JP5930220B2 - 非線形光学顕微鏡および非線形光学顕微鏡法 - Google Patents
非線形光学顕微鏡および非線形光学顕微鏡法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP5930220B2 JP5930220B2 JP2013505837A JP2013505837A JP5930220B2 JP 5930220 B2 JP5930220 B2 JP 5930220B2 JP 2013505837 A JP2013505837 A JP 2013505837A JP 2013505837 A JP2013505837 A JP 2013505837A JP 5930220 B2 JP5930220 B2 JP 5930220B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- excitation light
- condensing
- condensing position
- frequency
- nonlinear optical
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- 238000000399 optical microscopy Methods 0.000 title claims description 9
- 230000005284 excitation Effects 0.000 claims description 183
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 claims description 106
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 77
- 230000005484 gravity Effects 0.000 claims description 12
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims 4
- 230000008569 process Effects 0.000 description 39
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 25
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 17
- 238000001069 Raman spectroscopy Methods 0.000 description 12
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 11
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 11
- 230000008859 change Effects 0.000 description 9
- 238000005086 pumping Methods 0.000 description 5
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 4
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 230000004044 response Effects 0.000 description 4
- 230000005281 excited state Effects 0.000 description 3
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 3
- 230000005283 ground state Effects 0.000 description 3
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 3
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 3
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 2
- 230000001427 coherent effect Effects 0.000 description 2
- 108010082025 cyan fluorescent protein Proteins 0.000 description 2
- 238000002073 fluorescence micrograph Methods 0.000 description 2
- 230000007274 generation of a signal involved in cell-cell signaling Effects 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 239000010409 thin film Substances 0.000 description 2
- 238000012935 Averaging Methods 0.000 description 1
- 206010036618 Premenstrual syndrome Diseases 0.000 description 1
- RTAQQCXQSZGOHL-UHFFFAOYSA-N Titanium Chemical compound [Ti] RTAQQCXQSZGOHL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000005562 fading Methods 0.000 description 1
- 238000000799 fluorescence microscopy Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 1
