JP6055311B2 - タバコ中のノルニコチン合成を最小限にするための組成物および方法 - Google Patents
タバコ中のノルニコチン合成を最小限にするための組成物および方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP6055311B2 JP6055311B2 JP2012549063A JP2012549063A JP6055311B2 JP 6055311 B2 JP6055311 B2 JP 6055311B2 JP 2012549063 A JP2012549063 A JP 2012549063A JP 2012549063 A JP2012549063 A JP 2012549063A JP 6055311 B2 JP6055311 B2 JP 6055311B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- seq
- plant
- nicotine demethylase
- mutation
- amino acid
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 235000002637 Nicotiana tabacum Nutrition 0.000 title claims description 218
- MYKUKUCHPMASKF-VIFPVBQESA-N (S)-nornicotine Chemical compound C1CCN[C@@H]1C1=CC=CN=C1 MYKUKUCHPMASKF-VIFPVBQESA-N 0.000 title claims description 130
- MYKUKUCHPMASKF-UHFFFAOYSA-N Nornicotine Natural products C1CCNC1C1=CC=CN=C1 MYKUKUCHPMASKF-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims description 130
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 113
- 241000208125 Nicotiana Species 0.000 title description 58
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title description 16
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 title description 11
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 title description 4
- SNICXCGAKADSCV-JTQLQIEISA-N (-)-Nicotine Chemical compound CN1CCC[C@H]1C1=CC=CN=C1 SNICXCGAKADSCV-JTQLQIEISA-N 0.000 claims description 320
- SNICXCGAKADSCV-UHFFFAOYSA-N nicotine Natural products CN1CCCC1C1=CC=CN=C1 SNICXCGAKADSCV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 320
- 229960002715 nicotine Drugs 0.000 claims description 320
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims description 270
- 101000615488 Homo sapiens Methyl-CpG-binding domain protein 2 Proteins 0.000 claims description 235
- 102100021299 Methyl-CpG-binding domain protein 2 Human genes 0.000 claims description 201
- 230000035772 mutation Effects 0.000 claims description 194
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 160
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 114
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 111
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 109
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 96
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims description 82
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims description 82
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims description 82
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 80
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 75
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 75
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 claims description 69
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 43
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims description 34
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 32
- 230000004048 modification Effects 0.000 claims description 31
- 238000012986 modification Methods 0.000 claims description 31
- 125000001500 prolyl group Chemical group [H]N1C([H])(C(=O)[*])C([H])([H])C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 claims description 29
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 28
- 235000019505 tobacco product Nutrition 0.000 claims description 24
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 claims description 21
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 claims description 18
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 18
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 18
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 claims description 16
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 claims description 14
- 230000009467 reduction Effects 0.000 claims description 13
- 238000012216 screening Methods 0.000 claims description 13
- 125000000430 tryptophan group Chemical group [H]N([H])C(C(=O)O*)C([H])([H])C1=C([H])N([H])C2=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C12 0.000 claims description 12
- 230000000711 cancerogenic effect Effects 0.000 claims description 8
- 231100000315 carcinogenic Toxicity 0.000 claims description 7
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 claims description 6
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 claims description 6
- 230000017858 demethylation Effects 0.000 claims description 6
- 238000010520 demethylation reaction Methods 0.000 claims description 6
- 238000009395 breeding Methods 0.000 claims description 5
- 125000001909 leucine group Chemical group [H]N(*)C(C(*)=O)C([H])([H])C(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 5
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 4
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims description 4
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 claims description 4
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 claims description 4
- 125000003630 glycyl group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C(*)=O 0.000 claims description 4
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 claims description 4
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 claims description 4
- 125000003607 serino group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C(O[H])([H])[H] 0.000 claims description 4
- 125000002987 valine group Chemical group [H]N([H])C([H])(C(*)=O)C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 4
- 244000061176 Nicotiana tabacum Species 0.000 claims 40
- 241001144493 Nicotiana obtusifolia Species 0.000 description 124
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 77
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 48
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 45
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 32
- 230000006870 function Effects 0.000 description 29
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 29
- 239000013615 primer Substances 0.000 description 27
- XKABJYQDMJTNGQ-VIFPVBQESA-N n-nitrosonornicotine Chemical compound O=NN1CCC[C@H]1C1=CC=CN=C1 XKABJYQDMJTNGQ-VIFPVBQESA-N 0.000 description 23
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 21
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 19
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 19
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 18
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 17
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 17
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 17
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 17
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 16
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 15
- ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N Formamide Chemical compound NC=O ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 14
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 14
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 13
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 13
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 13
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 13
- 229930013930 alkaloid Natural products 0.000 description 12
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 12
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 12
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 10
- 150000003797 alkaloid derivatives Chemical class 0.000 description 10
- 230000008859 change Effects 0.000 description 10
- 230000009368 gene silencing by RNA Effects 0.000 description 10
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 9
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 8
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 8
- 239000000463 material Substances 0.000 description 8
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 7
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 7
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 7
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 7
- 230000009758 senescence Effects 0.000 description 7
- 108010015742 Cytochrome P-450 Enzyme System Proteins 0.000 description 6
- 108091030071 RNAI Proteins 0.000 description 6
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 6
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 6
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 6
