CN105358987A - 胰腺病标记物检测用十二指肠液试样的确定方法、以及胰腺病标记物的检测方法 - Google Patents

Abstract

提供在进行胰腺病标记物的检测之前，对于十二指肠液试样评价试样品质，只将包含胰液的可能性高且试样适应性良好的试样供试于胰腺病标记物检测从而进行确定的方法、以及使用由该方法确定的十二指肠液试样对胰腺病标记物进行检测的方法。即，提供胰腺病标记物检测用十二指肠液试样的确定方法，其特征在于，具有如下工序：(a1)将十二指肠液试样的颜色的浓度与规定的基准色进行比较的工序；和(b1)确定颜色的浓度为与前述基准色同等以上的十二指肠液试样供试于胰腺病标记物的检查、而颜色的浓度比前述基准色淡的十二指肠液试样不供试于胰腺病标记物的检查的工序。

Description

胰腺病标记物检测用十二指肠液试样的确定方法、以及胰腺病标记物的检测方法

技术领域

本发明涉及在将十二指肠液试样供试于胰腺病标记物检测的情况下，判断能够得到作为可靠性高的结果的试样的适应性，从而确定适合于胰腺病标记物检测的十二指肠液试样的方法；以及使用通过该方法确定的十二指肠液试样对胰腺病标记物进行检测的方法。

本申请要求基于2013年7月2日在日本国申请的日本特愿2013-138848号的优先权，并在此引用其内容。

背景技术

胰液(由胰管排出的体液)是用于知道胰脏的状态的重要的生物试样，应用于细胞诊断、碳酸氢盐测定、细菌检查、由蛋白质、核酸等制成的标记物的检查等胰腺病的检查中。特别是，通过对胰液中所包含的细胞、各种生物成分进行解析，可以期待难以早期发现并且预后非常差的胰腺癌的早期发现。

胰液通常经内窥镜地在胰脏的胰管中插入导管而采集。但是，该方法存在对于患者的侵害性高、还必须要求医师获得高超的技能等问题。因此，报告了使用十二指肠液代替从胰管采集的胰液对胰腺病进行检查的方法(例如,参照专利文献1)。胰液是由胰脏向十二指肠排出的，因此通过对十二指肠液中的胰液成分进行检测，能够检查胰腺病。十二指肠液在采集工序中不需要向胰管的途径，而只需将内窥镜插入至十二指肠在该部位进行吸引就能够采集。即，十二指肠液的采集相比于由胰管的胰液采集，能够以低侵害且更简便的技能来实施。

十二指肠液中除了由胰脏排出的胰液之外，还可包含在肝脏生成且经胆嚢排出的胆汁、十二指肠所分泌的粘液。即，十二指肠液是胰液、胆汁和十二指肠所分泌的粘液混合而成的体液，各成分的含量是各种各样的。因此，由被检者采集的十二指肠液中是否含有被认为具有对于检查胰腺病最重要的信息的胰液是不明确的。假设，由同一人多次分级采集的情况下，可以认为胰液的分布有偏差，则采集的十二指肠液中未必含有胰液。实际上，在透视下通过插入到十二指肠中的探头(Sonde)采集在静脉注射胰液和胆汁的分泌刺激剂(促胰液素(secretin)和CCK)的时刻后经过30分钟及45分钟后排出的胰液，对在该试验(促胰液素试验)中得到的胰液中的CEA(carcinoembryonicantigen，癌胚抗原)进行测定，从而进行区分健康者、慢性胰腺炎患者和胰腺癌患者的研究(参照非专利文献1)，该方法中，健康者组与胰腺癌患者组的CEA浓度区域的差小，可以预想到如果增加病例数则检测精度会变差。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：国际公开第2013/038981号小册子

非专利文献

非专利文献1：Rolny,等2人,ScandinavianJournalofGastroenterology,1977年,第12卷,第759-763页。

发明内容

发明要解决的问题

使用十二指肠液试样进行胰腺病标记物的检查的情况下，如果供试的十二指肠液试样中不含有胰液就得不到能够信赖的检查结果。因此，从十二指肠液试样中选定包含胰液的可能性高且具有试样适应性的试样，对于抑制由假阴性导致的检查精度的降低且提高检查的效率是重要的。

即，本发明目的在于，提供：在进行胰腺病标记物的检测之前，对于十二指肠液试样评价试样品质，只将包含胰液的可能性高且试样适应性良好的试样供试于胰腺病标记物检测从而进行确定的方法；以及使用由该方法确定的十二指肠液试样对胰腺病标记物进行检测的方法。

用于解决问题的方案

本发明人等为了解决上述问题进行了深入研究，结果发现，颜色浓的十二指肠液相比于接近无色透明的十二指肠液较多地包含胰液成分的情况多，适合作为胰腺病标记物检测用试样；进而发现，颜色浓的十二指肠液中，pH为中性～碱性的十二指肠液、或者确认到P型淀粉酶存在的十二指肠液适合作为胰腺病标记物检测用试样，至此完成了本发明。

即，本发明的胰腺病标记物检测用十二指肠液试样的确定方法、以及胰腺病标记物的检测方法如下述[1]～[18]。

[1]一种胰腺病标记物检测用十二指肠液试样的确定方法，其特征在于，具有如下工序：

(a1)将十二指肠液试样的颜色的浓度与规定的基准色进行比较的工序；和

(b1)确定颜色的浓度为与前述基准色同等以上的十二指肠液试样供试于胰腺病标记物的检查、而颜色的浓度比前述基准色淡的十二指肠液试样不供试于胰腺病标记物的检查的工序。

[2]一种胰腺病标记物检测用十二指肠液试样的确定方法，其特征在于，具有如下工序：

(a1)将十二指肠液试样的颜色的浓度与规定的基准色进行比较的工序；

(a2)将前述十二指肠液试样的pH与规定的基准值进行比较的工序；和

(b2)确定颜色的浓度为与前述基准色同等以上且pH为前述基准值以上的十二指肠液试样供试于胰腺病标记物的检查，而颜色的浓度比前述基准色淡的十二指肠液试样和前述十二指肠液试样的pH小于前述基准值的十二指肠液试样不供试于胰腺病标记物的检查的工序。

[3]根据前述[2]的胰腺病标记物检测用十二指肠液试样的确定方法，其中，只对前述工序(a1)中前述十二指肠液试样的颜色的浓度为与前述基准色同等以上的十二指肠液试样进行前述工序(a2)。

[4]一种胰腺病标记物检测用十二指肠液试样的确定方法，其特征在于，具有如下工序：

(a1)将十二指肠液试样的颜色的浓度与规定的基准色进行比较的工序；

(a2)将前述十二指肠液试样的pH与规定的基准值进行比较的工序；

(a3)将前述十二指肠液试样中的P型淀粉酶浓度与规定的基准浓度进行比较的工序；和

(b3)确定颜色的浓度为与前述基准色同等以上、pH为前述基准值以上并且P型淀粉酶浓度为前述基准浓度以上的十二指肠液试样供试于胰腺病标记物的检查，而颜色的浓度比前述基准色淡的十二指肠液试样、pH小于前述基准值的十二指肠液试样、以及P型淀粉酶浓度小于前述基准浓度的十二指肠液试样不供试于胰腺病标记物的检查的工序。

[5]根据前述[4]的胰腺病标记物检测用十二指肠液试样的确定方法，其中，只对前述工序(a1)中被判定为对胰腺病标记物的检查具有适应性的十二指肠液试样进行前述工序(a2)或(a3)。

[6]一种胰腺病标记物检测用十二指肠液试样的确定方法，其特征在于，具有如下工序：

(a1)将十二指肠液试样的颜色的浓度与规定的基准色进行比较的工序；

(a3)将前述十二指肠液试样中的P型淀粉酶浓度与规定的基准浓度进行比较的工序；和

(b4)确定颜色的浓度为与前述基准色同等以上且P型淀粉酶浓度为前述基准浓度以上的十二指肠液试样供试于胰腺病标记物的检查，而颜色的浓度比前述基准色淡的十二指肠液试样和P型淀粉酶浓度小于前述基准浓度的十二指肠液试样不供试于胰腺病标记物的检查的工序。

[7]根据前述[6]的胰腺病标记物检测用十二指肠液试样的确定方法，其中，只对前述工序(a1)中被判定为对胰腺病标记物的检查具有适应性的十二指肠液试样进行前述工序(a3)。

[8]根据前述[1]～[7]中的任一项所述的胰腺病标记物检测用十二指肠液试样的确定方法，其中，前述基准色为0.005mg/mL的胆红素水溶液或0.04mg/mL的胆红素水溶液的液色。

[9]根据前述[1]～[8]中的任一项所述的胰腺病标记物检测用十二指肠液试样的确定方法，其中，用目视进行十二指肠液试样的颜色的浓度的比较。

[10]根据前述[1]～[8]中的任一项所述的胰腺病标记物检测用十二指肠液试样的确定方法，其中，基于该十二指肠液试样的分光光谱信息进行十二指肠液试样的颜色的浓度的比较。

[11]根据前述[1]～[8]中的任一项所述的胰腺病标记物检测用十二指肠液试样的确定方法，其中，前述工序(a1)中，将CIEXYZ色度体系或CIEL*a*b*色度体系的色度图上的、前述十二指肠液试样与水的色度点间距离跟前述基准色与水的色度点间距离进行比较，

在前述工序(b1)、(b2)、(b3)或(b4)中，前述十二指肠液试样与水的色度点间距离为前述基准色与水的色度点间距离以上的情况下，确定该十二指肠液试样供试于胰腺病标记物的检查；前述十二指肠液试样与水的色度点间距离小于前述基准色与水的色度点间距离的情况下，确定该十二指肠液试样不供试于胰腺病标记物的检查。

[12]根据前述[1]～[8]中的任一项所述的胰腺病标记物检测用十二指肠液试样的确定方法，其中，基于350～540nm范围内的规定波长的吸光度进行十二指肠液试样的颜色的浓度的比较。

[13]根据前述[1]～[8]中的任一项所述的胰腺病标记物检测用十二指肠液试样的确定方法，其中，基于400～460nm范围内的规定波长的吸光度进行十二指肠液试样的颜色的浓度的比较。

[14]根据前述[1]～[5]、[8]～[13]中的任一项所述的胰腺病标记物检测用十二指肠液试样的确定方法，其中，前述十二指肠液试样的pH的规定的基准值为7.5以上。

[15]根据前述[4]～[14]中的任一项所述的胰腺病标记物检测用十二指肠液试样的确定方法，其中，前述十二指肠液试样中P型淀粉酶浓度的规定的基准浓度为5000U/L以上。

[16]一种胰腺病标记物的检测方法，其特征在于，具有对十二指肠液试样中的胰腺病标记物进行检测的工序，

前述十二指肠液试样是通过前述[1]～[15]中的任一项所述的胰腺病标记物检测用十二指肠液试样的调制方法而确定的。

[17]一种胰腺病标记物的检测方法，其特征在于，具有如下工序：

(a1)将十二指肠液试样的颜色的浓度与规定的基准色进行比较的工序；

(b1)确定颜色的浓度为与前述基准色同等以上的十二指肠液试样供试于胰腺病标记物的检查、而颜色的浓度比前述基准色淡的十二指肠液试样不供试于胰腺病标记物的检查的工序；和

(c1)对于前述工序(b1)中被确定供试于胰腺病标记物的检查的十二指肠液试样中的胰腺病标记物进行检测的工序。

[18]根据前述[16]或[17]前述的胰腺病标记物的检测方法，其中，前述胰腺病标记物为CEA(癌胚抗原)。

发明的效果

通过本发明的胰腺病标记物检测用十二指肠液试样的确定方法，对于十二指肠液试样的试样适应性进行评价，能够简便地选定具有适应性的试样作为供试于胰腺病标记物检查的试样。因此，如本发明的胰腺病标记物的检测方法那样，只将通过前述确定方法被确定为能够供试于胰腺病标记物检查的十二指肠液试样供试于胰腺病标记物的检查，不将检查适应性低的试样供于检查，由此能够抑制不需要的检查，减少胰腺病的漏检(假阴性)，从而能够提高检查性能。

附图说明

图1是本发明的标记物检测方法中，只将液色作为指标、使用分光光谱信息进行颜色比较的一方式的流程图的示意图。

图2是本发明的标记物检测方法中，将液色、pH和P型淀粉酶浓度作为指标、使用分光光谱信息进行颜色比较之后，进行pH比较，接着进行P型淀粉酶浓度比较的一方式的流程图的示意图。

图3是本发明的标记物检测方法中，将液色、pH和P型淀粉酶浓度作为指标、使用分光光谱信息进行颜色比较之后，进行P型淀粉酶浓度比较，接着进行pH比较的一方式的流程图的示意图。

图4是表示实施例1中各十二指肠液试样的吸收光谱数据的图。

图5是将图4中的吸收峰附近(300～560nm)放大的图。

图6是表示实施例1中计算出各胆红素浓度的胆红素水溶液的CIEXYZ色度体系的色度图上的与水的色度点的色度点间距离的结果的图。

具体实施方式

本发明和本申请说明书中，胰腺病标记物是胰液中所包含的蛋白质、核酸、脂质、细胞等各种生物分子，是与胰腺病的非罹患者相比较，罹患了胰腺病的患者的胰液中的浓度显著地变高的生物分子。需要说明的是，胰腺病的非罹患者并非限定于健康者，也包括胰腺病以外疾病的罹患者。另外，作为胰腺病，可列举出例如：胰腺癌、IPMN(胰管内乳头粘液性肿瘤)、MCN(粘液性嚢胞肿瘤)、SCN(浆液性嚢胞肿瘤)、NET(胰腺内分泌肿瘤)、慢性胰腺炎(CP)、急性胰腺炎等。

另外，“具有对于胰腺病标记物检查的适应性”的十二指肠液试样是指含有胰液的可能性高、通过使用该试样能够期待成为假阴性、假阳性的可能性低、可靠性高的检查结果的十二指肠液试样；“不具有对于胰腺病标记物检查的适应性”的十二指肠液试样是指不含有胰液的可能性高、通过使用该试样而成为假阴性、假阳性的风险高的十二指肠液试样。

通常地，胰液和十二指肠所分泌的粘液是透明的，胆汁包含胆红素等黄色物质因而呈现黄色。因此，作为这三者以各种各样的比率混合而成的体液的十二指肠液，存在有各种颜色的变型。特别是，受到来自胆汁的黄色物质的影响，十二指肠液呈现出由接近极其透明的淡黄色至深黄色(茶黄色)的范围广泛的颜色。

＜胰腺病标记物检测用十二指肠液试样的确定方法＞

本发明的胰腺病标记物检测用十二指肠液试样的确定方法(以下，有时也称为“本发明的试样确定方法”)的特征在于，只将液色的浓度为与规定的基准色同等以上的十二指肠液试样确定为供试于胰腺病标记物检查中的试样。即，确定：十二指肠液试样的颜色的浓度为与基准色同等以上的情况下，该十二指肠液试样供试于胰腺病标记物的检查；前述十二指肠液试样的颜色的浓度比前述基准色淡的情况下，该十二指肠液试样不供试于胰腺病标记物的检查。如后述实施例1等所示，液色浓的十二指肠液比颜色淡的十二指肠液具有胰腺病标记物的检测灵敏度高的倾向；液色过于淡的十二指肠液不包含充分量的胰液成分的可能性高。即，对于颜色过淡的十二指肠液试样进行胰腺病标记物检查的情况下，即便被采集了该十二指肠液试样的被检者罹患了胰腺病，检查呈现出阴性的可能性也高。因此，在供试于胰腺病标记物检查之前，对于十二指肠液试样的液色进行评价，通过选定液色的浓度为与规定的基准色同等以上的十二指肠液试样即可以期待含有充分量的胰液成分的十二指肠液试样，能够谋求假阴性的频率降低、检查性能的提高以及检查的效率化。

十二指肠液的颜色浓是指较多地包含来自于胆汁的成分。对于较多地包含胆汁成分的十二指肠液也适合于胰腺病标记物的检测的理由并不明确，但可以推测这是由于，胆汁和胰液一起由乳头部向十二指肠排出，因此胆汁向十二指肠排出的情况下，乳头部开口，胰液也同样地向十二指肠排出的情况多。另一方面，可以推测，十二指肠液为透明的情况下，乳头部闭塞而胆汁和胰液两者均没有被排出。如后述参考例1所示，通过现有方法，不选定十二指肠液试样而对全部试样进行CEA浓度检查的情况下，胰腺癌中的阶段T4的患者中成为假阴性的待检体多，这被认为可能是由于癌的浸润等，不仅胰管狭窄而且胆管也狭窄的结果，可以推测是因为供于检查的十二指肠液试样中仅包含由十二指肠分泌的粘液。需要说明的是，本发明人等初次发现的见解是，可以使用来自于胆汁的成分即黄色物质作为十二指肠液试样中是否包含胰液成分的指标。

用于比较十二指肠液试样的颜色的浓度的基准色，可以考虑十二指肠液试样所供试的胰腺病标记物的检测方法的种类、目标的检查精度(灵敏度·特异度)等适宜设定以保证包含充分量的来自于胆汁的黄色物质。本发明中，作为基准色，优选使用0.005mg/mL的胆红素水溶液的液色或者使用0.04mg/mL的胆红素水溶液的液色。需要说明的是，胆红素浓度越高则胆红素水溶液的颜色变得越浓。如果十二指肠液试样的颜色的浓度为与0.005mg/mL的胆红素水溶液的颜色同等以上，则可以期待包含充分量的胰液成分，可以提高胰腺病标记物检查的灵敏度。进而，如果十二指肠液试样的颜色的浓度为与0.04mg/mL的胆红素水溶液的颜色同等以上，则能够显著降低胰腺病标记物检查中的假阴性的频率，从而有助于检查精度的改善、检查的效率化。

另外，也有十二指肠液中混入了胃液的情况。胃液是强酸性的并且包含胃蛋白酶等消化酶，因此由于胃液的混入，有十二指肠液中的胰液成分分解或变性的担心。另外，供试有十二指肠液试样的检查中，胃液中也包含目标的胰腺病标记物的情况下，还有不能够区分该十二指肠液试样中的该标记物是来自于胰液还是来自于胃液的问题。进而，胃液的混入比例多时有胰液成分的含有比例也低的担心。因此，可以说胃液的混入少的十二指肠液试样比胃液的混入量多的十二指肠液试样更适合作为胰腺病标记物检测用试样。

通过胃液的混入而十二指肠液的pH降低。此处，可以通过将十二指肠液试样的pH作为指标来推测胃液向该试样的混入的程度。通过在供试于胰腺病标记物检查之前，测定十二指肠液试样的pH并且选定pH为规定的基准值以上的十二指肠液试样，即，能够期待胃液的混入量充分地少、胰液成分不至于被胃液损害成成为问题程度而质量高的十二指肠液试样，由此能够谋求假阴性的频率降低、检查性能的提高以及检查的效率化。

另一方面，α-淀粉酶中存在有S型和P型的同工酶。S型除了存在于唾液腺之外，还存在于卵巢、肺、肝、小肠，P型是胰脏特异性的。即，如果十二指肠液中存在有P型淀粉酶，则可以期待该十二指肠液中包含有胰液。相反地，十二指肠液中P型淀粉酶不存在或者仅极微量地存在的情况下，该十二指肠液中不包含充分量的胰液成分的可能性高。因此，通过在供试于胰腺病标记物检查之前，测定十二指肠液试样的P型淀粉酶浓度并且选定该浓度为规定的基准浓度以上的十二指肠液试样，由此能够谋求假阴性的频率降低、检查性能的提高以及检查的效率化。

如上总结，则十二指肠液试样中，液色浓的试样相比于液色淡的试样、pH高的试样相比于pH低的试样、P型淀粉酶浓度高的试样相比于浓度低的试样对于胰腺病标记物检查的适应性高。因此，本发明的试样确定方法中，将十二指肠液试样的液色和pH、或者十二指肠液试样的液色和P型淀粉酶浓度作为指标，优选只将所有的指标均判定为具有检查适应性的十二指肠试样确定为供试于胰腺病标记物的检查的试样。也可以将十二指肠液试样的液色、pH和P型淀粉酶浓度全部作为指标。

即，本发明的试样确定方法中，只将液色作为指标进行确定的方法的特征在于，具有：下述工序(a1)和(b1)。

(a1)将十二指肠液试样的颜色的浓度与规定的基准色进行比较的工序。

(b1)确定颜色的浓度为与前述基准色同等以上的十二指肠液试样供试于胰腺病标记物的检查、而颜色的浓度比前述基准色淡的十二指肠液试样不供试于胰腺病标记物的检查的工序。

另外，本发明的试样确定方法中，将十二指肠液试样的液色和pH作为指标进行确定的方法的特征在于，具有：下述工序(a1)、(a2)和(b2)。通过基于液色和pH两者进行选定，能够效率更加良好地选定对于胰腺病标记物检查的适应性高的十二指肠液试样。

(a1)将十二指肠液试样的颜色的浓度与规定的基准色进行比较的工序；

(a2)将前述十二指肠液试样的pH与规定的基准值进行比较的工序；和

(b2)确定颜色的浓度为与前述基准色同等以上且pH为前述基准值以上的十二指肠液试样供试于胰腺病标记物的检查，而颜色的浓度比前述基准色淡的十二指肠液试样和前述十二指肠液试样的pH小于前述基准值的十二指肠液试样不供试于胰腺病标记物的检查的工序。

该方法中，工序(a1)和工序(a2)先进行哪一者都可以。

该方法中，可以对全部的十二指肠液试样进行工序(a1)和工序(a2)，但优选在进行工序(a1)之后，只对该工序中颜色的浓度为与前述基准色同等以上的(即，被判定为具有检查适应性)十二指肠液试样进行工序(a2)。由此，能够限制工序(a2)中调查pH的十二指肠液试样的个数，从而能够减少方法整体的劳动力。需要说明的是，也可以在进行工序(a2)之后，仅对该工序中pH为前述基准值以上的十二指肠液试样进行工序(a1)。

另外，本发明的试样确定方法中的将十二指肠液试样的液色、pH和P型淀粉酶浓度作为指标进行确定的方法的特征在于，具有：前述工序(a1)以及下述工序(a2)、(a3)和(b3)。通过基于液色、pH和P型淀粉酶浓度的全部进行选定，能够效率更良好地选定对于胰腺病标记物检查的适应性高的十二指肠液试样。

(a2)将前述十二指肠液试样的pH与规定的基准值进行比较的工序；

(a3)将前述十二指肠液试样中的P型淀粉酶浓度与规定的基准浓度进行比较的工序；和

(b3)确定颜色的浓度为与前述基准色同等以上、pH为前述基准值以上并且P型淀粉酶浓度为前述基准浓度以上的十二指肠液试样供试于胰腺病标记物的检查，而颜色的浓度比前述基准色淡的十二指肠液试样、pH小于前述基准值的十二指肠液试样、以及P型淀粉酶浓度小于前述基准浓度的十二指肠液试样不供试于胰腺病标记物的检查的工序。

该方法中，工序(a1)、工序(a2)和工序(a3)可以按照任意顺序进行。

该方法中，优选在进行工序(a1)之后，仅对该工序中颜色的浓度为前述基准色同等以上的十二指肠液试样进行工序(a2)和(a3)。另外，更优选的是，在进行工序(a1)之后，仅对于该工序中颜色的浓度为与前述基准色同等以上的十二指肠液试样进行工序(a2)，仅对于该工序中pH为前述基准值以上的(即，被判定为具有检查适应性)十二指肠液试样进行工序(a3)；或者，在进行工序(a1)之后，仅对于该工序中颜色的浓度为与前述基准色同等以上的十二指肠液试样进行工序(a3)，仅对该工序中P型淀粉酶浓度为前述基准浓度以上的(即，被判定为具有检查适应性)十二指肠液试样进行工序(a2)。这样，通过仅对先进行的工序中被判定为具有检查适应性的十二指肠液试样进行剩下的工序，能够减少方法整体的劳动力。需要说明的是，可以在进行工序(a2)之后仅对该工序中被判定为对于胰腺病标记物的检查具有适应性的十二指肠液试样进行工序(a1)；也可以在进行工序(a3)之后，仅对该工序中被判定为对于胰腺病标记物的检查具有适应性的十二指肠液试样进行工序(a1)和(a2)。

本发明的试样确定方法中的将十二指肠液试样的液色和P型淀粉酶浓度作为指标进行确定的方法的特征在于，具有前述工序(a1)和(a3)、以及下述工序(b4)。通过基于液色和P型淀粉酶浓度两者进行选定，能够效率更良好地选定对于胰腺病标记物检查的适应性高的十二指肠液试样。

(b4)确定颜色的浓度为与前述基准色同等以上且P型淀粉酶浓度为前述基准浓度以上的十二指肠液试样供试于胰腺病标记物的检查，而颜色的浓度比前述基准色淡的十二指肠液试样和P型淀粉酶浓度小于前述基准浓度的十二指肠液试样不供试于胰腺病标记物的检查的工序。

该方法中，工序(a1)和工序(a3)先进行哪一者都可以。另外，与前述方法同样地，该方法中也优选在进行工序(a1)之后，仅对该工序中颜色的浓度为与前述基准色同等以上的十二指肠液试样进行工序(a3)。也可以在进行工序(a3)之后，仅对该工序中P型淀粉酶浓度为前述基准浓度以上的十二指肠液试样进行工序(a1)。

本发明的试样确定方法中作为确定对象的十二指肠液试样只要是从十二指肠的肠管内的某一位置采集的十二指肠液即可，优选为存在于十二指肠的第二部分或第三部分的十二指肠液。这是因为，十二指肠的第一部分是直接连接胃幽门的部位，有可能混入胃液；此外有时难以固定用于采样的内窥镜而难以采样等。

需要说明的是，十二指肠液可以通过常规方法采集。例如，可以通过连接到内窥镜导管的注射器、真空泵等的抽吸手段采集十二指肠液。具体而言，从口腔将内窥镜插入到十二指肠，使用钳子管道通道而插入的导管抽吸并且采集存在于十二指肠的第二部分、第三部分的十二指肠液。例如，也可以在进行作为所谓胃镜的胃/十二指肠的内窥镜检查(上部内窥镜检查)时，采集积存在十二指肠的肠管内的十二指肠液。

从同一被检者在同一天采集的十二指肠液试样之间，也会存在颜色不同的情况。作为其理由，可以认为是，采集十二指肠液试样的部位、采集的时机不同。此处，从同一被检者采集的十二指肠液试样为多个的情况下，将颜色更浓的试样与规定的基准色进行比较。需要说明的是，从同一被检者采集的十二指肠液试样为多个的情况下，对于与基准色比较为与该基准色同等以上的十二指肠液试样(即，进行了工序(a1)的十二指肠液试样)进行工序(a2)和(a3)。

十二指肠液中通常包含各种各样的酶，因此无论保存状态，均有产生十二指肠液试样中的成分的分解、变性的担心。另外，还有胆红素等颜色成分被光分解的可能性。因此，从被检者采集的时刻至将颜色的浓度与基准色进行比较为止需要时间的情况下，十二指肠液试样优选事先根据需要以避光状态冷藏或冷冻保存。

另外，由被检者采集的十二指肠液试样只要不变更液的颜色的浓度，则在将颜色的浓度与基准色进行比较之前，也可以添加各种添加剂、缓冲液等。作为添加剂，可列举出：表面活性剂、蛋白质分解酶抑制剂、核酸分解酶抑制剂等用于抑制十二指肠液试样中的成分的分解、变性的试剂等。添加剂等可以向包含从生物体采集的十二指肠液的容器中添加，也可以预先加入至容器中然后在该容器中直接采集十二指肠液。

十二指肠液试样的颜色与基准色的比较可以用目视进行。通过用目视进行，不需要特别的分析装置、操作等而能够简便且迅速地从多个十二指肠液试样中选定颜色最浓的试样。例如，预先准备带有基准色的颜色样本，用目视对十二指肠液试样和颜色样本进行比较，该十二指肠液试样的颜色为与颜色样本的基准色同等以上的浓度的情况下，该十二指肠液试样被确定为供试于胰腺病标记物的检查；比基准色淡的情况下，该十二指肠液试样被确定为不供试于胰腺病标记物的检查。

十二指肠液试样的颜色与基准色的比较也可以基于各十二指肠液试样的分光光谱信息进行。分光光谱是指吸收光谱、透射光谱等。通过利用分光光谱信息，也能够将难以用目视的稍微的色差以数值的形式进行比较。另外，能够客观地进行颜色比较，且也能够容易地进行多个试样的比较。十二指肠液试样的分光光谱可以使用分光光度计等液体试样的分光光谱分析中通常使用的各种装置来测定。

胆红素等来自于胆汁的黄色物质在350～540nm其中特别是400～460nm具有吸收光谱的峰波长区域。此处，可以基于十二指肠液试样的该波长区域的吸收光谱信息将颜色的浓度与基准色进行比较。具体而言，对于十二指肠液试样和具有基准色的液体(基准液，例如0.005mg/mL的胆红素水溶液等)，测定350～540nm范围内的规定波长的吸光度，进行比较。判定为该吸光度越大、色越浓。即，该吸光度为与基准液同等以上的情况下，该十二指肠液试样被确定为供试于胰腺病标记物的检查；该吸光度比基准液小的情况下，该十二指肠液试样被确定为不供试于胰腺病标记物的检查。该吸光度只要是处于350～540nm范围内的波长的吸光度即可，优选处于400～460nm范围内的波长的吸光度，更优选处于450～460nm范围内的波长的吸光度。

另外，也优选根据CIE(国际照明委员会)XYZ色度体系(或CIEYxy色度体系)或者CIEL*a*b*色度体系的色度图上的与水的色度点间距离进行十二指肠液试样的颜色与基准色的浓度的比较。具体而言，首先，对于十二指肠液试样，测定380～780nm的吸收光谱[A₁₀]，将其根据下述式换算成透射光谱[T₁₀]。

$T_{10}={10}^{-A_{10}}$

由得到的透射光谱，将十二指肠液试样的液色以色度体系的色度点的形式求出。接着，算出该色度点与同样求出的水(无彩色透明溶液)的色度点的在色度图上的色度点间距离。该与水的色度的色度点间距离表示“颜色的浓度”，被判定为该色度点间距离越大色越浓、该色度点间距离越小色越淡。算出的与水的色度点间距离为同样地算出的基准液与水的色度点间距离以上的情况下，该十二指肠液试样被确定为供试于胰腺病标记物的检查；比基准液与水的色度点间距离短的情况下，该十二指肠液试样被确定为不供试于胰腺病标记物的检查。

各色度体系中的十二指肠液试样与基准液的色度可以通过常规方法而求出。需要说明的是，由于是十二指肠液试样与基准液间的相对的比较，所以只要是在相同的条件下测定十二指肠液试样和基准液即可，吸收光谱的测定、求出各色度体系的色度时的各种条件(光源、滤波器、光学体系等)是任意的。

胃液的pH在2附近，胰液和胆汁的pH在8附近。因此，十二指肠中通过胃液与十二指肠液混合，pH为中性附近。可以预想，十二指肠液试样的pH表现出酸性的情况下，采集的十二指肠液中较多地混入了胃液。因此，十二指肠液试样的pH的基准值更优选设定在中性～碱性的范围内，进而优选设定在7.5以上，也可以设定在8.2以上。通过将pH的基准值设定在该范围内，能够选定由胃酸的混入带来的影响少且品质高的十二指肠液试样。需要说明的是，十二指肠液试样的pH可以从使用pH试纸的方法、用pH测量器测定的方法等公知的测定方法中适宜选择而进行测定。

工序(a3)中比较的十二指肠液试样中的P型淀粉酶浓度可以是该酶的蛋白质浓度自身，也可以是酶活性浓度(U/L)。使用酶活性浓度的情况下，十二指肠液试样中的P型淀粉酶浓度的基准浓度优选为5000U/L以上，也可以为10000U/L以上。需要说明的是，P型淀粉酶的酶活性浓度可以通过例如免疫抑制法(在只特异性地抑制S型淀粉酶的单克隆抗体存在下，使用标记过的底物对淀粉酶活性进行测定的方法)等临床检查等中通常使用的方法进行。

＜胰腺病标记物的检测方法＞

本发明的胰腺病标记物的检测方法(以下，有时也称为“本发明的标记物检测方法”)的特征在于，只将被本发明的试样确定方法确定的十二指肠液试样供试于胰腺病标记物的检测。通过本发明的试样确定方法选定包含充分量的胰液的可能性高的十二指肠液试样，通过检测该选定的十二指肠液试样中的胰腺病标记物，能够得到胰腺病标记物的检测灵敏度高、可靠性高的检测结果。

通过本发明的试样确定方法确定的十二指肠液试样，可以在确定后马上用于胰腺病标记物的检测，也可以在确定后保存规定期间后用于胰腺病标记物的检测(胰腺病标记物的测定试验)。确定后的十二指肠液试样可以在冷藏或冷冻下保存，也可以在室温下保存，还可以进行冷冻干燥处理以冷冻粉末的形式保存。另外，也可以在添加了各种添加剂的状态下进行保存。作为该添加剂，可列举出：表面活性剂、蛋白质分解酶抑制剂、核酸分解酶抑制剂、pH调节剂、pH指示剂等。进而，被确定的十二指肠液试样可以直接用于胰腺病标记物的测定试验；也可以通过离心分离处理等分离去除细胞等固体成分之后而使用。

对于本发明的标记物检测方法中检测到的胰腺病标记物，只要是与胰腺病的非罹患者相比较，罹患了胰腺病的患者的胰液中的浓度显著地变高的生物分子即可，没有特别的限定。本发明中，胰腺病标记物优选为糖蛋白质、酶等难以受到十二指肠液中所包含的消化酶的影响的生物分子。作为本发明的标记物检测方法中检测到的胰腺病标记物，可列举出：作为糖蛋白质的CEA、CA19-9(例如，参照Pancreas,1994,vol.9,No.6号,p741-747。)、MUC-1(KL-6)(参照例如,日本特开2006-308576号公报等。)、作为酶的MMP2(MatrixMetalloproteinase-2(基质金属蛋白酶-2))(例如，参照Pancreas2002,vol.24,No.4,pp.344-347。)、MMP7(MatrixMetalloproteinase-7(基质金属蛋白酶-7))等。除此之外，还可列举出：S100P、NGAL、MIC-1等罹患了胰腺病的患者的胰液中的浓度显著地变高的物质。

本发明的标记物检测方法中检测到的胰腺病标记物特别优选为CEA。通过将十二指肠液中的CEA浓度作为指标，可以调查出胰腺癌、IPMN、MCN、慢性胰腺炎和急性胰腺炎等有无发病、发病风险等。

本发明的标记物检测方法中，对于胰腺病标记物的检测方法，只要是以试样中的胰腺病标记物的检测或定量为目的的检查，则没有特别的限定。可以通过例如：使用了ELISA、免疫、二维电泳、免疫印迹法、质谱分析法等的各种蛋白质解析；使用应用了PCR、RT-PCR、探针的杂交等的各种核酸解析；细胞数计数、细胞诊断这样的细胞解析等检测各种胰腺病标记物。另外，通过使用生物化学自动分析装置等各种分析装置，可以对于多个十二指肠液试样迅速且容易地进行胰腺病标记物的检测或定量。

图1表示本发明的标记物检测方法中的、只以液色作为指标、使用分光光谱信息进行颜色比较的一个方式的流程图的概略。如前所述，首先，对于从被检者采集的十二指肠液试样测定分光光谱。接着，将得到的分光光谱信息与基准液的分光光谱信息进行比较来确定是否供试于胰腺病标记物的检查。对于被选定供试于胰腺病标记物的检查(可检查)的十二指肠液试样，测定该十二指肠液试样中的胰腺病标记物。对于被选定不供试于胰腺病标记物检查(不能检查)的十二指肠液试样，研究了不进行胰腺病标记物的检查而实施其他的检查等。

图2表示本发明的标记物检测方法中的以液色、pH和P型淀粉酶浓度作为指标使用分光光谱信息进行颜色比较，判定检查适应性之后，利用pH比较判定检查适应性，之后利用P型淀粉酶浓度判定检查适应性，由此选定十二指肠液试样，对于十二指肠液试样进行检查的一个方式的流程图的概略。另外，图3表示本发明的标记物检测方法中的以液色、pH和P型淀粉酶浓度作为指标使用分光光谱信息进行颜色比较，判定检查适应性之后，利用P型淀粉酶浓度判定检查适应性，之后利用pH比较判定检查适应性，由此选定十二指肠液试样，对于十二指肠液试样进行检查的一个方式的流程图的概略。图2所述的流程图中，如前所述，首先，对于从被检者采集的十二指肠液试样，测定分光光谱。接着，将得到的分光光谱信息与基准液的分光光谱信息进行比较。将颜色的浓度比前述基准色淡的十二指肠液试样判定为不能检查，对于颜色的浓度为与前述基准色同等以上的十二指肠液试样，将pH与基准值进行比较。将pH小于前述基准值的十二指肠液试样判定为不能检查，对于pH为前述基准值以上的十二指肠液试样，将P型淀粉酶浓度与基准浓度进行比较。将P型淀粉酶浓度小于前述基准浓度的十二指肠液试样判定为不能检查，对于P型淀粉酶浓度为前述基准浓度以上的十二指肠液试样，测定该十二指肠液试样中的胰腺病标记物。对于各工序中被判定为不能检查的十二指肠液试样，研究了不进行胰腺病标记物的检查而实施其他的检查等。图3所述的流程图中，在颜色比较工序之后进行P型淀粉酶浓度的比较工序，之后进行pH的比较工序，除此以外，与图2所述的流程图同样地进行。

例如，如CEA这样具有在胰腺病的罹患者的十二指肠液中的浓度比健康者高的倾向的胰腺病标记物的情况下，可以在十二指肠液试样的测定值小于规定的阈值时判断为阴性；在十二指肠液试样的测定值为规定的阈值以上时判断为阳性。为阴性时，采集了该十二指肠液试样的被检者为健康者(或者没有罹患胰腺病)的可能性高；为阳性时，该被检者罹患胰腺病的可能性高。因此，对于被判定为阳性的被检者，研究是否进一步进行精密检查也是有用的。精密检查是指例如：ERCP(内窥镜的逆行性胆管胰管造影)、EUS-FNA(超声波内窥镜下穿刺活体检测法)、MRCP(核磁共振胆管胰管摄影)、CT(计算机断层摄影)、MRI(核磁共振影像法)等。

实施例

接着，示出实施例等对本发明进一步详细地进行说明，但本发明不限定于以下的实施例。

[参考例1]

从胰腺癌病例49例中经内窥镜地采集十二指肠液试样，测定试样中的CEA浓度。CEA浓度使用市售的试剂盒(IBL公司制)通过ELISA法进行测定。由测定的CEA浓度，将临界值设为126ng/mL，对阴性和阳性进行判断。

将由检查结果求出的灵敏度和阳性待检体数相对于全部待检体数的比例根据每种表示主病灶的胰局部发展程度的T分类分别示于表1。Tis为非浸润癌；T1为肿瘤直径为2cm以下且局限于胰腺内；T2为肿瘤直径超过2cm且局限于胰腺内；T3为癌的浸润波及胰腺内胆管、十二指肠、胰周围组织的任意者；T4为癌的浸润波及相邻的大血管、胰外神经丛、其他脏器的任意者。可知，与Tis、T1、T2、T3相比较，T4的病例组的检测灵敏度非常地低；T4的病例不能检测出被认为是成为将CEA作为胰腺癌标记物的检查的灵敏度降低的瓶颈。另外暗示了，假阴性(胰腺癌且CEA浓度小于阈值)的比例为32.7％(49个病例中有16个病例)，被忽略的概率比较高。

[表1]

癌的发展程度(T分类)	灵敏度	[阳性待检体数]/[全部待检体数]
			Tis、T1、T2	66.7％	6/9
T3	80.0％	20/25
			T4	46.7%	7/15

T4的灵敏度下降的理由被认为是浸润范围广、胰管和胆管两者均狭窄、胰液和胆汁两者均不能被乳头部排出。实际上，从T4患者采集的十二指肠液试样与从其他分类患者采集的试样相比较，透明待检体多。由这些结果暗示了选出颜色更浓的待检体实施十二指肠液检查的有用性。

[实施例1]

对于从胰腺癌49个病例、胰腺良性疾病7个病例经内窥镜地采集的十二指肠液试样，测定吸收光谱。将全部待检体的吸收光谱示于图4。将图4中的吸收峰附近(300～560nm)放大的图示于图5。可知，十二指肠液试样在350～540nm其中特别是400～460nm具有吸收峰波长区域。

进而，对于各十二指肠液试样(待检体)的颜色的浓度进行评价。具体而言，使用分光光度计，以光路长度10mm测定各待检体的380～780nm的吸收光谱(A₁₀)。接着，基于下述式，将得到的吸收光谱换算成透射光谱(T₁₀)，进一步以光路长度5mm(T₅)进行换算。

$T_{10}={10}^{-A_{10}}$

T₅＝(-Log(T₁₀，10)/10)*5

由光路长度换算后的透射光谱，按照下述的一连串的式子，求出包含CIEXYZ色度体系的三刺激值(X、Y、Z)的色度，在色度图上的XY坐标做标记。将各待检体的X值和Y值示于表2～5。

[数学式3]

$\begin{array}{ccc}x=\frac{X}{X+Y+Z}& y=\frac{Y}{X+Y+Z}& z=\frac{Z}{X+Y+Z}=1-x-y\end{array}$

$X=K{\∫}_{380}^{780}S\left(\mathrm{\λ}\right)\stackrel{\‾}{x}\left(\mathrm{\λ}\right)R\left(\mathrm{\λ}\right)d\mathrm{\λ}$

$Y=K{\∫}_{380}^{780}S\left(\mathrm{\λ}\right)\stackrel{\‾}{y}\left(\mathrm{\λ}\right)R\left(\mathrm{\λ}\right)d\mathrm{\λ}$

$Z=K{\∫}_{380}^{780}S\left(\mathrm{\λ}\right)\stackrel{\‾}{z}\left(\mathrm{\λ}\right)R\left(\mathrm{\λ}\right)d\mathrm{\λ}$

$K=\frac{100}{{\∫}_{380}^{780}S\left(\mathrm{\λ}\right)\stackrel{\‾}{y}\left(\mathrm{\λ}\right)d\left(\mathrm{\λ}\right)}$

S(λ):颜色显示中所使用的标准光的分光分布

(光源*滤色器*光学体系；此次均以1计算)

XYZ色度体系中的2°视野的等色函数

R(λ):分光立体角反射率(此次是样品的透光率)

进而，对于各待检体，也测定455nm的吸光度和CEA浓度。将测定结果示于表2～5。CEA浓度与参考例1同样地测定。

[表2]

[表3]

[表4]

[表5]

如表2所示，良性待检体的CEA浓度为0.0～125.5ng/mL。此处，为了将特异度设为100％，将CEA浓度的临界值设定为126ng/mL。因此，使用该临界值对于胰腺癌的49个待检体进行评价，结果33个待检体为阳性、16个待检体为阴性。即，真阳性为67.3％，假阴性为32.7％。对于胰腺癌的各发展程度的灵敏度进行调查，结果胰腺癌(Tis、T1、T2)组为66.7％(6个待检体/9个待检体)；胰腺癌(T3)组为80.0％(20个待检体/25个待检体)；胰腺癌(T4)组为46.7％(7个待检体/15个待检体)(参照表3～5中“灵敏度(全部待检体)”栏。)。

接着，将CIEXYZ色度体系中的X值为0.345且Y值为0.349的色度点作为基准色(基准色1)，选定相同色度体系中的X值为0.345以上且Y值为0.349以上的待检体作为与基准色1同等以上浓度的待检体。表3～5的“待检体No.”栏中，带有星号标记的待检体为基于基准色1而被选定的待检体。需要说明的是，对于各待检体，将455nm的吸光度为0.137的液体的液色作为基准色，结果只选定与基于前述基准色1选定的待检体相同的待检体。只对于该被选定的待检体调查灵敏度，结果是胰腺癌(Tis、T1、T2)组为62.5％(5个待检体/8个待检体)；胰腺癌(T3)组为89.5％(17个待检体/19个待检体)；胰腺癌(T4)组为75.0％(6个待检体/8个待检体)(参照表3～5中“灵敏度(选定待检体)”栏。)。另外，胰腺癌49个待检体中被选定的35个待检体整体的灵敏度为80.0％(28个待检体/35个待检体)；假阴性为20.0％(7个待检体/35个待检体)。与此相对，胰腺癌待检体中没有被选定的14个待检体的真阳性为35.7％(5个待检体/14个待检体)、假阴性为64.3％(9个待检体/14个待检体)。这样，相比于对于全部待检体进行的情况下，只将基于基准色1选定的待检体作为对象时，胰腺癌(Tis、T1、T2)组的灵敏度稍稍降低但胰腺癌整体、胰腺癌(T3)组、胰腺癌(T4)组的灵敏度提高。特别是，胰腺癌(T4)组从46.7％明显提高至75.0％为止。

将CIEXYZ色度体系中的X值为0.335且Y值为0.335的色度点作为基准色(基准色2)，选定相同色度体系中的X值为0.335以上且Y值为0.335以上的待检体作为与基准色2同等以上浓度的待检体。表3～5的“待检体No.”栏中，标记了“#”的待检体是根据基准色2被选定的待检体。需要说明的是，对于各待检体，将455nm的吸光度为0.06的液体的液色作为基准色，结果只选定与基于前述基准色2选定的待检体相同的待检体。仅对该被选定的待检体检测灵敏度，结果胰腺癌(Tis、T1、T2)组为66.7％(6个待检体/9个待检体)；胰腺癌(T3)组为91.0％(20个待检体/22个待检体)；胰腺癌(T4)组为63.6％(7个待检体/11个待检体)。另外，胰腺癌49个待检体中被选定的42个待检体整体的灵敏度为78.0％。相比于对全部待检体进行的情况，只将基于基准色2选定的待检体作为对象时，胰腺癌整体、胰腺癌(T4)组的灵敏度提高。

调制将胆红素(BilirubinConjugateDitaurateDisodiumSalt，Calbiochem公司制、产品序号：201102)溶解于水中而成的稀释系列，与前述待检体同样地，测定各吸收光谱，求出色度，在CIEXYZ色度体系的色度图上的XY坐标上标记。另外，作为对照，对水也同样地测定吸收光谱而求出色度，在色度图上的XY坐标进行标记。计算出色度图上的各稀释系列的色度点与水的色度点之间的色度点间距离。将计算结果示于图6。结果可知，胆红素水溶液中，依赖于胆红素浓度，色度图上的该胆红素水溶液与水的色度点间距离变长。

另外，水的色度点与前述基准色1的色度点(X＝0.345、Y＝0.349)的色度点间距离为0.0195；水的色度点与前述基准色2的色度点(X＝0.335、Y＝0.335)的色度点间距离为0.0024。将这些色度点间距离与图6的标准曲线相对照，则可知基准色1的颜色的浓度与0.04mg/mL的胆红素水溶液相同；基准色2的颜色的浓度与0.005mg/mL的胆红素水溶液相同。由这些结果可知，通过使用0.04mg/mL的胆红素水溶液的液色作为基准色1、使用0.005mg/mL的胆红素水溶液的液色作为基准色2而选定十二指肠液试样，从而提高胰腺病标记物检查中的灵敏度，提高检查的可靠性和效率。

[参考例2]

由胰腺癌病例11例经内窥镜地采集十二指肠液试样，测定试样中的CEA浓度。CEA浓度使用市售的试剂盒(IBL公司制)通过ELISA法进行测定。由测定的CEA浓度，将临界值设为126ng/mL，对阴性和阳性进行判断。需要说明的是，该11例中，M7和M11待检体与参考例1和实施例1中的M7和M11待检体是相同待检体。

将测定各试样中的CEA浓度的结果示于表6。该结果是：11例中5例(待检体F67、S136、F9、M7和M11)为假阴性(胰腺癌并且CEA浓度小于阈值)，灵敏度为54.5％。

[实施例2]

对于参考例2中测定了CEA浓度的早期胰腺癌9个病例的十二指肠液试样，测定吸收光谱。可知，各十二指肠液试样在350～540nm其中特别是400～460nm具有吸收峰波长区域。

进而，对于各十二指肠液试样(待检体)的颜色的浓度，与实施例1同样地进行评价。将各待检体的X值和Y值、以及455nm的吸光度示于表6。

[表6]

将CIEXYZ色度体系中的X值为0.345且Y值为0.349的色度点作为基准色(基准色1)，将相同色度体系中的X值为0.345以上且Y值为0.349以上的待检体选定为与基准色1同等以上浓度的待检体。将与基准色1同等以上浓度的待检体判定为具有检查适应性；将比基准色1淡的待检体判定为没有检查适应性。表6的“颜色判定”栏中，标有圆圈标记的待检体是基于基准色1被判定为具有检查适应性的待检体；标有×标记的待检体是被判定为不具有检查适应性的待检体。即，可以判定除了F9以外的全部待检体均具有检查适应性。需要说明的是，对于各待检体，将455nm的吸光度为0.137的液体的液色作为基准色，结果只选定与基于前述基准色1选定的待检体相同的待检体。

进而，对于各待检体，也测定pH。将pH7.5作为基准值，将pH为该基准值以上的待检体判定为具有检查适应性，将小于该基准值的待检体判定为不具有检查适应性。将pH的测定结果和判定结果示于表6。表6的“pH判定”栏中，标记有圆圈标记的待检体是基于基准值(pH7.5)被判定为具有检查适应性的待检体；标记有×标记的待检体是被判定为不具有检查适应性的待检体。结果，由于待检体M11被判定为不具有检查适应性，所以与颜色判定的结果一起，选定9个待检体作为具有检查适应性。待检体M11由于胃液的混入以及胰液的含量少，因此可以推测为假阴性。

根据被选定的9个待检体的CEA浓度，通过该选定，灵敏度为66.7％(6/9)，改善了灵敏度的成绩。由这些结果可知，将十二指肠液试样的颜色和pH作为指标，能够判断该十二指肠液试样是否适合于胰腺病标记物检查(供试后是否能够期待得到可以信赖的结果)，通过将颜色和pH作为指标，能够选定适合于胰腺病标记物检查的十二指肠液试样。

[实施例3]

实施例2中，对于调节了颜色和pH的11个待检体，进一步测定P型淀粉酶浓度(酶活性浓度)。

P型淀粉酶浓度根据日本临床化学会(JapanSocietyofClinicalChemistry，JSCC)常用基准法进行测定。即，对于通过使用了抗人唾液腺型淀粉酶(S-AMY)抗体的S-AMY抑制法残留的AMY活性，用根据IFCC推荐法的方法进行测定。

将P型淀粉酶的酶活性浓度的基准浓度设为5000U/L，将P型淀粉酶浓度为该基准浓度以上的待检体判定为具有检查适应性；将P型淀粉酶浓度小于该基准浓度的待检体判定为不具有检查适应性。将各待检体的P型淀粉酶浓度的测定结果和基于P型淀粉酶浓度的判定结果与参考例2和实施例2中的CEA浓度、颜色判定、pH判定的结果一起示于表7。“P型淀粉酶浓度判定”栏中，标记了圆圈标记的待检体是基于基准值(5000U/L)被判定为具有检查适应性的待检体；标记了×标记的待检体是被判定为不具有检查适应性的待检体。

[表7]

根据十二指肠液试样的颜色、pH和P型淀粉酶浓度的基准，选定7个待检体。由被选定的7个待检体的CEA浓度可知，灵敏度为85.7％(6/7)，通过该选定，灵敏度的成果得到改善。由这些结果可知，通过将十二指肠液试样的颜色、pH和P型淀粉酶浓度作为指标，能够选定适合于胰腺病标记物检查的十二指肠液试样。即，由这些结果可知，将十二指肠液试样的颜色和P型淀粉酶浓度作为指标，能够判断该十二指肠液试样是否能够供试于胰腺病标记物检查；通过基于颜色和P型淀粉酶浓度进行选择，能够改善检查的灵敏度。

产业上的可利用性

通过本发明的试样确定方法和标记物检测方法，对十二指肠液试样的试样适应性进行评价，能够只将具有适应性的试样供试于胰腺病标记物检查，因此这些方法可以利用于对于胰液中的胰腺病标记物进行分析的领域、特别是用于胰腺癌的诊断·治疗的临床检查等领域。

Claims (18)

1.一种胰腺病标记物检测用十二指肠液试样的确定方法，其特征在于，具有如下工序：

(a1)将十二指肠液试样的颜色的浓度与规定的基准色进行比较的工序；和

(b1)确定颜色的浓度为与所述基准色同等以上的十二指肠液试样供试于胰腺病标记物的检查、而颜色的浓度比所述基准色淡的十二指肠液试样不供试于胰腺病标记物的检查的工序。

2.一种胰腺病标记物检测用十二指肠液试样的确定方法，其特征在于，具有如下工序：

(a1)将十二指肠液试样的颜色的浓度与规定的基准色进行比较的工序；

(a2)将所述十二指肠液试样的pH与规定的基准值进行比较的工序；和

(b2)确定颜色的浓度为与所述基准色同等以上且pH为所述基准值以上的十二指肠液试样供试于胰腺病标记物的检查，而颜色的浓度比所述基准色淡的十二指肠液试样和所述十二指肠液试样的pH小于所述基准值的十二指肠液试样不供试于胰腺病标记物的检查的工序。

3.根据权利要求2所述的胰腺病标记物检测用十二指肠液试样的确定方法，其中，只对所述工序(a1)中所述十二指肠液试样的颜色的浓度为与所述基准色同等以上的十二指肠液试样进行所述工序(a2)。

4.一种胰腺病标记物检测用十二指肠液试样的确定方法，其特征在于，具有如下工序：

(a1)将十二指肠液试样的颜色的浓度与规定的基准色进行比较的工序；

(a2)将所述十二指肠液试样的pH与规定的基准值进行比较的工序；

(a3)将所述十二指肠液试样中的P型淀粉酶浓度与规定的基准浓度进行比较的工序；和

(b3)确定颜色的浓度为与所述基准色同等以上、pH为所述基准值以上并且P型淀粉酶浓度为所述基准浓度以上的十二指肠液试样供试于胰腺病标记物的检查，而颜色的浓度比所述基准色淡的十二指肠液试样、pH小于所述基准值的十二指肠液试样、以及P型淀粉酶浓度小于所述基准浓度的十二指肠液试样不供试于胰腺病标记物的检查的工序。

5.根据权利要求4所述的胰腺病标记物检测用十二指肠液试样的确定方法，其中，只对所述工序(a1)中被判定为对胰腺病标记物的检查具有适应性的十二指肠液试样进行所述工序(a2)或(a3)。

6.一种胰腺病标记物检测用十二指肠液试样的确定方法，其特征在于，具有如下工序：

(a1)将十二指肠液试样的颜色的浓度与规定的基准色进行比较的工序；

(a3)将所述十二指肠液试样中的P型淀粉酶浓度与规定的基准浓度进行比较的工序；和

(b4)确定颜色的浓度为与所述基准色同等以上且P型淀粉酶浓度为所述基准浓度以上的十二指肠液试样供试于胰腺病标记物的检查，而颜色的浓度比所述基准色淡的十二指肠液试样和P型淀粉酶浓度小于所述基准浓度的十二指肠液试样不供试于胰腺病标记物的检查的工序。

7.根据权利要求6所述的胰腺病标记物检测用十二指肠液试样的确定方法，其中，只对所述工序(a1)中被判定对于胰腺病标记物的检查具有适应性的十二指肠液试样进行所述工序(a3)。

8.根据权利要求1～7中的任一项所述的胰腺病标记物检测用十二指肠液试样的确定方法，其中，所述基准色为0.005mg/mL的胆红素水溶液或0.04mg/mL的胆红素水溶液的液色。

9.根据权利要求1～8中的任一项所述的胰腺病标记物检测用十二指肠液试样的确定方法，其中，用目视进行十二指肠液试样的颜色的浓度的比较。

10.根据权利要求1～8中的任一项所述的胰腺病标记物检测用十二指肠液试样的确定方法，其中，基于该十二指肠液试样的分光光谱信息进行十二指肠液试样的颜色的浓度的比较。

11.根据权利要求1～8中的任一项所述的胰腺病标记物检测用十二指肠液试样的确定方法，其中，

所述工序(a1)中，将CIEXYZ色度体系或CIEL*a*b*色度体系的色度图上的、所述十二指肠液试样与水的色度点间距离跟所述基准色与水的色度点间距离进行比较，

在所述工序(b1)、(b2)、(b3)或(b4)中，所述十二指肠液试样与水的色度点间距离为所述基准色与水的色度点间距离以上的情况下，确定该十二指肠液试样供试于胰腺病标记物的检查；所述十二指肠液试样与水的色度点间距离小于所述基准色与水的色度点间距离的情况下，确定该十二指肠液试样不供试于胰腺病标记物的检查。

12.根据权利要求1～8中的任一项所述的胰腺病标记物检测用十二指肠液试样的确定方法，其中，基于350～540nm范围内的规定波长的吸光度进行十二指肠液试样的颜色的浓度的比较。

13.根据权利要求1～8中的任一项所述的胰腺病标记物检测用十二指肠液试样的确定方法，其中，基于400～460nm范围内的规定波长的吸光度进行十二指肠液试样的颜色的浓度的比较。

14.根据权利要求2～5、8～13中的任一项所述的胰腺病标记物检测用十二指肠液试样的确定方法，其中，所述十二指肠液试样的pH的规定的基准值为7.5以上。

15.根据权利要求4～14中的任一项所述的胰腺病标记物检测用十二指肠液试样的确定方法，其中，所述十二指肠液试样中的P型淀粉酶浓度的规定的基准浓度为5000U/L以上。

16.一种胰腺病标记物的检测方法，其特征在于，具有对十二指肠液试样中的胰腺病标记物进行检测的工序，

所述十二指肠液试样是通过权利要求1～15中的任一项所述的胰腺病标记物检测用十二指肠液试样的调制方法而确定的。

17.一种胰腺病标记物的检测方法，其特征在于，具有如下工序：

(a1)将十二指肠液试样的颜色的浓度与规定的基准色进行比较的工序；

(b1)确定颜色的浓度为与所述基准色同等以上的十二指肠液试样供试于胰腺病标记物的检查、而颜色的浓度比所述基准色淡的十二指肠液试样不供试于胰腺病标记物的检查的工序；和

(c1)对于所述工序(b1)中被确定供试于胰腺病标记物的检查的十二指肠液试样中的胰腺病标记物进行检测的工序。

18.根据权利要求16或17所述的胰腺病标记物的检测方法，其中，所述胰腺病标记物为癌胚抗原。