JP5698001B2 - アミノ酸の製造法 - Google Patents
アミノ酸の製造法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP5698001B2 JP5698001B2 JP2010550524A JP2010550524A JP5698001B2 JP 5698001 B2 JP5698001 B2 JP 5698001B2 JP 2010550524 A JP2010550524 A JP 2010550524A JP 2010550524 A JP2010550524 A JP 2010550524A JP 5698001 B2 JP5698001 B2 JP 5698001B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- seq
- amino acid
- sequence
- dna
- aspartate aminotransferase
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 title claims description 42
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims description 36
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 79
- 108010003415 Aspartate Aminotransferases Proteins 0.000 claims description 75
- 102000004625 Aspartate Aminotransferases Human genes 0.000 claims description 63
- 150000008575 L-amino acids Chemical class 0.000 claims description 53
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 50
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 38
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 37
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 claims description 17
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 claims description 17
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 claims description 17
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 17
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 13
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 claims description 11
- 241000588722 Escherichia Species 0.000 claims description 10
- RHGKLRLOHDJJDR-BYPYZUCNSA-N L-citrulline Chemical compound NC(=O)NCCC[C@H]([NH3+])C([O-])=O RHGKLRLOHDJJDR-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims description 9
- 230000002950 deficient Effects 0.000 claims description 9
- AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N L-Ornithine Chemical compound NCCC[C@H](N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims description 8
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims description 8
- 229960002429 proline Drugs 0.000 claims description 8
- PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N Hydroxyproline Chemical compound O[C@H]1CN[C@H](C(O)=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N 0.000 claims description 6
- 229930182821 L-proline Natural products 0.000 claims description 6
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N L-arginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims description 5
- FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N trans-L-hydroxy-proline Natural products ON1CCCC1C(O)=O FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 235000014852 L-arginine Nutrition 0.000 claims description 4
- 229930064664 L-arginine Natural products 0.000 claims description 4
- AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N Orn-delta-NH2 Natural products NCCCC(N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 229960002173 citrulline Drugs 0.000 claims description 4
- 229960002989 glutamic acid Drugs 0.000 claims description 4
- 229960003104 ornithine Drugs 0.000 claims description 4
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 3
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 3
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 claims description 2
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 claims description 2
- 229960002743 glutamine Drugs 0.000 claims description 2
- 150000008574 D-amino acids Chemical class 0.000 claims 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 280
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 128
- 101150005925 aspC gene Proteins 0.000 description 36
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 33
- 101100492609 Talaromyces wortmannii astC gene Proteins 0.000 description 28
- 101150116772 aatA gene Proteins 0.000 description 28
- 101150100742 dapL gene Proteins 0.000 description 28
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 20
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 16
- 101150089004 argR gene Proteins 0.000 description 15
- 101150068263 putA gene Proteins 0.000 description 15
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 14
- WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N chloramphenicol Chemical compound ClC(Cl)C(=O)N[C@H](CO)[C@H](O)C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N 0.000 description 12
- 229960005091 chloramphenicol Drugs 0.000 description 12
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 12
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 12
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 12
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 11
- 101100163308 Clostridium perfringens (strain 13 / Type A) argR1 gene Proteins 0.000 description 10
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 10
- 101150072344 argA gene Proteins 0.000 description 10
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 10
- 101150046501 proB gene Proteins 0.000 description 10
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 9
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 9
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 8
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 description 8
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 7
- 102000005133 Glutamate 5-kinase Human genes 0.000 description 7
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 7
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 7
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 6
- 108700023479 Glutamate 5-kinases Proteins 0.000 description 6
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 6
- 241000660147 Escherichia coli str. K-12 substr. MG1655 Species 0.000 description 5
- 239000006142 Luria-Bertani Agar Substances 0.000 description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 4
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 4
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 4
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 4
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 4
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 4
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 4
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 4
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 4
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 4
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 4
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 3
- 108010032178 Amino-acid N-acetyltransferase Proteins 0.000 description 3
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108020004485 Nonsense Codon Proteins 0.000 description 3
- 101100309436 Streptococcus mutans serotype c (strain ATCC 700610 / UA159) ftf gene Proteins 0.000 description 3
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 3
- 229940009098 aspartate Drugs 0.000 description 3
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 3
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 3
- -1 ethanol and glycerol Chemical compound 0.000 description 3
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 3
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 3
- SURQXAFEQWPFPV-UHFFFAOYSA-L iron(2+) sulfate heptahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.O.O.[Fe+2].[O-]S([O-])(=O)=O SURQXAFEQWPFPV-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 3
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 3
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 3
- 230000037434 nonsense mutation Effects 0.000 description 3
- 101150025220 sacB gene Proteins 0.000 description 3
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 2
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 2
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 2
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 2
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 241000186226 Corynebacterium glutamicum Species 0.000 description 2
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 2
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 description 2
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 2
- 241000187747 Streptomyces Species 0.000 description 2
- 108010006785 Taq Polymerase Proteins 0.000 description 2
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 2
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 2
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 2
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 2
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000009697 arginine Nutrition 0.000 description 2
- 230000037429 base substitution Effects 0.000 description 2
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 2
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 2
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 2
- 239000013611 chromosomal DNA Substances 0.000 description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 2
- SUYVUBYJARFZHO-RRKCRQDMSA-N dATP Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@H]1C[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)O1 SUYVUBYJARFZHO-RRKCRQDMSA-N 0.000 description 2
