JP5366348B2 - 高ｄｈａ含有餌生物を用いた水生生物の飼育 - Google Patents

Description

本発明は養殖分野に関し、不飽和脂肪酸（HUFA）、特にドコサヘキサエン酸（DHA）を豊富に含んだ餌生物を用いた水生生物の養殖飼育方法を提供し、幼魚の段階での高生存率を得るためのものである。

サケ、マス、オヒョウ、およびウナギのように、消費者の需要が高いシーフード類の消費は増加の一途をたどり、そして、この需要の高さと有限な天然資源とのために、そのような種を養殖する費用効率の高い養殖方法を開発することに多くの努力が費やされている。特に深刻な問題は、養殖されるべき魚類の孵化幼生の生存率を確実に高めることである。

養殖産業の発展にはいくつかの問題に取り組む必要があり、最も重大な問題の１つは、適切な栄養価の餌を幼生に与えるための生きた餌生物を供給する困難さである。自然界では幼生の魚類は、バランスの取れた栄養物を与える植物プランクトンの餌生物を混合した集団を食べ尽くしている。しかしながら、養殖の需要を満たす十分な量の植物プランクトンを捕集することは実現不可能である。その代わりとして、餌生物のうち選択された種は、特にクルマムシおよびアルテミア類では現在培養され、そして餌として使用されている。

発明が解決しようとする課題

しかしながら、一般に、そのように人工的に培養した餌生物は、適量のタンパク質およびエネルギーを与えるけれども、一定のＨＵＦＡの要件、特に幼生の最適な生存、成長、および発達に必須のＤＨＡおよびＥＰＡの要件を満たすに足りない脂質組成物を有する。詳細には、高含有量のＤＨＡが必要であること、および、餌生物中のＤＨＡとＥＰＡ（エイコサベンタエン酸）との比は少なくとも１：１、好ましくは少なくとも２：１であるべきであることが示されている。

現在、この問題は、これらの必須の脂肪酸に関して、餌生物に栄養価を高めさせるのを許容する高濃度組成物の存在下で餌生物を培養することによって、取り組まれ続けている。しかしながら、販売名Ｓｅｌｃｏ（商標登録）で売られている乳濁液製品のように、その目的のために現在利用可能な市販の組成物は、ＤＨＡ含有量が相対的に低い点、および／または、ＤＨＡ：ＥＰＡの比が十分に高くないという点で上記の要件を満たしていない。このような組成物を使用することによって、全脂質含有最中３から５％分のDHA含有量が高められたアルテミアが報告され（McEvoy et al. Aquaculture 163(1998) 237-250）、そのような組成物を与えられた魚の生存率が１２から１５％であったと報告されている（McEvoy et al. supra；Navarro et al. J. Fish Biol. ４３（１９９３）５０３−５１５）。この文脈では、生存率は、変態を経て最初に餌を食べた時からの生存パーセントとして定義されている。費用効果の高い養殖生産のために、５０％、好適には、それ以上の幼生の生存率が得られるべきである。

ＷＯ９９／３７１６６は、海藻油抽出における廃棄物の流れから得られたＨＵＦＡの乾燥セッケン粉末の使用に基づいて、魚類幼生に必須の栄養分を有する、生きた餌生物を豊富にする方法を開示している。乾燥重量で約２．７％のアルテミアのＤＨＡ富化レベルが開示されているが、養殖での使用や幼魚の生存への効能については開示されていない。

養殖で使用する他の材料はＷＯ９９／０６５８５に開示されている。例として、２４重量％のＤＨＡが開示されているが、リン脂質の含有量が開示されていない。しかしながら、その材料は、遊離脂肪酸の高い比率（３２〜３７重量％）と、非脂質材料の高い含有量とを含み、それにより餌動物の脂質取り込み効率が減少されることもある。一般に、遊離脂肪酸の高い含有量は、幼生および稚魚に有害であると考えられている。

