JP5984795B2 - 膵疾患を検出するためのデータを収集する方法 - Google Patents
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Description
一方、膵癌やIPMNにおいて、S100蛋白質ファミリーの1つであるS100Pが高い割合で過剰に発現することが知られている(例えば、非特許文献1,2参照。)。
本発明の一態様は、十二指腸内から採取された体液であって、排出刺激を行わずに生理的に分泌された膵液を含む前記体液中に含まれるS100Pの濃度を、固相化された抗体を用いて測定する膵疾患を検出するためのデータを収集する方法である。
上記態様においては、前記S100Pの濃度を、前記固相化された抗体を用いた免疫クロマトグラフィ法によって測定してもよい。
本発明の一態様によれば、被検体内から採取した膵液および/または膵液を含む体液に含まれるS100Pの濃度は、膵臓腫瘍、IPMN、慢性膵炎を含む膵疾患が存在する場合には高い確率で上昇するので、測定したS100Pの濃度の値から膵疾患の有無を高感度で検査することができる。この場合に、S100Pの濃度の測定に、操作が簡便で特別な設備を必要としない免疫クロマトグラフィ法を用いることにより、簡略な設備と手順でありながら膵疾患を高感度で検査することができる。
このようにすることで、純度の高い膵液を用いることによって、被検体内において発現されたS100Pの濃度をより正確に測定することができる。
本発明の上記態様においては、前記膵液を含む体液が、十二指腸液であってもよい。
十二指腸内において、膵液を胆汁や十二指腸の分泌液と混合された状態で十二指腸液として採取することができる。このようにすることで、膵液を採取する際の被検体への侵襲を低減することができる。
このようにすることで、検査に伴う被検体への負担を軽減することができる。
本発明の参考例においては、前記膵液および/または膵液を含む体液が、膵液分泌促進剤の投与により分泌させられた膵液および/または該膵液を含む体液であってもよい。
このようにすることで、十分な量の膵液および/または膵液を含む体液を検査に用いることができる。
このようにすることで、採取および検査の過程で膵液に含まれる蛋白質分解酵素によってS100Pが分解されてしまうことを防ぎ、検査精度を向上することができる。
上記参考例においては、膵液に含まれるプロテアーゼの活性を阻害するプロテアーゼ阻害剤が収容された採取容器をさらに備えていてもよい。
本実施形態に係る膵臓検査キットは、図1に示されるように、シリンジの外筒2内にプロテアーゼ阻害剤Aが収容されてなる採取容器1と、図2Aおよび図2Bに示されるように、抗S100P抗体を保持する免疫クロマトグラフィ装置20とを備えている。
プロテアーゼ阻害剤Aは、凍結乾燥された粉体である。これにより、プロテアーゼ阻害剤Aは、さらに容易に膵液および/または膵液を含む体液に溶解させられる。
担体21は、被検液を展開可能なものであればよく、例えば、ニトロセルロース製のメンブレンフィルターなどが好適に用いられる。担体21には、第1の抗体が保持された帯状の標識領域21aと、該標識領域21aから間隔をあけた位置において第2の抗体が固相化された帯状の吸着領域21bとが設けられている。第1の抗体および第2の抗体は、S100Pの互いに異なるエピトープを認識する抗S100P抗体である。
第1の抗体を標識する標識物質は、酵素や放射性物質などであってもよい。
吸収パッド23は、液体を迅速に吸収して保持できる材質、例えば、綿布、濾紙や、ポリエチレンやポリプロピレン等からなる多孔質プラスチック不織布等からなる。
本実施形態に係る膵臓検査方法は、被検体の十二指腸内から膵液を含む十二指腸液を採取容器内に採取し、採取した膵液を含む十二指腸液中のS100Pの濃度を免疫クロマトグラフィ装置20を使用して測定することにより行われる。十二指腸液の採取方法および採取容器は例示するカテーテルおよびシリンジに限定されず、膵液および/または膵液を含む体液が採取できればよい。
このようにすることで、膵管内から採取された純粋膵液は、十二指腸液によって希釈されることがないので、被検体内でのより正確なS100Pの濃度を測定することができる。
図5に示される採取容器1は、例えば、ゴムなどの弾性部材からなる栓8によって開口が塞がれ、カテーテル6に接続された中空針9を栓8に貫通させることにより、膵液・十二指腸液が内部に吸引されるようになっている。
このようにしても、膵液および/または膵液を含む体液に含まれるプロテアーゼの活性を、採取後迅速に阻害し、採取された膵液に含まれるS100Pの検査精度を向上することができる。
これに対して、本実施形態に係る採取容器1によれば、採取した膵液および/または膵液を含む体液中に含まれるプロテアーゼの活性を迅速に抑制することにより、S100Pのみならず膵液および/または膵液を含む体液中に含まれる他の蛋白質についても検出精度を向上することができ、他の蛋白質をマーカとした膵臓検査にも有効に用いることができる。
〔実施例1〕
本発明に係る膵臓検査方法の検査感度を以下の実験により評価した。
被検体として31人の膵癌患者群および7人のIPMN患者群からカテーテル吸引により被検液である膵液および膵液を含む体液を採取した。患者から採取した被検液を採取後迅速に凍結保存した後、各被検液中に含まれるS100Pの濃度をサイクレックス社製のELISAキットを使用して測定した。対照群として、6人の良性の膵のう胞患者(MCN、SCN)についても同様の方法で被検液の採取および測定を行った。各患者の疾患は病理診断によって診断した。
次に、実施例1で用いたELISAに使用されている2種類の抗S100P抗体(MBL社製)を第1の抗体および第2の抗体として用いて本実施例に係る免疫クロマトグラフィ装置を作成した。該免疫クロマトグラフィ装置によって実施例1に用いた被検液を検査することにより、ELISA法と免疫クロマトグラフィ法とからそれぞれ得られる検査結果の相関を確認した。
実施例1の結果を元に、セクレチン投与による分泌促進を行わず、プロテアーゼ阻害剤を採取容器内に予め収容しておく方法にて、膵癌患者41例、IPMN患者17例、良性膵のう胞(SCN、MCN)患者6例、慢性膵炎患者4例、膵内分泌腫瘍患者3例について、膵液・十二指腸液を採取し、S100Pの濃度を測定した。膵液・十二指腸液の採取およびS100P濃度の測定は実施例1と同様の方法で行った。その測定結果を図8に示す。図8において、縦軸は対数表示となっている。
以上の実験結果から、膵液を含む十二指腸液中のS100P濃度を測定することにより上記の様々な膵疾患を高感度に検出できることが確認された。
2 外筒
2a 吸引口
2b 排気口
3 ガスケット
4 プランジャ
5 キャップ
6 カテーテル
7 チューブ
8 栓
9 中空針
20 免疫クロマトグラフィ装置
21 担体
21a 標識領域(第1の抗体、抗S100P抗体)
22b 吸着領域(第2の抗体、抗S100P抗体)
22 サンプルパッド
23 吸収パッド
24 ケース
24a 滴下窓
24b 観察窓
A 蛋白質分解酵素阻害剤
B 膵液
Claims (5)
- 十二指腸内から採取された体液であって、排出刺激を行わずに生理的に分泌された膵液を含む前記体液中に含まれるS100Pの濃度を、固相化された抗体を用いて測定する膵疾患を検出するためのデータを収集する方法。
- 前記S100Pの濃度を、前記固相化された抗体を用いた免疫クロマトグラフィ法によって測定する請求項1に記載の膵疾患を検出するためのデータを収集する方法。
- 前記膵液を含む体液が、十二指腸液である請求項1に記載の膵疾患を検出するためのデータを収集する方法。
- 前記膵液に含まれる蛋白質分解酵素の活性を阻害する蛋白質分解酵素阻害剤が収容された採取容器に採取された前記膵液を含む体液を使用する請求項1から請求項3のいずれかに記載の膵疾患を検出するためのデータを収集する方法。
- 前記膵液が、膵液分泌促進剤を投与せずに生理的に分泌された膵液である請求項1に記載の膵疾患を検出するためのデータを収集する方法。
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