JP2011132195A - Ｓｌａｃ２−ａタンパク質量低減剤、ｍｙｏｓｉｎＶａタンパク質量低減剤、及びＳｌｐ２−ａタンパク質量低減剤 - Google Patents

Abstract

【課題】細胞内のＳｌａｃ２−ａ、ｍｙｏｓｉｎ Ｖａ及びＳｌｐ２−ａタンパク質量を低減する剤を提供する。
【解決手段】サンペンズ（学名Cassia mimosoides L. 別名 リュウキュウカワラケツメイ）を、エタノール及び水の混合溶媒によって抽出して得られた抽出物を有効成分として含有することを特徴とするＳｌａｃ２−ａタンパク質量の低減剤、ｍｙｏｓｉｎ Ｖａタンパク質量の低減剤、又はＳｌｐ２−ａタンパク質量の低減剤である。
【選択図】なし

Description

本発明は、細胞内に存在するタンパク質の一種であるＳｌａｃ２−ａ、ｍｙｏｓｉｎ Ｖａ又はＳｌｐ２−ａのタンパク質量を低減させる作用のある剤に関する。

最近メラノサイト内のメラノソーム輸送にかかわるタンパク質と、その機能が解明された。Ｓｌａｃ２−ａ、Ｒａｂ２７ａ、及びｍｙｏｓｉｎ Ｖａの３つのタンパク質が、メラノソーム上で複合体を形成し、メラノソームの微小管からアクチン線維への受け渡しと、アクチン線維上のメラノソーム輸送に関わっていること；ならびにＳｌｐ２−ａは、細胞周辺へ移動させたメラノソームを細胞膜につなぎとめる役割を果たしていること；が報告されている（例えば、非特許文献１）。また、ｍｙｏｓｉｎ Ｖａは、神経細胞や分泌細胞などに広く発現することが知られている。
この様な状況下、メラノソーム輸送関連タンパク質の一種であるＲａｂ２７aの不活性化剤が提案されている（特許文献１）。

一方、サンペンズの抽出物については、種々の用途、例えば皮膚外用剤への利用が提案されているが（特許文献２及び３）、上記タンパク質に対する作用についてはなんら知られていない。

特開２００７−１３７８２１号公報 特開平８−２８３１７２８号公報 特開２００９−２４９３６６号公報

「シナプトダグミンによる調節性分泌の制御」、蛋白質 核酸 酵素、ｐ２１８６−２１９７、Ｖｏｌ．４９、Ｎｏ．１４、２００４年

本発明は、細胞中に存在するＳｌａｃ２−ａタンパク質量、ｍｙｏｓｉｎ Ｖａタンパク質量、及びＳｌｐ２−ａタンパク質量を低減させる作用があり、しかも安全性が良好な新規な剤を提供することを課題とする。

本発明者が鋭意検討した結果、サンペンズから、エタノールと水との混合溶媒によって抽出された抽出物には、細胞中のＳｌａｃ２−ａ、ｍｙｏｓｉｎ Ｖａ及びＳｌｐ２−ａのタンパク質量を低減させる作用があることを見出し、この知見に基づいて本発明を完成するに至った。
即ち、本発明は、前記課題を解決するため、サンペンズ（Cassia mimosoides L.）からエタノール及び水の混合溶媒により抽出された抽出物を有効成分として含有する、Ｓｌａｃ２−ａタンパク質量低減剤、ｍｙｏｓｉｎ Ｖａタンパク質量低減剤又はＳｌｐ２−ａタンパク質量低減剤を提供する。
本発明の一態様は、メラノソーム輸送を阻害する作用を示す上記タンパク質量低減剤である。

本発明によれば、細胞内に存在するＳｌａｃ２−ａ、ｍｙｏｓｉｎ Ｖａ又はＳｌｐ２−ａのタンパク質量を低減する作用を示し、しかも安全性が良好な新規な剤を提供することができる。

例２で行ったＳｌａｃ２−ａタンパク質についてのウエスタンブロッティングの結果である。 例２で行ったｍｙｏｓｉｎ Ｖａタンパク質についてのウエスタンブロッティングの結果である。 例２で行ったＳｌｐ２−ａタンパク質についてのウエスタンブロッティングの結果である。 （ａ）例１で調製した抽出物を添加したメラノサイトの顕微鏡写真、及び（ｂ）無添加のメラノサイトの顕微鏡写真である。

