JP5818018B2 - 核酸増幅を用いる環状プライマー及びその応用 - Google Patents
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Description
本発明の環状プライマーには二種類のプライマーの設計を有して、それぞれ、異なるニーズに対して、一種類が単な増幅環状プライマーに設計され、普通の遺伝子増幅に応用され、プライマー二量体が排除されて、もう一種類が二重増幅環状プライマーに設計され、まれな突然変異を高特異的に検出するのに応用される。
ターゲットシーケンスと組み合わせる結合区のTm値において、プライマー中にターゲットシーケンスと特異的に結合される区域のTm値が普通プライマーのTm値を保持して、ターゲットシーケンスのGC含有量に基づいて決められ、一般的にTm値が約55℃から65℃までに設定される。増幅時の焼戻し温度がプライマーのTm値と一致するか、あるいはプライマーのTm値よりも3℃から5℃までに低くすることもできる。
簡単な設計において、環状プライマーを設ける際にたいしてあまり要求せず、プライマーの3’端シーケンスがターゲットシーケンス増幅の一部分に設けられ、5’端に位置する幾つかの塩基がプライマーの3’端シーケンスと相補され、ラベルシーケンスがプライマーの内部に追加されるか追加されないかを決定でき、突然変異識別塩基が3’末端の第一個の塩基にもプライマー内部に位置され、ただ、プライマー二本鎖結合区のTm値が相応のPCR反応システム中に使う焼戻し温度と一致保持される、または抜きんでられるのみである。PCRプライマーを設計した人には誰でも設けられる。
遺伝子GGT>TGTに突然変異される方法は以下のステップを含む。
12 突然変異識別区
13 ラベルシーケンス
14 相補シーケンス
15 ターゲットシーケンス識別区
16 相補シーケンス
21 ターゲットシーケンス
22 ターゲットシーケンス
23 シーケンス
24 シーケンス
25 まれな突然変異シーケンス
26 まれな突然変異を持つシーケンス
27 突然変異を持つシーケンス
31 ターゲットシーケンス
32 識別区突然変異識別区
33 相補識別区
34 ターゲットシーケンス識別区
35 相補識別区
41 突然変異を持つターゲットシーケンス
42 ターゲットシーケンス
43 産物
44 産物
45 目標産物
Claims (4)
- システムに三本のプライマーを有し、それぞれ、上流プライマー(F)と下流プライマー(R)と通用プライマー(T)とに分かれて、そのなかに、上流プライマー(F)と下流プライマー(R)に少なくとも一本の環状プライマーを有し、当環状プライマーの3’末端に第一、第二ターゲットシーケンス(21、22)と相補するターゲットシーケンス識別区が設けられて、5’末端にターゲットシーケンス識別区と相補する3個から20個までの塩基が設けられて、適当な条件下で、上流プライマー(F)と下流プライマー(R)の5’末端と3’末端が互いに二本の鎖に結合され、プライマーが一個の環状構造に構築されて、上流プライマー(F)と下流プライマー(R)の内部にそれぞれ同一の通用ラベルシーケンス(13)が各一個設けられて、適当な条件下で、上流プライマー(F)と下流プライマー(R)の5’末端と3’末端が互いに二本の鎖に結合され、プライマーが一個の環状構造に構築されて、プライマーが第一、第二ターゲットシーケンス(21、22)と識別されて且つ交雑されると、二本の鎖が開けられ、環状構造を消し、プライマーが自身の二本の鎖から第一、第二ターゲットシーケンス(21、22)と結合する二本の鎖までに変わってDNAの延伸能力を得て、通用プライマー(T)の通用ラベルシーケンス(13)が上流プライマー(F)と下流プライマー(R)との通用ラベルシーケンス(13)に完全に合わされることによって形成され、前記環状プライマーにはさらに一個の突然変異識別区を有することによって形成されている環状プライマーで増幅させる方法であって、
増幅に以下のステップ:
予め変性に設けられる第一のステップ;変性とプライマー焼き戻しとプライマー延伸循環の第一部分のPCR増幅に設けられる第二のステップ;変性とプライマー焼き戻しとプライマー延伸循環の第二部分のPCR増幅に設けられる第三のステップ;を有し、
第二ステップの増幅の焼き戻し温度が60℃から66℃までに設定され、第三ステップの増幅の焼き戻し温度が54℃から58℃までに設定されることによって形成され、
前記第二ステップにおいて、上流プライマー(F)が第一ターゲットシーケンス(21)と、下流プライマー(R)が第二ターゲットシーケンス(22)と高特異的に整合され、延伸してから第一のシーケンス(23)および第二のシーケンス(24)を得て、下流プライマー(R)が第一のシーケンス(23)と整合され、延伸してから第三のシーケンス(25)を得て、
前記第三ステップにおいて、通用プライマー(T)が第三のシーケンス(25)と結合されて、延伸してから第四のシーケンス(26)を得て、第三のシーケンス(25)および第四のシーケンス(26)が同時に通用プライマー(T)に整合されて、突然変異を持つ第五のシーケンス(27)が得られることを特徴とする、
環状プライマーで増幅させる方法。 - 前記突然変異識別区がターゲットシーケンス識別区の3’末端或いはターゲットシーケンス識別区の内部に位置されることによって形成されていることを特徴とする請求項1に記載の環状プライマーで増幅させる方法。
- 環状プライマーの総長さが35bpから80bpまでに設けられて、ターゲットシーケンス識別区が16bpから40bpまでに設けられて、通用ラベルシーケンス(13)が16bpから30bpまでに設けられることによって形成されていることを特徴とする請求項1に記載の環状プライマーで増幅させる方法。
- 通用ラベルシーケンス(13)の追加量が上流プライマー(F)と下流プライマー(R)との総追加量の10倍以上に設けられることによって形成されていることを特徴とする請求項1に記載の環状プライマーで増幅させる方法。
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US20060121487A1 (en) * | 2002-12-27 | 2006-06-08 | David Alland | Method for single nucleotide polymorphism detection |
US20050059049A1 (en) * | 2003-07-07 | 2005-03-17 | One Cell Systems, Inc. | Hairpin-labeled probes and methods of use |
US20070092880A1 (en) * | 2003-07-16 | 2007-04-26 | Crothers Donald M | Invasive cleavage reaction with electrochemical readout |
US7575863B2 (en) * | 2004-05-28 | 2009-08-18 | Applied Biosystems, Llc | Methods, compositions, and kits comprising linker probes for quantifying polynucleotides |
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US7517977B2 (en) * | 2004-10-18 | 2009-04-14 | Brandeis University | Reagents and methods for improving reproducibility and reducing mispriming in PCR amplification |
CA2659543C (en) * | 2006-06-06 | 2015-12-29 | Gen-Probe Incorporated | Tagged oligonucleotides and their use in nucleic acid amplification methods |
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