最後に記述された２つの材料はいずれも魚類ベースではなく、魚類内で発見された多くのＨＵＦＡを、たとえば若魚に望ましいＥＰＡおよび他ｎ−３脂肪酸を欠いている。

Sargent et al. （Aquaculture 179 (1999) 217-229）による最近のレビューでは、ＨＵＦＡに関しての要件に加えて、魚類幼生がリン脂質の餌要件を持つことが強調され、そして魚類幼生の理想的な餌が、卵の黄身と類似する組成物を備えた餌であることが強調されている。この著者によれば、魚卵の黄身は、約１７重量％のＤＨＡと約９重量％のＥＰＡとを含んだ約１０重量％（乾燥重量で）のリン脂質を含有する。この著者は、現在利用可能な材料から商業的規模にそのような餌を構築する方法に関して問題が残されているとレビューの中で結んでいる。

HUFAやリン脂質に関して魚の卵黄に非常に類似した組成物を含有する、栄養価を高められた養殖用餌生物を提供することが可能であることが分かっている。本発明による餌生物を用いることにより、例えばオヒョウ等の水生生物の幼生の理想的な生存、成長、色素沈着、および形態形成を確実にすることが可能である。ここで示されるように、本発明により、すでに開示されているものよりも大幅に高い幼生期における生存率や、高品質特性がオヒョウなどの魚において得られ、多くの需要の高い種の養殖飼育がより経済的になり、さらには商業的に採算のあうものとすることが可能となる。

課題を解決するための手段

本発明では水生生物の養殖方法を提供し、概方法には、少なくとも幼生期および/または幼生後の期間の水生生物に、全脂質成分中少なくとも１２重量％のDHAを含んだ餌生物を給餌することを含んでいる。

本発明による水生生物の飼育方法によれば、少なくとも幼生期および/または幼生後の期間の水生生物に、全脂質成分中少なくとも１２重量％のDHA、好ましくは少なくとも１５重量％、さらには少なくとも１７重量％、さらに好ましくは少なくとも２０重量％、さらには少なくとも２５重量％のDHAを含んだ餌生物を給餌することを含んでいる。

好適な実施形態においては、餌生物は相当量、たとえば全脂質含有量の５から３５重量％の範囲の、さらには５から２５重量％の範囲、１０から２０重量％の範囲、のリン脂質をも含んでいる。

さらに、魚類の幼生および稚魚に望ましい、例えばEPAや魚類に特徴的なｎ−３HUFA（例えば１８：３、１８：４、２０：４、２２：５など）などのその他のHUFAが餌生物により、与えられることが好ましい。

本発明者らは、好ましくは魚類ベースの原料によるDHA高含有物質を富化することによって、本発明におけるそのような餌生物が得られることを見出した。

遊離脂肪酸は大量だと魚類の幼生および稚魚には有害であると一般的に認識されているので、餌生物には遊離脂肪酸を過度に多く含まないことが好ましい。本発明によれば、遊離脂肪酸は餌生物の全脂質含有量の約１０％以下であることが好ましい。

この文脈では、表現「餌生物」は、養殖施設で生産される海洋種の幼生用に生きた餌として使用可能な何らかの海洋生物をいう。そのような餌生物の一般的なレビューは、１９９５年にFAOから発行され、Lavens & Sorgeloos (eds.)「Manual on the production and use of live food for aquaculture（養殖用の生き餌の生産および使用のマニュアル）」の中に見出され、それは本明細書中で参考として援用されている。従って、殆ど一般に使用される餌生物は微細藻類、クルマムシ、アルテミア、および、動物プランクトンのうちの幾つかのクラスおよび属を含み、動物プランクトンはカイアシ類、枝角類、線虫類、およびトロコフォアの幼生を含んでいる。

本発明で使用される用語「水生生物」は、最も広義で理解すべきであり、サケ、マス、コイ、バス、タイ、カレイ、スズキ、シタビラメ、サバヒー、ボラ、ハタ、クロダイ、オヒョウ、ヒラメ、ターボット、およびアンコウなどの魚類、エビ、ロブスター、ザリガニ、およびカニなどの甲殻類、二枚貝などの軟体動物といった淡水種および海洋種を含むものである。

これらの水生生物における共通の特徴は、生活環が非常に特定な栄養要件を有する１つ以上の幼生期を含むこと、従ってこの要件を満たす、生きた餌生物を提供することが首尾の良い養殖生産のための必須の要素であることである。上記のように、１つのそのような特定の要件は、必須脂肪酸ＤＨＡの含有量が高いことであり、用語「必須」とは、餌生物がそのような化合物のデノボ合成できないことを意味する。本発明の組成物は、ＤＨＡ含有量が少なくとも３０重量％、たとえば、約３０〜３５重量％または約３５〜４０重量％の範囲、好適には少なくとも４０重量％、たとえば、少なくとも６０重量％を含めて少なくとも５０重量％を有する。

本発明の特定の実施形態はオヒョウ類の飼育に関するものであるが、本発明は、上述のその他の水生生物の飼育をも包含するものである。

本発明者らの知るところでは、本発明によって得られる第１の利点は、オヒョウその他の類において、今までの方法によって得られたよりも相当に高い幼生魚の生存率が得られるということである。付帯の実施例に示すように、本発明によれば、大規模養殖においての６５から８０％さらにはそれ以上の、幼生期のオヒョウの生存率を着実に得ることができ、例えば適切な色素沈着などのその他の品質特性にも優れている。

本発明の有効な実施形態によれば、幼生期の終了時点で少なくとも３０％の幼魚が生存している、さらに好ましくは５０％さらには６０％、さらにいっそう好ましくは７０％さらには８０％が生存するように、例えば幼生期のオヒョウなどの水生生物に餌生物が与えられる。

養殖された成魚への適切な色素沈着は、市場価値という点で重要な要素である。通常のオヒョウは目に見える側が色づいており、目に見えない側は白く、色づいてはいない。本発明の好適な実施形態によれば、少なくとも７０％のオヒョウの若魚（変態したばかりの幼魚）に適切な色素沈着が見られる。好ましくは８０％、さらに好ましくは９０％さらに９５％、さらにほぼ全ての若魚に適切な色素沈着が見られることが好ましい。

一実施形態においては、本発明により、必ずしも消費目的で育てられていない水生生物、例えば鑑賞魚や水槽魚類など、の飼育方法が提供される。

本発明によると、水生生物に与えられる餌生物は、培養され養殖に用いられる全ての餌生物から選択することが可能であり、有効な実施形態においては、そのような餌生物はアルテミア、かいあし類、ミジンコ類、タマミジンコ類などの甲殻類、シオミズツボワムシ、海産ワムシ、およびルーベンスワムシを含んだワムシ類、さらには腕足類などである。

アルテミア類を用いた実施形態が極めて有効である。アルテミア類は、幼生期、中幼生期（metanaupliar）、さらには成体期において、本発明による方法に従って培養され、さらには使用され得る。

本発明の一実施形態によると、水生生物は海洋環境で飼育される。ここでは海洋環境とは、海水、もしくは塩化ナトリウムなどの塩分を付加された水生の生活環境を擬似した海水を含む、水生の生活環境を示す。

本発明によると、餌生物は適当な形状（例えば餌生物からなる組成物として）で水生生物に与えられる。好適な実施形態においては、前記組成の生物は全脂質含有量の少なくとも２０重量％のDHAを含有しており、さらに好ましくは全脂質含有量の２５重量％、さらには少なくとも３０重量％のDHAを含有している。

本発明の実施形態によると、組成物は全脂質含有量の少なくとも１２％のDHAを含む水生魚の餌生物からなり、そのような組成物は少なくとも５０重量％の水相を含んでいる。一実施形態においては、組成物の水相は、少なくとも０．５重量％の塩化ナトリウムを含む。

他の実施形態によると、概組成物は、水含有量が５０重量％以下、さらに多くとも４０重量％、さらには多くとも２５重量％、さらには多くとも５重量％、というように部分的に乾燥している。そのような組成物は粉状、細粒状、さらにはフレーク状などの適切な形状をとることが可能である。

上記から推論されるように、概組成物によるDHA供給量を大きくするには、餌生物の全脂質含有量を、例えば乾燥重量で少なくとも２０％、さらには乾燥重量で少なくとも２５％、さらに好ましくは乾燥重量で少なくとも３０％などに、大きくする必要がある
実例１：魚類幼生の餌生物用に栄養価の高い組成物の調整
アルテミア類のような餌生物用の組成物を以下の成分の組合せおよび混合によって調製した。

リン脂質含有率の高い成分は以下のように調製される。

挽いたイカ（１５０ｇｋ）を３００Ｌのイソプロパノールに加え、その混合物を４〜６時間いくらか強く撹拌し、一晩静置した。その後、その混合物を濾過し、３００Ｌのヘキサンを濾過物に加えて混合した。これにより、分離可能な２相が得られた。主にヘキサンおよびイソプロパノールからなる上相を分離し、５０Ｌの回転エバポレーターを使用して真空中で数回蒸留し、約６５％のリン脂質の含有量と約４０重量％の全DHA含有量とを有する黄褐色ワックスとして２．２ｋｇのリン脂質の高含有分留を生じた。

組成物中のＤＨＡの高含有成分として使用されたＴＧ４０１０の材料は、ＤＨＡ用に含有量を高くされた魚油ベースの材料から得られ、それは４０重量％のＤＨＡ、約１０重量％のＥＰＡ、および、約１０重量％の他のｎ−３ＨＵＦＡから成る。脂肪酸は大部分トリグリセリドの形態であり、その材料の脂肪酸の含有量は非常に少ない。ＤＨＡの高含有成分の供給源として、たとえば、約５０重量％のＤＨＡ含有量と、酵素によってＤＨＡが非常に豊富な合成トリグリセリドとを有するＴＧ５０１０（クローダ（Croda）からも）として、他の材料を試験した。

実例２：水生生物飼育のための高栄養アルテミアの培養
アルテミアシストを最適な条件下（海水、２７〜２９℃、約ｐＨ８、酸素含有量４ｍｇ／Ｌ以上）で孵化した。新規に孵化したノープリウスアルテミアをリンスし、２５０Ｌのタンクに入れて２００、０００／Ｌの密度を与えた。温度を２５〜２８℃、酸素含有量を５〜６ｍｇ／Ｌに保持し、炭酸水素ナトリウム（２ｇ／Ｌ）を使ってｐＨを７．５に緩衝液で処理した。タンクの底で貫通したホースを介して大気中の空気を通すことより、タンクを空気に晒した。実例４に記載したような栄養価の高い組成物をタンクに加えて濃度を０．２ｇ／Ｌとし、１０時間後に同量を加えた。栄養価の高い組成物を第１に加えてから２４時間後に、アルテミアは次の脂質組成物を有する（３１重量％（乾燥重量）の脂質）。最も左側の行内の数字は炭素数および脂肪成分中の脂肪酸における2重結合の数を示しており、DHAは２２：６、EPAは２０：５である。

このようにして得たアルテミアは、本発明に係るＤＨＡの総濃度が非常に高くなるので、本発明による、オヒョウ幼生のような魚類幼生の給餌に特に適切である。

実例３：代替富化組成物を用いたアルテミアの培養
新規に孵化されたアルテミアを、実例２で記載されたのと同一の条件下で２５０Ｌのタンクに入れた。アルテミアを、２重量％のクレモフォアＡ２５乳化剤によって混合された合成物で給餌した。脂質の組成物は、５０重量％の実例１のリン脂質の組成物と、２５重量％の「ＤＨＡ−８０」、（米国特許第５，６０４，１１９号に記載された）カンディタアンタークティカからリパーゼを使用してグリセロールおよびＤＨＡ脂肪酸から酵素的に合成され、本質的には８０重量％のＤＨＡから成るトリグリセリドと、２５重量％のＬｙｓｉ−２２（ＴＭ）（Lysi hf、 Iceland）、および、２２重量％のＤＨＡを含んだ魚油とを含んでいた。タンクに餌用組成物を加えて濃度を０．２ｇ／Ｌとし、１２時間後に同量を加えた。栄養価に富んだ組成物を最初に加えてから２４時間後に、アルテミアは以下の脂質組成物を有する（３４％ｄｗの脂質）。

得られたアルテミアは、本発明に係るＤＨＡの総濃度（９．５重量％）のみならず、他の魚類に特徴的なｎ−３ＨＵＦＡの総濃度が非常に高くなるので、オヒョウ幼生のような魚類幼生の給餌に特に適している。

実例４：クルマムシ（Brachionus plichatilis）を培養するための栄養価の高い組成物の使用
実例２に記載されたのと類似の条件下でクルマムシを育て、イソグリシスプランクトンおよび酵母で養い、約５０重量％のDHAを含むクローダ４０、クローダ５０の代わりにクローダ５０を使用することを除いて、実例４に記載されたように２７℃で６時間培養した。ＴＧ５０１０は約５０重量％のＤＨＡを含んでいる。クルマムシは以下の脂質組成物（２２％ｄｗの脂質）を有していた。

得られたクルマムシは非常に高いDHA含有率とリン脂質含有率とを有しており、したがって、本発明による水生生物の飼育に極めて適している。

実例５：オヒョウを養殖するためのＨＵＦＡおよびリン脂質の豊富なアルテミアの使用
オヒョウ幼生に、最初に２３０〜２５０°ｄ（「°ｄ」：孵化、温度（℃）と日数との積の記号）で給餌した。３．５または７ｍ³のいずれかの循環式養殖タンクを使用した。幼生を１１℃の養殖温度および３００〜５００ｌｕｘの光量まで段階的に順応させた。幼生にアルテミアを１日に２回、朝および午後遅くに給餌した。アルテミアは、朝の給餌２４時間前に、栄養価の高い組成物でその栄養価を高められ、それから、午後の給餌のために更に７〜８時間、１３〜１５℃で貯蔵された。アルテミアの良好な消化を可能にするために、餌の配給量が調整された。微小藻類（イソグリシス類）を養殖水に添加してストレスを減少させ、最大摂取速度を促進した。タンクの中央で僅かな空気に晒されると、水質および餌粒子を均質化してしまった。幼生を分散させるために、流入口を用いて僅かな循環の流れが必要とされた。水の交換が、最初には２４時間毎に１．２回から最後には２４時間ごとに３．３回に増加させられた。幼生養殖タンクは毎日清潔にされた。

給餌開始から幼生期の終わりまでに１つのタンクでの８０％以上の生存率が認められ（「ミルガイ」（顎が変形した幼生）を除いて９０％）、頻繁に６５〜７５％の生存率が認められた。平均約８０％の稚魚で正確な色素沈着が認められたが、１つのタンクでは９６％までの正確な色素沈着が認められた。正確な色素沈着は、眼のある側面での正常な色素沈着と、眼のない側面での不存在の色素沈着として定義されている。平均で稚魚の約６５％であるが１つのタンク内で約８０％までが、正確な眼の移動を示し、すなわち、眼のある側面に両眼を有していた。継続中の実験により、更に高い平均生存率および色素沈着率を得ることが示されている。

この結果は、本発明に係るＤＨＡの高含有の餌生物が、オヒョウのような水生生物を高生存率かつ高品質で養殖することに特に適していることを示している。

Claims (27)

1. 水生生物の養殖方法であって、前記方法は、水生生物の幼生期および／または幼生後の少なくとも一部の期間に、アルテミア類、かいあし類、ミジンコ類、およびタマミジンコ類を含む甲殻類、ワムシ類、および腕足動物類からなる群から選択される餌生物を給餌することを備え、前記餌生物は、全脂質含有量中のＤＨＡ含有量が少なくとも１５重量％であり、且つ１８：３、１８：４、２０：４、および２２：５脂肪酸を含むｎ−３ＨＵＦＡを供給し、前記餌生物は全脂質成分中５〜３５重量％の範囲のリン脂質を含み、乾燥重量で少なくとも２０重量％を占める全脂質成分を有することを特徴とする水生生物の養殖方法。
   
2. 請求項１に記載の方法であって、前記餌生物の全脂質成分中のＤＨＡ含有量が、少なくとも２０重量％であることを特徴とする方法。
   
3. 請求項１に記載の方法であって、前記餌生物の全脂質成分中のＤＨＡ含有量が、少なくとも２５重量％であることを特徴とする方法。
   
4. 請求項２に記載の方法であって、前記餌生物がアルテミア類であることを特徴とする方法。
   
5. 請求項４に記載の方法であって、前記アルテミア類を幼生期、中幼生期、または成体期に水性の生活環境で培養することを特徴とする方法。
   
6. 請求項１に記載の方法であって、前記餌生物がワムシ類または腕足動物類であることを特徴とする方法。
   
7. 請求項６に記載の方法であって、前記ワムシ類が、シオミズツボワムシ、海産ワムシ、およびルーベンスワムシを含む群から選択されることを特徴とする方法。
   
8. 請求項１に記載の方法であって、前記養殖される水生生物がオヒョウ類であることを特徴とする方法。
   
9. 請求項８に記載の方法であって、前記餌生物を幼生期のオヒョウ類に給餌することを特徴とする方法。
   
10. 請求項１に記載の方法であって、前記水生生物が、サケ、マス、コイ、バス、タイ、ターボット、シタビラメ、サバヒー、ボラ、ハタ、ヒラメ、スズキ、タラ、ハドック、ヒラメ、ウナギなどの魚類；エビ、ロブスター、ザリガニ、およびカニなどの甲殻類；二枚貝などの軟体動物からなる群から選択されることを特徴とする方法。
    
11. 請求項１に記載の方法であって、前記水生生物が、観賞魚類であることを特徴とする方法。
    
12. 請求項１に記載の方法であって、前記水生生物が海洋環境で養殖されることを特徴とする方法。
    
13. 請求項１に記載の方法であって、前記餌生物の全脂質成分中のＤＨＡ含有量が少なくとも２５重量％であることを特徴とする方法。
    
14. 請求項１に記載の方法であって、前記餌生物からなる餌が少なくとも５０重量％の水相を含むことを特徴とする方法。
    
15. 請求項１４に記載の方法であって、前記水相が少なくとも０．５重量％のＮａＣｌを含むことを特徴とする方法。
    
16. 請求項１に記載の方法であって、前記餌生物が、含水量が５０重量％未満である組成物として供給されることを特徴とする方法。
    
17. 請求項１６に記載の方法であって、前記組成物の含水量が１０重量％以下であることを特徴とする方法。
    
18. 請求項１６に記載の方法であって、前記組成物が、粉末、顆粒、およびフレークからなる群から選択される形態であることを特徴とする方法。
    
19. 水生生物を養殖するための組成物であって、前記組成物はアルテミア類、かいあし類、ミジンコ類、およびタマミジンコ類を含む甲殻類、ワムシ類、および腕足動物類からなる群から選択される餌生物を含み、前記餌生物は全脂質含有量中のＤＨＡ含有量が少なくとも１５重量％であり、且つ１８：３、１８：４、２０：４、および２２：５脂肪酸を含むｎ−３ＨＵＦＡを供給し、前記餌生物は全脂質成分中５〜３５重量％の範囲のリン脂質を含み、乾燥重量で少なくとも２０重量％を占める全脂質成分を有することを特徴とする組成物。
    
20. 請求項１９に記載の組成物であって、前記餌生物の全脂質成分中のＤＨＡ含有量が少なくとも２０重量％であることを特徴とする組成物。
    
21. 請求項１９に記載の組成物であって、前記餌生物が幼生期、中幼生期、または成体期に水性の生活環境で培養されたアルテミア類であることを特徴とする組成物。
    
22. 請求項１９に記載の組成物であって、前記餌生物の全脂質成分中のＤＨＡ含有量が少なくとも２５重量％であることを特徴とする組成物。
    
23. 請求項１９に記載の組成物であって、少なくとも５０重量％の水相を含むことを特徴とする組成物。
    
24. 請求項１９に記載の組成物であって、少なくとも０．５重量％のＮａＣｌを含むことを特徴とする組成物。
    
25. 請求項１９に記載の組成物であって、前記組成物の含水量が５０重量％未満であることを特徴とする組成物。
    
26. 請求項２５に記載の組成物であって、前記組成物の含水量が１０重量％以下であることを特徴とする組成物。
    
27. 請求項１９に記載の組成物であって、前記組成物は粉末、顆粒、およびフレークからなる群から選択される形態であることを特徴とする組成物。