JP5735493B2 - アンブロキサンの生物触媒的生産 - Google Patents
アンブロキサンの生物触媒的生産 Download PDFInfo
- Publication number
- JP5735493B2 JP5735493B2 JP2012513609A JP2012513609A JP5735493B2 JP 5735493 B2 JP5735493 B2 JP 5735493B2 JP 2012513609 A JP2012513609 A JP 2012513609A JP 2012513609 A JP2012513609 A JP 2012513609A JP 5735493 B2 JP5735493 B2 JP 5735493B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- homofarnesol
- ambroxan
- nucleic acid
- polypeptide
- acid molecule
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 239000001147 (3aR,5aS,9aS,9bR)-3a,6,6,9a-tetramethyl-2,4,5,5a,7,8,9,9b-octahydro-1H-benzo[e][1]benzofuran Substances 0.000 title claims description 104
- YPZUZOLGGMJZJO-LQKXBSAESA-N ambroxan Chemical compound CC([C@@H]1CC2)(C)CCC[C@]1(C)[C@@H]1[C@]2(C)OCC1 YPZUZOLGGMJZJO-LQKXBSAESA-N 0.000 title claims description 43
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims description 11
- 230000002210 biocatalytic effect Effects 0.000 title claims description 9
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 115
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 91
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 91
- 101710095468 Cyclase Proteins 0.000 claims description 84
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 77
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 77
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 77
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 60
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 50
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 47
- KOICZDDAVPYKKX-UHFFFAOYSA-N (3E,7Z)-4,8,12-trimethyltrideca-3,7,11-trien-1-ol Chemical compound CC(=C/CCO)CCC=C(/CCC=C(C)C)C KOICZDDAVPYKKX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 42
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 33
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 33
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 24
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 21
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 claims description 18
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 claims description 13
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims description 12
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 11
- YPZUZOLGGMJZJO-XRGAULLZSA-N (3as,5as,9as,9br)-3a,6,6,9a-tetramethyl-2,4,5,5a,7,8,9,9b-octahydro-1h-benzo[e][1]benzofuran Chemical class CC([C@@H]1CC2)(C)CCC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@]2(C)OCC1 YPZUZOLGGMJZJO-XRGAULLZSA-N 0.000 claims description 10
- 241000588902 Zymomonas mobilis Species 0.000 claims description 9
- 239000007858 starting material Substances 0.000 claims description 8
- WTEVQBCEXWBHNA-UHFFFAOYSA-N Citral Natural products CC(C)=CCCC(C)=CC=O WTEVQBCEXWBHNA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 229940043350 citral Drugs 0.000 claims description 6
- WTEVQBCEXWBHNA-JXMROGBWSA-N geranial Chemical compound CC(C)=CCC\C(C)=C\C=O WTEVQBCEXWBHNA-JXMROGBWSA-N 0.000 claims description 6
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 5
- 241001453380 Burkholderia Species 0.000 claims description 5
- 241000187747 Streptomyces Species 0.000 claims description 5
- KOICZDDAVPYKKX-NCZFFCEISA-N (3e,7e)-4,8,12-trimethyltrideca-3,7,11-trien-1-ol Chemical class CC(C)=CCC\C(C)=C\CC\C(C)=C\CCO KOICZDDAVPYKKX-NCZFFCEISA-N 0.000 claims description 4
- 241000193738 Bacillus anthracis Species 0.000 claims description 4
- 229940065181 bacillus anthracis Drugs 0.000 claims description 4
- 230000000284 resting effect Effects 0.000 claims description 4
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 claims description 3
- 241000589345 Methylococcus Species 0.000 claims description 3
- 241000187398 Streptomyces lividans Species 0.000 claims description 3
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 claims description 3
- 241000193403 Clostridium Species 0.000 claims description 2
- 241000186216 Corynebacterium Species 0.000 claims description 2
- 241000588722 Escherichia Species 0.000 claims description 2
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 claims description 2
- 241000194036 Lactococcus Species 0.000 claims description 2
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 claims description 2
- 241000589776 Pseudomonas putida Species 0.000 claims description 2
- 241000232299 Ralstonia Species 0.000 claims description 2
- 241000191025 Rhodobacter Species 0.000 claims description 2
- 241000190932 Rhodopseudomonas Species 0.000 claims description 2
- 241000588901 Zymomonas Species 0.000 claims description 2
- 229940039696 lactobacillus Drugs 0.000 claims description 2
- 239000002994 raw material Substances 0.000 claims description 2
- CRDAMVZIKSXKFV-FBXUGWQNSA-N (2-cis,6-cis)-farnesol Chemical compound CC(C)=CCC\C(C)=C/CC\C(C)=C/CO CRDAMVZIKSXKFV-FBXUGWQNSA-N 0.000 claims 1
- 239000000260 (2E,6E)-3,7,11-trimethyldodeca-2,6,10-trien-1-ol Substances 0.000 claims 1
- 241000320892 Clerodendrum phlomidis Species 0.000 claims 1
- 241000108056 Monas Species 0.000 claims 1
- 229940043259 farnesol Drugs 0.000 claims 1
- 229930002886 farnesol Natural products 0.000 claims 1
- CRDAMVZIKSXKFV-UHFFFAOYSA-N trans-Farnesol Natural products CC(C)=CCCC(C)=CCCC(C)=CCO CRDAMVZIKSXKFV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 51
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 50
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 26
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 25
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 21
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 17
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 16
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 14
- 239000000047 product Substances 0.000 description 12
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 11
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 11
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 10
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 9
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 8
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 8
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 8
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 8
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 7
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 7
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 7
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 7
- XVULBTBTFGYVRC-HHUCQEJWSA-N sclareol Chemical compound CC1(C)CCC[C@]2(C)[C@@H](CC[C@](O)(C)C=C)[C@](C)(O)CC[C@H]21 XVULBTBTFGYVRC-HHUCQEJWSA-N 0.000 description 7
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N Formamide Chemical compound NC=O ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 108091000048 Squalene hopene cyclase Proteins 0.000 description 6
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 6
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 6
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 6
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 6
- -1 trimethylcyclohex-1-enyl Chemical group 0.000 description 6
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 5
- 239000012431 aqueous reaction media Substances 0.000 description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 5
- 239000012876 carrier material Substances 0.000 description 5
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 5
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 5
- 230000006870 function Effects 0.000 description 5