- 230000008832 photodamage Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 229910052719 titanium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010936 titanium Substances 0.000 description 1
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G02—OPTICS
- G02B—OPTICAL ELEMENTS, SYSTEMS OR APPARATUS
- G02B21/00—Microscopes
- G02B21/06—Means for illuminating specimens
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/62—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
- G01N21/63—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
- G01N21/64—Fluorescence; Phosphorescence
- G01N21/645—Specially adapted constructive features of fluorimeters
- G01N21/6456—Spatial resolved fluorescence measurements; Imaging
- G01N21/6458—Fluorescence microscopy
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/62—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
- G01N21/63—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
- G01N21/65—Raman scattering
-
- G—PHYSICS
- G02—OPTICS
- G02B—OPTICAL ELEMENTS, SYSTEMS OR APPARATUS
- G02B21/00—Microscopes
- G02B21/0004—Microscopes specially adapted for specific applications
- G02B21/002—Scanning microscopes
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/62—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
- G01N21/63—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
- G01N21/65—Raman scattering
- G01N2021/653—Coherent methods [CARS]
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/62—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
- G01N21/63—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
- G01N21/65—Raman scattering
- G01N2021/653—Coherent methods [CARS]
- G01N2021/655—Stimulated Raman
Landscapes
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Optics & Photonics (AREA)
- Investigating, Analyzing Materials By Fluorescence Or Luminescence (AREA)
- Microscoopes, Condenser (AREA)
Description
本発明に係る非線形光学顕微鏡は、2波長以上の励起光によって誘起される非線形光学過程の信号光を検出する。このような非線形光学過程にはいくつかの種類があるが、ここでは和周波発生(SFG: Sum Frequency Generation)顕微鏡を例にして、本発明の原理を説明する。
と表される。2つの励起光パルスの空間的重なり面積が大きいほど和周波光強度が高く発生分布も狭くなる。2つのパルスの集光位置が時間的に揺らぐと、和周波光の時間平均光強度分布は空間的に広がり、信号光強度にも揺らぎが生じる。従来のSFG顕微鏡では、空間的な重なり面積が大きくなるように2つの励起光パルスの集光位置を固定した状態で使用し、かつ、時間的に揺らぎが生じないようにしている。これに対して、本発明では、2つのパルスの集光位置を時間的に変調し、変調により揺らいだ信号成分を検出する。このように、本発明では、パルスの集光位置を積極的に移動させて、和周波光の揺らぎ成分を測定対象とする。
と表される。励起光パルス1を1周期(+δ→0→-δ→0→+δ)動かした場合の位置r=0, -δ, +δにおける和周波光強度ISFG(0,t), ISFG(-δ,t), ISFG(+δ,t)は図3(b)に示すようになる。位置r=0において信号は2周期の変化があり、位置r=-δ, +δにおいて信号は1周期の変化がある。すなわち、励起光パルス1の集光位置を周波数fで変調した場合、位置r=0における信号は2fの周波数成分が支配的となり、位置r=-δ, +δにおける信号はfの周波数成分が支配的となる。このように、周波数特性が集光スポットの中心と外側で異なる。そのため、周波数2fの信号を抽出することにより、集光スポットサイズよりも空間的に狭い領域の信号を抽出することが可能となる。また、集光位置変調によって生じる信号の変化は完全な正弦波ではないので、r=0では高調波である周波数4f,6f,8f,...となる成分も生じる。高調波成分になればなるほど空間的に狭い領域からの信号となるので、高調波成分を抽出すれば分解能をより高めることができる。
