JP5656981B2

JP5656981B2 - 抗癌化合物およびこれを含有する医薬組成物

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Publication number: JP5656981B2
Application number: JP2012511323A
Authority: JP
Inventors: カリ，ジヤン−クリストフ; シエーブ，ミシエル; クレルク，フランソワ; コンボー，セシル; ゴンテイエ，シルビ; クリク，アラン; ラシヨー，シルベツト; シオ，ローラン
Original assignee: Sanofi SA
Current assignee: Sanofi SA
Priority date: 2009-05-18
Filing date: 2010-05-17
Publication date: 2015-01-21
Anticipated expiration: 2030-05-17
Also published as: MX2011012356A; SG176169A1; PL2432766T3; CO6400138A2; SI2432766T1; US20120220621A1; KR20120032483A; CN102459193A; CN102459193B; FR2945535A1; EA201171429A1; EP2432766A1; MA33356B1; JO2852B1; SMT201400005B; FR2945535B1; WO2010133794A1; EA021084B1; IL216361A0; ZA201108447B

Description

本発明は、式（Ｉ）の化合物：

およびこれを含む医薬組成物に関する。この化合物は、好ましくはＬ型（ｌｅｖｏｇｙｒａｔｏｒｙ）化合物（Ｉａ）である。この化合物は、抗癌成分として使用できる。本発明はまた、化合物（Ｉ）または（Ｉａ）を調製するための方法およびさらにこの方法における中間体の一部に関する。

多くの癌の治療方針は、オーロラタイプのキナーゼ、特に有糸分裂の調節に関与するオーロラＡおよびＢを阻害することを目的としている；この点に関して、ＮａｔｕｒｅＲｅｖｉｅｗｓ２００４，４，９２７−９３６；ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．２００２，９４，１３２０；Ｏｎｃｏｇｅｎｅ２００２，２１，６１７５；Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．２００９，２９（４），１０５９−１０７１；ＥｘｐｅｒｔＯｐｉｎ．Ｔｈｅｒ．Ｐａｔｅｎｔｓ２００５，１５（９），１１６９−１１８２；Ｃｌｉｎ．ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．２００８，１４（６），１６３９を参照されたい。

一部のオーロラ阻害剤化合物（例えば、ＭｉｌｌｅｎｎｉｕｍからのＭＬＮ−８２３７、Ａｓｔｒａ−ＺｅｎｅｃａからのＡＺＤ−１１５２またはＳｕｎｅｓｉｓからのＳＮＳ−３１４）は、現在臨床試験にて評価中である。ＭＬＮ−８２３７はオーロラＡに対して選択的であるが、ＡＺＤ−１１５２はオーロラＢに対して選択的である。オーロラＡおよびＢの両方のキナーゼが癌においては調節解除されるので、両方のオーロラＡおよびＢを阻害することにより、一方のキナーゼまたは他方のキナーゼの選択的阻害に関連する利点が得られる。さらに、多種キナーゼ化合物、例えばオーロラＡおよびＢを含む多くのキナーゼを阻害するＡｓｔｅｘからの化合物ＡＴ−９２８３が存在する。このタイプの化合物に関して、オーロラキナーゼの阻害は、オーロラＡおよびＢ以外のキナーゼの阻害により副作用を生じる可能性があるので、実際に臨床的に活用され得ることを予測するのは困難である。そのため、本発明が解決することを意図する技術的問題の１つは、オーロラＡおよびＢの強力な選択的阻害剤である化合物を開発することである。

環状ヌクレオチドホスホジエステラーゼ酵素ＰＤＥ３は、平滑心臓および血管筋の筋細胞において生じる環状ヌクレオチドｃＡＭＰおよびｃＧＭＰにより媒介される信号伝達に主要な役割を果たす。小分子によるＰＤＥ３の阻害は変力および血管拡張作用を有し、これは、心収縮における欠損が１つの特徴である特定の心筋症の処置のために短期間では有用であることが証明され得る。しかし、これら分子の長期間の使用によりこうしたタイプの患者の死亡率が増大することが示されている。さらに、このタイプの病態が存在しない患者、例えば癌を患う患者においてＰＤＥ３阻害剤を使用することにより、心臓律動に所望でない作用を生じる場合がある。このため、抗癌治療の内容において、ＰＤＥ３を阻害しないことが重要である。この点に関して、Ｅｘｐ．Ｏｐｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．ｄｒｕｇｓ２００２，１１，１５２９−１５３６「ＩｎｈｉｂｉｔｏｒｓｏｆＰＤＥ３ａｓａｄｊｕｎｃｔｔｈｅｒａｐｙｆｏｒｄｉｌａｔｅｄｃａｒｄｉｏｍｙｏｐａｔｈｙ」；Ｅｕｒ．ＨｅａｒｔＪ．ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｓ２００２，４（ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔＤ），Ｄ４３−Ｄ４９「Ｗｈａｔｉｓｗｒｏｎｇｗｉｔｈｐｏｓｉｔｉｖｅｉｎｏｔｒｏｐｉｃｄｒｕｇｓ？Ｌｅｓｓｏｎｓｆｒｏｍｂａｓｉｃｓｃｉｅｎｃｅａｎｄｃｌｉｎｉｃａｌｔｒｉａｌｓ」を参照されたい。本発明が解決することを意図する別の技術的問題は、オーロラＡおよびＢ阻害剤化合物が酵素ＰＤＥ３を阻害しないことである。

抗癌成分は代謝安定性を示すことも重要である（ｓｅｃｔｉｏｎ１０．２．２ｏｆ「Ｃｈｉｍｉｅｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｑｕｅ」Ｇ．Ｌ．Ｐａｔｒｉｃｋ，ＤｅＢｏｅｃｋ，ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ２００３，ＩＳＢＮ＝２−７４４５−０１５４−９を参照されたい。）。この理由は、医薬化合物の薬物動態学が不適当であることが、医薬化合物の開発における失敗の主要原因の１つであるからである（Ｃｕｒｒ．Ｐｈａｒｍ．２００５，１１，３５４５「Ｗｈｙｄｒｕｇｓｆａｉｌ−ａｓｔｕｄｙｏｎｓｉｄｅｅｆｆｅｃｔｓｉｎｎｅｗｃｈｅｍｉｃａｌｅｎｔｉｔｉｅｓ」）。さらに、代謝は、薬物動態学におけるクリアランス、薬物相互作用、個体間変動ならびに臨床効果および臨床毒性の主要決定因子であることが多い（Ｃｕｒｒ．ＤｒｕｇＭｅｔａｂ．２００４，５（５），４４３−４６２「Ｈｕｍａｎｈｅｐａｔｏｃｙｔｅｓｉｎｐｒｉｍａｒｙｃｕｌｔｕｒｅ：ｔｈｅｃｈｏｉｃｅｔｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄｒｕｇｍｅｔａｂｏｌｉｓｍｉｎｍａｎ」）。本発明が解決することを意図する別の技術的問題は、オーロラＡおよびＢ阻害剤化合物が高い化学安定性および代謝安定性を示すことである。

Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．２００２，１２，１４８１−１４８４には、異なる三環状構造を有する化合物６Ａが表ＩＩに記載されている。