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 5
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 5
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 5
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 5
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- BZLVMXJERCGZMT-UHFFFAOYSA-N Methyl tert-butyl ether Chemical compound COC(C)(C)C BZLVMXJERCGZMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- IMNFDUFMRHMDMM-UHFFFAOYSA-N N-Heptane Chemical compound CCCCCCC IMNFDUFMRHMDMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- IMKJGXCIJJXALX-SHUKQUCYSA-N Norambreinolide Chemical compound CC([C@@H]1CC2)(C)CCC[C@]1(C)[C@@H]1[C@]2(C)OC(=O)C1 IMKJGXCIJJXALX-SHUKQUCYSA-N 0.000 description 4
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000011942 biocatalyst Substances 0.000 description 4
- 238000000451 chemical ionisation Methods 0.000 description 4
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 4
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 4
- YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N phenylmethanesulfonyl fluoride Chemical compound FS(=O)(=O)CC1=CC=CC=C1 YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 4
- 239000012429 reaction media Substances 0.000 description 4
- 238000007363 ring formation reaction Methods 0.000 description 4
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 4
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N Benzene Chemical compound C1=CC=CC=C1 UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- XVULBTBTFGYVRC-UHFFFAOYSA-N Episclareol Natural products CC1(C)CCCC2(C)C(CCC(O)(C)C=C)C(C)(O)CCC21 XVULBTBTFGYVRC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- LAEIZWJAQRGPDA-UHFFFAOYSA-N Manoyloxid Natural products CC1(C)CCCC2(C)C3CC=C(C)OC3(C)CCC21 LAEIZWJAQRGPDA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 3
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 3
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 3
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 3
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 3
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 3
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 3
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 3
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 3
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 3
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 3
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 3
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 3
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 3
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 3
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 3
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 3
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 3
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 3
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 3
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 3
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 3
- AWDRATDZQPNJFN-VAYUFCLWSA-N taurodeoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(=O)NCCS(O)(=O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 AWDRATDZQPNJFN-VAYUFCLWSA-N 0.000 description 3
- QPFMBZIOSGYJDE-UHFFFAOYSA-N 1,1,2,2-tetrachloroethane Chemical compound ClC(Cl)C(Cl)Cl QPFMBZIOSGYJDE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WIIZWVCIJKGZOK-IUCAKERBSA-N 2,2-dichloro-n-[(1s,2s)-1,3-dihydroxy-1-(4-nitrophenyl)propan-2-yl]acetamide Chemical compound ClC(Cl)C(=O)N[C@@H](CO)[C@@H](O)C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 WIIZWVCIJKGZOK-IUCAKERBSA-N 0.000 description 2
- SXGZJKUKBWWHRA-UHFFFAOYSA-N 2-(N-morpholiniumyl)ethanesulfonate Chemical compound [O-]S(=O)(=O)CC[NH+]1CCOCC1 SXGZJKUKBWWHRA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZWEHNKRNPOVVGH-UHFFFAOYSA-N 2-Butanone Chemical compound CCC(C)=O ZWEHNKRNPOVVGH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZRLNBWWGLOPJIC-PYQRSULMSA-N A'-neogammacerane Chemical compound C([C@]1(C)[C@H]2CC[C@H]34)CCC(C)(C)[C@@H]1CC[C@@]2(C)[C@]4(C)CC[C@@H]1[C@]3(C)CC[C@@H]1C(C)C ZRLNBWWGLOPJIC-PYQRSULMSA-N 0.000 description 2
- 241001147780 Alicyclobacillus Species 0.000 description 2
- 241000640374 Alicyclobacillus acidocaldarius Species 0.000 description 2
- 108010006654 Bleomycin Proteins 0.000 description 2
- 241000589174 Bradyrhizobium japonicum Species 0.000 description 2
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RGSFGYAAUTVSQA-UHFFFAOYSA-N Cyclopentane Chemical compound C1CCCC1 RGSFGYAAUTVSQA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N D-mannomethylose Natural products CC1OC(O)C(O)C(O)C1O SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 2
- ZAFNJMIOTHYJRJ-UHFFFAOYSA-N Diisopropyl ether Chemical compound CC(C)OC(C)C ZAFNJMIOTHYJRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 2
- YQYJSBFKSSDGFO-UHFFFAOYSA-N Epihygromycin Natural products OC1C(O)C(C(=O)C)OC1OC(C(=C1)O)=CC=C1C=C(C)C(=O)NC1C(O)C(O)C2OCOC2C1O YQYJSBFKSSDGFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N Furan Chemical group C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010093096 Immobilized Enzymes Proteins 0.000 description 2
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SHZGCJCMOBCMKK-JFNONXLTSA-N L-rhamnopyranose Chemical compound C[C@@H]1OC(O)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O SHZGCJCMOBCMKK-JFNONXLTSA-N 0.000 description 2
- PNNNRSAQSRJVSB-UHFFFAOYSA-N L-rhamnose Natural products CC(O)C(O)C(O)C(O)C=O PNNNRSAQSRJVSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000016943 Muramidase Human genes 0.000 description 2
- 108010014251 Muramidase Proteins 0.000 description 2
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 description 2
- OFBQJSOFQDEBGM-UHFFFAOYSA-N Pentane Chemical compound CCCCC OFBQJSOFQDEBGM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 2
- 108010019653 Pwo polymerase Proteins 0.000 description 2
- 241000190950 Rhodopseudomonas palustris Species 0.000 description 2
- 108010034546 Serratia marcescens nuclease Proteins 0.000 description 2
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 241000187432 Streptomyces coelicolor Species 0.000 description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 2
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 2
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 2
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 2
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 description 2
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 2
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 2
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 2
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 2
- 238000010923 batch production Methods 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 239000003139 biocide Substances 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 229960001561 bleomycin Drugs 0.000 description 2
- OYVAGSVQBOHSSS-UAPAGMARSA-O bleomycin A2 Chemical compound N([C@H](C(=O)N[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)NCCC=1SC=C(N=1)C=1SC=C(N=1)C(=O)NCCC[S+](C)C)[C@@H](O[C@H]1[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O1)O[C@@H]1[C@H]([C@@H](OC(N)=O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)C=1N=CNC=1)C(=O)C1=NC([C@H](CC(N)=O)NC[C@H](N)C(N)=O)=NC(N)=C1C OYVAGSVQBOHSSS-UAPAGMARSA-O 0.000 description 2
- DKPFZGUDAPQIHT-UHFFFAOYSA-N butyl acetate Chemical compound CCCCOC(C)=O DKPFZGUDAPQIHT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000002843 carboxylic acid group Chemical group 0.000 description 2
