JP5507866B2

JP5507866B2 - Ｓｌｐ−２ａタンパク質低減剤、及びミオシン−５ａタンパク質低減剤

Info

Publication number: JP5507866B2
Application number: JP2009075485A
Authority: JP
Inventors: 研板倉; 明美高山; 千春近藤; 光則福田
Original assignee: Kose Corp
Current assignee: Kose Corp
Priority date: 2009-03-26
Filing date: 2009-03-26
Publication date: 2014-05-28
Anticipated expiration: 2029-03-26
Also published as: JP2010229043A

Description

本発明は、細胞内に存在するタンパク質の一種であるＳｌｐ−２ａ又はミオシン−５ａのタンパク質量を低減させる作用のある剤に関する。

最近メラノサイト内のメラノソーム輸送にかかわるタンパク質と、その機能が解明された。Ｓｌａｃ２−ａ、Ｒａｂ２７ａ、及びミオシン−５ａの３つのタンパク質が、メラノソーム上で複合体を形成し、メラノソームの微小管からアクチン線維への受け渡しと、アクチン線維上のメラノソーム輸送に関わっていること；ならびにＳｌｐ２−ａは、細胞周辺へ移動させたメラノソームを細胞膜につなぎとめる役割を果たしていること；が報告されている（例えば、非特許文献１）。また、ミオシン−５ａは、神経細胞や分泌細胞などに広く発現することが知られている。
この様な状況下、メラノソーム輸送関連タンパク質の一種であるＲａｂ２７aの不活性化剤が提案されている（特許文献１）。

一方、ゴマの抽出物については、種々の用途、例えば皮膚外用剤、への利用が提案されているが（特許文献２〜６）、上記タンパク質に対する作用についてはなんら知られていない。

特開２００７−１３７８２１号公報特開平１０−２７９４２８号公報特開平０７−２７７９３８号公報特開平０８−１５７３４７号公報特開平０５−１７０６５８号公報特開平０８−２０８６８５号公報

「シナプトダグミンによる調節性分泌の制御」、蛋白質核酸酵素、ｐ２１８６−２１９７、Ｖｏｌ．４９、Ｎｏ．１４、２００４年

本発明は、細胞中に存在するＳｌｐ−２ａ又はミオシン−５ａのタンパク質量を低減させる作用があり、しかも安全性が良好な新規な剤を提供することを課題とする。

本発明者が鋭意検討した結果、ゴマ種子の発芽体から、エタノールと水との混合溶媒によって抽出された抽出物には、細胞中のＳｌｐ−２ａ又はミオシン−５ａタンパク質量を低減させる作用があることを見出し、この知見に基づいて本発明を完成するに至った。
即ち、本発明は、前記課題を解決するため、ゴマ（Sesamum Indicum L.）又はその栽培品種の種子の発芽体からエタノール及び水の混合溶媒により抽出された抽出物を有効成分として含有する、Ｓｌｐ２−ａタンパク質低減剤、又はミオシン−５ａタンパク質低減剤を提供する。
本発明の一態様は、メラノソーム輸送を阻害する作用を示す上記タンパク質低減剤である。また、本発明のタンパク質低減剤の一態様は、皮膚外用剤又は化粧料である。

本発明によれば、細胞内に存在するＳｌｐ２−ａ又はミオシン−５ａのタンパク質量を低減する作用を示し、しかも安全性が良好な新規な剤を提供することができる。

例２で行ったＳｌｃｐ２−ａタンパク質についてのウエスタンブロッティングの結果である。例２で行ったミオシン−５ａタンパク質についてのウエスタンブロッティングの結果である。（ａ）例１で調製した抽出液を添加したメラノサイトの顕微鏡写真、及び（ｂ）無添加のメラノサイトの顕微鏡写真である。

以下、本発明について詳細に説明する。なお、本明細書において、「〜」はその前後の数値を含む範囲を意味するものとする。
本発明は、ゴマ（Sesamum Indicum L.）又はその栽培品種の種子の発芽体（以下、単に「ゴマ種子の発芽体」という）の抽出物を有効成分として含有する、Ｓｌｐ２−ａ又はミオシン−５ａタンパク質低減剤に関する。なお、本明細書において、「ゴマ種子の発芽体」とは、光を遮って種子を発芽させ、その発芽後の種子と発芽した芽の双方を含む、いわゆる「もやし」のことを意味するものとする。一般的には、ゴマの種子は数日で発芽し、「もやし」になる。本発明では、このもやしからの抽出物を利用する。また、本発明では、ゴマの栽培品種の種子の発芽体を利用することもできる。「栽培品種」とは、農業や園芸利用のためにつくられた（育種）であって、有用な形質を保持する品種のことをいう。

本発明では、水及びエタノールの混合溶媒による抽出物を用いる。水−エタノール混合溶媒を用いることで、ゴマ種子の発芽体から、上記タンパク質に対する減少作用を示す成分を、安定的に抽出することができる。なお、前記混合溶媒中には、水及びエタノール以外の親水性有機溶媒（例えば、２−プロパノール、ジメチルスルホキシド等）が含まれていてもよいが、但し、水とエタノールのみの混合溶媒を用いるのが好ましい。

前記ゴマ種子の発芽体の抽出物は、一般的な方法で調製することができる。例えば、ゴマ種子の発芽体を、室温又は加温下で、水−エタノール混合溶媒中に所定の時間浸漬することによって、有効成分を抽出することができる。抽出時は、攪拌を行ってもよい。また、抽出前に、乾燥、細切、圧搾又は醗酵等の前処理を行うこともできる。

前記ゴマ種子の発芽体の抽出物は、調製後、そのまま用いることができる。また、所望により、適宜の期間そのまま放置し熟成させた後に、用いることもできる。必要ならば、本発明の効果に影響のない範囲で、更に、濾過又はイオン交換樹脂等により、脱臭、脱色等の精製処理を施して用いることもできる。又、液体クロマトグラフィー等の分離手段を用い、活性の高い画分を取り出して用いることもできる。

本発明者が鋭意検討した結果、前記ゴマ種子の発芽体の抽出物には、細胞内に存在するＳｌｐ２−ａ及びミオシン−５ａのタンパク質量を軽減する作用があることを見出した。特にミオシン−５ａタンパク質は、分泌細胞中に広く発現することから、インシュリンなどのホルモンの分泌制御に関わることが推測され、本発明のタンパク質低減剤の分泌制御剤としての使用も期待される。

本発明のタンパク質低減剤中における、前記ゴマ種子の発芽体の抽出物の含有量は、固形分として、好ましくは０．０００００１〜０．０５質量％（以下単に「％」で示す）であり、より好ましくは０．０００１〜０．０１％である。この範囲内であれば、前記抽出物を安定に配合することができ、且つ細胞内に存在する前記２種のタンパク質に対して十分な低減作用を示す。

本発明のタンパク質低減剤は、皮膚外用剤及び化粧料として調製することができる。皮膚外用剤及び化粧料の態様では、前記ゴマ種子の発芽体の抽出物を前記質量％の範囲で含有するとともに、化粧品、及び医薬部外品に通常使用される各種の成分、即ち、水、アルコール、油剤、界面活性剤、増粘剤、粉体、キレート剤、ｐＨ調整剤、各種薬効剤、動植物・微生物由来の抽出物、香料等を、本発明の効果を損なわない範囲で適宜加えることができる。また、美白剤、抗酸化剤、細胞賦活剤、抗炎症剤、紫外線防止剤等の薬効成分を併用して、本発明の効果を更に高める、もしくは他の効果をさらに付加することもできる。

以下に実施例を挙げて本発明をさらに具体的に説明するが、本発明の範囲は下記の実施例に限定されることはない。
［例１：ゴマ種子の発芽体の抽出物の調製］
ゴマ種子の発芽体（もやし）の全草部乾燥品を粉砕し、７０％エタノール水溶液中に、常温で３時間浸漬及び攪拌し、成分を抽出した。この抽出液を冷却し、１日放置した後、濾過により不溶物を除去した。この様にして、ゴマ種子の発芽体の抽出液を得た。
この抽出液は、固形分濃度０．９％であった。以下の例では、この抽出液を７０％エタノール水溶液で希釈して濃度を調製したものを試料として用いた。

［例２：Ｓｌｐ２−ａ及びミオシン−５ａタンパク質低減能の評価］
ヒトメラノサイトを用い、Ｍｅｄｉｕｍ２５４培地にて培養した。例１で調製した抽出液を最終濃度が０.２３％になるように添加して７２時間後に細胞を回収し、タンパク質の抽出を行った。一定のタンパク質量をＳＤＳ−ＰＡＧＥで分離した後、抗Ｒａｂ２７ａ・ミオシン−５ａ・Ｓｌａｃ２−ａ・Ｓｌｐ２−ａ・アクチン抗体を用いてウエスタンブロッティングを行った。例１で調製した抽出液を添加していない細胞を対照として、検出されたバンドの濃さの比較から、各タンパク質量の変化を決定した。

・結果
無添加の対照試料及び例１で調製した抽出液で処理した細胞それぞれから検出されたＳｌｐ２−ａ及びミオシン−５ａのタンパク質量を、それぞれのバンドの濃さで比較した結果を図１及び図２に示す。なお、他の細胞骨格を担うタンパク質である、アクチンと、他のメラノソーム輸送関連タンパク質である、Ｒａｂ２７ａ及びＳｌａｃ２−ａについては、タンパク質量低減作用が認められなかった。アクチンについては、図１及び図２中に、対照として示した。これらの結果から、Ｓｌｐ２−ａ及びミオシン−５ａタンパク質量を、対照を１００％として算出した。その結果を下記表に示す。なお、表中の濃度０．２３％は製造例１で調製した抽出液の希釈濃度である。

図１に示す通り、Ｓｌｐ２−ａタンパク質のバンドが薄くなり、上記表に示す通り、Ｓｌｐ２−ａタンパク質量が、対照試料と比較して３０％まで低減され、即ち７０％減少したことが理解できる。
また、図２に示す通り、ミオシン−５ａタンパク質のバンドが薄くなり、上記表に示す通り、ミオシン−５ａの量が、対照試料と比較して５４％まで低減され、即ち４６％減少したことが理解できる。

［例３：メラノソーム輸送阻害能の評価］
ヒトメラノサイトを用い、Ｍｅｄｉｕｍ２５４培地（クラボウ社製）にて培養した。例１で調製した抽出液を最終濃度が０.２３％になるように添加して７２時間後の細胞を、顕微鏡観察した。写真を図３に示す。図３（ａ）が例１で調製した抽出液を添加したメラノサイトの顕微鏡観察写真であり、及び図３（ｂ）が無添加のメラノサイトの顕微鏡観察写真である。図３（ａ）及び（ｂ）の写真中、黒い斑点として観察されるのがメラノソームである。図３（ｂ）に示す無添加のメラノサイト内では、核周辺で合成されたメラノソームが、核周辺には留まらず、末端部まで一様に分布していることが理解できる。一方、例１で調製した抽出液を添加したメラノサイト中では、図３（ａ）に示す通り、合成されたメラノソームは、そのまま核周辺部に留まっていて、偏在したままであること、即ち、メラノソーム輸送が阻害されていることが理解できる。
よって、例１で調製したゴマ種子の発芽体の抽出液には、メラノソーム輸送阻害能があることが確認された。

［例４：化粧水の調製］
下記の組成の化粧水を、以下の方法で調製した。
Ａ．成分（３）、（４）及び（８）〜（１１）を混合溶解する。
Ｂ．成分（１）、（２）、（５）〜（７）及び（１２）を混合溶解する。
Ｃ．ＡとＢを混合して均一にし、化粧水を得た。
（成分）（％）
（１）グリセリン５．０
（２）１，３−ブチレングリコール６．５
（３）ポリオキシエチレン（２０Ｅ．Ｏ．）ソルビタン
モノラウリン酸エステル１．２
（４）エタノール１２．０
（５）乳酸０．０５
（６）乳酸ナトリウム０．１
（７）コラーゲン１．０
（８）ゴマ発芽体エキス＊０．５
（９）アスコルビン酸グルコシド０．５
（１０）防腐剤０．１
（１１）香料０．１
（１２）精製水残量
＊例１にて得られたゴマ発芽体エキス（固形分濃度０．９％）

［例５：乳液の調製］
下記の組成の乳液を、以下の方法で調製した。
Ａ．成分（１０）を加熱し、７０℃に保つ。
Ｂ．成分（１）〜（９）および（１１）を加熱混合し、７０℃に保つ。
Ｃ．ＢにＡを加えて混合し、均一に乳化する。
Ｄ．Ｃを冷却後（１２）〜（１５）を加え、均一に混合して乳液を得た。
（成分）（％）
（１）ポリオキシエチレン（１０Ｅ．Ｏ．）ソルビタン
モノステアレート１．０
（２）ポリオキシエチレン（６０Ｅ．Ｏ．）ソルビット
テトラオレエート０．５
（３）グリセリルモノステアレート１．０
（４）ステアリン酸０．５
（５）ベヘニルアルコール０．５
（６）スクワラン８．０
（７）エタノール５．０
（８）ゴマ発芽体エキス＊０．０１
（９）アルブチン１．０
（１０）精製水残量
（１１）防腐剤０．１
（１２）カルボキシビニルポリマー０．２
（１３）水酸化ナトリウム０．１
（１４）ヒアルロン酸０．１
（１５）香料０．１
＊例１にて得られたゴマ発芽体エキス（固形分濃度０．９％）

［例６：リキッドファンデーションの調製］
下記の組成のリキッドファンデーションを、以下の方法で調製した。
Ａ．成分（１）〜（７）を混合溶解する。
Ｂ．Ａに成分（１３）〜（１８）を加え、均一に混合し、７０℃に保つ。
Ｃ．成分（８）〜（１２）を均一に溶解し、７０℃に保つ。
Ｄ．ＣにＢを添加して、均一に乳化する。
Ｅ．Ｄを冷却後、成分（１９）及び（２０）を添加してリキッドファンデーションを得た。
（成分）（％）
（１）液状ラノリン２．０
（２）流動パラフィン５．０
（３）ステアリン酸２．０
（４）セタノール１．０
（５）自己乳化型
モノステアリン酸グリセリン１．０
（６）パラメトキシケイ皮酸
−２−エチルヘキシル８．０
（７）防腐剤０．１
（８）グリセリン５．０
（９）トリエタノールアミン１．０
（１０）カルボキシメチルセルロース０．２
（１１）ベントナイト０．５
（１２）精製水残量
（１３）酸化チタン６．０
（１４）微粒子酸化チタン２．０
（１５）微粒子酸化亜鉛５．０
（１６）マイカ２．０
（１７）タルク４．０
（１８）着色顔料４．０
（１９）ゴマ発芽体エキス＊０．０１
（２０）香料０．１
＊例１にて得られたゴマ発芽体エキス（固形分濃度０．９％）

［例７：日やけ止め乳液の調製］
下記の組成の日やけ止め乳液を、以下の方法で調製した。
Ａ．成分（１）〜（１１）を混合分散する。
Ｂ．成分（１２）〜（１５）を混合分散する。
Ｃ．ＡにＢを添加して、均一に乳化する。
Ｄ．Ｃに成分（１６）及び（１７）を添加して日やけ止め乳液を得た。
（成分）（％）
（１）ポリオキシアルレン変性
オルガノポリシロキサン１．０
（２）ジメチルポリシロキサン５．０
（３）オクタメチルシクロテトラシロキサン２０．０
（４）イソノナン酸イソトリデシル５．０
（５）パラメトキシケイ皮酸
−２−エチルヘキシル１０．０
（６）防腐剤０．１
（７）香料０．１
（８）シリコーン処理微粒子酸化チタン８．０
（９）シリコーン処理微粒子酸化亜鉛７．０
（１０）ポリスチレン末３．０
（１１）トリメチルシロキシケイ酸０．５
（１２）ジプロピレングリコール３．０
（１３）エタノール１０．０
（１４）精製水残量
（１５）食塩０．２
（１６）ゴマ発芽体エキス＊１．０
（１７）リン酸−Ｌ−アスコルビル
マグネシウム３．０
＊例１にて得られたゴマ発芽体エキス（固形分濃度０．９％）

［例８：軟膏剤の調製］
下記の組成の軟膏剤を、以下の方法で調製した。
Ａ．成分（３）、（４）及び（９）の一部を加熱混合し、７５℃に保つ。
Ｂ．成分（１）、（２）、（７）及び（８）を加熱混合し、７５℃に保つ。
Ｃ．ＡにＢを徐々に加え、これを冷却しながら成分（９）の残部で溶解した（５）及び（６）を加え、軟膏剤を得た。
（成分）（％）
（１）ステアリン酸１８．０
（２）セタノール４．０
（３）トリエタノールアミン２．０
（４）グリセリン５．０
（５）グリチルリチン酸ジカリウム０．５
（６）ゴマ発芽体エキス＊１．０
（７）酢酸ｄｌ−α―トコフェロール０．２
（８）パラオキシ安息香酸メチル０．１
（９）精製水残量
＊例１にて得られたゴマ発芽体エキス（固形分濃度０．９％）

［例９：ローション剤の調製］
下記の組成のローション剤を、以下の方法で調製した。
Ａ．成分（３）、（４）及び（６）を混合溶解する。
Ｂ．成分（１）、（２）、（５）及び、（７）を混合溶解する。
Ｃ．ＡとＢを混合して均一にし、ローション剤を得た。
（成分）（％）
（１）グリセリン５．０
（２）１，３−ブチレングリコール６．５
（３）ポリオキシエチレン（２０Ｅ．Ｏ．）
ソルビタンモノラウリン酸エステル１．２
（４）エチルアルコール８．０
（５）ゴマ発芽体エキス＊５．０
（６）パラオキシ安息香酸メチル０．２
（７）精製水残量
＊例１にて得られたゴマ発芽体エキス（固形分濃度０．９％）

上記例４〜７の化粧料、実施例８及び９の皮膚外用剤は、皮膚に適用することにより、皮膚を白くする作用がある化粧料及び皮膚外用剤であることを確認した。

本発明によれば、細胞内のＳｌｐ２−ａ及びミオシン−５ａタンパク質量を減少させる作用があるとともに、安全性が良好な、新規な剤を提供することができる。

Claims

ゴマ（Sesamum Indicum L.）又はその栽培品種の種子の発芽体から７０％エタノール水溶液により抽出した抽出物を有効成分として含有する、Ｓｌｐ２−ａタンパク質低減剤（美白剤を除く。）。
ゴマ（Sesamum Indicum L.）又はその栽培品種の種子の発芽体から７０％エタノール水溶液により抽出した抽出物を有効成分として含有する、ミオシン−５ａタンパク質低減剤（美白剤を除く。）。