ＷＯ０１／３６４２２には、異なる三環状構造を有する化合物が記載されている。

ＷＯ２００４／００５３２３には、異なる三環状構造を有するＥＰＯレセプターとして式（ａ）の化合物Ｅ５Ａ２９が記載されている。

さらに、この化合物は、三環状の環系の上部に基−Ｏ−ベンゾイミダゾリルによって置換されたフェニル環を含んでいない。

ＷＯ２００５／０１６２４５には、式（ｂ）：

（式中、Ｒ_４は置換されたフェニル基を表してもよい。−Ｏ−ベンゾイミダゾリル基による置換は記載も示唆もされていない。）
の異なる三環状構造を有する抗癌化合物が記載されている。

ＷＯ２００７／０１２９７２およびＥＰ１７４６０９７には、式（ｃ）の抗癌化合物

および１つの実施形態において式（ｃ’）の化合物が記載されている。

Ｒ_２は、置換されたアリールまたはヘテロアリール基を表し、Ｘは、ＮまたはＣＲ_７を表し、Ｒ_５およびＲ_６は両方ともＨまたはＣＨ_３を表してもよい。ＷＯ２００７／０１２９７２には、式（Ｉ）の化合物を特徴とする基

が含有されている例はない。さらに、分割された化合物のうち、ＷＯ２００７／０１２９７２には、これがオーロラＡまたはＢに対して最も活性なＤ型化合物であることが教示されている（１４７頁の表における実施例１１９および１２０を参照）。

ＷＯ０２／０６２７９５には、式（ｄ）：

（式中、Ｒ_４およびＲ_５は、場合により、５−または６−員環を形成してもよい。）
の化合物が記載されている。

国際公開第０１／３６４２２号国際公開第２００４／００５３２３号国際公開第２００５／０１６２４５号国際公開第２００７／０１２９７２号欧州特許出願公開第１７４６０９７号明細書国際公開第０２／０６２７９５号

ＮａｔｕｒｅＲｅｖｉｅｗｓ２００４，４，９２７−９３６ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．２００２，９４，１３２０Ｏｎｃｏｇｅｎｅ２００２，２１，６１７５Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．２００９，２９（４），１０５９−１０７１ＥｘｐｅｒｔＯｐｉｎ．Ｔｈｅｒ．Ｐａｔｅｎｔｓ２００５，１５（９），１１６９−１１８２Ｃｌｉｎ．ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．２００８，１４（６），１６３９Ｅｘｐ．Ｏｐｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．ｄｒｕｇｓ２００２，１１，１５２９−１５３６「ＩｎｈｉｂｉｔｏｒｓｏｆＰＤＥ３ａｓａｄｊｕｎｃｔｔｈｅｒａｐｙｆｏｒｄｉｌａｔｅｄｃａｒｄｉｏｍｙｏｐａｔｈｙ」Ｅｕｒ．ＨｅａｒｔＪ．ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｓ２００２，４（ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔＤ），Ｄ４３−Ｄ４９「Ｗｈａｔｉｓｗｒｏｎｇｗｉｔｈｐｏｓｉｔｉｖｅｉｎｏｔｒｏｐｉｃｄｒｕｇｓ？Ｌｅｓｓｏｎｓｆｒｏｍｂａｓｉｃｓｃｉｅｎｃｅａｎｄｃｌｉｎｉｃａｌｔｒｉａｌｓ」ｓｅｃｔｉｏｎ１０．２．２ｏｆ「Ｃｈｉｍｉｅｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｑｕｅ」Ｇ．Ｌ．Ｐａｔｒｉｃｋ，ＤｅＢｏｅｃｋ，ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ２００３，ＩＳＢＮ＝２−７４４５−０１５４−９Ｃｕｒｒ．Ｐｈａｒｍ．２００５，１１，３５４５「Ｗｈｙｄｒｕｇｓｆａｉｌ−ａｓｔｕｄｙｏｎｓｉｄｅｅｆｆｅｃｔｓｉｎｎｅｗｃｈｅｍｉｃａｌｅｎｔｉｔｉｅｓ」Ｃｕｒｒ．ＤｒｕｇＭｅｔａｂ．２００４，５（５），４４３−４６２「Ｈｕｍａｎｈｅｐａｔｏｃｙｔｅｓｉｎｐｒｉｍａｒｙｃｕｌｔｕｒｅ：ｔｈｅｃｈｏｉｃｅｔｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄｒｕｇｍｅｔａｂｏｌｉｓｍｉｎｍａｎ」Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．２００２，１２，１４８１−１４８４

本発明は、式（Ｉ）の化合物：

より具体的には、Ｌ型形態（Ｉａ）、特にメタノール中０．６９８ｍｇ／ｍｌの濃度において旋光度［α］_Ｄ＝−３８．６±０．７を示す形態の化合物に関する。この化合物は、塩基の形態、または酸、特に医薬的に許容される酸との付加塩の形態で存在してもよい。この化合物は、オーロラＡおよびＢキナーゼの選択的阻害剤である。これは、抗癌成分として使用できる。

本発明はまた、この化合物および少なくとも１つの医薬的に許容される賦形剤を含む医薬組成物およびこの化合物を含む薬剤に関する。

本発明はまた、
以下の３つの化合物を共に反応させる工程であって、ＰＧがベンゾイミダゾールのＮＨ機能のための保護基を示し、

次の化合物を得る工程：
ベンゾイミダゾールのＮＨ機能を脱保護して式（Ｉ）の化合物を得る工程：
適切な場合には、Ｌ型化合物を単離する工程
を含む、化合物を調製するための方法に関する。

３つの化合物間の反応は、還流下のアルコール、特に１−ブタノールにて行われる。次の中間体も本発明の一部を形成する。

ＰＧは、例えば基

であってもよい。

本発明は、式（Ｉ）の化合物：

に関する。

この化合物は、ラセミ形態、または２つのＬ型（Ｉａ）およびＤ型（Ｉｂ）エナンチオマーの形態で存在し得る。Ｌ型化合物（Ｉａ）は、Ｄ型エナンチオマー（Ｉｂ）の活性よりも相当大きい、オーロラＡおよびＢキナーゼの選択的阻害活性を有する。Ｌ型化合物（Ｉａ）はまた、Ｄ型エナンチオマー（Ｉｂ）の活性よりも大きい抗増殖活性を有する（表Ｉ参照）。

３つの化合物（Ｉ）、（Ｉａ）および（Ｉｂ）は、塩基または酸の付加塩の形態で存在してもよい。塩は、医薬的に許容される酸を用いて調製されるのが有利であるが（Ｐ．Ｓｔａｈｌ，Ｃ．Ｗｅｒｍｕｔｈ；ＨａｎｄｂｏｏｋｏｆＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳａｌｔｓ；ＷｉｌｅｙＥｄ．ＩＳＢＮ−１３：９７８−３９０６３９０２６０，ＩＳＢＮ−１０：３９０６３９０２６８を参照されたい。）、いずれかの他のタイプの酸の塩も、例えば精製または単離工程のために使用されてもよく、本発明の一部を形成する。

