JP5564499B2 - 前立腺癌の進行を予防または減退させるのに有効な組成物 - Google Patents

Description

本発明は、前立腺癌の進行を予防または減退させるのに有効な組成物に関連する。

とくに、本発明は組成物に関連し、この組成物は、前立腺がんの進行を予防または減退させるのに有効な、緑茶またはザクロ抽出物の活性成分を有する。

前立腺癌は、哺乳類、とくに西洋諸国のヒトの男性に最も一般的な癌である（例えば、非特許文献１参照）。

種々の要因、例えば未知の病因論、変化しやすい病理学、内分泌因子との錯綜した関係性、および未分化進行がこの疾患の複雑性に関与する。

ウィスコンシン州マディソンのウィスコンシン大学およびオハイオ州クリーブランドのケース・ウエスタン・リザーブ大学からの研究者チームは、ヒト前立腺癌に関するマウスモデルの前立腺腫瘍細胞におけるインスリン様成長因子（ＩＧＦ−１）で前駆される分子の代謝経路を調節調整する緑茶ポリフェノール（ＧＴＰ）の役割を立証した。これらの観察は、ＩＧＦ−１のレベルがどのように増加したら前立腺癌、乳癌、肺癌および大腸癌等いくつかの癌発生リスクを高めることに関連するかの研究で重要である。緑茶ポリフェノールは、前立腺癌マウスモデルの血清における血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）の量を抑制することによって腫瘍の進展を最小限にする。ＶＥＧＦの減退は、ＩＧＦ−１レベルのＧＴＰで誘発される抑制による結果と考えられる。ＶＥＧＦは、腫瘍を進展させる栄養分を運搬する新生血管の形成および発達させる機能を有する。ＶＥＧＦの量を減退させることによって、ＧＴＰは栄養分の流入および腫瘍成長支援を最小限にするよう作用する。

臨床的癌研究において、非特許文献２はザクロ抽出物が前立腺癌の進行の予防または減退に有効であることを報告した。

非特許文献３は、リコピンが前立腺癌の進行の予防または減退に有効であることを報告した。

特許文献１（国際公開第００／５７８９２号）は、セレノアが前立腺癌の治療に有効であることを報告した。

特許文献２（国際公開第０３／０３５６３５号）は、イソフラボノイド誘導体が前立腺癌の治療に有効であることを報告した。

特許文献３（国際公開第０４／０９１６０２号）は、Ｌ−カルニチンが循環器疾患の治療に有効であることを報告した。

ヒトにおけるセレンは、グルタチオンペルオキシダーゼ等の抗酸化酵素の減退に対する共同因子として機能する微量（痕跡）元素栄養分である。食物のセレンは、ナッツ、穀物、肉、魚および卵から得られる。「栄養的癌予防プロジェクト」（ＮＰＣ）は、制御されたランダムな癌予防試験であり、１３１２人の患者に対して最長１０年間にわたりセレンまたはプラシーボを毎日２００μｇ服用させた。この研究において、前立腺癌の発症および前立腺癌進行に関して統計的に有意な減退が得られた。

国際公開第００／５７８９２号パンフレット 国際公開第０３／０３５３５号パンフレット 国際公開第０４／０９１６０２号パンフレット

Cancer Statistics 1997, CA Cancer J. Clin. 1997; 47; 5-27 pp 4018-4026 and Clinical Cancer Research Vol. 12, 4018-4026, July 1 , 2006 Prostate Cancer and Prostatic Diseases (2002) 5, 6- 12

緑茶およびザクロ抽出物の抗発癌効果は既に既知であるが、上述の先行技術はどれも前立腺癌の進行を予防または減退するためにこれらの２つの活性成分を組み合わせて使用することに関しては陳述も提案もしていない。

さらに、腫瘍の化学療法に利用できる他の活性成分があり、また他の侵襲的な治療であって、癌性前立腺の除去または腫瘍を収縮させるよう設計した放射性シードの留置等の前立腺癌に対する侵襲的治療があるが、患者にとって伝統的な低毒性の治療薬の添加物または補完物として有効な組成物を服用することがより望ましく、それは前立腺癌に対する抗発癌剤として機能する。

したがって、本発明の目的の一つは、緑茶抽出物およびザクロ抽出物の活性成分を有する相乗効果的組成物である。

上述の組成物は、さらに、リコピン、セレン、亜鉛、セレノア、イソフラボノイド誘導体およびＬ−カルニチンを有するものとする。

本発明のさらなる目的は、
（ａ）活性成分として、２５〜８００ｍｇ、好ましくは１２５および２５０ｍｇの服用量緑茶抽出物
（ｂ）活性成分として、服用量が２５〜８００ｍｇ、好ましくは４０，１２５および２５０ｍｇの服用量ザクロ抽出物
（ｃ）服用量が０．０３〜３０．０ｍｇ、好ましくは１．２５および５ｍｇのリコピン
（ｄ）服用量が８．２〜５００μｇ、好ましくは５５および８２．５μｇのセレン
（ｄ）服用量が１〜２００ｍｇ、好ましくは２０ｍｇの服用量亜鉛
（ｅ）服用量が１０〜４００ｍｇ、好ましくは１６０および３２０ｍｇのセレノア
（ｆ）服用量が１０〜５００ｍｇ、好ましくは１００ｍｇのイソフラボノイド誘導体（大豆イソフラボン）および
（ｇ）服用量が５０〜５００ｍｇ、好ましくは２００ｍｇのＬ−カルニチン
を有する組成物を得るにある。

本発明のさらなる目的は、前立腺癌の進行を予防または減退する上述した組成物の使用方法を得るにある。

本発明のさらなる目的は、前立腺癌の進行を予防または減退する薬剤を調合する上述した組成物の使用方法を得るにある。

本発明のさらなる目的は、前立腺癌の進行を予防または減退する栄養補助食品を調合する上述した組成物の使用方法を得るにある。

本発明の組成物は、さらに、コエンザイム、ミネラル物質、抗酸化剤、ビタミンおよび前立腺癌の治療に有効な薬剤を有する。

以下は本発明をさらに説明するための非制限的な実施形態を示す。

以下において報告した実験として、ヒト前立腺癌細胞株ＬＮＣａＰおよびＰＣ３（American Type Culture Collection Rockville, MDから入手した）を用いた。

ＬＮＣａＰ細胞は、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）および１％ペニシリンおよびストレプトマイシンを追加したＲＰＭＩ １６４０培地（Life Technologies, Rockville, MD）において培養した。細胞は、３７°Ｃで空気中濃度５％のＣＯ２を含む加湿環境において培養した。両方の細胞培養セットは、１０ｃｍ組織培養フラスコにおいて８０％まで密集成長し、１：８に分裂した。細胞を９６細胞プレートに置き、実験に用いる前に付着させて６０〜７０％まで密集成長させた。

試験管内細胞成長に対する効果
ＬＮＣａＰおよびＰＣ３細胞の培養セットを、緑茶抽出物（ＰＢＳ中４０μｇ／ｍｌ）、ザクロ抽出物（ＰＢＳ中４０μｇ／ｍｌ）またはその組み合わせ（緑茶抽出物およびザクロ抽出物の両方）のいずれかによって完全な細胞培地を含む１０ウェルにおいて処理した。対照実験として使用する細胞は、完全な細胞培地における同量のＰＢＳで培養した。リコピン（５ｍｍｏｌ／Ｌ）、セレン（３０ｎｇ／ｍｌ）、亜鉛（１０μｇ／ｍｌ）、セレノア（１０μｇ／ｍｌ）、および大豆イソフラボン（１０μｇ／ｍｌ）の効果も、細胞培養にそれらを単独で、または緑茶抽出物およびザクロ抽出物と組み合わせて加えることによって試験した。細胞の細胞増殖は、３７°Ｃで検査薬ありまたはなしで２４時間培養後３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウム（ＭＴＴ）比色分析を用いて測定した。ＭＴＴ（５ｎｇ／ｍｌ）をすべてのウェルに加え、さらに２時間培養した。その後、プレートを５００×ｇで５分間４°Ｃの温度下において遠心分離した。ＭＴＴ溶液を注意深く吸引することによってウェルから除去し、緩衝ＤＭＳＯ（０．１ｍｌ）を各ウェルに加え、プレートを１５分間振動させた。吸光度を５４０ｎｍの波長でマイクロプレートリーダー上において測定した。各化合物のみおよび組み合わせのそれぞれの細胞成長効果を、細胞生存の割合（パーセンテージ）として分析し、この細胞生存は、未処理の対照実験細胞が完全に生存し自由に成長することができる細胞とみなすものである。

得られた結果を以下の表１〜４において報告する。

表１，２，３および４において報告した結果は、本発明の組成物が単一の構成素に関して統計的に活性が高いことを示す。

さらに、リコピン、セレンおよび亜鉛またはセレノア、大豆イソフラボンおよびＬ−カルニチンは、本発明の組成物の阻害活性を増加させない。

２５ｍｌの培養フラスコにおけるＬＮＣａＰおよびＰＣ３細胞を、緑茶抽出物（ＰＢＳ中４０μｇ／ｍｌ）、ザクロ抽出物（ＰＢＳ中４０μｇ／ｍｌ）、セレン（１０μｇ／ｍｌ）、大豆イソフラボン（１０μｇ／ｍｌ）または緑茶抽出物プラスザクロ抽出物の組み合わせのいずれかで処理した。

対照はＰＢＳのみとした。処理は、付着させた後４８時間後に開始した。細胞は、フローサイトメトリによって分析する前に最長７２時間培養で成長させた。細胞は、１０ｍＭブロモデオキシウリジン（ＢｒｄＵ）を２時間緑茶抽出物およびザクロ抽出物で処理する前に同位体でラベル付けし、共に非同期で成長する細胞とした。その後、細胞を播種し、７０％エタノールで固定し、０．１％ＨＣｌで処理し、１０分間９０°Ｃで加熱し、ラベル付けＤＮＡを露呈させた。細胞を抗ＢｒｄＵ共役ＦＩＴＣ（Becton Dickinson）で染色し、ヨウ化プロピジウムで対向染色した。細胞サイクル分析を、ＬｙｓｉｓIIソフトウェアを用いてＢｅｃｔｏｎ−Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ ＦＡＣＳｃａｎ上で行った。

単一成分に対する本発明の組成物を用いて得たフローサイトメトリ分析の結果を以下の表において報告する。

単独化合物の使用は、ＬＮＣａＰおよびＰＣ３細胞の両方の増殖における阻害を示す（表５〜８および１０〜１３参照）。表９および１４において報告した結果は、本発明の組成物組み合わせがＬＮＣａＰおよびＰＣ３細胞の両方における増殖の阻害に対する予期しなかった相乗効果をもたらすことを示す。７２時間持続したＳ相において停止した細胞株は、ＬＮＣａＰおよびＰＣ３株に対してそれぞれ最大値６０．９％および５４．８％である。

細胞分裂または成長停止への効果は、媒体で処理した対照実験において観察されなかった。

試験管内抗腫瘍活性
本発明による組み合わせの抗腫瘍活性を評価するため、固形腫瘍株ＬＮＣａＰ（ＡＴＣＣ）を用いた。

細胞をヌードマウスにおいて５〜６回培養した。この株の固形癌フラグメント（３ｍｍ平方）を、ｎｕ−ｎｕヌードマウス８週齢の雄マウス（NxGen Bioscience, San Diego, CA）の脇窩部の皮膚下に移植した。腫瘍を確実に取ったマウス（約２０日後）をそれぞれ１０匹の４群にランダムに振り分けた。動物群を、媒体、緑茶抽出物、ザクロ抽出物または緑茶抽出物およびザクロ抽出物の組み合わせで処理した。対照実験の群における動物は、水のみ飲み、連続する２８日間に関して１日１回朝に飲用水に１％（ｗ／ｖ、リチウム入り）緑茶抽出物およびザクロ抽出物またはそれら組み合わせを服用させた。腫瘍の径を２週間に１回測定し、腫瘍体積を式０．５２３８Ｌ１Ｌ２Ｈを用いて計算し、Ｌ１は長径、Ｌ２は短径およびＨは腫瘍の高さである。すべての動物は、対照実験の動物に対して１３００ｍｍ^３前後に到達した後安楽死させ、それは約２８日後であった。

結果（平均およびＳＥ）は、２８日目の腫瘍体積が対照実験群において１３０５±８７であったが、緑茶およびザクロ抽出物で試験した群において値はそれぞれ１０２６±９８（ｐ＜０．０５）および１０１１±９１（ｐ＜０．０５）であった。一方、組み合わせの処理（緑茶＋ザクロ抽出物）においては腫瘍減退の明らかな相乗効果があり、６２３±１１２（ｐ＜０．００１）であった。したがって、阻害は、緑茶（２１．４％）およびザクロ（２２．５％）のみと比較して組み合わせによって５２．３％であった。

得られた結果を表１５において示し、本発明の組成物は単独構成素に対して統計的により活性が高いことを示す。

本発明に従った栄養補助食品または薬剤は、製薬分野における操作者によく知られすでに臨床で用いられている活性成分から成り、それらの薬学毒物学的プロフィールは知られている。

したがって、それらの調達は非常に容易であり、同じ理由でこれらは現在長く市場にありヒトまたは動物に服用させるのに適切である製品である。

以下において、本発明による組成物の非限定的な実施例を報告する。

組成物１
緑茶抽出物 ２５０ｍｇ
ザクロ抽出物 ２５０ｍｇ
組成物２
緑茶抽出物 ２５０ｍｇ；
ザクロ抽出物 ２５０ｍｇ；
リコピン １．２５ｍｇ；
セレン ８２．５μｇ；
亜鉛 ２０ｍｇ
組成物３
緑茶抽出物 １２５ｍｇ；
ザクロ抽出物 １２５ｍｇ；
リコピン ５ｍｇ；
セレン ８２．５μｇ；
亜鉛 ２０ｍｇ；
セレノア １６０ｍｇ；
大豆イソフラボン １００ｍｇ
組成物４
緑茶抽出物 １２５ｍｇ；
ザクロ抽出物 ４０ｍｇ；
リコピン ５ｍｇ；
セレン ５５μｇ；
亜鉛 ２０ｍｇ；
セレノア ３２０ｍｇ；
大豆イソフラボン １００ｍｇ
組成物５
緑茶抽出物 １２５ｍｇ；
ザクロ抽出物 １２５ｍｇ；
リコピン ５ｍｇ；
セレン ８２．５μｇ；
亜鉛 ２０ｍｇ；
セレノア １６０ｍｇ；
大豆イソフラボン １００ｍｇ；
Ｌ−カルニチン ２００ｍｇ

Claims (9)

1. 活性成分として緑茶抽出物およびザクロ抽出物を含む、前立腺癌の進行を予防または減退させるための医薬組成物。
2. リコピン、セレン、亜鉛、セレノア、大豆イソフラボンおよびＬ−カルニチンをさらに含む、請求項１に記載の医薬組成物。
3. 緑茶抽出物は２５〜８００ｍｇの服用量で存在し；ザクロ抽出物は２５〜８００ｍｇの服用量で存在する、請求項１または２に記載の医薬組成物。
4. リコピンは０．０３〜３０．０ｍｇの服用量で存在し、セレンは８．２〜５００μｇの服用量で存在し、亜鉛は１〜２００ｍｇの服用量で存在し、セレノアは１０〜４００ｍｇの服用量で存在し、大豆イソフラボンは１０〜５００ｍｇの服用量で存在し；Ｌ−カルニチンは５０〜５００ｍｇの服用量で存在する、請求項２に記載の医薬組成物。
5. 緑茶抽出物は２５０ｍｇの服用量で存在し、ザクロ抽出物は２５０ｍｇの服用量で存在し、リコピンは１．２５ｍｇの服用量で存在し、セレンは８２．５μｇの服用量で存在し、亜鉛は２０ｍｇの服用量で存在する、請求項２に記載の医薬組成物。
6. 緑茶抽出物は１２５ｍｇの服用量で存在し、ザクロ抽出物は１２５ｍｇの服用量で存在し、リコピンは５ｍｇの服用量で存在し、セレンは８２．５μｇの服用量で存在し、亜鉛は２０ｍｇの服用量で存在し、セレノアは１６０ｍｇの服用量で存在し、大豆イソフラボンは１００ｍｇの服用量で存在する、請求項２に記載の医薬組成物。
7. 緑茶抽出物は１２５ｍｇの服用量で存在し、ザクロ抽出物は４０ｍｇの服用量で存在し、リコピンは５ｍｇの服用量で存在し、セレンは５５μｇの服用量で存在し、亜鉛は２０ｍｇの服用量で存在し、セレノアは３２０ｍｇの服用量で存在し、大豆イソフラボンは１００ｍｇの服用量で存在する、請求項２に記載の医薬組成物。
8. 緑茶抽出物は１２５ｍｇの服用量で存在し、ザクロ抽出物は１２５ｍｇの服用量で存在し、リコピンは５ｍｇの服用量で存在し、セレンは８２．５μｇの服用量で存在し、亜鉛は２０ｍｇの服用量で存在し、セレノアは１６０ｍｇの服用量で存在し、大豆イソフラボンは１００ｍｇの服用量で存在し、Ｌ−カルニチンは２００ｍｇの服用量で存在する、請求項２に記載の医薬組成物。
9. 薬剤としての、請求項１または２に記載の医薬組成物。