JP5313201B2

JP5313201B2 - 消耗性疾患の予防または治療用薬剤

Info

Publication number: JP5313201B2
Application number: JP2010102400A
Authority: JP
Inventors: ▲かん▼ 欽林
Original assignee: 杏輝天力（杭州）藥業有限公司
Priority date: 2009-05-02
Filing date: 2010-04-27
Publication date: 2013-10-09
Anticipated expiration: 2030-04-27
Also published as: CN101874807A; EP2246047B1; KR101140753B1; US20100279992A1; CN101874807B; EP2246047A1; US8658629B2; KR20100119845A; JP2010260859A; WO2010127557A1

Description

本発明は、消耗性疾患を予防および／または治療するための薬剤または薬剤組成物に関する。詳細には、本発明は、悪液質や拒食症等の消耗性疾患、特に癌によって引き起こされる悪液質（癌悪液質）を予防および／または治療するための薬剤または薬剤組成物に関する。

悪液質は、健康によくない疲労状態であり、一般的に、内分泌系や免疫系の病気や変化からの拒食症によって生じ、これにより、体が消耗したり、筋肉や内臓タンパク質が減少したり、最終的には体重が減少する。

悪液質は、慢性疾患の患者または救急患者で見受けられる症状である。特に、癌患者の中でも、胃癌や膵臓癌の患者では、約７０％の患者でこの症状を発症するであろう。癌の末期では、約８０％の患者が、癌の種類にかからわず、悪液質を発症するであろう。悪液質は、たとえ、食べ物の量を増やして、患者の栄養素の摂取量を増やしても、患者の体重の低下を防止したりあるいは終わらせる方法がないという特徴がある。ホルモン食欲増進剤(hormonal appetite enhancer)（メゲストロール、酢酸メドロキシプロゲステロンなど）が、一般的に治療に使用される。しかし、このような処置では、体重が一時的増加する（水や脂肪が増加するのみである）が、体筋は増加せず、活動能や身体活動は改善されない人もいる。逆に、血栓、浮腫、出血、高血糖症や高血圧症などの、薬の副作用が見受けられることがある。

異化亢進（catabolic wasting）または悪液質は、自然的に進行する骨格筋および脂肪の消費、栄養の補給を増加させているにも関らず体重が減少してしまう難治性の体重減少、安静時エネルギー消費量（ＲＥＥ）の増加、タンパク質合成の減少、炭水化物代謝変化（Coriサイクル活性の増加）、タンパク質溶媒(protein solvent)によるＡＴＰ−ユビキチン依存性プロテアソーム経路の過剰な異化、および脂肪溶媒(adipose solvent)による脂肪組織の過剰な異化に特徴付けられる症候群である（非特許文献１）。一般的に、患者は、少なくとも５％または５ポンドの体重減少が見られるまでは悪液質と診断されない。癌患者の約半分が、一定レベルで異化亢進(catabolic wasting)を経験し、肺、膵臓および胃腸悪性疾患の症例で高い発病率が見られる（非特許文献２）。かかる症候群は、ＡＩＤＳなどの免疫不全症の患者や細菌性・寄生虫性疾患、リウマチ性関節炎ならびに腸、肝臓、肺および心臓に関連する慢性疾患の患者で見られる。悪液質はまた、拒食症に関連し、老化の状況あるいは身体の損傷または火傷の結果となりうる。悪液質症候群は、患者の機能的能力や生活の質を低くし、薬効(potent situation)を低下させ、薬剤耐性を抑制する。悪液質のレベルは、患者の寿命に反比例して、それは、大抵、予後不良を意味する。近年では、高齢・障害に関連する疾患は、健康管理において、大きな問題となってきている。

拒食症（食欲不振の医学的用語）は、多くの悪性疾患を悪化させ、癌、感染症、慢性臓器不全および心的外傷を有する患者においてよく見られる。拒食症は、カロリー摂取の低下や栄養失調を引き起こすという点で、重篤な症候群である。拒食症の症状としては、妊娠期間（gestation）の短縮、嗅覚の低下、早期の満腹感、空腹感の低下、完全なる食物嫌悪や吐き気があり、嘔吐も見られることがある。拒食症の原因はよく分かっておらず、効果的な治療として使用できる選択肢が限られている。ある研究によれば、ホルモン、社会的要因および心理的要因が、この症候群の開始と進行の重要な要因なのではないかと言及されている。

悪液質は通常（実際）癌と関連しているものの、悪液質の開始と、腫瘍のサイズ、病期、悪性疾患の型と期間と、の一定の関係は、明確になっていない。癌悪液質は、大抵、カロリー摂取の減少、安静時エネルギー消費量の増加、タンパク質、脂肪および炭水化物の代謝性変化に関連している。例えば、炭水化物の明らかな異常としては、総グルコース変換（率）の増加、グルコース新生の増加、耐糖能異常および高血糖症がある。脂肪溶媒(fat solvent)の増加、遊離脂肪酸およびグリセロールの変換（率）の増加、脂質異常症ならびにリポタンパク質リパーゼ活性の減少が一般的に見られる。悪液質に関連する体重減少は、体脂肪貯蔵損失によるものであるだけでなく、身体のタンパク質総重量の損失および広範的な骨格筋消耗にも起因すると考えられる。上記症候群の悪化の重要因子は、タンパク質変換（率）の増加およびアミノ酸酸化の調節障害にある可能性がある。さらに、催炎症性(pro-inflammatory)サイトカイン（例えば、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）、インターロイキン−１、インターロイキン−６およびγ−インターフェロン）、急性期タンパク質（例えば、Ｃ反応性タンパク質）ならびに特有のプロスタグランジンのような癌に関連して生産される特有の主たる影響要因は、癌悪液質に関連しているようである。

一方、漢方薬において、高齢者は毎日ポリア本草薬（Ｐｏｒｉａｇａｌｅｎｉｃａｌ）を飲むことが推奨され、それは、老化を遅らせ、病気になりにくくなり、寿命を延ばすと言われている。

本願発明者は、特許文献１において、人体で免疫を増強する薬剤組成物を開示しており、かかる薬剤組成物は、潜在的成分（有効成分）としてラノスタン化合物を含む。かかる組成物は、免疫を増強させることができ、ウイルス感染症の予防および治療に有効であることが記載されている。一方で、ポリア抽出物およびこれから精製されたラノスタン／ラノスタン化合物は、免疫に阻害効果を示し、ＩｇＥ−介在性アレルギー（喘息）の予防および治療に用いられる。かかる阻害効果は、特許文献２および特許文献３に開示されている。これらの公報は、ポリア抽出物およびラノスタン／ラノスタン化合物が免疫を調節できることを示唆している。

欧州特許出願公開第１５３５６１９号明細書米国特許出願公開第２００９−０３１８３９９号明細書国際公開第２００９／１５５７３０号パンフレット

ＢｏｄｙＪＪ，ＣｕｒｒＯｐｉｎＯｎｃｏｌ１１：２５５−６０，１９９９，ＭｕｓｃａｒｉｔｏｌｉＭ，ｅｔａｌ：ＥｕｒＪＣａｎｃｅｒ４２：３１−４１，２００６ＤｅｗｙｓＷＤ，ｅｔａｌ：ＡｍＪＭｅｄ６９：４９１−７，１９８０

本発明の目的は、消耗性疾患（悪液質および拒食症など)、特に癌に起因する悪液質の予防または治療のための薬剤または薬剤組成物を提供することである。

本発明の別の目的は、消耗性疾患（悪液質および拒食症など）、特に癌に起因する悪液質の予防または治療において、マツホド（Ｐｏｌｉａｃｏｃｏｓ（Ｓｃｈｗ）Ｗｏｌｆ）から準備されるポリア抽出物の使用を提供することである。

本発明のさらに別の目的は、消耗性疾患（悪液質および拒食症など）、特に癌に起因する悪液質の予防または治療のためのラノスタン／ラノスタン化合物の新たな用途を提供することである。

本願出願人は、米国特許出願公開第２００９−０２４７４９６号明細書および国際公開第２００９／１２４４２０号パンフレットにおいて、ポリア抽出物およびこれから精製されたラノスタン／ラノスタン化合物が、ヒトの腸において有効で、栄養の摂取、即ち、グルコース、アミノ酸およびビタミン（葉酸）の吸収を向上することを開示している。当該知見をさらに検討した結果、本発明者は、ポリア抽出物成分、特にラノスタン化合物が、栄養および免疫に関連する悪液質を向上させ、治療の助けとなる可能性があると、考えた。そこで、本発明者は、ポリア抽出物成分およびラノスタン化合物が悪液質の治療効果があるか否かを、ヒト肺癌細胞を移植したマウスの実験を行うことによって評価して、かかるヒト肺癌細胞が移植されたマウスが、正常な食欲を示すかどうか、また、正常なマウスと比較して、徐々に体重が減少することなく、正常な体重を有するかどうかを、観察した。その結果、ポリア抽出物成分およびラノスタン化合物が、徐々に体重を減少させることなく、正常な体重を有する効果を有し、ゆえに、悪液質や拒食症等の消耗性疾患、特に癌によって引き起こされる悪液質（癌悪液質）を予防および／または治療するのに有効であることを知得した。上記知見に基づいて、本発明を完成した。

すなわち、上記目的は、以下によって達成される。

（１）有効成分としての下記式（Ｉ）：

ただし、Ｒ_１は、−Ｈまたは−ＣＨ_３であり；Ｒ_２は、−ＯＣＯＣＨ_３、＝Ｏまたは−ＯＨであり；Ｒ_３は、−Ｈまたは−ＯＨであり；Ｒ_４は、−Ｃ（＝ＣＨ_２）−Ｃ（ＣＨ_３）_２Ｒ_ａ（この際、Ｒ_ａは、−Ｈまたは−ＯＨである）または−ＣＨ＝Ｃ（ＣＨ_３）Ｒ_ｂ（この際、Ｒ_ｂは、−ＣＨ_３または−ＣＨ_２ＯＨである）である；Ｒ_５は、−Ｈまたは−ＯＨであり；およびＲ_６は、−ＣＨ_３または−ＣＨ_２ＯＨである、
で示されるラノスタン化合物（本明細書中、「ラノスタン化合物（Ｉ）」または単に「ラノスタン」とも称する）、またはその薬理上許容される塩を、消耗性疾患（悪液質および拒食症など）を予防または治療の予防または治療のために有効な量を含む、哺乳動物における消耗性疾患を予防または治療するための薬剤または薬剤組成物。

（２）上記ラノスタン化合物（Ｉ）は、下記式：

または、

である、上記（１）に記載の薬剤または薬剤組成物。

（３）ラノスタン化合物（Ｉ）またはその薬理上許容される塩を１〜６０重量％含む、上記（１）または（２）に記載の薬剤または薬剤組成物。

（４）有効成分（活性成分）として単離されたラノスタン化合物（Ｉ）またはその薬理上許容される塩を含む、上記（１）〜（３）のいずれかに記載の薬剤または薬剤組成物。

（５）経口投与される、上記（１）〜（４）のいずれかに記載の薬剤または薬剤組成物。

（６）前記ラノスタン化合物（Ｉ）の供給源として、ポリア抽出物（Poria extract）を含む、上記（１）〜（５）のいずれかに記載の薬剤または薬剤組成物。

（７）前記ポリア抽出物は、ポリア抽出物の重量に対して、１〜６０重量%の前記式（Ｉ）のラノスタン化合物を含む、上記（６）に記載の薬剤または薬剤組成物。

（８）前記ポリア抽出物は、実質的にセコラノスタン（secolanostane）を含まない、上記（６）または（７）に記載の薬剤または薬剤組成物。

（９）前記ポリア抽出物は、下記の工程：
ａ）水、メタノール、エタノールまたはこれらの混合溶媒によって、マツホド(Poliacocos(Schw) Wolf)の代謝産物、発酵産物または菌核粒子(sclerotium)を抽出する工程と、
ｂ）前記ａ）工程から得られた液体抽出物を濃縮する工程と、
ｃ）前記ｂ）工程から得られた濃縮物をシリカゲルカラムに導入する工程と、
ｄ）極性の低い溶離液で前記シリカゲルカラムを溶出し、溶出液を集める工程と、
ｅ）前記溶出液を濃縮して、溶出濃縮物を形成する工程と、
を含む方法によって準備される、上記（６）〜（８）のいずれかに記載の薬剤または薬剤組成物。

（１０）前記ｅ）工程で得られた溶出濃縮物は、薄層クロマトグラフィーのＲｆ値が少なくとも０．１であり、この際、薄層クロマトグラフィーは、ジクロロメタン：メタノール＝９６：４（体積比）の混合溶媒で展開し、紫外線ランプとヨード蒸気で検出する、上記（９）に記載の薬剤または薬剤組成物。

（１１）前記ａ）工程における抽出は９５％水性エタノール（９５％エタノール水溶液）を用いることによって行われる、上記（９）または（１０）に記載の薬剤または薬剤組成物。

（１２）前記ａ）工程における抽出は、マツホド(Poliacocos(Schw) Wolf)の代謝産物、発酵産物または菌核粒子を熱湯または沸騰水で抽出して抽出物水溶液を得；ｐＨが９〜１１になるまで、得られた抽出物水溶液に塩基を添加して塩基性水溶液を得；かかる塩基性水溶液を回収し、ｐＨを好ましくは４〜７、より好ましくは４〜６になるまで、この塩基性水溶液に酸を添加して沈殿物を形成し；かかる沈殿物を回収して、必要であれば噴霧乾燥し；エタノールまたはエタノール水溶液で沈殿物を抽出し；抽出物溶液を回収することを有する、上記（９）〜（１１）のいずれかに記載の薬剤または薬剤組成物。

（１３）前記ｂ）工程で得られる濃縮物は、メタノールとｎ−ヘキサンを体積比１：１で含む二相の溶媒でさらに抽出し、メタノール層を二相の溶媒による抽出混合物から分離し、メタノール層を濃縮することによって濃縮物を形成し、当該濃縮物を前記ｃ）工程におけるシリカゲルカラムにフィードとして用いる、上記（９）〜（１１）のいずれかに記載の薬剤または薬剤組成物。

（１４）前記ｄ）工程における極性の低い溶離液は、ジクロロメタンとメタノールを体積比９６．５：３．５で含む混合溶媒である、上記（９）〜（１２）のいずれかに記載の薬剤または薬剤組成物。

（１５）前記ポリア抽出物は、ポリア抽出物の重量に対して、５〜３５％重量のラノスタン化合物（Ｉ）を含む、上記（６）〜（１４）のいずれかに記載の薬剤または薬剤組成物。

（１６）さらに栄養素を含む、上記（１）〜（１５）のいずれかに記載の薬剤または薬剤組成物。ここで栄養素としては、特に制限されないが、例えば、グルコース、アミノ酸、ビタミンまたはそれらの組み合わせなどが挙げられる。

（１７）前記哺乳動物は、ヒトである、上記（１）〜（１６）のいずれかに記載の薬剤または薬剤組成物。

（１８）前記消耗性疾患は、悪液質である、上記（１）〜（１７）のいずれかに記載の薬剤または薬剤組成物。より好ましくは、かかる悪液質は、肺癌、胃癌、膵臓癌、大腸癌、乳癌、口腔癌または鼻咽腔癌などの癌によって引き起こされる。

（１９）前記消耗性疾患は、癌、拒食症、老化(aging)、体の損傷(body injury)もしくは火傷(body burn)によって引き起こされる、上記（１）〜（１７）のいずれかに記載の薬剤または薬剤組成物。

（２０）式（Ｉ）のラノスタン化合物またはその薬理上許容される塩は、体重１ｋｇあたり、８．４ｍｇ／日以上の量で哺乳動物（特にヒト）に投与される、上記（１）〜（１９）のいずれかに記載の薬剤または薬剤組成物。

（２１）薬理上許容される賦形剤または希釈剤をさらに含む、上記（１）〜（２０）のいずれかに記載の薬剤または薬剤組成物。すなわち、当該形態の本発明の薬剤または薬剤組成物は、活性成分として、単離されたラノスタン化合物（Ｉ）またはその薬理上許容される塩、および製薬上許容できる担体または希釈剤を含む。

本発明の薬剤または薬剤組成物によれば、消耗性疾患、例えば、悪液質や拒食症等の消耗性疾患、特に癌によって引き起こされる悪液質（癌悪液質）を予防または治療することができる。

図１は、実施例７の１回目の試験におけるそれぞれの群におけるマウスの体重変化を示すものである。図中、「＋」はブランクの群を示し；丸はコントロール群を示し；ダイヤモンド型、四角および三角は、それぞれ、マウスの体重１ｋｇ当たり、１７．６ｍｇ、８．８ｍｇおよび４．４ｍｇのラノスタンを投与された薬剤投与群、ＰＣ−Ａ、ＰＣ−ＢおよびＰＣ−Ｃを示す。図２は、実施例７の２回目の試験におけるそれぞれの群におけるマウスの体重変化を示すものである。図中、ダイヤモンド型はブランクの群を示し；四角は、コントロール群を示し；三角は、マウスの体重１ｋｇ当たり、８．８ｍｇのラノスタンを投与された薬剤投与群、ＰＣ−Ｄを示す。図３は、実施例７の２回目の試験におけるそれぞれの群におけるマウスの食糧摂取量（食物消費量）変化を示すものである。図中、ダイヤモンド型はブランクの群を示し；三角は、コントロール群を示し；丸はマウスの体重１ｋｇ当たり、８．８ｍｇのラノスタンを投与された薬剤投与群、ＰＣ−Ｄを示す。図４は、実施例７の第２２日の１回目の試験におけるマウスの血中アルブミン濃度（ｇ／ｄＬ）を示す。図５は、実施例７の第２２日の２回目の試験におけるマウスの血中アルブミン濃度（ｇ／ｄＬ）を示す。図６は、実施例８におけるＩ群の癌患者（化学療法＋ポリア抽出物カプセル１個）の全体的な栄養状態を示す図である。この際、患者は、臨床医により使用されているＰＧ−ＳＧＡ評価法(PG-SGA assessment)(Patient-Generated Subjective Global Assessment)に従って評価された。図７は、実施例８におけるＩＩ群の癌患者（化学療法＋ポリア抽出物カプセル２個）の全体的な栄養状態を示す図である。この際、患者は、臨床医により使用されているＰＧ−ＳＧＡ評価法(PG-SGA assessment)に従って評価された。図８は、実施例８におけるコントロール群の癌患者（化学療法）の全体的な栄養状態を示す図である。この際、患者は、臨床医により使用されているＰＧ−ＳＧＡ評価法(PG-SGA assessment)に従って評価された。

本発明は、下記式（Ｉ）：

ただし、Ｒ_１は、−Ｈまたは−ＣＨ_３であり；Ｒ_２は、−ＯＣＯＣＨ_３、＝Ｏまたは−ＯＨであり；Ｒ_３は、−Ｈまたは−ＯＨであり；Ｒ_４は、−Ｃ（＝ＣＨ_２）−Ｃ（ＣＨ_３）_２Ｒ_ａ（この際、Ｒ_ａは、−Ｈまたは−ＯＨである）または−ＣＨ＝Ｃ（ＣＨ_３）Ｒ_ｂ（この際、Ｒ_ｂは、−ＣＨ_３または−ＣＨ_２ＯＨである）である；Ｒ_５は、−Ｈまたは−ＯＨであり；およびＲ_６は、−ＣＨ_３または−ＣＨ_２ＯＨである、
で示されるラノスタン化合物またはその薬理上許容される塩を哺乳動物における消耗性疾患を予防または治療するのに有効な量含む、哺乳動物における消耗性疾患を予防または治療するための薬剤または薬剤組成物を提供する。本発明によると、ラノスタン化合物（Ｉ）もしくはその薬理上許容される塩または上記ラノスタン化合物（Ｉ）もしくはその薬理上許容される塩を含むポリア抽出物を使用することによって、拒食症患者や癌患者における重篤な体重減少を治療できる。また、当該使用によって、栄養分摂取を向上できる。

本発明において、消耗性疾患は、悪液質であることが好ましく、肺癌、胃癌、膵臓癌、大腸癌、乳癌、口腔癌または鼻咽腔癌などの癌によって引き起こされる悪液質（癌悪液質）であることがより好ましい。または、消耗性疾患は、癌、拒食症、老化(aging)、体の損傷(body injury)もしくは火傷(body burn)によって引き起こされる消耗性疾患であることもまた好ましい。なお、悪液質に関連する疾患としては、癌に加えて、ＡＩＤＳ、老化リウマチ性関節炎、肺結核、線維性嚢胞、クローン病、感染症などによって引き起こされる悪液質などがある。手術後または化学療法もしくは放射線治療を受けた癌患者の消耗状態（wasting state）を改善するために、栄養素補給（アミノ酸、グルコース、ビタミンなど）が摂取される必要がある場合がある。本発明の有効成分（活性成分）は、栄養補給のために粉乳、飲料または食物に添加されることができる。また、医療用途のため、錠剤、カプセル、顆粒、液体、注射などの形態にすることもできる。

「悪液質」は、人体が疲労状態であることを意味する。悪液質を引き起こす理由は多くの理論があるが、このようなメカニズムは解明されていない。癌に関しては、癌細胞放出因子または癌細胞に対する人体の免疫反応により、直接的または間接的に様々な要因を放出し、これにより拒食症となり、人体における内分泌系および免疫システムに変化をもたらし、その結果、患者は食物の摂取を嫌がりはじめ、筋肉中の脂肪やタンパク質が徐々に減少し、これにより、身体が脆くなったり、体重が減少していくという現象が徐々に起こることが知られている。

悪液質に関連する疾患は、癌、感染症（肺結核、ＡＩＤＳなど）、自己免疫疾患（リウマチ性関節炎）、老化、線維性嚢胞およびクローン病を含む。

癌患者の約７０％が悪液質を発症し、胃癌や膵臓癌患者でより頻繁に見られる。癌の末期では、癌の種類にかかわらず約８０％の癌患者の悪液質を発症する。栄養素をより多く摂取させるためにチューブによる栄養補給(gavage)（経管栄養）や静脈注射による食物摂取または他の方法を治療に適用しても、患者の体重の低下を防止したりあるいは終わらせることができない。

ホルモン食欲増進剤(hormonal appetite enhancer)（メゲストロール、酢酸メドロキシプロゲステロンなど）が、一般的に治療に使用される。しかし、このような処置では、体重が一時的増加する（水や脂肪が増加するのみである）が、体筋は増加せず、活動能や身体活動は改善されない人もいる。逆に、血栓、浮腫、出血、高血糖症や高血圧症などの、薬の副作用が見受けられることがある。

本発明で使用される哺乳動物（例えば、ヒト）による哺乳動物における消耗性疾患を予防または治療するためのラノスタン化合物（Ｉ）は、下記式（Ｉ）で示される。

上記式（Ｉ）中、Ｒ_１は、−Ｈまたは−ＣＨ_３である。Ｒ_２は、−ＯＣＯＣＨ_３、＝Ｏまたは−ＯＨである。ここで、Ｒ_２が＝Ｏであるとは、Ｒ_２の結合している炭素原子に結合する水素原子が脱離し、Ｒ_２の結合および前記水素原子の脱離に伴う結合の双方が、Ｃ＝Ｏを形成するための二重結合に関与する。すなわち、Ｒ_２が＝Ｏであるときは、ラノスタン化合物（Ｉ）は、下記構造を有する。

また、Ｒ_３は、−Ｈまたは−ＯＨである。Ｒ_４は、−Ｃ（＝ＣＨ_２）−Ｃ（ＣＨ_３）_２Ｒ_ａ（この際、Ｒ_ａは、−Ｈまたは−ＯＨである）または−ＣＨ＝Ｃ（ＣＨ_３）Ｒ_ｂ（この際、Ｒ_ｂは、−ＣＨ_３または−ＣＨ_２ＯＨである）である；Ｒ_５は、−Ｈまたは−ＯＨである。Ｒ_６は、−ＣＨ_３または−ＣＨ_２ＯＨである。

前記式（Ｉ）において、Ｒ_１は、好ましくはＨであり、Ｒ_３は、好ましくはＯＨであり、Ｒ_４は、好ましくは−Ｃ（＝ＣＨ_２）−Ｃ（ＣＨ_３）_２Ｒ_ａ（この際、Ｒ_ａは、好ましくはＨである）であり、Ｒ_５は、好ましくはＨであり、Ｒ_６は、好ましくはＣＨ_３である。すなわち、ラノスタン化合物（Ｉ）は、下記式で表わされる化合物が好ましい。

または、

上記ラノスタン化合物（Ｉ）は、ポリア抽出物（マツホドの抽出物）中に含まれる。このラノスタン化合物（Ｉ）は比較的低極性の画分であり、主要な化合物である上記Ｋ１、Ｋ２、Ｋ３およびＫ４Ｋ１〜Ｋ６化合物と、微量の化合物Ｋ４ａ、Ｋ４ｂ、Ｋ５、Ｋ６ａ、およびＫ６ｂＫ１〜Ｋ６化合物と、を含む。これらのうち、Ｋ１、Ｋ２、Ｋ３、およびＫ４Ｋ１〜Ｋ６化合物が、哺乳動物における消耗性疾患を予防または治療効果を有する。

また、微量成分である前記Ｋ４ａ、Ｋ４ｂ、Ｋ５、Ｋ６ａ、およびＫ６ｂ化合物の構造は以下の通りである：

なお、前記式（Ｉ）には、連続する４個の炭素原子にわたる、点線で示される３本の結合が示されているが、これは、上記Ｋ１およびＫ２のそれぞれの主成分のように、前記連続する４個の炭素原子の２番目と３番目の炭素原子、すなわち２つの六員の縮合に関与している２個の炭素原子間に二重結合が存在する形態と、Ｋ１およびＫ２の微量成分並びにＫ３〜Ｋ６（Ｋ６ｂを除く）のように、前記連続する４個の炭素原子の、１番目および２番目の炭素原子間、並びに３番目および４番目の炭素原子間に二重結合が存在する形態との双方を含む概念である。

本発明の薬剤または薬剤組成物は、有効成分（活性成分）として、ラノスタン化合物（Ｉ）を含む。適当なラノスタン化合物（Ｉ）源としては、ポリア抽出物がある。または、当該ラノスタン化合物（Ｉ）は、冬虫夏草(Cordyceps sinensis)、樟芝(Antrodia cinnamomea)またはマンネンタケ(Granodema lucidum)から得てもよい。以下では、本発明に係るラノスタン化合物（Ｉ）をポリア抽出物から得る方法について説明する。しかし、本発明は、下記形態に限定されない。

本発明のラノスタン化合物（Ｉ）（Ｋ１〜Ｋ６化合物）は、粗抽出物を得る、従来の抽出工程を利用することにより、ポリア（例えば、マツホド）から得られる。すなわち、ラノスタン化合物（Ｉ）の供給源として、ポリア抽出物（Poria extract）が使用されることが好ましい。また、この際、ポリア抽出物中のラノスタン化合物（Ｉ）の含有量は、特に制限されないが、ポリア抽出物は、ポリア抽出物の重量に対して、１〜６０重量%の前記式（Ｉ）のラノスタン化合物を含むことが好ましく、より好ましくは５〜６０重量％、さらに好ましくは７〜４０重量％、特に好ましくは１０〜２０重量％の前記式（Ｉ）のラノスタン化合物を含む。ここで、ポリア抽出物は、例えば、ＵＳ２００４／０２２９８５２Ａ１および特開２００４−３３９２２０号公報に記載されるのと同様の方法により調製できる。具体的には、一般的な抽出方法によりマツホド（Ｐｏｌｉａｃｏｃｏｓ（Ｓｃｈｗ）Ｗｏｌｆ）を抽出して粗抽出物を得る。ここで、粗抽出物は、必要であれば濃縮されて濃縮物を得てもよい。この粗抽出物または濃縮物をクロマトグラフィーによってラノスタンの低極性画分（ジクロロメタン：メタノールが９６：４の溶離液使用）およびセコラノスタンの高極性画分（ジクロロメタン：メタノールが９０：１０または０：１００の溶離液使用）に分離する。ここで、ジクロロメタン：メタノール＝９６：４（体積比）の混合溶媒によって薄層クロマトグラフィーで展開したときに、ラノスタン画分はクロマトグラフィー値（Ｒｆ）が０．１以上のところで検出され、また、セコラノスタン画分はＲｆが０．１未満のところで検出される。ジクロロメタン：メタノール＝９７：３〜９５：５の体積比（より好ましくは９７：３〜９６：４、特に好ましくは９６．５：３．５の体積比）である極性の低い溶離液を使用し、ラノスタン画分をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで溶出することにより、いくつかのラノスタンをラノスタン画分から分離する。

すなわち、ラノスタン化合物（Ｉ）またはポリア抽出物の調製方法の好ましい実施形態は、ａ）水、メタノール、エタノールまたはこれらの混合溶媒によって、マツホド[Poria cocos（Schw）Wolf]の代謝産物、発酵産物または菌核粒子(sclerotium)を抽出し；ｂ）前記ａ）工程から得られた液体抽出物を濃縮し；ｃ）前記ｂ）工程から得られた濃縮物をシリカゲルカラムに導入し；ｄ）極性の低い溶離液で前記シリカゲルカラムを溶出し、溶出液を集め；ｅ）前記溶出液を濃縮して、溶出濃縮物を形成することを含む。

ここで、上記ｅ）工程で得られた溶出濃縮物は、薄層クロマトグラフィーのＲｆ値が少なくとも０．１（Ｒｆ値＝０．１以上）であり、この際、薄層クロマトグラフィーは、ジクロロメタン：メタノール＝９６：４の混合溶媒で展開し、紫外線ランプとヨード蒸気で検出することが好ましい。

前記ａ）工程における抽出は９５％エタノールを用いることによって行われることが好ましい。また、前記ａ）工程における抽出は、Poria cocos (Schw) Wolfの代謝産物、発酵産物または菌核粒子を熱湯または沸騰水で抽出して抽出物水溶液を得；ｐＨが９〜１１になるまで、得られた抽出物水溶液に塩基を添加して塩基性水溶液を得；かかる塩基性水溶液を回収し、ｐＨを好ましくは４〜７、より好ましくは４〜６になるまで、この塩基性水溶液に酸を添加して沈殿物を形成し；かかる沈殿物を回収して；エタノールで沈殿物を抽出し；抽出物溶液を回収することを有することが好ましい。

前記ｂ）工程で得られる濃縮物は、メタノールとｎ−ヘキサンを体積比１：１で含む二相の溶媒でさらに抽出し、メタノール層を二相の溶媒による抽出混合物から分離し、メタノール層を濃縮することによって濃縮物を形成し、当該濃縮物を前記ｃ）工程におけるシリカゲルカラムにフィードとして用いることが好ましい。

上記方法によって得られるポリア抽出物中のラノスタン化合物（Ｉ）の含有量は、消耗性疾患の予防・治療効果を達成できる程度であれば特に制限されないが、ポリア抽出物が、ポリア抽出物の重量に対して、５〜３５％重量のラノスタン化合物（Ｉ）を含むことが好ましい。

また、上記方法によって得られるポリア抽出物は、実質的にセコラノスタン（secolanostane）を含まないことが好ましい。ここで、「実質的にセコラノスタン（secolanostane）を含まない」とは、本発明の薬剤または薬剤組成物が、ラノスタン化合物（Ｉ）またはポリア抽出物による消耗性疾患の予防・治療効果を損なわない程度であることを意味し、具体的には、セコラノスタンの含有量は、ラノスタン化合物（Ｉ）の含有量の５重量％未満であることが好ましい。より好ましくは、ポリア抽出物は、セコラノスタン（secolanostane）を含まない。

本発明に係る薬剤または薬剤組成物は、上記ラノスタン化合物（Ｉ）もしくはその薬理上許容される塩、または当該ラノスタン化合物（Ｉ）もしくはその薬理上許容される塩を含むポリア抽出物を含む。好ましくは、本発明に係る薬剤または薬剤組成物は、有効成分（活性成分）として、単離されたラノスタン化合物（Ｉ）またはその薬理上許容される塩を含む。ここで、ラノスタン化合物（Ｉ）もしくはその薬理上許容される塩は、単独で使用されてもあるいは２種以上の混合物として使用されてもよい。

本発明において、ラノスタン化合物（Ｉ）の薬理上許容される塩の形態は、消耗性疾患の予防・治療効果を発揮でき、また、哺乳動物に悪影響を与えない形態であれば特に制限されない。具体的には、塩酸、臭化水素酸、リン酸、硫酸、メタンスルホン酸、酢酸、酒石酸、乳酸、コハク酸、クエン酸、リンゴ酸、マレイン酸、ソルビン酸、アコニット酸、サリチル酸、フタル酸、エンボニックアシッド(embonic acid)、エナント酸などの有機及び無機酸から誘導される塩；ナトリウム塩、カリウム塩、アルミニウム塩などの塩基から誘導される塩などの、生理学的に許容できる無毒な塩が挙げられる。

また、本発明に係る薬剤または薬剤組成物中の、上記ラノスタン化合物（Ｉ）もしくはその薬理上許容される塩、または当該ラノスタン化合物（Ｉ）もしくはその薬理上許容される塩を含むポリア抽出物の含有量は、消耗性疾患の予防・治療効果を発揮でき、また、哺乳動物に悪影響を与えない程度であれば特に制限されない。好ましくは、本発明に係る薬剤または薬剤組成物は、薬剤または薬剤組成物の全量に対して、前記ラノスタン化合物（Ｉ）またはその薬理上許容される塩を、１〜６０重量％含有する。また、本発明の薬剤または薬剤組成物において、好ましくは、セコラノスタンの含有量は、前記ラノスタン化合物（Ｉ）の含有量の５重量％未満である。かような形態によれば、毒性を示す虞のあるセコラノスタンの含有量が低減されているため、ラノスタン化合物（Ｉ）もしくはその薬理上許容される塩による消耗性疾患の予防・治療効果がより一層向上しうる。

本発明に係る薬剤または薬剤組成物は、上記ラノスタン化合物（Ｉ）もしくはその薬理上許容される塩、または当該ラノスタン化合物（Ｉ）もしくはその薬理上許容される塩を含むポリア抽出物に加えて、薬理上許容される賦形剤または希釈剤をさらに含んでもよい。ここで、薬理上許容される賦形剤または希釈剤は、特に制限されず、従来公知の形態が適宜採用されうる。担体としては、例えば、乳糖、白糖、塩化ナトリウム、ブドウ糖、尿素、澱粉、炭酸カルシウム、カオリン、結晶セルロース、ケイ酸等の賦形剤；水、エタノール、プロパノール、単シロップ、ブドウ糖液、澱粉液、ゼラチン溶液、カルボキシメチルセルロース、セラック、メチルセルロース、リン酸カリウム、ポリビニルピロリドン等の結合剤；乾燥澱粉、アルギン酸ナトリウム、寒天末、ラミナラン末、炭酸水素ナトリウム、炭酸カルシウム、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル類、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸モノグリセリド、澱粉、乳糖等の崩壊剤、白糖、ステアリン、カカオバター、水素添加油等の崩壊抑制剤；第４級アンモニウム塩基、ラウリル硫酸ナトリウム等の吸収促進剤；グリセリン、澱粉等の保湿剤；澱粉、乳糖、カオリン、ベントナイト、コロイド状ケイ酸等の吸着剤；精製タルク、ステアリン酸塩（ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸ナトリウム等）、硼酸末、ポリエチレングリコール等の潤沢剤等が挙げられる。また、希釈剤としては、例えば、水、エタノール、プロピレングリコール、エトキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル類等が挙げられる。なお、これらの担体および希釈剤はあくまでも例示であり、これらには全く制限されない。

また、本発明に係る薬剤または薬剤組成物は、栄養素をさらに含んでもよい。ここで、栄養素としては、医薬の製剤分野において通常使用し得る公知の栄養素を使用でき、特に制限されない。例えば、グルコース、アミノ酸、ビタミンまたはそれらの組み合わせなどが挙げられる。

さらに、本発明に係る薬剤または薬剤組成物は、常法に従い、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、矯味矯臭剤、溶解補助剤、懸濁剤、着色剤、ｐＨ緩衝剤、防腐剤、ゲル化剤、界面活性剤、コーティング剤等、医薬の製剤分野において通常使用し得る公知の補助剤を用いて製剤化されうる。また、必要に応じて着色剤、保存剤、香料、風味剤、甘味剤、他の医薬等と混合されてもよい。

本発明に係る薬剤または薬剤組成物は、ヒトを含む哺乳動物に対し、経口または非経口により安全に投与され、また、当該投与により、消耗性疾患を予防または治療できる。好ましくは、例えば錠剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤、シロップ剤等の形態で経口投与されうる。ただし、経皮投与や皮下投与の形態で非経口により投与されてもよい。また、従来公知の手法により徐放剤の形態とされてもよい。

本発明において、「哺乳動物」としては、特に制限されず、例えばヒト、サル、マウス、ウマ、ウシ、ブタ、イヌ、ネコ、モルモット、ウサギおよびラット等が例示される。なかでも、ヒト、サル並びに、イヌおよびネコ等の愛玩動物、モルモット、ウサギおよびラット等の実験動物がより好ましく、ヒトが特に好ましい。

本発明に係る薬剤または薬剤組成物の投与量は、患者の年齢、体重及び症状、目的とする投与形態や方法、治療効果、および処置期間等によって異なり、正確な量は医師により決定されるものである。通常、式（Ｉ）のラノスタン化合物またはその薬理上許容される塩が、体重１ｋｇあたり、好ましくは５〜４０ｍｇ／日、より好ましくは７〜３５ｍｇ／日、さらにより好ましくは８．４ｍｇ／日以上、特に好ましくは８．４〜３３．６ｍｇ／日の量で哺乳動物（特にヒト）に投与される。

後述する実施例は、本発明をさらに詳細に説明するために提供するものであり、本発明の範囲を限定するために使用してはならない。

本明細書においてパーセンテージおよびその他の量は、特に指摘しない限り重量基準である。パーセンテージは、全体が１００％となる任意の範囲から選択される。

本発明の効果を、以下の実施例および比較例を用いて説明する。ただし、本発明の技術的範囲が以下の実施例のみに制限されるわけではない。

実施例１
雲南で成長させたポリア(Poria)２６ｋｇを、加熱しながら７５％水性アルコール（エタノール）溶液２６０リットルで抽出した。抽出は３回繰り返し、得られた３つの抽出溶液を合わせて、真空濃縮して、抽出物（アルコール抽出物）２２５．２ｇを得た。続いてその抽出物について定量分析を行ったところ、１グラムあたり、ラノスタン７６．２７ｍｇが得られたことが分かった。ここで、Ｋ１（パキム酸(pachymic acid)）は３３．４ｍｇ、Ｋ１−１（デヒドロパキム酸(dehydropachymic acid)）は９．５９ｍｇ、Ｋ２−１（ツムロス酸(tumulosic acid)）は１９．０１ｍｇ、Ｋ２−２（デヒドロツムロス酸(dehydrotumulosic acid)）は６．７５ｍｇ、Ｋ３（ポリポレン酸Ｃ(polyporenic acid C)）５．０６ｍｇ、およびＫ４（３−エピデヒドロツムロス酸(3-epidehydrotumulosic acid)）は２．４６ｍｇを占めた。

実施例２
実施例１で得られたアルコール抽出物１２５ｇを、さらにジクロロメタン１．３リットルで６回抽出し、得られた６つの抽出溶液を合わせて濃縮して、抽出物（ジクロロメタン抽出物）２２．２６ｇを得た。このジクロロメタン抽出物を、加熱した９５％水性アルコール（エタノール）溶液に溶解し、放置して冷却し、次いでろ過し、不溶物を廃棄した。ろ液に少量の水を、ろ液中のアルコール濃度が４５％になるまで加えて、沈殿させ、遠心分離により沈殿物１７．４ｇを得た。続いて、この沈殿物を定量分析したところ、沈殿物１グラムあたり、ラノスタン２６４．７８ｍｇが含まれることが分かった。ここで、Ｋ１−１は１５９．７ｍｇ、Ｋ１−２は５６．９６ｍｇ、Ｋ２−１は２４．４３ｍｇ、Ｋ２−２は８．８ｍｇ、Ｋ３は９．８４ｍｇ、およびＫ４は５．０５ｍｇを占めた。なお、Ｋ１−１、Ｋ１−２、Ｋ２−１、Ｋ２−２、Ｋ３、およびＫ４の構造は下記のとおりである。シリカゲルを使用した薄層クロマトグラフィー法（ＴＬＣ）により、沈殿物はセコラノスタンを全く含んでいないことを確認した。

実施例３
ポリア(Poria)１００ｋｇを水８００ｋｇ中で３時間煮沸し、５０℃になるまで放置して冷却し、５ＮＮａＯＨ溶液を用いて、ｐＨ値を１１になるように調整し、次いで得られた溶液を３時間攪拌した。遠心分離機を使用して、固形物から液体を分離し、分離した固形物にさらに水８００ｋｇを加えた。ｐＨ値をＮａＯＨで１１に調整すること、攪拌すること、遠心分離により固形物を取り除くことを含む、上記の手順を繰り返した。得られた２つの液体を合わせて、真空濃縮し５０℃の溶液１００ｋｇとし、次いで、３ＮＨＣｌを用いてｐＨ値を６．５になるように調整して、沈殿物を生成した。この沈殿物を溶液から分離し、続いてＨ_２Ｏ４０Ｌで洗浄し、沈殿物を回収するために遠心分離した。沈殿物は水８Ｌを用いて噴霧乾燥し、粉末３８０ｇを得た。その後、粉末はアルコール（エタノール）４Ｌを用いて３回抽出し、抽出溶液は合わせて濃縮し、アルコール抽出物（エタノール抽出物）２３８．９ｇを得た。このアルコール抽出物２３８．９ｇは、ＴＬＣ分析によりセコラノスタン化合物を全く含まないことが証明された。次いで、アルコール抽出物２３８．９ｇは、ＨＰＬＣにより分離し、抽出物１グラムにつき、Ｋ２が２１４ｍｇ、Ｋ３が２３ｍｇ、Ｋ４が２４ｍｇおよびＫ１が４．５２ｍｇとなることが分かった。言い換えれば、抽出物１グラムにつき約２６５ｍｇのラノスタン化合物が含まれている。

また、粉末を５０％水性アルコール（エタノール）溶液４Ｌを用いて抽出し、その５０％水性アルコール溶液を除き、不溶性粉末を得た。抽出は三回繰り返し、５０％水性アルコール溶液に不溶性の物質２４５．７ｇを得た。この不溶性物質はＴＬＣ分析によりセコラノスタン化合物を全く含まないことが確認された。その後、ＨＰＬＣによる分離および精製プロセスを行い、抽出物１グラムにつき、Ｋ２を２１４ｍｇ、Ｋ３を２３ｍｇ、Ｋ４を２４ｍｇおよびＫ１を４．５２ｍｇ得た。これは、抽出物１グラムにつきラノスタン化合物約２６１ｍｇが得られたことと同等である。

実施例４
ポリア粉末を中国で成長させたＰｏｒｉａｃｏｃｏｓ（Ｓｃｈｗ）Ｗｏｌｆ３０ｋｇから製造した。このポリア粉末は、９５％アルコール（エタノール）溶液１２０Ｌで２４時間抽出した。混合物をろ過し、ろ液を得た。残渣はさらに３回抽出しかつろ過した。ろ液を合わせて濃縮し、２６５．２ｇの量の乾燥抽出物を得た。乾燥抽出物は、二相抽出剤（ｎ−ヘキサン：９５％メタノール＝１：１（体積比））を用いた分配抽出を行い、そこからメタノール相を除き、その後、濃縮して２４６．９ｇの量の乾燥した固形物を得た。乾燥固形物は、乾燥固形物の１０〜４０倍の重量のシリカゲルを充填したシリカゲルカラムを用いて分離した。７０〜２３０メッシュの直径を有するシリカゲルは、Ｍｅｒｃｋ社製シリカゲル６０を用いて準備した。カラムは以下の溶離液を順に用いて溶出した：ジクロロメタン：メタノール＝９６：４（体積比）の混合溶媒；ジクロロメタン：メタノール＝９０：１０（体積比）の混合溶媒；および純粋メタノール。溶出液は、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）によって試験した。ここで、検出には紫外線ランプおよびヨウ素蒸気を用い、ジクロロメタン：メタノール＝９６：４（体積比）の混合溶媒を展開液として使用した。ＴＬＣにおいて類似の組成を有する溶出液は混合した。

ジクロロメタン：メタノール＝９６：４（体積比）の混合溶媒を用いた溶出により、７８ｇの量のＰＣＭ部分を得た。ＰＣＭは薄層クロマトグラフィーにおいて６つのスポット跡を示した。ジクロロメタン：メタノール＝９０：１０（体積比）および純粋メタノールの溶離液を用いた溶出により得られた溶出液を混合し、１６８ｇの量のＰＣＷ部分を得た。

ＰＣＭ部分は、ジクロロメタン：メタノール＝９６．５：３．５（体積比）の溶離液および同様のシリカゲルカラムを使用してさらに分離し、Ｋ１（Ｋ１−１およびＫ１−２）、Ｋ２（Ｋ２−１およびＫ２−２）、Ｋ３、Ｋ４、Ｋ４ａ、Ｋ４ｂ、Ｋ５、Ｋ６ａおよびＫ６ｂの精製ラノスタン成分を得た。なお、分離工程および同定分析データの詳細については、ＵＳ２００４／０２２９８５２Ａ１公報に記載されるのと同様である。

前記Ｋ１〜Ｋ６ｂ化合物は下記の構造を有する：

ＰＣＭ部分から分離したラノスタン化合物Ｋ１〜Ｋ６ｂの量は下記表１に列記した。ＰＣＭ部分は、ラノスタン化合物Ｋ１〜Ｋ６ｂを約１５ｗｔ％含む。

実施例５
実施例４で調製したＰＣＭ部分を有するカプセルを下記表２に示される組成に基づいて準備した。

ＰＣＭ部分およびケイアルミン酸ナトリウムは、＃８０メッシュを使用してふるい分けし、ジャガイモデンプンは＃６０メッシュを使用してふるい分けし、マグネシウムステレート（Ｓｔｅｒａｔｅ）は＃４０メッシュを使用してふるい分けした。続いて、上記成分はミキサーで均一に混合し、次いで得られた混合物はＮｏ．１の空カプセルに充填した。各カプセルは、有効成分Ｋ１〜Ｋ６を約１．６８ｍｇ（０．４２ｗｔ％）含んでいる。

実施例６
実施例２および３で調製したポリア抽出物を下記表３に示される薬剤に調剤し、これを試験材料として使用した。当該試験材料について、癌を患う動物の、ポリア抽出物投与後の体重、食物摂取量（食物消費量）および血清中タンパク質レベルの変化、並びに、癌に起因する悪液質を有する動物全体の栄養状態を評価した。

実施例７
本実施例は、癌に起因する悪液質を治療するための上記表３に示される薬剤を使用する動物試験である。ヒト肺癌細胞を移植したマウスをポリア抽出物が悪液質への治療効果を有するかどうかを明らかにするために使用した。ヒト肺癌細胞を移植したマウスおよび正常マウスの体重、食物摂取量および血清アルブミンレベルの変化を観察し、癌悪液質の治療における薬の有効性を評価した。

試験動物
ＣＢ−１７ＳＣＩＤマウス（６〜８週齢）は、国立台湾大学研究動物センター（ＬａｂｏｒａｔｏｒｙＡｎｉｍａｌＣｅｎｔｅｒｏｆｔｈｅＮａｔｉｏｎａｌＴａｉｗａｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ）（台湾、タイペイ）から入手した。動物は、室温２５±２℃、湿度４０〜７０％、昼夜１２時間ずつ、水の制限なしで、ステンレススチールケージ内で飼育した。動物は、購入後は、動物飼育舎で適応させ、動物の体重を無作為に測定した。近似する体重の動物は、乱数により同じ群に分類し、統計分析により、群間に有意な体重差がないことを確認した。

ヒト肺癌Ｈ４６０株の培養
Ｈ４６０株は、液体窒素容器から取り出し、３７℃の水浴で解凍した。１０％ＦＢＳを追加したＤＭＥＭ培地８ｍＬを取り、１２００ｒｐｍで１０分遠心分離した。上澄みを回収し、これに細胞を加えた。細胞は、所望の細胞量に達するまで、３７℃、５％ＣＯ_２の培養オーブン（ｃｕｌｔｕｒｅｏｖｅｎ）内で培養した。

マウスへの肺癌Ｈ４６０株の同所移植(Orthotopic transplantation)
マウスを、ペントバルビタールを用いて深麻酔し、Ｎｏ．２９ゲージの０．５ｍＬインシュリン針を用いて、マウスの胸腔内へ、Ｈ４６０細胞株（１×１０^６細胞／ｍＬ）０．１ｍＬを移植した。マウスは、細胞の移植後は、元のかごへ収容し、回復させた。

薬の調製
実施例２で調製したポリア抽出物６７．７ｍｇを秤量し、滅菌水１０ｍＬを加えて、その後、超音波処理を行い、抽出物を水に懸濁させた（「ＰＣ−Ａ」剤と称する）。「ＰＣ−Ｂ」剤は、「ＰＣ−Ａ」剤５ｍＬに滅菌水を加えて１０ｍＬとした。また、「ＰＣ−Ｃ」剤は、「ＰＣ−Ｂ」剤５ｍＬに滅菌水を加えて１０ｍＬとした。上記表３に示される投与量が行われるまで、チューブによる食物摂取により、体重２５ｇｍ当たり０．２５ｃｃの薬剤（薬剤０．２５ｃｃ／体重２５ｇｍ）で体重に応じて、マウスに投与した。試験は２回行った。ブランク群のマウスには、蒸留水を与えた（Ｈ４６０の代わりに、ＰＢＳ（ｃｕｌｔｉｖａｔｉｏｎＰＢＳ）を用いて、マウスの胸腔中に注射した）。コントロール群の肺癌マウスには、蒸留水を用いて食事を与えた。食事は、Ｎｏ．１８（５ｃｍ長さ）のスチール管が接続された注射針（１ｃｃ）を用いて与えた。経管栄養（チューブによる食物摂取）を行う場合には、左手を用いてマウスの口腔を開き、経管栄養用のスチール管を注意深く胃の中へセットして、薬剤または蒸留水をチューブを通して与えた。この際のそれぞれの投与量は０．３ｃｃに制限した。

１回目の試験では、全体で５つの群（１つのブランク群、１つのコントロール群、３つの投与群）で行い、各群９匹のマウスを用いた。実施例２のポリア抽出物を用いて調製されたＰＣ−Ａ、ＰＣ−ＢおよびＰＣ−Ｃ剤を、３つの投与群の肺癌マウスに投与し、それぞれの群のマウスには、表３に示すように、ｋｇ体重当たり、１７．６ｍｇ、８．８ｍｇおよび４．４ｍｇのラノスタンが投与された。

２回目の試験では、全体で３つの群（１つのブランク群、１つのコントロール群、１つの投与群）で行い、各群３匹のマウスを用いた。実施例３のポリア抽出物を用いて調製されたＰＣ−Ｄ剤を、投与群の肺癌マウスに投与し、それぞれのマウスは、表３に示すように、ｋｇ体重当たり、８．８ｍｇのラノスタンが投与された。

血清アルブミンサンプルの収集
２２日目の全血を眼角から採取し、全血を室温で１時間放置した。３，０００ｒｐｍの遠心分離を２回行った後、血清を回収し、血清アルブミンの含量分析を後に行うときまで、−２０℃で保存した。

血清アルブミンの濃度測定
マウスアルブミンＥＬＩＳＡキット（Bethyl Laboratories Inc.製、テキサス、ＵＳ）を用いて分析した。抗マウスアルブミンを、ＴＢＳで１０倍に希釈し、１００μＬ／ウェルでマイクロタイタープレート（ｍｉｃｒｏｔｉｔｅｒｐｌａｔｅ）を被覆した。このプレートを１時間室温でインキュベートした後、ＴＢＳＴで３回、続いて、ブロッキングのために１％ＢＳＡ２００μＬ／ウェルで洗浄した。室温で１時間のインキュベーション後、プレートをＴＢＳＴで３回洗浄した。試料または標準物質を添加し、プレートを室温で１時間インキュベートし、続いてＴＢＳＴで５回洗浄を行った。１００μＬ／ウェルのヤギの抗マウスアルブミン−ＨＲＰ接合体希釈液(conjugate dilution)（１％ＢＳＡおよび０．０５％ツィーン２０を含むＴＢＳにより１０，０００倍希釈を行った）を加えて、室温で１時間インキュベートした。ＴＢＳＴで５回洗浄後、基質ＴＭＢ（３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジン）１００μＬを加えて、暗所で室温で１５分間反応させた。１００μＬ／ウェルの２ＮＨＣｌを加えて反応をクエンチした(quench)。Ａ_{４５０ｎｍ}の吸光度を測定した。

統計的方法
データは、平均値±標準偏差（Ｍｅａｎ±ＳＤ．）として示した。最初に、一方向（ｏｎｅ−ｗａｙ）ＡＮＯＶＡを用いて群間の差異を試験した。ｐ＜０．０５である場合、デネットの多重比ｔ検定(Dennett’s multiple range t-test)を用いて、群間の差異の有意性を試験した。この際、各群は、コントロール群と比較した。

体重と食物摂取量（食物消費量）の変化
食物摂取量（食物消費量）および体重の変化を、１回目の試験および２回目の試験で各群のマウスで観察した。

結果
マウスの体重の変化
１回目の試験において、ポリア抽出物の経管栄養中の肺癌マウスの体重変化を図１に示す。コントロール群のマウスの体重は、Ｈ４６０肺癌細胞を移植した後に大きく減少した。肺癌細胞移植マウスと比較すると、少ない用量である、ポリア抽出物ＰＣ−Ｃ（４．４ｍｇ／ｋｇ）およびＰＣ−Ｂ（８．８ｍｇ／ｋｇ）のさらなる投与とは、大きな違いがなく、悪液質症候群の改善が見られない。多い用量の群（ＰＣ−Ａ１７．６ｍｇ／ｋｇ）において、体重の減少の有意な減退が見られた。よって、ポリア抽出物は、Ｈ４６０肺癌の移植によって生じる体重の減少を改善することがわかる。

２回目の試験において、異なるポリア抽出物抽出物ＰＣ−Ｄ（８．８ｍｇ／ｋｇ）を用いた肺癌マウスの体重の変化を、図２に示す。図２に示すように、Ｈ４６０肺癌細胞の移植後のコントロール群では、体重は大きく減少している。正常なマウス（Ｈ４６０細胞を移植していないブランク群）のみで、若干の体重の増加が見られた。投与群（ＰＣ−Ｄ群）のマウスは、試験の開始時と同等の体重で、体重の変動がないことがわかる。よって、ポリア抽出物が悪液質の治療に用いることができることが示唆される。

癌を有するマウスの食物摂取量（食物消費量）の変化
ポリア抽出物の経管栄養後の肺癌マウスの食物摂取量（食物消費量）の変化を図３に示す。Ｈ４６０肺癌細胞の移植後、コントロール群におけるマウスの食物摂取量が徐々に減少した。これに反して、肺癌細胞を移植後のポリア抽出物投与群（ＰＣ−Ｄ群）のマウスは、ブランク群（Ｈ４６０肺癌細胞の移植なし）の正常なマウスと同じように、食物摂取量の経時的な減少が見られなかった。これらの２つの群間には食物摂取量の差異がない。よって、ポリア抽出物は、悪液質によって引き起こされる、食物摂取の低下を改善または治療する。

肺癌マウスの血清アルブミン量の変化
１回目の試験および２回目の試験におけるそれぞれの群のマウスの血清アルブミン量の変化を、図４および図５に示す。ブランク群（Ｈ４６０移植なし）と比較して、Ｈ４６０肺癌細胞の移植したコントロール群のマウスは、血清アルブミン量が減少する傾向が見られる。ポリア抽出物投与群（ＰＣ−Ａ、ＰＣ−Ｂ、ＰＣ−Ｃ）では、ラノスタン量が増加するにつれて、血清アルブミン量も増加し、ラノスタン量１７．６ｍｇ／ｋｇであるＰＣ−Ａ群において、アルブミン量の大きな増加が観察される。また、ポリア抽出物投与群ＰＣ−Ｄ（８．８ｍｇ／ｋｇ用量）において、有意な結果が観察される。

動物の体は、肺癌細胞に対して炎症反応を生じ、この反応は肝細胞タンパク質の産生を変化させる。産生が抑制されるタンパク質もあれば、産生が増加するタンパク質（タンパク質の誘導）もある。よって、悪液質を評価するひとつの方法としては、体重と食物摂取量の変化に加えて、血清アルブミンをモニターすることがある。血清アルブミンの減少は、肝細胞中のアルブミン産生に肺癌細胞が影響を及ぼし、結果として、血液へのアルブミンの放出が減少することを意味する。図４および５に示されるように、血中アルブミン量は、悪液質を有するマウスにおいて減少するが、悪液質を有するがポリア抽出物が投与されたマウスでは減少していない。すなわち、ポリア抽出物は悪液質を治療する機能を有する。

実施例８
本実施例では、癌によって引き起こされる悪液質を治療する場合のポリア抽出物のヒトの臨床実験を以下のようにして行う：
（１）患者の全体的な栄養状態の改善の観察、および
（２）患者の体重の改善の観察。

（Ａ）癌患者の群分けおよび薬の投与
体重が減少し続けている１５人の癌患者（内訳：胃癌患者３人、膵臓癌患者３人、結腸直腸癌患者３人、乳癌患者４人、口腔癌患者１人、鼻咽腔癌患者１人）をランダムに、ひとつの群が５人になるように、３つの群に分けた。群Ｉでは、ポリア抽出物（実施例３で調製された抽出物、１６．８ｍｇ／カプセル）を、１日に１カプセルの少ない用量で、投与した。群ＩＩでは、ポリア抽出物（実施例３で調製された抽出物、１６．８ｍｇ／カプセル）を、１日に２カプセルと、より多い用量で、投与した。群ＩＩＩでは、ポリア抽出物を投与せず、コントロール群として化学療法薬を投与した。

（Ｂ）治療セグメント（ｓｅｇｍｅｎｔ）
６週間の化学療法を受けた１５名の患者において、群ＩおよびＩＩの患者には４週間ポリア抽出物を投与し（５週間目、６週間目は化学療法のみ）、体重および栄養評価を毎週記録した。

（Ｃ）結果（１）：体重の維持／改善効果
体重の改善が観察され、治療完了時（６週間または４２日目）と、治療後１日目と、の体重を比較し、結果を下記表４に示す：

表４の結果から、化学療法／ポリア抽出物投与群において、体重の維持または改善が、ＩＩＩ群（ポリア抽出物なしの化学療法のみ）に比べて優れていることがわかる。群ＩＩＩでは、治療後１日目よりも低い体重である、体重の減少が観察された。

（Ｄ）結果（２）：患者の全体的な栄養状態の改善効果
患者の全体的な栄養状態の評価は、臨床医に用いられているＰＧ−ＳＧＡ（Ｐａｔｉｅｎｔ−ＧｅｎｅｒａｔｅｄＳｕｂｊｅｃｔｉｖｅＧｌｏｂａｌＡｓｓｅｓｓｍｅｎｔ：患者発症関連全体評価）法に従って行った。Ｉ〜ＩＩＩ群の患者は、図６、７および８に示されるように、（１）体重の改善、（２）食物摂取量（食物消費量）の改善、（３）症状の軽減および（４）身体的活動の改善、の全体のスコアを加算することで評価した。図６は、Ｉ群（化学療法＋ポリア抽出物１カプセル）で観察された結果を、図７は、ＩＩ群（化学療法＋ポリア抽出物２カプセル）で観察された結果を、および図８は、ＩＩＩ群（コントロール群、化学療法）で観察された結果を、それぞれ、示す。ＰＧ−ＳＧＡのスコアが低いほど、患者が改善し、全体的な傾向は健康に向かっていることを示す。

これらの治療結果から、化学療法薬と併用してポリア抽出物を投与された群は、悪液質患者の健康／生活の質において、化学療法群よりも、有意に改善されており、統計的に有意な意味（有意差）がある。

この実施例の結果によれば、ポリア抽出物と化学療法薬とを併用することで、癌患者の体重減少を抑制し、さらに、化学療法のみが行なわれた患者の場合と比べて、患者の全体的な栄養状態の改善が有意に優れていることが分かる。

本発明は、明細書中、好ましい実施例を開示したが、後述する請求項に定義された本発明の概念または背景により、開示された実施例を種々の変更および修飾が可能であることは理解されうる。

Claims

下記式（Ｉ）：
ただし、Ｒ_１は、−Ｈまたは−ＣＨ_３であり；Ｒ_２は、−ＯＣＯＣＨ_３、＝Ｏまたは−ＯＨであり；Ｒ_３は、−Ｈまたは−ＯＨであり；Ｒ_４は、−Ｃ（＝ＣＨ_２）−Ｃ（ＣＨ_３）_２Ｒ_ａ（この際、Ｒ_ａは、−Ｈまたは−ＯＨである）または−ＣＨ＝Ｃ（ＣＨ_３）Ｒ_ｂ（この際、Ｒ_ｂは、−ＣＨ_３または−ＣＨ_２ＯＨである）である；Ｒ_５は、−Ｈまたは−ＯＨであり；およびＲ_６は、−ＣＨ_３または−ＣＨ_２ＯＨである、
で示されるラノスタン化合物またはその薬理上許容される塩を哺乳動物における癌悪液質を予防または治療するのに有効な量を含み、
ポリア抽出物の重量に対して、１〜６０重量％の前記式（Ｉ）のラノスタン化合物またはその薬理上許容される塩を含むポリア抽出物(Poria extract)を、前記式（Ｉ）のラノスタン化合物の供給源として含み、
前記ポリア抽出物は、セコラノスタン(secolanostane)を含まない、
哺乳動物における癌悪液質を予防または治療するための薬剤。
前記式（Ｉ）のラノスタン化合物は、下記式：
を有する化合物から選択される少なくとも１種である、請求項１に記載の薬剤。
さらに製薬上許容できる担体または希釈剤を含む、請求項１または２に記載の薬剤。
経口投与される、請求項１〜３のいずれか１項に記載の薬剤。
前記哺乳動物がヒトである、請求項１〜４のいずれか１項に記載の薬剤。
前記ポリア抽出物が、ポリア抽出物の重量に対して、５〜３５重量％の前記式（Ｉ）のラノスタン化合物を含む、請求項１〜５のいずれか１項に記載の薬剤。
前記癌が、肺癌、胃癌、膵臓癌、結腸直腸癌、乳癌、口腔癌、または上咽頭癌である、請求項１〜６のいずれか１項に記載の薬剤。
式（Ｉ）のラノスタン化合物またはその薬理上許容される塩は、８．４〜３３．６ｍｇ／日の量でヒトに投与される、請求項１〜７のいずれか１項に記載の薬剤。
前記ポリア抽出物は、下記の工程：
ａ）水、メタノール、エタノールまたはこれらの混合溶媒によって、マツホド(Poliacocos(Schw) Wolf)の代謝産物、発酵産物または菌核粒子(sclerotium)を抽出する工程と、
ｂ）前記ａ）工程から得られた液体抽出物を濃縮する工程と、
ｃ）前記ｂ）工程から得られた濃縮物をシリカゲルカラムに導入する工程と、
ｄ）極性の低い溶離液で前記シリカゲルカラムを溶出し、溶出液を集める工程と、
ｅ）前記溶出液を濃縮して、溶出濃縮物を形成する工程と、
を含む方法によって準備され、
前記ａ）工程における抽出は、９５％エタノールを用いることによって行われる、またはPoria cocos (Schw) Wolfの代謝産物、発酵産物または菌核粒子を熱湯または沸騰水で抽出して抽出物水溶液を得；ｐＨが９〜１１になるまで、得られた抽出物水溶液に塩基を添加して塩基性水溶液を得；かかる塩基性水溶液を回収し、ｐＨを４〜７になるまで、この塩基性水溶液に酸を添加して沈殿物を形成し；かかる沈殿物を回収して；エタノールで沈殿物を抽出し；抽出物溶液を回収することを有する、請求項１〜８のいずれか１項に記載の薬剤。