以下、本発明について詳細に説明する。なお、本明細書において、「〜」はその前後の数値を含む範囲を意味するものとする。
本発明は、サンペンズ（学名Cassia mimosoides L.）、別名リュウキュウカワラケツメイの全草（以下、単に「サンペンズ」という）の抽出物を有効成分として含有する、Ｓｌａｃ２−ａ、ｍｙｏｓｉｎ Ｖａ又はＳｌｐ２−ａのタンパク質量低減剤に関する。メラニンは皮膚の色を決める黒色の色素であり、皮膚に存在するメラノサイトと呼ばれる細胞のメラノソームと呼ばれる細胞内小器官で生成される。メラニンが蓄積されて黒色化したメラノソームは種々の輸送関連タンパク質によりメラノサイトの核周辺から樹状突起の末端へと輸送され、周りの表皮細胞に受け渡される。紫外線等の刺激によりメラノソームが過剰に表皮細胞に蓄積されると色素異常、いわゆるシミが生じる。我々は古くから薬用茶として用いられてきたサンペンズの抽出液に着目し、メラノサイトにてメラノソーム輸送における作用を検討した。その結果、光学顕微鏡観察によりサンペンズ抽出物を添加したメラノサイトでは、核周辺でのメラノソームの凝集が観察された。またメラノソーム輸送関連タンパク質のうちＳｌａｃ２−ａ、ｍｙｏｓｉｎ Ｖａ及びＳｌｐ２−ａのタンパク質量の減少がウエスタンブロッティング法により確認された。以上より、サンペンズの抽出物は、メラノソーム輸送関連タンパク質である、Ｓｌａｃ２−ａ、ｍｙｏｓｉｎ Ｖａ及びＳｌｐ２−ａのタンパク質量を減少させる作用があり、それによって、メラノソームの輸送を阻害することが明らかとなった。

本発明では、水及びエタノールの混合溶媒によるサンペンズの抽出物を用いる。水−エタノール混合溶媒を用いることで、サンペンズから、上記タンパク質に対する減少作用を示す成分を、安定的に抽出することができる。なお、前記混合溶媒中には、水及びエタノール以外の親水性有機溶媒（例えば、２−プロパノール、ジメチルスルホキシド等）が含まれていてもよいが、但し、水とエタノールのみの混合溶媒を用いるのが好ましい。水とエタノールの比率は任意であるがエタノールの濃度として１０〜９０質量％（以下単に「％」で示す）が好ましく３０〜７０％が特に好ましい。

前記サンペンズの抽出物は、一般的な方法で調製することができる。例えば、サンペンズを、室温又は加温下で、水−エタノール混合溶媒中に所定の時間浸漬することによって、有効成分を抽出することができる。抽出時は、攪拌を行ってもよい。また、抽出前に、乾燥、細切、圧搾又は醗酵等の前処理を行うこともできる。

前記サンペンズの抽出物は、調製後、そのまま用いることができる。また、所望により、適宜の期間そのまま放置し熟成させた後に、用いることもできる。必要ならば、本発明の効果に影響のない範囲で、更に、濾過又はイオン交換樹脂等により、脱臭、脱色等の精製処理を施して用いることもできる。又、液体クロマトグラフィー等の分離手段を用い、活性の高い画分を取り出して用いることもできる。

本発明者が鋭意検討した結果、前記サンペンズの抽出物には、細胞内に存在するＳｌａｃ２−ａ、ｍｙｏｓｉｎ Ｖａ及びＳｌｐ２−ａのタンパク質量を軽減する作用があることを見出した。Ｓｌａｃ２−ａ、ｍｙｏｓｉｎ Ｖａ及びＳｌｐ２−ａは、メラノサイト中におけるメラノソーム輸送に関与するタンパク質である。よって、本発明のタンパク質量低減剤の一態様は、メラノソーム輸送に対して阻害作用を示す、メラノソーム輸送阻害剤である。メラノソームの輸送が阻害されると、メラノサイトで生成したメラニンが、ケラチノサイトに受け渡されるのが阻害されるため、肌の色素沈着を抑制することができる。本発明者は、従来の美白剤、コウジ酸、アルブチンには、メラノソーム輸送阻害作用がないことを確認している。従って、本発明のタンパク質量低減剤が示すメラノソーム輸送阻害作用に基づく肌の色素沈着抑制効果は、従来のコウジ酸やアルブチン等を含有する美白用化粧料が奏する美白効果とは異なるものである。また、特にｍｙｏｓｉｎ Ｖａタンパク質は、分泌細胞中に広く発現することから、インシュリンなどのホルモンの分泌制御に関わることが推測され、本発明のタンパク質量低減剤の分泌制御剤としての使用も期待される。