- SUYVUBYJARFZHO-UHFFFAOYSA-N dATP Natural products C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C1CC(O)C(COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)O1 SUYVUBYJARFZHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RGWHQCVHVJXOKC-SHYZEUOFSA-J dCTP(4-) Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@@H]1O[C@H](COP([O-])(=O)OP([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O)[C@@H](O)C1 RGWHQCVHVJXOKC-SHYZEUOFSA-J 0.000 description 2
- HAAZLUGHYHWQIW-KVQBGUIXSA-N dGTP Chemical compound C1=NC=2C(=O)NC(N)=NC=2N1[C@H]1C[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)O1 HAAZLUGHYHWQIW-KVQBGUIXSA-N 0.000 description 2
- NHVNXKFIZYSCEB-XLPZGREQSA-N dTTP Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)[C@@H](O)C1 NHVNXKFIZYSCEB-XLPZGREQSA-N 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 2
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 2
- 229940049906 glutamate Drugs 0.000 description 2
- 229930195712 glutamate Natural products 0.000 description 2
- 235000013402 health food Nutrition 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 2
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 2
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- WRUGWIBCXHJTDG-UHFFFAOYSA-L magnesium sulfate heptahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.O.O.[Mg+2].[O-]S([O-])(=O)=O WRUGWIBCXHJTDG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229940061634 magnesium sulfate heptahydrate Drugs 0.000 description 2
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 2
- 239000003471 mutagenic agent Substances 0.000 description 2
- 231100000707 mutagenic chemical Toxicity 0.000 description 2
- KHPXUQMNIQBQEV-UHFFFAOYSA-N oxaloacetic acid Chemical compound OC(=O)CC(=O)C(O)=O KHPXUQMNIQBQEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L potassium carbonate Chemical compound [K+].[K+].[O-]C([O-])=O BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 101150098466 rpsL gene Proteins 0.000 description 2
- 238000011218 seed culture Methods 0.000 description 2
- 238000010187 selection method Methods 0.000 description 2
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 2
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 2
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 2
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K tripotassium phosphate Chemical compound [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 239000012137 tryptone Substances 0.000 description 2
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 description 2
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 2
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 2
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 2
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 2
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 1
- 102000007610 Amino-acid N-acetyltransferase Human genes 0.000 description 1
- 108020005544 Antisense RNA Proteins 0.000 description 1
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 1
- 241000194107 Bacillus megaterium Species 0.000 description 1
- FMMWHPNWAFZXNH-UHFFFAOYSA-N Benz[a]pyrene Chemical compound C1=C2C3=CC=CC=C3C=C(C=C3)C2=C2C3=CC=CC2=C1 FMMWHPNWAFZXNH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000186146 Brevibacterium Species 0.000 description 1
- 108090000994 Catalytic RNA Proteins 0.000 description 1
- 102000053642 Catalytic RNA Human genes 0.000 description 1
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 1
- 241000186216 Corynebacterium Species 0.000 description 1
- 241000186145 Corynebacterium ammoniagenes Species 0.000 description 1
- 241001644925 Corynebacterium efficiens Species 0.000 description 1
- 241001134763 Corynebacterium flavescens Species 0.000 description 1
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 1
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 description 1
- 241001013691 Escherichia coli BW25113 Species 0.000 description 1
- 241000620209 Escherichia coli DH5[alpha] Species 0.000 description 1
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 1
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 1
- 101710198928 Gamma-glutamyl phosphate reductase Proteins 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- FUSGACRLAFQQRL-UHFFFAOYSA-N N-Ethyl-N-nitrosourea Chemical compound CCN(N=O)C(N)=O FUSGACRLAFQQRL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VZUNGTLZRAYYDE-UHFFFAOYSA-N N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine Chemical compound O=NN(C)C(=N)N[N+]([O-])=O VZUNGTLZRAYYDE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000589776 Pseudomonas putida Species 0.000 description 1
- 102000018120 Recombinases Human genes 0.000 description 1
- 108010091086 Recombinases Proteins 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 description 1
- 241000607720 Serratia Species 0.000 description 1
- 241000607715 Serratia marcescens Species 0.000 description 1
- 108020004459 Small interfering RNA Proteins 0.000 description 1
- 241000187398 Streptomyces lividans Species 0.000 description 1
- JZRWCGZRTZMZEH-UHFFFAOYSA-N Thiamine Natural products CC1=C(CCO)SC=[N+]1CC1=CN=C(C)N=C1N JZRWCGZRTZMZEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000003929 Transaminases Human genes 0.000 description 1
- 108090000340 Transaminases Proteins 0.000 description 1
- 102000004357 Transferases Human genes 0.000 description 1
- 108090000992 Transferases Proteins 0.000 description 1
- 239000000999 acridine dye Substances 0.000 description 1
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 239000002168 alkylating agent Substances 0.000 description 1
- 229940100198 alkylating agent Drugs 0.000 description 1
- 150000001370 alpha-amino acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 235000008206 alpha-amino acids Nutrition 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000003863 ammonium salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 108010024239 aromatic amino acid aminotransferase Proteins 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010364 biochemical engineering Methods 0.000 description 1
- 230000006696 biosynthetic metabolic pathway Effects 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 231100000357 carcinogen Toxicity 0.000 description 1
- 239000003183 carcinogenic agent Substances 0.000 description 1
- 238000003163 cell fusion method Methods 0.000 description 1
- 239000003184 complementary RNA Substances 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N dl-hydroxyproline Natural products OC1C[NH2+]C(C([O-])=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 239000011790 ferrous sulphate Substances 0.000 description 1
- 235000003891 ferrous sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 238000012224 gene deletion Methods 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 239000000413 hydrolysate Substances 0.000 description 1
- 229960002591 hydroxyproline Drugs 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 229910017053 inorganic salt Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 1
- 229910000359 iron(II) sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000005304 joining Methods 0.000 description 1
- AIHDCSAXVMAMJH-GFBKWZILSA-N levan Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@](CO)(CO[C@@H]2[C@H]([C@H](O)[C@@](O)(CO)O2)O)O1 AIHDCSAXVMAMJH-GFBKWZILSA-N 0.000 description 1
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- SCVOEYLBXCPATR-UHFFFAOYSA-L manganese(II) sulfate pentahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.[Mn+2].[O-]S([O-])(=O)=O SCVOEYLBXCPATR-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000037353 metabolic pathway Effects 0.000 description 1
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 229910017464 nitrogen compound Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000002830 nitrogen compounds Chemical class 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 229910000027 potassium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011181 potassium carbonates Nutrition 0.000 description 1
- 229910000160 potassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011009 potassium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 230000019525 primary metabolic process Effects 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 108091092562 ribozyme Proteins 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 235000019157 thiamine Nutrition 0.000 description 1
- KYMBYSLLVAOCFI-UHFFFAOYSA-N thiamine Chemical compound CC1=C(CCO)SCN1CC1=CN=C(C)N=C1N KYMBYSLLVAOCFI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003495 thiamine Drugs 0.000 description 1
- 239000011721 thiamine Substances 0.000 description 1
- DPJRMOMPQZCRJU-UHFFFAOYSA-M thiamine hydrochloride Chemical compound Cl.[Cl-].CC1=C(CCO)SC=[N+]1CC1=CN=C(C)N=C1N DPJRMOMPQZCRJU-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229960000344 thiamine hydrochloride Drugs 0.000 description 1
- 235000019190 thiamine hydrochloride Nutrition 0.000 description 1
- 239000011747 thiamine hydrochloride Substances 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 1
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 230000003313 weakening effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/10—Transferases (2.)
- C12N9/1096—Transferases (2.) transferring nitrogenous groups (2.6)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
- C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
- C12P13/10—Citrulline; Arginine; Ornithine
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
- C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
- C12P13/14—Glutamic acid; Glutamine
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
- C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
- C12P13/24—Proline; Hydroxyproline; Histidine
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y206/00—Transferases transferring nitrogenous groups (2.6)
- C12Y206/01—Transaminases (2.6.1)
- C12Y206/01001—Aspartate transaminase (2.6.1.1), i.e. aspartate-aminotransferase
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Description
すなわち、本発明は、以下の[1]〜[6]に関する。
[1]L−アミノ酸を生成する能力を有し、かつアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ活性が親株に比べて低下又は喪失した微生物を培地に培養し、培養物中にL−アミノ酸を生成蓄積せしめ、該培養物からL−アミノ酸を採取することを特徴とする、L−アミノ酸の製造法。
[2]アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ活性が親株に比べて低下又は喪失した微生物が、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼをコードするDNAを欠損した微生物である、[1]記載のL-アミノ酸の製造法。
[3]アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼが、以下の(1)〜(3)より選ばれる蛋白質である、[1]又は[2]記載のL−アミノ酸の製造法。
(1)配列番号2で表されるアミノ酸配列からなる蛋白質
(2)配列番号2で表されるアミノ酸配列において、1以上のアミノ酸が欠失、置換もしくは付加されたアミノ酸配列からなり、かつアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ活性を有する蛋白質
(3)配列番号2で表されるアミノ酸配列と80%以上の相同性を有するアミノ酸配列からなり、かつアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ活性を有する蛋白質
[4]アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼが、以下の(1)〜(3)より選ばれるDNAにコードされる、[1]又は[2]に記載のL−アミノ酸の製造法。
(1)配列番号1で表される塩基配列からなるDNA
(2)配列番号1で表される塩基配列と相補的な塩基配列からなるDNAとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ活性を有する蛋白質をコードするDNA
(3)配列番号1で表される塩基配列と80%以上の相同性を有し、かつアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ活性を有する蛋白質をコードするDNA
[5]微生物がエシェリヒア属に属する微生物である、[1]〜[4]のいずれかに記載のL−アミノ酸の製造法。
[6]L−アミノ酸が、L−グルタミン酸、L−グルタミン、L−プロリン、L−オルニチン、L−シトルリン、L−アルギニン、L−ヒドロキシプロリンからなる群より選ばれるアミノ酸である[1]〜[5]のいずれかに記載のL−アミノ酸の製造法。
本発明は、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ活性が親株に比べて低下又は喪失した微生物を用いたL−アミノ酸の製造法を提供する。したがって、本発明の製造法に用いられる微生物は、L−アミノ酸を生成する能力を有し、かつアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ活性を有する微生物の、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ活性を低下又は喪失させることにより得ることができる。
(a)L−アミノ酸の生合成を制御する機構の少なくとも1つを緩和又は解除する方法、
(b)L−アミノ酸の生合成に関与する酵素の少なくとも1つを発現強化する方法、
(c)L−アミノ酸の生合成に関与する酵素遺伝子の少なくとも1つのコピー数を増加させる方法、
(d)L−アミノ酸の生合成経路から該L−アミノ酸以外の代謝産物へ分岐する代謝経路の少なくとも1つを弱化又は遮断する方法、及び
(e)親株に比べ、L−アミノ酸のアナログに対する耐性度が高い細胞株を選択する方法、
などをあげることができ、上記公知の方法は単独又は組み合わせて用いることができる。
上記(a)〜(e)の具体的な方法は、上記(a)の方法に関してはAgric. Biol. Chem., 43, 105-111 (1979)、J. Bacteriol., 110, 761-763 (1972)及びAppl. Microbiol. Biotechnol., 39, 318-323 (1993)などに記載されている。上記(b)の方法に関しては、Agric. Biol. Chem., 43, 105-111 (1979)及びJ. Bacteriol., 110, 761-763 (1972)などに記載されている。上記(c)の方法に関しては、Appl. Microbiol. Biotechnol., 39, 318-323 (1993)及びAgric. Biol. Chem., 39, 371-377 (1987)などに記載されている。上記(d)の方法に関しては、Appl. Environ. Microbiol., 38, 181-190 (1979)及びAgric. Biol. Chem., 42, 1773-1778 (1978)などに記載されている。上記(e)の方法に関しては、Agric. Biol. Chem., 36, 1675-1684 (1972)、Agric. Biol. Chem., 41, 109-116 (1977)、Agric. Biol. Chem. , 37, 2013-2023 (1973)及びAgric. Biol. Chem., 51, 2089-2094 (1987)などに記載されている。上記文献等を参考に各種アミノ酸を生成、蓄積する能力を有する微生物を取得することができる。
本発明はまた、上記1の方法で調製された、L−アミノ酸を生成する能力を有し、かつアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ活性が親株に比べて低下又は喪失した微生物を培地に培養し、培養物中にL−アミノ酸を生成、蓄積させ、該培養物からL−アミノ酸を採取することによる、L−アミノ酸の製造法を提供する。
(1)cat−sacBカセットの作製
クロラムフェニコール耐性遺伝子(cat)とレバンシュークラーゼ遺伝子(sacB)を含むDNA断片は以下のようにして調製した。
pHSG398(タカラバイオ社製)を鋳型として0.1μg、配列番号3の配列を有する合成DNA、及び配列番号4の配列を有する合成DNAをプライマーとして各0.5μmol/L、2.5unitsのPyrobest DNAポリメラーゼ(タカラバイオ製)、5μLのPyrobest DNAポリメラーゼ用×10緩衝液(タカラバイオ製)、各200μmol/LのdNTP(dATP、dGTP、dCTP及びdTTP)を含む反応液50μLを調製し、96℃で15秒間、55℃で30秒間、72℃で1分間の工程を30回繰り返すことによりPCR反応を行った。増幅されたDNA断片を常法にて精製した後、制限酵素BamHIとSalIで消化し、アガロース電気泳動によりDNA断片を分離した後、Wizard SV Gel and PCR Clean−Up System(Promega社製)(以下、DNA断片精製キットと略す)を用いて精製し、クロラムフェニコール耐性遺伝子断片を得た。
さらにpMOB3(ATCC77282由来)を鋳型として配列番号5の配列を有する合成DNA、及び配列番号6の配列を有する合成DNAをプライマーにして同様にPCR反応を行い、常法にて精製した。得られたDNA断片を制限酵素SphIとSalIで消化した後、アガロース電気泳動とDNA精製キットを用いて精製し、レバンシュークラーゼ遺伝子断片を得た。pHSG298(タカラバイオ社製)を制限酵素BamHIとSphIで消化し、アガロース電気泳動とDNA断片精製キットを用いて精製した。上記3つのDNA断片をDNA Ligation Kit Ver.2.1(タカラバイオ社製)を用いて連結し、大腸菌DH5αのコンピテントセル(TOYOBO社製)を形質転換して、クロラムフェニコール耐性を指標に形質転換体を選択した。選択した形質転換体のコロニーより公知の方法に従ってプラスミドを抽出し、制限酵素を用いてその構造を解析することによりクロラムフェニコール耐性遺伝子(cat)とレバンシュークラーゼ遺伝子(sacB)を含むpHSGcatsacBが取得されていることを確認した。得られたプラスミドを鋳型に配列番号7の配列を有する合成DNA、及び配列番号8の配列を有する合成DNAをプライマーとしてPCR反応を行い、DNA断片精製キットにより精製して、クロラムフェニコール耐性遺伝子(cat)とレバンシュークラーゼ遺伝子(sacB)が含まれるDNA断片(以下、cat−sacBカセットと略す)を得た。
各DNA断片は以下のようにして作製した。
大腸菌MG1655株ゲノムDNA(ATCC700926D−5)を鋳型として0.1μg、配列番号9の配列を有する合成DNA、及び配列番号11の配列を有する合成DNAをプライマーとして各0.5μmol/L、2.5unitsのLA Taq DNAポリメラーゼ(タカラバイオ製)、5μLのLA Taq DNAポリメラーゼ用×10緩衝液(タカラバイオ製)、各400μmol/LのdNTP(dATP、dGTP、dCTP及びdTTP)を含む反応液50μLを調製し、94℃で1分間、55℃で30秒間、72℃で7分間の工程を30回繰り返すことによりPCR反応を行って、aspCを含むDNA断片を増幅した。得られたDNA断片を鋳型に、配列番号9の配列を有する合成DNAと配列番号13の配列を有する合成DNAをプライマーとして用いaspC遺伝子の5’側領域を、配列番号11の配列を有する合成DNAと配列番号14の配列を有する合成DNAをプライマーとして用い3’側領域をそれぞれPCR反応で増幅し、得られたDNA断片をDNA断片精製キットで精製し、得られたDNA断片をDNA断片精製キットで精製した。
次にこの2断片と上記(1)で得られたcat−sacBカセットを混合してこれを鋳型とし、配列番号10の配列を有する合成DNAと配列番号12の配列を有する合成DNAをプライマーとしてPCR反応を行い3断片の連結と増幅を行った。この操作により得られたDNA断片はaspC遺伝子の5’側配列と3’側配列の間にクロラムフェニコール耐性遺伝子とレバンシュークラーゼ遺伝子が挿入された構造をもっている。このDNA断片をaspC破壊用DNA断片として用いた。
さらに配列番号9の配列を有する合成DNA、及び配列番号11の配列を有する合成DNAをプライマーとしてPCR反応で増幅されたaspC遺伝子を含むDNA断片を鋳型にして、配列番号9の配列を有する合成DNAと配列番号16の配列を有する合成DNAをプライマーとして用いaspC遺伝子の5’側領域を、配列番号11の配列を有する合成DNAと配列番号15の配列を有する合成DNAをプライマーとして用い3’側領域をそれぞれPCR反応で増幅し、得られたDNA断片をDNA断片精製キットで精製した。
次にこの2断片を混合してこれを鋳型とし、配列番号10の配列を有する合成DNAと配列番号12の配列を有する合成DNAをプライマーとしてPCR反応を行い2断片の連結と増幅を行った。この操作により得られたDNA断片はaspC遺伝子の5’側領域と3’側領域が直接つながっており、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼをコードするaspC遺伝子の大部分が欠損した構造になっている。このDNA断片をaspC領域に挿入したマーカーの除去用DNA断片として用いた。
上記(2)で得られたaspC破壊用DNA断片をDatsenkoらの方法[Proc.Natl.Acad.Sci.USA,97,6640(2000)]に従って大腸菌BW25113/pKD46(CGSC#7739としてYale 大学The Coli Genetic Stock Centerより入手可能)に導入し、染色体DNAとの相同組換えを起こさせた。クロラムフェニコール耐性を指標に形質転換体を選択し、出現したコロニーを採取して、シュークロース60g/Lを含むLB寒天培地〔トリプトン(ディフコ社製)10g、塩化ナトリウム5g、酵母エキス(ディフコ社製)5g、バクトアガー(ディフコ社製)20gを水1Lに含みpH7.2に調整した培地〕上で生育しない株を選抜した後、次にaspC領域に挿入したマーカーの除去用DNA断片を同様に導入した。シュークロース非感受性、かつクロラムフェニコール感受性となった株を選抜して、cat−sacBカセットの削除に成功した株、BWC/pKD46株を得た。また、確認のため、得られた株の染色体DNAを公知の方法で抽出し、これを鋳型として配列番号10の配列を有する合成DNAと配列番号12の配列を有する合成DNAをプライマーとしてPCR反応を行ったところ、マーカー除去用DNA断片と同じ長さのDNA断片が増幅された。
実施例1で得たaspC欠損株BWC/pKD46株からpKD46プラスミドを脱落させBWC株を得た。具体的には8mLのLB液体培地を入れた試験管に植菌して42℃一晩振とう培養を行い、得られた培養液をLB寒天培地〔トリプトン(ディフコ社製)10g、塩化ナトリウム5g、酵母エキス(ディフコ社製)5g、バクトアガー(ディフコ社製)20gを水1Lに含みpH7.2に調整した培地〕にストリークし、出現したコロニーの中からアンピシリン100mg/Lを含むLB寒天培地で生育できなくなったものを選抜した。
aspC変異株BWC株、及び親株であるBW25113株(CGSC#7736)をLB寒天培地で30℃、24時間培養した後、それぞれをLB液体培地〔トリプトン(ディフコ社製)10g、塩化ナトリウム5g、酵母エキス(ディフコ社製)5gを水1Lに含みpH7.2に調整した培地〕350mLの入った三角フラスコに植菌し、30℃で16時間培養した。
得られた種培養液20mLを、本培養培地〔グルコース45g、酵母エキスパウダー(AY−80;アサヒフードアンドヘルスケア社製)10g/L、硫酸アンモニウム10g、塩化ナトリウム2g/L、リン酸水素二カリウム1.0g、硫酸マグネシウム7水和物0.5g、硫酸鉄7水和物278mg、硫酸マンガン5水和物10mg、チアミン塩酸塩8mgを水1Lに含む。滅菌後に硫酸でpH7.0に調整。〕780mLの入ったジャーファーメンターに植菌し、攪拌回転数毎分800回転、通気毎分1L、30℃で16時間培養した。
遠心分離により培養液から菌体を除去し、上清中のL−アミノ酸の蓄積量をBankらの方法[Anal.Biochem.,240,167(1996)]に従って高速液体クロマトグラフィー(HPLC)により定量した。
結果を表1に示す。
(1)プロリン分解酵素遺伝子putA破壊用DNA断片、putA領域に挿入したマーカーの除去用DNA断片、proB破壊用DNA断片、及びproB74変異導入用DNA断片の作製
各DNA断片は以下のようにして作製した。
大腸菌MG1655株ゲノムDNAを鋳型に、配列番号17の配列を有する合成DNA、及び配列番号19の配列を有する合成DNAをプライマーとしてPCR反応を行い、putAを含むDNA断片を増幅した。得られたDNA断片を鋳型にputAの5’領域を配列番号17の配列を有する合成DNAと配列番号21の配列を有する合成DNAで、putAの3’領域を配列番号19の配列を有する合成DNAと配列番号22の配列を有する合成DNAでそれぞれPCR反応により増幅し、得られたDNA断片をDNA断片精製キットで精製した。次にこの2断片と実施例1の(1)で得られたcat−sacBカセットを混合してこれを鋳型とし、配列番号18の配列を有する合成DNAと配列番号20の配列を有する合成DNAをプライマーとしてPCR反応を行い3断片の連結と増幅を行った。この操作により得られたDNA断片はputA遺伝子の5’側配列と3’側配列の間にクロラムフェニコール耐性遺伝子とレバンシュークラーゼ遺伝子が挿入された構造をもっている。このDNA断片をputA破壊用DNA断片として用いた。
さらに配列番号17の配列を有する合成DNA、及び配列番号19の配列を有する合成DNAをプライマーとしてPCR反応で増幅されたputA遺伝子を含むDNA断片を鋳型にして、配列番号17の配列を有する合成DNAと配列番号24の配列を有する合成DNAをプライマーとして用いputA遺伝子の5’側領域を、配列番号19の配列を有する合成DNAと配列番号23の配列を有する合成DNAをプライマーとして用い3’側領域をそれぞれPCR反応で増幅し、得られたDNA断片をDNA断片精製キットで精製した。次にこの2断片を混合してこれを鋳型とし、配列番号18の配列を有する合成DNAと配列番号20の配列を有する合成DNAをプライマーとしてPCR反応を行い2断片の連結と増幅を行った。この操作により得られたDNA断片はputA遺伝子の5’側領域と3’側領域が直接つながっており、putA遺伝子の大部分が欠損した構造になっている。このDNA断片をputA領域に挿入したマーカーの除去用DNA断片として用いた。
次に大腸菌MG1655株ゲノムDNAを鋳型に、配列番号25の配列を有する合成DNA、及び配列番号27の配列を有する合成DNAをプライマーとしてPCR反応を行い、proBを含むDNA断片を増幅した。得られたDNA断片を鋳型にproBの5’’領域を配列番号25の配列を有する合成DNAと配列番号29の配列を有する合成DNAで、proBの3’領域を配列番号27の配列を有する合成DNAと配列番号30の配列を有する合成DNAでそれぞれPCR反応により増幅し、得られたDNA断片をDNA断片精製キットで精製した。次にこの2断片と実施例1の(1)で得られたcat−sacBカセットを混合してこれを鋳型とし、配列番号26の配列を有する合成DNAと配列番号28の配列を有する合成DNAをプライマーとしてPCR反応を行い3断片の連結と増幅を行った。この操作により得られたDNA断片はproB遺伝子の5’側配列と3’側配列の間にクロラムフェニコール耐性遺伝子とレバンシュークラーゼ遺伝子が挿入された構造をもっている。このDNA断片をproB破壊用DNA断片として用いた。
さらに配列番号25、及び27の合成DNAをプライマーとしてPCR反応で増幅されたproB遺伝子を含むDNA断片を鋳型にして、配列番号25の配列を有する合成DNAと配列番号32の配列を有する合成DNAをプライマーとして用いproB遺伝子の5’側領域を、配列番号27の配列を有する合成DNAと配列番号31の配列を有する合成DNAをプライマーとして用い3’側領域をそれぞれPCR反応で増幅し、得られたDNA断片をDNA断片精製キットで精製した。次にこの2断片を混合してこれを鋳型とし、配列番号26の配列を有する合成DNAと配列番号28の配列を有する合成DNAをプライマーとしてPCR反応を行い2断片の連結と増幅を行った。この操作により得られたDNA断片はproB遺伝子の319番目の塩基がAからGに置換されている。この変異が導入されたproB74がコードするγグルタミルキナーゼはプロリンによるフィードバック阻害が解除されていることが報告されている[Gene,64,199(1988)]。この操作によって得られたDNA断片をproB74変異導入用DNA断片として用いた。
プロリン分解酵素遺伝子putA破壊用DNA断片、及びputA領域に挿入したマーカーの除去用DNA断片を用い、BW25113/pKD46に実施例1の(3)と同様の操作を行ってBWA/pKD46株を得た。
aspC破壊用DNA断片、及びaspC領域に挿入したマーカーの除去用DNA断片を用い、BWA/pKD46株に実施例1の(3)と同様の操作を行ってBWAC/pKD46株を得た。
proB破壊用DNA断片、及びproB74変異導入用DNA断片を用い、BWA/pKD46株、及びBWAC/pKD46株に実施例1の(3)と同様の操作を行ってBWAP/pKD46株、及びBWACP/pKD46株をそれぞれに得た。
実施例3で得たBWAP/pKD46株及びaspC欠損株BWACP/pKD46からpKD46プラスミドを脱落させ、BWAP株及びBWACP株をそれぞれ得た。BWAP株、及びBWACP株をLB寒天培地で30℃、24時間培養し、菌株をそれぞれLB液体培地8mLの入った試験管に植菌し、30℃で16時間培養した。
得られた種培養液0.4mLを、それぞれ、本培養培地〔グルコース20g、酵母エキスパウダー(AY−80;アサヒフードアンドヘルスケア社製)4g/L、硫酸アンモニウム10g、塩化ナトリウム2g/L、リン酸水素二カリウム1.0g、硫酸マグネシウム7水和物0.5g、硫酸鉄7水和物278mg、炭酸カルシウム25gを水1Lに含む。滅菌後に硫酸でpH7.0に調整。〕8mLの入った試験管に植菌し、30℃で30時間培養した。
遠心分離により培養液から菌体を除去し、上清中のL−アミノ酸の蓄積量を高速液体クロマトグラフィー(HPLC)により定量した。
結果を表2に示す。
(1)N―アセチルグルタミン酸合成酵素遺伝子argA破壊用DNA断片、argA215変異導入用DNA断片、argR破壊用DNA断片、及びargR領域に挿入したマーカーの除去用DNA断片の作製
大腸菌MG1655株ゲノムDNAを鋳型に、配列番号33の配列を有する合成DNA、及び配列番号35の配列を有する合成DNAをプライマーとしてPCR反応を行い、argAを含むDNA断片を増幅した。得られたDNA断片を鋳型にargAの5’’領域を配列番号33の配列を有する合成DNAと配列番号37の配列を有する合成DNAで、argAの3’領域を配列番号35の配列を有する合成DNAと配列番号38の配列を有する合成DNAでそれぞれPCR反応により増幅し、得られたDNA断片をDNA断片精製キットで精製した。次にこの2断片と実施例1の(1)で得られたcat−sacBカセットを混合してこれを鋳型とし、配列番号34の配列を有する合成DNAと配列番号36の配列を有する合成DNAをプライマーとしてPCR反応を行い3断片の連結と増幅を行った。この操作により得られたDNA断片はargA遺伝子の5’側配列と3’側配列の間にクロラムフェニコール耐性遺伝子とレバンシュークラーゼ遺伝子が挿入された構造をもっている。このDNA断片をargA破壊用DNA断片として用いた。
さらに配列番号33の配列を有する合成DNA、及び配列番号35の配列を有する合成DNAをプライマーとしてPCR反応で増幅されたargA遺伝子を含むDNA断片を鋳型にして、配列番号33の配列を有する合成DNAと配列番号40の配列を有する合成DNAをプライマーとして用いargA遺伝子の5’側領域を、配列番号35の配列を有する合成DNAと配列番号39の配列を有する合成DNAをプライマーとして用い3’側領域をそれぞれPCR反応で増幅し、得られたDNA断片をDNA断片精製キットで精製した。
次にこの2断片を混合してこれを鋳型とし、配列番号34の配列を有する合成DNAと配列番号36の配列を有する合成DNAをプライマーとしてPCR反応を行い2断片の連結と増幅を行った。この操作により得られたDNA断片はargA遺伝子の56番目の塩基がAからGに置換されている。この変異が導入されたargA215がコードするN−アセチルグルタミン酸合成酵素はアルギニンによるフィードバック阻害が解除されていることが報告されている[Appl.Environ.Microbiol.,64,1805(1998)]。この操作によって得られたDNA断片をargA215変異導入用DNA断片として用いた。
次に大腸菌MG1655株ゲノムDNAを鋳型に、配列番号41の配列を有する合成DNA、及び配列番号43の配列を有する合成DNAをプライマーとしてPCR反応を行い、argRを含むDNA断片を増幅した。得られたDNA断片を鋳型にargRの5’領域を配列番号41の配列を有する合成DNAと配列番号45の配列を有する合成DNAで、argRの3’領域を配列番号43の配列を有する合成DNAと配列番号46の配列を有する合成DNAでそれぞれPCR反応により増幅し、得られたDNA断片をDNA断片精製キットで精製した。次にこの2断片と実施例1の(1)で得られたcat−sacBカセットを混合してこれを鋳型とし、配列番号42の配列を有する合成DNAと配列番号44の配列を有する合成DNAをプライマーとしてPCR反応を行い3断片の連結と増幅を行った。この操作により得られたDNA断片はargR遺伝子の5’側配列と3’側配列の間にクロラムフェニコール耐性遺伝子とレバンシュークラーゼ遺伝子が挿入された構造をもっている。このDNA断片をargR破壊用DNA断片として用いた。
さらに配列番号41の配列を有する合成DNA、及び配列番号43の配列を有する合成DNAをプライマーとしてPCR反応で増幅されたargR遺伝子を含むDNA断片を鋳型にして、配列番号41の配列を有する合成DNAと配列番号48の配列を有する合成DNAをプライマーとして用いargR遺伝子の5’側領域を、配列番号43の配列を有する合成DNAと配列番号47の配列を有する合成DNAをプライマーとして用い3’側領域をそれぞれPCR反応で増幅し、得られたDNA断片をDNA断片精製キットで精製した。次にこの2断片を混合してこれを鋳型とし、配列番号42の配列を有する合成DNAと配列番号44の配列を有する合成DNAをプライマーとしてPCR反応を行い2断片の連結と増幅を行った。この操作により得られたDNA断片はargR遺伝子の5’側領域と3’側領域が直接つながっており、argR遺伝子の大部分が欠損した構造になっている。このDNA断片をargR領域に挿入したマーカーの除去用DNA断片として用いた。
N―アセチルグルタミン酸合成酵素遺伝子argA破壊用DNA断片、及びargA215変異導入用DNA断片を用い、BW25113/pKD46株に実施例1の(3)と同様の操作を行って目的の株を得た。
argR破壊用DNA断片、及びargR領域に挿入したマーカーの除去用DNA断片を用い、上記(2)で得られた株に実施例1の(3)と同様の操作を行ってBWR/pKD46株を得た。
aspC破壊用DNA断片、及びaspC領域に挿入したマーカーの除去用DNA断片を用い、BWR株に実施例1の(3)と同様の操作を行って目的の株、BWRC/pKD46株を得た。
実施例5で得たBWR/pKD46株、及びaspC欠損株BWRC/pKD46からpKD46プラスミドを脱落させBWR株、及びBWRC株を得た。実施例4と同じ方法で、BWR、BWRCの各菌株のアミノ酸の生産試験を行った。
結果を表3に示す。
実施例3の(2)、及び(3)にて作製したBWA/pKD46株、及びBWAC/pKD46株からpKD46プラスミドを脱落させBWA株、及びBWAC株を得たのち、文献[J.Biosci.Bioeng.,90,522(2000)]記載のプラスミドpWFP1をDowerらの方法[Nucleic Acids Research,16,6127(1988)]にしたがってエレクトロポレーション法により導入し、アンピシリン耐性を指標にそれぞれの形質転換体を得た。
実施例4と同じ方法で、実施例7で作製したBWA/pWFP1、BWAC/pWFP1の各菌株のアミノ酸生産試験を行った。
結果を表4に示す。
配列番号4−人工配列の説明:合成DNA
配列番号5−人工配列の説明:合成DNA
配列番号6−人工配列の説明:合成DNA
配列番号7−人工配列の説明:合成DNA
配列番号8−人工配列の説明:合成DNA
配列番号9−人工配列の説明:合成DNA
配列番号10−人工配列の説明:合成DNA
配列番号11−人工配列の説明:合成DNA
配列番号12−人工配列の説明:合成DNA
配列番号13−人工配列の説明:合成DNA
配列番号14−人工配列の説明:合成DNA
配列番号15−人工配列の説明:合成DNA
配列番号16−人工配列の説明:合成DNA
配列番号17−人工配列の説明:合成DNA
配列番号18−人工配列の説明:合成DNA
配列番号19−人工配列の説明:合成DNA
配列番号20−人工配列の説明:合成DNA
配列番号21−人工配列の説明:合成DNA
配列番号22−人工配列の説明:合成DNA
配列番号23−人工配列の説明:合成DNA
配列番号24−人工配列の説明:合成DNA
配列番号25−人工配列の説明:合成DNA
配列番号26−人工配列の説明:合成DNA
配列番号27−人工配列の説明:合成DNA
配列番号28−人工配列の説明:合成DNA
配列番号29−人工配列の説明:合成DNA
配列番号30−人工配列の説明:合成DNA
配列番号31−人工配列の説明:合成DNA
配列番号32−人工配列の説明:合成DNA
配列番号33−人工配列の説明:合成DNA
配列番号34−人工配列の説明:合成DNA
配列番号35−人工配列の説明:合成DNA
配列番号36−人工配列の説明:合成DNA
配列番号37−人工配列の説明:合成DNA
配列番号38−人工配列の説明:合成DNA
配列番号39−人工配列の説明:合成DNA
配列番号40−人工配列の説明:合成DNA
配列番号41−人工配列の説明:合成DNA
配列番号42−人工配列の説明:合成DNA
配列番号43−人工配列の説明:合成DNA
配列番号44−人工配列の説明:合成DNA
配列番号45−人工配列の説明:合成DNA
配列番号46−人工配列の説明:合成DNA
配列番号47−人工配列の説明:合成DNA
配列番号48−人工配列の説明:合成DNA
Claims (3)
- L−アミノ酸を生成する能力を有し、かつアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ活性が親株に比べて低下又は喪失したエシェリヒア(Escherichia)属に属する微生物を培地に培養し、培養物中にL−アミノ酸を生成蓄積せしめ、該培養物からL−アミノ酸を採取することを特徴とする、L−アミノ酸の製造法であって、
前記アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼが、
(1)配列番号2で表されるアミノ酸配列からなる蛋白質
(2)配列番号2で表されるアミノ酸配列において、1〜20個のアミノ酸が欠失、置換もしくは付加されたアミノ酸配列からなり、かつアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ活性を有する蛋白質、及び
(3)配列番号2で表されるアミノ酸配列と95%以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ活性を有する蛋白質
より選ばれる蛋白質であり、かつ、
前記L−アミノ酸が、L−グルタミン酸、L−グルタミン、L−プロリン、L−オルニチン、L−シトルリン、L−アルギニンおよびL−ヒドロキシプロリンからなる群より選ばれるアミノ酸であることを特徴とする、製造法(ただし、D−アミノ酸が添加された培地を用いる方法を除く)。 - アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ活性が親株に比べて低下又は喪失したエシェリヒア(Escherichia)属に属する微生物が、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼをコードするDNAを欠損したエシェリヒア(Escherichia)属に属する微生物である、請求項1記載のL-アミノ酸の製造法。
- アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼが、以下の(1)〜(2)より選ばれるDNAにコードされる、請求項1又は2に記載のL−アミノ酸の製造法。
(1)配列番号1で表される塩基配列からなるDNA
(2)配列番号1で表される塩基配列と95%以上の同一性を有し、かつアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ活性を有する蛋白質をコードするDNA
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2010550524A JP5698001B2 (ja) | 2009-02-10 | 2010-02-09 | アミノ酸の製造法 |
Applications Claiming Priority (4)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2009028693 | 2009-02-10 | ||
JP2009028693 | 2009-02-10 | ||
JP2010550524A JP5698001B2 (ja) | 2009-02-10 | 2010-02-09 | アミノ酸の製造法 |
PCT/JP2010/051905 WO2010092959A1 (ja) | 2009-02-10 | 2010-02-09 | アミノ酸の製造法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPWO2010092959A1 JPWO2010092959A1 (ja) | 2012-08-16 |
JP5698001B2 true JP5698001B2 (ja) | 2015-04-08 |
Family
ID=42561801
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2010550524A Active JP5698001B2 (ja) | 2009-02-10 | 2010-02-09 | アミノ酸の製造法 |
Country Status (4)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US9023622B2 (ja) |
EP (1) | EP2397545B1 (ja) |
JP (1) | JP5698001B2 (ja) |
WO (1) | WO2010092959A1 (ja) |
Families Citing this family (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP5951968B2 (ja) * | 2011-11-24 | 2016-07-13 | 協和発酵バイオ株式会社 | L−アスパラギンの製造法 |
CN109971800A (zh) * | 2019-05-17 | 2019-07-05 | 南通普悦生物医药有限公司 | 酶解法制l-羟基脯氨酸的方法 |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5316943A (en) * | 1988-06-14 | 1994-05-31 | Kidman Gene E | Racemic conversion of using a transaminase |
Family Cites Families (18)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS5618596A (en) | 1979-07-23 | 1981-02-21 | Ajinomoto Co Inc | Production of l-lysine through fermentation process |
JPS56144092A (en) | 1980-04-14 | 1981-11-10 | Ajinomoto Co Inc | Preparation of l-methionine by fermentation |
DE3127361A1 (de) | 1981-07-08 | 1983-02-03 | Schering Ag, 1000 Berlin Und 4619 Bergkamen | Herstellung und anwendung von plasmiden mit genen fuer die biosynthese von l-prolin |
GB8301700D0 (en) | 1983-01-21 | 1983-02-23 | Searle & Co | Cloning and utilisation of aminotransferase genes |
GB8403244D0 (en) | 1984-02-07 | 1984-03-14 | Searle & Co | Aminoacids via bioconversion |
JPH06102028B2 (ja) * | 1985-10-04 | 1994-12-14 | 協和醗酵工業株式会社 | アミノ酸の製造法 |
JPS6394985A (ja) | 1986-10-09 | 1988-04-26 | Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd | L−チロシンの製造法 |
JPH06102028A (ja) | 1992-09-22 | 1994-04-12 | Nikon Corp | 光学式非接触距離測定機及び測定方法 |
DE19539952A1 (de) | 1995-10-26 | 1997-04-30 | Consortium Elektrochem Ind | Verfahren zur Herstellung von O-Acetylserin, L-Cystein und L-Cystein-verwandten Produkten |
SK285201B6 (sk) | 1996-12-05 | 2006-08-03 | Ajinomoto Co., Inc. | Rekombinantná DNA, autonómne reprodukovaná v bunkách koryneformnej baktérie, koryneformná baktéria a spôsob výroby L-lyzínu, vektor pVK7 |
JP4168463B2 (ja) | 1996-12-05 | 2008-10-22 | 味の素株式会社 | L−リジンの製造法 |
AU725516B2 (en) * | 1997-09-19 | 2000-10-12 | Metabolix, Inc. | Biological systems for manufacture of polyhydroxyalkanoate polymers containing 4-hydroxyacids |
AU760575C (en) * | 1998-04-13 | 2005-04-14 | University Of Georgia Research Foundation, Inc., The | Pyruvate carboxylase overexpression for enhanced production of oxaloacetate-derived biochemicals in microbial cells |
DE19949579C1 (de) | 1999-10-14 | 2000-11-16 | Consortium Elektrochem Ind | Verfahren zur fermentativen Herstellung von L-Cystein oder L-Cystein-Derivaten |
RU2230114C2 (ru) | 2001-11-30 | 2004-06-10 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" | Мутантная глутаминсинтетаза, фрагмент днк, штамм escherichia coli - продуцент l-глутамина и способ получения l-аминокислот |
RU2244007C2 (ru) | 2002-02-27 | 2005-01-10 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" | Способ получения l-треонина, штамм escherichia coli - продуцент треонина (варианты) |
JP4836440B2 (ja) * | 2004-03-10 | 2011-12-14 | センター・フォー・ディーエヌエイ・フィンガープリンティング・アンド・ダイアグノスティックス | 微生物を用いたアルギニン産生の方法 |
JP2009028693A (ja) | 2007-07-30 | 2009-02-12 | Nippon Paint Co Ltd | 塗膜形成方法 |
-
2010
- 2010-02-09 US US13/148,625 patent/US9023622B2/en active Active
- 2010-02-09 EP EP10741236.3A patent/EP2397545B1/en active Active
- 2010-02-09 WO PCT/JP2010/051905 patent/WO2010092959A1/ja active Application Filing
- 2010-02-09 JP JP2010550524A patent/JP5698001B2/ja active Active
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5316943A (en) * | 1988-06-14 | 1994-05-31 | Kidman Gene E | Racemic conversion of using a transaminase |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
JPN6014026501; J. Bacteriol. Vol.130, No.1, 1977, pp.429-440 * |
JPN6014026503; J. Gen. Microbiol. Vol.27, 1962, pp.41-50 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JPWO2010092959A1 (ja) | 2012-08-16 |
US9023622B2 (en) | 2015-05-05 |
EP2397545A1 (en) | 2011-12-21 |
EP2397545A4 (en) | 2012-08-29 |
EP2397545B1 (en) | 2015-07-29 |
US20110312042A1 (en) | 2011-12-22 |
WO2010092959A1 (ja) | 2010-08-19 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP4881739B2 (ja) | L−アルギニン、l−オルニチンまたはl−シトルリンの製造法 | |
JP2017023147A (ja) | 発酵法による目的物質の製造法 | |
WO2022017223A1 (zh) | 丙酮酸羧化酶基因启动子的突变体及其应用 | |
JP5698001B2 (ja) | アミノ酸の製造法 | |
KR102527895B1 (ko) | GlxR 단백질 변이체 또는 이를 이용한 쓰레오닌 생산방법 | |
ZA200507688B (en) | TDCBC/PCKA gene-inactivated microorganism and met hod of producing I-threonine using the same | |
JP5064396B2 (ja) | L‐グルタミンの製造法 | |
EP3797167B1 (en) | A method of producing the tripeptide gamma-glu-val-gly using enterobacteriaceae | |
JP5297804B2 (ja) | アミノ酸の製造法 | |
JPWO2013154182A1 (ja) | アミノ酸の製造法 | |
JP5827131B2 (ja) | L−グルタミンまたはl−グルタミン酸の製造法 | |
JP7549665B2 (ja) | L-分枝鎖アミノ酸生産能が強化された微生物及びそれを用いてl-分枝鎖アミノ酸を生産する方法 | |
KR102673796B1 (ko) | 신규한 아세토하이드록시산 신테아제 변이체 및 이를 이용한 l-이소류신 생산방법 | |
JP2024531681A (ja) | LysE変異体及びそれを用いたL-アルギニン生産方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20121221 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20140701 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20140829 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20150203 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20150212 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 5698001 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |