CN103460045B - 胰脏检查方法及胰脏检查试剂盒 - Google Patents
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Abstract
虽然是简单的设备和步骤但以高灵敏度检查胰疾病。提供通过免疫色谱法来测定从被检体采集的胰液和/或包含胰液的体液中包含的S100P的浓度的胰脏检查方法。此外,提供具备保持抗S100P抗体的免疫色谱装置和收纳抑制胰液中包含的蛋白水解酶的活性的蛋白水解酶抑制剂的采集容器的胰脏检查试剂盒。
Description
技术领域
本发明涉及胰脏检查方法及胰脏检查试剂盒。
背景技术
以往,胰管内乳头状粘液性肿瘤(IPMN)作为胰癌的早期发现的线索受到注目。胰癌、IPMN的诊断通过内窥镜检查或活检进行。但是,难以从内窥镜图像发现早期的胰癌、IPMN,在活检中从胰脏采集组织的操作其本身是困难的。因此,通过这些方法得不到充分的检查精度。
另一方面,已知在胰癌、IPMN中,属于S100蛋白质家族之一的S100P以高的比例过量地表达(例如,参照非专利文献1、2。)。
现有技术文献
非专利文献
非专利文献1:KenokiOhuchida、另9名、“S100PIsanEarlyDevelopmentalMarkerofPancreaticCarcinogenesis”、ClinicalCancerResearch、2006年9月15日、第12卷、第18号、pp.5411-5416
非专利文献2:MadsGronborg、另8名、“ComprehensiveProteomicAnalysisofHumanPancreaticJuice”、JournalofProteomeResearch、2004年9月17日、第3卷、第5号、pp.1042-1055
发明内容
发明要解决的问题
非专利文献1中,从胰脏的组织或胰液中包含的胰细胞中提取RNA,由S100P基因的mRNA表达水平测定S100P的表达量。通过该方法能够以高精度检测胰癌及IPMN。然而,需要繁杂的多阶段的工序,检查中需要高额的费用和长的时间。非专利文献2中,将胰液通过TOF-MS(飞行时间型质谱)进行解析来测定S100P的表达量,需要比较大规模的设备。即,能够通过这些方法实施检查的设施有限,此外,存在不适合通常的临床检查的不良情况。
本发明是鉴于上述的情况而进行的,目的在于提供虽然是简单的设备和步骤但能够以高灵敏度检查胰疾病的胰脏检查方法及胰脏检查试剂盒。
用于解决问题的方案
为了达成上述目的,本发明提供以下的方案。
本发明的第1方式是一种胰脏检查方法,其通过免疫色谱法测定从被检体采集的胰液和/或包含胰液的体液中包含的S100P的浓度。
根据本发明的第1方式,从被检体内采集的胰液和/或包含胰液的体液中包含的S100P的浓度由于在存在包括胰脏肿瘤、IPMN、慢性胰腺炎的胰疾病的情况下以高的概率上升,所以能够由测定的S100P的浓度的值以高灵敏度检查胰疾病的有无。这种情况下,在S100P的浓度的测定中,通过使用操作简便且不需要特殊设备的免疫色谱法,虽然是简单的设备和步骤但能够以高灵敏度检查胰疾病。
在上述第1方式中,上述胰液也可以是从胰管内采集的胰液。
通过这样操作,通过使用纯度高的胰液,能够更准确地测定在被检体内表达的S100P的浓度。
在上述第1方式中,上述包含胰液的体液也可以是从十二指肠内采集的体液,该体液也可以是十二指肠液。
在十二指肠内,能够在与胆汁或十二指肠的分泌液混合的状态下以十二指肠液形式采集胰液。通过这样操作,能够降低采集胰液时的对被检体的侵袭。
在上述第1方式中,上述胰液和/或包含胰液的体液也可以是在不进行胰液分泌促进剂的使用等积极的排出刺激的情况下、生理性分泌的胰液和/或包含该胰液的体液。
通过这样操作,能够减轻伴随检查而产生的对被检体的负担。
在上述第1方式中,上述胰液和/或包含胰液的体液也可以是通过胰液分泌促进剂的投与而分泌的胰液和/或包含该胰液的体液。
通过这样操作,能够将充分量的胰液和/或包含胰液的体液用于检查。
在上述第1方式中,也可以使用采集到采集容器中的上述胰液和/或包含胰液的体液,所述采集容器收纳有抑制上述胰液中包含的蛋白水解酶(蛋白酶)的活性的蛋白酶抑制剂。
通过这样操作,能够防止在采集及检查的过程中S100P被胰液中包含的蛋白水解酶分解,提高检查精度。
本发明的第2方式是一种胰脏检查试剂盒,其具备保持2种抗S100P抗体的免疫色谱装置,所述2种抗S100P抗体为通过标记物质标记被检物质的第1抗体、及吸附与该第1抗体形成复合物的所述被检物质的第2抗体,所述2种抗S100P抗体识别S100P的彼此不同的表位。
在上述第2方式中,也可以进一步具备收纳有抑制胰液中包含的蛋白酶的活性的蛋白酶抑制剂的采集容器。
发明的效果
根据本发明,发挥虽然是简单的设备和步骤但能够以高灵敏度检查胰疾病的效果。
附图说明
图1是本发明的一实施方式所述的胰脏检查试剂盒所具备的采集容器的整体构成图。
图2A是表示本发明的一实施方式所述的胰脏检查试剂盒所具备的免疫色谱装置的内部构成的图。
图2B是表示图2A的免疫色谱装置的外观的图。
图3是对图1的采集容器的使用方法进行说明的图。
图4是表示图1的采集容器的变形例的图。
图5是表示图1的采集容器的又一个变形例的图。
图6是表示在实施例1中测定胰液、十二指肠液中的S100P浓度的结果的图表。
图7是表示在实施例1中测定纯胰液中的S100P浓度的结果的图表。
图8是表示在实施例3中对5种胰疾病测定胰液、十二指肠液中的S100P浓度的结果的图表。
具体实施方式
以下,对本发明的一实施方式所述的胰脏检查试剂盒及使用该胰脏检查试剂盒的胰脏检查方法参照图1至图5进行说明。
本实施方式所述的胰脏检查试剂盒具备如图1所示那样在注射器的外筒2内收纳蛋白酶抑制剂A而成的采集容器1、和如图2A及图2B所示那样保持抗S100P抗体的免疫色谱装置20。
采集容器1的注射器具备外筒2、划分该外筒2的内部空间且在外筒2内能够滑动地设置的垫圈3和推拉该垫圈3的柱塞4。蛋白酶抑制剂A配置在通过垫圈3划分为抽吸口2a侧的空间内。抽吸口2a通过帽盖5等被密封。
蛋白酶抑制剂A使用在以水作为主成分的胰液和/或包含胰液的体液中容易溶解的水溶性的物质。作为蛋白酶抑制剂A,适宜使用例如作为磺酰基系化合物的苯基甲基磺酰氟(PMSF)、脒苯基甲磺酰氟(APMSF)、4-(2-氨乙基)-苯磺酰氟(AEBSF)、作为甲苯磺酰基系化合物的1-氯-3-甲苯磺酰基氨-7-氨基-2-庚酮盐酸盐(TLCK―HCL)、或作为肽系的抑制剂的抑肽酶、亮肽素等。这些蛋白酶抑制剂A主要是不可逆地抑制丝氨酸蛋白酶的物质,强力地抑制胰液中较多地包含的蛋白酶即淀粉酶、胰蛋白酶、弹性蛋白酶等。
蛋白酶抑制剂A可以是仅1种收纳在外筒2内,也可以是2种以上收纳在外筒2内。此外,蛋白酶抑制剂A也可以与抑制脂肪酶等其它消化酶的活性的抑制剂一起被收纳。
蛋白酶抑制剂A是经冷冻干燥的粉体。由此,蛋白酶抑制剂A更容易溶解到胰液和/或包含胰液的体液中。
通过采集容器1采集的被检液的采集量根据采集容器1的内容量、或根据检查所需的被检液的量预先设定为规定量。收纳在外筒2内的蛋白酶抑制剂A的重量按照溶解到应当采集的规定量的被检液中时蛋白酶抑制剂A的浓度达到所期望的数值的方式来决定。
免疫色谱装置20如图2A所示的那样具备展开被检液的载体21、分别配置在载体21的两端的样品垫22及吸收垫23。
载体21只要是能够展开被检液的物质即可,适宜使用例如硝基纤维素制的膜滤器等。载体21上设置有保持有第1抗体的带状的标记区域21a、在从该标记区域21a空出间隔的位置固相化有第2抗体的带状的吸附区域21b。第1抗体及第2抗体是识别S100P的彼此不同的表位的抗S100P抗体。
第1抗体通过呈现规定颜色的物质、例如金胶体或铂胶体等金属胶体、或由彩色的聚苯乙烯胶乳等合成胶乳或天然橡胶胶乳等构成的胶乳胶体(标记物质)被标记。
标记第1抗体的标记物质也可以是酶或放射性物质等。
样品垫22由吸水性优异的材料、例如由多孔质聚乙烯或多孔质聚丙烯等多孔质合成树脂形成的片材或薄膜、或滤纸、棉布等纤维素制的纸、织布或无纺布等构成。
吸收垫23由能够迅速地吸收并保持液体的材质、例如棉布、滤纸、由聚乙烯或聚丙烯等形成的多孔质塑料无纺布等构成。
这些载体21、样品垫22及吸收垫23如图2B所示的那样,通过塑料制的盒子24进行包装。盒子24中,滴加窗24a在与样品垫22对应的位置开口,观察窗24b在与吸附区域21b对应的位置开口。
使用这样构成的免疫色谱装置20时,操作者从滴加窗24a向样品垫22上滴加被检液。所滴加的被检液通过从样品垫22向着吸收垫23在载体21上移动而展开。在展开的途中,被检液中包含的S100P在标记区域21a中与第1抗体结合而形成复合物。之后,该复合物在吸附区域21b中通过与第2抗体结合而吸附到吸附区域21b上。然后,通过复合物在吸附区域21b中集聚,从而吸附区域21b呈现出规定的颜色。因此,操作者能够由观察窗24b内是否出现规定颜色的条带、或条带的颜色的浓淡来测定S100P的有无或浓度。
接着,对使用了这样构成的胰脏检查试剂盒的胰脏检查方法进行说明。
本实施方式所述的胰脏检查方法如下进行:从被检体的十二指肠内将包含胰液的十二指肠液采集到采集容器内,使用免疫色谱装置20测定所采集的包含胰液的十二指肠液中的S100P的浓度。十二指肠液的采集方法及采集容器并不限定于例示的导管及注射器,只要能够采集胰液和/或包含胰液的体液即可。
具体而言,首先,介由插入十二指肠内的内窥镜的管道将导管配置在十二指肠内的乳头部附近,如图3所示的那样,将导管6的基端连接到外筒2的抽吸口2a上,拉紧柱塞4。由此,能够将由乳头部分泌到十二指肠内的胰液与胆汁、十二指肠分泌液一起以十二指肠液形式抽吸并采集到外筒2内。
在抽吸十二指肠液前,也可以进行促进胰脏中的胰液的分泌及胰液由乳头部向十二指肠内的排出的处理、例如分泌素等胰液分泌促进剂的向被检体内的投与。此外,也可以不进行这样的处理而采集在生理性条件下排出到十二指肠内的胰液和/或包含该胰液的十二指肠液。
在外筒2内采集胰液与胆汁、十二指肠分泌液的混合液(以下,称为胰液·十二指肠液。)至规定量后,从抽吸口2a卸下导管6,将外筒内2的胰液·十二指肠液由抽吸口2a滴加到免疫色谱装置20的滴加窗24a中。之后,例如等待5分钟到15分钟,直到胰液·十二指肠液充分地在载体21上展开。通过以上的步骤,能够以观察窗24b内有无条带出现的形式检查胰液·十二指肠液中的S100P的有无、即胰癌或IPMN等胰疾病的有无。另外,也可以在胰脏检查试剂盒中附带包含缓冲液等的稀释液,通过该稀释液将胰液·十二指肠液稀释后滴加到滴加窗24a中。
在观察窗24b内观察到条带时,通过以目视或免疫色谱用的读取器测定条带的呈色的浓淡来测定S100P的浓度。也可以通过以由健康的人的胰液·十二指肠液预先得到的条带的呈色的浓淡作为基准值,并将该基准值与测定的条带的呈色的浓淡进行比较来判定被检体的胰疾病的有无。此时,基准值的设定根据使用从胰管内采集的纯胰液和胰液·十二指肠液中的哪个而不同,此外,也根据采集量或采集所需的时间、是否使用胰液分泌促进剂而不同。因此,需要在各种条件下采集作为被检液的胰液和/或包含胰液的体液时的基准值。
这种情况下,根据本实施方式,在胰液和/或包含胰液的体液中包含的S100P的浓度与胰疾病的有无之间存在高的相关性,在存在胰疾病的情况下,胰液和/或包含胰液的体液中的S100P的浓度以高的比例上升。因此,能够以高的灵敏度检查胰疾病的有无。
进而,胰液·十二指肠液从导管6流入外筒2内后在外筒2内迅速地与蛋白酶抑制剂A混合。由此,由于胰液·十二指肠液中包含的S100P的分解迅速地被抑制,所以能够测定准确的S100P的浓度,能够进一步提高检查灵敏度。特别是由于胰液与其它的消化液相比蛋白酶的活性高,所以通过按照采集到外筒2内的胰液·十二指肠液中的蛋白酶抑制剂A的浓度充分地变高的方式设定蛋白酶抑制剂A的收纳量,能够有效地提高检查精度。
此外,通过以十二指肠液的形式采集排出到十二指肠中的胰液并用于检查,与在胰管内插入导管6来采集胰管内的纯胰液的情况相比能够降低侵袭同时简便地采集胰液。此外,由于免疫色谱装置20的操作不需要特殊的设备、长的时间,所以即使是例如规模比较小的经常就诊的医院等也能够廉价地且以短时间实施高灵敏度的检查。
另外,在本实施方式中,将由乳头部排出到十二指肠内并与胆汁、十二指肠分泌液混合的胰液用于检查,但也可以将从胰管内采集的纯胰液用于检查来代替上述方式。纯胰液可以通过边造影边将导管从乳头部插入胰管内进行抽吸、或将气囊导管或软管在胰管内留置一定时间来采集。
通过这样操作,由于从胰管内采集的纯胰液不会被十二指肠液稀释,所以能够测定被检体内的更准确的S100P的浓度。
此外,在本实施方式中,作为蛋白酶抑制剂A,使用经冷冻干燥的粉体物质,但也可以使用溶解到缓冲液等中的液体物质来代替该粉体物质。通过这样操作,即使胰液·十二指肠液的采集量为少量,也能够使蛋白酶抑制剂A容易地均一地与胰液·十二指肠液混合。
此外,在本实施方式中,例示出使用注射器作为采集容器1的构成,但采集容器1的构成并不限定于此,只要是介由所连接的导管内能够抽吸胰液和/或包含胰液的体液、且收纳与胰液和/或包含胰液的体液接触而抑制胰液中包含的蛋白酶的活性的蛋白酶抑制剂的构成即可。例如,作为采集容器1,可以使用如图4所示那样捕集器(trap)型的容器,也可以使用如图5所示那样内部为真空状态的容器。
此外,采集容器只要是能够使采集到的胰液和/或包含胰液的体液与预先收纳在容器内的蛋白酶抑制剂A迅速地接触的构成即可,也可以采用图1、图4及图5中例示的采集容器1以外的采集容器。此外,也可以是通过所例示的导管以外的采集手段如抽吸、吸收、回收等采集胰液和/或包含胰液的体液的构成。采集容器的构成可以根据采集方法来选择。
图4所示的采集容器1具备与导管6连接的抽吸口2a、和与连接在排气泵等上的软管7连接的排气口2b,通过从排气口2b进行排气,从抽吸口2b流入胰液·十二指肠液并贮存。
图5所示的采集容器1利用例如由橡胶等弹性构件构成的塞8来堵塞开口,通过使与导管6连接的中空针9贯穿塞8,从而将胰液·十二指肠液抽吸到内部。
即使这样操作,也能够在采集后迅速地抑制胰液和/或包含胰液的体液中包含的蛋白酶的活性,提高所采集的胰液中包含的S100P的检查精度。
这里,在以往的体液的采集容器的情况下,由于在导管的基端连接采集容器边贮存边抽吸胰液和/或包含胰液的体液,在抽吸结束后分注胰液和/或包含胰液的体液并添加蛋白酶抑制剂,所以在抽吸的过程中在采集容器内也发生蛋白质的分解,存在难以由所采集的胰液和/或包含胰液的体液得到准确的检查结果的问题。
与此相对,根据本实施方式所述的采集容器1,通过迅速地抑制所采集的胰液和/或包含胰液的体液中包含的蛋白酶的活性,不仅对于S100P,对于胰液和/或包含胰液的体液中包含的其它蛋白质也能够提高检测精度,也能够有效地用于以其它蛋白质作为标志物的胰脏检查。
此外,在本实施方式中,通过免疫色谱法来测定S100P的浓度,但只要是使用固相化的抗体能够简便地测定的方法,也可以使用其它的测定方法。也可以使用例如小型的表面等离子共振装置(SPR)或微流控(MicroFluidics)等进行测定。
实施例
接着,对上述的实施方式所述的胰脏检查方法的实施例进行说明。
〔实施例1〕
对本发明所述的胰脏检查方法的检查灵敏度通过以下的实验进行评价。
作为被检体,从31人的胰癌患者组及7人的IPMN患者组通过导管抽吸采集作为被检液的胰液及包含胰液的体液。将从患者采集的被检液在采集后迅速地冷冻保存后,使用CycLexCo.,Ltd.制的ELISA试剂盒测定各被检液中包含的S100P的浓度。作为对照组,对6人的良性的胰腺囊肿患者(MCN、SCN)也通过同样的方法进行被检液的采集及测定。各患者的疾病已通过病理诊断进行诊断。
作为被检液,使用从胰管内采集的纯胰液及胰液·十二指肠液。对于胰液·十二指肠液,使用包含生理性分泌及排出的胰液(以下,称为胰液·十二指肠液(-)。)的十二指肠液及利用投与分泌素促进胰液分泌后采集的十二指肠液(以下,称为胰液·十二指肠液(+)。)。进而,对于胰液·十二指肠液(-)、(+),测定使用收纳有蛋白酶抑制剂的采集容器(抑制剂(+))及空的采集容器(抑制剂(-))采集的被检液。将其测定结果示于图6及图7中。
在图6及图7中,横轴表示患者的症例,纵轴表示纯胰液中或十二指肠液中的S100P的浓度。各点表示在上述条件下从各患者采集的胰液或十二指肠液中的S100P的浓度。
接着,以由对照组得到的S100P的浓度的最高值作为截止值,在由胰癌患者及IPMN患者得到的S100P的浓度超过截止值的情况下,判定该患者在胰癌或IPMN的检查中为阳性。然后,在各检查条件下,相对于31人的胰癌患者组及7人的IPMN患者组中正常地完成检查的患者的合计,算出判定为阳性的患者的比例作为阳性率。将其结果示于表1中。在上述的条件下无法正常地采集被检液的数据从表1、图6及图7所示的统计中除外。
[表1]
由表1获知的那样,在任一检查条件下均得到高的阳性率。即,通过测定胰液·十二指肠液或纯胰液中包含的S100P的浓度能够以高灵敏度检查胰癌或IPMN的有无,确认本发明的胰脏检查方法对于胰癌或IPMN的检查是有用的。
此外确认,在使用胰液·十二指肠液的检查中,通过使用加有蛋白酶抑制剂的本发明所述的采集容器能够大幅地提高检查灵敏度。即确认,通过加有蛋白酶抑制剂的采集容器抑制由与胰液同时分泌的丰富的蛋白酶引起的S100P的分解,特别是对于进行分泌促进时的检查是有效的。
〔实施例2〕
接着,使用在实施例1中使用的用于ELISA的2种抗S100P抗体(MBL公司制)作为第1抗体及第2抗体来制作本实施例所述的免疫色谱装置。通过利用该免疫色谱装置检查在实施例1中使用的被检液,确认由ELISA法和免疫色谱法分别得到的检查结果的相关性。
以硝基纤维素膜制作载体,以金胶体标记第1抗体,制作本实施例所述的免疫色谱装置。然后,使用所制作的免疫色谱装置检查实施例1的被检液,测定条带的呈色的有无及呈色的浓淡。
将所测定的免疫色谱装置的呈色的浓淡区分为3个等级,结果确认与通过ELISA法定量的浓度之间存在相关性。本实施例的检查所需要的时间约为15分钟。即确认,通过使用免疫色谱法,在短时间内可得到灵敏度充分高的检查结果。
〔实施例3〕
基于实施例1的结果,不进行利用分泌素的投与实现的分泌促进,通过将蛋白酶抑制剂预先收纳到采集容器内的方法,对胰癌患者41例、IPMN患者17例、良性胰腺囊肿(SCN、MCN)患者6例、慢性胰腺炎患者4例、胰内分泌肿瘤患者3例采集胰液·十二指肠液,测定S100P的浓度。胰液·十二指肠液的采集及S100P浓度的测定通过与实施例1同样的方法进行。将其测定结果示于图8中。在图8中,纵轴以对数表示。
以由良性胰腺囊肿患者6例得到的S100P的浓度的测定值中的最高值作为截止值,算出各症例中的阳性率。其结果是,胰疾病的阳性率在胰癌中为90%,在IPMN中为90%,在慢性胰腺炎中为100%,在胰内分泌肿瘤中为100%。
由以上的实验结果确认,通过测定包含胰液的十二指肠液中的S100P浓度,能够以高灵敏度检测上述的各种胰疾病。
附图标记说明
1采集容器
2外筒
2a抽吸口
2b排气口
3垫圈
4柱塞
5帽盖
6导管
7软管
8塞
9中空针
20免疫色谱装置
21载体
21a标记区域(第1抗体、抗S100P抗体)
22b吸附区域(第2抗体、抗S100P抗体)
22样品垫
23吸收垫
24盒子
24a滴加窗
24b观察窗
A蛋白水解酶抑制剂
B胰液
Claims (6)
1.固相化的抗体在制备检测胰脏疾病的试剂盒中的用途,其中,使用固相化的抗体测定包含胰液的体液中包含的S100P的浓度,所述包含胰液的体液为不进行排出刺激的情况下生理性分泌的、从十二指肠内采集的体液。
2.根据权利要求1所述的用途,其中,通过使用所述固相化的抗体的免疫色谱法测定所述S100P的浓度。
3.根据权利要求1或2所述的用途,其中,所述包含胰液的体液为十二指肠液。
4.根据权利要求1到权利要求2中任一项所述的用途,其中,使用采集到采集容器中的所述包含胰液的体液,所述采集容器收纳有抑制所述胰液中包含的蛋白水解酶的活性的蛋白水解酶抑制剂。
5.根据权利要求3所述的用途,其中,使用采集到采集容器中的所述包含胰液的体液,所述采集容器收纳有抑制所述胰液中包含的蛋白水解酶的活性的蛋白水解酶抑制剂。
6.一种胰脏检查试剂盒,其具备保持2种抗S100P抗体的免疫色谱装置,且其进一步具备收纳有抑制胰液中包含的蛋白水解酶的活性的蛋白水解酶抑制剂的采集容器,
其中,所述胰液为不进行排出刺激的情况下生理性分泌的、从十二指肠内采集的体液中包含的胰液,所述2种抗S100P抗体为通过标记物质标记被检物质的第1抗体、及吸附与该第1抗体形成复合物的所述被检物质的第2抗体,所述2种抗S100P抗体识别S100P的彼此不同的表位,
所述蛋白水解酶抑制剂是作为磺酰基系化合物的苯基甲基磺酰氟、脒苯基甲磺酰氟、4-(2-氨乙基)-苯磺酰氟、作为甲苯磺酰基系化合物的1-氯-3-甲苯磺酰基氨-7-氨基-2-庚酮盐酸盐、或作为肽系的抑制剂的抑肽酶、亮肽素。
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CN105358987A (zh) * | 2013-07-02 | 2016-02-24 | 奥林巴斯株式会社 | 胰腺病标记物检测用十二指肠液试样的确定方法、以及胰腺病标记物的检测方法 |
EP2933639A1 (en) * | 2014-04-16 | 2015-10-21 | Deutsches Krebsforschungszentrum Stiftung des Öffentlichen Rechts | S100p and Hyaluronic acid as biomarkers for metastatic breast cancer |
CN106461678A (zh) * | 2014-05-26 | 2017-02-22 | 奥林巴斯株式会社 | 胰腺癌判定方法 |
EP3173791A4 (en) * | 2014-07-23 | 2017-12-13 | Olympus Corporation | Method for determining pancreatic disease |
WO2017073226A1 (ja) * | 2015-10-26 | 2017-05-04 | オリンパス株式会社 | 膵疾患の罹患可能性評価方法 |
JP7131546B2 (ja) * | 2017-03-31 | 2022-09-06 | 東洋紡株式会社 | イムノクロマト試験片およびキットおよび測定方法 |
CN109111519A (zh) * | 2018-10-16 | 2019-01-01 | 无锡傲锐东源生物科技有限公司 | 抗s100p蛋白单克隆抗体及其用途 |
Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1297922A (zh) * | 1999-11-26 | 2001-06-06 | 上海博道基因技术有限公司 | 一种多肽-人钙结合s100蛋白21和编码该多肽的多核苷酸 |
CN1339108A (zh) * | 1999-02-26 | 2002-03-06 | Synx制药公司 | 诊断和区分中风的方法 |
CN101405300A (zh) * | 2006-03-21 | 2009-04-08 | 惠氏公司 | 用于拮抗rage的方法及组合物 |
WO2010047448A1 (en) * | 2008-10-22 | 2010-04-29 | Korea Research Institute Of Bioscience And Biotechnology | Diagnostic kit of colon cancer using colon cancer related marker,and diagnostic method thereof |
CN101903775A (zh) * | 2007-10-19 | 2010-12-01 | Erac股份有限公司 | 抗edta的s100a12c复合物(erac) |
Family Cites Families (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5651769A (en) | 1995-10-16 | 1997-07-29 | The Beth Israel Hospital Association | Method for retrieving pancreatic juice utilizing and endoscopically wire-guided catheter |
WO1998052593A1 (en) | 1997-05-19 | 1998-11-26 | Repligen Corporation | Method for assisting in differential diagnosis and treatment of autistic syndromes |
US6628388B2 (en) | 2000-11-06 | 2003-09-30 | The Regents Of The University Of California | Detection of birefringent microcrystals in bile |
DK2311934T3 (da) * | 2001-09-06 | 2013-09-08 | Rapid Micro Biosystems Inc | Hurtig påvisning af replicerende celler |
AU2004221394A1 (en) | 2003-03-17 | 2004-09-30 | The Johns Hopkins University | Aberrantly methylated genes in pancreatic cancer |
JPWO2006030596A1 (ja) | 2004-09-14 | 2008-05-08 | オリンパス株式会社 | 生体組織採取器具、内視鏡システムおよび生体組織採取方法 |
JP2006308576A (ja) * | 2005-03-31 | 2006-11-09 | Eisai Co Ltd | 膵液による膵管内乳頭粘液性腺癌および膵臓癌の検出法及び検出キット |
