KR102587334B1

KR102587334B1 - 피부 개선용 균주 및 이를 포함하는 피부 개선용 키트

Info

Publication number: KR102587334B1
Application number: KR1020160082625A
Authority: KR
Inventors: 박태훈; 김소희; 진유진; 안수선; 이존환
Original assignee: (주)아모레퍼시픽
Priority date: 2015-06-30
Filing date: 2016-06-30
Publication date: 2023-10-12
Also published as: KR20170003478A

Abstract

본 명세서에는, 피부 상태 개선 효과가 있는 균주 및 피부 상태 개선용 키트가 개시된다. 본 발명의 일 관점인 스타필로코커스 에피더미디스(Staphylococcus epidermidis) 균주는, 피부 유해균의 피부상 생체막 형성을 억제하고, 피부 유익균인 스타필로코커스 에피더미디스의 생체막 형성을 유도하여, 피부 상태를 개선할 수 있다. 구체적으로, 상기 균주를 포함한 약학적 조성물 또는 화장료 조성물은, 항염증, 여드름 또는 아토피 개선, 치료 또는 예방, 피부보습 및 피부장벽 개선 효과를 얻을 수 있다.

Description

피부 개선용 균주 및 이를 포함하는 피부 개선용 키트{Strains for improving skin, and kit for improving skin using the same}

본 명세서에는, 피부 상태 개선 효과가 있는 균주 및 피부 상태 개선용 키트가 개시된다.

피부는 외부 환경에 직접적으로 노출되는 신체 부위로서, 우리 몸의 중요한 기관들을 보호하는 보호막 역할을 할 뿐만 아니라 수분 증발을 조절하고 외부 감염으로부터 몸을 보호하는 역할을 한다. 하지만, 아무리 외부로부터의 바이러스 침투까지 막아내는 피부일지라도 과도한 자외선이나 오염물질 등에 노출되면 홍반, 부종, 가려움 등의 피부 자극 및 염증 반응을 유발하게 된다. 이러한 환경유해인자에 의한 피부 트러블은 미관상 문제가 될 뿐만 아니라, 염증 반응 과정에서 생성되는 물질들이 부수적으로 피부의 색소 침착을 일으키고, 피부 탄력 섬유의 붕괴를 촉진시켜 피부 주름 증가에까지 영향을 미치는 것으로 알려져 있다.

피부의 최외각층에 존재하는 각질세포(각질형성세포, Keratinocyte)는 섬유아세포, 내피세포 및 진피세포에 주로 있는 면역세포들과 상호작용하여 피부자극반응의 개시, 조정, 조절에 중요한 역할을 한다. 피하의 염증반응과 관련하여 피부자극은 가장 일반적인 유해효과이며 임상적으로 접촉성 피부염의 70%는 피부자극으로 설명될 수 있다. 홍반, 부종, 균열, 수분손실, 표피탈락, 간지럼증 및 통증은 자극성 또는 알러지성 접촉성 피부염의 대표적 증상들이다. 이것은 세포의 항상성에 이상이 오고 염증반응이 일어나 생기는 증상들이다. 다시말해, 이러한 증상들은 피부자극에 의해 생겨나는 복잡한 생화학적, 신경과 혈관 세포의 반응들의 연쇄작용에 의한 궁극적 생리학적 소견인 것이다.

Marcelo C.L. et al, J.invest. Dermatol.,pages 37-44, 1983

일 측면에서, 본 발명의 목적은, 피부 유해균의 생물막 형성 억제능을 갖는 스타필로코커스 에피더미디스(Staphylococcus epidermidis) 균주를 제공하는 것이다.

다른 측면에서, 본 발명의 목적은, 항염증, 여드름 또는 아토피 개선, 치료 또는 예방, 피부보습 및 피부장벽 개선 효과가 있는 균주를 제공하는 것이다.

다른 측면에서, 본 발명의 목적은, 피부 상태 개선용 키트를 제공하는 것이다.

일 측면에서, 본 발명은, 피부 유해균의 생물막 생성 억제능을 갖는 스타필로코커스 에피더미디스(Staphylococcus epidermidis) 균주이다.

다른 측면에서, 본 발명은, 스타필로코커스 에피더미디스(Staphylococcus epidermidis) 균주 또는 이의 배양액을 유효성분으로 포함하는 조성물이다.

다른 측면에서, 본 발명은, 스타필로코커스 에피더미디스(Staphylococcus epidermidis) 균주; 피부 도포 직전 상기 균주와 혼합되는 화장료 조성물; 및 사용설명서를 포함하는, 피부 상태 개선용 키트이다.

본 발명의 일 관점인 스타필로코커스 에피더미디스(Staphylococcus epidermidis) 균주는, 피부 유해균의 피부상 생체막 형성을 억제하고, 피부 유익균인 스타필로코커스 에피더미디스의 생체막 형성을 유도하여, 피부 상태를 개선할 수 있다. 구체적으로, 상기 균주를 포함한 약학적 조성물 또는 화장료 조성물은, 항염증, 여드름 또는 아토피 개선, 치료 또는 예방, 피부보습 및 피부장벽 개선 효과를 얻을 수 있다.

도 1은, 스타필로코커스 에피더미디스 균주의 생체막 형성능(위) 과, 피부 유해균 생체막 형성 억제능(아래)를 보이는 도이다.
도 2는, 피부 상태 개선용 키트에 포함되는 용기의 일 구현예를 보이는 도이다.
도 3은, 본 발명 균주의 분말을 도포한 후 피부 수분 손실 정도를 보이는 도이다.
도 4는, 본 발명 균주의 분말을 도포한 후 피부 수분 보유력을 확인한 도이다.
도 5는, 본 발명 균주의 분말을 도포한 후 피부 피지의 증감을 확인한 도이다.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.

본 발명은 일 관점에서, 피부 유해균의 생물막 생성 억제능을 갖는 스타필로코커스 에피더미디스(Staphylococcus epidermidis) 균주이다.

본 명세서에서 피부 유해균이란, 피부의 상태를 악화시키는 균을 통칭하는 것으로서, 직간접적으로 피부 건강에 해로운 작용, 예컨대, 피부 유해균의 대사작용 또는 증식작용 자체로 피부에 해로운 작용을 하거나, 그로부터 생산되는 물질로 인하여 피부 상태를 악화시키는 균을 의미할 수 있다. 본 명세서에서 피부 유익균은 피부 유해균과 달리, 피부에 유익한 효과를 부여하는 균을 의미할 수 있다.

상기와 같은 관점에서, 상기 피부 유해균은, 프로피오니박테리움(Propionibacterium), 스타필로코커스(Staphylococcus), 스트렙토코커스(Streptococcus), 칸디다(Candida) 및 아시네토박터(Acinetobacter)로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상일 수 있으나, 이제 제한되는 것은 아니고, 공지의 피부 유해균을 포함할 수 있다. 상기와 같은 관점에서, 상기 프로피오니박테리움은, 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes)이고, 상기 스타필로코커스는 스타필로코커스 오레우스(Staphylococcus aureus)이고, 상기칸디다는 칸디다 알비칸스(Candida albicans)일 수 있다.

본 발명의 일 관점인 균주는, 피부 유해균의 생물막 형성을 억제하면서, 균주 자체의 생물막을 형성하여, 피부 상태 개선의 효과를 부여할 수 있다.

본 발명의 일 관점인 스타필로로커스 에피더미디스 균주는 기탁기관에 기탁하였다.

본 발명은 다른 관점에서, 스타필로코커스 에피더미디스(Staphylococcus epidermidis) 균주 또는 이의 배양액을 유효성분으로 포함하는 조성물이다.

본 발명의 일 관점인 조성물에 있어서, 상기 조성물은, 약학적 조성물일 수 있고, 화장료 조성물일 수 있다.

구체적으로, 본 발명의 일 관점인 조성물은 약학 또는 미용 분야에서 통상의 방법에 따라 환자의 신체 내 투여에 적합한 단위투여형의 제제로 제형화시켜 투여할 수 있다. 이러한 목적에 적합한 제형으로는 비경구투여 제제로서 주사제 또는 국소 투여용 제제 등이 바람직하다. 주사용 제형은 등장성 수용액 또는 현탁액이 바람직하다. 그러나, 이때, 일반적으로 사용되는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 함께 사용할 수 있다. 이렇게 제조된 본 발명의 제제는 통상의 방법에 따라 비경구적으로, 예를 들면 특정 부위에 직접 투여할 수 있다. 이때, 조성물의 주입은 주사기를 이용하여 이루어질 수 있다. 유효성분의 실제 투여량은 투여경로, 환자의 체중, 연령 및 성별 등 여러 관련 인자에 비추어 결정되어야 하는 것으로 이해되어야 하며, 1회 투여량에 포함되는 균주는 10⁵ 내지 10⁹개 일 수 있다. 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.

본 발명의 일 관점인 조성물에 있어서, 상기 조성물은 화장료 조성물일 수 있는데, 화장료 조성물로는 예를 들어, 기초 화장료, 메이크업 화장료, 모발용 화장료, 바디용 화장료 등이 있을 수 있고, 그 제형은 특별히 제한되지 않으며, 목적하는 바에 따라 적절히 선택할 수 있다.

예를 들면, 상기 화장료 조성물은 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클린싱, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 유연화장수, 영양화장수, 로션, 바디로션, 영양 크림, 마사지 크림, 모이스처 크림, 핸드크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 팩, 젤, 패치, 수중유(O/W)형, 유중수(O/W)형 등의 기초 화장료, 립스틱, 메이크업베이스 또는 파운데이션 등의 색조 화장료, 샴푸, 린스, 바디클렌저, 치약 또는 구강 청정제 등의 세정료, 헤어토닉, 젤 또는 무스 등의 정발제, 양모제 또는 염모제 등의 모발용 화장료 조성물로 제형화 될 수 있다.

상기 화장료 조성물은 화장품학적으로 허용가능한 매질 또는 기제를 함유한다. 이는 국소적용에 적합한 모든 제형으로, 예를 들면 용액, 겔, 고체 또는 반죽 무수 생성물, 수상에 유상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 현탁액, 마이크로에멀젼, 마이크로캡슐, 미세과립구 또는 이온형(리포좀) 및/또는 비이온형의 소낭 분산제의 형태로, 또는 크림, 스킨, 로션, 파우더, 연고, 스프레이 또는 콘실 스틱의 형태로 제공될 수 있다. 이들 조성물은 당해 분야의 통상적 방법에 따라 제조될 수 있다.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 일 실시태양에서, 상기 화장료 조성물에 추가적으로 점증제를 함유할 수 있다. 본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 점증제는 메틸 셀룰로스, 카르복시 메틸 셀룰로스, 카르복시 메틸 하이드록시 구아닌, 하이드록시 메틸 셀룰로스, 하이드록시에틸셀룰로스, 카르복시 비닐 폴리머, 폴리쿼터늄, 세테아릴 알콜, 스테아릭산, 카라기난 등을 사용할 수 있으며, 바람직하게는 카르복시 메틸 셀룰로스, 카르복시 비닐 폴리머, 폴리쿼터늄 중에서 1종 이상을 사용할 수 있으며, 가장 바람직하게는 카르복시 비닐 폴리머가 될 수 있다.

본 발명의 일 실시태양에서 상기 화장료 조성물은 필요에 따라 적절한 각종의 기제와 첨가제를 함유할 수 있으며, 이들 성분의 종류와 양은 발명자에 의해 용이하게 선정될 수 있다. 필요에 따라 허용 가능한 첨가제를 함유할 수 있으며, 예를 들면, 당업계에 통상적인 방부제, 색소, 첨가제 등의 성분을 추가로 포함할 수 있다.

방부제는 구체적으로 페녹시에탄올(Phenoxyethanol) 또는 1,2-헥산디올 (1,2-Hexanediol) 등이 될 수 있고, 향료는 인공향료 등이 될 수 있다.

그리고, 본 발명의 일 실시태양에서 화장료 조성물은 수용성 비타민, 유용성 비타민, 고분자 펩티드, 고분자 다당, 스핑고 지질 및 해초 엑기스로 이루어진 군에서 선택된 조성물을 포함할 수 있다. 이외에 첨가해도 되는 배합 성분으로서는 유지 성분, 보습제, 에몰리엔트제, 계면 활성제, 유기 및 무기 안료, 유기 분체, 자외선 흡수제, 방부제, 살균제, 산화 방지제, 식물 추출물, pH 조정제, 알콜, 색소, 향료, 혈행 촉진제, 냉감제, 제한제, 정제수 등을 들 수 있다.

또한, 이외에 첨가해도 되는 배합 성분은 이에 한정되는 것은 아니며, 또, 상기 어느 성분도 본 발명의 목적 및 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 배합 가능하다.

본 발명의 일 관점인 조성물에 있어서, 상기 조성물은 항염증용 조성물일 수 있다. 또한 상기 조성물은, 여드름 또는 아토피 개선, 치료 또는 예방용 조성물일 수 있다.

일 구현예에서, 상기 조성물은 피부의 피지를 크게 감소시키는 효과가 있어, 피지로 인한 피부 트러블을 개선시킬 수 있다.

본 발명의 일 관점인 조성물은, 조성물 중 총 중량을 기준으로 10⁵ 내지 10⁹cell/g의 균주를 포함할 수 있다. 구체적으로 조성물 1g당, 10⁵ 내지 10⁹ 개의 균주, 10⁶ 내지 10⁹ 개의 균주, 10⁷ 내지 10⁹ 개의 균주, 10⁸ 내지 10⁹ 개의 균주, 10⁶ 내지 10⁸ 개의 균주 또는 10⁶ 내지 10⁷ 개의 균주를 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명은 다른 측면에서, 상기 스타필로로커스 에피더미디스 균주; 피부 도포 직전 상기 균주와 혼합되는 화장료 조성물; 및 사용설명서를 포함하는, 피부 상태 개선용 키트이다.

상기와 같은 관점에서, 상기 설명서에는, 상기 균주와 화장료 조성물을 사용 직전에 혼합하여 사용하고, 일주일당 2회 내지 4회 사용할 것이 기재되어되어 있을 수 있다. 상기 균주와 화장료 조성물은 제한되지 않고 1회 이상, 2회 이상, 3회 이상, 4회 이상, 5회 이상, 6회 이상 또는 7회 사용될 수 있다. 한편, 상기 균주는 분말 제형일 수 있고, 진공 상태 또는 질소기체로 개별용기에 밀봉되어 있을 수 있다.

상기와 같은 관점에서, 상기 키트는, 균주 담지부; 및 화장료 조성물 담지부를 포함하는 용기를 더 포함할 수 있다. 따라서, 개별 용기에 밀봉된 상태인 균주와 화장료 조성물을 용기 내의 각 담지부에 넣어, 피부에 사용할 수 있다.

상기와 같은 관점에서 화장료 조성물은, 공지의 화장료 조성물, 예컨대, 스킨, 로션 또는 파우더일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

이하, 하기의 실시예를 통하여 본 발명을 보다 구체적으로 설명한다. 그러나, 하기 실시예는 본 발명에 대한 이해를 돕기 위해 예시의 목적으로만 제공된 것일 뿐, 본 발명의 범주 및 범위가 이에 한정되지 않는다.

[실시예 1] 균주의 동정

피험자 15명의 피부에서 균을 분리하여 동정하였다. 구체적으로, 이마 또는 볼의 2cm의 직경 범위의 피부에서 면봉을 이용하여 채집한 후, 멸균 PBS로 10^-2, 10^-3 CFU/ml으로 희석하여 TSA(trypticase, Soy, Agar) 배지에서 24 내지 48시간 동안 배양하였다.

이후, 단일 콜로니 3개를 이용하여 균을 동정하여, 스타필로코커스 에피더미디스일 확률이 높은 균주를 확인하였다. 단일 균주 집락을 만들기 위해 반복적으로 TSA 아가 플레이트 도말을 반복하여 단일 콜로니(Single Colony)를 확보하였다.

이후 하기 방법에 의하여, 단일 균주로부터 16S rRNA 염기 서열 분석을 통해 The Basic Local Alignment Search Tool (BLAST)과 비교하여 최종적으로 스타필로코커스 에피더미디스 임을 확인하였다.

DNA는 FastDNA SPIN for Soil Kit (MP Biomedicals, France)를 이용하여, 제작사의 포로토콜에 따라 DNA를 추출하였다. DNA 추출은 분쇄 물질 E 튜브(Lysing matrix E tube)에 978 ㎕의 시료와 MT buffer 122 ㎕를 첨가하고, 5 분간 볼텍싱(voltexing)한 후, 14,000 rpm으로 10 분간 원심분리를 하였다. 원심분리 후 상층액을 2㎖ 튜브(catch tube)에 옮기고, 250㎕ PPS를 첨가한 후, 10 회 인버팅(inverting)을 실시하였으며, 다시 14,000 rpm으로 원심분리 후 상층액을 새로운 2 ml 튜브에 옮겼다. 바인딩 매트릭스 용액(Binding matrix solution)을 1 ㎖ 첨가하고 상온에 3 분간 침전시켰으며, 상층액 500 ㎕를 제거하고, 나머지 용액을 재부유한 후 스핀필터(spin filter)에 600 ㎕를 취하여 넣었다. 14,000 rpm 으로 1 분간 원심분리하고, SEWS-M를 이용하여 필터안의 바인딩 매트릭스(binding matrix)를 재부유하였으며, 다시 14,000 rpm으로 1 분간 원심분리한 후, 세척을 2회 반복하였다. 필터를 상온에 완전히 건조시킨 후, DES 용액을 50 ㎕ 넣고 14,000 rpm으로 1 분간 원심분리하여 균주 DNA를 얻었다.

16S rRNA 유전자 증폭은 균주 특정 프라이머(specific primer)인 27F와 유니버설프라이머(universal primer)인 1492R을 사용하였다. 인터프라이머인 518F, 800R 프라이머를 이용하여 1,300bp이상의 염기서열을 읽었다.

반응액의 조성은 10 X PCR buffer 2 ㎕, 25 mM MgCl2 1 ㎕, 10 mM dNTPs 2 ㎕, 포워드 프라이머 (10 pmole) 1 ㎕, 리버스 프라이머 (10 pmole) 1 ㎕, 0.5 unit Taq 폴리머라제 0.5 ㎕를 사용하였으며, 최종 반응 용량이 20 ㎕가 되도록 하였다. PCR 반응은 95℃ 1 분, 55℃ 1 분, 75℃ 1 분 30 초씩 30 회를 실시하였으며, 마지막으로 72℃에서 8 분간 처리 후 4℃에서 보관하였다.

이후 The Basic Local Alignment Search Tool (BLAST)과 비교하여 최종적으로 스타필로코커스 에피더미디스 임을 확인하였다.

사용된 프라이머 서열은 표 1과 같다.

PCR Primer Name Primer Sequences
27F	5' (AGA GTT TGA TCM TGG CTC AG) 3'
1492R	5' (TAC GGY TAC CTT GTT ACG ACT T) 3'
Sequencing Primer Name Primer Sequences
785F	5' (GGA TTA GAT ACC CTG GTA) 3'
907R	5' (CCG TCA ATT CMT TTR AGT TT) 3'

그 결과는 표 2과 같다.

[표 2]

*표 2에서 1번부터 5번은 여성 피험자이고, 6번부터 15번은 남성 피험자이다.

[실시예 2] 스타필로코커스 에피더미디스 균주의 바이오필름 생성능 및 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes) 바이오필름 형성 억제능의 측정

스타필로코커스 에피더미디스 균주를 TSB 배지, 32℃ 인큐베이터에서 16 내지 24시간 배양하였다. 96 웰플레이트에 1% Dextrose가 함유된 TSB를 100㎕씩 넣은 후, 첫 웰에 1% Dextrose가 함유된 TSB에 희석한 시험군을 200㎕ 연속희석을 하였다. 그 후 상기 배양균액을 각 웰에 접종하여 최종 균주농도가 10⁶ CFU/ml 이 되도록 하였다. 이 후, 32℃ 인큐베이터에서 48시간동안 정치배양하였다. 배양 후 배양액을 제거하고, 200㎕의 멸균 이용수를 이용하여 3번 세척을 진행하였다. 그 후 크리스탈 바이올렛을 100 ㎕를 첨가하여 5-10분간 염색하고, 200㎕의 멸균이용수를 이용하여 3번 세척을 진행하였다. 세척 후 100 ㎕의 99% 에탄올을 첨가하고, 5분간 흔들어 염료를 추출하였다. 이 후, 590 nm에서 흡광도를 측정하였다. 흡광도 측정은 SpectraMax 190를 이용하여 수행하였다. 측정한 OD₅₉₀ 값은 0.25-0.5 사이를 유효한 값으로 SoftMax Pro 4.7.1. 프로그램을 이용하여 분석하였다. 접종되지 않은 웰을 음성대조군으로, 시료 없이 균만 접종된 웰을 양성대조군으로하여 측정된 OD₅₉₀값을 외삽하여 바이오 필름 형성율을 정량적으로 계산하였다. 그 결과는 도 1와 같았다.

바이오필름 형성능과 형성 억제능은 하기 식에 따라 구하였다:

바이오필름 형성억제능 = 100 - 바이오필름 형성능.

[실시예 3] 효과가 좋은 스타필로코커스 에피더미디스 균주의 선별(유익균의 선별)

실시예 2에서 얻은 바이오필름 형성능과 피부 유해균에 대한 바이오필름 생성 억제능을 합한 값이 클 수록 효과가 우수한 균주로 가정하여 선별하였다(표 3).

	SA 바이오필름 형성저해능			바이오필름 형성능			우선순위
	1	2	3	1	2	3	1	2	3
1	13.83	79.58		23.13	25.62		36.96	105.19
2	13.56	22.81	74.37	81.54	50.96	41.79	95.11	73.76	116.15
3	-28.14	16.97	8.74	421.49	325.46	390.60	393.34	342.43	399.34
4	22.65	-8.74	27.67	78.15	115.44	88.53	100.80	106.70	116.19
5	58.96	56.38		44.04	45.14		103.00	101.51
6	3.25	43.26	22.74	32.11	25.13	15.06	35.36	68.39	37.80
7	-72.62	-66.67	24.64	32.45	22.53	45.74	-40.17	-44.14	70.38
8	-3.43	6.82	21.98	30.75	29.19	29.49	27.32	36.01	51.47
9	-14.81	-16.10	18.67	31.79	32.74	280.27	16.98	16.64	298.93
10	-15.39	6.94	24.60	181.27	35.08	63.73	165.88	42.02	88.33
11	18.40	38.19	23.19	26.06	148.34	23.45	44.45	186.53	46.65
12	-61.55	20.39	14.16	179.92	113.70	43.45	118.37	134.08	57.61
13	4.70	-7.25	49.25	392.93	37.87	184.36	397.63	30.61	233.61
14	-27.03	8.32	24.50	283.68	84.21	250.68	256.65	92.53	275.18
15	24.14	25.83	40.50	66.40	57.06	42.53	90.54	82.90	83.03

[실시예 4] 제형의 결정

우수한 효과를 얻을 수 있는 제형을 결정하기 위하여 하기의 실험을 하였다.

부틸렌 글리콜(BG)만을 포함한 것을 기본 제형으로 하였으며, 추가적으로 보존제 등을 첨가하여 제형 내에서 생존한 스타필로코커스 에피더미디스 균주의 수를 측정하였다.

그 결과는 하기 표 4과 같다.

	BG	SC	EDTA	pH	0일차 균수 (단위:cfu/g)	3일차 균수 (단위:cfu/g)
Pre-Control (TSB	0	0	0	5.5	2.8ⅹ10¹¹	-
Control (PBS)	0	0	0	0	1.3ⅹ10⁸	2.4ⅹ10⁸
SE 제형 #1	15%	0	0	7.0	4.7ⅹ10⁸	ND
SE 제형 #2	15%	0.1%	0.05%	5.5	3.0ⅹ10⁸	ND
SE 제형 #3	15%	0	0	5.5	8.2ⅹ10⁸	0.3ⅹ10⁸

*SE는 스타필로코커스 에피더미디스 균주를 의미한다.

*SC는 에틸헥실글리세린의 원료명인 Senciva 50을 의미한다.

[실시예 5] 임상실험

약 2g의 겔 제형의 에센스에 분말형태의 유익균 8.0 X 10⁸ CFU/g을 주3회 4주간 피험자의 피부에 취침전 도포하고, 4주후 피부 상태 개선 효과를 측정하였다.

[실시예 5-1] TEWL 및 Hydration측정

스타필로코커스 에피더미디스 균주의 피부보습력 효과를 확인하기 위하여 하기 실험을 하였다. 피험자는 세안 후 항온 항습 조건(25 ℃, 상대습도 40%)에서 10-15분 대기하고, 피부 수분 손실여부를 Vapometer(EP1, Delfin Technologies Ltd, 70211 Kuopio, FINLAND)의 std 모드로 10-15초간 정지상태로 측정하고, 피부 수분 보유력을 Corneometer(MPA-5, Courage + Khazaka electronic GmbH, 독일)을 이용하여 측정하였다. 실험은 3회 반복하여 평균값을 구하였다. 그 결과, 스타필로코커스 에피더미디스 균주와 에센스 혼합물을 도포한 부위에서 피부 수분 손실이 감소하고, 피부 수분 보유량이 증가하여 피부보습력이 향상되었음을 확인할 수 있었다(도 3 및 도 4).

[실시예 5-2] 피부 유해균 S.aureus의 수 측정

피부 미생물이 원상태로 회복된 후 측정할 수 있도록 세안 후 8시간 후에 실험을 진행하였다. 구체적으로, 세안 후 8시간이 경과한 후에 플레이트(Easystamp Staph agar plate, 3.5 mm X 3.5 mm, 정사각형, Komed, 한국)를 볼, 이마, 턱 피부위에 고르게 접촉켰다. 그 후, 상기 플레이트를 32℃에서 24- 48시간 배양하여, 균 수를 측정하였다. 그 결과, 피험자의 피부에서 피부 유해균인 S.aureus 수가 크게 감소함을 알 수 있었다(표 2).

[표 5] 임상 전 총균수 측정

[표 6] 임상 후 총균수 측정

[실시예 5-3] 피지 조절 효과 측정

피험자는 세안 후 항온 항습 조건(25 ℃, 상대습도 40%)에서 10-15분 대기하고, Sebumeter(MPA-5, Courage + Khazaka, GmbH ＆ Co. KG, Leichlinge, Germany)를 이용하여, 피험자들의 이마와 볼에서 본 발명 유익균 도포 전 후의 피지 증감량을 확인하였다. 그 결과, 본 발명 유익균 도포 후에 피부에서의 피지가 크게 감소함을 확인할 수 있었다(도 5).

10: 펌프
20: 화장료 조성물 담지부
30: 균주 담지부

<110> Amorepacific corporation <120> Strains for improving skin, and kit for improving skin using the same <130> 16P386IND <150> KR 10-2015-0093021 <151> 2015-06-30 <160> 4 <170> KopatentIn 2.0 <210> 1 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> PCR Primer Name Primer Sequences_27F <400> 1 agagtttgat cmtggctcag 20 <210> 2 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> PCR Primer Name Primer Sequences_1492R <400> 2 tacggytacc ttgttacgac tt 22 <210> 3 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sequencing Primer Name Primer Sequences_785F <400> 3 ggattagata ccctggta 18 <210> 4 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sequencing Primer Name Primer Sequences_907R <400> 4 ccgtcaattc mtttragttt 20

Claims

스타필로코커스 에피더미디스(Staphylococcus epidermidis) 균주 또는 이의 배양액을 유효성분으로 포함하는 프로피오니박테리움(Propionibacterium)의 생물막 생성 억제용 균주 조성물.
제1항에 있어서,
상기 균주는 피부상에 스타필로코커스 에피더미디스 생물막 형성능이 있는, 균주 조성물.
삭제
제1항에 있어서,
상기 프로피오니박테리움은, 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes)인, 균주 조성물.
제1항, 제2항 및 제4항 중 어느 한 항의 균주 조성물을 유효성분으로 포함하는 피부 보습용; 피부장벽 강화용; 또는 여드름 또는 아토피 개선 또는 예방용; 화장료 조성물.
제1항, 제2항 및 제4항 중 어느 한 항의 균주 조성물을 유효성분으로 포함하는, 항염증용; 또는 여드름 또는 아토피 개선, 치료 또는 예방용; 약학 조성물.
제5항에 있어서,
상기 화장료 조성물은 화장료 조성물 총 중량을 기준으로, 10⁵ cell/g 내지 10⁹ cell/g의 균주를 포함하는, 조성물.
제6항에 있어서,
상기 약학 조성물은 약학 조성물 총 중량을 기준으로, 10⁵ cell/g 내지 10⁹ cell/g의 균주를 포함하는, 조성물.
제1항, 제2항 및 제4항 중 어느 한 항의 균주 조성물;
피부 도포 직전 상기 균주와 혼합되는 화장료 조성물;
및 사용설명서;를 포함하는, 피부 상태 개선용 키트.
제9항에 있어서,
상기 사용설명서에는, 상기 제1항, 제2항 및 제4항 중 어느 한 항의 균주 조성물과 화장료 조성물을 사용 직전에 혼합하여 사용하고, 일주일당 2회 내지 4회 사용할 것이 기재되어 있는, 피부 상태 개선용 키트.
제9항에 있어서,
상기 키트는,
상기 제1항, 제2항 및 제4항 중 어느 한 항의 균주 조성물 담지부; 및 화장료 조성물 담지부;를 포함하는 용기를 더 포함하는, 피부 상태 개선용 키트.
제9항에 있어서,
상기 제1항, 제2항 및 제4항 중 어느 한 항의 균주 조성물은 분말 제형인, 피부 상태 개선용 키트.
제9항에 있어서,
상기 제1항, 제2항 및 제4항 중 어느 한 항의 균주 조성물은 진공 상태 또는 질소 기체로 밀봉되어 있는 것인, 피부 상태 개선용 키트.