FR2967413A1 - Compose 8-oxo-9-[3-(1h-benzimidazol-2-yloxy)-phenyl]-4,5,6,7,8,9-hexahydro-2h-pyrrolo[3,4-b]quinoline-3-carboxylate d'ethyle, sel, forme cristalline, co-cristal, formulation, procedes de preparation, application a titre de medicaments, compositions pharmaceutiques et nouvelle utilisation notamment comme inhibiteur des kinases aurora. - Google Patents

Abstract

L'invention se rapporte plus précisément à un nouveau sel, co-cristal et formulations du 8-oxo-9-[3-(1 H-benzimidazol-2-yloxy)-phényl]-4,5,6,7,8,9-hexahydro-2H-pyrrolo[3,4-b]quinoline-3-carboxylate d'éthyle de formule (F) : à leurs préparations et leur utilisation en thérapeutique, notamment comme inhibiteurs sélectifs des kinases Aurora A et B, et pour leur utilisation en tant qu'anti cancéreux.

Description

Composé 8-oxo-9-[3-(1H-benzimidazol-2-yloxy)-phényl]-4,5,6,7,8,9-hexahydro-2H- pyrrolo[3,4-b]quinoline-3-carboxylate d'éthyle, sel, forme cristalline, co-cristal, formulation, procédés de préparation, application à titre de médicaments, compositions pharmaceutiques et nouvelle utilisation notamment comme inhibiteur des kinases aurora.

L'invention se rapporte ainsi au composé 8-oxo-9-[3-(1 H-benzimidazol-2-yloxy)-phényl]-4,5,6,7,8,9-hexahydro-2H-pyrrolo[3,4-b] quinoline-3-carboxylate d'éthyle, sel, forme cristalline, co-cristal, formulation, leurs procédés de préparation, leur application à titre de médicaments, compositions pharmaceutiques et leurs nouvelles utilisations notamment comme inhibiteurs des kinases Aurora. Le composé 8-oxo-9-[3-(1 H-benzimidazol-2-yloxy)-phényl]-4,5,6,7,8,9-hexahydro-2H-pyrrolo[3,4-b] quinoline-3-carboxylate d'éthyle sous forme de base libre appelé ci-après 15 composé F répond à la formule (F) ci-après, La préparation de ce composé (F) est décrite ci-après comme intermédiaire E1 à l'exemple 1 de la présente invention décrit ci-après. 20 La présente invention a ainsi pour objet le composé 8-oxo-9-[3-(1 H-benzimidazol-2-yloxy)-phényl]-4,5,6,7,8,9-hexahydro-2H-pyrrolo[3,4-b] quinoline-3-carboxylate d'éthyle ou composé F de formule (F) ci-après : (F) ce composé F étant sous forme: - de composé 1 sel sulfate dudit composé F - ou de composé 11 co-cristal dudit produit de formule (F) - ou de formulation renfermant ledit composé de formule (F) ou ledit composé 1 sel sulfate du produit de formule (F) ou ledit composé 11 co-cristal du produit de formule (F) tels que définis ci-dessus. La présente invention a ainsi pour objet le composé 1 tel que défini ci-dessus ou sel de 10 sulfate de. 8-oxo-9-[3-(1 H-benzimidazol-2-yloxy)-phényl]-4,5,6,7,8,9-hexahydro-2H-pyrrolo[3,4-b] quinoline-3-carboxylate d'éthyle qui a donc la formule (1) suivante : O (1) La présente invention a ainsi pour objet le composé 1 tel que défini ci-dessus ou sel de 15 sulfate du 8-oxo-9-[3-(1 H-benzimidazol-2-yloxy)-phényl]-4,5,6,7,8,9-hexahydro-2H-pyrrolo[3,4-b] quinoline-3-carboxylate d'éthyle caractérisé en ce qu'il est sous forme cristalline. La présente invention a ainsi pour objet le composé II tel que défini ci-dessus ou cocristal du produit de formule (F) 8-oxo-9-[3-(1 H-benzimidazol-2-yloxy)-phényl]-20 4,5,6,7,8,9-hexahydro-2H-pyrrolo[3,4-b]quinoline-3-carboxylate d'éthyle La présente invention a ainsi pour objet le composé II tel que défini ci-dessus ou co- cristal du 8-oxo-9-[3-(1 H-benzimidazol-2-yloxy)-phényl]-4,5,6,7,8,9-hexahydro-2H- 2 (F) pyrrolo[3,4-b]quinoline-3-carboxylate d'éthyle caractérisé en ce qu'il s'agiit du co-cristal de l'acide L-malique. La présente invention a également pour objet les formulations telles que définies ci-dessus caractérisées en ce qu'elles renferment ledit composé de formule (F) 8-oxo-9- [3-(1 H-benzimidazol-2-yloxy)-phényl]-4,5,6,7,8,9-hexahydro-2H-pyrrolo[3,4-b] quinoline-3-carboxylate d'éthyle ou ledit composé 1 sel sulfate du produit de formule (F) ou ledit composé 11 co-cristal du produit de formule (F) tels que définis ci-dessus. Les composés 1, 11 ou formulations tels que définis ci-dessus, objet de l'invention, sont des inhibiteurs sélectifs des kinases Aurora.

La présente invention est également relative à des compositions pharmaceutiques contenant ces composés. Ces composés peuvent être utilisés en tant qu'anticancéreux. L'invention est aussi relative aux procédés d'obtention de ces composés ainsi qu'à certains des intermédiaires desdits procédés. [Problème technique] Plusieurs stratégies pour traiter le cancer visent à inhiber les kinases du type Aurora, notamment Aurora A et B, qui sont impliquées dans la régulation de la mitose ; voir à ce propos Nature Reviews 2004, 4, 927-936 ; Cancer Res. 2002, 94, 1320 ; Oncogene 2002, 21, 6175 ; MOI.Cell.Blol. 2009, 29(4), 1059-1071 ; Expert Opin. Ther.

Patents 2005, 15(9), 1169-1182 ; CIin.Cancer Res. 2008, 14(6), 1639). Certains composés inhibiteurs d'Aurora (par exemple, MLN-8237 de la société Millenium, AZD-1152 de la société Astra-Zeneca ou SNS-314 de la société Sunesis) sont actuellement évalués en essais cliniques. MLN-8237 est sélectif vis d'Aurora A tandis que 1'AZD-1152 est sélectif vis à vis d'Aurora B. Les deux kinases, Aurora A et B, étant dérégulées dans le cancer, inhiber à la fois Aurora A et B procure un avantage par rapport à une inhibition sélective de l'une ou l'autre kinase. Par ailleurs, 11 existe des composés multikinases tel que le composé de la société Astex, AT-9283, qui inhibent plusieurs kinases dont Aurora A et B. 11 est difficile, pour ce type de composés, de prédire que l'inhibition des kinases Aurora pourra réellement être exploitée en clinique, car l'inhibition des autres kinases qu'Aurora A et B est susceptible d'engendrer des effets secondaires. Un problème technique qu'entend résoudre l'invention est donc de mettre au point un composé qui soit un inhibiteur puissant et sélectif d'Aurora A et B. L'enzyme phosphodiesterase à nucléotide cyclique PDE3 joue un rôle important dans la signalisation médiée par les nucléotides cycliques cAMP et cGMP qui a lieu dans les myocytes des muscles lisses cardiaques et vasculaires. L'inhibition de PDE3 par des petites molécules a une action inotrope et vasodilatatoire qui peut s'avérer utile à court terme pour le traitement de certaines cardiomyopathies présentant des défauts de contraction cardiaque. Toutefois, il a été montré que l'usage à long terme de ces molécules augmente la mortalité chez ce type de patients. En outre, l'utilisation d'inhibiteurs de PDE3 chez des patients ne présentant pas ce type de pathologie, tels que des patients atteints de cancer, peut entraîner des effets indésirables sur le rythme cardiaque. Il est donc important, dans le cadre d'une thérapie anticancéreuse, de ne pas inhiber PDE3. Voir à ce propos, Exp.Opin.Invest.drugs 2002, 11, 1529-1536 "Inhibitors of PDE3 as adjunct therapy for dilated cardiomyopathy" ; Eur. Heart J. supplements 2002, 4(supplement D), D43-D49 "What is wrong with positive inotropic drugs ? Lessons from basic science and clinical trials". Un autre problème technique qu'entend résoudre l'invention est que le composé inhibiteur d'Aurora A et B n'inhibe pas l'enzyme PDE3. Il est important également que l'anticancéreux présente une stabilité métabolique (voir chap.10.2.2 de « Chimie pharmaceutique » G.L.Patrick, De Boeck, éd. 2003, isbn= 2-7445-0154-9). En effet, l'insuffisance de la pharmacocinétique de composés pharmaceutiques est une des raisons majeures de l'échec de leur développement (Curr. Pharm. 2005,11, 3545 "Why drugs fail-a study on side effects in new chemical entities"). De plus, le métabolisme est souvent un déterminant majeur de la clairance, des interactions médicamenteuses, de la variabilité intrindividuelle de la pharmacocinétique ainsi que de l'efficacité clinique et de la toxicité (Curr.Drug Metab. 2004, 5(5), 443-462 "Human hepatocytes in primary culture: the choice to investigate drug metabolism in man"). Un autre problème technique qu'entend résoudre l'invention est que le composé inhibiteur d'Aurora A et B présente une bonne stabilité chimique et métabolique. [Art antérieur] Bioorg.Med.Chem.Lett. 2002, 12, 1481-1484 décrit dans le tableau II le composé 6A ayant une structure tricyclique différente. WO 01/36422 décrit des composés ayant une structure tricyclique différente. WO 2004/005323 décrit le composé E5A29 de formule (a) : Hic Hic (a) comme récepteur de l'EPO ayant une structure tricyclique différente. De plus, il ne comprend pas au sommet du tricycle de noyau phényle substitué par le groupe -O-benzimidazolyle. WO 2005/016245 décrit des composés anticancéreux présentant une structure tricyclique différente, de formule (b) : R~ R4 O N\ N'es N ~ I R2 R3 (b) dans laquelle R4 peut représenter un groupe phényle substitué. La substitution par le groupe -O-benzimidazolyle n'est pas décrite ni suggérée. WO 2007/012972 et EP 1746097 décrivent des composés anticancéreux de formule (c) HN _

Y' XN y" 1

R3 (C) et selon un mode de réalisation, selon la formule (c') : R2 O HN (c' ) R2 représente un groupe aryle ou hétéroaryle substitué, X représente N ou CR7, R5 et R6 peuvent représenter tous les deux H ou CH3. Aucun exemple de WO N 15 2007/012972 ne comporte le groupe qui caractérise le composé de formule (1). De plus, parmi les composés qui ont été dédoublés, WO 2007/012972 enseigne que ce sont les composés dextrogyres qui sont les plus actifs sur Aurora A ou B (cf.ex.119 et 120 dans le tableau en page 147). WO 02/062795 décrit des composés de formule (d) : 10 ~a H (d) dans laquelle R4 et R5 peuvent éventuellement former un cycle à 5 ou 6 chaînons. [Brève description de l'invention] Le sel sulfate cristallin et le co-cristal objet de la présente invention ont démontré un profil physico-chimique très amélioré (solubilité, stabilité) qui a permis la mise au point de formulation compatibles avec l'administration à l'homme. Le sel sulfate cristallin ou le co-cristal ainsi formulé a démontré une activité significative sur des modèles xénogreffés de tumeurs humaines chez la souris.

Les avantages apportés par la présente invention sont notamment : - l'identification d'un sel sulfate, sel cristallin ou composé I, d'un composé Il et des formulations, tels que définis ci-dessus, objet de la présente invention, comme inhibiteurs sélectifs des protéines kinases aurora. - ce sel sulfate ou composé I est cristallin alors que la base et beaucoup d'autres sels tels que par exemple chlorhydrate , phosphate, p- toluènesulfonate, naphtalène-1,5-disulfonate de ce produit sont amorphes. - Ce sel ou composé I, le composé II et formulations, objet de la présente invention, sont beaucoup plus solubles en milieu aqueux que la base amorphe ou composé F et autorisent donc de meilleures propriétés de formulation pour l'administration à l'homme. Les avantages du sel sulfate et du co-cristal de l'acide L-malique sont ainsi notamment d'être plus stables que la base en conditions de stockage à haute température et d'humidité. Les cristallins sont donc plus aisés à peser et distribuer que la base amorphe. Les avantages de la formulation sont notamment d'être compatible avec l'administration intra-veineuse i.v. à l'homme : elle permet de réduire l'apparition d'une impureté d'oxydation (exemple 3) et d'obtenir une solution stable plusieurs mois à 5°C compatible avec une utilisation en clinique.

La présente invention a notamment pour objet les formulations telle que définies ci-dessus caractérisées en ce qu'elles sont sous forme de solution miscellaire La présente invention a notamment pour objet les formulations telles que définies ci-dessus caractérisées en ce qu'elles sont sous forme de solution miscellaire compatibles avec une administration intra-veineuse. Méthodes analytiques utilisées pour la présente invention méthode LC/MS-A Les produits à analyser sont séparés sur une colonne UPLC modèle Aquity Beh C18 1,7 pm 2,1x50 mm (Waters) thermostatée à 70°C et éluée à un débit de 1 ml/min par un gradient d'acétonitrile contenant 0,1% d'acide formique (solvant B) dans l'eau contenant 0,10/0 d'acide formique (solvant A) programme d'élution : pallier isocratique à 50/0 de solvant B pendant 0,15 min, gradient de 5 à 100% de solvant B en 3,15 min puis retour aux conditions initiales en 0,1 min. Les produits sont détectés par un détecteur UV/vis à barrette de diode modèle PDA Acquity (Waters, gamme de longueurs d'ondes considérée 192-400 nm), un détecteur à diffusion de lumière modèle Sedex 85 (Sedere, gaz de nébulisation : azote, température de nébulisation : 32°C, pression de nébulisation 3,8 bar) et un spectromètre de masse Acquity SQD (Waters, fonctionnant en mode positif et négatif, gamme de masse considérée 80 à 800 uma). Méthode LC/MS-B Les spectres ont été obtenus sur un appareil Waters UPLC-SQD en mode d'ionisation électrospray positif et/ou négatif (ES+/-), dans les conditions de chromatographie liquide suivantes : colonne : ACQUITY BEH C18 1,7 pm, 2,1x50 mm ; Tc°,°nne : 50°C ; débit: 1 ml/min ; solvants : A : H2O (0,1% acide formique) B : CH3CN (0,1% acide formique) ; gradient (2 mn) : 5 à 50% B en 0,8 min ; 1,2 min : 100% de B ; 1,85 min 100% de B ; 1,95 min 50/0 de B. 1H RMN Les spectres sont enregistrés sur un spectromètre de marque Brüker, le produit étant dissous dans le DMSO-d6. Les déplacements chimiques 8 sont exprimés en ppm. IR Le spectre infrarouge est enregistré entre 4000 et 400 cm-' sur un spectromètre Nicolet Nexus en pastille de KBr avec une résolution de 2 cm-1.

Mesure du pouvoir rotatoire Les pouvoirs rotatoires ont été enregistrés sur un polarimètre 341 Perkin-Elmer. Analyse élémentaire Les analyses élémentaires ont été faites sur un analyseur EA1108 Thermo. Diffraction des Rayons X sur Poudre Les analyses ont été effectuées par un diffractomètre Bruker D8-Advance en configuration Bragg-Brentano. Les données ont été enregistrées à 21 °C (température ambiante) en utilisant une source de rayons X CuKa1 (X=1.5406 A) générés à 35kV - 40mA, des fentes de divergence variable réglées pour irradier une surface d'échantillon de largeur 4mm, un chambre en température TTK450 Anton-Paar, un détecteur PSD/Vantec. L'échantillon est déposé sur un portoir de chambre en température TTK450 - Anton Paar sur une lame de Silicium. L'échantillon est aplani par des mouvements rotatoires sur la lame de Silicium pour obtenir une surface plane d'épaisseur constante. Les diffractogrammes ont été enregistrés dans le domaine angulaire 20-400 en 20 en mode continue en utilisant des incréments angulaires de 0.033° en 20 et un temps d'acquisition par saut de 0.5s. Méthode HPLC pour les études de stabilités chimiques et solubilités Les produits à analyser sont séparés sur une colonne HPLC modèle XTerra MS C18 3,5 pm 4,6x50 mm (Waters) thermostatée à 40°C et éluée à un débit de 1,2 ml/min par un gradient d'acétonitrile contenant 0,0350/0 d'acide trifluoroacétique (solvant A) dans l'eau contenant 0,050/0 d'acide trifluoroacétique (solvant B) avec le programme suivant d'élution : gradient de 10 à 950/0 de solvant A en 25min puis pallier isocratique pendant 5 min puis retour aux conditions initiales en 2 min et pallier de rééquilibration de la colonne d'une durée de 5 min. Les produits sont détectés par un détecteur UV/VIS à barrette de diode modèle Agilent (gamme de longueurs d'ondes considérée 190-950 nm), Mesure de solubilité La solubilité des composés est mesurée dans l'eau ultra-purifiée, dans un milieu tamponné HCI pH 1, dans un milieu tamponné Acétate pH 4.7 et dans un milieu tamponné 20 Phosphate pH 7.4. L'eau Ultra-purifiée est issue d'un système de production Millipore... Le milieu tamponné HCI pH1 est préparé par dilution au 1/10 d'une solution HCI 1N prête à l'emploi commercialisée par Merck. Le milieu tamponné Acétate pH4.7 est préparé par addition de 0.75 g d'acétate de 25 sodium trihydraté à 0,35 ml d'acide acétique pur complété à 250 ml avec de l'eau ultra-purifiée. Le milieu tamponné Phosphate pH7.4 est préparé par addition de 40.5 ml d'une solution 0.1M d'hydrogénophosphate disodique à 9.5 ml d'une solution 0.1M de dihydrogénophosphate sodique puis addition complété à 100 ml avec de l'eau ultra-purifiée. 30 Quel que soit le milieu dans lequel est mesurée la solubilité du composé, le protocole suivant a été mis en oeuvre. Environ 4mg de composé à l'état de poudre sont pesés dans tube en verre Perkin Elmer de 7ml. Un volume de 2ml du milieu considéré est ajouté. Une agitation est ensuite appliqué au tube pendant 16h à température ambiante à l'abri de la lumière en utilisant un agitateur dit Rock'n'roller RM5. Apres 16h d'agitation, les suspensions 35 sont transférées dans des tubes Eppendorf safe lock de 2 ml et centrifugées pendant 15min à 18000 tours/min dans une centrifugeuse Sigma 3-18k. Un aliquote du surnageant est immédiatement prélevé après centrifugation pour mesure de la concentration en composé par HPLC en utilisant les conditions expérimentales décrite plus haut. Etude de Stabilité Physico-chimique de la forme solide La stabilité chimique et physique de la forme solide du composé considéré est étudiée par HPLC et par Diffraction des Rayons X sur poudre après 14 jours de stockage du composé dans 4 conditions stressantes : 50°C/Humidité ambiante, 50°C/80% d'humidité relative, 80°C/Humidité ambiante et 80°C/80% d'humidité relative. Environ 20mg de composé considéré pour l'étude sont placés dans 4 cristallisoirs. Deux cristallisoirs sont fermés de façon non hermétique et placés dans deux étuves (Marque-modèle) contrôlées en température à 50°C et 80°C respectivement. Deux cristallisoirs sont laissés ouverts et placés dans deux dessiccateurs contenant une solution KCI préalablement saturée générant une humidité relative dans le dessiccateur égale à -800/0. Les deux dessiccateurs sont ensuite placés dans deux étuves Heraeus UT6060 contrôlées en température à 50°C et 80°C respectivement. Après 14 jours de stockage, les cristallisoirs sont fermés de façon hermétique et leur température est naturellement ramenée à 21 °C (température ambiante). Les 4 échantillons du composé considérés sont ensuite analysés par Diffraction des Rayons X sur poudre pour contrôler la stabilité physique et par HPLC pour contrôler la stabilité chimique du composé. Méthodes biologiques Mesure de l'activité sur Aurora A et B La capacité à inhiber l'activité kinase de l'enzyme est estimée en mesurant l'activité kinase résiduelle de l'enzyme en présence de différentes concentrations du composé à tester (généralement de 0,17 à 10000 nM). Une courbe dose-réponse est établie et permet de déterminer une IC50 (concentration inhibitrice à 500/0). La mesure de l'activité kinase est réalisée par un dosage radioactif de la quantité de phosphate radioactif (33P) incorporé dans un fragment de la protéine NuMA (Nuclear Mitotic Apparatus protein) après 30 min d'incubation à 37°C. Le composé à tester est d'abord dissous à différentes concentrations dans du diméthylsulfoxyde (DMSO). La réaction s'effectue dans les puits d'une plaque de microtitration de type FlashPlate (Nickel Chelate FlashPlate-96, PerkinElmer). Chaque puits (100 p1) contient 10 nM d'Aurora A, 500 nM de NuMA, 1 pM ATP et 0,2 pCi d'ATP-y-33P dans un tampon 50 mM Tris-HCI pH=7,5 ; 10 mM MgCl2 ; 50 mM NaCl, 1 mM de dithiothréitol. Le pourcentage de DMSO final est de 30/0. Après homogénéisation par agitation, la plaque est incubée pendant 30 min à 37°C. Le contenu des puits est ensuite éliminé et les puits lavés par du tampon PBS. La radioactivité est ensuite mesurée à l'aide d'un compteur de type TRILUX 1450 Microbeta (WALLAC). Dans chaque plaque, 8 puits témoins sont réalisés : 4 témoins positifs (activité kinase maximale) pour lesquels la mesure est faite en présence d'enzyme et de substrat et en absence de composé de l'invention et 4 témoins négatifs (bruit de fond) pour lesquels la mesure est faite en absence d'enzyme, de substrat et de composé à tester. Les mesures sont données dans le Tableau I. Aurora A L'enzyme recombinante humaine Aurora A utilisée est exprimée sous forme entière avec un tag poly-Histidine en position N-terminale et produite dans E.Coli. Un fragment (acides aminés 1701-2115) de la protéine humaine NuMA avec un tag poly-Histidine en position C-terminale est exprimé sous forme recombinante dans E.coli. Aurora B/Incenp L'enzyme humaine Aurora B entière est coexprimée avec un fragment de la protéine humaine Incenp (aa 821-918) dans un système baculovirus et est exprimée en cellules d'insecte. Aurora B présente un tag poly-Histidine en position N-terminale tandis que le fragment Incenp possède un tag Glutathion-S-Transférase (GST) en position N-terminale. Les 2 protéines forment un complexe appelé Aurora B/Incenp. Un fragment (aa1701-2115) de la protéine humaine NuMA avec un tag poly-Histidine en position C-terminal est exprimé sous forme recombinante dans E.coli. Ce fragment est utilisé comme substrat.

La présente invention a encore pour objet tout procédé de préparation des composés I, Il et formulation tels que définis ci-dessus. La présente invention a ainsi pour objet tout procédé de préparation du composé I tel que définie ci-dessus ou sel sulfate du 8-oxo-9-[3-(1 H-benzimidazol-2-yloxy)-phényl]-4,5,6,7,8,9-hexahydro-2H-pyrrolo[3,4-b] quinoline-3-carboxylate d'éthyle, et notamment le procédé tel que défini dans le schéma 1 ci-dessus ou encore les procédés tels que décrits dans la partie expérimentale La présente invention a ainsi pour objet tout procédé de préparation du composé II tel que défini ci-dessus ou co-cristal du 8-oxo-9-[3-(1 H-benzimidazol-2-yloxy)-phényl]-4,5,6,7,8,9-hexahydro-2H-pyrrolo[3,4-b] quinoline-3-carboxylate d'éthyle, et notamment les procédés tels que décrits dans la partie expérimentale La présente invention a ainsi pour objet tout procédé de préparation de formulation telle que définie ci-dessus et notamment les procédés tels que décrits dans la partie expérimentale. Partie expérimentale selon la présente invention Exemple 1 : préparation du sulfate de 8-oxo-9-f341H-benzimidazol-2-yloxy)- phényll-4,5,6,7,8,9-hexahydro-2H-pyrrolof3,4-blquinoline-3-carboxylate d'éthyle, énantiomère lévogyre - O TsOH cat., THF 49-52°C 3h ,,. 2- McONa, heptane, 12°C-TA Etape 1 11 H HO ~J O H N 1- , NaH, DMF, reflux N O, Y Etape 2 intermédiaire B1 ~~CI 2_ Extraction, AcOEt ,concentration. ~N N 3- Filtration sur silice trituration iPr2O Y , HN EtOOC H intermédiaire E1, base énantiomère lévogyre intermédiaire D1, base racémique intermédiaire Cl intermédiaire Al purification & separation des enantioméres 1-aq.HCl, EtOH TA., 20h. 2-trituration iPr2O HN Etape 4 EtOOC H EtOOC H Etape 5 N 1 Sulfate de l'énantiomère lévogyre 8-oxo-9- [3-(1 H-benzimidazol-2-yloxy)-phényl]- 4, 5, 6, 7 , 8, 9 -h ex a h y d ro-2 H -py r ro l o [3 , 4- b ] quinoline-3-carboxylate d'éthyle. L Schema 1 Intermédiaire Al. 2-Chloro-1-(tétrahydro-pyran-2-yl)-1H-benzimidazole Dans un réacteur de 10 I, sous argon et sous agitation, on charge 2,5 1 de THF, 180 g de 2-chlorobenzimodazole (1,18 moles) et 325 m1 de 3,4-dihydro-2H-pyrane (6,56 moles, 3 éq.). Le réacteur est chauffé jusqu'à solubilisation (température du milieu : 40°C). On introduit ensuite 6,3 g d'acide para-toluènesulfonique (0,033 mole, 0,028 éq.). La température est 10 maintenue entre 49 et 52 °C pendant 2,5 h. On refroidit à 12°C et on ajoute 7,65 g de O H HO-S=O OH Composé I, exemple 1 HN EtOOC5 méthylate de sodium (0,142 moles, 0,12 éq.) en maintenant l'agitation sur une durée totale de 15 min. La température est ensuite portée à 18°C, 5 1 de n-heptane sont ajoutés et l'ensemble est filtré sur 300 g de Clarcel FLO-M, le rétentat est lavé par 5 1 de n-heptane. Le filtrat est concentré à sec sous pression réduite et on obtient 292,6 g de 2-chloro-1-(tetrahydro-pyran-2- y1)-1 H-benzimidazole sous forme d'une huile légèrement jaune (rendement quantitatif). RMN 'H (400 MHz, DMSO-d6) : 1,42 à 2,01 (m, 5H); 2,21 à 2,34 (m, 1H); 3,69 à 3,78 (m, 1H); 4,12 (d, J=11,4 Hz, 1H); 5,72 (dd, J=2,4 et 11,2 Hz, 1H); 7,22 à 7,34 (m, 2H); 7,62 (d, J=7,2 Hz, 1H); 7,78 (d, J=7,2 Hz, 1H).

Intermédiaire B1 3-f1-(Tétrahydro-pyran-2-yl)-1H-benzimidazol-2-yloxyjbenzaldéhvde Dans 2 ballons tricol de 2 I, équipés chacun d'un réfrigérant, d'un thermomètre et d'un arbre d'agitation, sous argon, on charge du N,N-diméthylformamide (0,4 1 par ballon), et du 3- hydroxybenzaldéhyde (68,5 g, ballon 1 ; 64,2 g, ballon 2 ; 1,08 moles). De l'hydrure de sodium (dispersion à 60% dans l'huile minérale) est ensuite ajouté par portions (ballon 1: 26 g ; ballon 2: 24 g ; 1,25 moles, 1,2 éq.), la température maximale lors de l'addition est de 32°C. Le 2-chloro-1-(tétrahydro-pyran-2-yl)-1 H-benzimidazole (Al), titre estimé à 85%) est ensuite introduit (ballon 1: 151 g dans 0,5 1 de N,N-diméthylformamide ; ballon 2: 142 g dans 0,5 1 de N,N-diméthylformamide ; 1,05 moles, 0,97 éq.). Le milieu est ensuite porté au reflux (température 140°C, temps de montée en température 40 min) et le reflux est maintenu pendant 1 h. Le chauffage est ensuite arrêté et le milieu est laissé à refroidir pendant 1,5 h. Le contenu des 2 ballons est rassemblé. Le tout est mélangé lentement à 5 1 d'eau glacée. La phase aqueuse obtenue est ensuite extraite par 4x2,5 1 d'acétate d'éthyle (AcOEt). Les phases organiques sont ensuite rassemblées, lavées par 3 1 d'eau puis 2 1 d'une solution saturée NaCI et enfin séchées par addition MgSO4 pendant une nuit. La phase organique obtenue est ensuite filtrée sur un verre fritté (porosité 4) et concentrée à sec sous pression réduite pour obtenir 385 g d'une huile marron (LC/MS-A, tr (temps de rétention)=1,86 min, MS mode positif : m/z=323,16).

Une fraction de 158 g du matériel brut obtenu précédemment est solubilisée à chaud dans 1,5 I d'un mélange n-heptane/AcOEt (8/2 en volumes), combiné à 500 g de silice (70-30 mesh) et l'ensemble est agité pendant 45 min. La suspension obtenue est filtrée sur Célite, lavée par 3 I d'un mélange n-heptane/AcOEt (8/2 en volumes). La phase organique obtenue est concentrée à sec sous pression réduite. Le résidu est remis en suspension dans 200 ml d'éther isopropylique par agitation mécanique et traitement aux ultrasons puis filtré sur verre fritté (porosité 3). Le solide obtenu est lavé par 2x40 ml d'éther ispropylique et séché sous pression réduite à 40°C pendant 16 h pour donner 68 g de solide. Un traitement similaire appliqué au reste du brut permet d'obtenir 87,8 g de solide. Les solides obtenus sont réunis et homogénéisés pour obtenir 155,8 g de 3-[1-(tétrahydro-pyran-2-yl)-1 H-benzimidazol-2-yloxy]-benzaldéhyde sous forme de cristaux beige clair (LC/MS-A, tr=1,87 min, MS mode positif m/z=323,13). MS(LC/MS-B): tr=1,00 min; [M+H]+ : m/z 323 ; RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) : 1,54 à 1,62 (m, 1H); 1,63 à 1,84 (m, 2H); 1,92 à 2,03 (m, 2H); 2,30 à 2,42 (m, 1H); 3,70 à 3,79 (m, 1H); 4,10 (d, J=11,5 Hz, 1H); 5,74 (dd, J=2,1 et 11,1 Hz, 1H); 7,13 à 7,22 (m, 2H); 7,43 (d, J=7,3 Hz, 1H); 7,65 (d, J=7,3 Hz, 1H); 7,73 (t, J=7,8 Hz, 1H); 7,78 à 7,83 (m, 1H); 7,87 (d, J=7,8 Hz, 1H); 7,96 (s, 1H); 10,05 (s, 1H). Le lavage des phases silices utilisées précédemment par 2 1 d'un mélange nheptane/AcOEt (1/1 en volumes) permet d'obtenir 67 g de matériel après concentration à sec sous pression réduite. Ce matériel est repris par 2 1 d'un mélange n-heptane/AcOEt (9/1 en volumes), combiné avec 285 g de silice (70-30 mesh), agité et traité par ultrasons pendant 1 h. La suspension est ensuite filtrée sur Célite, la phase solide est lavée par 2 1 d'un mélange n-heptane/AcOEt (9/1 en volumes). Le filtrat est concentré à sec sous pression réduite et le résidu est trituré dans 400 m1 d'un mélange n-heptane/éthanol (95/5 en volumes), filtré sur verre fritté (porosité 3) et séché sous pression réduite pour donner 35 g de 3-[1-(tetrahydro- pyran-2-y1)-1 H-benzimidazol-2-yloxy]-benzaldéhyde sous forme de cristaux beige clair. (LC/MS-A, tr=1,93 min, MS mode positif m/z=323,16).

Intermédiaire C1: 8-Oxo-943-f1-(tetrahydro-pyran-2-yl)-1H-benzimidazol-2-yloxyl-phényl}-4,5, 6,7,8,9-hexahydro-2H-pyrrolof3,4-blquinoline-3-carboxylate d'éthyle N Dans un Erlenmeyer de 2 1 sous agitation magnétique, on ajoute 50 g de chlorhydrate de 3-amino-2-éthoxycarbonylpyrrole et 0,204 1 de soude 2N. L'ensemble est agité pendant 15 min à température ambiante (TA), puis il est ensuite extrait par 3x0,3 1 de dichlorométhane. Les phases organiques sont rassemblées, séchées sur MgSO4 et concentrée à sec sous pression réduite. Le résidu est trituré avec du n-pentane, filtré et séché sous pression réduite jusqu'à poids constant pour donner 36,4 g de 3-amino-2-éthoxycarbonylpyrrole sous forme d'un solide marron.

Dans un ballon tricol de 2 1 muni d'un arbre d'agitation, d'un thermomètre et d'un réfrigérant, on charge 1,2 1 de 1-butanol, 145 g de 3-[1-(tetrahydro-pyran-2-y1)-1H-benzimidazol-2-yloxy]-benzaldéhyde (0,405 mole, B1), 62,4 g de 3-amino-2- éthoxycarbonylpyrrole (1 éq., 0,405 mole), 46,8 g de 1,3-cyclohexanedione à 97% (1 éq., 0,405 mole) et 70,5 m1 de N,N-diisopropyléthylamine (1 éq.) et on porte au reflux (temps de montée en température 55 min, reflux maintenu 30 min, température 114°C). Le milieu est ensuite refroidi à TA et concentré à sec sous pression réduite pour donner 290 g d'une huile marron contenant le 8-oxo-9-{3-[1-(tetrahydro-pyran-2-y1)-1 H-benzimidazol-2-yloxy]-phényl}- 4,5,6,7,8,9-hexahydro-2H-pyrrolo[3,4-b]quinoline-3-carboxylate d'éthyle. (LC/MS-A, tr=1,96 min, MS mode positif m/z=553,33). Une opération similaire conduite avec 35 g de 341-(tetrahydro-pyran-2-y1)-1 H-benzimidazol-2-yloxy]-benzaldéhyde (0,098 mole, exemple B1) permet d'obtenir 72 g d'une huile marron contenant le 8-oxo-9-{3-[1-(tetrahydro-pyran-2-y1)-1 H-benzimidazol-2-yloxy]-phényl}-4,5,6,7,8,9-hexahydro-2H-pyrrolo[3,4-b] quinoline-3- carboxylate d'éthyle. (LC/MS-A, tr=1,96 min, MS mode positif m/z=553,35). Intermédiaire D1: 8-Oxo-9-f3-(1H-benzimidazol-2-yloxy)-phényll-4,5,6,7,8,9- hexahydro-2H-pyrrolof3,4-b]duinoline-3-carboxylate d'éthyle Oy NI O H Dans un ballon de 2 I, on charge 224 g de l'huile marron contenant le 8-oxo-9-{3-[1- (tetrahydro-pyran-2-yl)-1 H-benzimidazol-2-yloxy]-phényl}-4,5,6,7,8,9-hexahydro-2H-pyrrolo[3,4-b] quinoline-3-carboxylate d'éthyle (ex.1.3), 0,7 1 d'éthanol et 0,243 1 d'acide chlorhydrique 2N. Le mélange est agité 16 h à TA, puis filtré sur verre fritté (porosité 4). Le filtrat est concentré à sec sous pression réduite et le résidu est trituré avec 0,5 1 d'éther isopropylique. Le solide obtenu est séché sous pression réduite jusqu'à poids constant pour donner 253 g d'un solide marron contenant le 8-oxo-9-[3-(1 H-benzimidazol-2-yloxy)-phényl]-4,5,6,7,8,9-hexahydro-2H-pyrrolo[3,4-b] quinoline-3-carboxylate d'éthyle. (LC/MS-A, tr=1,46 min, MS mode positif m/z=469,29). Une opération similaire conduite avec 54 g de l'huile marron contenant le 8-oxo-9-{3-[1-(tetrahydro-pyran-2-yl)-1 H-benzimidazol-2-yloxy]-phényl}- 4,5,6,7,8,9-hexahydro-2H-pyrrolo[3,4-b]quinoline-3-carboxylate d'éthyle (Cl) permet d'obtenir 60 g d'un solide marron contenant le 8-oxo-9-[3-(1 H-benzimidazol-2-yloxy)-phényl]-4,5,6,7,8,9-hexahydro-2H-pyrrolo[3,4-b] quinoline-3-carboxylate d'éthyle. (LC/MS-A, tr=1,48 min, MS mode positif m/z=469,29). Une fraction aliquote de 0,8 g du matériel obtenu peut être purifiée par chromatographie sur une cartouche de 50 g de silice (10-90 pm) (Biotage SNAP, KP-Sil) éluée par un palier isocratique de dichlorométhane de 20 min, puis un gradient de 0 à 1% en volumes d'isopropanol dans le dichlorométhane en 1 h et enfin un pallier isocratique de dichlorométhane/isopropanol (99/1 en volumes) de 20 min. Les fractions contenant le produit attendu sont réunies pour donner 0,21 g d'un solide jaune. Les produits de 2 séparations chromatographiques similaires conduites à la même échelle sont cristallisés dans l'acétonitrile pour donner au total 0,16 g de 8-oxo-9-[3-(1H-benzimidazol-2-yloxy)-phényl]- 4,5,6,7,8,9-hexahydro-2H-pyrrolo[3,4-b]quinoline-3-carboxylate d'éthyle sous forme de cristaux beiges. (LC/MS-A, tr=1,61 min, MS mode positif m/z=469,28). RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) : 1,29 (t, J=7,0 Hz, 3H); 1,80 à 1,97 (m, 2H); 2,19 à 2,27 (m, 2H); 2,55 à 2,69 (m, 1H); 2,81 (dt, J=4,8 et 17,2 Hz, 1H); 4,26 (q, J=7,0 Hz, 2H); 5,11 (s, 1H); 6,73 (d, J=3,3 Hz, 1H); 7,02 à 7,16 (m, 5H); 7,25 (t, J=7,9 Hz, 1H); 7,31 à 7,38 (m, 2H); 8,34 (s, 1H); 11,33 (s large, 1H); 12,26 (s large, 1H). Analyse élémentaire : C= 68,720/0 ; H= 5,10% ; N= 11,82% ; H2O= 0,38%.

Intermédiaire E1: Enantiomère lévogyre du 8-oxo-9-f3-(1H-benzimidazol-2-yloxy)-phényll-4,5,6,7,8, 9-hexahydro-2H-pyrrolof3,4-blquinoline-3-carboxylate d'éthyle Chiral L'énantiomère lévogyre est purifié à partir du produit brut de l'exemple D1 sur une colonne chirale Welk-01 RR, 10 pM, 80x350 mm (Regis, USA) éluée par un mélange nheptane/dichloro-méthane/éthanol/triéthylamine (50/47,5/2,5/0,1 en volumes). L'élution des produits est détectée par spectroscopie UV à 265 nm. Des quantités de 10 g du produit brut décrit dans l'exemple D1 sont injectées lors de chaque opération. Dans ces conditions, le pic correspondant à l'énantiomère lévogyre est élué avec un tr entre 50 et 80 min. Les fractions d'énantiomère lévogyre purifié correspondant aux opérations nécessaires pour purifier 310 g du produit brut décrit dans l'exemple D1, sont rassemblées, homogénéisées et concentrées à sec sous pression réduite pour fournir 50 g d'un solide beige. Spectre de masse (LC/MS-B): tr=0,77 min ; [M+H]+ : m/z 469 ; [M-H]- : m/z 467. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) : 1,29 (t, J=7,1 Hz, 3H); 1,79 à 1,97 (m, 2H); 2,19 à 2,27 (m, 2H); 2,55 à 2,66 (m, 1H); 2,81 (dt, J=4,9 et 17,1 Hz, 1H); 4,26 (q, J=7,1 Hz, 2H); 5,12 (s, 1H); 6,73 (d, J=3,4 Hz, 1H); 7,02 à 7,16 (m, 5H); 7,25 (t, J=8.3 Hz, 1H); 7,29 à 7,41 (m, 2H); 8,32 (s, 1H); 11,31 (s large, 1H); 12,26 (s large, 1H). IR : principales bandes : 1678 ; 1578 ; 1525 ; 1442 ; 1188 ; 1043 et 743 cm-1. Pouvoir rotatoire : [a]p= -38,6±o,7 à C=0,698 mg/mi dans le méthanol. Analyse élémentaire : C= 68,18% ; H= 5,920/0 ; N= 11,220/0 ; H2O= 1,250/0. Composé 1 : sulfate de l'énantiomère lévogyre du 8-oxo-9-f3-(1H-benzimidazol-2-yloxy)-phényll-4,5,6,7,8, 9-hexahydro-2H-pyrrolof3,4-blqui noline-3-carboxylate d'éthyle O 10 Dans un ballon on ajoute 350ml d'acétonitrile à 3.9 g (8.33 mmol) de l'énantiomère lévogyre du 8-oxo-9-[3-(1 H-benzimidazol-2-yloxy)-phényl]-4,5,6,7,8,9-hexahydro-2H-pyrrolo[3,4-b] quinoline-3-carboxylate d'éthyle sous forme de base amorphe et on agite le tout pendant 30 min. à 60°C, on ajoute 20 ml d'acétonitrile en maintenant le mélange sous agitation à 60°C. On obtient une solution marron présentant un léger trouble. Cette solution 15 est ensuite filtrée sur un verre fritté de porosité 3. On ajoute ensuite 85 ml d'acide sulfurique 0.1M dans un mélange eau/acétonitrile (1/4-v/v ; 8.5 mmol, 1.02 éq.) on agite brièvement le mélange manuellement et on le laisse revenir à température ambiante (-25°C, en 30 min.) sans agitation. Les cristaux formés sont filtrés et lavés par 3x10 ml d'acétonitrile puis séchés sous pression réduite à 70°C jusqu'à poids constant pour donner 3.1g de cristaux jaunes, 20 point de fusion : 242-244°C, forme monosulfate déterminé par microanalyse, contenant 5.70/0 H2O (1.8 mol/mol, déterminé par la méthode de K. Fischer) et 0.5 mol/mol d'acétonitrile (déterminé par RMN). Les cristaux sont ensuite combinés avec 70 ml d'acétate d'éthyle et le mélange est porté au reflux pendant 30 min. Après retour à la température ambiante les cristaux sont 25 collectés par filtration, lavés avec 30 ml d'acétate d'éthyle et séchés sous pression réduite à 70°C pendant une nuit. On obtient 3.04 g de cristaux jaunes : point de fusion 242-244°C, acétonitrile : 0.2 mol/mol (RMN), H2O 5.90/0 (1.9 mol/mol). Les cristaux sont ensuite combinés de nouveau avec 120 ml d'acétate d'éthyle et le mélange est porté au reflux pendant l h 30 min. Après retour à la température ambiante les 30 cristaux sont collectés par filtration, lavés avec 30 ml d'acétate d'éthyle et séchés sous pression réduite à 70°C pendant une nuit. On obtient 2.94 g de cristaux jaunes : monosulfate5 de l'énantiomère lévogyre du 8-oxo-9-[3-(1 H-benzimidazol-2-yloxy)-phényl]-4,5,6,7,8,9-hexahydro-2H-pyrrolo[3,4-b] quinoline-3-carboxylate d'éthyle Point de fusion 242-244°C Spectre RMN 1H (400 MHz, 8 en ppm, DMSO-d6) : 1,29 (t, J=7,1 Hz, 3 H) ; 1,78 à 1,96 (m, 2 H) ; 2,20 à 2,28 (m, 2 H) ; 2,61 (m, 1 H) ; 2,81 (m, 1 H) ; 4,26 (q, J=7,1 Hz, 2 H) ; 5,12 (s, 1 H) ; 6,73 (d, J=3,4 Hz, 1H) ; 7,04 à 7,18 (m, 5 H) ; 7,27 (t, J=8,0 Hz, 1 H) ; 7,34 à 7,42 (m, 2 H) ; 8,33 (s, 1 H) ; 11,31 (s large, 1 H). Acétonitrile : traces Spectre Infra Rouge : Les principales bandes sont centrées à :3424 ; 3209 ; 2939 ; 2621 ; 1684 ; 1635 ; 1578 ; 1471 ; 1372 ; 1188 ; 1042 ; 782 ; 762 ; 586 cm-' Analyse élémentaire : C = 54,41 - 54,43% ; H = 5,06 - 4,940/0 ; N = 9,51 - 9,530/0 ; S = 5,24 - 5,250/0 ; eau = 5,47 % (K. Fischer) Pouvoir rotatoire : PR = -10,1 +/- 0,6 ; C = 2,204 mg / 0,5 ml CH3OH à 589 nm ; température 20 °C

La présente invention a ainsi pour objet le composé 1 tel que défini ci-dessus, ou sel de sulfate du 8-oxo-9-[3-(1 H-benzimidazol-2-yloxy)-phényl]-4,5,6,7,8,9-hexahydro-2H-20 pyrrolo[3,4-b]quinoline-3-carboxylate d'éthyle caractérisé en ce que son point de fusion est 242-244°C,

Exemple 2.a : préparation du co-cristal de l'énantiomère lévogyre du 8-oxo-9-[3-(1 H-benzimidazol-2-yloxy)-phényl]-4,5,6,7,8,9-hexahydro-2H-pyrrolo[3,4-b] quinoline-3-25 carboxylate d'éthyle avec l'acide L-Malique (composé II). Le co-cristal de l'énantiomère lévogyre du 8-oxo-9-[3-(1 H-benzimidazol-2-yloxy)-phényl]-4,5,6,7,8,9-hexahydro-2H-pyrrolo[3,4-b] quinoline-3-carboxylate d'éthyle avec l'acide L-Malique (composé II) est obtenu en broyant 0.53 millimole de l'énantiomère lévogyre du 8-oxo-9-[3-(1 H-benzimidazol-2-yloxy)-phényl]-4,5,6,7,8,9-hexahydro-2H-pyrrolo[3,4-b] quinoline- 30 3-carboxylate d'éthyle (intermédiare E1 de l'exemple 1) avec 0.53 millimole de l'acide L-malique en présence de 100 microlitres d'éthanol, au moyen d'un broyeur à billes, pendant 20 minutes à température ambiante.

Exemple 2.13 : préparation du co-cristal de l'énantiomère lévogyre du 8-oxo-9-[3-35 (1H-benzimidazol-2-yloxy)-phényl]-4,5,6,7,8,9-hexahydro-2H-pyrrolo[3,4-b] quinoline-3-carboxylate d'éthyle avec l'acide L-Malique (composé II).

Le co-cristal de l'énantiomère lévogyre du 8-oxo-9-[3-(1 H-benzimidazol-2-yloxy)-phényl]-4,5,6,7,8,9-hexahydro-2H-pyrrolo[3,4-b] quinoline-3-carboxylate d'éthyle avec l'acide L-Malique (composé II) est obtenu en broyant 0.53 millimole de l'énantiomère lévogyre du 8-oxo-9-[3-(1 H-benzimidazol-2-yloxy)-phényl]-4,5,6,7,8,9-hexahydro-2H-pyrrolo[3,4-b] quinoline- 3-carboxylate d'éthyle (intermédiare E1 de l'exemple 1) avec 0.53 millimole de l'acide L-malique en présence de 100 microlitres d'éthanol, au moyen d'un broyeur à billes, pendant 20 minutes à température ambiante. Le solide résultant est mis en suspension dans 2.5 ml d'acétate d'éthyle à température ambiante durant 24 heures.

Exemple 2.c : préparation du co-cristal de l'énantiomère lévogyre du 8-oxo-9-[3-(1 H-benzimidazol-2-yloxy)-phényl]-4,5,6,7,8,9-hexahydro-2H-pyrrolo[3,4-b] quinoline-3-carboxylate d'éthyle avec l'acide L-Malique (composé II). Le co-cristal de l'énantiomère lévogyre du 8-oxo-9-[3-(1 H-benzimidazol-2-yloxy)-phényl]-4,5,6,7,8,9-hexahydro-2H-pyrrolo[3,4-b] quinoline-3-carboxylate d'éthyle avec l'acide L-Malique (composé II) est obtenu en mélangeant une solution éthanolique (0.3 millimole dans 250 microlitres) de l'énantiomère lévogyre du 8-oxo-9-[3-(1 H-benzimidazol-2-yloxy)-phényl]-4,5,6,7,8,9-hexahydro-2H-pyrrolo[3,4-b] quinoline-3-carboxylate d'éthyle (intermédiare E1 de l'exemple 1) avec une solution éthanolique (0.3 millimole dans 56 microlitres) de l'acide L-malique. La cristallisation est amorcée avec 2 mg de co-cristal de l'énantiomère lévogyre du 8-oxo-9-[3-(1 H-benzimidazol-2-yloxy)-phényl]-4,5,6,7,8,9-hexahydro-2H-pyrrolo[3,4-b] quinoline-3-carboxylate d'éthyle avec l'acide L-Malique puis 250 microlitres d'acétate d'éthyle sont ajoutés. La suspension obtenue est laissée sous agitation une nuit à température ambiante.

Exemple 3: préparation du 8-oxo-9-f3-(1H-benzimidazol-2-yloxy)-phényll-5,6,7, 89-tetrahydro-2H-pyrrolof3,4-blquinoline-3-carboxylate d'éthyle. Acetonitrile, 20°C, 30 min. Pour assurer un rendement reproductible à la préparation décrite ci-après, il est recommandé d'appliquer des conditions de manipulations visant à éviter la présence de cl CI Chiral O O Enantiomère dextrogyre du 8-oxo-9-[341 H-benzimidazol-2-yloxy)-phényl] -4,5,6, 7,8,9-hexahyd ro-2H-pyrrolo [3,4-b]quinoline-3-carboxylate d'éthyle O 8-oxo-9-[3-(1 H-benzimidazol-2-yloxy)-phényl]-5,6, 7,89-tetrahydro-2H-pyrrolo [3,4-b]quinoline-3-carboxylate d'éthyle

---- traces d'humidité dans le matériel et les réactifs pendant la réaction d'oxydation. Dans un tricol équipé d'un barreau magnétique on ajoute successivement, 2.03 g d'énantiomère dextrogyre du 8-oxo-9-[3-(1 H-benzimidazol-2-yloxy)-phényl]-4,5,6,7,8,9-hexahydro-2H-pyrrolo[3,4-b] quinoline-3-carboxylate d'éthyle isolé par la méthode chromatographique décrite dans l'exemple 1, 100 ml d'acétonitrile anhydre d'un flacon neuf ouvert extemporanément et 1 g de 2,3-dichloro-5,6-dicyano. Le mélange réactionnel est agité à température ambiante. La solution devient noire puis un précipité apparait. Après 30 minutes de réaction, le milieu réactionnel est concentré sous pression réduite et le résidu est repris par 100 ml d'eau. La solution obtenue est extraite par 5x100 ml d'acétate d'éthyle. Les phases organiques sont jointes, desséchées sur sulfate de magnésium et concentrées sous pression réduite. Le résidu est repris par un volume minimal d'un mélange de dichlorométhane/méthanol (1/1, v/v) combiné avec 6 g de silice pour chromatographie (40-63 pm) et concentré à nouveau. La poudre obtenue est placée dans une cartouche de chromatographie qui est ensuite placée au sommet d'une colonne de 100g de silice (10-90 pm, Biorad), l'ensemble est adapté à un appareil de chromatographie Biotage. La colonne est éluée par un gradient de 0 à 5% d'isopropanol dans le dichlorométhane en 10 volumes de colonnes selon les conditions standard données par le logiciel de chromatographie Biotage. Les fractions homogènes sont rassemblées et concentrées sous pression réduite pour donner 1.77 g d'un solide jaune. Le solide est repris par 150 ml d'une solution aqueuse saturée d'hydrogénocarbonate de sodium, extrait par 3 x 150 ml d'acétate d'éthyle. Les phases organiques sont jointes, lavées par 150 ml d'une solution aqueuse saturée d'hydrogénocarbonate de sodium, desséchées sur sulfate de magnésium et concentrées sous pression réduite. Les phases aqueuses précédentes sont jointes, extraites par 1x150 ml de toluène, puis 2x150 ml d'un mélange toluène/acétate d'éthyle (1/1, v/v), les phases organiques sont jointes, lavées par 150 ml d'une solution aqueuse saturée d'hydrogénocarbonate de sodium, desséchées sur sulfate de magnésium et concentrées sous pression réduite. Les résidus concentrés des phases organiques sont remis en suspension dans 50 ml d'acétate d'éthyle, la suspension est portée au reflux pendant 15 minutes puis laissée refroidir à température ambiante. Le solide formé est filtré et séché sous pression réduite pour donner 970 mg de 8-oxo-9-[3-(1 H-benzimidazol-2-yloxy)-phényl]- 5,6,7,89-tetrahydro-2H-pyrrolo[3,4-b]quinoline-3-carboxylate d'éthyle. SAR216905 VAC.LDS2.207.1, LC/MS : méthode LC/MS-A, tr=1,35 min, MS mode positif m/z=467,33, Spectre RMN 1H (400 MHz, d en ppm, DMSO-d6) : 1,34 (t, J=7,1 Hz, 3 H) ; 2,10 (m, 2 H) ; 2,61 (m, 2 H) ; 3,15 (m, 2 H) ; 4,32 (q, J=7,1 Hz, 2 H) ; 7,11 (m, 2 H) ; 7,19 (m, 1 H) ; 35 7,35 (m, 1 H) ; 7,38 à 7,44 (m, 4 H) ; 7,50 (t, J=7,9 Hz, 1 H) ; 12,78 (m étalé, 2 H)

Résultats biologiques : Structure Chiral ® OYN H Chiral ® OYN H HN N N HN / H N ~0 H ~0 OH O 0 0=S=0 OH Composé Intermédiaire E1 (exemple 1) Composé 1 (exemple 1) Forme Amorphe Cristallin physique IC50 AuroraA 2 2 (nM) IC50 AuroraB 1 1 (nM) Exemple 4 : mise en évidence de la structure cristalline des composés 1 et 2 La nature cristalline ou amorphe du Composé 1 (Sulfate), du Composé II (co-crystal) et de l'intermédiaire E1 est étudiée par Diffraction des Rayons X sur Poudre.

Le diffractogramme enregistré pour l'intermédiaire E1 est caractérisé par un halo de diffusion dans l'ensemble du domaine angulaire étudié (2° - 40° en 20) caractéristique d'un produit amorphe. Le diffractogramme enregistré pour le Composé 1 tel qu'obtenu suivant les conditions expérimentales décrites en Exemple 1 est caractéristique d'un produit cristallin. Le diffractogramme enregistré est reporté dans la figure XX1 et les détails des principaux pics de diffraction sont donnés dans le Tableau 4-1. La présente invention a ainsi pour objet le composé 1 tel que défini ci-dessus ou sel de sulfate du 8-oxo-9-[3-(1 H-benzimidazol-2-yloxy)-phényl]-4,5,6,7,8,9-hexahydro-2H-pyrrolo[3,4-b] quinoline-3-carboxylate d'éthyle dont le diffractogramme de rayons X est tel que définie à la figure 4-1 ci-après . Le diffractogramme enregistré pour le Composé II tel qu'obtenu suivant les conditions expérimentales décrites en Exemple 2 est caractéristique d'un produit cristallin. Le diffractogramme enregistré est reporté dans la figure 4-2 et les détails des principaux pics de diffraction sont donnés dans le Tableau 4-2.

La présente invention a ainsi pour objet le composé II tel que défini ci-dessus ou Co-cristal de l'acide L-malique du 8-oxo-9-[3-(1 H-benzimidazol-2-yloxy)-phényl]-4,5,6,7,8,9- hexahydro-2H-pyrrolo[3,4-b]quinoline-3-carboxylate d'éthyle dont le diffractogramme de rayons X est tel que définie à la figure 4-2 ci-après : 2-Theta - Scale Figure 4-1 : Diffractogramme Rayons X sur poudre enregistré pour le Composé 1 tel qu'obtenu suivant les conditions expérimentales détaillées en Exemple 1. 20 (°) d (Â) Intensité 7,215 12,24212 66,3 10,804 8,18214 8,5 11,059 7,99377 19,7 11,75 7,52565 27,3 14,483 6,1109 41,3 15,497 5,71331 11,8 17,247 5,13736 9,4 18,135 4,8877 40 18,734 4,73293 15,5 19,354 4,58267 26,6 19,961 4,44456 11,3 20,403 4,34919 11,6 21,727 4,08704 11,6 22,249 3,99249 100 23,686 3,75334 21,4 24,201 3,67469 14 24,937 3,56777 57,7 25,42 3,50113 26,4 26,681 3,3384 13,1 5 28,34 3,14666 14,4 31,321 2,85359 14,2 Tableau 4-1 : Position angulaire en 26, Espace inter-réticulaire et Intensité relative des principaux pics de diffraction enregistrés pour le Composé 1 tel qu'obtenu suivant les conditions expérimentales détaillées en Exemple 1. Figure 4-2 : Diffractogramme Rayons X sur poudre enregistré pour le Composé II (Co-crystal) tel qu'obtenu suivant les conditions expérimentales détaillées en Exemple II. 20 2-Theta - Scale5 20 (°) d (Â) Intensité 4,797 18,40588 14,9 11,476 7,7043 33,2 11,848 7,46367 15,1 12,7 6,96481 13,2 14,232 6,21834 7,4 14,837 5,96602 12,8 15,825 5,59552 11,6 17,086 5,18542 33,2 18,589 4,76942 20 18,966 4,67532 35,9 19,444 4,56146 18,1 20,209 4,39061 100 21,094 4,20842 48,3 21,539 4,12238 29,7 22,119 4,01562 87,3 23,121 3,84384 19,9 25,001 3,5588 35,6 26,139 3,40638 43,6 29,326 3,0431 35,1 Tableau 4-2 : Position angulaire en 20, Espace inter-réticulaire et Intensité relative des principaux pics de diffraction enregistrés pour le Composé II (Co-crystal) tel qu'obtenu suivant les conditions expérimentales détaillées en Exemple II.

Exemple 5 : détermination de la solubilité de composés 11-et II 2 La solubilité des Composé 1 et Composé II est mesurée dans l'eau ultra-purifiée, dans un milieu tamponné HCI pH 1, dans un milieu tamponné Acétate pH 4.7 et dans un milieu 5 tamponné Phosphate pH 7.4. Le tableau ci-dessous rassemble les valeurs de solubilité mesurées après 16h d'agitation pour le Composé 1 et le Composé II. Milieu de Solubilité Composé 1 Composé II (Sulfate) (Co-cristal) 0.025 mg/m1 0.019 mg/m1 Eau ultra-purifiée (pH = 3.4) (pH = 3.5) HCI 0.1 N > 2mg/m1* > 2 mg/m1* (pH = 1.1) (pH = 1.0) 0.009 mg/m1 0.010 mg/m1 Tampon Acétate pH 4.7 (pH = 4.6) (pH = 4.6) 0.008 mg/m1 0.009 mg/m1 Tampon Phosphate pH 7.4 (pH = 7.4) (pH = 7.5) 10 *: Saturation non atteinte Tableau 5-1 : Valeurs de solubilité des Composés 1 et II mesurées après 16h d'agitation dans l'eau Ultra-purifiée, dans un Tampon HCI pH 1, dans un Tampon Acétate pH 4.7, dans un Tampon Phosphate pH 7.4 (cible 2mg/ml).

15 Exemple 6 détermination de la stabilté des composés II-et II 2- dans différentes conditions La stabilité Physique et Chimique du Composé 1 et du Composé II est étudiée par Diffraction des Rayons X sur poudre et par HPLC respectivement après 14 jours de stockage dans 4 conditions stressantes : 50°C/Humidité ambiante, 50°C/80% d'humidité relative, 20 80°C/Humidité ambiante et 80°C/80% d'humidité ambiante. La figure 6-1 compare les diffractogrammes de Rayons X sur poudre enregistrés pour les 4 aliquotes de Composé 1 prélevés dans les 4 cristallisoirs stockés pendant 14 jours dans les 4 conditions différentes d'humidité et de température. Les diffractogrammes enregistrés pour les aliquotes conservés 14 jours à 50°C/humidité ambiante, 50°C/80% d'humidité 25 relative et 80°C/humidité ambiante sont comparables au diffractogramme enregistré pour le Composé 1 tel que reçu. Le diffractogramme enregistré pour l'aliquote conservé 14 jours à 80°C/80% d'humidité relative est différent de celui enregistré pour le Composé 1 tel que reçu.

Ces résultats démontrent la stabilité Physique du Composé 1 pendant 14 jours dans les conditions 50°C/Humidité ambiante, 50°C/80% d'humidité relative et 80°C/Humidité ambiante et l'instabilité Physique du composé 1 pendant 14 jours dans les conditions 80°C/80% d'humidité relative.

Le Tableau 6-1 reporte le pourcentage de dégradation déterminé par HPLC pour les 4 aliquotes de Composé 1 stockés suivant les 4 conditions stressantes. Ces résultats démontrent la stabilité Chimique du Composé 1 pendant 14 jours dans les conditions 50°C/Humidité ambiante, 50°C/80% d'humidité relative et 80°C/Humidité ambiante et l'instabilité Chimique du composé 1 pendant 14 jours dans les conditions 80°C/80% d'humidité relative. 1 8000- ,a0 _ 3000-_ ,20 _ '000 P,0000 - e0 - ao ~I y 50 -- 4000 30 -- 2000 _-,. -- ' ._. -- - - 80°C/80 % HR - 0 0 20 a0 2-Theta - Scale Figure 61 : Diffractogrammes de Rayons X sur poudre enregistrés pour les aliquotes de Composé 1 stockés 14 jours dans les conditions 50°C/Humidité ambiante, 50°C/80% 15 d'humidité relative, 80°C/Humidité ambiante et 80°C/80% d'humidité ambiante, comparé au Diffractogramme de Composé 1 enregistré tel que reçu. Composé 1 50°C/Hu 50°C/80 80°C/Hu 80°C/80 Conditions midité % d'humidité midité % d'humidité ambiante relative ambiante relative Pourcenta =1% =0.3% =1.2% =16.1% ge de dégradation Tableau 61: Pourcentage de dégradation du Composé 1 stocké 14 jours dans les conditions stressantes 50°C/Humidité ambiante, 50°C/80% d'humidité relative, 20 80°C/Humidité ambiante et 80°C/80% d'humidité ambiante La figure 6-2 compare les diffractogrammes de Rayons X sur poudre enregistrés pour les 4 aliquotes de Composé II prélevés dans les 4 cristallisoirs stockés pendant 14 jours dans les 4 conditions différentes d'humidité et de température. Les diffractogrammes enregistrés pour les aliquotes conservés 14 jours à 50°C/humidité ambiante, 50°C/80% d'humidité relative, 80°C/humidité ambiante et 80°C/80% d'humidité relative sont comparables au diffractogramme enregistré pour le Composé II tel que reçu. Ces résultats démontrent la stabilité Physique du Composé II pendant 14 jours dans les conditions 50°C/Humidité ambiante, 50°C/80% d'humidité relative, 80°C/Humidité ambiante et 80°C/80% d'humidité relative. Le Tableau 6-2 reporte le pourcentage de dégradation déterminé par HPLC pour les 4 aliquotes de Composé II stockés suivant les 4 conditions stressantes. Ces résultats démontrent la stabilité Chimique du Composé II pendant 14 jours dans les conditions 50°C/Humidité ambiante, 50°C/80% d'humidité relative et 80°C/Humidité ambiante et une instabilité Chimique du Composé II pendant 14 jours dans les conditions 80°C/80% d'humidité relative. .000 180001 ,t000l ,0000l ,0000l ni000l ,3000 .. _ , 1200° OEn000l ,. o ,o 00 9000 "- - - - ao .,Q Çn50%HR I l Al I 1 ^ \ a000 V ~ so - a000 ~o - - y état initial 'nLJn~J,1J,L.JI j ~ z 0 2-Th20 eta - Scale ao Figure 6-2 : Diffractogrammes de Rayons X sur poudre enregistrés pour les aliquotes 20 de Composé II stockés 14 jours dans les conditions 50°C/Humidité ambiante, 50°C/80% d'humidité relative, 80°C/Humidité ambiante et 80°C/80% d'humidité ambiante, comparé au Diffractogramme de Composé 1 enregistré tel que reçu. Composé II 50°C/Hu 50°C/80 80°C/Hu 80°C/80 Conditions midité % d'humidité midité % d'humidité ambiante relative ambiante relative Pourcenta X0.0% - 0.3% - 0.6% - 8.7% ge de dégradation Tableau 6-2: Pourcentage de dégradation du Composé II stocké 14 jours dans les conditions stressantes 50°C/Humidité ambiante, 50°C/80% d'humidité relative, 80°C/Humidité ambiante et 80°C/80% d'humidité ambiante Exemple 7: Formulation à 5 mg/ml (en actif) en solution micellaire pour adminisration 1.v Dans un ballon, on charge 25 mg de l'énantiomère lévogyre du 8-oxo-9-[3-(1 H-benzimidazol-2-yloxy)-phényl]-4,5,6,7,8,9-hexahydro-2H-pyrrolo[3,4-b] quinoline-3-carboxylate d'éthyle (exemple 1, intermédiaire E1), 375 mg de polysorbate 80 (Tween 80), 125 µl d'éthanol. La suspension est agitée environ 15 minutes jusqu'à solubilisation, puis 4,5 ml de solution aqueuse de glucose 50/0 (G5) contenant 17,5 mg d'acide ascorbique (pour la solution à 3.5 mg/ml en acide ascorbique) ou 2.5 mg d'acide ascorbique (pour la solution à 0.5 mg/ml d'acide ascorbique) sont additionnés. Le mélange est acidifié jusqu'à pH = 2 avec H2SO4 puis agité jusqu'à obtention d'une homogénéité totale. Après la solubilisation, le pH est remonté à 3 par addition de NaOH IN. Le volume est enfin complété à 5 ml par addition de G5. Le conditionnement est réalisé en flacons antibiotiques et sous azote pour un stockage à 4°C à l'abri de la lumière. Le suivi du de l'apparition du produit d'oxydation 8-oxo-9-[3-(1 H-benzimidazol-2- yloxy)-phényl]-5,6,7,89-tetrahydro-2H-pyrrolo[3,4-b] quinoline-3-carboxylate d'éthyle (exemple 3) est réalisé par HPLC Les résultats du dosage du produit d'oxydation (exemple 3) après 35 jours de stockage à 5°c sont donnés dans le tableau ci-dessous par comparaison à une solution de référence de sulfate de l'énantiomère lévogyre du 8-oxo-9-[3-(1 H-benzimidazol-2-yloxy)-phényl]-4,5,6,7,8,9-hexahydro-2H-pyrrolo[3,4-b] quinoline-3-carboxylate d'éthyle (exemple 1, composé I) à 5 mg/ml dans un mélange eau/acétonitrile (50/50). sulfate de l'énantiomère lévogyre du 8-oxo-9- 0,65 [341 H-benzimidazol-2-yloxy)-phényl]- 4,5,6,7,8,9-hexahydro-2H-pyrrolo[3,4- b]quinoline-3-carboxylate d'éthyle (exemple 1, composé 1) à 5 mg/m1 dans un mélange eau/acétonitrile (50/50) l'énantiomère lévogyre du 8-oxo-9-[3-(1 H- 0,5 benzimidazol-2-yloxy)-phényl]-4,5,6,7,8,9-hexahydro-2H-pyrrolo[3,4-b] quinoline-3- carboxylate d'éthyle (exemple 1, intermédiaire E1), polysorbate 80 7.50/0, éthanol 2.50/0, G5, acide ascorbique 0.5 mg/m1 l'énantiomère lévogyre du 8-oxo-9-[3-(1 H- 0,25 benzimidazol-2-yloxy)-phényl]-4,5,6,7,8,9-hexahydro-2H-pyrrolo[3,4-b] quinoline-3- carboxylate d'éthyle (exemple 1, intermédiaire E1), polysorbate 80 7.50/0, éthanol 2.50/0, G5, acide ascorbique 0.5 mg/m1 Exemple 8: Formulation à 5 mg/m1 (en produit actif) à partir du sulfate de l'énantiomère lévogyre du 8-oxo-9-1'3-(1H-benzimidazol-2-yloxy)-phényll-4,5,6,7,8,9- hexahydro-2H-pyrrolof3,4-blquinoline-3-carboxylate d'éthyle (exemple 1, composé 1) en solution micellaire pour adminisration 1.v Dans un ballon on charge 300 mg d'acide ascorbique, puis 8 ml de glucose 50/0 (G5). La suspension est agitée jusqu'à obtention d'une solution, puis additionnée de 250 µl d'éthanol et 750 mg de polysorbate 80 ou Solutol HS15 (BASF). Le mélange est agitée jusqu'à obtention d'une homogénéité totale puis 60 mg de sulfate de l'énantiomère lévogyre du 8-oxo-9-[3-(1 H-benzimidazol-2-yloxy)-phényl]-4,5,6,7,8,9-hexahydro-2H-pyrrolo[3,4-b] quinoline-3-carboxylate d'éthyle (exemple 1, composé 1) sont ajoutés. L'ensemble est agité pendant 30 min jusqu' à dissolution. 250 µl de NaOH IN sont alors ajoutés pour ajuster le pH à 3. Le volume est enfin complété à 10 m1 par addition de G5.

Le conditionnement doit être réalisé en verre inactinique pour le stockage. Un programme de stabilité de 3 mois à 5°c et protégé de la lumière a été réalisé pour la formulation Solutol, aucune augmentation significative du produit d'oxydation 8-oxo-9-[3-(1 H-benzimidazol-2-yloxy)-phényl]-5,6,7,89-tetrahyd ro-2H-pyrrolo[3,4-b]quinoline-3-carboxylate d'éthyle (exemple 3) n'a été observée par dosage HPLC.20 L'invention a également pour objet un procédé de préparation du sel sulfate cristallin et du co-cristal et de la formulation tels que définis ci-dessus. La présente invention a ainsi pour objet un procédé de préparation du composé 1 tel que définie aux revendications 1 à 6 ou sel sulfate du 8-oxo-9-[3-(1 H-benzimidazol-2-yloxy)- phényl]-4,5,6,7,8,9-hexahydro-2H-pyrrolo[3,4-b]quinoline-3-carboxylate d'éthyle, tel que défini dans le schéma 1 ci-après : 1- O TsOH cat., 1 THF, 49-52°C, 3h.

N~CI 2- McONa, heptane, 12°C-TA N H Etape 1 intermédiaire B1 N ~~cl N HI HO - O 1- 1/ NaH, DMF, reflux N O_ 2- Extraction, AcOEt , concentration. Etape 2 3- Filtration sur silice, trituration iPr2O \ H O HN EtOOC H intermédiaire E1, base énantiomère lévogyre intermédiaire D1, base racémique intermédiaire Cl intermédiaire Al purification & separation des enantioméres 1-aq.HCl, EtOH TA., 20h. 2-trituration iPr2O HN Etape 4 EtOOC H EtOOC H Etape 5 N 1 La présente invention a ainsi pour objet un procédé de préparation du composé II tel que définie ci-dessus caractérisé en ce que : - ou bien l'énantiomère lévogyre du 8-oxo-9-[3-(1 H-benzimidazol-2-yloxy)-phényl]-4,5,6,7,8,9-hexahydro-2H-pyrrolo[3,4-b] quinoline-3-carboxylate d'éthyle est broyé avec de l'acide L-malique en présence d'éthanol, HN O HO-S=O EtOOC H OH Composé I, exemple 1 Sulfate de l'énantiomère lévogyre 8-oxo-9-[3-(1 H-benzimidazol-2-yloxy)-phényl]-4, 5, 6, 7 , 8, 9 -h ex a h y d ro-2 H -py r ro I o [3 , 4- b ] quinoline-3-carboxylate d'éthyle. - ou bien l'énantiomère lévogyre du 8-oxo-9-[3-(1 H-benzimidazol-2-yloxy)-phényl]-4,5,6,7,8,9-hexahydro-2H-pyrrolo[3,4-b] quinoline-3-carboxylate d'éthyle est broyé avec de l'acide L-malique en présence d'éthanol, et le solide résultant est mis en suspension dans-de l'acétate d'éthyle. - ou bien on mélange une solution éthanolique de l'énantiomère lévogyre du 8-oxo-9-[3-(1 H-benzimidazol-2-yloxy)-phényl]-4,5,6,7,8,9-hexahydro-2H-pyrrolo[3,4-b] quinoline-3-carboxylate d'éthyle avec une solution éthanolique de l'acide L-malique. puis la cristallisation est amorcée avec du co-cristal de l'énantiomère lévogyre du 8-oxo-9-[3-(1 H-benzimidazol-2-yloxy)-phényl]-4,5,6,7,8,9-hexahydro-2H-pyrrolo[3,4-b] quinoline-3-carboxylate d'éthyle avec l'acide L-Malique puis de l'acétate d'éthyle est ajouté.- La présente invention a ainsi pour objet un procédé de préparation d'une formulation telle que définie ici-dessus caractérisé en ce que : - ou bien on charge de l'énantiomère lévogyre du 8-oxo-9-[3-(1 H-benzimidazol-2-yloxy)-phényl]-4,5,6,7,8,9-hexahydro-2H-pyrrolo[3,4-b] quinoline-3-carboxylate d'éthyle, du polysorbate 80 (Tween 80) et del' éthanol, on agite puis on ajoute une solution aqueuse de glucose contenant de l'acide ascorbique puis le pH du mélange est ajusté à ph=3 - ou bien on charge de l'acide ascorbique, puis du glucose 50/0 on agite puis ajoute de l' éthanol et du polysorbate 80 ou Solutol ; on agite et ajoute du sulfate de l'énantiomère lévogyre du 8-oxo-9-[3-(1 H-benzimidazol-2-yloxy)-phényl]-4,5,6,7,8,9-hexahydro-2H- pyrrolo[3,4-b]quinoline-3-carboxylate d'éthyle (composé 1) ; on agite et ajoute du NaOH IN pour ajuster le pH à 3- Des exemples de préparation du sel sulfate, de ses formes cristallines et des formulations objet de la présente invention sont décrits dans la présente invention. Dans ce qui suit, les matières de départ et les réactifs, quand leur préparation n'est pas décrite, sont disponibles dans le commerce ou décrits dans la littérature, ou bien peuvent être préparés selon des méthodes qui y sont décrites ou qui sont connues de l'Homme du métier. De façon inattendue, on a en effet mis en évidence que le sel sulfate et le co-cristal de l'acide L-malique du composé de formule (F) possédaient des propriétés de stabilité et de solubilité encore améliorées par rapport au même composé sous forme de base. Enfin, le sel sulfate et le co-cristal de l'acide L-Malique sont plus solubles que le composé de formule (F) sous forme de base libre, comme le montre les analyses décrites dans l'exemple 5. On a mis également en évidence que la forme sulfate du composé de formule (F) et le co-cristal de l'acide L-Malique possédaient des propriétés améliorées de stabilité à la température par rapport à la forme d'autre sels (Chlorhydrate, phosphate, p- toluenesulfonate, naphtalene-1,5-disulfonate, tous obtenus sous forme amorphe) de ce même composé. Il ressort de ces analyses que le sel sulfate du composé et le co-cristal de l'acide L-malique de formule (F) présentent à la fois des propriétés de solubilité et de stabilité supérieures à celles du composé de formule (F) sous forme de base ou de sel de chlorhydrate, de phosphate, de p-toluenesulfonate ou de naphtalene-1,5-disulfonate, et qui le rendent particulièrement adapté à la fabrication de médicaments. Les propriétés physico-chimiques du composé de formule (F) sous forme de sel de sulfate ou de co-cristal de l'acide L-malique permettent également sa conservation dans les conditions usuelles sans précautions trop contraignantes en rapport avec la présence de lumière, la température et l'humidité. On a mis en évidence une formulation en solution micellaire adaptée à l'administration intraveineuse du composé de formule (F) qui permet de de stabiliser pendant plusieurs semaine à plusieurs mois le composé de formule (F), cette solution est encore plus stable quand elle est réalisée à partir de la forme sulfate du composé de formule (F). Le sel sulfate ou composé I selon la présente invention est un anti-cancéreux. Le cocristal ou composé II selon la présente invention est un anti-cancéreux. De même pour les formulations selon la présente invention. A ce titre, le composé I, le composé II et les formulations selon la présente invention, 20 peuvent être utilisés pour la préparation de médicaments, en particulier de médicaments destinés à traiter les cancers, notamment mentionnés ci-dessous. Ainsi, selon un autre de ses aspects, l'invention a pour objet des médicaments qui comprennent le sel sulfate, le co-cristal ou les formulations définies ci-dessus.- Ces médicaments trouvent leur emploi en thérapeutique, notamment dans le traitement de 25 cancers, notamment mentionnés ci-dessous. Un autre objet de l'invention est donc l'utilisation du sel sulfate pour la préparation d'un médicament destiné à traiter les cancers mentionnés ci-dessous. Selon un autre de ses aspects, la présente invention concerne des compositions pharmaceutiques comprenant, en tant que principe actif, le sel sulfate. Ces 30 compositions pharmaceutiques contiennent une dose efficace du sel sulfate; ainsi qu'au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable. Lesdits excipients sont choisis selon la forme pharmaceutique et le mode d'administration souhaités, parmi les excipients habituels qui sont connus de l'Homme du métier. L'invention s'étend ainsi aux compositions pharmaceutiques contenant à titre de principe 35 actif l'un au moins des médicaments tels que définis ci-dessus. De telles compositions pharmaceutiques de la présente invention peuvent également, le cas échéant, renfermer des principes actifs d'autres médicaments antimitotiques tels que notamment ceux à base de taxol, cis-platine, les agents intercalants de l'ADN et autres. Ces compositions pharmaceutiques peuvent être administrées par voie buccale, par voie parentérale ou par voie locale en application topique sur la peau et les muqueuses 5 ou par injection par voie intraveineuse ou intramusculaire. Ces compositions peuvent être solides ou liquides et se présenter sous toutes les formes pharmaceutiques couramment utilisées en médecine humaine comme, par exemple, les comprimés simples ou dragéifiés, les pilules, les tablettes, les gélules, les gouttes, les granulés, les préparations injectables, les pommades, les crèmes ou les 10 gels ; elles sont préparées selon les méthodes usuelles. Le principe actif peut y être incorporé à des excipients habituellement employés dans ces compositions pharmaceutiques, tels que le talc, la gomme arabique, le lactose, l'amidon, le stéarate de magnésium, le beurre de cacao, les véhicules aqueux ou non, les corps gras d'origine animale ou végétale, les dérivés paraffiniques, les glycols, les divers agents 15 mouillants, dispersants ou émulsifiants, les conservateurs. La posologie usuelle, variable selon le produit utilisé, le sujet traité et l'affection en cause, peut être, par exemple, de 0,05 à 5 g par jour chez l'adulte, ou de préférence de 0,1 à 2 g par jour. La présente invention a ainsi pour objet un médicament caractérisé en ce qu'il 20 comprend le composé 1 tel que défini ci-dessus sous forme de sel sulfate du 8-oxo-9-[3-(1 H-benzimidazol-2-yloxy)-phényl]-4,5,6,7,8,9-hexahydro-2H-pyrrolo[3,4-b] quinoline-3-carboxylate d'éthyle. La présente invention a ainsi pour objet un médicament caractérisé en ce qu'il comprend le composé 11 tel que défini ci-dessus sous forme de co-cristal du 8-oxo-9-[3- 25 (1 H-benzimidazol-2-yloxy)-phényl]-4,5,6,7,8,9-hexahydro-2H-pyrrolo[3,4-b] quinoline-3-carboxylate d'éthyle. La présente invention a ainsi pour objet un médicament caractérisé en ce qu'il comprend une formulation du 8-oxo-9-[3-(1 H-benzimidazol-2-yloxy)-phényl]-4,5,6,7,8,9-hexahydro-2H-pyrrolo[3,4-b] quinoline-3-carboxylate d'éthyle tel que défini ci-dessus. 30 La présente invention a encore pour objet une composition pharmaceutique, caractérisée en ce qu'elle comprend, à titre de principe actif, le composé 1 ou sel sulfate du 8-oxo-9-[3-(1 H-benzimidazol-2-yloxy)-phényl]-4,5,6,7,8,9-hexahydro-2H-pyrrolo[3,4-b] quinoline-3-carboxylate d'éthyle tel que défini ci-dessus ainsi qu'au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable.

La présente invention a encore pour objet une composition pharmaceutique, caractérisée en ce qu'elle comprend, à titre de principe actif, le composé II ou co-cristal du 8-oxo-9-[3-(1 H-benzimidazol-2-yloxy)-phényl]-4,5,6,7,8,9-hexahydro-2H-pyrrolo[3,4-b] quinoline-3-carboxylate d'éthyle tel que défini ci-dessus ainsi qu'au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable. La présente invention a encore pour objet une composition pharmaceutique, caractérisée en ce qu'elle comprend, à titre de principe actif, une formulation du 8-oxo-9-[3-(1 H-benzimidazol-2-yloxy)-phényl]-4,5,6,7,8,9-hexahydro-2H-pyrrolo[3,4-b] quinoline-3-carboxylate d'éthyle tel que défini ci-dessus ainsi qu'au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable. La présente invention a encore pour objet l'utilisation du composé 1 tel que défini ci-dessus, ou sel sulfate du 8-oxo-9-[3-(1 H-benzimidazol-2-yloxy)-phényl]-4,5,6,7,8,9-hexahydro-2H-pyrrolo[3,4-b] quinoline-3-carboxylate d'éthyle pour la préparation d'un médicament destiné à traiter le cancer.

La présente invention a encore pour objet l'utilisation du composé 11 tel que défini ci-dessus, ou co-cristal du 8-oxo-9-[3-(1 H-benzimidazol-2-yloxy)-phényl]-4,5,6,7,8,9-hexahydro-2H-pyrrolo[3,4-b] quinoline-3-carboxylate d'éthyle pour la préparation d'un médicament destiné à traiter le cancer. La présente invention a encore pour objet l'utilisation d'une formulation du 8-oxo-9-[3- (1 H-benzimidazol-2-yloxy)-phényl]-4,5,6,7,8,9-hexahydro-2H-pyrrolo[3,4-b] quinoline-3-carboxylate d'éthyle tel que défini ci-dessus, pour la préparation d'un médicament destiné à traiter le cancer. Un tel médicament peut notamment être destiné au traitement ou à la prévention d'une maladie chez un mammifère.

La présente invention a notamment pour objet l'utilisation des composés I, Il ou formulation tels que définis ci-dessus pour la préparation d'un médicament destiné à la prévention ou au traitement de maladies liées à une prolifération non contrôlée. La présente invention a particulièrement pour objet l'utilisation des composés I, Il ou formulation tels que définis ci-dessus pour la préparation d'un médicament destiné au traitement ou à la prévention d'une maladie choisie dans le groupe suivant : troubles de la prolifération de vaisseaux sanguins, troubles fibrotiques, troubles de la prolifération de cellules 'mesangial', désordres métaboliques, allergies, asthmes, thromboses, maladies du système nerveux, rétinopathie, psoriasis, arthrite rhumatoïde, diabète, dégénérescence musculaire, infection bactérienne, en particulier par Listeria monocytogenes et cancers. La présente invention a ainsi tout particulièrement pour objet l'utilisation des composés I, Il ou formulation tels que définis ci-dessus pour la préparation d'un médicament destiné au traitement ou à la prévention de maladies en oncologie et notamment destiné au traitement de cancers. Parmi ces cancers, on s'intéresse au traitement de tumeurs solides ou liquides, au traitement de cancers résistant à des agents cytotoxiques Les produits de la présente invention cités peuvent notamment être utilisés pour le traitement de tumeurs primaires et/ou de métastases en particulier dans les cancers gastriques, hépatiques, rénaux, ovariens, du colon, de la prostate, du poumon (NSCLC et SCLC), les glioblastomes, les cancers de la thyroïde, de la vessie, du sein, dans les mélanomes, dans les tumeurs hématopoiétiques lymphoïdes ou myéloïdes, dans les sarcomes, dans les cancers du cerveau, du larynx, du système lymphatique, cancers des os et du pancréas.

La présente invention a aussi pour objet l'utilisation des composés I, Il ou formulation tels que définis ci-dessus pour la préparation de médicaments destinés à la chimiothérapie de cancers. De tels médicaments destinés à la chimiothérapie de cancers peuvent être utilisés seuls ou en en association.

Les produits de la présente demande peuvent notamment être administrés seuls ou en association avec de la chimiothérapie ou de la radiothérapie ou encore en association par exemple avec d'autres agents thérapeutiques. De tels agents thérapeutiques peuvent être des agents anti-tumoraux couramment utilisés.

Comme inhibiteurs de kinases, on peut citer la butyrolactone, le flavopiridol et la 2(2-hydroxyéthylamino)-6-benzylamino-9-méthylpurine appelée olomucine. La présente invention a encore pour objet à titre de produits industriels nouveaux, les intermédiaires de synthèse de formules Al, B1, Cl, D1 et E1 tels que définis dans la préparation des exemples ci-dessus.

Dans les compositions pharmaceutiques de la présente invention pour l'administration orale, sublinguale, sous-cutanée, intramusculaire, intra-veineuse, topique, locale, intratrachéale, intranasale, transdermique ou rectale, le sel de sulfate peut être 34 administré sous forme unitaire d'administration, en mélange avec des excipients pharmaceutiques classiques, aux animaux et aux êtres humains pour la prophylaxie ou le traitement des troubles ou des maladies ci-dessus. Les formes unitaires d'administration appropriées comprennent les formes par voie orale telles que les comprimés, les gélules molles ou dures, les poudres, les granules et les solutions ou suspensions orales, les formes d'administration sublinguale, buccale, intratrachéale, intraoculaire, intranasale, par inhalation, les formes d'administration topique, transdermique, sous-cutanée, intramusculaire ou intraveineuse, les formes d'administration rectale et les implants. Pour l'application topique, on peut utiliser les composés selon l'invention dans des crèmes, gels, pommades ou lotions. Lesdites formes unitaires sont dosées pour permettre une administration journalière de 0,01 à 20 mg de principe actif par kg de poids corporel, selon la forme galénique. Il peut y avoir des cas particuliers où des dosages plus élevés ou plus faibles sont appropriés ; de tels dosages ne sortent pas du cadre de l'invention. Selon la pratique habituelle, le dosage approprié à chaque patient est déterminé par le médecin selon le mode d'administration, le poids et la réponse dudit patient. La présente invention, selon un autre de ses aspects, concerne également une méthode de traitement des pathologies ci-dessus indiquées qui comprend l'administration, à un patient, d'une dose efficace de sulfate .

Claims (21)

1. REVENDICATIONS1) Composé 8-oxo-9-[3-(1 H-benzimidazol-2-yloxy)-phényl]-4,5,6,7,8,9-hexahydro-2H-pyrrolo[3,4-b] quinoline-3-carboxylate d'éthyle ou composé F de formule (F) ci-après, oEt (F) ce composé F étant sous forme: - de composé 1 sel sulfate dudit composé F - ou de composé 11 co-cristal dudit produit de formule (F) - ou de formulation renfermant ledit composé de formule (F) ou ledit composé 1 sel sulfate du produit de formule (F) ou ledit composé 11 co-cristal du produit de formule (F) tels que définis ci-dessus.
2. 2) Composé 1 tel que défini à la revendication 1 ou sel de sulfate du 8-oxo-9-[3-(1 H-15 benzimidazol-2-yloxy)-phényl]-4,5,6,7,8,9-hexahydro-2H-pyrrolo[3,4-b] quinoline-3-carboxylate d'éthyle
3. 3) Composé 1 tel que défini à la revendication 1 ou 2, ou sel de sulfate du 8-oxo-9-[3-(1 H-benzimidazol-2-yloxy)-phényl]-4,5,6,7,8,9-hexahydro-2H-pyrrolo[3,4-b] quinoline-3-20 carboxylate d'éthyle caractérisé en ce qu'il est sous forme cristalline .
4. 4). Composé 1 tel que défini à la revendication 1 à 3, ou sel de sulfate du 8-oxo-9-[3-(1 H-benzimidazol-2-yloxy)-phényl]-4,5,6,7,8,9-hexahydro-2H-pyrrolo[3,4-b] quinoline-3-carboxylate d'éthyle dont le diffractogramme de rayons X est tel que définie à la figure 25 4-1 ci-après : Figure 4-1 : Diffractogramme Rayons X pour le Composé 1 20 (°) d (A) Intensité 107,215 12,24212 66,3 10,804 8,18214 8,5 11,059 7,99377 19,7 11,75 7,52565 27,3 14,483 6,1109 41,3 15,497 5,71331 11,8 17,247 5,13736 9,4 18,135 4,8877 40 18,734 4,73293 15,5 19,354 4,58267 26,6 19,961 4,44456 11,3 20,403 4,34919 11,6 21,727 4,08704 11,6 22,249 3,99249 100 23,686 3,75334 21,4 24,201 3,67469 14 24,937 3,56777 57,7 25,42 3,50113 26,4 26,681 3,3384 13,1 28,34 3,14666 14,4 31,321 2,85359 14,2
5. 5) Composé 1 tel que défini à la revendication 1 à 3, ou sel de sulfate du 8-oxo-9-[3-(1 H-benzimidazol-2-yloxy)-phényl]-4,5,6,7,8,9-hexahydro-2H-pyrrolo[3,4-b] quinoline-3-5 carboxylate d'éthyle caractérisé en ce que son point de fusion est 242-244°C,
6. 6) Composé II tel que défini à la revendication 1 ou co-cristal du 8-oxo-9-[3-(1 H-benzimidazol-2-yloxy)-phényl]-4,5,6,7,8,9-hexahydro-2H-pyrrolo[3,4-b] quinoline-3-carboxylate d'éthyle
7. 7) Composé II tel que défini à la revendication 1 ou 6 ou co-cristal du
8. 8-oxo-9-[3-(1 H-benzimidazol-2-yloxy)-phényl]-4,5,6,7,8,9-hexahydro-2H-pyrrolo[3,4-b] quinoline-3-carboxylate d'éthyle caractérisé en ce qu'il s'agiit du co-cristal de l'acide L-malique.8). Composé II tel que défini à la revendication 1 ou 6 à 7 ou Co-cristal de l'acide L-malique du 8-oxo-9-[3-(1 H-benzimidazol-2-yloxy)-phényl]-4,5,6,7,8,9-hexahydro-2H-pyrrolo[3,4-b] quinoline-3-carboxylate d'éthyle dont le diffractogramme de rayons X est tel que définie à la figure 4-2 ci-après : Figure 4-2 : Diffractogramme Rayons X enregistré pour le Composé II (Co-cristal). 20 (°) d (Â) Intensité 4,797 18,40588 14,9 11,476 7,7043 33,2 11,848 7,46367 15,1 12,7 6,96481 13,2 14,232 6,21834 7,4 14,837 5,96602 12,8 15,825 5,59552 11,6 17,086 5,18542 33,2 18,589 4,76942 20 18,966 4,67532 35,9 19,444 4,56146 18,1 20,209 4,39061 100 21,094 4,20842 48,3 21,539 4,12238 29,7 22,119 4,01562 87,3 23,121 3,84384 19,9 25,001 3,5588 35,6 26,139 3,40638 43,6 29,326 3,0431 35,1
9. 9) Formulations telle que définies à la revendication 1 caractérisées en ce qu'elles renferment ledit composé de formule (F) ou ledit composé 1 sel sulfate du produit de formule (F) ou ledit composé II co-cristal du produit de formule (F) tels que définis aux revendications ci-dessus.
10. 10) Procédé de préparation du composé 1 tel que définie aux revendications 1 à 5 ou sel sulfate du 8-oxo-9-[3-(1 H-benzimidazol-2-yloxy)-phényl]-4,5,6,7,8,9-hexahydro-2H- pyrrolo[3,4-b]quinoline-3-carboxylate d'éthyle, tel que défini dans le schéma 1 ci-après :
11. 11) Procédé de préparation du composé II tel que définie aux revendications 1 et 6 à 8 caractérisé en ce que : - ou bien l'énantiomère lévogyre du 8-oxo-9-[3-(1 H-benzimidazol-2-yloxy)-phényl]-4,5,6,7,8,9-hexahydro-2H-pyrrolo[3,4-b] quinoline-3-carboxylate d'éthyle est broyé avec de l'acide L-malique en présence d'éthanol, - ou bien l'énantiomère lévogyre du 8-oxo-9-[3-(1 H-benzimidazol-2-yloxy)-phényl]-4,5,6,7,8,9-hexahydro-2H-pyrrolo[3,4-b] quinoline-3-carboxylate d'éthyle est broyé avec de l'acide L- malique en présence d'éthanol, et le solide résultant est mis en suspension dans-de l'acétate d'éthyle - ou bien on mélange une solution éthanolique de l'énantiomère lévogyre du 8-oxo-9-[3-(1 H-benzimidazol-2-yloxy)-phényl]-4,5,6,7,8,9-hexahydro-2H-pyrrolo[3,4-b] quinoline-3-carboxylate d'éthyle avec une solution éthanolique de l'acide L-malique. puis la cristallisation est amorcée avec du co-cristal de l'énantiomère lévogyre du 8-oxo-9-[3-(1 H-benzimidazol-2-yloxy)-phényl]-4,5,6,7,8,9-hexahydro-2H-pyrroio[3,4-b] quinoline-3-carboxylate d'éthyle avec l'acide L-Malique puis de l'acétate d'éthyle est ajouté.-
12. 12) Procédé de préparation d'une formulation telle que définie aux revendications 1 et 9 20 caractérisé en ce que : - ou bien on charge de l'énantiomère lévogyre du 8-oxo-9-[3-(1 H-benzimidazol-2-yloxy)-phényl]-4,5,6,7,8,9-hexahydro-2H-pyrrolo[3,4-b] quinoline-3-carboxylate d'éthyle, du polysorbate 80 (Tween 80) et del' éthanol, on agite puis on ajoute une solution aqueuse de glucose contenant de l'acide ascorbique puis le pH du mélange est ajusté à pH = 3. 25 - ou bien on charge de l'acide ascorbique, puis du glucose 5% on agite puis ajoute de l' éthanol et du polysorbate 80 ou Solutol ; on agite et ajoute du sulfate de l'énantiomère lévogyre du 8-oxo-9-[3-(1 H-benzimidazol-2-yloxy)-phényl]-4,5,6,7,8,9-hexahydro-2H-pyrrolo[3,4-b] quinoline-3-carboxylate d'éthyle (composé 1) ; on agite et ajoute du NaOH 1 N pour ajuster le pH à 3- 30
13. 13) Médicament, caractérisé en ce qu'il comprend le composé 1 tel que défini aux revendications 1 à 5 sous forme de sel sulfate du 8-oxo-9-[3-(1 H-benzimidazol-2-yloxy)-phényl]-4,5,6,7,8,9-hexahydro-2H-pyrrolo[3,4-b] quinoline-3-carboxylate d'éthyle. 35
14. 14). Médicament, caractérisé en ce qu'il comprend le composé II tel que défini aux revendications 1 et 6 à 8 sous forme de co-cristal du 8-oxo-9-[3-(1 H-benzimidazol-2-40 yloxy)-phényl]-4,5,6,7,8,9-hexahydro-2H-pyrrolo[3,4-b] quinoline-3-carboxylate d'éthyle.
15. 15). Médicament, caractérisé en ce qu'il comprend une formulation du 8-oxo-9-[3-(1 H-benzimidazol-2-yloxy)-phényl]-4,5,6,7,8,9-hexahydro-2H-pyrrolo[3,4-b] quinoline-3-5 carboxylate d'éthyle tel que défini aux revendications 1 et 9.
16. 16) Composition pharmaceutique, caractérisée en ce qu'elle comprend, à titre de principe actif, le composé 1 ou sel sulfate du 8-oxo-9-[3=(1 H-benzimidazol-2-yloxy)-phényl]-4,5,6,7,8,9-hexahydro-2H-pyrrolo[3,4-b] quinoline-3-carboxylate d'éthyle tel que 10 défini aux revendications 1 à 5 ainsi qu'au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable.
17. 17 Composition pharmaceutique, caractérisée en ce qu'elle comprend, à titre de principe actif, le composé II ou co-cristal du 8-oxo-9-[3-(1 H-benzimidazol-2-yloxy)-phényl]- 15 4,5,6,7,8,9-hexahydro-2H-pyrrolo[3,4-b]quinoline-3-carboxylate d'éthyle tel que défini aux revendications 1 et 6 à 8 ainsi qu'au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable.
18. 18 Composition pharmaceutique, caractérisée en ce qu'elle comprend, à titre de principe 20 actif, une formulation du 8-oxo-9-[3-(1 H-benzimidazol-2-yloxy)-phényl]-4,5,6,7,8,9-hexahydro-2H-pyrrolo[3,4-b] quinoline-3-carboxylate d'éthyle tel que défini aux revendications 1 et 9 ainsi qu'au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable.
19. 19 Utilisation du composé 1 tel que défini aux revendications 1 à 5 ou sel du 8-oxo-9-[3-25 (1 H-benzimidazol-2-yloxy)-phényl]-4,5,6,7,8,9-hexahydro-2H-pyrrolo[3,4-b] quinoline-3 carboxylate d'éthyle pour la préparation d'un médicament destiné à traiter le cancer.
20. 20 Utilisation du composé II tel que défini aux revendications 1 et 6 à 8 ou co-cristal du 8-oxo-9-[3-(1 H-benzimidazol-2-yloxy)-phényl]-4,5,6,7,8,9-hexahydro-2H-pyrrolo[3,4- 30 b]quinoline-3-carboxylate d'éthyle pour la préparation d'un médicament destiné à traiter le cancer.
21. 21 Utilisation d'une formulation du 8-oxo-9-[3-(1 H-benzimidazol-2-yloxy)-phényl]- 4,5,6,7,8,9-hexahydro-2H-pyrrolo[3,4-b]quinoline-3-carboxylate d'éthyle telle que définie 35 aux revendications 1 et 9, pour la préparation d'un médicament destiné à traiter le cancer