化合物（Ｉ）および（Ｉａ）は、抗癌成分として使用されてもよく、または癌の処置のための薬剤を調製するために使用されてもよい。癌は、より具体的にはオーロラＡおよび／またはＢキナーゼが関与する癌である。

化合物（Ｉ）、（Ｉａ）および（Ｉｂ）は、以下のスキームＩに従って得られる。

工程１：２−ハロ−ベンゾイミダゾール（Ｈａｌ＝ＢｒまたはＣｌ）のＮＨ機能は、保護基ＰＧを用いて保護されてＡ１を得る。ＰＧ−Ｘは、保護基ＰＧを導入する試薬を表す。ＰＧは、より具体的にはジヒドロピラン（

）であってもよく、この場合ＰＧ−Ｘは３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン（

）を表す。

工程２：Ａ１は、塩基の存在下で３−ホルミル−フェノールと反応させ、対応するフェノラートイオンを生じてＢ１を得る。塩基は、例えばＮａＨのようなアルカリ金属水素化物であってもよい。反応は、ＤＭＦのような極性非プロトン性溶媒中で行われる。

工程３：Ｂ１である３−アミノ−２−エトキシカルボニルピロールおよび１，３−シクロヘキサンジオンは、例えば環流下のアルコール（例えば１−ブタノール）中で互いに反応してＣ１を得る。

工程４：Ｃ１のＮＨ機能を脱保護して、化合物（Ｉ）を得る。脱保護条件は、ＰＧの特性に依存する。例えば、ＰＧがジヒドロピランを表す場合、強酸が使用される。

工程５：例えばキラルクロマトグラフィを用いて、２つのエナンチオマー（Ｉａ）および（Ｉｂ）が単離される。

工程１から５それぞれについて、実施例１に記載の特定条件を参照できる。

分析方法
方法ＬＣ／ＭＳ−Ａ
分析のための生成物は、７０℃で恒温にしたＡｃｑｕｉｔｙＢｅｈＣ１８ＵＰＬＣカラム（１．７μｍ、２．１×５０ｍｍ（Ｗａｔｅｒｓ））にて分離され、１ｍｌ／分の流速にて０．１％ギ酸（溶媒Ｂ）を含有するアセトニトリルから０．１％のギ酸（溶媒Ａ）を含有する水への勾配を用いて溶出される；溶出プログラム：溶媒Ｂの５％での均一濃度段階０．１５分、５％から１００％への溶媒Ｂの勾配３．１５分、次いで０．１分かけて初期条件への回復。生成物は、ＡｃｑｕｉｔｙＰＤＡダイポールアレイＵＶ／ｖｉｓ検出器（Ｗａｔｅｒｓ、走査される波長範囲：１９２から４００ｎｍ）、Ｓｅｄｅｘ８５光散乱検出器（Ｓｅｄｅｒｅ、噴霧ガス：窒素、噴霧温度：３２℃、噴霧圧力３．８ｂａｒ）およびＡｃｑｕｉｔｙＳＱＤ質量分析計（Ｗａｔｅｒｓ、正イオンおよび負イオンモードにて操作、走査される質量範囲：８０から８００ａｍｕ）によって検出される。

方法ＬＣ／ＭＳ−Ｂ
スペクトルは、次の液体クロマトグラフィ条件の下で、正イオンおよび／または負イオン電子スプレーイオン化モード（ＥＳ＋／−）におけるＷａｔｅｒｓＵＰＬＣ−ＳＱＤ装置にて得られた：カラム：ＡＣＱＵＩＴＹＢＥＨＣ１８１．７μｍ、２．１×５０ｍｍ；Ｔ_カラム：５０℃；流速：１ｍｌ／分；溶媒：Ａ：Ｈ_２Ｏ（０．１％ギ酸）；Ｂ：ＣＨ_３ＣＮ（０．１％ギ酸）；勾配（２分）：０．８分で５％から５０％Ｂ；１．２分：１００％Ｂ；１．８５分１００％Ｂ；１．９５分５％Ｂ。

^１ＨＮＭＲ
スペクトルは、Ｂｒｕｋｅｒ分光計にて記録され、生成物はＤＭＳＯ−ｄ６中に溶解される。化学シフトδはｐｐｍ単位で表される。

ＩＲ
赤外スペクトルは、ＫＢｒディスク上に、２ｃｍ^−１の解像度で、ＮｉｃｏｌｅｔＮｅｘｕｓ分光計にて記録される。

旋光度の測定
旋光度は、Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ３４１旋光計にて記録した。

元素分析
元素分析は、ＴｈｅｒｍｏＥＡ１１０８分析器にて行った。

オーロラＡおよびＢに対する活性の測定
酵素のキナーゼ活性を阻害する能力は、異なる濃度の試験化合物（一般に０．１７から１００００ｎＭ）の存在下、酵素の残存キナーゼ活性を測定することによって見積もられる。ＩＣ_５０（５０％阻害濃度）を決定可能な用量−応答曲線を得る。キナーゼ活性は、３７℃で３０分の温置後、タンパク質ＮｕＭＡ（核有糸分裂装置タンパク質）の断片に組み込まれる量の放射活性ホスファート（３３Ｐ）の量の放射活性アッセイによって測定される。試験化合物は、まずジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中にて異なる濃度で溶解される。反応は、ＦｌａｓｈＰｌａｔｅマイクロタイタープレート（ＮｉｃｋｅｌＣｈｅｌａｔｅＦｌａｓｈＰｌａｔｅ−９６，ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）のウェル中で行われる。各ウェル（１００μｌ）は、５０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ＝７．５；１０ｍＭのＭｇＣｌ_２；５０ｍＭのＮａＣｌの緩衝液中に１０ｎＭオーロラＡ、５００ｎＭのＮｕＭＡ、１μＭのＡＴＰおよび０．２μＣｉのＡＴＰ−γ−３３Ｐ、１ｍＭのジチオトレイトールを含有する。ＤＭＳＯの最終パーセンテージは３％である。撹拌による均質化の後、プレートを３７℃で３０分間温置する。次いでウェルの内容物を取り出し、ウェルをＰＢＳ緩衝液で洗浄する。次いで放射活性をＴＲＩＬＵＸＩ４５０Ｍｉｃｒｏｂｅｔａカウンター（ＷＡＬＬＡＣ）を用いて測定する。各プレートにおいて、８個の対照ウェルが存在する：酵素および基質の存在下および本発明の化合物の不存在下で測定を行うための４つのポジティブ対照（最大キナーゼ活性）、ならびに酵素、基質および試験化合物の不存在下で測定を行うための４つのネガティブ対照（背景）。測定値を表Ｉに示す。

オーロラＡ
使用される組換え型ヒト酵素オーロラＡは、Ｎ−末端位置にてポリヒスチジンタグを有する全体形態で発現され、Ｅ．ｃｏｌｉに産生される。Ｃ−末端位置にポリ−ヒスチジンタグを有するヒトタンパク質ＮｕＭＡの断片（アミノ酸１７０１−２１１５）は、Ｅ．ｃｏｌｉにて組換え形態で発現される。

オーロラＢ／Ｉｎｃｅｎｐ
ヒト酵素オーロラＢ全体は、バキュロウィルス系にてヒトタンパク質Ｉｎｃｅｎｐ（ａａ８２１−９１８）の断片と共に同時発現され、昆虫細胞中に発現される。オーロラＢは、Ｎ−末端位置にてポリ−ヒスチジンタグを有するが、Ｉｎｃｅｎｐ断片は、Ｎ−末端位置にてグルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）タグを保持する。２つのタンパク質は、オーロラＢ／Ｉｎｃｅｎｐと呼ばれる複合体を形成する。Ｃ−末端位置にポリ−ヒスチジンタグを有するヒトタンパク質ＮｕＭＡの断片（ａａ１７０１−２１１５）は、Ｅ．ｃｏｌｉにて組換え形態で発現される。この断片は基質として使用される。

細胞増殖の測定
細胞（腫瘍細胞株ＨｅＬａ−参照：ＡＴＣＣＣＣＬ−２およびＨＣＴ１１６参照：ＡＴＣＣＣＣＬ−２４７）は試験化合物と９６時間接触されるが、最後の２４時間の間に^１４Ｃ−チミジンが添加される。細胞増殖は、細胞に組み込まれる^１４Ｃ−チミジンの量によって見積もられる。

試験化合物は溶解されて、ＤＭＳＯ中１０ｍＭにて原液を形成し、この原液を使用して、一般に１００００μＭから０．３μＭの一連の段階希釈を行い、これらの段階希釈は、細胞培養培地中に１／５０で希釈され（２０×溶液）、これを細胞培養プレート中で１／２０希釈のために使用する。試験化合物の最終濃度は、一般に１００００から０．３ｎＭである。

Ｄ０：細胞は、１８０μＬの培養培地中で９６ウェルのＣｙｔｏｓｔａｒプレートに播種される。次いでプレートは、５％ＣＯ_２、３７℃にて４時間恒温槽に置かれる。試験生成物は、２０×溶液から出発して、ウェルあたり、１０μＬの体積で添加される。この溶液は、培養培地中に２％ＤＭＳＯを含有する。このため、ＤＭＳＯの最終濃度は０．１％である。次いでプレートは、５％ＣＯ_２、３７℃にて７２時間恒温槽に置かれる。

Ｄ３：７２時間後、培養培地中、ウェルあたり１０μＬの^１４Ｃ−チミジン１０μＣｉ／ｍＬを添加する。次いでプレートは、５％ＣＯ_２、３７℃にて２４時間恒温槽に置かれる。

Ｄ４： ^１４Ｃチミジンの組み込みを、この２４時間の「パルス」期間後に、Ｍｉｃｒｏ−Ｂｅｔａ放射活性カウンター（Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ）にて測定する。試験生成物を有する細胞の総処置時間は９６時間である。

阻害％ＩＣ５０は、次の式を用いてエクセル計算される：

ＩＣ_５０は、値１に固定されたパラメータＤ（ヒル番号）を用いて、式２０５の補助によりＸＬｆｉｔソフトウェア（ＩＤＢＳ、英国）を用いて計算する。結果を表Ｉに示す。

酵素ＰＤＥ３の活性における本発明の化合物の作用の評価
酵素ＰＤＥ３の活性における本発明の化合物の作用は、ＣＥＲＥＰ社（Ｌｅｂｏｉｓｌ’Ｅｖｅｑｕｅ，８６６００Ｃｅｌｌｅｌ’Ｅｖｅｓｃａｕｌｔ，Ｆｒａｎｃｅ；ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｅｒｅｐ．ｆｒ）によって標準プロトコルに従って評価された（Ｂｅｎｄｅｒ，Ａ．Ｔ．，Ｂｅａｖｏ，Ｊ．Ａ．ＰｈａｒｍａｃｏｌＲｅｖ．２００６，５８，４８８−５２０を参照されたい。組換え形態の酵素ＰＤＥ３Ａは、Ｓｆ９細胞にて発現され、基質はｃＡＭＰであり、残存ＡＭＰｃはＨＴＲＦによって測定される。試験中の参照阻害剤はミルリノンであり、このＩＣ_５０は２７０ｎＭである。残存活性％は、阻害剤を使用しない対照に関連する。）結果は、５０％（ＩＣ_５０）によって阻害を誘導する濃度として、または化合物の設定濃度において測定された阻害％として表される。結果を表Ｉに示す。

化合物の化学安定性の測定
化合物の化学安定性は、種々の培地中で測定された：５０／５０（ｖ／ｖ）水／アセトニトリル混合物中の０．０５Ｎの塩酸；５０／５０（ｖ／ｖ）水／アセトニトリル混合物中の０．０５Ｎ水酸化ナトリウム；５０／５０（ｖ／ｖ）水／アセトニトリル混合物中のリン酸ナトリウム緩衝液、２５ｍＭ、ｐＨ＝７．４；１％（ｗ／ｖ）のベンジルアミン塩酸塩を含有する５０／５０（ｖ／ｖ）水／アセトニトリル混合物中のリン酸ナトリウム緩衝液２５ｍＭ、ｐＨ＝７．４；１％（ｖ／ｖ）の２−メルカプトエタノールを含有する５０／５０（ｖ／ｖ）水／アセトニトリル混合物中のリン酸ナトリウム緩衝液、２５ｍＭ、ｐＨ＝７．４。化合物は、ＤＭＳＯ中の１０ｍＭ原液の希釈によって、１００μＭの最終濃度にて試験下の培地中に希釈される。溶液を２０℃にて、合計４８時間貯蔵し、試験下の化合物の濃度をＨＰＬＣによって経時的（ｔ＝０、１、６、１２、２４および４８時間）に測定する。ＨＰＬＣ分析は、ＬｕｎａＣ１８カラム３０×４．６ｍｍ、３μｍ（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ）上にダイオードアレイ検出器を備えたＡｇｉｌｅｎｔシステム１１００装置を用いて行うが、この装置では、アセトニトリル（溶媒Ｂ）から、０．５％（ｖ／ｖ）のギ酸（溶媒Ａ）を含有する水への勾配を用い、流速１．５ｍｌ／分および温度２５℃で溶出する。溶出プログラムは、５分での１０から９０％への溶媒Ｂの勾配、続いて９０％の溶媒Ｂにて１分の均一濃度段階、１分かけて初期条件への回復からなる。試験下の生成物の濃度は、各生成物の最大波長におけるクロマトグラムにおける試験下の生成物の特徴的ピークの高さおよび面積から見積もられる。サンプリングのそれぞれの時間において測定される面積および高さは、時間０において試料のために得られた面積および高さに関連する。分解が観察される場合、得られた時間−濃度曲線から半減期が測定される。結果を表ＩＩに示す。

ヒトおよびマウス肝臓のミクロソーム調製物の存在下での代謝の評価
ミクロソーム調製物が、医薬化合物の代謝安定性を決定するのに依然として重要であるが、初代培養肝細胞の培養により、この固有クリアランスのより詳細な評価が可能になり、良好なビトロ−ビボ相間が、ヒトの肝クリアランスを示唆する。

本発明の化合物（５μＭ）は、ヒトおよびマウスミクロソーム肝臓フラクション（１ｍｇ／ｍｌのタンパク質）について生理学的温度にて温置され、ウシ血清アルブミン（１ｍｇ／ｍｌＢＳＡ）および還元形態のニコチンアミドアデニンジヌクレオチドホスファート（１ｍＭＮＡＤＰＨ）の存在下、リン酸塩緩衝液中に希釈される。温置を終了させるために、内部標準（ＩＳ）としてコルチコステロンを含有する４体積のアセトニトリルを添加する。試料を遠心分離し、上清を、液体クロマトグラフィ／タンデム型質量分析カップリング（ＬＣ／ＭＳ−ＭＳ）によって分析する。ＬＣ／ＭＳ−ＭＳ分析は、１１００シリーズのクロマトグラフィシステム（Ａｇｉｌｅｎｔ）およびＰａｌＣＴＣ自動注入器を備えたＱＴＲＡＰＡＰＩ４０００質量分析器（Ｓｃｉｅｘ）にて行う。データを得て、Ａｎａｌｙｓｔ１．４．１ソフトウェアを用いて分析する。試料を、３μｍＣ１８Ｐｏｌａｒｉｓカラムにて分離し、流速０．７ｍｌ／分にて、アセトニトリル（溶媒Ｂ）から０．１％ギ酸（溶媒Ａ）を含有する水への勾配を用いて溶出する。溶出プログラムは、２分で２０から９０％への溶媒Ｂの勾配；０．９分間の９０％の溶媒Ｂでの均一濃度段階および０．１分での初期条件への回復を含む。化合物および内部標準についてのクロマトグラフィのピーク面積を、Ａｎａｌｙｓｔ−Ｃｌａｓｓｉｃアルゴリズムを用いて積分する。本発明の生成物の代謝安定性は、温置の０分（ｔ０）および２０分（ｔ２０）後に測定された積分比（化合物のイオン電流／イオン電流ＩＳ）を比較することによって見積もられる。次いで代謝安定性は、次の式に従って消失％として表される：
代謝％＝（ｔ０でのピーク比−ｔ２０でのピーク比）／ｔ０でのピーク比
結果を表ＩＩＩに示す。

ヒト肝細胞の存在下でのクリアランスの評価
本発明の化合物（０．５または５μＭ）は、生理学的温度での恒温槽中において、特定ドナーから得られた新鮮なまたは凍結保存されたヒト肝細胞（約２０００００細胞／ウェル）の存在下でコラーゲンで覆われた４８ウェルプレート中にて２４時間温置する。温置は、培養培地（ＨＡＭＦ１２−ＷｉｌｌｉａｍＥ）を用いて行われる。種々の時間（０；０．５；１；２；４；６；８および２４時間）にて、１００μｌを各ウェルから試料化し、内部標準（ＩＳ）としてコルチコステロンを含有する７００μｌの７０／３０（ｖ／ｖ）アセトニトリル／水混合物を添加することによって動力学を停止する。次いで、細胞を解離し、細胞内および細胞外培地を混合し、−２０℃の凍結形態にてこれらの分析の前に貯蔵する。解凍後、試料を３００ｇで２０分間遠心分離し、上清を液体クロマトグラフィ／タンデム型質量分析カップリング（ＬＣ／ＭＳ−ＭＳ）によって分析する。ＬＣ／ＭＳ−ＭＳ分析は、１１００シリーズのクロマトグラフィシステム（Ａｇｉｌｅｎｔ）およびＰａｌＣＴＣ自動注入器を備えたＱＴＲＡＰＡＰＩ４０００質量分析器（Ｓｃｉｅｘ）にて行う。データを得て、Ａｎａｌｙｓｔ１．４．１ソフトウェアを用いて分析する。試料を、３μｍＣ１８Ｐｏｌａｒｉｓカラムにて分離し、流速０．７ｍｌ／分にて、アセトニトリル（溶媒Ｂ）から０．１％ギ酸（溶媒Ａ）を含有する水への勾配を用いて溶出する。溶出プログラムは、２分で２０から９０％への溶媒Ｂの勾配；０．９分間の９０％の溶媒Ｂでの均一濃度段階および０．１分での初期条件への回復を含む。本発明の生成物の濃度を、内部標準（ＩＳ）に関連した、生成物の特徴的イオンのイオン電流を積分することによって測定する。得られた化合物／ＩＳ比は、既知の濃度の較正曲線に関し、これによって本発明の生成物濃度を確認できる。固有クリアランス（ｍｌ．ｈ^−１．１０^−６細胞単位で表される。）は、次いで、ＷｉｎＮｏｎＬｉｎｓｏｆｔｗａｒｅ（５．０）を用いて、動力学的プロファイル（濃度／時間）から決定される。結果を表ＩＶに示す。

（実施例１）
エチル８−オキソ−９−［３−（１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルオキシ）フェニル］−４，５，６，７，８，９−ヘキサヒドロ−２Ｈ−ピロロ［３，４−ｂ］キノリン−３−カルボキシラート（Ｉ）の調製

Ａ１．２−クロロ−１−（テトラヒドロ−ピラン−２−イル）−１Ｈ−ベンゾイミダゾール（ＣＡＳ２０８３９８−２９−２）

１０ｌの反応器に、アルゴン下、撹拌しながら、２．５ｌのＴＨＦ、１８０ｇの２−クロロベンゾイミダゾール（１．１８モル）および３２５ｍｌの３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン（６．５６モル、３当量）を充填する。反応器を溶解が生じるまで加熱する（混合物の温度：４０℃）。次いで６．３ｇのパラ−トルエンスルホン酸（０．０３３モル、０．０２８当量）を導入する。温度を４９から５２℃に２．５時間維持する。１２℃で冷却を行い、７．６５ｇのナトリウムメトキシド（０．１４２モル、０．１２当量）を、合計１５分間撹拌を維持しながら添加する。次いで温度を１８℃にして、５ｌのｎ−ヘプタンを添加し、混合物全体を３００ｇのＣｌａｒｃｅｌＦＬＯ−Ｍにて濾過し、残余分を５ｌのｎ−ヘプタンで洗浄する。濾液を減圧下で乾燥するまで濃縮して、２９２．６ｇの２−クロロ−１−（テトラヒドロ−ピラン−２−イル）−１Ｈ−ベンゾイミダゾールを淡黄色の油の形態で得る（定量収率）。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：１．４２−２．０１（ｍ，５Ｈ）；２．２１−２．３４（ｍ，１Ｈ）；３．６９−３．７８（ｍ，１Ｈ）；４．１２（ｄ，Ｊ＝１１．４Ｈｚ，１Ｈ）；５．７２（ｄｄ，Ｊ＝２．４および１１．２Ｈｚ，１Ｈ）；７．２２−７．３４（ｍ，２Ｈ）；７．６２（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ）；７．７８（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ）。

Ｂ１：３−［１−（テトラヒドロ−ピラン−２−イル）−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルオキシ］ベンズアルデヒド

２つの２ｌの３ツ口丸底フラスコ（それぞれ、冷却器、温度計および撹拌シャフトを備える。）に、アルゴン下、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（フラスコあたり０．４ｌ）および３−ヒドロキシベンズアルデヒド（６８．５ｇ、フラスコ１；６４．２ｇ、フラスコ２；１．０８モル）を充填する。次いで水素化ナトリウム（鉱油中の６０％分散液）を、滴下し（フラスコ１：２６ｇ；フラスコ２：２４ｇ；１．２５モル、１．２当量）、添加中の最大温度は３２℃であり、８５％純度と見積もられる２−クロロ−１−（テトラヒドロ−ピラン−２−イル）−１Ｈ−ベンゾイミダゾール（Ａ１）を次いで導入する（フラスコ１：０．５ｌ中の１５１ｇのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド；フラスコ２：０．５ｌ中の１４２ｇのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド；１．０５モル、０．９７当量）。次いで混合物を還流加熱し（温度１４０℃、温度上昇時間４０分）、還流を１時間維持する。次いで加熱を停止し、混合物を１．５時間冷却させる。２つのフラスコの内容物を合わせる。合わせた混合物を徐々に５ｌの氷水に混合する。次いで得られた水相を４×２．５ｌの酢酸エチル（ＡｃＯＥｔ）で抽出する。次いで有機相を合わせ、３ｌの水で洗浄し、次いで２ｌの飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄し、最後にＭｇＳＯ_４を添加して一晩乾燥する。次いで得られた有機相をガラスフリット（多孔度４）で濾過し、減圧下で乾燥するまで濃縮して３８５ｇの褐色油を得る（ＬＣ／ＭＳ−Ａ、ｔｒ（保持時間）＝１．８６分、ＭＳ正イオンモードｍ／ｚ＝３２３．１６）。

上記で得られた粗生成物の１５８ｇ画分を１．５ｌのｎ−ヘプタン／ＡｃＯＥｔ混合物（８／２体積）に熱溶解させ、５００ｇのシリカ（７０−３０メッシュ）を合わせ、混合物を４５分間撹拌する。得られた懸濁液をＣｅｌｉｔｅで濾過し、３ｌのｎ−ヘプタン／ＡｃＯＥｔ混合物（８／２体積）で洗浄する。得られた有機相を減圧下で乾燥するまで濃縮する。残渣を機械的撹拌および超音波処理によって２００ｍｌのイソプロピルエーテルに再懸濁させ、次いでガラスフリット（多孔度３）で濾過する。得られた固体を２×４０ｍｌのイソプロピルエーテルで洗浄し、４０℃にて１６時間減圧下で乾燥させ、６８ｇの固体を得る。粗生成物の残りに適用された同様の処理により、８７．８ｇの固体を得る。得られた固体を合わせ、均質化して１５５．８ｇの３−［１−（テトラヒドロ−ピラン−２−イル）−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルオキシ］ベンズアルデヒドを淡ベージュ色の結晶形態で得る（ＬＣ／ＭＳ−Ａ、ｔｒ＝１．８７分、ＭＳ正イオンモードｍ／ｚ＝３２３．１３）。ＭＳ（ＬＣ／ＭＳ−Ｂ）：ｔｒ＝１．００分；［Ｍ＋Ｈ］＋：ｍ／ｚ３２３；^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：１．５４−１．６２（ｍ，１Ｈ）；１．６３−１．８４（ｍ，２Ｈ）；１．９２−２．０３（ｍ，２Ｈ）；２．３０−２．４２（ｍ，１Ｈ）；３．７０−３．７９（ｍ，１Ｈ）；４．１０（ｄ，Ｊ＝１１．５Ｈｚ，１Ｈ）；５．７４（ｄｄ，Ｊ＝２．１ａｎｄ１１．１Ｈｚ，１Ｈ）；７．１３−７．２２（ｍ，２Ｈ）；７．４３（ｄ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，１Ｈ）；７．６５（ｄ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，１Ｈ）；７．７３（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ）；７．７８−７．８３（ｍ，１Ｈ）；７．８７（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ）；７．９６（ｓ，１Ｈ）；１０．０５（ｓ，１Ｈ）。

上記で使用されたシリカ相を２ｌのｎ−ヘプタン／ＡｃＯＥｔ混合物（体積で１／１）で洗浄することにより、６７ｇの生成物を得て、これを減圧下で乾燥するまで濃縮する。生成物を２ｌのｎ−ヘプタン／ＡｃＯＥｔ混合物（体積で９／１）に溶解し、２８５ｇのシリカ（７０−３０メッシュ）を合わせ、撹拌し、超音波で１時間処理する。次いで懸濁液をＣｅｌｉｔｅで濾過し、固相を２ｌのｎ−ヘプタン／ＡｃＯＥｔ混合物（体積で９／１）で洗浄する。濾液を減圧下で乾燥するまで濃縮して、残渣を４００ｍｌのｎ−ヘプタン／エタノール混合物（体積で９５／５）に研和し、ガラスフリット（多孔度３）で濾過し、減圧下で乾燥して３５ｇの３−［１−（テトラヒドロ−ピラン−２−イル）−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルオキシ］ベンズアルデヒドを淡ベージュ色の結晶形態として得る（ＬＣ／ＭＳ−Ａ、ｔｒ＝１．９３分、ＭＳ正イオンモードｍ／ｚ＝３２３．１６）。

Ｃ１：エチル８−オキソ−９−｛３−［１−（テトラヒドロ−ピラン−２−イル）−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルオキシ］フェニル｝−４，５，６，７，８，９−ヘキサヒドロ−２Ｈ−ピロロ［３，４−ｂ］キノリン−３−カルボキシラート

２ｌの円錐フラスコに、磁性撹拌しながら、５０ｇの３−アミノ−２−エトキシカルボニルピロール塩酸塩および０．２０４ｌの２Ｎ水酸化ナトリウム溶液を充填する。混合物を周囲温度（ＡＴ）で１５分間撹拌し、次いで３×０．３ｌのジクロロメタンで抽出する。有機相を合わせ、ＭｇＳＯ_４で乾燥し、減圧下で乾燥するまで濃縮する。残渣をｎ−ペンタンで研和し、濾過し、減圧下で一定重量まで乾燥して、３６．４ｇの３−アミノ−２−エトキシカルボニルピロールを褐色固体の形態で得る。

撹拌シャフト、温度計および冷却器を備えた２ｌの３ツ口丸底フラスコに、１．２ｌの１−ブタノール、１４５ｇの３−［１−（テトラヒドロ−ピラン−２−イル）−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルオキシ］ベンズアルデヒド（０．４０５モル、Ｂ１）、６２．４ｇの３−アミノ−２−エトキシカルボニルピロール（１当量、０．４０５モル）、４６．８ｇの１，３−シクロヘキサンジオン（９７％形態（１当量、０．４０５モル））および７０．５ｍｌのＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１当量）を充填し、混合物を環流下におく（温度上昇時間５５分、３０分間の還流維持、温度１１４℃）。次いで混合物をＡＴまで冷却し、減圧下で乾燥するまで濃縮して、エチル８−オキソ−９−｛３−［１−（テトラヒドロ−ピラン−２−イル）−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルオキシ］フェニル｝−４，５，６，７，８，９−ヘキサヒドロ−２Ｈ−ピロロ［３，４−ｂ］キノリン−３−カルボキシラートを含有する２９０ｇの褐色油を得る（ＬＣ／ＭＳ−Ａ、ｔｒ＝１．９６分、ＭＳ正イオンモードｍ／ｚ＝５５３．３３）。３５ｇの３−［１−（テトラヒドロ−ピラン−２−イル）−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルオキシ］−ベンズアルデヒド（０．０９８モル、実施例Ｂ１）を用いて同様の操作を行い、エチル８−オキソ−９−｛３−［１−（テトラヒドロ−ピラン−２−イル）−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルオキシ］フェニル｝−４，５，６，７，８，９−ヘキサヒドロ−２Ｈ−ピロロ［３，４−ｂ］キノリン−３−カルボキシラートを含有する７２ｇの褐色油を得る（ＬＣ／ＭＳ−Ａ、ｔｒ＝１．９６分、ＭＳ正イオンモードｍ／ｚ＝５５３．３５）。

Ｄ１：エチル８−オキソ−９−［３−（１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルオキシ）フェニル］−４，５，６，７，８，９−ヘキサヒドロ−２Ｈ−ピロロ［３，４−ｂ］キノリン−３−カルボキシラート（化合物Ｉ）

２ｌの丸底フラスコに、エチル８−オキソ−９−｛３−［１−（テトラヒドロ−ピラン−２−イル）−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルオキシ］フェニル｝−４，５，６，７，８，９−ヘキサヒドロ−２Ｈ−ピロロ［３，４−ｂ］キノリン−３−カルボキシラート（実施例１．３）を含有する２２４ｇの褐色油、０．７ｌのエタノールおよび０．２４３ｌの２Ｎ塩酸を充填する。混合物をＡＴで１６時間撹拌し、次いでガラスフリット（多孔度４）で濾過する。濾液を減圧下で乾燥するまで濃縮して、残渣を０．５ｌのイソプロピルエーテルで研和する。得られた固体を、減圧下で一定重量に乾燥して、エチル８−オキソ−９−［３−（１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルオキシ）フェニル］−４，５，６，７，８，９−ヘキサヒドロ−２Ｈ−ピロロ［３，４−ｂ］キノリン−３−カルボキシラートを含有する２５３ｇの褐色固体を得る（ＬＣ／ＭＳ−Ａ、ｔｒ＝１．４６分、ＭＳ正イオンモードｍ／ｚ＝４６９．２９）。エチル８−オキソ−９−｛３−［１−（テトラヒドロ−ピラン−２−イル）−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルオキシ］フェニル｝−４，５，６，７，８，９−ヘキサヒドロ−２Ｈ−ピロロ［３，４−ｂ］キノリン−３−カルボキシラート（Ｃ１）を含有する５４ｇの褐色油を用いて同様の操作を行い、エチル８−オキソ−９−［３−（１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルオキシ）フェニル］−４，５，６，７，８，９−ヘキサヒドロ−２Ｈ−ピロロ［３，４−ｂ］キノリン−３−カルボキシラートを含有する６０ｇの褐色固体を得る（ＬＣ／ＭＳ−Ａ、ｔｒ＝１．４８分、ＭＳ正イオンモードｍ／ｚ＝４６９．２９）。

得られた生成物０．８ｇのアリコート画分を、ジクロロメタンの均一濃度段階で２０分、次いで０から１体積％へのジクロロメタン中のイソプロパノールの勾配で１時間、最後にジクロロメタン／イソプロパノール（体積で９９／１）の均一濃度段階で２０分で溶出する、５０ｇシリカカートリッジ（１０から９０μｍ）（ＢｉｏｔａｇｅＳＮＡＰ，ＫＰ−Ｓｉｌ）でのクロマトグラフィにより精製してもよい。予測生成物を含有する画分を合わせて、０．２１ｇの黄色固体を得る。同じスケールで行われる２つの同様のクロマトグラフィ分離の生成物をアセトニトリルから結晶化して、合計０．１６ｇのエチル８−オキソ−９−［３−（１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルオキシ）フェニル］−４，５，６，７，８，９−ヘキサヒドロ−２Ｈ−ピロロ［３，４−ｂ］キノリン−３−カルボキシラートをベージュ色の結晶形態として得る（ＬＣ／ＭＳ−Ａ、ｔｒ＝１．６１分、ＭＳ正イオンモードｍ／ｚ＝４６９．２８）。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：１．２９（ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，３Ｈ）；１．８０−１．９７（ｍ，２Ｈ）；２．１９−２．２７（ｍ，２Ｈ）；２．５５−２．６９（ｍ，１Ｈ）；２．８１（ｄｔ，Ｊ＝４．８および１７．２Ｈｚ，１Ｈ）；４．２６（ｑ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，２Ｈ）；５．１１（ｓ，１Ｈ）；６．７３（ｄ，Ｊ＝３．３Ｈｚ，１Ｈ）；７．０２−７．１６（ｍ，５Ｈ）；７．２５（ｔ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ）；７．３１−７．３８（ｍ，２Ｈ）；８．３４（ｓ，１Ｈ）；１１．３３（ｂｒｏａｄｓ，１Ｈ）；１２．２６（ｂｒｏａｄｓ，１Ｈ）。元素分析：Ｃ＝６８．７２％；Ｈ＝５．１０％；Ｎ＝１１．８２％；Ｈ_２Ｏ＝０．３８％。

（実施例２）
エチル８−オキソ−９−［３−（１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルオキシ）フェニル］−４，５，６，７，８，９−ヘキサヒドロ−２Ｈ−ピロロ［３，４−ｂ］キノリン−３−カルボキシラートのＬ型エナンチオマー（Ｉａ）
Ｌ型エナンチオマーを実施例Ｄ１の粗生成物から、ｎ−ヘプタン／ジクロロメタン／エタノール／トリエチルアミン混合物（体積で５０／４７．５／２．５／０．１）で溶出するＷｅｌｋ−０１ＲＲキラルカラム、１０μＭ、８０×３５０ｍｍ（Ｒｅｇｉｓ、米国）にて精製する。生成物の溶出を２６５ｎｍのＵＶ分光法により検出する。実施例Ｄ１に記載される１０ｇの粗生成物量を、各操作に注入する。これらの条件下、Ｌ型エナンチオマーに対応するピークを、５０から８０分のｔｒで溶出する。実施例Ｄ１に記載された３１０ｇの粗生成物を精製するために必要とされる操作に対応して精製されたＬ型エナンチオマー画分を合わせ、均質化し、減圧下で乾燥するまで濃縮して５０ｇのベージュ色固体を得る。マススペクトル（ＬＣ／ＭＳ−Ｂ）：ｔｒ＝０．７７分；［Ｍ＋Ｈ］＋：ｍ／ｚ４６９；［Ｍ−Ｈ］−：ｍ／ｚ４６７。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：１．２９（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ）；１．７９−１．９７（ｍ，２Ｈ）；２．１９−２．２７（ｍ，２Ｈ）；２．５５−２．６６（ｍ，１Ｈ）；２．８１（ｄｔ，Ｊ＝４．９および１７．１Ｈｚ，１Ｈ）；４．２６（ｑ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ）；５．１２（ｓ，１Ｈ）；６．７３（ｄ，Ｊ＝３．４Ｈｚ，１Ｈ）；７．０２−７．１６（ｍ，５Ｈ）；７．２５（ｔ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ）；７．２９−７．４１（ｍ，２Ｈ）；８．３２（ｓ，１Ｈ）；１１．３１（ｂｒｏａｄｓ，１Ｈ）；１２．２６（ｂｒｏａｄｓ，１Ｈ）。ＩＲ：主要バンド：１６７８；１５７８；１５２５；１４４２；１１８８；１０４３および７４３ｃｍ^−１。ｃ＝メタノール中０．６９８ｍｇ／ｍｌでの旋光度：［α］_Ｄ＝−３８．６±０．７。元素分析：Ｃ＝６８．１８％；Ｈ＝５．９２％；Ｎ＝１１．２２％；Ｈ_２Ｏ＝１．２５％。

（実施例３）
エチル８−オキソ−９−［３−（１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルオキシ）フェニル］−４，５，６，７，８，９−ヘキサヒドロ−２Ｈ−ピロロ［３，４−ｂ］キノリン−３−カルボキシラートのＤ型エナンチオマー（Ｉｂ）
Ｄ型エナンチオマーは、ｎ−ヘプタン／エタノール混合物（体積で７／３、次いで６／４）で溶出するＷｅｌｋ−０１ＳＳキラルカラム、１０μＭ、６０×３５０ｍｍ（Ｒｅｇｉｓ、米国）でのクロマトグラフィによって実施例Ｄ１からの精製された生成物の精製によって得られる。生成物の溶出をＵＶ分光法により検出する。Ｄ型エナンチオマーの画分を合わせ、均質化し、減圧下で乾燥するまで濃縮して１．９ｇの黄色粉末を得る。ＭＳ（ＬＣ／ＭＳ−Ｂ）：ｔｒ＝０．７７分；［Ｍ＋Ｈ］＋：ｍ／ｚ＝４６９．２；［Ｍ−Ｈ］−：ｍ／ｚ＝４６７．２。ｃ＝メタノール中３．６ｍｇ／ｍｌでの旋光度：［α］_Ｄ＝＋５３．１±１．１。

（実施例４から１３）
実施例４から１１の化合物をＷＯ２００７／０１２９７２（請求項２６の方法を参照されたい。）に記載の方法で調製した。式（ＩＩ）の三環状ジヒドロピリジン生成物を、スキームＩＩに従って調製してもよい。

ピラゾール（Ｘ＝Ｎ）またはピロール−２−カルボキシラート（Ｘ＝ＣＯＯＥｔ）の１当量混合物、１当量のアルデヒドＲ−ＣＨＯおよび１当量のジケトン誘導体（Ｙ＝ＣＨ_２、ＣＭｅ_２、Ｎ−Ｂｏｃ）をアルコール、例えばエタノールまたは１−ブタノール中で３０分間から数時間環流加熱する。次いで混合物を周囲温度に冷却する。所望の生成物を濾過によって単離し、または他には溶媒を乾燥するまで蒸発させる。必要に応じて、粗生成物をシリカゲル上のクロマトグラフィまたは他には高速分取液体クロマトグラフィ（ＨＰＬＣ）によって精製する。

ＹがＮ−Ｂｏｃを表す場合、生成物は、ジクロロメタン中のトリフルオロ酢酸（５０／５０）の溶液または他にはジオキサン中の塩酸溶液を用いて脱保護してもよい（スキームＩＩＩ）。

化合物４（Ｒ＝Ｈ）の調製に使用される一般式（ＩＩＩ）のアルデヒドを、スキームＩＶに従って得てもよい。Ｒは、ベンゾイミダゾール核において１つ（ｎ＝１）またはこれ以上（ｎは２から４）の置換基を示し、次のＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＯＨ、ＳＨ、ＣＦ_３、ＯＣＦ_３、ＯＣＨ_３、ＳＣＦ_３、ＳＣＨ_３、ＯＣＨＦ_２、ＯＣＨ_２Ｆ、ＳＣＨ_２Ｆ、（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキル、Ｏ−アリル、場合により１つ以上のハロゲン原子で置換されるフェニルから選択される。

工程１：３−ヨード−ベンズアルデヒドのアルデヒド機能を、アルコール保護基、より具体的にはジオール保護基（例えばエチレングリコール）を用いて、酸、例えばパラ−トルエンスルホン酸の存在下、不活性溶媒、例えばトルエン中、２０℃から反応混合物の沸騰温度の間の温度にて保護する。

工程２：形成された中間体を、パラジウム錯体、例えばビス（ジベンジリデンアセトン）パラジウム、ホスフィン誘導体、例えばビス［（２−ジフェニルホスフィノ）フェニル］エーテルおよび塩基、例えばナトリウムｔｅｒｔ−ブトキシドの存在下、不活性溶媒、例えばトルエン中、２０℃から反応混合物の沸騰温度までの温度にて、式（ＩＶ）の生成物と反応させる。

工程３：アルデヒド機能を、酸性水溶液、例えば塩酸の存在下、場合により溶媒、例えばアセトン中、２０℃から反応混合物の沸騰温度の間の温度にて、脱保護する。

表Ｉは、オーロラＡおよびＢ阻害活性、株ＨｅＬａおよびＨＣＴ１１６での抗増殖活性、ＰＤＥ３阻害活性および代謝を比較する。化合物（Ｉ）または（Ｉａ）は、オーロラＡおよびＢキナーゼの阻害のレベルが高く、株ＨｅＬａおよびＨＣＴ１１６に対する活性が非常に良好であることがわかった。

Claims

式（Ｉ）：

の化合物。
Ｌ型形態の請求項１に記載の化合物。
メタノール中０．６９８ｍｇ／ｍｌの濃度において旋光度［α］_Ｄ＝−３８．６±０．７を示す、請求項２に記載の化合物。
塩基の形態、または酸との付加塩の形態である、請求項１から３のいずれか一項に記載の化合物。
請求項１から４のいずれか一項に記載の化合物および少なくとも１つの医薬的に許容される賦形剤を含む医薬組成物。
オーロラＡおよびＢキナーゼの選択的阻害剤として使用するための、請求項５に記載の医薬組成物。
抗癌成分として使用するための、請求項５または６に記載の医薬組成物。
請求項１から４のいずれか一項に記載の化合物を含む薬剤。
請求項１から４のいずれか一項に記載の化合物を調製する方法であって、
ＰＧがベンゾイミダゾールのＮＨ機能のための保護基を示す、以下の３つの構成成分を共に反応させて、

化合物を得る工程：
ベンゾイミダゾールのＮＨ機能を脱保護して式（Ｉ）の化合物を得る工程：
適切な場合には、Ｌ型化合物を単離する工程
を含む方法。
３つの化合物間の反応が、還流下のアルコール中で行われる、請求項９に記載の方法。
ＰＧが基

を表す、請求項９から１０のいずれか一項に記載の方法。
次のリスト：

から選択される化合物であって、ＰＧはベンゾイミダゾールのＮＨ機能のための保護基を示す化合物。
ＰＧが基

を表す、請求項１２に記載の化合物。
請求項１から４のいずれか一項に記載の化合物の調製における中間体としての、請求項１２または１３に記載の化合物の使用。
請求項１から４のいずれか一項に記載の化合物の製造用の中間体であって、前記中間体が、請求項１２または１３に規定されるものである、中間体。