JP5484476B2 - Tmprss4―特異的なヒト抗体 - Google Patents
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Description
1)前記放射性同位元素を含む組成物を個体の静脈内に投与する工程、
2)前記工程1)の組成物を検出して腫瘍細胞を確認する工程、
3)工程2)で確認された腫瘍細胞を手術的切除によって除去する工程を含む、TMPRSS4が過発現される癌の生体内治療方法を提供する。
1)前記放射性同位元素を含む組成物を腫瘍細胞が除去された患者の静脈内に投与する工程、
2)前記工程1)の組成物を検出して腫瘍細胞を確認する工程、
3)工程2)で腫瘍細胞が検出されなければ、腫瘍細胞がすべて除去されたと判断することを特徴とする、癌治療患者の予後評価方法を提供する。
1)前記形質転換体を培養する工程、及び
2)前記培養液から前記ヒト抗体を精製する工程を含むTMPRSS4に特異的なヒト抗体の製造方法を提供する。
2)前記個体に対する検出映像を収得する工程を含む生体内TMPRSS4が過発現される癌の映像化方法を提供する。
1)前記放射性同位元素を含む組成物を個体の静脈内に投与する工程、
2)前記工程1)の組成物を検出して腫瘍細胞を確認する工程、
3)工程2)で確認された腫瘍細胞を手術的切除によって除去する工程を含む、TMPRSS4が過発現される癌の生体内治療方法を提供する。
1)前記放射性同位元素を含む組成物を大腸癌腫瘍細胞が除去された患者の静脈内に投与する工程、
2)前記工程1)の組成物を検出して腫瘍細胞を確認する工程、
3)工程2)で腫瘍細胞が検出されなければ、腫瘍細胞がすべて除去されたと判断することを特徴とする癌治療患者の予後評価方法を提供する。
(発明を実施するための形態)
以下、本発明の実施例によってさらに詳しく説明する。
<1−1>TMPRSS4遺伝子クローニング
韓国生命工学研究院人間遺伝体機能研究産業団のKUGI(Korean UniGene Information)からヒトTMPRSS4遺伝子を含んでいるプラスミド(IRAU−61−E06;クローンID:hMU011286)の分譲を受けた。前記プラスミドを鋳型DNAにして、前記TMPRSS4のプロテアーゼドメイン(aa205〜434)のみを発現させるために、正方向プライマー(配列番号1:5’−GAGGAGCATATGGATTATAAAGATCATGATATTGATTATAAAGATGATGATGATAAAGTGGTGGGTGGGGAGGAG−3’)及び逆方向プライマー(配列番号2:5’−GAGGAGCTCGAGCAGCTCAGCCTTCCAGAC−3’)を用いて遺伝子を下記の条件で増幅した後、NdeIとXhoIで処理した後、ライゲースを用いてpET21c(Novagen,米国)にサーブクローニングした。PCR条件は、全体反応液が50μlの時、鋳型は100ngになるように加えて、94℃で2分、94℃で30秒、55℃で30秒、72℃で1分30秒で30サイクル、72℃で10分間反応させてPCR産物を得た。同時に、前記サーブクローニングされたベクターの塩基配列を確認した(図1)。
前記サーブクローニングされたベクターをBL21(DE3)で形質転換させた後、LB(+amp)培地に接種して一晩中培養した後、500ml LB(+amp)培地に1/100に希釈して接種した。37℃で2時間程度OD=0.5まで追加で培養した後、IPTGを1mMの濃度で処理した後、4時間の間培養した。大腸菌を5000rpmで10分間遠心分離して得た後、バグバスター(Bug buster)溶液10mlに懸濁した後、15分間砕いた後、12000rpmで30分間遠心分離して水溶性分画と不溶性分画を分離した。これをSDS−PAGEで分析した結果、TMPRSS4タンパク質は不溶性分画に存在した。不溶性分画を8Mウレア溶液(8M urea,0.1M NaH2PO4,0.01M TrisCl pH7.9)で溶解した後、Ni−NTAレジン(Qiagen,米国)1mlに結合させた後、10mlの洗浄緩衝溶液(8M urea,0.1M NaH2PO4,0.01M TrisCl pH5.9)で洗浄して、5mlの溶離緩衝溶液(8M urea,0.1M NaH2PO4,0.01M TrisCl pH4.5)で溶離した。溶離したTMPRSS4タンパク質(TMPS4−FLAG)は、PBS(+10% glycerol)溶液に透析して10%SDS−PAGEゲルで電気泳動した後、クマシー染色して約35kDaの大きさを確認した(図2)。
TMPRSS4の細胞外ドメインのトリプシン類似タンパク質分解活性を測定するために、TMPS4−FLAGタンパク質(2.25μg)に蛍光ペプチドトリプシン基質であるBoc−Gln−Ala−Arg−AMC(t−butyloxycarbonylv(t−Boc)−Gln−Ala−Arg−7amido−4−メチルクマリン;B4153,Sigma,米国)とカリクレイン基質であるZ−Phe−Arg−AMC(Z−Phe−Arg7−アミド−4−メチルクマリンハイドロクロライド;C9521,Sigma,米国)をそれぞれ基質緩衝溶液(50mM tris,10mM CaCl2,1μM ZnCl2)に100μMの濃度で溶解して、TMPS4−FLAGタンパク質と混ぜた後、エンテロキナーゼ(0.09ng)を添加して時間別にVictor3プレートリーダー(PerkinElmer,米国)を用いて380/460nmでペプチド基質の加水分解による蛍光信号を測定した。
多様性を有したヒト由来scFvライブラリー細胞2.7×1010を2×YT CM[Tryptone(CONDA,1612.00)17g、酵母エキス(CONDA,1702.00)10g、NaCl(sigma,S7653−5kg)5g、クロラムフェニコール(sigma,C0857)34μg/ml)]、2%グルコース(sigma,G5400)及び5mM MgCl2(sigma,M2393)を含む培地(3L)で、37℃で2〜3時間の間培養した後(OD600=0.5〜0.7)、ヘルパーファージを感染させて2×YTCMK[2×YT CM,カナマイシン(sigma,K1876)70μg/ml,1mM IPTG(ELPISBIO,IPTG025)]培地に30℃で16時間の間培養した。培養した細胞を遠心分離(4500rpm,15分,4℃)した後、上澄み液に4%PEG(Fluka,81253)6000と3%NaCl(sigma,S7653)を添加してよく溶解した後、氷で1時間の間反応させた。再び遠心分離(8000rpm,20分,4℃)した後、ペレットにPBSを添加して溶解した後、遠心分離(12000rpm,10分,4℃)してファージライブラリーを含む上澄み液を新しいチューブに入れて4℃で保管した。
TMPS4−FLAGを抗原としてエイビーフロンティア(韓国)に依頼し、2匹のウサギに3回反復注射して多クローン性抗体血清を得た。これを再び抗原特異的親和度を用いて精製を行なって、TMPS4−FLAGに特異的に結合する多クローン性抗体を2mg/mlの濃度で1mlを収得した。前記収得した多クローン性抗体を非還元性条件で、10%SDS−PAGEで確認した。
<5−1>パニング(Panning)過程
実施例2で収得した精製されたTMPRSS4抗原(TMPS4−FLAGとTM−EK)各30μgをイムノソルブ(Immunosorb)チューブ(Nunc470319)に4mlのコーティング緩衝溶液[Na2CO3(sigma,S7795)1.59g、NaHCO3(sigma,S8875)2.93g、NaN3(sigma,S2002),0.2g]で4℃で16時間程度回転機でコーティングした後、室温で2時間の間PBSに溶解してスキムミルク[(BD,232100)−4%in 1XPBS]を用いて免疫チューブでブロッキングした。免疫チューブに実施例3で製造したファージライブラリー2mlを添加して室温で2時間の間反応させ、PBST(0.05%)で5回、PBSで2回洗浄した。洗浄後、特異的に結合したscFv−ファージのみ100mM TEA(Sigma T−0886)に溶離して、溶出したファージを大腸菌(XL1−Blue,stratagene,200249)に感染させて増幅した。一回目パニングで増幅されたファージを、PBST洗浄回数のみ増やして(2次:13回、3次:23回)同一な方法で2次及び3次パニングを行なった。
<5−2−1>パニング結果確認
1次から3次までパニングして氷らせておいた細胞ストックを5mlの2×YTCM、2%グルコース,5mM MgCl2培地にOD600=0.1になるように入れた後、37℃で2〜3時間(OD600=0.5〜0.7)培養した。以後、M1ヘルパーファージを感染させて2×YTCMK、5mM MgCl2、1mM IPTG培地に30℃で16時間の間培養した。培養細胞を遠心分離した後(4500rpm、15分、4℃)上澄み液(1次〜3次パニング ポリscFv−ファージ)を新しいチューブに移した。96ウェル免疫プレート(NUNC 439454)に二種類の抗原をウェル当り100ngずつ4℃で16時間程度コーティング緩衝溶液で処理してコーティングした後、PBSに溶解したスキムミルク(4%)を用いて各ウェルをブロッキングした。各ウェルにPBS−ツイーン20(0.05%)0.2mlで洗浄後、1次〜3次パニング ポリscFV−ファージを各ウェルに100μlずつ入れて常温で2時間の間反応させた。また、各ウェルにPBS−ツイーン20(0.05%)0.2mlを用いて4回洗浄した後、二次抗体である抗−M13−HRP(Amersham27−9421−01)を1:2000に希釈して室温で1時間の間反応した。PBS−ツイーン20(0.05%)0.2mlで洗浄した後、OPDタブレット(Sigmap8787−TAB)をPC緩衝溶液[C6H8O7.H2O(sigma,C0706)5.1g、Na2HPO4(sigma,S7907)7.3g]に溶解した基質溶液を作って、ウェル当り100μlずつ入れて10分間発色させた後、490nmで吸光度を分光光度計(MolecularDevice,米国)で測定した。
前記結合能が大きい多クローンファージ抗体群(3次パニング)から得たコロニーを、2×YTCM、2%グルコース、5mM MgCl2培地1mlを含んだ96ディープウェルプレート(バイオニア90030)で、37℃で16時間の間培養した。培養した細胞のOD600値が0.1になるように100〜200μlを取って1mlの2×YTCM、2%グルコース、5mM MgCl2培地に希釈した後、96ディープウェルプレートで37℃でOD600値が0.5〜0.7になるように2〜3時間培養した。M1ヘルパーファージをMOI値が1:20になるように感染させた後、2×YTCMK、5mM MgCl2、1mM IPTG培地に30℃で16時間培養した。培養した細胞を遠心分離(4500rpm、15分、4℃)した後、上澄み液を取って4%PEG6000と3%NaClを添加してよく溶解した後、氷で1時間の間反応させた。再び遠心分離(8000rpm、20分、4℃)した後、ペレットにPBSを添加して溶解した後、遠心分離(12000rpm、10分、4℃)して上澄み液を取って新しいチューブに移して、3次パニングして得た単一クローンscFv−ファージを4℃で保管した。
<5−3−1>フィンガープリンティングによる検証
1次選別された単一クローン50個の単一クローン細胞1μlとTaq.DNAポリメラーゼ(ゼンダックス5U/μl)0.2μl、50p/μlの正方向プライマー(pelB5、配列番号5:5’−CTAGATAACGAGGGCAAATCATG−3’)及び逆方向プライマー(cla3、配列番号6:5’−CGTCACCAATGAAACCATC−3’)0.2μl、10X緩衝溶液3μl、10mM dNTP mix0.6μl、蒸留水24.8μlを混合してコロニーPCR(iCycler iQ,BIO−RAD)を行なった。PCRプログラムの条件は、下記の表4のとおりである。
前記50種の単一ファージクローンを2×YTCM、2%グルコース、5mM MgCl2培地(5ml)に37℃で16時間の間培養した。培養した単一クローンからDNA精製キット(Nuclogen5112)を用いてDNAを収得した後、配列番号5のpelB5プライマーを用いた配列分析を依頼した(ソルゼント、韓国)。
前記抗原TMPRSS4−FLAGが各ウェルに0.1〜200ngずつローディングされた10%SDS−PAGEゲル2枚を100Vで2時間程度電気泳動した後、NC膜(millipore Cat.No.HATF00010)に85Vで2時間の間伝達した。以後、膜を4%スキムミルクin TBSTで4℃で一日晩中ブロッキングした。以後、実施例4で製造した多クローンα−TMPRSS4抗体(1mg/ml)を4%スキムミルクin TBSTに1:2000に希釈し、実施例5で選別された単一クローンファージ抗体の上澄み液を4%スキムミルクin TBSTに1:50に希釈して常温で1時間30分間反応させた。TBSTで10分に一回ずつ5回洗浄した後、それぞれ抗−マウスIgG−HRP(Sigma)と抗−M13−HRP(Amersham bioscience)を用いて、4%スキムミルクin TBSTに1:3000に希釈して常温で30分間反応させた後、同じ方法で洗浄した。洗浄後、現象(Intron,Cat.No.12145)して多クローン性抗体と単一ファージ抗体を検出することができる抗原タンパク質の量を比較した。
100mmプレートでTMPRSS4を過多発現することが知られた大腸癌細胞株(colo205;ATCC)細胞株をPBSで2回洗浄した後、無酵素PBS基盤−解離緩衝溶液(Gibco)を添加して、37℃で10分間培養した。以後、細胞をスクレイパーで集めた後、1300rpmで3分間遠心分離してペレットを2%PBF(2%FBS含有1XPBS)溶液で二度洗浄した後、2%PBF溶液を入れて再懸濁して≧5×105細胞の濃度で準備した。本発明の単一クローンファージ抗体100μlをPEGで10倍濃縮した後、1/2に希釈して前記細胞に混合した。氷で1時間の間反応させた後、1300rpmで4℃で3分間遠心分離して上澄み液を除去した。200μlの2%PBF溶液で3回洗浄した後、2%PBF溶液に1:200に希釈させた抗−g8p抗体(Abcam)100μlを入れてよく混合して、氷で30分間反応させた。1300rpmで4℃で3分間遠心分離した後、上澄み液を除去して200μlの2%PBF溶液で3回洗浄した。2%PBF溶液に1:1000で希釈させたFITC−連結された抗−マウスIgG 100μlをそれぞれの試料に混合した後、氷で30分間反応させた。追加で洗浄した後、500μlの2%PBF溶液を添加してFACS用チューブ(Falcon)に試料を移してボルテキシングした後、染色された細胞を流細胞分析機(Beckman Coulter)で分析した。毎実験時に単一ファージ抗体を同一な条件で試料に処理して内部対照群(internal control)に用いた。データは、WINMDI2.9ソフトウエア(//facs.scripps.edu/software.html,The Scripps Research Institute)を用いて分析した。
TMPRSS4に対する単一クローンファージ抗体をファージからIgG全長ベクターに転換するために、重鎖は単一クローンDNA 1μlと10pmole/μl表8の重鎖正方向プライマーと重鎖逆方向プライマー、10X緩衝溶液5μl、10mM dNTP mix 1μl、pfu DNA重合酵素(ソルゼント、2.5U/μl)0.5μl、蒸留水を混合して、コロニーPCR(iCycler iQ、BIO−RAD)を行なった。また、軽鎖は表8の軽鎖正方向及び逆方向プライマーを用いて同一な方法でコロニーPCRを行なった。
293E細胞(Invitrogen)にPEI(Cat#23966,Polysciences,Inc)40μgと全長形態抗体重鎖DNA10μg、軽鎖DNA10μgを入れて共同形質感染をして得た上澄み液をウエスタンブロットで確認した。対照群には、正常ヒトIgG(Jackson Lab)を用いた。
トリプシン(trypsin)(Gibco25300)でColo205細胞を採取した後、RPMI浸潤培養液(invasion media)(RPMI,10mM HEPES,0.5%BSA)で二度洗浄した後、浸潤培養液に細胞を2×106/mlの濃度に懸濁して準備した。精製されたTMPRSS4多クローン性抗体及び単一クローンT2−6C抗体を浸潤培養液にそれぞれ30及び75ng/50mlに希釈して細胞懸濁液50μlとTMPRSS4抗体溶液50μlを混合した後、37℃で二時間前培養した。24ウェルトランスウェルプレート(well transwell plate)(8μm pore size,costar3422)は、マトリゲル(BD354234)を1mg/mlで無血清培地(RPMI,10mM HEPES)に希釈してインサート(insert)の上側面に室温で一時間の間コーティングした。一時間経過後、インサートに残っているマトリゲルを除去して無血清培地で一度洗浄した。その後、5%FBSが添加されたRPMI浸潤培養液600μlをチャンバー(chamber)に入れた。消毒された鉗子(forceps)を用いてインサートを培養液が入っているチャンバーに入れた後、あらかじめ反応させておいた細胞と抗体の混合物をインサート中に100μl入れて、37℃/5%CO2で24時間の間培養した。マトリゲルを通過した浸潤された細胞を測定するために、インサートの上側面をPBSに湿らせた綿棒で拭いて3.7%パラホルムアルデヒド500μl(Sigma HT50)が入っているチャンバーにインサートを入れて、室温で30分間固定した。その後、1%クリスタルバイオレット(Sigma C3886)/100mM NaBorate(Sigma S9640)500μlに30分間染色して水で洗浄した後、乾燥させて顕微鏡で100倍の倍率で細胞をカウンティングした。
TMPRSS4を過発現することが知られたColo205細胞株及びTMPRSS4を低発現することが知られたSw480(ATCC,CCL−228)細胞株をトリプシンで採取した後、RPMI移動培養液(RPMI,10mM HEPES,0.5%BSA)で二度洗浄した後、8×105/mlの濃度に懸濁して準備した。細胞懸濁液50μlと三種類の濃度(0、1及び2μM)に希釈しておいた多クローンTMPS4抗体溶液、及び単一クローンT2−6C及びT2−6G抗体50μl(TMPRSS4抗体を移動培養液に希釈して1000ng/50μlに製造)をそれぞれ混ぜて37℃で二時間の間前培養した。24ウェルトランスウェルプレートは挿入下側面に0.05%ゼラチン(Sigma G1393)を用いて室温で一時間の間コーティングした。一時間経過後、インサートに残っているゼラチンを除去してPBSで一度洗浄した。前記過程が終わった後、5%FBSが添加されたRPMI移動培養液600μlをチャンバーに入れた。消毒された鉗子を用いてインサートをチャンバーに入れた後、あらかじめ反応させておいた細胞と抗体の混合物をインサート中に100μlを入れて、37℃/5%CO2で24時間の間培養した。細胞の移動を測定するために先にインサートの上側面をPBSに湿らせた綿棒で拭いて、3.7%パラホルムアルデヒド500μlが入っているチャンバーにインサートを入れて室温で30分間固定した。その後、1%クリスタルバイオレット/100mM NaBorate 500μlに30分間染色して水で洗浄した後、乾燥させて顕微鏡で100倍の倍率で細胞をカウンティングした。
トリプシンでColo205細胞を採取した後、2%FBSが添加されたRPMI培養液で二度洗浄した後、無血清培養液(RPMI,10mM HEPES)に細胞を2×105/mlで懸濁して準備した。精製されたTMPRSS4抗体を無血清培養液に250、500及び1000ng/40μlに希釈して細胞懸濁液50μlとTMPRSS4 T2−6C抗体溶液40μlを混ぜて37℃で二時間の間前培養した。反応を終えた細胞と抗体の混合物90μlに10μlのFBSを添加して、96ウェルプレートに100μlずつ入れて37℃/5%CO2で24、48及び72時間培養した。それぞれのタイムポイントに合わせてPreMix WST−1細胞増殖溶液(takara,MK400)を10μl添加して二時間の間37℃で反応させた後、VERSA maxマイクロプレートリーダー機で、440nmでサンプルの吸光度を測定した。
TMPRSS4に対する抗体の抗原に対する結合力をELISAで測定し、GraphPad PRISM4.0プログラムで分析した結果、結合定数KD値が約1.03×10−9Mと確認された。
配列番号2:TMPRSS4リバースプライマー
配列番号3:CMV-proFプライマー
配列番号4:NATJK-R4
配列番号5:pelB5
配列番号6:cla3
配列番号7:T1-11G VH CDR 1
配列番号8:T1-12C VH CDR 1
配列番号9:T1-9F VH CDR 1
配列番号10:T2-8F VH CDR 1
配列番号11:T2-12C VH CDR 1
配列番号12:T2-3A VH CDR 1
配列番号13:T2-7B VH CDR 1
配列番号14:T2-10E VH CDR 1
配列番号15:T2-6C VH CDR 1
配列番号16:T1-5G VH CDR 1
配列番号17:T2-6A VH CDR 1
配列番号18:T2-12A VH CDR 1
配列番号19:T1-11G VH CDR 2
配列番号20:T1-12C VH CDR 2
配列番号21:T1-9F VH CDR 2
配列番号22:T2-8F VH CDR 2
配列番号23:T2-12C VH CDR 2
配列番号24:T2-3A VH CDR 2
配列番号25:T2-7B VH CDR 2
配列番号26:T2-6G VH CDR 2
配列番号27:T2-10E VH CDR 2
配列番号28:T2-6C VH CDR 2
配列番号29:T1-5G VH CDR 2
配列番号30:T2-6A VH CDR 2
配列番号31:T2-12A VH CDR 2
配列番号32:T1-11G VH CDR 3
配列番号33:T1-12C VH CDR 3
配列番号34:T1-9F VH CDR 3
配列番号35:T2-8F VH CDR 3
配列番号36:T2-12C VH CDR 3
配列番号37:T2-3A VH CDR 3
配列番号38:T2-7B VH CDR 3
配列番号39:T2-6G VH CDR 3
配列番号40:T2-10E VH CDR 3
配列番号41:T2-6C VH CDR 3
配列番号42:T1-5G VH CDR 3
配列番号43:T2-6A VH CDR 3
配列番号44:T2-12A VH CDR 3
配列番号45:T1-11G重鎖
配列番号46:T2- 6A重鎖
配列番号47:T1-12C重鎖
配列番号48:T1- 9F重鎖
配列番号49:T2-12F重鎖
配列番号50:T2- 8F重鎖
配列番号51:T2-12A重鎖
配列番号52:T2-12C重鎖
配列番号53:T2- 3A重鎖
配列番号54:T2- 7B重鎖
配列番号55:T2- 6G重鎖
配列番号56:T2-10E重鎖
配列番号57:T2- 6C重鎖
配列番号58:T1-11G VL CDR 1
配列番号59:T1-12C VL CDR 1
配列番号60:T1-9F VL CDR 1
配列番号61:T2-8F VL CDR 1
配列番号62:T2-12C VL CDR 1
配列番号63:T2-3A VL CDR 1
配列番号64:T2-7B VL CDR 1
配列番号65:T2-6G VL CDR 1
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配列番号71:T1-11G VL CDR 2
配列番号72:T1-12C VL CDR 2
配列番号73:T1-9F VL CDR 2
配列番号74:T2-8F VL CDR 2
配列番号75:T2-12C VL CDR 2
配列番号76:T2-3A VL CDR 2
配列番号77:T2-7B VL CDR 2
配列番号78:T2-6G VL CDR 2
配列番号79:T2-10E VL CDR 2
配列番号80:T2-6C VL CDR 2
配列番号81:T1-5G VL CDR 2
配列番号82:T2-6A VL CDR 2
配列番号83:T2-12A VL CDR 2
配列番号84:T1-11G VL CDR 3
配列番号85:T1-12C VL CDR 3
配列番号86:T1-9F VL CDR 3
配列番号87:T2-8F VL CDR 3
配列番号88:T2-12C VL CDR 3
配列番号89:T2-3A VL CDR 3
配列番号90:T2-7B VL CDR 3
配列番号91:T2-6G VL CDR 3
配列番号92:T2-10E VL CDR 3
配列番号93:T2-6C VL CDR 3
配列番号94:T1-5G VL CDR 3
配列番号95:T2-6A VL CDR 3
配列番号96:T2-12A VL CDR 3
配列番号97:T1-11G軽鎖
配列番号98:T2- 6A軽鎖
配列番号99:T1-12C軽鎖
配列番号100:T1- 9F軽鎖
配列番号101:T2-12F軽鎖
配列番号102:T2- 8F軽鎖
配列番号103:T2-12A軽鎖
配列番号104:T2-12C軽鎖
配列番号105:T2- 3A軽鎖
配列番号106:T2- 7B軽鎖
配列番号107:T2- 6G軽鎖
配列番号108:T2-10E軽鎖
配列番号109:T2- 6C軽鎖
配列番号110:NATVH1-2
配列番号111:NATVH1-2
配列番号112:NATVH3-2
配列番号113:NATVH3-2
配列番号114:NATJH-ALL
配列番号115:NATVL4
配列番号116:NATVK1-1
配列番号117:NATVL4
配列番号118:NATVK3
配列番号119:NATJL1-R
配列番号120:NATJK-R5
配列番号121:NATJL2-R
Claims (12)
- 下記の1)又は2)のいずれか一つを含むTMPRSS4に特異的なヒト抗体:
1)配列番号57のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域(VH)を含む重鎖;及び
配列番号109のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域(VL)を含む軽鎖、並びに
2)配列番号55のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域(VH)を含む重鎖;及び
配列番号107のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域(VL)を含む軽鎖。 - 請求項1に記載のヒト抗体を含む癌の予防及び治療用薬学的組成物。
- 前記の癌が、大腸癌、肺癌、肝臓癌、膵臓癌、胃癌及び悪性甲状腺腫瘍からなる群から選択されることを特徴とする、請求項2に記載の薬学的組成物。
- 化学的療法と並行して投与することを特徴とする、請求項2又は3に記載の薬学的組成物。
- 請求項1に記載のヒト抗体および治療用放射性同位元素を含む癌の放射線免疫治療用薬学的組成物。
- 前記の癌が、大腸癌、肺癌、肝臓癌、膵臓癌、胃癌及び悪性甲状腺腫瘍からなる群から選択されることを特徴とする、請求項5に記載の薬学的組成物。
- 前記治療用放射性同位元素が、3H、11C、14C、18F、64Cu、76Br、86Y、99mTc、111In、123I、177Lu及びこれらの混合物及び組み合わせからなる群から選択されることを特徴とする、請求項5又は6に記載の薬学的組成物。
- 前記治療用放射性同位元素が、ヒト抗体と結合されるかヒト抗体が結合された運搬体に含まれることを特徴とする、請求項5〜7のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
- 請求項1に記載のヒト抗体の診断的有効量を含む癌の検出用組成物。
- 前記の癌が、大腸癌、肺癌、肝臓癌、膵臓癌、胃癌及び悪性甲状腺腫瘍からなる群から選択されることを特徴とする、請求項9に記載の癌の検出用組成物。
- 前記ヒト抗体が、治療用放射線同位元素に直接的にまたは間接的に結合または連結されたことを特徴とする、請求項9又は10に記載の癌の検出用組成物。
- 前記治療用放射性同位元素が、3H、11C、14C、18F、64Cu、76Br、86Y、99mTc、111In、123I、177Lu及びこれらの混合物及び組み合わせからなる群から選択されることを特徴とする、請求項9〜11のいずれか一項に記載の癌の検出用組成物。
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