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 6
- 239000000779 smoke Substances 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 6
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 6
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 5
- 241000493375 Nicotiana quadrivalvis Species 0.000 description 5
- 101150053185 P450 gene Proteins 0.000 description 5
- 235000019504 cigarettes Nutrition 0.000 description 5
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 5
- 241000894007 species Species 0.000 description 5
- SNICXCGAKADSCV-ZQBYOMGUSA-N 3-(1-methylpyrrolidin-2-yl)(614C)pyridine Chemical compound N1=[14CH]C=CC(=C1)C1N(C)CCC1 SNICXCGAKADSCV-ZQBYOMGUSA-N 0.000 description 4
- PLUBXMRUUVWRLT-UHFFFAOYSA-N Ethyl methanesulfonate Chemical compound CCOS(C)(=O)=O PLUBXMRUUVWRLT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108700024394 Exon Proteins 0.000 description 4
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 4
- 235000019506 cigar Nutrition 0.000 description 4
- 238000003205 genotyping method Methods 0.000 description 4
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 4
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 4
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 4
- 230000003228 microsomal effect Effects 0.000 description 4
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- 102000003849 Cytochrome P450 Human genes 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 230000001055 chewing effect Effects 0.000 description 3
- 238000004817 gas chromatography Methods 0.000 description 3
- 230000036541 health Effects 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 3
- 210000001589 microsome Anatomy 0.000 description 3
- MWUXSHHQAYIFBG-UHFFFAOYSA-N nitrogen oxide Inorganic materials O=[N] MWUXSHHQAYIFBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 3
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 3
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 3
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 3
- MTXSIJUGVMTTMU-JTQLQIEISA-N (S)-anabasine Chemical compound N1CCCC[C@H]1C1=CC=CN=C1 MTXSIJUGVMTTMU-JTQLQIEISA-N 0.000 description 2
- SOPPBXUYQGUQHE-JTQLQIEISA-N Anatabine Chemical compound C1C=CCN[C@@H]1C1=CC=CN=C1 SOPPBXUYQGUQHE-JTQLQIEISA-N 0.000 description 2
- SOPPBXUYQGUQHE-UHFFFAOYSA-N Anatabine Natural products C1C=CCNC1C1=CC=CN=C1 SOPPBXUYQGUQHE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NYHBQMYGNKIUIF-UUOKFMHZSA-N Guanosine Chemical compound C1=NC=2C(=O)NC(N)=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O NYHBQMYGNKIUIF-UUOKFMHZSA-N 0.000 description 2
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 2
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 description 2
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 description 2
- 238000012228 RNA interference-mediated gene silencing Methods 0.000 description 2
- 108091027967 Small hairpin RNA Proteins 0.000 description 2
- 241000656145 Thyrsites atun Species 0.000 description 2
- 241001002356 Valeriana edulis Species 0.000 description 2
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 2
- 229930014345 anabasine Natural products 0.000 description 2
- 229930192500 bigelovii Natural products 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 2
- 231100000357 carcinogen Toxicity 0.000 description 2
- 239000003183 carcinogenic agent Substances 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 2
- 239000000567 combustion gas Substances 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 230000009088 enzymatic function Effects 0.000 description 2
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 2
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 2
- 239000003337 fertilizer Substances 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 2
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 2
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 2
- XKLJHFLUAHKGGU-UHFFFAOYSA-N nitrous amide Chemical compound ON=N XKLJHFLUAHKGGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 229930002371 pyridine alkaloid Natural products 0.000 description 2
- 150000003222 pyridines Chemical class 0.000 description 2
- 230000008707 rearrangement Effects 0.000 description 2
- 102220106441 rs149364972 Human genes 0.000 description 2
- 102200014843 rs367784906 Human genes 0.000 description 2
- 102220238210 rs61752981 Human genes 0.000 description 2
- 102220046710 rs61754440 Human genes 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 2
- 238000002864 sequence alignment Methods 0.000 description 2
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 2
- 229910001415 sodium ion Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 2
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- UDPGUMQDCGORJQ-UHFFFAOYSA-N (2-chloroethyl)phosphonic acid Chemical compound OP(O)(=O)CCCl UDPGUMQDCGORJQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 1
- GOJUJUVQIVIZAV-UHFFFAOYSA-N 2-amino-4,6-dichloropyrimidine-5-carbaldehyde Chemical group NC1=NC(Cl)=C(C=O)C(Cl)=N1 GOJUJUVQIVIZAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020005065 3' Flanking Region Proteins 0.000 description 1
- 108020005029 5' Flanking Region Proteins 0.000 description 1
- 108091093088 Amplicon Proteins 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000005623 Carcinogenesis Diseases 0.000 description 1
- 108090000994 Catalytic RNA Proteins 0.000 description 1
- 102000053642 Catalytic RNA Human genes 0.000 description 1
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 1
- 208000032170 Congenital Abnormalities Diseases 0.000 description 1
- 206010010356 Congenital anomaly Diseases 0.000 description 1
- MIKUYHXYGGJMLM-GIMIYPNGSA-N Crotonoside Natural products C1=NC2=C(N)NC(=O)N=C2N1[C@H]1O[C@@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O MIKUYHXYGGJMLM-GIMIYPNGSA-N 0.000 description 1
- 102000002004 Cytochrome P-450 Enzyme System Human genes 0.000 description 1
- NYHBQMYGNKIUIF-UHFFFAOYSA-N D-guanosine Natural products C1=2NC(N)=NC(=O)C=2N=CN1C1OC(CO)C(O)C1O NYHBQMYGNKIUIF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003155 DNA primer Substances 0.000 description 1
- 238000001712 DNA sequencing Methods 0.000 description 1
- 102000004533 Endonucleases Human genes 0.000 description 1
- 108010042407 Endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 239000005976 Ethephon Substances 0.000 description 1
- 206010064571 Gene mutation Diseases 0.000 description 1
- 206010071602 Genetic polymorphism Diseases 0.000 description 1
- 206010020649 Hyperkeratosis Diseases 0.000 description 1
- 108091026898 Leader sequence (mRNA) Proteins 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 108700011259 MicroRNAs Proteins 0.000 description 1
- 102000006374 N-Demethylating Oxidoreductases Human genes 0.000 description 1
- 108010058669 N-Demethylating Oxidoreductases Proteins 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 241000208126 Nicotiana acuminata Species 0.000 description 1
- 244000061322 Nicotiana alata Species 0.000 description 1
- IOVCWXUNBOPUCH-UHFFFAOYSA-M Nitrite anion Chemical compound [O-]N=O IOVCWXUNBOPUCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000000636 Northern blotting Methods 0.000 description 1
- 108020004711 Nucleic Acid Probes Proteins 0.000 description 1
- 108091005461 Nucleic proteins Chemical group 0.000 description 1
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 1
- 238000010222 PCR analysis Methods 0.000 description 1
- 108020004459 Small interfering RNA Proteins 0.000 description 1
- 238000002105 Southern blotting Methods 0.000 description 1
- 108091036066 Three prime untranslated region Proteins 0.000 description 1
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XJLXINKUBYWONI-DQQFMEOOSA-N [[(2r,3r,4r,5r)-5-(6-aminopurin-9-yl)-3-hydroxy-4-phosphonooxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl] [(2s,3r,4s,5s)-5-(3-carbamoylpyridin-1-ium-1-yl)-3,4-dihydroxyoxolan-2-yl]methyl phosphate Chemical compound NC(=O)C1=CC=C[N+]([C@@H]2[C@H]([C@@H](O)[C@H](COP([O-])(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]3[C@H]([C@@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](O3)N3C4=NC=NC(N)=C4N=C3)O)O2)O)=C1 XJLXINKUBYWONI-DQQFMEOOSA-N 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 206010064930 age-related macular degeneration Diseases 0.000 description 1
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 125000000613 asparagine group Chemical group N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)* 0.000 description 1
- 230000007698 birth defect Effects 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000036952 cancer formation Effects 0.000 description 1
- 231100000504 carcinogenesis Toxicity 0.000 description 1
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 1
- 239000002962 chemical mutagen Substances 0.000 description 1
- 239000012707 chemical precursor Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000011208 chromatographic data Methods 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 239000012297 crystallization seed Substances 0.000 description 1
- OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N cytosine Chemical class NC=1C=CNC(=O)N=1 OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000007123 defense Effects 0.000 description 1
- 230000003831 deregulation Effects 0.000 description 1
- 238000003795 desorption Methods 0.000 description 1
- 230000000368 destabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000010195 expression analysis Methods 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 238000012239 gene modification Methods 0.000 description 1
- 230000030279 gene silencing Effects 0.000 description 1
- 238000012226 gene silencing method Methods 0.000 description 1
- 230000004077 genetic alteration Effects 0.000 description 1
- 231100000118 genetic alteration Toxicity 0.000 description 1
- 230000005017 genetic modification Effects 0.000 description 1
- 235000013617 genetically modified food Nutrition 0.000 description 1
- 230000036252 glycation Effects 0.000 description 1
- 229940029575 guanosine Drugs 0.000 description 1
- 150000003278 haem Chemical class 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000007602 hot air drying Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 238000011005 laboratory method Methods 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000007937 lozenge Substances 0.000 description 1
- 208000002780 macular degeneration Diseases 0.000 description 1
- 238000004890 malting Methods 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- 230000007102 metabolic function Effects 0.000 description 1
- 239000002679 microRNA Substances 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 102000035118 modified proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091005573 modified proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000001823 molecular biology technique Methods 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 231100000219 mutagenic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003505 mutagenic effect Effects 0.000 description 1
- 229930027945 nicotinamide-adenine dinucleotide Natural products 0.000 description 1
- 150000004005 nitrosamines Chemical class 0.000 description 1
- 238000007899 nucleic acid hybridization Methods 0.000 description 1
- 239000002853 nucleic acid probe Substances 0.000 description 1
- 210000003463 organelle Anatomy 0.000 description 1
- 208000028169 periodontal disease Diseases 0.000 description 1
- 230000035479 physiological effects, processes and functions Effects 0.000 description 1
- 230000008121 plant development Effects 0.000 description 1
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 description 1
- XOFYZVNMUHMLCC-ZPOLXVRWSA-N prednisone Chemical compound O=C1C=C[C@]2(C)[C@H]3C(=O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 XOFYZVNMUHMLCC-ZPOLXVRWSA-N 0.000 description 1
- 229960004618 prednisone Drugs 0.000 description 1
- 239000000955 prescription drug Substances 0.000 description 1
- 239000002987 primer (paints) Substances 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 210000001938 protoplast Anatomy 0.000 description 1
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 108091092562 ribozyme Proteins 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 230000001568 sexual effect Effects 0.000 description 1
- 239000004055 small Interfering RNA Substances 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 1
- 235000020039 sonti Nutrition 0.000 description 1
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 230000002123 temporal effect Effects 0.000 description 1
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K trisodium citrate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229940038773 trisodium citrate Drugs 0.000 description 1
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 1
- 108700026220 vif Genes Proteins 0.000 description 1
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
- A01H5/00—Angiosperms, i.e. flowering plants, characterised by their plant parts; Angiosperms characterised otherwise than by their botanic taxonomy
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
- A01H5/00—Angiosperms, i.e. flowering plants, characterised by their plant parts; Angiosperms characterised otherwise than by their botanic taxonomy
- A01H5/12—Leaves
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
- A01H6/00—Angiosperms, i.e. flowering plants, characterised by their botanic taxonomy
- A01H6/82—Solanaceae, e.g. pepper, tobacco, potato, tomato or eggplant
- A01H6/823—Nicotiana, e.g. tobacco
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A24—TOBACCO; CIGARS; CIGARETTES; SIMULATED SMOKING DEVICES; SMOKERS' REQUISITES
- A24B—MANUFACTURE OR PREPARATION OF TOBACCO FOR SMOKING OR CHEWING; TOBACCO; SNUFF
- A24B13/00—Tobacco for pipes, for cigars, e.g. cigar inserts, or for cigarettes; Chewing tobacco; Snuff
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/52—Genes encoding for enzymes or proenzymes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
- C12N15/8216—Methods for controlling, regulating or enhancing expression of transgenes in plant cells
- C12N15/8222—Developmentally regulated expression systems, tissue, organ specific, temporal or spatial regulation
- C12N15/8223—Vegetative tissue-specific promoters
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
- C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
- C12N15/8242—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with non-agronomic quality (output) traits, e.g. for industrial processing; Value added, non-agronomic traits
- C12N15/8243—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with non-agronomic quality (output) traits, e.g. for industrial processing; Value added, non-agronomic traits involving biosynthetic or metabolic pathways, i.e. metabolic engineering, e.g. nicotine, caffeine
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
- C12N9/0071—Oxidoreductases (1.) acting on paired donors with incorporation of molecular oxygen (1.14)
- C12N9/0073—Oxidoreductases (1.) acting on paired donors with incorporation of molecular oxygen (1.14) with NADH or NADPH as one donor, and incorporation of one atom of oxygen 1.14.13
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
- C12Q1/6888—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms
- C12Q1/6895—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms for plants, fungi or algae
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/13—Plant traits
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/156—Polymorphic or mutational markers
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Botany (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Physiology (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
- Immunology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
- Pyridine Compounds (AREA)
- Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Manufacture Of Tobacco Products (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
配列表の正式な写しを、2011年1月12日に作成した149KBのサイズの「400712SequenceListing.txt」というファイル名を有するASCIIフォーマットされた配列表として、EFS−Webを通じて電子的に提出し、本明細書と同時に出願する。このASCIIフォーマットされた文書に含まれる配列表は、明細書の一部分であり、参照することによりその全体が本明細書の一部をなすものとする。
本発明は、タバコ植物およびその植物部分におけるノルニコチン合成、よって、その代謝産物であるN’−ニトロソノルニコチンを最小限にするための組成物および方法、特に根特異的ニコチン脱メチル化酵素と緑葉および老化誘導性ニコチン脱メチル化酵素との組合せの発現または機能を阻害するための組成物および方法に関する。
a)79位のグリシン残基のセリンによる置換、
b)107位のプロリン残基のセリンによる置換、
c)381位のプロリン残基のセリンによる置換、
d)419位のプロリン残基のセリンによる置換、および
e)それらの任意の組合せ
からなる群より選択される実施形態3に記載のタバコ植物またはその植物部分。
a)329位のトリプトファン残基の停止コドンによる置換、
b)364位のリシン残基のアスパラギンによる置換、
c)376位のバリン残基のメチオニンによる置換、
d)381位のプロリン残基のセリンによる置換、
d)458位のプロリン残基のセリンによる置換、および
e)それらの任意の組合せ
からなる群より選択される実施形態7に記載のタバコ植物またはその植物部分。
a)422位でトリプトファン残基と置換した停止コドン、
b)449位でプロリン残基と置換したロイシン、および
c)それらの任意の組合せ
からなる群より選択される実施形態11に記載のタバコ植物またはその植物部分。
a)381位のプロリン残基のセリンによる置換、
b)329位のトリプトファン残基の停止コドンによる置換、
c)422位のトリプトファン残基の停止コドンによる置換、および
d)それらの任意の組合せ
からなる群より選択される実施形態15に記載のタバコ植物またはその植物部分。
a)配列番号2、5、6、7、8、9または10に示すアミノ酸配列、および
b)配列番号2、5、6、7、8、9または10に示すアミノ酸配列と少なくとも98%の配列同一性を有するアミノ酸配列
からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むCYP82E10ニコチン脱メチル化酵素である実施形態22に記載の方法。
a)配列番号14、15、16、17、18、19、20または21に示すアミノ酸配列、および
b)配列番号14、15、16、17、18、19、20または21に示す配列と少なくとも98%の配列同一性を有するアミノ酸配列
からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む実施形態26に記載の方法。
a)配列番号26、27、28、29、30、31または32に示すアミノ酸配列、および
b)配列番号26、27、28、29、30、31または32に示す配列と少なくとも98%の配列同一性を有するアミノ酸配列
からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、実施形態30に記載の方法。
b)配列番号1、3または4の少なくとも20の連続するヌクレオチドの断片を含むヌクレオチド配列、
c)配列番号1に示す配列全体と少なくとも97%の配列同一性を有するヌクレオチド配列であって、前記ポリヌクレオチドが、植物におけるニコチンからノルニコチンへの前記代謝変換に関与するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列、
d)配列番号2および5〜13からなる群より選択されるポリペプチドをコードするヌクレオチド配列または少なくとも115の連続する残基を含むその断片、
e)配列番号2、5、6、7、8、9、10、11、12または13に示す配列と少なくとも98%の配列同一性を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列、ならびに
f)前記項目(a)から(e)のいずれかによる前記配列と相補的なヌクレオチド配列
からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む単離ポリヌクレオチド。
b)配列番号2、5、6、7、8、9、10、11、12または13に示すアミノ酸配列と少なくとも98%同一であるアミノ酸配列、および
c)配列番号2、5、6、7、8、9、10、11、12または13に示すアミノ酸配列の断片であるアミノ酸配列であって、前記断片が、配列番号2、5、6、7、8、9、10、11、12または13のアミノ酸配列の少なくとも115の連続する残基を含むアミノ酸配列
からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む単離ポリペプチド。
以下の列挙は、配列表についての配列情報を示す。アミノ酸置換についての標準的な表記を用いる。つまり、例えば、CYP82E10 P419Sは、バリアントタンパク質が、419位でのプロリン残基のセリンによる置換を有する(番号付けは、野生型配列、この場合は配列番号2に示すCYP82E10配列に関する)ことを示す。別の例として、CYP82E4 P38Lは、バリアントタンパク質が、38位のプロリン残基のロイシンによる置換を有する(番号付けは、野生型配列、この場合は配列番号14に示すCYP82E4配列に関する)ことを示す。なお別の例として、CYP82E5 P72Lは、バリアントタンパク質が、72位のプロリン残基のロイシンによる置換を有する(番号付けは、野生型配列、この場合は配列番号26に示すCYP82E5配列に関する)ことを示す。
配列番号2は、CYP82E10についてのアミノ酸配列を示す。
配列番号3は、CYP82E10遺伝子のイントロンのヌクレオチド配列を示す。
配列番号4は、CYP82E10についてのゲノム配列を示す。
配列番号5は、CYP82E10 L148Fについてのアミノ酸配列を示す。
配列番号6は、CYP82E10 G172Rについてのアミノ酸配列を示す。
配列番号7は、CYP82E10 A344Tについてのアミノ酸配列を示す。
配列番号8は、CYP82E10 A410Tについてのアミノ酸配列を示す。
配列番号9は、CYP82E10 R417Hについてのアミノ酸配列を示す。
配列番号10は、CYP82E10 P419Sについてのアミノ酸配列を示す。
配列番号11は、CYP82E10 G79Sについてのアミノ酸配列を示す。
配列番号12は、CYP82E10 P107Sについてのアミノ酸配列を示す。
配列番号13は、CYP82E10 P381Sについてのアミノ酸配列を示す。
配列番号14は、CYP82E4についてのアミノ酸配列を示す。
配列番号15は、CYP82E4 P38Lについてのアミノ酸配列を示す。
配列番号16は、CYP82E4 D171Nについてのアミノ酸配列を示す。
配列番号17は、CYP82E4 E201Kについてのアミノ酸配列を示す。
配列番号18は、CYP82E4 R169Qについてのアミノ酸配列を示す。
配列番号19は、CYP82E4 G459Rについてのアミノ酸配列を示す。
配列番号20は、CYP82E4 T427Iについてのアミノ酸配列を示す。
配列番号21は、CYP82E4 V376Mについてのアミノ酸配列を示す。
配列番号22は、CYP82E4 W329Stopについてのアミノ酸配列を示す。
配列番号23は、CYP82E4 K364Nについてのアミノ酸配列を示す。
配列番号24は、CYP82E4 P381Sについてのアミノ酸配列を示す。
配列番号25は、CYP82E4 P458Sについてのアミノ酸配列を示す。
配列番号26は、CYP82E5についてのアミノ酸配列を示す。
配列番号27は、CYP82E5 P72Lについてのアミノ酸配列を示す。
配列番号28は、CYP82E5 L143Fについてのアミノ酸配列を示す。
配列番号29は、CYP82E5 S174Lについてのアミノ酸配列を示す。
配列番号30は、CYP82E5 M224Iについてのアミノ酸配列を示す。
配列番号31は、CYP82E5 P235Sについてのアミノ酸配列を示す。
配列番号32は、CYP82E5 A410Vについてのアミノ酸配列を示す。
配列番号33は、CYP82E5 W422Stopについてのアミノ酸配列を示す。
配列番号34は、CYP82E5 P449Lについてのアミノ酸配列を示す。
配列番号35は、CYP82E10のエキソン1についてのフォワードプライマー配列を示す。
配列番号36は、CYP82E10のエキソン1についてのリバースプライマー配列を示す。
配列番号37は、CYP82E10のエキソン2についてのフォワードプライマー配列を示す。
配列番号37は、CYP82E10のエキソン2についてのリバースプライマー配列を示す。
配列番号38は、CYP82E4v2についてのゲノム配列を示す。
配列番号39は、CYP82E5v2についてのゲノム配列を示す。
本発明は、植物、特に様々な商業的な品種のタバコ植物を含むタバコ(Nicotiana)属の植物の根におけるニコチンからノルニコチンへの代謝変換に関与する根特異的ニコチン脱メチル化酵素ポリペプチドの発現または機能を阻害するための組成物および方法を含む。
本発明は、タバコ植物の根におけるニコチンからノルニコチンへの根特異的変換に関与する新規なニコチン脱メチル化酵素遺伝子、CYP82E10(ゲノム配列は配列番号4に示す)、およびそれによりコードされるCYP82E10ニコチン脱メチル化酵素(配列番号2)、ならびにニコチンからノルニコチンへの変換を低減または最小限にすること、すなわちタバコ植物およびその植物部分においてノルニコチンのレベルを低減することにおけるその使用を対象とする。「根特異的」により、それが、葉または種子のようなその他の植物器官に反して、タバコ植物の根の中で優先的に発現されることを意図する。選択された好ましい変異を、緑葉ニコチン脱メチル化酵素(例えば配列番号26に示すCYP82E5)もしくはニコチン脱メチル化酵素活性を有するそのバリアントをコードする遺伝子内の1つ以上の選択された好ましい変異と組み合わせて、そしてさらに老化誘導性ニコチン脱メチル化酵素(例えば配列番号14に示すCYP82E4)もしくはニコチン脱メチル化酵素活性を有するそのバリアントをコードする遺伝子内の1つ以上の選択された好ましい変異と組み合わせて、この根特異的ニコチン脱メチル化酵素またはニコチン脱メチル化酵素活性を有するそのバリアントに導入することにより、変換率が約1.5%未満、好ましくは約1%未満である最小限のニコチンからノルニコチンへの変換を有する非トランスジェニックタバコ植物を生成できる。
本発明の組成物は、CYP82E10ポリペプチドならびにそれらのバリアントおよび断片を含む。このようなニコチン脱メチル化酵素ポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、タバコ植物の商業的な品種を含む植物におけるニコチンからノルニコチンへの代謝変換に関与する。特に、本発明の組成物は、配列番号2、および5〜13に示すアミノ酸配列を含む単離ポリペプチド、配列番号1、3および4に示すヌクレオチド配列を含む単離ポリヌクレオチド、ならびに配列番号2および5〜13のアミノ酸配列をコードする単離ポリヌクレオチドを含む。本発明のポリヌクレオチドは、植物、特にタバコ植物におけるニコチンからノルニコチンへの代謝変換に関与するニコチン脱メチル化酵素ポリペプチドまたはそのバリアントの発現の阻害において用いることができる。本発明のポリヌクレオチドのいくつかは、野生型ニコチン脱メチル化酵素のニコチン脱メチル化酵素活性の阻害をもたらす変異を有する。本発明のポリペプチドの阻害は、熱風乾燥タバコのような、集団の30%、50%、70%、90%未満で遺伝子変換が発生するタバコ系統におけるノルニコチンレベルの低下において効果的である。本発明のポリペプチドの阻害は、植物集団の少なくとも90%、80%、70%、60%、50%において遺伝子変換が発生するタバコ集団におけるノルニコチンレベルの低下において効果的である。集団は、好ましくは、約25、50、100、500、1,000、5,000または25,000植物より多くを含有し、ここで、より好ましくは、植物の少なくとも約10%、25%、50%、75%、95%または100%が、本発明のポリペプチドを含む。
タバコ属植物もしくは植物部分、特に根の組織において本発明のCYP82E10ポリペプチドの濃度、含量および/または活性を低減する方法が提供される。本発明のCYP82E10ポリペプチド(配列番号2)およびニコチン脱メチル化酵素活性を保持するそのバリアント(例えば配列番号7、8、9および10)の活性を低減または消去するために多くの方法を単独または組み合わせて用いてよい。さらに、2以上の異なるニコチン脱メチル化酵素、より具体的には根特異的CYP82E10ニコチン脱メチル化酵素と、緑葉CYP82E5および老化誘導性CYP82E4ニコチン脱メチル化酵素の一方または両方との活性を低減または消去するために方法の組合せを採用してよい。ある特定の実施形態では、CYP82E5は、緑葉における変換に対して負に影響する配列番号26の配列中の少なくとも1つのアミノ酸変異を有するポリペプチドであり、CYP82E4は、老化した葉における変換に対して負に影響する少なくとも1つのアミノ酸変異を有する配列番号14に示す配列を有する。
本発明のCYP82E10ポリヌクレオチド、ならびにそれらのバリアントおよび断片は、本発明の方法において用いて、植物におけるニコチンからノルニコチンへの代謝変換に関与するCYP82E10ニコチン脱メチル化酵素の発現または機能を阻害することができる。この様式で、好ましい変異を対象のCYP82E10遺伝子に導入できる。本発明の方法は、好ましい変異をCYP82E10ニコチン脱メチル化酵素遺伝子に導入するための特定の方法に依存しない。
以下の議論で述べる引用は、実験部の終わりに示す。
CYP82E4v2が、コンバータ植物において観察される高いノルニコチン蓄積を担うニコチン脱メチル化酵素遺伝子座を表すという知見(Siminszkyら、2005)は、変換の問題を克服し、老化しかつ乾燥させた葉のノルニコチン含量を低下させることに向けての非トランスジェニックおよびトランスジェニックのアプローチへの扉を開いた。具体的に、研究者は、化学変異原に曝露されたタバコ集団を作製し、CYP82E4v2遺伝子座にて非機能的対立遺伝子を有する個体を選択することが可能になった。実際に、3つの独立したグループが、この方策に基づいて非変換タバコ系統を既に作製している(Deweyら、2007;Xuら、2007b;Julioら、2008)。
ニコチン脱メチル化酵素をコードする可能性があるタバコゲノム中のその他の遺伝子を同定するために、BLASTNおよびBLASTXアルゴリズム(Altschulら、1990、1997)を用いる相同性検索を、CYP82E4v2のDNAおよびタンパク質配列をそれぞれのクエリ配列として用いて、GenBank中のN.tabacum発現遺伝子配列断片(EST)データベースに対して行った。CYP82Eスーパーファミリーの以前の特徴決定したメンバー(例えばCYP82E2、CYP82E3およびCYP82E5v2)に対応するcDNA配列を同定することに加えて、この遺伝子ファミリーの以前に特徴決定されたいずれのメンバーとも完全にアラインメントされない7つのESTを発見した。興味深いことに、7つのESTは全て、根特異的cDNAライブラリーまたは根を含む混合組織で構成されるcDNAライブラリーのいずれかを起源とした。この観察結果は、新しいCYP82E遺伝子が、根組織に特異的に発現されることを示唆し、これは、CYP82E P450スーパーファミリーのこの特定のメンバーが、なぜ以前に検出から逃れたかを説明する特性である(以前の努力は、葉組織で発現されたCYP82E遺伝子の特徴決定に焦点を当てていたからである)。いずれの個別のEST配列も、この新規な遺伝子の全体のコード領域をカバーするのに十分長くなかったので、PCRプライマーを設計し、これは、タバコの根組織から単離したRNAから作製された第1鎖cDNAからのcDNA配列全体の増幅を可能にした。さらに、プライマーを用いて、中央の大きいイントロンを含む遺伝子の対応するゲノム領域を増幅した。この新規なCYP82E cDNAは、タバコCYP82E4v2 cDNAと92.4%のヌクレオチド同一性およびアミノ酸レベルでの91.1%の予測される同一性を共有する。P450遺伝子命名法についての手引きを守って、この新しい遺伝子は、CYP82E10と命名された。CYP82Eスーパーファミリーの特徴決定された全てのメンバーのうち、CYP82E10は、CYP82E5v2と最高の配列類似性を示し、cDNAレベルで96.5%のヌクレオチド同一性、および95.7%の予測アミノ酸配列同一性を共有する。CYP82E10のDNA配列およびその予測タンパク質配列を、図1に示す。
タバコ植物のノルニコチン総含量に対するCYP82E10の特異的な貢献を正確に評価するために、(1)この遺伝子内にノックアウト変異を有するタバコ植物を同定し、(2)この変異を、それぞれ植物775および1013を起源とするcyp82e4v2およびcyp82e5v2変異と組み合わせることが必要であった。CYP82E10中の潜在的な衰弱性変異を同定するために、EMS突然変異誘発DH98−325−6集団を、CYP82E10の部分を特異的に増幅する(CYP82Eスーパーファミリーのその他のメンバーを同時に増幅することなく)プライマーを用いるハイスループットDNA配列分析によりスクリーニングした。CYP82E10のエキソン1を特異的に増幅するために、以下のPCRプライマーを用いた:5’−GTGATAGTTTGATTCCCAAGTGC−3’(フォワード)および5’−CTCCCAAAGTTAGATTAGTCCG−3’(リバース)。エキソン2の特異的増幅は、プライマー5’−AGGTCGCGCTGATTCTTG−3’(フォワード)および5’−AGATGAATACCCATCTATCTAGGAGT−3’(リバース)を用いて達成した。最大限の特異性を確実にするために、エキソン1についてのリバースプライマーおよびエキソン2についてのフォワードプライマーは、CYP82E10イントロン内の配列に対応する(図1)。突然変異誘発植物のPCR増幅および配列分析は、Deweyら(2007)に記載されるようにして96ウェルフォーマットを用いて行った。
元の1041変異は、強いコンバータCYP82E4v2対立遺伝子と、野生型CYP82E5v2遺伝子との両方を含有する遺伝子背景(DH98−325−6)にあることに鑑みて、植物ノルニコチン総含量に向かうCYP82E10の特異的貢献を正確に評価するための唯一の方法は、1041変異を、ノックアウトCYP82E4v2およびCYP82E5v2変異も有するタバコ植物に導入することである。このことを遂行するために、1041変異についてヘテロ接合型の植物(e10E10)を、上記の775および1013変異の両方についてヘテロ接合型の植物(e4E4/e5E5)と交雑させた。後者の植物は、交雑種775/1013//TN90/3/TN90/4/TN90からの子孫である。3つ全てのニコチン脱メチル化酵素変異についてヘテロ接合型のF1植物(e4E4/e5E5/e10E10)を、分子的遺伝子型決定により同定し、自家受粉させた。分子的遺伝子型決定は、400を超えるF2子孫をスクリーニングし、その後、それらを以下の遺伝子型クラスに分類するためにも用いた。E4E4/E5E5/e10e10(合計3つの植物)、e4e4/E5E5/e10e10(合計4つの植物)、E4E4/e5e5/e10e10(合計5つの植物)、およびe4e4/e5e5/e10e10(合計5つの植物)。
今回の発見および新しいニコチン脱メチル化酵素遺伝子CYP82E10の特徴決定により、商用グレードの空気乾燥タバコ植物におけるニコチン変換率(およびそれによりノルニコチンレベル)を、トランスジェニックアプローチを用いることによってのみ以前は可能であったレベルまで低減するための方策を開発することができた。この非GMOベースの技術は、ノルニコチンのレベルを、トランスジェニック方策を用いて達成されていたものと同様の程度まで低減でき、それでもなお、(1)トランスジェニック植物を作製するために要求されるいくつかの機能付加技術について交渉し、ライセンス料を支払うこと、(2)トランスジェニック事象の規制緩和に関連する冗長な時間および面倒な費用を回避すること、ならびに(3)GMOに対して哲学的に反対する最終使用者により製品が拒絶される可能性に遭遇することのようなトランスジェニック作物の商業化に関連する実質的な障害を迂回しながら、超少量ノルニコチンタバコ品種を開発するための手段として働くおびただしい利点を提供する。本明細書で報告する発見は、CYP82E4v2ニコチン脱メチル化酵素遺伝子における変異だけ(Julioら、2008;Xuら、2007b)、またはCYP82E4v2変異とCYP82E5v2変異との組合せ(Deweyら、2007)を標的にした以前に記載された非GMO方策と比較して、タバコ製品において見出される、文書で最も十分に立証されている強い発癌物質の1つのレベルを低下させる我々の能力の主要な前進である。トランスジェニック技術を用いて、乾燥させた葉において約2.6%から約0.5%までニコチン変換レベルを低下させることが、葉のNNN含量における相応の低減も導くことが以前に証明された(Lewisら、2008)。本報告で記載する三重変異組合せ(e4e4/e5e5/e10e10)を含有するタバコの葉からのNNN含量の同様の低減が観察されることが予期される。空気乾燥タバコを元来は標的にしたが、この技術は、熱風乾燥品種にも利益を与える。熱交換器は老化するので、熱風乾燥中にNOxガスを除去するそれらの能力は減少し得る。さらに、最近の研究は、かなりの量のTSNA形成が乾燥させた葉の貯蔵の間に発生し得ることを示している。熱風乾燥品種に三重変異組合せを導入することによりノルニコチンレベルを最小限にすることは、貯蔵の間または乾燥プロセス中の非効率な熱交換の結果としてのいずれかのNNN形成に対する防衛手段として作用できる。
Claims (29)
- CYP82E10ニコチン脱メチル化酵素をコードする遺伝子において変異を含むタバコ植物またはその植物部分であって、前記CYP82E10ニコチン脱メチル化酵素配列が配列番号2に示すアミノ酸配列と少なくとも98%の配列同一性を有し、前記変異が、前記CYP82E10ニコチン脱メチル化酵素の改変をもたらし、前記改変が、配列番号2の79位、107位、381位もしくは419位またはそれらの任意の組合せに対応するアミノ酸残基にて生じ、前記改変が、
a)79位のグリシン残基のセリンによる置換、
b)107位のプロリン残基のセリンによる置換、
c)381位のプロリン残基のセリンによる置換、
d)419位のプロリン残基のセリンによる置換、および
e)それらの任意の組合せ
からなる群より選択されるタバコ植物またはその植物部分。 - 前記CYP82E10ニコチン脱メチル化酵素が、配列番号2、5、6、7、8および9に示す配列からなる群より選択される請求項1に記載のタバコ植物またはその植物部分。
- CYP82E4ニコチン脱メチル化酵素をコードする遺伝子において変異をさらに含み、前記CYP82E4ニコチン脱メチル化酵素が、配列番号14に示す配列と少なくとも98%の配列同一性を有し、前記変異が、前記CYP82E4ニコチン脱メチル化酵素の改変をもたらし、前記改変が、配列番号14の329位、364位、376位、381位もしくは458位またはそれらの任意の組合せに対応するアミノ酸残基にて生じ、前記改変が、
a)329位のトリプトファン残基の停止コドンによる置換、
b)364位のリシン残基のアスパラギンによる置換、
c)376位のバリン残基のメチオニンによる置換、
d)381位のプロリン残基のセリンによる置換、
d)458位のプロリン残基のセリンによる置換、および
e)それらの任意の組合せ
からなる群より選択される請求項1または2に記載のタバコ植物またはその植物部分。 - 前記CYP82E4ニコチン脱メチル化酵素が、配列番号14、15、16、17、18、19および20に示す配列からなる群より選択される請求項3に記載のタバコ植物またはその植物部分。
- CYP82E5ニコチン脱メチル化酵素をコードする遺伝子における変異をさらに含み、前記CYP82E5ニコチン脱メチル化酵素が、配列番号26に示す配列と少なくとも98%の配列同一性を有し、前記変異が、前記CYP82E5ニコチン脱メチル化酵素の改変をもたらし、前記改変が、配列番号26の422位もしくは449位またはそれらの任意の組合せに対応する位置アミノ酸残基にて生じ、前記改変が、
a)422位でトリプトファン残基と置換された停止コドン、
b)449位でプロリン残基と置換されたロイシン、および
c)それらの任意の組合せ
からなる群より選択される請求項1〜4のいずれかに記載のタバコ植物またはその植物部分。 - 前記CYP82E5ニコチン脱メチル化酵素が、配列番号26、27、28、29、30、31および32に示す配列からなる群より選択される請求項5に記載のタバコ植物またはその植物部分。
- 前記CYP82E10ニコチン脱メチル化酵素遺伝子における前記変異および前記CYP82E4ニコチン脱メチル化酵素遺伝子における前記変異を含む請求項5または6に記載のタバコ植物またはその植物部分。
- 前記タバコ植物またはその植物部分が、前記変異についてホモ接合型である請求項1〜7のいずれかに記載のタバコ植物またはその植物部分。
- 前記CYP82E10ニコチン脱メチル化酵素が、配列番号2の381位にプロリン残基のセリンによる置換を含み、前記CYP82E4ニコチン脱メチル化酵素が、配列番号14の329位にトリプトファン残基の停止コドンによる置換を含み、前記CYP82E5ニコチン脱メチル化酵素が、配列番号26の422位にトリプトファン残基の停止コドンによる置換を含む請求項8に記載のタバコ植物またはその植物部分。
- 前記植物またはその部分が、1.5%未満の、ニコチンからノルニコチンへの変換を有する請求項7〜9のいずれかに記載のタバコ植物またはその植物部分。
- 前記植物またはその部分が、0.5%以下の、ニコチンからノルニコチンへの変換を有する請求項10に記載のタバコ植物またはその植物部分。
- 請求項1〜11のいずれかに記載のタバコ植物の種子またはその子孫であって、前記種子が、前記CYP82E10ニコチン脱メチル化酵素の遺伝子において前記変異を含む、タバコ植物の種子またはその子孫。
- a)請求項1〜11のいずれかに記載のタバコ植物またはその植物部分もしくは子孫を得るステップと、
b)前記タバコ植物またはその植物部分もしくは子孫からタバコ製品を調製するステップと
を含むタバコ製品を得る方法。 - タバコ製品の発癌可能性を低減する方法であって、前記タバコ製品を、請求項1〜11のいずれかに記載のタバコ植物またはその植物部分もしくは子孫から調製することを含む方法。
- タバコ植物またはその植物部分におけるノルニコチンのレベルを低減するかまたはニコチンからノルニコチンへの変換率を低減する方法であって、CYP82E10ニコチン脱メチル化酵素、CYP82E4ニコチン脱メチル化酵素、およびCYP82E5ニコチン脱メチル化酵素を各々コードする少なくとも3つのニコチン脱メチル化酵素遺伝子の各々の少なくとも1つの対立遺伝子内の変異を、前記植物のゲノムに導入するステップを含み、
a)前記CYP82E10ニコチン脱メチル化酵素が、配列番号2に示すアミノ酸配列と少なくとも98%の配列同一性を有し、前記変異が、前記CYP82E10ニコチン脱メチル化酵素のアミノ酸配列の改変をもたらし、前記改変が、配列番号2の79位、107位、381位もしくは419位またはそれらの任意の組合せに対応するアミノ酸残基にて生じ、前記改変が、
i)79位のグリシン残基のセリンによる置換、
ii)107位のプロリン残基のセリンによる置換、
iii)381位のプロリン残基のセリンによる置換、
iv)419位のプロリン残基のセリンによる置換、および
v)それらの任意の組合せ
からなる群より選択され、
b)前記CYP82E4ニコチン脱メチル化酵素が、配列番号14に示す配列と少なくとも98%の配列同一性を有し、前記変異が、前記CYP82E4ニコチン脱メチル化酵素のアミノ酸配列の改変をもたらし、前記改変が、配列番号14の329位、364位、376位、381位もしくは458位またはそれらの任意の組合せに対応するアミノ酸残基にて生じ、前記改変が、
i)329位のトリプトファン残基の停止コドンによる置換、
ii)364位のリシン残基のアスパラギンによる置換、
iii)376位のバリン残基のメチオニンによる置換、
iv)381位のプロリン残基のセリンによる置換、
v)458位のプロリン残基のセリンによる置換、および
vi)それらの任意の組合せ
からなる群より選択され、
c)前記CYP82E5ニコチン脱メチル化酵素が、配列番号26に示す配列と少なくとも98%の配列同一性を有し、前記変異が、前記CYP82E5ニコチン脱メチル化酵素のアミノ酸配列の改変をもたらし、前記改変が、配列番号26の422位もしくは449位またはそれらの任意の組合せに対応する位置アミノ酸残基にて生じ、前記改変が、
i)422位でトリプトファン残基と置換された停止コドン、
ii)449位でプロリン残基と置換されたロイシン、および
iii)それらの任意の組合せ
からなる群より選択される方法。 - 前記CYP82E10ニコチン脱メチル化酵素が、配列番号2、5、6、7、8、および9に示すアミノ酸配列からなる群より選択される請求項15に記載の方法。
- 前記CYP82E4ニコチン脱メチル化酵素が、配列番号14、15、16、17、18、19、および20に示すアミノ酸配列からなる群より選択される請求項15または16に記載の方法。
- 前記CYP82E5ニコチン脱メチル化酵素が、配列番号26、27、28、29、30、31および32に示すアミノ酸配列からなる群より選択される請求項15〜17のいずれかに記載の方法。
- 前記植物またはその植物部分が、前記変異についてホモ接合型である請求項15〜18のいずれかに記載の方法。
- 前記導入するステップが、育種手順を含む請求項15〜19のいずれかに記載の方法。
- 前記植物が、バーレータバコ植物、バージニアタバコ植物、熱風乾燥タバコ植物、空気乾燥タバコ植物、火力乾燥タバコ植物、オリエンタルタバコ植物またはダークタバコ植物である、請求項15〜20のいずれかに記載の方法。
- 前記タバコ植物が、バーレータバコ植物、バージニアタバコ植物、熱風乾燥タバコ植物、空気乾燥タバコ植物、火力乾燥タバコ植物、オリエンタルタバコ植物またはダークタバコ植物である請求項1〜12のいずれかに記載のタバコ植物またはその植物部分。
- ノルニコチンのレベルが低いタバコ植物を同定する方法であって、配列番号1または3における変異の存在について、対象のタバコ植物からのDNA試料をスクリーニングするステップを含み、前記変異が、前記CYP82E10ニコチン脱メチル化酵素の発現または機能の低減をもたらす方法。
- 前記タバコ植物が、1.5%未満の、ニコチンからノルニコチンへの変換を有する請求項23に記載の方法。
- 前記スクリーニングが、配列番号1、3、35、36、37および38からなる群より選択される配列を用いて行われる請求項23または24に記載の方法。
- 配列番号14をコードする遺伝子中の変異の存在、配列番号26をコードする遺伝子中の変異の存在または配列番号14をコードする遺伝子中および配列番号26をコードする遺伝子中の変異の存在について、前記DNA試料または前記対象のタバコ植物からの別のDNA試料をスクリーニングするステップをさらに含む請求項23〜25のいずれかに記載の方法。
- a)配列番号1、3または4を含むヌクレオチド配列、
b)配列番号1に示す配列全体と少なくとも98%の配列同一性を有するヌクレオチド配列であって、植物におけるニコチンからノルニコチンへの前記代謝変換に関与するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列、
c)配列番号2、5、6、7、8、9、10、11、12または13に示す配列全体と少なくとも98%の配列同一性を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列であって、植物におけるニコチンからノルニコチンへの前記代謝変換に関与するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列、ならびに
d)前記項目(a)から(c)のいずれかによる前記配列と相補的なヌクレオチド配列からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む単離ポリヌクレオチド。 - a)配列番号2、5、6、7、8、9、10、11、12または13に示すアミノ酸配列、および
b)配列番号2、5、6、7、8、9、10、11、12または13に示すアミノ酸配列と少なくとも98%同一であるアミノ酸配列であって、植物におけるニコチンからノルニコチンへの前記代謝変換に関与するポリペプチドをコードするアミノ酸配列
からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む単離ポリペプチド。 - CYP82E10ニコチン脱メチル化酵素をコードする遺伝子、CYP82E4ニコチン脱メチル化酵素をコードする遺伝子およびCYP82E5ニコチン脱メチル化酵素をコードする遺伝子における変異についてホモ接合型であるタバコ植物またはその植物部分であって、前記変異が、前記CYP82E10ニコチン脱メチル化酵素、CYP82E4ニコチン脱メチル化酵素およびCYP82E5ニコチン脱メチル化酵素の発現または機能の低減をもたらし、前記CYP82E10ニコチン脱メチル化酵素が381位における変異を含み、前記CYP82E4ニコチン脱メチル化酵素が329位における変異を含み、前記CYP82E5ニコチン脱メチル化酵素が422位における変異を含み、前記番号付けが、それぞれ配列番号2、14および26に従う
a)前記CYP82E10ニコチン脱メチル化酵素が、配列番号2に示すアミノ酸配列と少なくとも98%の配列同一性を有し、前記変異が、前記CYP82E10ニコチン脱メチル化酵素のアミノ酸配列の改変をもたらし、前記改変が、配列番号2の79位、107位、381位もしくは419位またはそれらの任意の組合せに対応するアミノ酸残基にて生じ、前記改変が、
i)79位のグリシン残基のセリンによる置換、
ii)107位のプロリン残基のセリンによる置換、
iii)381位のプロリン残基のセリンによる置換、
iv)419位のプロリン残基のセリンによる置換、および
v)それらの任意の組合せ
からなる群より選択され、
b)前記CYP82E4ニコチン脱メチル化酵素が、配列番号14に示す配列と少なくとも98%の配列同一性を有し、前記変異が、前記CYP82E4ニコチン脱メチル化酵素のアミノ酸配列の改変をもたらし、前記改変が、配列番号14の329位、364位、376位、381位もしくは458位またはそれらの任意の組合せに対応するアミノ酸残基にて生じ、前記改変が、
i)329位のトリプトファン残基の停止コドンによる置換、
ii)364位のリシン残基のアスパラギンによる置換、
iii)376位のバリン残基のメチオニンによる置換、
iv)381位のプロリン残基のセリンによる置換、
v)458位のプロリン残基のセリンによる置換、および
vi)それらの任意の組合せ
からなる群より選択され、
c)前記CYP82E5ニコチン脱メチル化酵素が、配列番号26に示す配列と少なくとも98%の配列同一性を有し、前記変異が、前記CYP82E5ニコチン脱メチル化酵素のアミノ酸配列の改変をもたらし、前記改変が、配列番号26の422位もしくは449位またはそれらの任意の組合せに対応する位置アミノ酸残基にて生じ、前記改変が、
i)422位でトリプトファン残基と置換された停止コドン、
ii)449位でプロリン残基と置換されたロイシン、および
iii)それらの任意の組合せ
からなる群より選択されるタバコ植物またはその植物部分。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US29567110P | 2010-01-15 | 2010-01-15 | |
US61/295,671 | 2010-01-15 | ||
PCT/US2011/021088 WO2011088180A1 (en) | 2010-01-15 | 2011-01-13 | Compositions and methods for minimizing nornicotine synthesis in tobacco |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2013516990A JP2013516990A (ja) | 2013-05-16 |
JP6055311B2 true JP6055311B2 (ja) | 2016-12-27 |
Family
ID=43722405
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2012549063A Active JP6055311B2 (ja) | 2010-01-15 | 2011-01-13 | タバコ中のノルニコチン合成を最小限にするための組成物および方法 |
Country Status (14)
Country | Link |
---|---|
US (6) | US9247706B2 (ja) |
EP (1) | EP2524044A1 (ja) |
JP (1) | JP6055311B2 (ja) |
KR (1) | KR101611847B1 (ja) |
CN (1) | CN102858983B (ja) |
AR (2) | AR080636A1 (ja) |
AU (1) | AU2011205282B2 (ja) |
BR (1) | BR112012017565A2 (ja) |
CA (1) | CA2786813C (ja) |
EA (1) | EA033565B1 (ja) |
MX (1) | MX337123B (ja) |
PH (1) | PH12017500180B1 (ja) |
WO (1) | WO2011088180A1 (ja) |
ZA (1) | ZA201205426B (ja) |
Families Citing this family (59)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US10266836B2 (en) | 2001-11-13 | 2019-04-23 | U.S. Smokeless Tobacco Company Llc | Tobacco nicotine demethylase genomic clone and uses thereof |
WO2006091194A1 (en) | 2005-02-23 | 2006-08-31 | North Carolina State University | Alteration of tobacco alkaloid content through modification of specific cytochrome p450 genes |
WO2009064771A2 (en) | 2007-11-12 | 2009-05-22 | North Carolina State University | Alteration of tobacco alkaloid content through modification of specific cytochrome p450 genes |
US9247706B2 (en) | 2010-01-15 | 2016-02-02 | North Carolina State University | Compositions and methods for minimizing nornicotine synthesis in tobacco |
CN103562393A (zh) | 2011-02-28 | 2014-02-05 | 奥驰亚客户服务公司 | 烟草近交植物albex1f和albex1ms |
RU2013139871A (ru) | 2011-02-28 | 2015-04-10 | Норт Каролина Стейт Юниверсити | Инбредные растения табака ncbex1f, ncbex1mc и nc ex90 |
JP6693747B2 (ja) | 2012-12-21 | 2020-05-13 | フィリップ・モーリス・プロダクツ・ソシエテ・アノニム | 植物体中のたばこ特異的ニトロソアミンの低減 |
WO2014110363A1 (en) * | 2013-01-11 | 2014-07-17 | North Carolina State University | Tobacco inbred plants k326 src, cms k326 src, k346 src, cms k346 src, nc1562-1 src, nctg-61 src, cms nctg-61 src and hybrid nc196 src |
US9560830B2 (en) | 2013-03-05 | 2017-02-07 | North Carolina State University | Tobacco inbred and hybrid plants and uses thereof |
US10375910B2 (en) | 2013-03-15 | 2019-08-13 | Altria Client Services Llc | Development of tobacco varieties with no or significantly reduced anatabine content |
US9710787B2 (en) * | 2013-07-31 | 2017-07-18 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Systems and methods for representing, diagnosing, and recommending interaction sequences |
WO2015085299A1 (en) * | 2013-12-06 | 2015-06-11 | Altria Client Services Inc. | Tobacco plants having altered amounts of one or more alkaloids in leaf and methods of using such plants |
WO2015134423A1 (en) * | 2014-03-03 | 2015-09-11 | North Carolina State University | Tobacco inbred and hybrid plants and tobacco products made thereof |
WO2015134438A1 (en) * | 2014-03-03 | 2015-09-11 | North Carolina State University | Tobacco inbred and hybrid plants and tobacco products made thereof |
CN106659232A (zh) * | 2014-03-03 | 2017-05-10 | 北卡罗莱纳州立大学 | 烟草近交和杂种植物以及由其制得的烟草产品 |
WO2015157359A1 (en) | 2014-04-08 | 2015-10-15 | Altria Client Services Llc | Tobacco having altered leaf properties and methods of making and using |
JP6871158B2 (ja) * | 2014-05-08 | 2021-05-12 | フィリップ・モーリス・プロダクツ・ソシエテ・アノニム | 植物体におけるニコチンからノルニコチンへの変換の低減 |
RU2721799C2 (ru) | 2014-09-26 | 2020-05-22 | Филип Моррис Продактс С.А. | Уменьшение содержания табак-специфичных нитрозаминов посредством изменения пути ассимиляции нитратов |
WO2016057515A2 (en) | 2014-10-06 | 2016-04-14 | Altria Client Services Llc | Genetic control of axillary bud growth in tobacco plants |
JP2018516550A (ja) * | 2015-05-05 | 2018-06-28 | ノース カロライナ ステート ユニバーシティNorth Carolina State University | タバコ中のタバコ特異的ニトロソアミンnnkを低減するための方法及び組成物 |
EP4218404A3 (en) * | 2015-06-26 | 2023-09-06 | Altria Client Services LLC | Compositions and methods for producing tobacco plants and products having altered alkaloid levels |
CN105602961B (zh) * | 2015-09-07 | 2018-10-23 | 中国农业科学院烟草研究所 | 突变的烤烟cyp82e4基因及其应用 |
CN108697059B (zh) | 2016-01-29 | 2023-06-16 | 菲利普莫里斯生产公司 | 减少田地生长烟草植物中的镉累积 |
CN109715810B (zh) | 2016-03-11 | 2023-07-14 | 奥驰亚客户服务有限公司 | 用于生产烟杈减少或消除的烟草植物和制品的组合物和方法 |
WO2018067985A1 (en) | 2016-10-07 | 2018-04-12 | Altria Client Services Llc | Composition and methods for producing tobacco plants and products having reduced tobacco-specific nitrosamines (tsnas) |
WO2018114641A1 (en) | 2016-12-20 | 2018-06-28 | Philip Morris Products S.A. | Plants with shortened time to flowering |
WO2018119124A1 (en) | 2016-12-21 | 2018-06-28 | Altria Client Services Llc | Compositions and methods for producing tobacco plants and products having altered alkaloid levels |
CN106636146B (zh) * | 2017-02-16 | 2019-09-13 | 云南省烟草农业科学研究院 | 一种降低尼古丁转化率的cyp82e5基因突变体及其应用 |
CN111108205B (zh) | 2017-09-11 | 2024-05-28 | 奥驰亚客户服务有限公司 | 用于生产烟杈减少或消除的烟草植物和制品的组合物和方法 |
EP3480314A1 (en) * | 2017-11-03 | 2019-05-08 | Philip Morris Products S.A. | Regulation of alkaloid content |
CN111726983B (zh) * | 2017-12-07 | 2024-05-07 | 肯塔基大学研究基金会 | bZIP转录因子调节烟碱向降烟碱的转化 |
US11950563B2 (en) | 2018-01-12 | 2024-04-09 | Altria Client Services Llc | Compositions and methods for producing tobacco plants and products having altered alkaloid levels |
CN108192900B (zh) * | 2018-01-16 | 2021-11-30 | 西南大学 | 烟草烟碱去甲基化酶基因cyp82e4的编辑失活载体及其应用 |
US11220695B2 (en) | 2018-03-05 | 2022-01-11 | Altria Client Services Llc | Compositions and methods for producing tobacco plants and products having altered alkaloid levels with desirable leaf quality |
AR115022A1 (es) | 2018-03-28 | 2020-11-18 | Philip Morris Products Sa | Modulación del contenido de aminoácidos en una planta |
WO2019185699A1 (en) | 2018-03-28 | 2019-10-03 | Philip Morris Products S.A. | Modulating reducing sugar content in a plant |
US11377665B2 (en) | 2018-04-03 | 2022-07-05 | Altria Client Services Llc | Composition and methods for producing tobacco plants and products having increased phenylalanine and reduced tobacco-specific nitrosamines (TSNAs) |
CN108424922B (zh) * | 2018-04-20 | 2021-04-16 | 云南省烟草农业科学研究院 | 一种降低尼古丁转化率的cyp82e10基因错义突变体m271及其应用 |
WO2020023864A1 (en) | 2018-07-26 | 2020-01-30 | Altria Client Services Llc | Compositions and methods based on pmt engineering for producing tobacco plants and products having altered alkaloid levels |
US11976286B2 (en) | 2018-12-30 | 2024-05-07 | Philip Morris Products S.A. | Modulation of nitrate levels in plants via mutation of nitrate reductase |
EP3914069A1 (en) | 2019-01-24 | 2021-12-01 | Altria Client Services LLC | Tobacco plants comprising reduced nicotine and reduced tobacco specific nitrosamines |
CN113939201A (zh) * | 2019-06-05 | 2022-01-14 | R·J·雷诺烟草公司 | bZIP转录因子调节烟碱向去甲烟碱的转化并降低烟草特异性(TSNA)前体的水平 |
EP4041753A1 (en) | 2019-10-01 | 2022-08-17 | Philip Morris Products S.A. | Modulating sugar and amino acid content in a plant (sultr3) |
EP4041896A1 (en) | 2019-10-01 | 2022-08-17 | Philip Morris Products S.A. | Modulating reducing sugar content in a plant (inv) |
WO2021072241A1 (en) | 2019-10-10 | 2021-04-15 | Altria Client Services Llc | Compositions and methods for producing tobacco plants and products having altered alkaloid levels with desirable leaf quality via manipulating leaf quality genes |
US20230399651A1 (en) | 2019-10-10 | 2023-12-14 | Altria Client Services Llc | Compositions and Methods Based on QPT Engineering for Producing Tobacco Plants and Products Having Altered Alkaloid Levels |
EP4069854A1 (en) | 2019-12-03 | 2022-10-12 | Altria Client Services LLC | Compositions and methods for producing tobacco plants and products having altered alkaloid levels |
WO2021146585A1 (en) | 2020-01-17 | 2021-07-22 | Altria Client Services Llc | Methods and compositions related to improved nitrogen use efficiency |
WO2021154738A1 (en) | 2020-01-27 | 2021-08-05 | Altria Client Services Llc | Compositions and methods based on pmt engineering for producing tobacco plants and products having altered alkaloid levels |
WO2021158973A1 (en) | 2020-02-06 | 2021-08-12 | Trustees Of Boston University | Enzyme-based electrochemical nicotine biosensor |
WO2021221752A2 (en) | 2020-02-06 | 2021-11-04 | Trustees Of Boston University | High throughput assay for identifying microbial redox enzymes |
WO2021236791A1 (en) | 2020-05-20 | 2021-11-25 | Altria Client Services Llc | A hybrid air and fire curing combination process to reduce harmful and potentially harmful constituents in cured tobacco |
CN111662912A (zh) * | 2020-06-01 | 2020-09-15 | 云南省烟草农业科学研究院 | 一种烟草NtARF6基因突变体及分子鉴定方法和应用 |
US20220010324A1 (en) | 2020-06-03 | 2022-01-13 | Altria Client Services Llc | Compositions and methods for producing tobacco plants and products having altered alkaloid levels |
WO2023117661A1 (en) | 2021-12-20 | 2023-06-29 | Philip Morris Products S.A. | Increasing anatabine in tobacco leaf by regulating methyl putrescine oxidase |
WO2023117701A1 (en) | 2021-12-21 | 2023-06-29 | Philip Morris Products S.A. | Modulation of nicotine production by alteration of nicotinamidase expression or function in plants |
WO2023230433A1 (en) | 2022-05-23 | 2023-11-30 | Altria Client Services Llc | Methods and compositions for regulating alkaloids in tobacco field |
US20240132901A1 (en) | 2022-08-05 | 2024-04-25 | Altria Client Services Llc | Methods and compositions for regulating alkaloids in tobacco |
WO2024079137A1 (en) | 2022-10-13 | 2024-04-18 | Philip Morris Products S.A. | Increasing leaf biomass and nitrogen use efficiency by regulating ntp2 |
Family Cites Families (91)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4762785A (en) | 1982-08-12 | 1988-08-09 | Calgene, Inc. | Novel method and compositions for introducting alien DNA in vivo |
EP0290799B9 (en) | 1983-01-13 | 2004-09-01 | Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. | Transgenic dicotyledonous plant cells and plants |
US5352605A (en) | 1983-01-17 | 1994-10-04 | Monsanto Company | Chimeric genes for transforming plant cells using viral promoters |
EP0131624B1 (en) | 1983-01-17 | 1992-09-16 | Monsanto Company | Plasmids for transforming plant cells |
NL8300698A (nl) | 1983-02-24 | 1984-09-17 | Univ Leiden | Werkwijze voor het inbouwen van vreemd dna in het genoom van tweezaadlobbige planten; agrobacterium tumefaciens bacterien en werkwijze voor het produceren daarvan; planten en plantecellen met gewijzigde genetische eigenschappen; werkwijze voor het bereiden van chemische en/of farmaceutische produkten. |
NL8300699A (nl) | 1983-02-24 | 1984-09-17 | Univ Leiden | Werkwijze voor het inbouwen van vreemd dna in het genoom van tweezaadlobbige planten; werkwijze voor het produceren van agrobacterium tumefaciens bacterien; stabiele cointegraat plasmiden; planten en plantecellen met gewijzigde genetische eigenschappen; werkwijze voor het bereiden van chemische en/of farmaceutische produkten. |
NL8401048A (nl) | 1984-04-03 | 1985-11-01 | Rijksuniversiteit Leiden En Pr | Werkwijze voor het inbouwen van vreemd dna in het genoom van eenzaadlobbige planten. |
US4732856A (en) | 1984-04-03 | 1988-03-22 | Carnegie Institution Of Washington | Transposable elements and process for using same |
US5231019A (en) | 1984-05-11 | 1993-07-27 | Ciba-Geigy Corporation | Transformation of hereditary material of plants |
NL8401780A (nl) | 1984-06-04 | 1986-01-02 | Rijksuniversiteit Leiden En Pr | Werkwijze voor het inbouwen van vreemd dna in het genoom van planten. |
US5149645A (en) | 1984-06-04 | 1992-09-22 | Rijksuniversiteit Leiden | Process for introducing foreign DNA into the genome of plants |
US4945050A (en) | 1984-11-13 | 1990-07-31 | Cornell Research Foundation, Inc. | Method for transporting substances into living cells and tissues and apparatus therefor |
US5107065A (en) | 1986-03-28 | 1992-04-21 | Calgene, Inc. | Anti-sense regulation of gene expression in plant cells |
AU7360087A (en) | 1986-04-30 | 1987-11-24 | Boyce Thompson Institute For Plant Research Inc. | Electric field mediated dna transformation of plant cells and organelles |
US5188958A (en) | 1986-05-29 | 1993-02-23 | Calgene, Inc. | Transformation and foreign gene expression in brassica species |
GB8615676D0 (en) * | 1986-06-26 | 1986-07-30 | Stoppers Co Ltd | Nicotine containing lozenge |
US5177010A (en) | 1986-06-30 | 1993-01-05 | University Of Toledo | Process for transforming corn and the products thereof |
US4801540A (en) | 1986-10-17 | 1989-01-31 | Calgene, Inc. | PG gene and its use in plants |
EP0267159A3 (de) | 1986-11-07 | 1990-05-02 | Ciba-Geigy Ag | Verfahren zur genetischen Modifikation monokotyler Pflanzen |
SE455438B (sv) | 1986-11-24 | 1988-07-11 | Aga Ab | Sett att senka en brennares flamtemperatur samt brennare med munstycken for oxygen resp brensle |
US5004863B2 (en) | 1986-12-03 | 2000-10-17 | Agracetus | Genetic engineering of cotton plants and lines |
US5350689A (en) | 1987-05-20 | 1994-09-27 | Ciba-Geigy Corporation | Zea mays plants and transgenic Zea mays plants regenerated from protoplasts or protoplast-derived cells |
ES2121803T3 (es) | 1987-05-20 | 1998-12-16 | Novartis Ag | Plantas de zea mays y plantas transgenicas de zea mays generadas a partir de protoplastos o celulas derivadas de protoplastos. |
US5013658A (en) | 1988-05-13 | 1991-05-07 | Dna Plant Technology Corporation | Transposon tagging of genes in transformed plants |
EP0342926B1 (en) | 1988-05-17 | 1994-09-28 | Mycogen Plant Science, Inc. | Plant ubiquitin promoter system |
US5034323A (en) | 1989-03-30 | 1991-07-23 | Dna Plant Technology Corporation | Genetic engineering of novel plant phenotypes |
US5302523A (en) | 1989-06-21 | 1994-04-12 | Zeneca Limited | Transformation of plant cells |
US5141131A (en) | 1989-06-30 | 1992-08-25 | Dowelanco | Method and apparatus for the acceleration of a propellable matter |
EP0426641B1 (en) | 1989-10-31 | 2000-09-13 | Monsanto Company | Promoter for transgenic plants |
US5668295A (en) | 1990-11-14 | 1997-09-16 | Philip Morris Incorporated | Protein involved in nicotine synthesis, DNA encoding, and use of sense and antisense DNAs corresponding thereto to affect nicotine content in transgenic tobacco cells and plants |
US5260205A (en) | 1990-11-14 | 1993-11-09 | Philip Morris Incorporated | Method of purifying putrescine N-methyltransferase from tobacco plant extract with a polyamine |
DK0558676T3 (da) | 1990-11-23 | 2000-09-25 | Aventis Cropscience Nv | Fremgangsmåde til transformering af enkimbladede planter |
US5384253A (en) | 1990-12-28 | 1995-01-24 | Dekalb Genetics Corporation | Genetic transformation of maize cells by electroporation of cells pretreated with pectin degrading enzymes |
EP0626998B1 (en) | 1992-02-19 | 2001-10-31 | The State Of Oregon Acting By And Through The Oregon Stateboard Of Higher Education On Behalf Of The University Of Oregon | Production of viral resistant plants via introduction of untranslatable plus sense viral rna |
JPH07505531A (ja) | 1992-04-15 | 1995-06-22 | プラント・ジェネティック・システムズ・エヌ・ブイ | 単子葉植物細胞の形質転換法 |
US5311143A (en) | 1992-07-02 | 1994-05-10 | Motorola, Inc. | RF amplifier bias control method and apparatus |
US5469976A (en) | 1993-04-30 | 1995-11-28 | Burchell; James R. | Shelf allocation and management system |
DE69404385T2 (de) | 1993-06-04 | 1998-02-19 | Cavis Srl | Trägheitsschalter zur Ausschaltung der Batterie eines Kraftfahrzeuges |
EP0865499B1 (en) | 1995-09-14 | 2009-03-18 | Virginia Tech Intellectual Properties, Inc. | Production of lysosomal enzymes in plant-based expression systems |
US5713376A (en) | 1996-05-13 | 1998-02-03 | Berger; Carl | Non-addictive tobacco products |
US7238860B2 (en) | 2001-04-18 | 2007-07-03 | Mendel Biotechnology, Inc. | Yield-related polynucleotides and polypeptides in plants |
EP1033405A3 (en) | 1999-02-25 | 2001-08-01 | Ceres Incorporated | Sequence-determined DNA fragments and corresponding polypeptides encoded thereby |
WO2000067558A1 (en) | 1999-05-06 | 2000-11-16 | Michael Timko | Regulation of gene expression in tobacco for manipulation of plant growth and secondary metabolism |
EP1276886B1 (en) | 2000-04-26 | 2012-11-28 | Monsanto Technology LLC | Method for the transformation of plant cell plastids |
CA2440278C (en) | 2001-03-09 | 2017-02-28 | University Of Kentucky Research Foundation | Cytochrome p450s and uses thereof |
EP1406518A4 (en) | 2001-06-08 | 2006-03-29 | Vector Tobacco Ltd | CHANGES IN NICOTINE AND NITROSAMINE LEVELS IN TOBACCO |
US20060157072A1 (en) | 2001-06-08 | 2006-07-20 | Anthony Albino | Method of reducing the harmful effects of orally or transdermally delivered nicotine |
US7032601B2 (en) | 2001-09-28 | 2006-04-25 | U.S. Smokeless Tobacco Company | Encapsulated materials |
US6953040B2 (en) | 2001-09-28 | 2005-10-11 | U.S. Smokeless Tobacco Company | Tobacco mint plant material product |
US7700834B2 (en) | 2001-11-13 | 2010-04-20 | U.S. Smokless Tobacco Company | Nicotiana nucleic acid molecules and uses thereof |
US7812227B2 (en) | 2001-11-13 | 2010-10-12 | U.S. Smokeless Tobacco Company | Cloning of cytochrome p450 genes from nicotiana |
US7855318B2 (en) | 2001-11-13 | 2010-12-21 | U.S. Smokeless Tobacco Company | Cloning of cytochrome P450 genes from Nicotiana |
US20040162420A1 (en) | 2002-10-16 | 2004-08-19 | U.S. Smokeless Tobacco Company | Cloning of cytochrome p450 genes from nicotiana |
US20040111759A1 (en) | 2001-11-13 | 2004-06-10 | U.S. Smokeless Tobacco Company | Identification and use of cytochrome P450 nucleic acid sequences from tobacco |
US20040117869A1 (en) | 2002-01-11 | 2004-06-17 | U.S. Smokeless Tobacco Company | Cloning of cytochrome P450 genes from Nicotiana |
US8592663B2 (en) | 2001-11-13 | 2013-11-26 | U.S. Smokeless Tobacco Company Llc | Tobacco nicotine demethylase genomic clone and uses thereof |
US7700851B2 (en) | 2001-11-13 | 2010-04-20 | U.S. Smokeless Tobacco Company | Tobacco nicotine demethylase genomic clone and uses thereof |
US20040103449A1 (en) | 2001-11-13 | 2004-05-27 | U.S. Smokeless Tobacco Company | Identification and use of cytochrome P450 nucleic acid sequences from tobacco |
WO2003078577A2 (en) | 2002-03-12 | 2003-09-25 | U.S. Smokeless Tobacco Company | Cloning of cytochrome p450 genes from nicotiana |
JP2006519590A (ja) | 2002-10-16 | 2006-08-31 | ユーエス スモークレス タバコ カンパニー | タバコ属由来のシトクロムp450遺伝子のクローニング |
US20050019448A1 (en) | 2003-07-22 | 2005-01-27 | Kevin Engelhardt | Liquid flavoring dissolving strips and method of use thereof |
CN102703477A (zh) | 2003-10-16 | 2012-10-03 | 美国无烟烟草有限责任公司 | 从烟草克隆细胞色素p450基因 |
EP2330191A1 (en) | 2003-10-16 | 2011-06-08 | U.S. Smokeless Tobacco Company | Cloning of cytochrome P450 genes from nicotiana |
US8637731B2 (en) | 2003-10-16 | 2014-01-28 | U.S. Smokeless Tobacco Company | Nicotiana nucleic acid molecules and uses thereof |
BRPI0415363A (pt) | 2003-10-16 | 2006-12-12 | Us Smokeless Tobacco Co | molécula de ácido nucleico isolada a partir de nicotina, planta transgênica, e, métodos de produção de uma planta transgênica, de seleção de uma planta contendo uma molécula de ácido nucleico, e de aumento ou diminuição dos nìveis de nornicotina em uma planta |
US8627828B2 (en) | 2003-11-07 | 2014-01-14 | U.S. Smokeless Tobacco Company Llc | Tobacco compositions |
CN102669810B (zh) | 2003-11-07 | 2014-11-05 | 美国无烟烟草有限责任公司 | 烟草组合物 |
US7694686B2 (en) | 2003-12-22 | 2010-04-13 | U.S. Smokeless Tobacco Company | Conditioning process for tobacco and/or snuff compositions |
EP2295549B1 (en) | 2004-04-29 | 2015-02-25 | U.S. Smokeless Tobacco Company LLC | Nicotiana nucleic acid molecules and uses thereof |
US8586837B2 (en) * | 2004-04-29 | 2013-11-19 | U.S. Smokeless Tobacco Company Llc | Nicotiana nucleic acid molecules and uses thereof |
JP2008510486A (ja) | 2004-08-23 | 2008-04-10 | ユーエス スモークレス タバコ カンパニー | 多様性を持つタバコ |
US20060185686A1 (en) | 2004-08-23 | 2006-08-24 | Lawrence Robert H Jr | Nicotiana diversity |
US20070199097A1 (en) | 2004-09-03 | 2007-08-23 | U.S. Smokeless Tobacco Company | Tobacco plants having a mutation in a nicotine demethylase gene |
WO2006091194A1 (en) | 2005-02-23 | 2006-08-31 | North Carolina State University | Alteration of tobacco alkaloid content through modification of specific cytochrome p450 genes |
US7950399B2 (en) | 2005-04-29 | 2011-05-31 | Philip Morris Usa Inc. | Non-tobacco pouch product |
US7757697B2 (en) | 2005-12-22 | 2010-07-20 | Swisher International, Inc. | Method for reducing nitrosamines in tobacco |
CA2666383C (en) | 2006-10-13 | 2015-12-22 | North Carolina State University | Alteration of tobacco alkaloid content through modification of specific cytochrome p450 genes |
US8319011B2 (en) * | 2006-12-15 | 2012-11-27 | U.S. Smokeless Tobacco Company Llc | Tobacco plants having reduced nicotine demethylase activity |
US8186360B2 (en) | 2007-04-04 | 2012-05-29 | R.J. Reynolds Tobacco Company | Cigarette comprising dark air-cured tobacco |
US7667104B2 (en) | 2007-11-06 | 2010-02-23 | Alliance One International, Inc. | Tobacco cultivar AOB 171 |
WO2009064771A2 (en) * | 2007-11-12 | 2009-05-22 | North Carolina State University | Alteration of tobacco alkaloid content through modification of specific cytochrome p450 genes |
US9247706B2 (en) | 2010-01-15 | 2016-02-02 | North Carolina State University | Compositions and methods for minimizing nornicotine synthesis in tobacco |
JP5550433B2 (ja) | 2010-04-22 | 2014-07-16 | 任天堂株式会社 | 操作装置および情報処理システム |
RU2013139871A (ru) | 2011-02-28 | 2015-04-10 | Норт Каролина Стейт Юниверсити | Инбредные растения табака ncbex1f, ncbex1mc и nc ex90 |
WO2014110363A1 (en) | 2013-01-11 | 2014-07-17 | North Carolina State University | Tobacco inbred plants k326 src, cms k326 src, k346 src, cms k346 src, nc1562-1 src, nctg-61 src, cms nctg-61 src and hybrid nc196 src |
US9560830B2 (en) | 2013-03-05 | 2017-02-07 | North Carolina State University | Tobacco inbred and hybrid plants and uses thereof |
WO2015134423A1 (en) | 2014-03-03 | 2015-09-11 | North Carolina State University | Tobacco inbred and hybrid plants and tobacco products made thereof |
CN106659232A (zh) | 2014-03-03 | 2017-05-10 | 北卡罗莱纳州立大学 | 烟草近交和杂种植物以及由其制得的烟草产品 |
US9560823B2 (en) | 2015-05-01 | 2017-02-07 | Monsanto Technology Llc | Plants and seeds of hybrid corn variety CH103948 |
US9560822B2 (en) | 2015-05-01 | 2017-02-07 | Monsanto Technology Llc | Plants and seeds of hybrid corn variety CH100298 |
US9560824B2 (en) | 2015-05-01 | 2017-02-07 | Monsanto Technology Llc | Plants and seeds of hybrid corn variety CH138178 |
-
2011
- 2011-01-13 US US13/521,766 patent/US9247706B2/en active Active
- 2011-01-13 JP JP2012549063A patent/JP6055311B2/ja active Active
- 2011-01-13 EP EP11701711A patent/EP2524044A1/en active Pending
- 2011-01-13 AU AU2011205282A patent/AU2011205282B2/en active Active
- 2011-01-13 KR KR1020127021338A patent/KR101611847B1/ko active IP Right Grant
- 2011-01-13 CA CA2786813A patent/CA2786813C/en active Active
- 2011-01-13 CN CN201180014010.5A patent/CN102858983B/zh active Active
- 2011-01-13 EA EA201201004A patent/EA033565B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2011-01-13 MX MX2012008060A patent/MX337123B/es active IP Right Grant
- 2011-01-13 WO PCT/US2011/021088 patent/WO2011088180A1/en active Application Filing
- 2011-01-13 BR BRBR112012017565-3A patent/BR112012017565A2/pt not_active Application Discontinuation
- 2011-01-13 AR ARP110100113A patent/AR080636A1/es unknown
-
2012
- 2012-07-19 ZA ZA2012/05426A patent/ZA201205426B/en unknown
-
2015
- 2015-12-28 US US14/980,523 patent/US10194624B2/en active Active
-
2017
- 2017-01-31 PH PH12017500180A patent/PH12017500180B1/en unknown
- 2017-06-29 US US15/637,865 patent/US10681883B2/en active Active
-
2020
- 2020-05-07 US US16/868,750 patent/US11304395B2/en active Active
- 2020-10-21 AR ARP200102910A patent/AR120271A2/es unknown
-
2022
- 2022-03-07 US US17/653,699 patent/US11877556B2/en active Active
-
2023
- 2023-12-21 US US18/392,210 patent/US20240122151A1/en active Pending
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US11877556B2 (en) | Compositions and methods for minimizing nornicotine synthesis in tobacco | |
US11492633B2 (en) | Tobacco having altered leaf properties and methods of making and using | |
JP7399923B2 (ja) | アルカロイドレベル改変タバコ植物体及び製品を作出する組成物及び方法 | |
US20210045310A1 (en) | Alteration of tobacco alkaloid content through modification of specific cytochrome p450 genes | |
Lewis et al. | Three nicotine demethylase genes mediate nornicotine biosynthesis in Nicotiana tabacum L.: functional characterization of the CYP82E10 gene | |
US10294520B2 (en) | Nicotiana nucleic acid molecules and uses thereof | |
TW200845887A (en) | Tobacco plants having reduced nicotine demethylase activity | |
CN115485386B (zh) | 低生物碱含量的烟草属植物体及其制备方法 | |
CN113271768B (zh) | 经由硝酸盐还原酶的突变来调节植物中的硝酸盐水平 | |
Lopez | Developing Non-GMO Tobacco Cultivars with Lower Alkaloid Content Using a Reverse Genetics Strategy. |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20131219 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20150217 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20150515 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20150601 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20150828 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20151127 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20151228 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20160128 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20160226 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20160510 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20160909 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20160912 |
|
A911 | Transfer to examiner for re-examination before appeal (zenchi) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A911 Effective date: 20161005 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20161102 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20161202 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6055311 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |