JP5584833B2 - 美容方法 - Google Patents
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Description
[1] ヒトの皮膚表面に生息する細菌を採取する工程と、前記細菌のうち、ヒトの皮膚表面で増殖し、皮膚の健康状態を改善させる1または複数種の有用菌を選択的に増殖させる工程と、前記増殖させた有用菌の菌体、菌体成分および前記有用菌の産生物質からなる群より選択される1または複数を含む組成物をヒトの皮膚に投与する工程とを有する美容方法。
[2] 前記投与する工程において、前記細菌を採取したのと同一のヒト個体に前記組成物の投与(戻し)を行う上記[1]記載の美容方法。
[3] 前記細菌が皮膚常在菌である上記[1]または[2]記載の美容方法。
[4] 前記1または複数種の有用菌を選択的に増殖させる工程が、
採取した前記細菌を培地上で培養する予備培養工程と、
前記培養した細菌から前記有用菌を選抜する選抜工程と、
前記選抜した有用菌を培養する培養工程とを含む上記[1]から[3]のいずれか1項記載の美容方法。
[5] 前記細菌がヒトの健全な状態の皮膚表面に生息するものである上記[1]から[4]のいずれか1項記載の美容方法。
[6] 前記有用菌がコアグラーゼ陰性ブドウ球菌である上記[1]から[5]のいずれか1項記載の美容方法。
[7] 前記有用菌が表皮ブドウ球菌(Staphylococcus epidermidis)である上記[6]記載の美容方法。
[8] ヒトの皮膚表面から採取した皮膚常在菌より分離し選択的に増殖させた、ヒトの皮膚表面で増殖し、皮膚の健康状態を改善させる1または複数種の有用菌の菌体、菌体成分および前記有用菌の産生物質からなる群より選択される1または複数を含むスキンケア用組成物。
[9] 前記細菌が皮膚常在菌である上記[8]記載のスキンケア用組成物。
[10] 前記細菌が、ヒトの健全な状態の皮膚表面に生息するものである上記[8]または[9]記載のスキンケア用組成物。
[11] 前記有用菌がコアグラーゼ陰性ブドウ球菌である上記[8]から[10]のいずれか1項記載のスキンケア用組成物。
[12] 前記有用菌が表皮ブドウ球菌(Staphylococcus epidermidis)である上記[11]記載のスキンケア用組成物。
[13] ヒトの皮膚表面から採取した皮膚常在菌のうち、ヒトの皮膚表面で増殖し、皮膚の健康状態を改善させる1または複数種の有用菌を選択的に増殖させて得られる菌体。
[14] 前記細菌が皮膚常在菌である上記[13]記載の菌体。
[15] 前記細菌がヒトの健全な状態の皮膚表面に生息するものである上記[13]または[14]記載の菌体。
[16] 前記有用菌がコアグラーゼ陰性ブドウ球菌である上記[13]から[15]のいずれか1項記載の菌体。
[17] 前記有用菌が表皮ブドウ球菌(Staphylococcus epidermidis)である上記[16]記載の菌体。
[18] 上記[13]から[17]のいずれか1項記載の菌体を乾燥させて得られる乾燥菌体。
本発明の一実施の形態に係る美容方法(以下、「美容方法」と略称する場合がある。)は、個人(ヒトの個体)の皮膚表面からその表面に生息する皮膚常在菌(細菌の一例)を採取する工程と、皮膚常在菌のうち、個人の皮膚表面で増殖し、皮膚の健康状態を改善させる1または複数種の有用菌を選択的に増殖させる工程と、増殖させた有用菌の菌体、菌体成分および有用菌の産生物質からなる群より選択される1または複数を含むスキンケア用組成物を個人の皮膚に投与する(戻す)工程とを有している。
皮膚の表面には数十種類の皮膚常在菌を始めとする細菌が存在しているが、スキンケア用組成物の製造に用いられる細菌としては、皮膚の状態を健全に保つ上で有用なものであれば、これらのうち任意のものを単独で、あるいは任意の2以上のものを適宜組み合わせて用いてもよい。スキンケア用組成物の製造に好適に用いられる細菌としては、ヒトの皮膚常在菌が挙げられ、その具体例として、表皮ブドウ球菌(Staphylococcus epidermidis)が挙げられる。
上記のようにして皮膚表面から採取した細菌には、有用菌も有害菌も含まれている。これらのうち、所望の1または複数種の有用菌のみを選択的に増殖させる。選択的な増殖の方法としては、所望の有用菌のみを分離後培養する方法、所望の有用菌のみが増殖する条件下で培養を行う方法があり、いずれの方法を用いてもよい。
(i)採取した細菌を培地上で培養する予備培養工程
(ii)培養した細菌の同定を行い、有用菌を選抜する選抜工程
(iii)選抜した有用菌を培養する培養工程
滅菌綿棒等を用いて採取した細菌は、リン酸緩衝生理食塩水(PBS)等の希釈液を用いて所定の倍率(例えば10〜100,000倍)に希釈し、培養用の培地表面に塗布後、培養を行う。培養条件は、分離の目的とする有用菌の種類や使用する培地等の条件に応じて適宜設定される。
上記の予備培養工程で培養した細菌について、菌種の同定を行い、有用菌の選抜を行う。選抜工程は、任意の公知の方法を用いて行うことができるが、例えば、下記のような手順で行われる。まず、培地の目視観察を行い、培地上に形成されたコロニー数のカウントを行うと共に、可能な場合には外観による予備分類を行う。次いで、個々のコロニーまたはそのうちの代表的ないくつかについて、菌種の同定を行う。例えば、表皮ブドウ球菌の場合には、顕微鏡観察、グラム染色およびコアグラーゼ活性を組み合わせることにより同定を行う。特に、表皮ブドウ球菌は、黄色ブドウ球菌等の病原性菌と異なりコアグラーゼ陰性(CNS)であるため、コアグラーゼ活性の測定は、黄色ブドウ球菌との識別上重要である。
上記のようにして皮膚常在菌等の細菌から選抜(分離)された有用菌を培養する。培養は、任意の公知の方法を用いて行うことができる。このようにして得られる有用菌は、皮膚常在菌を採取した個人の皮膚表面の環境に適応していると考えられるため、スキンケア用組成物に含有させて個人の皮膚表面に投与する(戻す)ことにより、皮膚表面で優勢に増殖し、それに伴う皮膚表面の状態の改善や有害菌の増殖抑制等の効果が期待できる。培養に使用される培地や培養条件については、予備培養工程の場合と同様、分離の目的とする有用菌の種類や使用する培地等の条件に応じて適宜設定される。なお、複数の有用菌を選抜した場合、菌株ごとに分離し、純粋培養したものを、スキンケア用組成物の製造時に所定の割合で混合して用いてもよいが、複数種の有用菌を混合した状態で培養してもよい。
スキンケア用組成物の調製に際し、上記のようにして選択的に増殖させた有用菌の生菌を直接用いてもよいが、生菌を含む状態では長期保存が困難であるため、有用菌の仮死状態菌または有用菌の乾燥菌体を調製しておき、使用の直前に水を含む基剤に分散させることにより有用菌を復元し、有用菌を含むスキンケア用組成物を調製してもよい。
実施例1:皮膚常在菌からの表皮ブドウ球菌の分離および純粋培養ならびに乾燥菌体の作製
[1]皮膚常在菌の採取
下記の操作は滅菌手袋を着用した状態で行った。
洗浄後、オートクレーブ中で滅菌したポリカーボネート製の円筒(内径25mmφ)を被験者の額の皮膚表面に軽く圧着し、円筒の内部に露出した皮膚の表面を滅菌済みのリン酸緩衝生理食塩水(PBS)に20秒間浸した滅菌綿棒で満遍なく拭った。円筒を離し、皮膚表面に残った水分を滅菌綿棒で拭き取った。円筒の皮膚接触面の内側に付着した水分についても同様に滅菌綿棒で拭き取った。滅菌済みのPBSを入れた滅菌済みのチューブ内にこれらの滅菌綿棒(採取者の手が触れた部分は折り取っておく。)を入れ、キャップをして安全キャビネット中に移した。
上記の様にして得られた菌液100μLを、900μLのPBSを入れたマイクロチューブに加え、ボルテックスして、10倍希釈液を作製した。菌液の代わりに希釈液を用いて同様の操作を繰り返し、100〜100,000倍希釈液を作製した。得られた各希釈液をトリプチケースソイ寒天培地(TS培地)および黄色ブドウ球菌用選択培地(以下「選択培地」という。)上に50μLずつ加え均一に伸ばし、37℃で48時間培養を行った。
TS培地および選択培地上に形成されたコロニーを目視観察し、各コロニーに番号を振った。各コロニーをTS培地および選択培地上で上記[2]と同様の培養条件下で純粋培養した。形成された各コロニーに番号を振り、スライドガラス上に脱イオン水を1滴置き、白金線を用いてコロニーから採取した菌体を分散後、裏からガスバーナーで炙り、スライドガラスの表面に菌体を火炎固定した。これに、クリスタルバイオレット溶液、ヨード液、サフラニン液を順次作用させ、グラム染色を行った。その後、各コロニーに含まれる菌体について、染色性および形態を顕微鏡観察した。併せて、アピ スタフプレートを用いて菌種の同定を行ったところ、表皮ブドウ球菌であることが確認された。
表皮ブドウ球菌と同定されたコロニーから採取した菌体を、TS培地上で純粋培養した。得られたコロニーより、白金耳を用いて菌体を採取(1mm径のコロニー1個)し、保護剤としてスキムミルクに分散させ、アンプルへ注入し、−80℃超低温庫で急速凍結させた。これを凍結乾燥機にかけ、乾燥菌体粉末を得た。
乾燥菌体を含むアンプルを開封し、液体状のTS培地を少量加え、乾燥菌体を懸濁させた。得られた懸濁液を、液体状のTS培地、平板状のTS培地およびマンニット培地に加え、37℃で48時間培養したところ、いずれの培地からも菌が検出されると共に、平板培地上でコロニーを形成することが確認された。これらの菌体の同定を行ったところ、表皮ブドウ球菌であることが確認された。
20〜50代の21名の女性を被験者として、試験の初日に本人の皮膚(額部)から採取した皮膚常在菌より、実施例1に記載の手順を用いて分離および純粋培養した、自己の皮膚常在菌に由来する表皮ブドウ球菌を投与する(戻す)ことが、皮膚表面の表皮ブドウ球菌数および表皮水分量に及ぼす影響を検討した。
Claims (6)
- ヒトの皮膚表面から採取した細菌のうち、そのヒトの皮膚表面で増殖し、その皮膚の表皮水分量を改善させる1または複数種の有用菌を選択的に増殖させる工程と、
増殖させた前記有用菌の菌体、その菌体成分および前記有用菌の産生物質からなる群より選択される1または複数を含む組成物を前記細菌を採取したのと同一のヒト個体に前記組成物の投与(戻し)を行う工程とを有することを特徴とする美容方法(但し、ヒトの疾病を予防又は治療する態様は除く)。 - ヒトの皮膚表面から採取した細菌のうち、そのヒトの皮膚表面で増殖し、その皮膚の健康状態を改善させる1または複数種の有用菌である表皮ブドウ球菌(Staphylococcus epidermidis)を選択的に増殖させる工程と、
増殖させた前記表皮ブドウ球菌の菌体、その菌体成分および前記表皮ブドウ球菌の産生物質からなる群より選択される1または複数を含む組成物を前記細菌を採取したのと同一のヒト個体に前記組成物の投与(戻し)を行う工程とを有することを特徴とする美容方法(但し、ヒトの疾病を予防又は治療する態様は除く)。 - 前記細菌が皮膚常在菌であることを特徴とする請求項1または2記載の美容方法。
- 前記1または複数種の有用菌を選択的に増殖させる工程が、
採取した前記細菌を培地上で培養する予備培養工程と、
前記培養した細菌から前記有用菌を選抜する選抜工程と、
前記選抜した有用菌を培養する培養工程とを含むことを特徴とする請求項1から3のいずれか1項記載の美容方法。 - 前記細菌がヒトの健全な状態の皮膚表面に生息するものであることを特徴とする請求項1から4のいずれか1項記載の美容方法。
- 前記有用菌がコアグラーゼ陰性ブドウ球菌であることを特徴とする請求項1から5のいずれか1項記載の美容方法。
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