と表される。ここで、δ1≠δ3またはδ2≠δ4、2f < f0とする。また、この条件を満たせばδn=0(n=1,2,3,4)であっても良い。このような変調では、励起光パルスの集光点重心は螺旋状に移動する。このような変調方式では、2jf(jは整数)の周波数成分を検出する。こうすることで、光軸に垂直な面内および光軸方向、すなわち全方向について空間分解能が向上する。
と表される。ここで、δ1≠δ2とする。また、この条件を満たせばδn=0(n=1,2)であっても良い。このような変調では、励起光パルスの集光点重心は光軸方向の直線上を移動する。このような変調方式では、2jf(jは整数)の周波数成分を検出する。こうすることで、光軸方向の空間分解能が向上する。
以下、本手法が適用可能な非線形光学過程の例を説明する。
図11(a)に示すように、分子は、周波数ω1, ω2の2個の光子を同時に吸収し、基底状態から励起状態へ遷移する。その後、励起状態から蛍光を発し,基底状態へ遷移する。このとき発せられる蛍光が非縮退2光子励起蛍光である。2光子励起蛍光強度は励起光強度の2乗に比例するため,励起光をきつく集光することにより光軸方向の分解能が得られる。そのため,共焦点ピンホールなしで3次元イメージングが可能である。光褪色や光損傷も集光点近傍に抑制される。1光子励起蛍光顕微鏡では励起光として紫外光や可視光の励起光を用いるのに対して2光子励起蛍光顕微鏡では近赤外光を用いる。近赤外光は生体試料中における散乱や1光子吸収が小さいため、励起光が試料の深部まで到達でき、深部イメージングが可能である。また、励起光と蛍光の波長が大きく異なることから励起光と蛍光の分離も容易である。
2光子励起のSFGとは,図11(b)に示すように周波数ω1, ω2の2個の光子が和の周波数ω3=ω1+ω2をもつ1個の光子に変換される2次の非線形光学過程であり、反転対称性のない分子・媒質でのみ生じる現象である。そのため、SFG顕微鏡では生体組織中における配向構造や組織構造を可視化することが可能である。
DFGとは,図11(c)に示すように周波数ω1, ω2の2個の光子が差の周波数ω3=ω1-ω2をもつ1個の光子に変換される2次の非線形光学過程であり、反転対称性のない分子・媒質でのみ生じる現象である。周波数差をラマン振動数に一致させることにより、試料の化学成分や熱力学的状態に由来する振動コントラストが得られる。
3光子励起のSFGとは図11(d)に示すように周波数ω1, ω2, ω3の3個の光子が和の周波数ω4=ω1+ω2+ω3をもつ1個の光子に変換される3次の非線形光学過程であり、全ての分子・媒質で生じる現象である。ただし、励起光と信号光の波長が大きく異なり屈折率が大きく異なるために、位相整合条件を満たすことが困難である。そのため、一般的に屈折率が一様な分布の媒質中ではTHGは発生せず、屈折率分布が不均一な媒質中(屈折率の異なる媒質の境界)で発生する。入射光である3個の光子の周波数が同じ周波数の場合をTHGと呼ぶ。
周波数ω1, ω2, ω3の3つの入射場と媒質の相互作用により、新しい周波数ω4=ω1-ω2+ω3の光が発生する3次の非線形光学過程をFWM過程と呼ぶ。相互作用を行う場の順番により、FWM過程には図11(e)(f)に示す2つの過程がある。非共鳴FWM顕微鏡では、屈折率の分布を測定することが可能である。
図12(a)のようにFWM過程において2つの励起光の周波数差ω1-ω2がラマン振動数WRに近づくとFWM過程が増強される。振動共鳴により増強されたFWM過程をCARS過程と呼ぶ。CARS強度は周波数ω1のポンプ光と周波数ω2のストークス光の周波数差ω1-ω2がラマン振動数WRに近づくほど強くなる。そのため、CARS顕微鏡では、試料の化学成分や熱力学的状態に由来する振動コントラストが得られる。
図12(b)のようにFWM過程において2つの励起光の周波数和ω1+ω3が電子共鳴振動数Weに近づくとFWM過程が増強される。2光子電子共鳴により増強されたFWM過程をSPE過程と呼ぶ。SPE強度は周波数和ω1+ω3が電子共鳴振動数Weに近づくほど強くなる。そのため、SPE顕微鏡では,試料の吸収に基づくコントラストが得られる。
TPAは超短光パルスの強度自身に誘起された吸収係数の変化に起因する。TPAは、2個の光子が同時に吸収され、基底状態から励起状態へ遷移する。TPA顕微鏡では吸収による励起光強度の微小な変化量を測定するために、図12(c)に示すように、第1光子と第2光子の周波数が異なる2波長励起を行う。また、一方の周波数(ω2)の光強度のみを周波数fで強度変調し、他方(ω1)は変調せずに用いる。TPAが生じると、励起光強度は周波数ω2の光強度が減少した量だけ周波数ω1の光強度が減少する。従来は、ω2の励起光を強度変調して、ω1の励起光に生じる周波数fの信号を測定するが、上述したように本手法を適用する場合は強度変調を行う必要はない。TPA顕微鏡では吸収コントラストが得られる。
ラマン活性媒質に周波数ω1のポンプ光と周波数ω2のストークス光を入射したとき、ラマン散乱によりポンプ光がストークス光に変換され、ストークス光が増幅される過程がSRS過程である(図12(d))。従来のSRS顕微鏡では、SRSによるストークス光強度とポンプ光強度の微小な変化量を測定するために、TPA顕微鏡と同様に一方の励起光に強度変調を行う。ただし、上述したように本手法を適用する場合は強度変調を行う必要はない。SRS顕微鏡では振動コントラストが得られる。
図5に数値計算により周波数f=10kHzで励起光1の集光点を100nm(δ=100nm)変調したときの信号のフーリエ変換を示す。図5のグラフの横軸は周波数(kHz)を表し、縦軸は任意単位の信号光強度をログスケールで表している。
により計算した。ここで、f0は螺旋回転の角周波数、fは螺旋半径の変調周波数であり、f0>>fとする。こうすることで、xy面内における対称性が確保される。
ここで、ls:散乱長、z:光軸方向の位置、z0:試料表面の位置である。
図1(a)に、本実施形態にかかる非線形光学顕微鏡のシステム構成の概念図を示す。