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 2
- MVPPADPHJFYWMZ-UHFFFAOYSA-N chlorobenzene Chemical compound ClC1=CC=CC=C1 MVPPADPHJFYWMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 2
- 238000002742 combinatorial mutagenesis Methods 0.000 description 2
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 2
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 2
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 238000001952 enzyme assay Methods 0.000 description 2
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 2
- 238000002290 gas chromatography-mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 2
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 2
- BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N isopropyl beta-D-thiogalactopyranoside Chemical compound CC(C)S[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N 0.000 description 2
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 2
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 2
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 2
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 2
- 229960000274 lysozyme Drugs 0.000 description 2
- 239000004325 lysozyme Substances 0.000 description 2
- 235000010335 lysozyme Nutrition 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 2
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 2
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N propan-1-ol Chemical compound CCCO BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- 239000011537 solubilization buffer Substances 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 229960000268 spectinomycin Drugs 0.000 description 2
- UNFWWIHTNXNPBV-WXKVUWSESA-N spectinomycin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](NC)[C@@H](O)[C@H]([C@@H]([C@H]1O1)O)NC)[C@]2(O)[C@H]1O[C@H](C)CC2=O UNFWWIHTNXNPBV-WXKVUWSESA-N 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- NUMQCACRALPSHD-UHFFFAOYSA-N tert-butyl ethyl ether Chemical compound CCOC(C)(C)C NUMQCACRALPSHD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- VZGDMQKNWNREIO-UHFFFAOYSA-N tetrachloromethane Chemical compound ClC(Cl)(Cl)Cl VZGDMQKNWNREIO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 2
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 2
- 238000012250 transgenic expression Methods 0.000 description 2
- KOICZDDAVPYKKX-HDVIWIBHSA-N (3z,7e)-4,8,12-trimethyltrideca-3,7,11-trien-1-ol Chemical compound CC(C)=CCC\C(C)=C\CC\C(C)=C/CCO KOICZDDAVPYKKX-HDVIWIBHSA-N 0.000 description 1
- YYGNTYWPHWGJRM-UHFFFAOYSA-N (6E,10E,14E,18E)-2,6,10,15,19,23-hexamethyltetracosa-2,6,10,14,18,22-hexaene Chemical compound CC(C)=CCCC(C)=CCCC(C)=CCCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)C YYGNTYWPHWGJRM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 1
- SCYULBFZEHDVBN-UHFFFAOYSA-N 1,1-Dichloroethane Chemical compound CC(Cl)Cl SCYULBFZEHDVBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OCJBOOLMMGQPQU-UHFFFAOYSA-N 1,4-dichlorobenzene Chemical compound ClC1=CC=C(Cl)C=C1 OCJBOOLMMGQPQU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DURPTKYDGMDSBL-UHFFFAOYSA-N 1-butoxybutane Chemical compound CCCCOCCCC DURPTKYDGMDSBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HBAQYPYDRFILMT-UHFFFAOYSA-N 8-[3-(1-cyclopropylpyrazol-4-yl)-1H-pyrazolo[4,3-d]pyrimidin-5-yl]-3-methyl-3,8-diazabicyclo[3.2.1]octan-2-one Chemical class C1(CC1)N1N=CC(=C1)C1=NNC2=C1N=C(N=C2)N1C2C(N(CC1CC2)C)=O HBAQYPYDRFILMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000178 Acrylic resin Polymers 0.000 description 1
- 239000004925 Acrylic resin Substances 0.000 description 1
- 108010000239 Aequorin Proteins 0.000 description 1
- 244000105975 Antidesma platyphyllum Species 0.000 description 1
- 101000755953 Bacillus subtilis (strain 168) Ribosome maturation factor RimP Proteins 0.000 description 1
- 241001646647 Burkholderia ambifaria Species 0.000 description 1
- 241000589638 Burkholderia glumae Species 0.000 description 1
- 101100139845 Caenorhabditis elegans rac-2 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000725101 Clea Species 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 241000192700 Cyanobacteria Species 0.000 description 1
- XDTMQSROBMDMFD-UHFFFAOYSA-N Cyclohexane Chemical compound C1CCCCC1 XDTMQSROBMDMFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004543 DNA replication Effects 0.000 description 1
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 1
- 241000206602 Eukaryota Species 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 102000053187 Glucuronidase Human genes 0.000 description 1
- 108010060309 Glucuronidase Proteins 0.000 description 1
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010043121 Green Fluorescent Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000004144 Green Fluorescent Proteins Human genes 0.000 description 1
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000766694 Hyphozyma Species 0.000 description 1
- 239000005909 Kieselgur Substances 0.000 description 1
- 241000255777 Lepidoptera Species 0.000 description 1
- 229910010082 LiAlH Inorganic materials 0.000 description 1
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 1
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 1
- NTIZESTWPVYFNL-UHFFFAOYSA-N Methyl isobutyl ketone Chemical compound CC(C)CC(C)=O NTIZESTWPVYFNL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UIHCLUNTQKBZGK-UHFFFAOYSA-N Methyl isobutyl ketone Natural products CCC(C)C(C)=O UIHCLUNTQKBZGK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000035032 Multiple sulfatase deficiency Diseases 0.000 description 1
- CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N O-Xylene Chemical compound CC1=CC=CC=C1C CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CBENFWSGALASAD-UHFFFAOYSA-N Ozone Chemical compound [O-][O+]=O CBENFWSGALASAD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283222 Physeter catodon Species 0.000 description 1
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- 108020005091 Replication Origin Proteins 0.000 description 1
- 108700008625 Reporter Genes Proteins 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 244000182022 Salvia sclarea Species 0.000 description 1
- 235000002911 Salvia sclarea Nutrition 0.000 description 1
- 108020004682 Single-Stranded DNA Proteins 0.000 description 1
- 108700005078 Synthetic Genes Proteins 0.000 description 1
- BHEOSNUKNHRBNM-UHFFFAOYSA-N Tetramethylsqualene Natural products CC(=C)C(C)CCC(=C)C(C)CCC(C)=CCCC=C(C)CCC(C)C(=C)CCC(C)C(C)=C BHEOSNUKNHRBNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108090000992 Transferases Proteins 0.000 description 1
- 102000004357 Transferases Human genes 0.000 description 1
- ZVNYJIZDIRKMBF-UHFFFAOYSA-N Vesnarinone Chemical compound C1=C(OC)C(OC)=CC=C1C(=O)N1CCN(C=2C=C3CCC(=O)NC3=CC=2)CC1 ZVNYJIZDIRKMBF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001338 aliphatic hydrocarbons Chemical class 0.000 description 1
- PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N aluminium oxide Inorganic materials [O-2].[O-2].[O-2].[Al+3].[Al+3] PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 1
- 230000006229 amino acid addition Effects 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 238000005349 anion exchange Methods 0.000 description 1
- 239000012062 aqueous buffer Substances 0.000 description 1
- 150000004945 aromatic hydrocarbons Chemical class 0.000 description 1