本発明のタンパク質量低減剤中における、前記サンペンズの抽出物の含有量は、固形分として、好ましくは０．０００００１〜０．０５％であり、より好ましくは０．０００１〜０．０１％である。この範囲内であれば、前記抽出物を安定に配合することができ、且つ細胞内に存在する前記３種のタンパク質に対して十分な低減作用を示す。

本発明のタンパク質量低減剤は、皮膚外用剤として調製することができる。皮膚外用剤の態様では、前記サンペンズの抽出物とともに、化粧品、及び医薬部外品に通常使用される各種の成分、即ち、水、アルコール、油剤、界面活性剤、増粘剤、粉体、キレート剤、ｐＨ調整剤、各種薬効剤、動植物・微生物由来の抽出物、香料等を、本発明の効果を損なわない範囲で適宜加えることができる。また、美白剤、抗酸化剤、細胞賦活剤、抗炎症剤、紫外線防止剤等の薬効成分を併用して、本発明の効果を更に高める、もしくは他の効果をさらに付加することもできる。

本発明のタンパク質量低減剤は、美肌等を目的とする化粧品、特に美白用化粧品として適する。化粧品の形態については特に限定されず、例えば、乳液、クリーム、化粧水、パック、洗浄料、メーキャップ化粧料等のいずれの形態の化粧品であってもよい。その他、分散液、軟膏、液剤、エアゾール、貼付剤、パップ剤、リニメント剤等の部外医薬品として調製してもよい。また、本発明のタンパク質量低減剤は、乳化型皮膚外用剤であってもよく、かかる場合は、Ｗ／Ｏ型及びＯ／Ｗ型のいずれであってもよい。

以下に実施例を挙げて本発明をさらに具体的に説明するが、本発明の範囲は下記の実施例に限定されることはない。
［例１：サンペンズの抽出物の調製］
サンペンズの全草部乾燥品を粉砕し、５０％エタノール水溶液中に浸漬及び攪拌し、成分を加温抽出した。この抽出液を冷却し、7日間放置した後、濾過により不溶物を除去した。この様にして、サンペンズの抽出物を得た。
この抽出物は、固形分濃度１．４％であった。以下の例では、この抽出物を５０％エタノール水溶液で希釈して濃度を調製したものを試料として用いた。

［例２：Ｓｌａｃ２−ａ、ｍｙｏｓｉｎ Ｖａ及びＳｌｐ２−ａタンパク質量低減能の評価］
ヒトメラノサイトを用い、Ｍｅｄｉｕｍ２５４培地にて培養した。例１で調製した抽出物を最終濃度が０．３７５％になるように添加して９６時間後に細胞を回収し、タンパク質の抽出を行った。一定のタンパク質量をＳＤＳ−ＰＡＧＥで分離した後、抗Ｓｌａｃ２−ａ、ｍｙｏｓｉｎ Ｖａ、Ｓｌｐ２−ａ、Ｒａｂ２７ａ、ａｃｔｉｎ抗体を用いてウエスタンブロッティングを行った。例１で調製した抽出物を添加していない細胞を対照として、検出されたバンドの濃さの比較から、各タンパク質量の変化を決定した。

・結果
無添加の対照試料及び例１で調製した抽出物で処理した細胞それぞれから検出されたＳｌａｃ２−ａ、ｍｙｏｓｉｎ Ｖａ及びＳｌｐ２−ａのタンパク質量を、それぞれのバンドの濃さで比較した結果を図１、図２及び図３に示す。なお、他の細胞骨格を担うタンパク質である、アクチンと、他のメラノソーム輸送関連タンパク質である、Ｒａｂ２７ａについては、タンパク質量低減作用が認められなかった。アクチンについては、図１、図２及び図３中に対照として示した。サンペンズの抽出物を添加しないときのＳｌａｃ２−ａ、ｍｙｏｓｉｎ Ｖａ及びＳｌｐ２−ａそれぞれのバンドの濃さに対する、０．３７５％添加したときのバンドの濃さの比率を算出し、タンパク質量とした。なお、表中の濃度０．３７５％は製造例１で調製した抽出物の希釈濃度である。

図１に示す通り、Ｓｌａｃ２−ａタンパク質のバンドが薄くなり、上記表に示す通り、Ｓｌａｃ２−ａタンパク質量が、対照試料と比較して３９％まで低減され、即ち６１％減少したことが理解できる。
また、図２に示す通り、ｍｙｏｓｉｎ Ｖａタンパク質のバンドが薄くなり、上記表に示す通り、ｍｙｏｓｉｎ Ｖａの量が、対照試料と比較して３４％まで低減され、即ち６６％減少したことが理解できる。
さらに図３に示す通り、Ｓｌｐ２−ａタンパク質のバンドが薄くなり、上記表に示す通り、Ｓｌｐ２−ａの量が、対照試料と比較して４２％まで低減され、即ち５６％減少したことが理解できる。

［例３：メラノソーム輸送阻害能の評価］
ヒトメラノサイトを用い、Ｍｅｄｉｕｍ２５４培地（クラボウ社製）にて培養した。例１で調製した抽出物を最終濃度が０.３７５％になるように添加して９６時間後の細胞を、顕微鏡観察した。写真を図４に示す。図４（ａ）が例１で調製した抽出物を添加したメラノサイトの顕微鏡観察写真であり、及び図４（ｂ）が無添加のメラノサイトの顕微鏡観察写真である。図４（ａ）及び（ｂ）の写真中、黒い斑点として観察されるのがメラノソームである。図４（ｂ）に示す無添加のメラノサイト内では、核周辺で合成されたメラノソームが、核周辺には留まらず、末端部まで一様に分布していることが理解できる。一方、例１で調製した抽出物を添加したメラノサイト中では、図４（ａ）に示す通り、合成されたメラノソームは、そのまま核周辺部に留まっていて、偏在したままであること、即ち、メラノソーム輸送が阻害されていることが理解できる。
よって、例１で調製したサンペンズの抽出物には、メラノソーム輸送阻害能があることが確認された。

［例４：化粧水の調製］
下記の組成の化粧水を、以下の方法で調製した。
Ａ． 成分（３）、（４）及び（８）〜（１１）を混合溶解する。
Ｂ． 成分（１）、（２）、（５）〜（７）及び（１２）を混合溶解する。
Ｃ． ＡとＢを混合して均一にし、化粧水を得た。
（成分） （％）
（１）グリセリン ５．０
（２）１，３−ブチレングリコール ６．５
（３）ポリオキシエチレン（２０Ｅ．Ｏ．）ソルビタン
モノラウリン酸エステル １．２
（４）エタノール １２．０
（５）乳酸 ０．０５
（６）乳酸ナトリウム ０．１
（７）コラーゲン １．０
（８）サンペンズ抽出物＊ ０．５
（９）アスコルビン酸グルコシド ０．５
（１０）防腐剤 ０．１
（１１）香料 ０．１
（１２）精製水 残量
＊製造例１にて得られたサンペンズ抽出物

［例５：乳液の調製］
下記の組成の乳液を、以下の方法で調製した。
Ａ． 成分（１０）を加熱し、７０℃に保つ。
Ｂ． 成分（１）〜（９）および（１１）を加熱混合し、７０℃に保つ。
Ｃ． ＢにＡを加えて混合し、均一に乳化する。
Ｄ． Ｃを冷却後（１２）〜（１５）を加え、均一に混合して乳液を得た。
（成分） （％）
（１）ポリオキシエチレン（１０Ｅ．Ｏ．）ソルビタン
モノステアレート １．０
（２）ポリオキシエチレン（６０Ｅ．Ｏ．）ソルビット
テトラオレエート ０．５
（３）グリセリルモノステアレート １．０
（４）ステアリン酸 ０．５
（５）ベヘニルアルコール ０．５
（６）スクワラン ８．０
（７）エタノール ５．０
（８）サンペンズ抽出物＊ ０．０１
（９）アルブチン １．０
（１０）精製水 残量
（１１）防腐剤 ０．１
（１２）カルボキシビニルポリマー ０．２
（１３）水酸化ナトリウム ０．１
（１４）ヒアルロン酸 ０．１
（１５）香料 ０．１
＊製造例１にて得られたサンペンズ抽出物

［例６：リキッドファンデーションの調製］
下記の組成のリキッドファンデーションを、以下の方法で調製した。
Ａ． 成分（１）〜（７）を混合溶解する。
Ｂ． Ａに成分（１３）〜（１８）を加え、均一に混合し、７０℃に保つ。
Ｃ． 成分（８）〜（１２）を均一に溶解し、７０℃に保つ。
Ｄ． ＣにＢを添加して、均一に乳化する。
Ｅ． Ｄを冷却後、成分（１９）、（２０）を添加してリキッドファンデーションを得た。
（成分） （％）
（１）液状ラノリン ２．０
（２）流動パラフィン ５．０
（３）ステアリン酸 ２．０
（４）セタノール １．０
（５）自己乳化型
モノステアリン酸グリセリン １．０
（６）パラメトキシケイ皮酸
−２−エチルヘキシル ８．０
（７）防腐剤 ０．１
（８）グリセリン ５．０
（９）トリエタノールアミン １．０
（１０）カルボキシメチルセルロース ０．２
（１１）ベントナイト ０．５
（１２）精製水 残量
（１３）酸化チタン ６．０
（１４）微粒子酸化チタン ２．０
（１５）微粒子酸化亜鉛 ５．０
（１６）マイカ ２．０
（１７）タルク ４．０
（１８）着色顔料 ４．０
（１９）サンペンズ抽出物＊ ０．０１
（２０）香料 ０．１
＊製造例１にて得られたサンペンズ抽出物

［例７：日やけ止め乳液の調製］
下記の組成の日やけ止め乳液を、以下の方法で調製した。
Ａ． 成分（１）〜（１１）を混合分散する。
Ｂ． 成分（１２）〜（１５）を混合分散する。
Ｃ． ＡにＢを添加して、均一に乳化する。
Ｄ． Ｃに成分（１６）、（１７）を添加して日やけ止め乳液を得た。
（成分） （％）
（１）ポリオキシアルキレン変性
オルガノポリシロキサン １．０
（２）ジメチルポリシロキサン ５．０
（３）オクタメチルシクロテトラシロキサン ２０．０
（４）イソノナン酸イソトリデシル ５．０
（５）パラメトキシケイ皮酸
−２−エチルヘキシル １０．０
（６）防腐剤 ０．１
（７）香料 ０．１
（８）シリコーン処理微粒子酸化チタン ８．０
（９）シリコーン処理微粒子酸化亜鉛 ７．０
（１０）ポリスチレン末 ３．０
（１１）トリメチルシロキシケイ酸 ０．５
（１２）ジプロピレングリコール ３．０
（１３）エタノール １０．０
（１４）精製水 残量
（１５）食塩 ０．２
（１６）サンペンズ抽出物＊ １．０
（１７）リン酸−Ｌ−アスコルビル
マグネシウム ３．０
＊製造例１にて得られたサンペンズ抽出物

上記例４〜７の化粧料は、皮膚に適用することにより、皮膚を白くする作用がある化粧料であることを確認した。

本発明によれば、細胞内のＳｌａｃ２−ａ、ｍｙｏｓｉｎ Ｖａ及びＳｌｐ２−ａのタンパク質量を減少させる作用があるとともに、安全性が良好な、新規な剤を提供することができる。

Claims (6)

1. サンペンズ（Cassia mimosoides L.）からエタノール及び水の混合溶媒により抽出した抽出物を有効成分として含有する、Ｓｌａｃ２−ａタンパク質量低減剤。
2. サンペンズ（Cassia mimosoides L.）からエタノール及び水の混合溶媒により抽出した抽出物を有効成分として含有する、ｍｙｏｓｉｎ Ｖａタンパク質量低減剤。
3. サンペンズ（Cassia mimosoides L.）からエタノール及び水の混合溶媒により抽出した抽出物を有効成分として含有する、Ｓｌｐ２−ａタンパク質量低減剤。
4. メラノソーム輸送阻害作用を示す請求項１〜３いずれかに記載のタンパク質量低減剤。
5. 皮膚外用剤である請求項１〜４のいずれか１項に記載のタンパク質量低減剤。
6. 化粧料である請求項１〜４のいずれか１項に記載のタンパク質量低減剤。

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