図2に、実験で用いた非線形光学顕微鏡の具体的な構成を示す。ここでは、光源として波長775nmのチタンサファイアレーザー発振器11を用いてレーザーパルスを発振する。薄膜偏光板(ビームスプリッター)12でこのレーザーパルスを分割し、一方をそのまま励起光パルス2として用い、他方をパラメトリック発振器(波長変換手段)13により波長1000nmに変換して励起光パルス1として用いる。
本発明の手法によって光軸方向の分解能が向上していることを確認するための実験を行った。本実験例では、ガルバノスキャナーを用いて、励起光パルス1の集光位置が励起光パルス2の集光位置に対して、光軸に垂直な面内で直線上を動くように集光位置を変調させた。この際の変調周波数は1kHzとした。すなわち、励起光パルス1の位置変調方向をx軸としたときに、励起光パルス1の集光位置は次のように表される。なお、このように2つの励起光パルスの集光位置を光軸に垂直な面内で相対的に直線移動させる変調方法を、以下、X変調と称する。
次に、本発明の手法によって光軸に垂直な面内での分解能が向上していることを確認するための実験を行った。図9は、直径40nmの蛍光ビーズの2光子蛍光像である。
なお、観察信号として抽出する信号は周波数2fの成分である。また、螺旋回転の各周波数f0はf0>2fとしている。このように集光位置を螺旋状に移動させることにより、光軸に垂直な面内における分解能が、X方向およびY方向の両方について向上していることが図9(c)から確認できる。
次に、2光子励起蛍光以外の他の多光子励起過程においても分解能が向上することを確認するために、ガラスと空気の境界における4光波混合(FWM: Four-wave Mixing)信号を測定した。FWMは周波数ω1,ω2,ω3の3つの入射場と媒質の相互作用により、ω4=ω1-ω2+ω3の光が発生する3次の非線形光学過程である。本実験では、3つの励起光パルスを試料に照射し、そのうちの1つの励起光パルスを光軸方向に垂直な面内で変調周波数fで直線移動させた。
以上のように、非線形光学過程による信号光を測定する非線形光学顕微鏡において励起光の集光位置を変調させ、信号光の変調周波数の偶数倍成分を抽出することで、空間分解能を光軸に垂直な面内方向および光軸方向の両方について向上させることができる。また、集光点以外から発生する信号光を抑制できるので、従来よりも深い部分のイメージングできるようになる。
12 ビームスプリッター(薄膜偏光板)
13 光パラメトリック発振器
14 ガルバノスキャナー(ポインティング変調ユニット)
15 ダイクロイックミラー
16 時間遅延ステージ
17 ダイクロイックミラー
18 対物レンズ
19 試料
20 励起光カットフィルター
21 光電子増倍管
22 対物レンズ
23 励起光カットフィルター
24 光電子増倍管
Claims (13)
- 第1の励起光を試料上に集光する第1の光学系と、
第2の励起光を試料上に集光する第2の光学系と、
前記第1の励起光と前記第2の励起光の試料上での集光位置を、所定の変調周波数で相対的に位置変調させる集光位置変調手段と、
試料から生じる信号光から、前記変調周波数に応じた周波数成分を抽出する信号抽出手段と、
を備える非線形光学顕微鏡。 - 前記信号抽出手段は、前記信号光から前記変調周波数の偶数倍の周波数成分を抽出する、
請求項1に記載の非線形光学顕微鏡。 - 前記集光位置変調手段は、第1の励起光の集光位置と第2の励起光の集光位置との重心を、光軸に垂直な面内で螺旋状に移動させる、
請求項1または2に記載の非線形光学顕微鏡。 - 前記集光位置変調手段は、第1の励起光の集光位置と第2の励起光の集光位置との重心を、光軸に垂直な面内で直線状に移動させる、
請求項1または2に記載の非線形光学顕微鏡。 - 前記集光位置変調手段は、第1の励起光の集光位置と第2の励起光の集光位置との重心を、光軸方向に直線状に移動させる、
請求項1〜4のいずれかに記載の非線形光学顕微鏡。 - 前記集光位置変調手段は、第1の励起光または第2の励起光の集光位置を光軸に垂直な面内で移動させるポインティング変調ユニットを含む、
請求項3または4に記載の非線形光学顕微鏡。 - 前記集光位置変調手段は、第1の励起光または第2の励起光の集光位置を光軸方向に移動させる波面変調ユニットを含む、
請求項5記載の非線形光学顕微鏡。 - 第1の励起光および第2の励起光はパルスレーザ光であり、
第1の励起光と第2の励起光の集光位置を時間的に重ねるための時間遅延光学系を更に備える、
請求項1〜7のいずれかに記載の非線形光学顕微鏡。 - 所定の変調周波数で第1の励起光と第2の励起光の集光位置を相対的に位置変調させつつ、試料上に第1の励起光と第2の励起光を集光する集光工程と、
試料から生じる信号光から、前記変調周波数に応じた周波数成分を抽出する抽出工程と、
を含む、非線形光学顕微鏡法。 - 前記抽出工程では、前記信号光から前記変調周波数の偶数倍の周波数成分を抽出する、
請求項9に記載の非線形光学顕微鏡法。 - 前記集光工程では、第1の励起光の集光位置と第2の励起光の集光位置との重心を、光軸に垂直な面内で螺旋状に移動させる、
請求項9または10に記載の非線形光学顕微鏡法。 - 前記集光工程では、第1の励起光の集光位置と第2の励起光の集光位置との重心を、光軸に垂直な面内で直線状に移動させる、
請求項9または10に記載の非線形光学顕微鏡法。 - 前記集光工程では、第1の励起光の集光位置と第2の励起光の集光位置との重心を、光軸方向に直線状に移動させる、
請求項9〜12のいずれかに記載の非線形光学顕微鏡法。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2011061333 | 2011-03-18 | ||
JP2011061333 | 2011-03-18 | ||
PCT/JP2012/052377 WO2012127907A1 (ja) | 2011-03-18 | 2012-02-02 | 非線形光学顕微鏡および非線形光学顕微鏡法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPWO2012127907A1 JPWO2012127907A1 (ja) | 2014-07-24 |
JP5930220B2 true JP5930220B2 (ja) | 2016-06-08 |
Family
ID=46879075
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2013505837A Expired - Fee Related JP5930220B2 (ja) | 2011-03-18 | 2012-02-02 | 非線形光学顕微鏡および非線形光学顕微鏡法 |
Country Status (3)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP5930220B2 (ja) |
DE (1) | DE112012001802T5 (ja) |
WO (1) | WO2012127907A1 (ja) |
Families Citing this family (14)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
ES2845600T3 (es) * | 2013-01-09 | 2021-07-27 | Univ California | Aparato y métodos para la obtención de imágenes de fluorescencia utilizando excitación multiplexada por radiofrecuencia |
JP6613552B2 (ja) * | 2013-09-09 | 2019-12-04 | 株式会社ニコン | 超解像観察装置及び超解像観察方法 |
WO2015143041A1 (en) | 2014-03-18 | 2015-09-24 | The Regents Of The University Of California | Parallel flow cytometer using radiofrequency mulitplexing |
CN108474728B (zh) | 2015-10-13 | 2022-04-26 | 贝克顿·迪金森公司 | 多模态荧光成像流式细胞术系统 |
JPWO2017158697A1 (ja) * | 2016-03-14 | 2019-01-17 | オリンパス株式会社 | 画像取得方法および画像取得装置 |
EP3430376A1 (en) | 2016-03-17 | 2019-01-23 | BD Biosciences | Cell sorting using a high throughput fluorescence flow cytometer |
EP3455608A1 (en) | 2016-05-12 | 2019-03-20 | BD Biosciences | Fluorescence imaging flow cytometry with enhanced image resolution |
DE102016111747B4 (de) | 2016-06-27 | 2020-10-01 | Forschungsverbund Berlin E.V. | Verfahren und Vorrichtung zur Raman-Spektroskopie |
ES2951466T3 (es) | 2016-09-13 | 2023-10-23 | Becton Dickinson Co | Citómetro de flujo con ecualización óptica |
JP6923161B2 (ja) * | 2017-12-26 | 2021-08-18 | オリンパス株式会社 | 試料分析装置 |
CN114303050A (zh) | 2019-07-10 | 2022-04-08 | 贝克顿·迪金森公司 | 用于调整细胞分选分类的可重构集成电路 |
US11513058B2 (en) | 2020-05-19 | 2022-11-29 | Becton, Dickinson And Company | Methods for modulating an intensity profile of a laser beam and systems for same |
WO2021262285A1 (en) | 2020-06-26 | 2021-12-30 | Becton, Dickinson And Company | Dual excitation beams for irradiating a sample in a flow stream and methods for using same |
CN113176583B (zh) * | 2021-04-02 | 2023-02-07 | 华东师范大学重庆研究院 | 一种超灵敏红外高分辨三维成像技术 |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2005091895A (ja) * | 2003-09-18 | 2005-04-07 | Institute Of Physical & Chemical Research | 走査型共焦点顕微鏡装置 |
JP2010532878A (ja) * | 2007-07-06 | 2010-10-14 | ナショナル ユニヴァーシティー オブ シンガポール | 蛍光焦点変調顕微鏡システムおよびその方法 |
JP2010286799A (ja) * | 2008-11-21 | 2010-12-24 | Nikon Corp | 走査型顕微鏡 |
-
2012
- 2012-02-02 DE DE112012001802.8T patent/DE112012001802T5/de not_active Ceased
- 2012-02-02 JP JP2013505837A patent/JP5930220B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2012-02-02 WO PCT/JP2012/052377 patent/WO2012127907A1/ja active Application Filing
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2005091895A (ja) * | 2003-09-18 | 2005-04-07 | Institute Of Physical & Chemical Research | 走査型共焦点顕微鏡装置 |