- 102000005936 beta-Galactosidase Human genes 0.000 description 1
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 1
- 230000036983 biotransformation Effects 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 239000008366 buffered solution Substances 0.000 description 1
- 239000000648 calcium alginate Substances 0.000 description 1
- 235000010410 calcium alginate Nutrition 0.000 description 1
- 229960002681 calcium alginate Drugs 0.000 description 1
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- OKHHGHGGPDJQHR-YMOPUZKJSA-L calcium;(2s,3s,4s,5s,6r)-6-[(2r,3s,4r,5s,6r)-2-carboxy-6-[(2r,3s,4r,5s,6r)-2-carboxylato-4,5,6-trihydroxyoxan-3-yl]oxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylate Chemical compound [Ca+2].O[C@@H]1[C@H](O)[C@H](O)O[C@@H](C([O-])=O)[C@H]1O[C@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O2)C([O-])=O)O)[C@H](C(O)=O)O1 OKHHGHGGPDJQHR-YMOPUZKJSA-L 0.000 description 1
- 238000003965 capillary gas chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000000679 carrageenan Substances 0.000 description 1
- 235000010418 carrageenan Nutrition 0.000 description 1
- 229920001525 carrageenan Polymers 0.000 description 1
- 229940113118 carrageenan Drugs 0.000 description 1
- 239000012159 carrier gas Substances 0.000 description 1
- 238000006555 catalytic reaction Methods 0.000 description 1
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 1
- 238000001311 chemical methods and process Methods 0.000 description 1
- 229960005091 chloramphenicol Drugs 0.000 description 1
- KRVSOGSZCMJSLX-UHFFFAOYSA-L chromic acid Substances O[Cr](O)(=O)=O KRVSOGSZCMJSLX-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 230000002759 chromosomal effect Effects 0.000 description 1
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000002734 clay mineral Substances 0.000 description 1
- 230000001447 compensatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 229940125782 compound 2 Drugs 0.000 description 1
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 1
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 239000000287 crude extract Substances 0.000 description 1
- 150000004292 cyclic ethers Chemical class 0.000 description 1
- WJTCGQSWYFHTAC-UHFFFAOYSA-N cyclooctane Chemical compound C1CCCCCCC1 WJTCGQSWYFHTAC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004914 cyclooctane Substances 0.000 description 1
- 230000009849 deactivation Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- SHFGJEQAOUMGJM-UHFFFAOYSA-N dialuminum dipotassium disodium dioxosilane iron(3+) oxocalcium oxomagnesium oxygen(2-) Chemical compound [O--].[O--].[O--].[O--].[O--].[O--].[O--].[O--].[Na+].[Na+].[Al+3].[Al+3].[K+].[K+].[Fe+3].[Fe+3].O=[Mg].O=[Ca].O=[Si]=O SHFGJEQAOUMGJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940117389 dichlorobenzene Drugs 0.000 description 1
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 1
- POLCUAVZOMRGSN-UHFFFAOYSA-N dipropyl ether Chemical compound CCCOCCC POLCUAVZOMRGSN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004821 distillation Methods 0.000 description 1
- PRAKJMSDJKAYCZ-UHFFFAOYSA-N dodecahydrosqualene Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C PRAKJMSDJKAYCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 238000005265 energy consumption Methods 0.000 description 1
- IMKJGXCIJJXALX-UHFFFAOYSA-N ent-Norambreinolide Natural products C1CC2C(C)(C)CCCC2(C)C2C1(C)OC(=O)C2 IMKJGXCIJJXALX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003344 environmental pollutant Substances 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 1
- 239000003205 fragrance Substances 0.000 description 1
- AWJWCTOOIBYHON-UHFFFAOYSA-N furo[3,4-b]pyrazine-5,7-dione Chemical compound C1=CN=C2C(=O)OC(=O)C2=N1 AWJWCTOOIBYHON-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- 235000009424 haa Nutrition 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- DMEGYFMYUHOHGS-UHFFFAOYSA-N heptamethylene Natural products C1CCCCCC1 DMEGYFMYUHOHGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 1
- 239000002608 ionic liquid Substances 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- CYPPCCJJKNISFK-UHFFFAOYSA-J kaolinite Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[OH-].[Al+3].[Al+3].[O-][Si](=O)O[Si]([O-])=O CYPPCCJJKNISFK-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 1
- 229910052622 kaolinite Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000002576 ketones Chemical class 0.000 description 1
- WABPQHHGFIMREM-UHFFFAOYSA-N lead(0) Chemical compound [Pb] WABPQHHGFIMREM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 210000003712 lysosome Anatomy 0.000 description 1
- 230000001868 lysosomic effect Effects 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 238000000520 microinjection Methods 0.000 description 1
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 description 1
- 201000006033 mucosulfatidosis Diseases 0.000 description 1
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- TVMXDCGIABBOFY-UHFFFAOYSA-N octane Chemical compound CCCCCCCC TVMXDCGIABBOFY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 239000012430 organic reaction media Substances 0.000 description 1
- 238000010525 oxidative degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000010451 perlite Substances 0.000 description 1
- 235000019362 perlite Nutrition 0.000 description 1
- 150000008300 phosphoramidites Chemical class 0.000 description 1
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 1
- 231100000719 pollutant Toxicity 0.000 description 1
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920000098 polyolefin Polymers 0.000 description 1
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 229920002635 polyurethane Polymers 0.000 description 1
- 239000004814 polyurethane Substances 0.000 description 1
- 150000003140 primary amides Chemical class 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 210000001938 protoplast Anatomy 0.000 description 1
- 239000000376 reactant Substances 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 102220277134 rs776745497 Human genes 0.000 description 1
- 239000001691 salvia sclarea Substances 0.000 description 1
- 229940096995 sclareolide Drugs 0.000 description 1
- 150000003334 secondary amides Chemical class 0.000 description 1
- 238000010517 secondary reaction Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 1
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 229940031439 squalene Drugs 0.000 description 1
- TUHBEKDERLKLEC-UHFFFAOYSA-N squalene Natural products CC(=CCCC(=CCCC(=CCCC=C(/C)CCC=C(/C)CC=C(C)C)C)C)C TUHBEKDERLKLEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 1
- 229920002994 synthetic fiber Polymers 0.000 description 1
- 229920001059 synthetic polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 1
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 1
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 1
- 239000008096 xylene Substances 0.000 description 1
- UHVMMEOXYDMDKI-JKYCWFKZSA-L zinc;1-(5-cyanopyridin-2-yl)-3-[(1s,2s)-2-(6-fluoro-2-hydroxy-3-propanoylphenyl)cyclopropyl]urea;diacetate Chemical compound [Zn+2].CC([O-])=O.CC([O-])=O.CCC(=O)C1=CC=C(F)C([C@H]2[C@H](C2)NC(=O)NC=2N=CC(=CC=2)C#N)=C1O UHVMMEOXYDMDKI-JKYCWFKZSA-L 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
- C12P17/02—Oxygen as only ring hetero atoms
- C12P17/04—Oxygen as only ring hetero atoms containing a five-membered hetero ring, e.g. griseofulvin, vitamin C
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/90—Isomerases (5.)
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
a)ホモファルネソールをホモファルネソール-アンブロキサンシクラーゼと接触させる、および/またはそれと共にインキュベートする、
b)アンブロキサンを単離する、
アンブロキサンの生産のための方法(プロセス)に関する。
a)配列番号2、5、6、7、8、9、10もしくは11に記載の配列を含むポリペプチドをコードする核酸分子;
b)配列番号1に示される配列の少なくとも1個のポリヌクレオチドを含む核酸分子;
c)配列番号2、5、6、7、8、9、10もしくは11の配列に対して少なくとも46%の同一性を有するポリペプチドをコードする核酸分子;
d)配列番号2、5、6、7、8、9、10もしくは11に記載の配列の機能的に等価なポリペプチドまたは断片のための、(a)〜(c)に記載の核酸分子;
e)配列番号3および4に記載のプライマーを用いてcDNAライブラリーもしくはゲノムDNAから核酸分子を増幅することによるか、またはde novo合成により核酸分子を化学的に合成することにより得られる、ホモファルネソール-アンブロキサンシクラーゼの活性を有する機能的に等価なポリペプチドをコードする核酸分子;
f)ストリンジェントな条件下で(a)〜(c)に記載の核酸分子とハイブリダイズするホモファルネソール-アンブロキサンシクラーゼの活性を有する機能的に等価なポリペプチドをコードする核酸分子;
g)(a)〜(c)に記載の核酸分子または少なくとも15 nt、好ましくは、20 nt、30 nt、50 nt、100 nt、200 ntもしくは500 ntのその部分的断片をプローブとして用いて、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下でDNAライブラリーから単離することができる、ホモファルネソール-アンブロキサンシクラーゼの活性を有する機能的に等価なポリペプチドをコードする核酸分子;ならびに
h)ホモファルネソール-アンブロキサンシクラーゼの活性を有する機能的に等価なポリペプチドの配列が、配列番号2、5、6、7、8、9、10もしくは11に記載の配列に対して少なくとも46%の同一性を有する、前記ポリペプチドをコードする核酸分子;
i)ホモファルネソール-アンブロキサンシクラーゼの活性を有する機能的に等価なポリペプチドが、a)〜h)に記載のものの群から選択される核酸分子によりコードされ、モノクローナル抗体を用いて単離されたか、または単離することができる前記ポリペプチドをコードする核酸分子;
j)ホモファルネソール-アンブロキサンシクラーゼの活性を有する機能的に等価なポリペプチドが、a)〜h)に記載のものの群から選択される核酸分子によりコードされるポリペプチドと類似するか、または同様の結合部位を有する、前記ポリペプチドをコードする核酸分子、
からなる群より選択される少なくとも1個の核酸分子を含む核酸分子によりコードされるポリペプチドである、アンブロキサンの生物触媒的生産のためのプロセスである。
Gap作製ペナルティ:8;Gap伸長ペナルティ:2、
および核酸については以下のパラメーター:
Gap作製ペナルティ:50;Gap伸長ペナルティ:3
を設定することにより、同一性比較を実行することが好ましい。
a)ホモファルネソール-アンブロキサンシクラーゼの活性を有する、遊離した、必要に応じて精製されたか、もしくは部分的に精製されたポリペプチド;
b)ホモファルネソール-アンブロキサンシクラーゼの活性を有する固定されたポリペプチド;
c)a)もしくはb)に記載の、細胞から単離されたポリペプチド;
d)ホモファルネソール-アンブロキサンシクラーゼの活性を有する少なくとも1個のポリペプチドを含む、無傷の細胞、必要に応じて休止期の細胞もしくは破壊された細胞;
e)d)の下で記載された細胞の細胞溶解物もしくは細胞ホモジェネート、
からなる群より選択される形態で存在することを含む。
a)配列番号2、5、6、7、8、9、10もしくは11に記載の配列を含むポリペプチドをコードする核酸分子;
b)配列番号1に示される配列の少なくとも1個のポリヌクレオチドを含む核酸分子;
c)配列が配列番号2、5、6、7、8、9、10もしくは11に記載の配列に対して少なくとも46%の同一性を有するポリペプチドをコードする核酸分子;
d)配列番号2、5、6、7、8、9、10もしくは11に記載の配列の断片のための、(a)〜(c)に記載の核酸分子;
e)配列番号3および4に記載のプライマーを用いて、cDNAライブラリーもしくはゲノムライブラリーから核酸分子を増幅することにより得られる、ホモファルネソール-アンブロキサンシクラーゼの活性を有する機能的に等価なポリペプチドをコードする核酸分子;
f)ストリンジェントな条件下で(a)〜(c)に記載の核酸分子とハイブリダイズするホモファルネソール-アンブロキサンシクラーゼの活性を有するポリペプチドをコードする核酸分子;
g)ストリンジェントな条件下で、プローブとして(a)〜(c)に記載の核酸分子または少なくとも15 nt、好ましくは20 nt、30 nt、50 nt、100 nt、200 ntもしくは500 ntのその部分的断片を用いてDNAライブラリーから単離することができる、ホモファルネソール-アンブロキサンシクラーゼの活性を有するポリペプチドをコードする核酸分子;および
h)ポリペプチドの配列が、配列番号2、5、6、7、8、9、10もしくは11に記載の配列に対して少なくとも46%の同一性を有する、ホモファルネソール-アンブロキサンシクラーゼの活性を有するポリペプチドをコードする核酸分子;
i)ポリペプチドが、a)〜h)に記載のものの群より選択される核酸分子によりコードされるか、またはモノクローナル抗体を用いて単離することができる、ホモファルネソール-アンブロキサンシクラーゼの活性を有する機能的に等価なポリペプチドをコードする核酸分子;
j)ポリペプチドが、a)〜h)に記載のものの群より選択される核酸分子によりコードされるポリペプチドと類似するか、もしくは同様の結合部位を有する、ホモファルネソール-アンブロキサンシクラーゼの活性を有する機能的に等価なポリペプチドをコードする核酸分子、
からなる群より選択される少なくとも1個の核酸分子を含む核酸分子を含む遺伝子構築物またはベクターでもある。
a)ホモファルネソール-アンブロキサンシクラーゼをコードする核酸配列、または
b)a)の核酸配列に機能し得る形で連結された遺伝子制御配列、例えば、機能的プロモーター、または
c)(a)および(b)
のいずれかが、その天然の遺伝的環境に位置しないか、または組換え方法により改変された全ての構築物を意味し、例えば、1個以上のヌクレオチド残基の置換、付加、欠失、反転または挿入である改変が可能である。天然の遺伝的環境とは、元の生物における天然の染色体座、またはゲノムライブラリー中での存在を意味する。ゲノムライブラリーの場合、核酸配列の天然の遺伝的環境が少なくとも部分的に保持されるのが好ましい。
a)配列番号2、5、6、7、8、9、10もしくは11に記載の配列を含むポリペプチドをコードする核酸分子;
b)配列番号1に示される配列の少なくとも1個のポリヌクレオチドを含む核酸分子;
c)配列が配列番号2、5、6、7、8、9、10もしくは11に記載の配列に対して少なくとも46%の同一性を有するポリペプチドをコードする核酸分子;
d)配列番号2、5、6、7、8、9、10もしくは11に記載の配列の機能的に等価なポリペプチドまたは断片のための、(a)〜(c)に記載の核酸分子;
e)配列番号3および4に記載のプライマーを用いてcDNAライブラリーもしくはゲノムライブラリーから核酸分子を増幅させるか、または対応する遺伝子を化学的に合成することにより得られる、ホモファルネソール-アンブロキサンシクラーゼの活性を有する機能的に等価なポリペプチドをコードする核酸分子;
f)ストリンジェントな条件下で(a)〜(c)に記載の核酸分子とハイブリダイズする、ホモファルネソール-アンブロキサンシクラーゼの活性を有する機能的に等価なポリペプチドをコードする核酸分子;
g)ストリンジェントな条件下で、プローブとして(a)〜(c)に記載の核酸分子または少なくとも15 nt、好ましくは20 nt、30 nt、50 nt、100 nt、200 ntもしくは500 ntのその部分的断片を用いてDNAライブラリーから単離することができる、ホモファルネソール-アンブロキサンシクラーゼの活性を有する機能的に等価なポリペプチドをコードする核酸分子;ならびに
h)ポリペプチドの配列が配列番号2、5、6、7、8、9、10もしくは11に記載の配列に対して少なくとも46%の同一性を有する、ホモファルネソール-アンブロキサンシクラーゼの活性を有する機能的に等価なポリペプチドをコードする核酸分子;
i)ポリペプチドがa)〜h)に記載のものの群から選択される核酸分子によりコードされ、モノクローナル抗体を用いて単離されたか、または単離することができる、ホモファルネソール-アンブロキサンシクラーゼの活性を有する機能的に等価なポリペプチドをコードする核酸分子;
j)ポリペプチドがa)〜h)に記載のものの群から選択される核酸分子によりコートされるポリペプチドと類似するか、または同様の結合部位を有する、ホモファルネソール-アンブロキサンシクラーゼの活性を有する機能的に等価なポリペプチドをコードする核酸分子、
からなる群より選択される少なくとも1個の核酸分子を含む核酸分子によりコードされる、前記ポリペプチドの使用である。
実施例
実施例1: Zm-SHCのクローニングと大腸菌における発現
オリゴヌクレオチドZm-SHC_fwおよびZm-SHC_revを用いて、ザイモモナス・モビリスに由来するシクラーゼ遺伝子を増幅することができる。
100 ngの各プライマーZm-SHC_fwおよびZm-SHC_revを等モル量で混合した。ザイモモナス・モビリスに由来するゲノムDNA(ATCC31821)を用いるPCRを、Pwoポリメラーゼ(Roche Applied Science)および以下の温度勾配プログラム:95℃で3分、95℃で30秒、50℃で30秒、および72℃で3分の30サイクル;72℃で10分;使用まで4℃を用いて、製造業者により特定されたように実行した。PCR産物(-2.2 kb)をアガロースゲル電気泳動(1.2%E-ゲル、Invitrogen)およびカラムクロマトグラフィー(GFXキット、Amersham Pharmacia)により単離した後、配列決定した(配列決定プライマー:Zm-SHC_fwおよびZm-SHC_rev)。得られた配列は公開された配列と一致する。
対応する2 mlの前培養物から接種された大腸菌LU15568を、37℃で16時間、100 mlのErlenmeyerフラスコ(バッフル付)中、20 mlのLB-Amp/Spec/Cm (100μg/lアンピシリン;100μg/lスペクチノマイシン;20μg/lクロラムフェニコール)、0.1 mM IPTG、0.5 g/lラムノース中で増殖させ、5000 g/10分で遠心分離し、4℃で保存した。細胞ペレットを15 mlの破壊バッファー(0.2M Tris/HCl、0.5 M EDTA、pH 8.0)、375Uベンゾナーゼ(例えば、Novagen、25U/μL)、40μL PMSF(100 mM、i-PropPH中に溶解)、0.8 gスクロースおよび約0.5 mgのリゾチーム中に懸濁することにより、タンパク質抽出物を調製した。バッチを混合し、氷上で30分間インキュベートした。その後、混合物を-20℃で凍結した。
ブラジリゾビウム・ジャポニカム由来ホモファルネソール-シクラーゼを、実施例2aに記載のように調製した。
ホモファルネソール(1,(3Z,7E-4,8,12-トリメチルトリデカ-3,7,11-トリエン-1-オール))を、実施例2aに記載のタンパク質調製物と共にインキュベートした。具体的には、4 mlのタンパク質調製物、0.5 mlのクエン酸ナトリウムバッファー(1Mクエン酸ナトリウム、pH 4.9)、0.5 mlのホモファルネソール溶液(2%(w/w)タウロデオキシコール酸を含む0.1Mクエン酸ナトリウムバッファー、pH 6.5中の100 mM)を互いに混合し、30℃で攪拌しながらインキュベートした。しかしながら、同じ組成を有する対照反応物を60℃でインキュベートした。
大腸菌中で組換え生産されたブラジリゾビウム・ジャポニカム由来生物触媒の酵素活性は、Zm-SHCのものと一致する。37℃で3時間、20 mMのホモファルネソール溶液と細胞ホモジェネート(タンパク質量:31 mg)とをインキュベートした後、26.4%のホモファルネソールが反応してアンブロキサンが得られた。同一の条件下で、組換えZm-SHCにより22.4%の変換率が得られた。
反応/定量
ホモファルネソール(1)からアンブロキサン(2)への反応を、以下のGC系を用いて決定することができる:
カラム:10m Optima 1
温度プロフィール:
0': 100℃
15℃/分
14.7': 320℃
34.7': 320℃
インジェクター温度:320℃
RT:ホモファルネソール約12.5';アンブロキサン:約11.4'。
アンモニアを用いる電子衝撃イオン化(EI)および化学イオン化(CI)後に陽イオンのキャピラリーGC/MS分析を用いて、同定を行った。装備:EIおよびCIイオン化のための2個のMSD(HP 5973)と組合わせたGC (HP 6980)。
分離カラム: DB-1
長さ: 30 m
内径: 250μm
フィルム厚: 0.25μm
担体ガス: He
流速: 1.2 ml/分
スプリット比: 1:60
オーブン温度: 100℃、5K/分で200℃まで、5分等温、30K/分で300℃まで、50分等温
インジェクター温度: 250℃
導入線温度: 300℃
注入量: 0.2μl
サンプル調製: 直接注入。
EI:走査範囲:25-750 amu、イオン化エネルギー:70 eV
CI:走査範囲:75〜800 amu。
Claims (13)
- 一般式(2)のアンブロキサン誘導体の製造方法であって、一般式(1)のホモファルネソール誘導体を、酵素としてのホモファルネソール-アンブロキサンシクラーゼの活性を有するポリペプチドを用いて生物触媒的に反応させて、対応するアンブロキサン誘導体を得るものであり、
上記酵素が、
a)配列番号2もしくは5に記載の配列を含むポリペプチドをコードする核酸分子;
b)配列番号1に示される配列を含む核酸分子;
c)配列が配列番号2もしくは5に記載の配列に対して少なくとも90%の同一性を有し、かつホモファルネソール-アンブロキサンシクラーゼの活性を有するポリペプチド、をコードする核酸分子;
d)ストリンジェントな条件下で配列番号1に示される配列を有する核酸分子とハイブリダイズする、ホモファルネソール-アンブロキサンシクラーゼの活性を有するポリペプチドをコードする核酸分子
からなる群より選択される少なくとも1個の核酸分子を含む核酸分子によりコードされるポリペプチドである、前記方法。 - ホモファルネソール-アンブロキサンシクラーゼが、10〜100モル%の反応速度を有する、請求項1に記載の方法。
- 酵素が、
a)ホモファルネソール-アンブロキサンシクラーゼの活性を有する、遊離の、必要に応じて精製されたか、または部分的に精製されたポリペプチド;
b)ホモファルネソール-アンブロキサンシクラーゼの活性を有する固定されたポリペプチド;
c)a)またはb)に記載の、細胞から単離されたポリペプチド;
d)ホモファルネソール-アンブロキサンシクラーゼの活性を有する少なくとも1個のポリペプチドを含む、無傷の細胞、必要に応じて、休止期の細胞または破壊された細胞;
e)d)の下に記載された細胞の細胞溶解物または細胞ホモジェネート、
からなる群より選択される形態で存在する、請求項1または2に記載の方法。 - 前記細胞が、ホモファルネソール-アンブロキサンシクラーゼの活性を有するポリペプチドをコードする少なくとも1個の異種核酸分子を発現する、微生物である、請求項3に記載の方法。
- アンブロキサンの生産に用いられる出発材料がシトラールであり、これを複数の工程において反応させてホモファルネソールを得る、請求項1〜4のいずれか1項に記載の方法。
- アンブロキサンを単相水性系または2相系において生産する、請求項1〜5のいずれか1項に記載の方法。
- アンブロキサンをバッチ式、原料バッチ式または連続的に生産する、請求項1〜6のいずれか1項に記載の方法。
- ホモファルネソールからアンブロキサンへの反応を、0〜45℃(60℃)の範囲の温度および/または4〜8の範囲のpHで行う、請求項1〜7のいずれか1項に記載の方法。
- ホモファルネソール-アンブロキサンシクラーゼが、エシェリシア属、コリネバクテリウム属、ラルストニア属、クロストリジウム属、シュードモナス属、バチルス属、ザイモモナス属、ロドバクター属、ストレプトミセス属、バークホルデリア属、ラクトバチルス属およびラクトコッカス属の細菌群から選択される、ホモファルネソール-アンブロキサンシクラーゼを過剰発現する微生物に由来するものである、請求項1〜8のいずれか1項に記載の方法。
- ホモファルネソール-アンブロキサンシクラーゼが、メチロコッカス・カプサラタス、ロドシュードモナス・パルストリス、フランキア種、ストレプトミセス・セリカラー、ロドシュードモナス・パレント、フランキア・アルニ、バチルス・アントラシス、バークホルデリア・アンビファリア、特に、ザイモモナス・モビリスおよびブラジリゾビウム・ジャポニカムからなる群より選択される微生物から単離されたものである、請求項1〜9のいずれか1項に記載の方法。
- ホモファルネソール-アンブロキサンシクラーゼが、ホモファルネソール-アンブロキサンシクラーゼを過剰発現する、エシェリシア・コリ種、シュードモナス・プチダ種、バークホルデリア・グルマ種、ストレプトミセス・リビダンス種、ストレプトミセス・セリカラー種およびメチロコッカス・カプサラタス種、ロドシュードモナス・パルストリス種、フランキア種、ロドシュードモナス・パレント種、フランキア・アルニ種、バチルス・アントラシス種、バークホルデリア・アンビファリア種、特に、ザイモモナス・モビリス種およびブラジリゾビウム・ジャポニカム種のトランスジェニック細菌から単離されたものである、請求項1〜10のいずれか1項に記載の方法。
- アンブロキサンを得るための、ホモファルネソールの生物触媒反応のためのホモファルネソール-アンブロキサンシクラーゼの活性を有するポリペプチドの使用であって、
上記ホモファルネソール-アンブロキサンシクラーゼの主要な活性が、主要な基質であるホモファルネソールとの反応であり、
前記ポリペプチドが、
a)配列番号2もしくは5に記載の配列を含むポリペプチドをコードする核酸分子;
b)配列番号1に示される配列を含む核酸分子;
c)配列が配列番号2もしくは5に記載の配列に対して少なくとも90%の同一性を有し、かつホモファルネソール-アンブロキサンシクラーゼの活性を有するポリペプチド、をコードする核酸分子;
d)ストリンジェントな条件下で配列番号1に示される配列を有する核酸分子とハイブリダイズする、ホモファルネソール-アンブロキサンシクラーゼの活性を有するポリペプチドをコードする核酸分子
からなる群より選択される少なくとも1個の核酸分子を含む核酸分子によりコードされる、上記使用。 - ホモファルネソール-アンブロキサンシクラーゼが、10〜100モル%の反応速度を有する、請求項12に記載の使用。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
EP09162104.5 | 2009-06-05 | ||
EP09162104 | 2009-06-05 | ||
PCT/EP2010/057696 WO2010139719A2 (de) | 2009-06-05 | 2010-06-02 | Biokatalytische herstellung von ambroxan |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2012528578A JP2012528578A (ja) | 2012-11-15 |
JP5735493B2 true JP5735493B2 (ja) | 2015-06-17 |
Family
ID=42985751
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2012513609A Active JP5735493B2 (ja) | 2009-06-05 | 2010-06-02 | アンブロキサンの生物触媒的生産 |
Country Status (7)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US8759043B2 (ja) |
EP (2) | EP3404108A1 (ja) |
JP (1) | JP5735493B2 (ja) |
CN (1) | CN102449158B (ja) |
ES (1) | ES2703770T3 (ja) |
MX (1) | MX2011012757A (ja) |
WO (1) | WO2010139719A2 (ja) |
Families Citing this family (30)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20120070867A1 (en) | 2009-06-04 | 2012-03-22 | Basf Se | process for the enzymatic reduction of enoates |
ES2628225T3 (es) | 2009-09-15 | 2017-08-02 | Basf Se | Preparación de beta-aminoácidos |
EP2531606B1 (en) | 2010-02-01 | 2014-06-11 | Basf Se | Process for the reduction of cinnamaldehyde derivatives employing enoate reductases |
US8932839B2 (en) | 2010-11-17 | 2015-01-13 | Basf Se | Method for the biocatalytic cyclization of terpenes and cyclase mutants employable therein |
EP2640835B1 (de) | 2010-11-17 | 2019-05-22 | Basf Se | Verfahren zur biokatalytischen cyclisierung von terpenen und darin einsetzbare cyclase-mutanten |
JP2013132226A (ja) * | 2011-12-26 | 2013-07-08 | Kao Corp | (−)−3a,6,6,9a−テトラメチルドデカヒドロナフト[2,1−b]フランの製造方法 |
US9080191B2 (en) | 2012-03-13 | 2015-07-14 | Basf Se | Method for biocatalytic production of nitriles from oximes and oxime dehydratases usable therein |
CN104245647B (zh) * | 2012-04-16 | 2017-06-09 | 巴斯夫欧洲公司 | 制备(3e,7e)‑高法呢醇的改进方法 |
US20130273619A1 (en) | 2012-04-16 | 2013-10-17 | Basf Se | Process for the Preparation of (3E, 7E)-Homofarnesol |
WO2014022434A1 (en) | 2012-07-30 | 2014-02-06 | Allylix, Inc. | Sclareol and labdenediol diphosphate synthase polypeptides encoding nucleic acid molecules and uses thereof |
GB201318894D0 (en) * | 2013-10-25 | 2013-12-11 | Givaudan Sa | Improvements in or relating to organic compounds |
MX2017004162A (es) * | 2014-09-29 | 2017-07-19 | Basf Se | Metodo para ciclizar biocataliticamente el geranillinalool y productos de ciclizacion obtenidos de este modo. |
GB201507170D0 (en) * | 2015-04-24 | 2015-06-10 | Givaudan Sa | Process |
GB201507207D0 (en) | 2015-04-24 | 2015-06-10 | Givaudan Sa | Enzymes and applications thereof |
MX2018000413A (es) | 2015-07-10 | 2018-09-06 | Basf Se | Metodo para la hidroformilacion de butadienos 2-sustituidos y la produccion de productos secundarios de estos, especialmente ambrox. |
GB201516396D0 (en) | 2015-09-16 | 2015-10-28 | Givaudan Sa | Improvements in or relating to organic compounds |
US10954538B2 (en) * | 2016-02-19 | 2021-03-23 | Basf Se | Enzymatic cyclization of homofarnesylic acid |
GB201618090D0 (en) * | 2016-10-26 | 2016-12-07 | Givaudan Sa | Product |
EP3585902B1 (en) | 2017-02-24 | 2021-07-14 | Basf Se | Method for the preparation of (3e,7e)-homofarnesic acid or (3e,7e)-homofarnesic acid ester |
JP7203747B2 (ja) * | 2017-02-24 | 2023-01-13 | ビーエーエスエフ ソシエタス・ヨーロピア | アリルアルコール及びそれらのアシル化生成物のカルボニル化による不飽和カルボン酸の調製のための方法 |
MX2019010097A (es) * | 2017-02-24 | 2019-10-15 | Int Flavors & Fragrances Inc | Escualeno hopeno ciclasa y uso de la misma para producir ambroxan. |
GB201902646D0 (en) * | 2019-02-27 | 2019-04-10 | Givaudan Sa | Process |
GB201917694D0 (en) | 2019-12-04 | 2020-01-15 | Givaudan Sa | Enzyme mediated process |
GB201917688D0 (en) | 2019-12-04 | 2020-01-15 | Givaudan Sa | SHC enzymes and enzyme variants |
GB202005468D0 (en) | 2020-04-15 | 2020-05-27 | Givaudan Sa | Enzyme-media process |
CN116348602A (zh) | 2020-09-02 | 2023-06-27 | 国际香料和香精公司 | 角鲨烯何帕烯环化酶衍生物及其用于生产降龙涎香醚的用途 |
GB202115120D0 (en) | 2021-10-21 | 2021-12-08 | Givaudan Sa | Organic compounds |
WO2023175123A1 (en) | 2022-03-17 | 2023-09-21 | Givaudan Sa | Shc enzymes and enzyme variants |
WO2023245039A1 (en) | 2022-06-15 | 2023-12-21 | International Flavors & Fragrances Inc. | Squalene hopene cyclase variants for producing sclareolide |
GB202219135D0 (en) | 2022-12-19 | 2023-02-01 | Givaudan Sa | Process |
Family Cites Families (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US513270A (en) | 1894-01-23 | August friedrich wilhelm kreinsen | ||
EP0204009B1 (en) | 1983-07-13 | 1992-02-05 | BASF K & F Corporation | Process for producing diol and furan and microorganism capable of same |
DE19931847A1 (de) | 1999-07-09 | 2001-01-11 | Basf Ag | Immobilisierte Lipase |
WO2001032890A1 (de) | 1999-10-29 | 2001-05-10 | Basf Aktiengesellschaft | L-pantolacton-hydrolase und ein verfahren zur herstellung von d-pantolacton |
DE10019380A1 (de) | 2000-04-19 | 2001-10-25 | Basf Ag | Verfahren zur Herstellung von kovalent gebundenen biologisch aktiven Stoffen an Polyurethanschaumstoffen sowie Verwendung der geträgerten Polyurethanschaumstoffe für chirale Synthesen |
DE10019377A1 (de) | 2000-04-19 | 2001-10-25 | Basf Ag | Verfahren zur Immobilisierung von biologisch aktiven Stoffen auf Trägermaterialien und Verwendung der mit biologisch aktiven Stoffen geträgerten Materialien für chirale Synthesen |
JP5277747B2 (ja) * | 2007-08-08 | 2013-08-28 | パナソニック株式会社 | 燃料電池の電力変換装置 |
JP5236233B2 (ja) * | 2007-09-04 | 2013-07-17 | 花王株式会社 | (−)−アンブロキサンの製造方法 |
-
2010
- 2010-06-02 WO PCT/EP2010/057696 patent/WO2010139719A2/de active Application Filing
- 2010-06-02 US US13/375,996 patent/US8759043B2/en active Active
- 2010-06-02 ES ES10724460T patent/ES2703770T3/es active Active
- 2010-06-02 EP EP18179368.8A patent/EP3404108A1/de active Pending
- 2010-06-02 MX MX2011012757A patent/MX2011012757A/es active IP Right Grant
- 2010-06-02 JP JP2012513609A patent/JP5735493B2/ja active Active
- 2010-06-02 CN CN201080023461.0A patent/CN102449158B/zh active Active
- 2010-06-02 EP EP10724460.0A patent/EP2438182B1/de active Active
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP2012528578A (ja) | 2012-11-15 |
EP2438182A2 (de) | 2012-04-11 |
EP3404108A1 (de) | 2018-11-21 |
CN102449158B (zh) | 2017-08-25 |
US8759043B2 (en) | 2014-06-24 |
ES2703770T3 (es) | 2019-03-12 |
WO2010139719A2 (de) | 2010-12-09 |
CN102449158A (zh) | 2012-05-09 |
EP2438182B1 (de) | 2018-10-10 |
WO2010139719A3 (de) | 2011-02-24 |
US20120135477A1 (en) | 2012-05-31 |
MX2011012757A (es) | 2011-12-16 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP5735493B2 (ja) | アンブロキサンの生物触媒的生産 | |
US11091752B2 (en) | Squalene hopene cyclase and use thereof for producing ambroxan | |
JP6163557B2 (ja) | 化学物質およびその誘導体を生成するための組成物および方法 | |
US11345907B2 (en) | Method for producing albicanol compounds | |
US9528133B2 (en) | Compositions and methods for producing chemicals and derivatives thereof | |
CN110396508B (zh) | 源自Nocardia cyriacigeorgica的L-泛解酸内酯脱氢酶及应用 | |
JP6989513B2 (ja) | ホモファルネシル酸の酵素的環化 | |
CN110396507B (zh) | 源自Cnuibacter physcomitrellae的L-泛解酸内酯脱氢酶 | |
US20210310031A1 (en) | Method for producing drimanyl acetate compounds | |
JP5919192B2 (ja) | βアミノ酸の調製 | |
WO2022051761A2 (en) | Squalene hopene cyclase derivatives and use thereof for producing ambrox | |
WO2008018640A1 (fr) | Plasmide, transformé, et procédé de production de la 3-carboxymuconolactone | |
US11214775B2 (en) | Method for biocatalytic production of terpene compounds | |
CA2943348A1 (en) | Compositions and methods for producing chemicals and derivatives thereof | |
CN110396506B (zh) | 源自Nocardia asteroides的L-泛解酸内酯脱氢酶及其应用 | |
EP4013862A2 (en) | Novel polypeptides for producing albicanol and/or drimenol compounds | |
CN110527671B (zh) | 源自Nocardia farcinica的L-泛解酸内酯脱氢酶及其应用 | |
CN118119716A (zh) | 从脂肪酸中生物合成产生大环麝香内酯 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20130529 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20140909 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20141209 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20150324 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20150416 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 5735493 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |