JP6022609B2 - 酵素安定化のための適合溶質エクトインおよびその誘導体 - Google Patents
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Description
(a)脱水素酵素、
(b)酸化還元補因子、
(c)酸化還元等価物の存在下で指示試薬の光学的特性における少なくとも一つの光学的変化を導くことのできる試剤、
(d)指示試薬、および
(e)エクトインまたはその誘導体である少なくとも一つの適合溶質
を含む乾燥組成物に関する。
(i)本発明の組成物の成分(a)〜(e)および溶媒を含む組成物(すなわち、乾燥状態ではなく溶解された状態にある成分を含む組成物)を担体上の試験フィールドへと適用する工程、および
(ii)前記溶媒を組成物から除去する工程
または、
(i)本発明の組成物の成分(a)、(b)、(d)および(e)ならびに溶媒を含む組成物(すなわち、乾燥状態ではなく溶解された状態にある成分を含む組成物)を第一の層中の担体上の試験フィールドへと適用する工程、
(ii)前記溶媒を第一の層の組成物から除去する工程、
(iii)本発明の組成物の成分(c)〜(e)および溶媒を含む組成物(すなわち、乾燥状態ではなく溶解された状態にある成分を含む組成物)を第一の層上の第二の層中に適用する工程、および
(iv)前記溶媒を第二の層の組成物から除去する工程
または
(i)本発明の組成物の成分(a)、(b)、(d)および(e)ならびに溶媒を含む組成物(すなわち、乾燥状態ではなく溶解された状態にある成分を含む組成物)を第一の層中の担体上の試験フィールドへと適用する工程、
(ii)前記溶媒を第一の層の組成物から除去する工程、
(iii)本発明の組成物の成分(b)〜(e)および溶媒を含む組成物(すなわち、乾燥状態ではなく溶解された状態にある成分を含む組成物)を第一の層上の第二の層中に適用する工程、および
(iv)前記溶媒を第二の層の組成物から除去する工程
または
(i)本発明の組成物の成分(a)、(d)および(e)ならびに溶媒を含む組成物(すなわち、乾燥状態ではなく溶解された状態にある成分を含む組成物)を第一の層中の担体上の試験フィールドへと適用する工程、
(ii)前記溶媒を第一の層の組成物から除去する工程、
(iii)本発明の組成物の成分(b)〜(e)および溶媒を含む組成物(すなわち、乾燥状態ではなく溶解された状態にある成分を含む組成物)を第一の層上の第二の層中に適用する工程、および
(iv)前記溶媒を第二の層の組成物から除去する工程
または
(i)本発明の組成物の成分(c)〜(e)および溶媒を含む組成物(すなわち、乾燥状態ではなく溶解された状態にある成分を含む組成物)を第一の層中の担体上の試験フィールドへと適用する工程、
(ii)前記溶媒を第一の層の組成物から除去する工程、
(iii)本発明の組成物の成分(a)、(b)、(d)および(e)ならびに溶媒を含む組成物(すなわち、乾燥状態ではなく溶解された状態にある成分を含む組成物)を第一の層上の第二の層中に適用する工程、および
(iv)前記溶媒を第二の層の組成物から除去する工程
または
(i)本発明の組成物の成分(b)〜(e)および溶媒を含む組成物(すなわち、乾燥状態ではなく溶解された状態にある成分を含む組成物)を第一の層中の担体上の試験フィールドへと適用する工程、
(ii)前記溶媒を第一の層の組成物から除去する工程、
(iii)本発明の組成物の成分(a)、(b)、(d)および(e)ならびに溶媒を含む組成物(すなわち、乾燥状態ではなく溶解された状態にある成分を含む組成物)を第一の層上の第二の層中に適用する工程、および
(iv)前記溶媒を第二の層の組成物から除去する工程
または
(i)本発明の組成物の成分(b)〜(e)および溶媒を含む組成物(すなわち、乾燥状態ではなく溶解された状態にある成分を含む組成物)を第一の層中の担体上の試験フィールドへと適用する工程、
(ii)前記溶媒を第一の層の組成物から除去する工程、
(iii)本発明の組成物の成分(a)、(d)および(e)ならびに溶媒を含む組成物(すなわち、乾燥状態ではなく溶解された状態にある成分を含む組成物)を第一の層上の第二の層中に適用する工程、および
(iv)前記溶媒を第二の層の組成物から除去する工程、
を含む。
(a)本発明の診断用試験エレメントを、少なくとも一つの酵素を再構成状態へと転換するために適切な条件下で、分析物を含むことが予想される体液と接触させる工程、
(b)診断用試験エレメント上で再構成状態にある少なくとも一つの酵素を含む湿潤組成物中の指示試薬の少なくとも一つの光学的特性における変化を測定し、それによって体液サンプル中の分析物の存在または量が決定される工程
を含む、体液サンプル中の分析物の存在または量を測定するための方法に関する。
グルコースレベルを測定するための4つの異なる反応フィルムが作製され、そして、欧州特許第0821234号明細書 実施例1に本質的に記載されているホイル上にコーティングされた。組成物の処方は、以下の表1に示されている。
試験エレメントは、乾燥剤の存在下、45℃で6週間のあいだプラスチックバイアル中で保管された。続く工程において、試験エレメントの試験フィールドが、溶出緩衝液を用いて超音波処理によって溶出された。上澄み中で、酵素活性が測定された。
試験エレメントは、乾燥剤の存在下、4℃(KS)、24℃(RT)、35℃(DT)および45℃(HT)で63日間のあいだプラスチックバイアル中で保管された。試験エレメントは、複数の静脈血サンプルの血糖レベルを測定するために使用された。サンプルは、並行して参照方法(Hitachi)とともに測定された。結果は、KSで保管された試験エレメントに対して正規化された。
試験エレメントは、本質的に実施例3で記載されているように保管され、および、処理された。種々の緩衝液、すなわち、リン酸緩衝液 pH6.8、安定剤なし、リン酸緩衝液 pH6.8、第一のコーティングフィルム100gあたり2gのエクトイン、HEPES緩衝液 pH7.1、安定剤なし、および、HEPES緩衝液 pH7.1、第一のコーティングフィルム100gあたり2gのエクトイン、が図4に示されているように、コーティング組成物中に使用された。図より明らかなように、エクトインの安定化能は緩衝液系とは無関係に観察された。
国際公開公報2011/020856号に記載されているグルコース脱水素酵素突然変異体2を含む溶液の一定分量が、表4に示されるように、種々の量のエクトインまたはヒドロキシエクトインと合わせられた。
Gluc−DORおよびその変異体(Gluc−DOR 31)を用いた試験エレメントが、上の実施例1に記載されるように作製された。試験エレメントは、上の実施例2に記載されるように分析された。酵素活性の測定は、欧州特許第0620283号明細書に記載されるようにニトロソアニリンを用いて行われた。図5より明らかなように、安定化効果は、45℃で3週間後にすでに観察可能である。
Claims (19)
- 以下の成分
(a)脱水素酵素、
(b)酸化還元補因子、
(c)酸化還元等価物の存在下で指示試薬の少なくとも一つの光学的特性における変化を導くことのできる試剤、
(d)指示試薬、および
(e)エクトインまたはその誘導体である少なくとも一つの適合溶質
を含む乾燥組成物であって、前記脱水素酵素がグルコース脱水素酵素であり、および、前記エクトインの誘導体が、ヒドロキシエクトイン、ホモエクトイン、ヒドロキシエクトインエステル、ヒドロキシエクトインエーテル、エクトインのスルホニル誘導体またはエステル化されたエクトインのスルホニル誘導体およびエクトインのスルホニル誘導体のアミドからなる群より選択される組成物。 - 前記グルコース脱水素酵素が、グルコース脱水素酵素(EC番号 1.1.1.47)、キノプロテイングルコース脱水素酵素(EC番号 1.1.5.2)、グルコース−6−リン酸脱水素酵素(EC番号 1.1.1.49)、ニコチンアミド−アデニン−ジヌクレオチド(NAD)−依存性グルコース脱水素酵素(EC番号 1.1.1.119)およびフラビン−アデニン−ジヌクレオチド(FAD)−依存性グルコース脱水素酵素(EC番号 1.1.99.10)、または、それらの酵素的に活性な変異体からなる群より選択される請求項1記載の組成物。
- 前記キノプロテイングルコース脱水素酵素(EC番号 1.1.5.2)が、ピロロキノリンキノン(PQQ)依存性グルコース脱水素酵素(EC番号 1.1.5.2)である請求項2記載の組成物。
- 前記酸化還元等価物の存在下で少なくとも一つの光学的特性における変化を導くことのできる試剤が、前記酸化還元等価物を前記酸化還元補因子から前記指示試薬へと移動させる能力を有する請求項1〜3のいずれか1項に記載の組成物。
- 前記試剤が、
(i)ジアホラーゼ、
(ii)フェナジン、
(iii)ニトロソアニリン、または
(iv)キノン
である請求項4記載の組成物。 - 前記ジアホラーゼが、リポアミド脱水素酵素またはNADH脱水素酵素である請求項5記載の組成物。
- 前記フェナジンが、フェナジンエトサルフェート、フェナジンメトサルフェート、1−(3−カルボキシプロポキシ)−5−エチルフェナジニウムトリフルオロメタンスルホネートまたは1−メトキシフェナジンメトサルフェートである請求項5記載の組成物。
- 前記ニトロソアニリンが、[(4−ニトロソフェニル)イミノ]ジメタノール塩酸塩である請求項5記載の組成物。
- 前記キノンが、フェナントレンキノン、フェナントロリンキノンまたはベンゾ[h]−キノリンキノンである請求項5記載の組成物。
- 前記酸化還元補因子が、カルバ−NAD、NAD、FADおよびPQQからなる群より選択される請求項1〜9のいずれか1項に記載の組成物。
- 請求項1〜10のいずれか1項に記載の組成物を担体上に含む、体液サンプルからの分析物の測定のための診断用試験エレメント。
- 前記担体が、前記組成物を含む試験フィールドを備え、前記試験フィールドはその上に前記体液サンプルが適用されるサンプル適用面と、前記分析物が前記組成物と反応した際の前記試薬の少なくとも一つの光学的特性における変化を検出することを可能にする検出面と、を備える請求項11記載の試験エレメント。
- 固体の担体上に請求項1〜10のいずれか1項に記載の組成物を作製するための工程を含む、診断用試験エレメントを製造するための方法。
- 前記作製が、以下の工程
(i)本発明の組成物の成分(a)〜(e)および溶媒を含む組成物(すなわち、乾燥状態ではなく溶解された状態にある成分を含む組成物)を担体上の試験フィールドへと適用する工程、および
(ii)前記溶媒を組成物から除去する工程
または、
(i)本発明の組成物の成分(a)、(b)、(d)および(e)ならびに溶媒を含む組成物(すなわち、乾燥状態ではなく溶解された状態にある成分を含む組成物)を第一の層中の担体上の試験フィールドへと適用する工程、
(ii)前記溶媒を第一の層の組成物から除去する工程、
(iii)本発明の組成物の成分(c)〜(e)および溶媒を含む組成物(すなわち、乾燥状態ではなく溶解された状態にある成分を含む組成物)を第一の層上の第二の層中に適用する工程、および
(iv)前記溶媒を第二の層の組成物から除去する工程
または
(i)本発明の組成物の成分(a)、(b)、(d)および(e)ならびに溶媒を含む組成物(すなわち、乾燥状態ではなく溶解された状態にある成分を含む組成物)を第一の層中の担体上の試験フィールドへと適用する工程、
(ii)前記溶媒を第一の層の組成物から除去する工程、
(iii)本発明の組成物の成分(b)〜(e)および溶媒を含む組成物(すなわち、乾燥状態ではなく溶解された状態にある成分を含む組成物)を第一の層上の第二の層中に適用する工程、および
(iv)前記溶媒を第二の層の組成物から除去する工程
または
(i)本発明の組成物の成分(a)、(d)および(e)ならびに溶媒を含む組成物(すなわち、乾燥状態ではなく溶解された状態にある成分を含む組成物)を第一の層中の担体上の試験フィールドへと適用する工程、
(ii)前記溶媒を第一の層の組成物から除去する工程、
(iii)本発明の組成物の成分(b)〜(e)および溶媒を含む組成物(すなわち、乾燥状態ではなく溶解された状態にある成分を含む組成物)を第一の層上の第二の層中に適用する工程、および
(iv)前記溶媒を第二の層の組成物から除去する工程
または
(i)本発明の組成物の成分(c)〜(e)および溶媒を含む組成物(すなわち、乾燥状態ではなく溶解された状態にある成分を含む組成物)を第一の層中の担体上の試験フィールドへと適用する工程、
(ii)前記溶媒を第一の層の組成物から除去する工程、
(iii)本発明の組成物の成分(a)、(b)、(d)および(e)ならびに溶媒を含む組成物(すなわち、乾燥状態ではなく溶解された状態にある成分を含む組成物)を第一の層上の第二の層中に適用する工程、および
(iv)前記溶媒を第二の層の組成物から除去する工程
または
(i)本発明の組成物の成分(b)〜(e)および溶媒を含む組成物(すなわち、乾燥状態ではなく溶解された状態にある成分を含む組成物)を第一の層中の担体上の試験フィールドへと適用する工程、
(ii)前記溶媒を第一の層の組成物から除去する工程、
(iii)本発明の組成物の成分(a)、(b)、(d)および(e)ならびに溶媒を含む組成物(すなわち、乾燥状態ではなく溶解された状態にある成分を含む組成物)を第一の層上の第二の層中に適用する工程、および
(iv)前記溶媒を第二の層の組成物から除去する工程
または
(i)本発明の組成物の成分(b)〜(e)および溶媒を含む組成物(すなわち、乾燥状態ではなく溶解された状態にある成分を含む組成物)を第一の層中の担体上の試験フィールドへと適用する工程、
(ii)前記溶媒を第一の層の組成物から除去する工程、
(iii)本発明の組成物の成分(a)、(d)および(e)ならびに溶媒を含む組成物(すなわち、乾燥状態ではなく溶解された状態にある成分を含む組成物)を第一の層上の第二の層中に適用する工程、および
(iv)前記溶媒を第二の層の組成物から除去する工程、
を含む、請求項13記載の方法。 - 前記適合溶質が、乾燥条件下、組成物中の少なくとも一つの酵素の酵素活性の低下を低減する請求項13または14記載の方法。
- 乾燥条件下、組成物中の少なくとも一つの酵素の酵素活性の低下を低減するための、エクトインまたはその誘導体である少なくとも一つの適合溶質の使用であって、前記組成物が、脱水素酵素、酸化還元補因子、酸化還元等価物の存在下で指示試薬の少なくとも一つの光学的特性における変化を導くことのできる試剤、および指示試薬を含み、前記エクトインの誘導体が、ヒドロキシエクトイン、ホモエクトイン、ヒドロキシエクトインエステル、ヒドロキシエクトインエーテル、エクトインのスルホニル誘導体またはエステル化されたエクトインのスルホニル誘導体およびエクトインのスルホニル誘導体のアミドからなる群より選択され、および、前記脱水素酵素がグルコース脱水素酵素である使用。
- 乾燥条件下の前記組成物中の前記少なくとも一つの適合溶質が、診断用試験エレメント中に含まれる請求項16記載の使用。
- 前記診断用試験エレメントが、請求項11または12記載の診断用試験エレメントである請求項17記載の使用。
- 以下の工程:
(a)請求項11または12記載の診断用試験エレメントを、少なくとも一つの酵素を再構成状態へと転換するために適切な条件下で、分析物を含むことが予想される体液と接触させる工程、
(b)前記診断用試験エレメント上で再構成状態にある少なくとも一つの酵素を含む湿潤組成物中の指示試薬の少なくとも一つの光学的特性における変化を測定し、それによって体液サンプル中の前記分析物の存在または量が決定される工程
を含む、体液サンプル中の分析物の存在または量を測定するための方法。
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