BRPI0708998A2 (pt) * | 2006-03-21 | 2011-06-21 | Wyeth Corp | anticorpo que se liga especificamente ao rage; anticorpo quimérico ou um fragmento de ligação rage do mesmo; anticorpo humanizado ou um fragmento de ligação rage do mesmo; anticorpo humanizado que se liga especificamente ao rage ou um fragmento de ligação rage do mesmo; anticorpo que se liga especificamente ao rage e bloqueia a ligação de um parceiro corporal rage; ácido nucléico isolado; método de tratamento de um indivìduo que tem uma doença ou transtorno relacionado com rage; método de tratamento de sepse ou choque séptico em um indivìduo humano; método de tratamento de listeriose sistêmica em um indivìduo humano; e método de inibir a ligação de um parceiro de ligação rage (rage-bp), o rage em um indivìduo mamìfero |
US8529547B2 (en) * | 2011-04-05 | 2013-09-10 | Olympus Corporation | Method of collecting specimen and method of diagnosing subject to detect upper digestive system disease |
US8586384B2 (en) * | 2011-04-05 | 2013-11-19 | Olympus Corporation | Method of collecting duodenal specimen to detect upper digestive system disease without using pancreatic or bile stimulant |
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Patent Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1339108A (zh) * | 1999-02-26 | 2002-03-06 | Synx制药公司 | 诊断和区分中风的方法 |
CN1297922A (zh) * | 1999-11-26 | 2001-06-06 | 上海博道基因技术有限公司 | 一种多肽-人钙结合s100蛋白21和编码该多肽的多核苷酸 |
CN101405300A (zh) * | 2006-03-21 | 2009-04-08 | 惠氏公司 | 用于拮抗rage的方法及组合物 |
CN101903775A (zh) * | 2007-10-19 | 2010-12-01 | Erac股份有限公司 | 抗edta的s100a12c复合物(erac) |
WO2010047448A1 (en) * | 2008-10-22 | 2010-04-29 | Korea Research Institute Of Bioscience And Biotechnology | Diagnostic kit of colon cancer using colon cancer related marker,and diagnostic method thereof |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
Optimized sample preparation of endoscopic collected pancreatic fluid for sds-page analysis;Joao A.等;《Elecrophoresis》;20100731;第31卷(第14期);讨论部分第8段,摘要 * |
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