JP2010532878A (ja) * | 2007-07-06 | 2010-10-14 | ナショナル ユニヴァーシティー オブ シンガポール | 蛍光焦点変調顕微鏡システムおよびその方法 |
JP2010286799A (ja) * | 2008-11-21 | 2010-12-24 | Nikon Corp | 走査型顕微鏡 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JPWO2012127907A1 (ja) | 2014-07-24 |
DE112012001802T5 (de) | 2014-03-13 |
WO2012127907A1 (ja) | 2012-09-27 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP5930220B2 (ja) | 非線形光学顕微鏡および非線形光学顕微鏡法 | |
JP5311595B2 (ja) | 顕微鏡及び観察方法 | |
Cheng et al. | Coherent anti-Stokes Raman scattering microscopy: instrumentation, theory, and applications | |
US6809814B2 (en) | System and method for epi-detected coherent anti-stokes raman scattering microscopy | |
JP5736325B2 (ja) | 光学装置 | |
Isobe et al. | Enhancement of lateral resolution and optical sectioning capability of two-photon fluorescence microscopy by combining temporal-focusing with structured illumination | |
WO2014125729A1 (ja) | 測定装置及び測定方法 | |
JP6283104B2 (ja) | 光学分析装置 | |
JP2010092002A (ja) | 光学顕微鏡 | |
US8804117B2 (en) | Method for detecting a resonant nonlinear optical signal and device for implementing said method | |
US9625389B2 (en) | Light measuring device and light measuring method | |
JP6357245B2 (ja) | 光学分析装置及び生体分子解析装置 | |
Filippidis et al. | Nonlinear imaging techniques as non-destructive, high-resolution diagnostic tools for cultural heritage studies | |
JP2016515703A (ja) | 誘導ラマン検出のための装置および方法 | |
Doronina-Amitonova et al. | Nonlinear-optical brain anatomy by harmonic-generation and coherent Raman microscopy on a compact femtosecond laser platform | |
JP5453407B2 (ja) | 組織化された材料のナノ構造を探索するための焦点容量の変調を伴うコヒーレント非線形顕微鏡法システム及び方法 | |
JP6765115B2 (ja) | 非線形光学顕微鏡、空間位相変調器および非線形光学顕微鏡法 | |
JP5536908B2 (ja) | 共鳴非線形光信号を検出するための方法およびその方法を実装するための装置 | |
JP2011145487A (ja) | 多光子励起顕微鏡 | |
JP2013517490A5 (ja) | ||
Akimov et al. | Three-dimensional microimaging of inhomogeneities in transparent media using third-harmonic generation and four-wave mixing | |
JP6923161B2 (ja) | 試料分析装置 | |
Lee et al. | Measurement of scattering nonlinearities from a single plasmonic nanoparticle | |
Dashtabi et al. | Nonlinear optical microscopy improvement by focal-point axial modulation | |
D'Arco et al. | Implementation of stimulated Raman scattering microscopy for single cell analysis |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20150107 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20150107 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20160112 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20160412 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20160419 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 5930220 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |