JP5288678B2

JP5288678B2 - レニンインヒビター、カルシウムチャネルブロッカーおよび利尿薬を含む医薬組成物

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Publication number: JP5288678B2
Application number: JP2004505094A
Authority: JP
Inventors: デイビッド・ルイス・フェルドマン; ランディ・リー・ウェブ
Original assignee: ノバルティスアーゲー
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Filing date: 2003-05-16
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Description

発明の詳細な説明

レニン・アンギオテンシン系（ＲＡＳ）は、分子量の大きな前駆体アンギオテンシノーゲン、２つのプロセシング酵素、レニンおよびアンギオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）、および血管作動性メディエーターであるアンギオテンシンＩＩ（ＡｎｇＩＩ）からなる、複雑なホルモン系である（Ｊ. Ｃardiovasc. Ｐharmacol.、１５（Ｓupp Ｂ）（１９９０） p. Ｓ１−Ｓ５）。酵素であるレニンは、アンギオテンシノーゲンの開裂によりデカペプチドであるアンギオテンシンＩを生じる反応を触媒し、アンギオテンシンＩはそれ自体の生物活性は最小限であり、ＡＣＥにより活性オクタペプチドであるＡｎｇＩＩに変換される。ＡｎｇＩＩは心血管系において、血管収縮、交感神経系の活性化、アルドステロン産生刺激、抗ナトリウム利尿、血管成長刺激（すなわち、平滑筋細胞増殖の刺激、および血管壁における過剰の細胞外マトリックス物質の沈着）、および心臓成長の刺激をはじめとする多様な生物作用を有する。ＡｎｇＩＩは昇圧ホルモンとして機能し、またいくつかの型の高血圧症の病態生理学に関与している。

アンギオテンシンＩＩの血管収縮作用は、非横紋筋平滑筋細胞、アドレナリン作動性ホルモンであるエピネフリンおよびノルエピネフリンの形成刺激、ならびにノルエピネフリン形成により引き起こされる交感神経系の活性上昇に対する作用により生じる。アンギオテンシンＩＩはまた、電解質バランスに影響を及ぼし、たとえば腎臓において抗ナトリウム利尿作用および抗利尿薬作用を示し、これにより一方では下垂体からのバソプレシンペプチドの放出、他方では副腎皮質球状帯からのアルドステロンの放出が促進される。これらの影響はすべて、血圧の調節、循環体積および末梢抵抗の両方を増加させるといった重要な役割を担う。アンギオテンシンＩＩはまた、細胞の増殖および移動、そして細胞外マトリックス形成に関与している。

アンギオテンシンＩＩは、標的細胞の表面上の特定の受容体と相互作用する。たとえばＡＴ１およびＡＴ２受容体と呼ばれる受容体サブタイプの同定が可能になっている。近年ではＡＴ１受容体に結合する物質の同定に向けて多大な努力が払われている。このような活性成分は、しばしばアンギオテンシンＩＩアンタゴニストと呼ばれる。このようなアンタゴニストはＡＴ１受容体を阻害するために、その他の適用のうちで、たとえば抗高血圧薬として、またはうっ血性心不全の処置のために使用し得る。従って、アンギオテンシンＩＩアンタゴニストはＡＴ１受容体サブタイプに結合する活性成分であると理解される。

レニン・アンギオテンシン系のインヒビターは、血圧を低下させる薬物として周知であり、たとえばＮ. Ｅng. Ｊ. Ｍed. ３１６、２３（１９８７） p. １４２９−１４３５に記載のように、高血圧およびうっ血性心不全において有益な作用を示す。レニン・アンギオテンシン系のインヒビターとして多数のペプチドおよび非ペプチドインヒビターが知られているが、最も広く研究されているのはＡＣＥインヒビターであり、これにはカプトプリル、エナラプリル、リシノプリル、ベナゼプリルおよびスピラプリルなどの薬物が含まれる。ＡＣＥインヒビターの主要な作用様式は、血管収縮ペプチドＡｎｇＩＩの形成阻止を含むが、Ｈypertension、１６、４（１９９０） p. ３６３−３７０では、ＡＣＥが血管作動性ペプチドであるブラジキニンおよびサブスタンスＰをはじめとする種々のペプチド基質を開裂させることが報告されている。ＡＣＥインヒビターによるブラジキニン分解の阻止が示されており、Ｃirc. Ｒes.、６６、１（１９９０） p. ２４２−２４８では、ある条件下におけるＡＣＥインヒビターの活性がＡｎｇＩＩ形成の阻止よりもむしろブラジキニンレベルの上昇により媒介されていると報告されている。結局のところ、ＡＣＥインヒビターの作用は、単にアンギオテンシン形成の形成阻止と、それに続くレニン・アンギオテンシン系の阻害によるものと推定することはできない。アンギオテンシンＩのアンギオテンシンＩＩへの変換の阻害、またはＡＴ１受容体の遮断に加えて、ＲＡＳはその経路の最初の部分を停止させることができる。この最初のステップ（すなわち、アンギオテンシノーゲンのアンギオンテンシンＩへの変換）は、レニンにより媒介され、レニンインヒビター（ＲＩ）により阻害できる。レニンインヒビターは、カスケードの律速段階に作用するため、アンギオテンシンＩＩの形成を完全に停止させる。アンギオテンシンＩＩの形成はＲＩにより実質的に完全に遮断されるため、これらの薬物はＡＣＥインヒビターまたはＡＴ１受容体ブロッカーよりも優れた効力があると証明できる。さらに、それらの特異性が高いために、ＲＩの副作用はＡＣＥインヒビターよりも少ない。このようなＲＩの一つは、アリスキレンである。その他、デチキレン、テルラキレンおよびザンキレンがある。

アリスキレンは次の化学式（Ｉ）を有する。

この化学式（Ｉ）のレニンインヒビターは、化学的には２（Ｓ）,４（Ｓ）,５（Ｓ）,７（Ｓ）−Ｎ−（３−アミノ−２,２−ジメチル−３−オキソプロピル）−２,７−ジ（１−メチルエチル）−４−ヒドロキシ−５−アミノ−８−［４−メトキシ−３−（３−メトキシ−プロポキシ）フェニル］−オクタンアミドと定義され、ＥＰ６７８５０３Ａに詳しく開示されている。特に好ましいのは、そのヘミフマル酸塩である。

高血圧症ならびにそれに関連する疾病および病状の処置における欠点は、単独療法が多くの場合、薬理学的に誘導される血圧低下とは反対に作用する、代償性反射を刺激するということである。この代償は降圧作用を妨げる傾向がある。従って、この適用のためのさらなる処置方法の開発が望まれる。

本発明は、（ｉ）レニンインヒビター、（ｉｉ）カルシウムチャネルブロッカー（ＣＣＢ）、および（ｉｉｉ）利尿薬、または、必要に応じて、各々の場合においてその医薬上許容される塩を含む医薬組成物であって、特に前記または後記の疾病または病状の処置のための医薬組成物に関する。

同様に本発明は、（ｉ）レニンインヒビター、（ｉｉ）カルシウムチャネルブロッカー（ＣＣＢ）、および（ｉｉｉ）利尿薬、または、必要に応じて、各々の場合においてその医薬上許容される塩の、前記または後記の疾病または病状の処置のための医薬を製造するための使用に関する。

同様に本発明は、ヒトを含む動物に治療上有効な量の（ｉ）レニンインヒビター、（ｉｉ）カルシウムチャネルブロッカー（ＣＣＢ）、および（ｉｉｉ）利尿薬、または、必要に応じて、各々の場合においてその医薬上許容される塩を投与することを含む、前記または後記の疾病または病状の処置のための方法に関する。

さらに本発明は、（ｉ）レニンインヒビターまたはその医薬上許容される塩の医薬組成物、（ｉｉ）カルシウムチャネルブロッカー（ＣＣＢ）またはその医薬上許容される塩の医薬組成物、および（iii ）利尿薬またはその医薬上許容される塩の医薬組成物を、成分（ｉ）〜（ｉｉｉ）の２つまたは３つの個別単位の形態で含む、パーツのキットに関する。

本発明によれば、レニンインヒビター（ｉ）はアリスキレン、デチキレン、テルラキレン、およびザンキレンからなる群から選択され；ＣＣＢ（ｉｉ）はアムロジピン、フェロジピン、イスラジピン、ラシジピン、ニカルジピン、ニフェジピン、ニグルジピン、ニルジピン、ニモジピン、ニソルジピン、ニトレンジピン、ニバルジピン、リョシジン（ryosidine）、アニパミル、ジルチアゼム、フェンジリン、フルナリジン、ガロパミル、ミベフラジル、プレニラミン、チアパミルおよびベラパミルからなる群から選択され；および利尿薬（ｉｉｉ）はブメタニド、エタクリン酸、フロセミド、トルセミド、アミロリド、スピロノラクトン、トリアムテレン、クロロサリドン、クロロチアジド、ヒドロクロロチアジド、ヒドロフルムチアジド、メチルクロチアジド、メトラゾン、およびジクロルフェナミドおよびまたアミロリドからなる群から選択される。各々の場合において、必要に応じて、たとえばヒドロクロロチアジドの場合のようにそれ自体医薬上許容される塩としては存在しない場合、これらの化合物はまた、それらの医薬上許容される塩も包含する。

一般名または商標名により識別される活性物質の構造は、最新版の標準概論「ザ・メルク・インデックス（The Merck Index）」または、たとえばライフサイクル・パテンツ・インターナショナル（LifeCycle Patents International）（たとえばIMS World Publications）などのデータベースから検出し得る。その相当する内容は、出典明示により本明細書の一部とする。当業者ならば、活性物質を十分に確認でき、また、これらの参考文献に基づいて、同様に製造し、インビトロ（in vitro）およびインビボ（in vivo）の双方において標準的なテストモデルで医薬品の適応および特性を試験することができる。

本発明はさらに、心不全（（急性および慢性）うっ血性心不全など）、左心室機能障害および肥大型心筋症、糖尿病性心筋症、上室性および心室性不整脈、心房細動、心房粗動または有害な血管再構築の処置のための前記の医薬組成物に関する。さらに、本発明の組み合わせ、および特にアリスキレン、とりわけそのヘミフマル酸塩、アムロジピン、とりわけそのマレイン酸塩、またはより好ましくはそのベシル酸塩と、ヒドロクロロチアジド（ＨＣＴＺ）との組み合わせは、心筋梗塞およびその続発症の処置および予防に有益であることが分かっている。このような併用療法はまた、アテローム性動脈硬化症、アンギナ（angina）（安定性または不安定性）、および腎不全（糖尿病性および非糖尿病性）の処置に有用である。さらに、このような併用療法は、内皮機能障害を改善でき、それにより心不全、狭心症（angina pectoris）および糖尿病などの、正常な内皮機能が障害されている疾病において利益をもたらす。さらに本発明の組み合わせは、続発性アルドステロン症、原発性および続発性肺高血圧症、腎不全症状（糖尿病性ネフロパシー、糸球体腎炎（ＩｇＡネフロパシーを含む）、腎繊維症、強皮症、糸球体硬化症、腎臓疾患のタンパク尿など）、およびまた、腎血管性高血圧症、糖尿病性網膜症の処置または予防、他の血管障害（片頭痛、末梢血管障害、レイノー病、管腔過形成など）、認知機能障害（アルツハイマー病など）、緑内障および脳卒中、肺および肝繊維症、ＴＧＦ−βにより誘発される過剰の細胞外マトリックスの蓄積によりもたらされる繊維症、および平滑筋細胞の増殖性疾患（子宮筋腫など）の管理のために使用し得る。

さらに本発明は、高血圧症、心不全（（急性および慢性）うっ血性心不全など）、左心室機能障害および肥大型心筋症、糖尿病性心筋症、上室性および心室性不整脈、心房細動、心房粗動、有害な血管再構築、心筋梗塞およびその続発症、アテローム性動脈硬化症、アンギナ（angina）（不安定性または安定性）、腎不全（糖尿病性および非糖尿病性）、心不全、狭心症（angina pectoris）、糖尿病、続発性アルドステロン症、原発性および続発性肺高血圧症、腎不全症状（糖尿病性ネフロパシー、糸球体腎炎（ＩｇＡネフロパシーを含む）、腎繊維症、強皮症、糸球体硬化症、腎臓疾患のタンパク尿など）、およびまた、腎血管性高血圧症、糖尿病性網膜症からなる群から選択される病状または疾病の処置、他の血管障害（片頭痛、末梢血管障害、レイノー病、管腔過形成など）、認知機能障害（アルツハイマー病など）、緑内障および脳卒中、肺および肝繊維症、ＴＧＦにより誘発される過剰の細胞外マトリックスの蓄積によりもたらされる繊維症、および子宮をはじめとする平滑筋細胞の増殖性疾患の管理のための方法に関し、その方法は、このような処置を必要とする哺乳類に、治療上有効な量の（ｉ）レニンインヒビター、（ｉｉ）ＣＣＢ、および（ｉｉｉ）利尿薬、またはその医薬上許容される塩および医薬上許容される担体の組み合わせを投与することを含む。レニンインヒビターはアリスキレン、ＣＣＢはアムロジピン、および利尿薬はＨＣＴＺであることが好ましい。

同様に本発明は、（ｉ）レニンインヒビター、（ｉｉ）ＣＣＢ、および（ｉｉｉ）利尿薬の、またはその医薬上許容される塩の組み合わせの、前記または後記の疾病または病状の処置のための使用に関する。

本明細書および特許請求の範囲にわたり使用されているように、「処置」とは、関連技術分野で知られている種々の処置形態または様式のすべてを包含し、特に予防的、治癒的および緩和的処置を包含する。

利尿薬はＲＡＳを活性化し、従ってレニンインヒビター（ＲＩ）によるＲＡＳの阻害をより効果的にする。利尿薬によりその活性が増強されるＲＩにＣＣＢを加えると、たとえば、ＲＡＳとは別のメカニズムにより血圧が降下する。ＣＣＢは（ｉ）ＴＧＦ−βおよびα平滑筋細胞のアクチンの、糸球体発現の阻害（Ｎephron ２０００Ｎov;８６（３）:３１５−２６）、および（ｉｉ）複数の細胞シグナル経路を阻害することにより、増殖阻害活性を示す（ＪＨypertens ２００２Ｊan;２０（１）:９５−１０２）ことを介して、少なくとも部分的に腎臓保護作用があることが示されている。

驚くべきことに、本発明の異なるメカニズムの組み合わせの使用が、抗高血圧処置の単独療法により刺激されている代償性血圧制御メカニズムの活性化を回避する機会を最大にすることが見出されている。意外にも、ＲＡＳの阻害はこの系が活性化されている際に最も効果的である。従って、この系のブロッカーをＲＡＳの緩やかな活性化剤と同時に投与すれば、ＲＡＳのより強い薬理学的阻害を達成することができる。このようなＲＡＳの活性化は、カルシウムチャネルブロッカーと利尿薬を用いて達成することができる。加えて、これらの治療法は単独でもそれぞれが抗高血圧作用を有する。この組み合わせでのＲＩの使用は、最も効果的で完全なＲＡＳの阻害を提供する。二元の組み合わせに対する三元の組み合わせの予想外の利点は、（ｉ）降圧作用の増強および（ｉｉ）レニンインヒビター（利尿薬により増強）およびＣＣＢの併用作用を介するより効果的な抗増殖作用である。これらの両活性は組織保護の増強を示すことになる。二元の組み合わせを超える、増強された活性および利点は、三成分間の相互作用を増大させるか、あるいは相乗効果さえももたらす。さらに、組み合わせ相手の用量はより低い用量を使えるため、副作用をより少なくできることが明らかである。たとえば、併用投与する場合には個々の成分の用量を２〜７分の１または３〜７分の１、４〜７分の１、５〜７分の１または６〜７分の１に減らすことができ、また、個々の薬物と比較してもなお、それに匹敵する降圧活性を示す。ヒトにおける、二元の組み合わせに対する三元の組み合わせの優位性または驚くべき利点は、たとえば降圧、左心室性肥大、腎臓保護（たとえば、タンパク尿の正常化、改善、または悪化の遅延；糸球体濾過率またはクレアチニンクリアランスの低下の緩徐化、血清クレアチニンの倍増の遅延）に対する組み合わせの利点を試験することによって示すことができる。

長期の、制御できない高血圧性血管疾患は、最終的には心臓および腎臓などの標的臓器における種々の病理変化をもたらす。糖尿病があると、これらの病変は悪化する。高血圧が持続すれば、脳卒中の発生率もまた増加する。従って、組み合わせ療法の利点に対するさらなる洞察を得るには、抗高血圧療法の有効性の評価、降圧作用の終点を超える、さらなる心臓血管終点の評価の必要性が非常に高い。高血圧性血管疾患の特性は多因子性であることである。ある状況下では、異なる作用機構の薬物が組み合わせられてきた。しかし、異なる作用様式の薬物の任意の組み合わせを単に使用するだけでは、必ずしも有益な作用を持つ組み合わせにつながるとは限らない。

増強作用とは、ある薬物の生物作用がもう一つの薬物によって増強され、個々の薬物の作用と比較して相加的または相加的生物作用よりも強い作用を生じることである。一方、相乗作用とは、ある薬物の生物作用がもう一つの薬物によって増強され、個々の成分の作用を加えることにより予想された生物作用よりも、より強い生物作用を生じることである。

ある一つの態様において本発明は、（ｉ）アリスキレン、（ｉｉ）アムロジピン、および（ｉｉ）ヒドロクロロチアジド（ＨＣＴＺ）またはその医薬上有効な塩を含む医薬組成物に関する。

もう一つの実施形態において本発明は、（ｉ）アリスキレン、とりわけそのヘミ−フマル酸塩、アムロジピン、とりわけそのマレイン酸塩または、より好ましくはそのベシル酸塩、およびＨＣＴＺを含む医薬組成物を投与することにより、心臓および腎臓に関連する病状を処置する方法に関する。

組み合わせる化合物は、医薬上許容される塩として存在し得る。これらの化合物が、たとえば、少なくとも一つの塩基性中心を持つ場合は、それらは酸付加塩を形成し得る。相当する酸付加塩はまた、所望により、付加的に存在する塩基性中心を有するように形成し得る。少なくとも一つの酸性基（たとえば、ＣＯＯＨ）を有する化合物はまた、塩基を伴って塩を形成し得る。化合物が、たとえばカルボキシ基およびアミノ基の両方を含む場合は、さらに相当する内部塩基を形成してもよい。

驚くべきことに、アリスキレン、アムロジピン、およびＨＣＴＺの組み合わせは、これらの薬物をそれぞれ単独で投与するよりも優れた治療効果を示すことを見出した。優れた有効性はまた、作用時間の延長としても証明することができる。作用時間は、次の投与の前に基準値に戻る時間、または濃度曲線下面積（ＡＵＣ）としてモニタリングでき、ミリメートル水銀柱での血圧の変化（ｍｍＨｇの変化）および作用時間（分、時間または日）の積として表される。

さらなる利点は、本発明に従って組み合わせられる個々の薬物は低用量を用いて用量を減らすことができ（たとえば、しばしば低用量しか必要としないだけでなく、投与頻度も頻繁でなくてよい）、また副作用の発現率を減らすことができる。アリスキレン、アムロジピン、およびＨＣＴＺまたはその医薬上許容される塩の組み合わせ投与は、さらに多くの処置患者において有意な応答をもたらし、すなわちこれは病状の根底にある病因にかかわらず、応答率がより高いことを示す。これは、処置される患者の要望および要求に合致している。

アリスキレン、とりわけそのヘミフマル酸塩、アムロジピン、とりわけそのマレイン酸塩または、より好ましくはそのベシル酸塩、およびＨＣＴＺを用いる組み合わせ療法は、改善された有効性ならびに応答率の高さにより、より効果的な抗高血圧療法（悪性、本態性、腎血管性、糖尿病性、孤立性収縮期高血圧または他の続発型の高血圧症）をもたらす。この組み合わせはまた、心不全（（急性および慢性）うっ血性心不全など）、左心室機能障害および肥大型心筋症、糖尿病性心筋症、上室性および心室性不整脈、心房細動、心房粗動または有害な血管再構築の処置または予防に有用である。さらに、アリスキレン、アムロジピン、およびＨＣＴＺを用いる組み合わせ療法は心筋梗塞およびその続発症の処置および予防に有益であることが分かっている。アリスキレン、アムロジピン、およびＨＣＴＺを用いる組み合わせ療法はまた、アテローム性動脈硬化症、アンギナ（angina）（安定性または不安定性）、および腎不全（糖尿病性および非糖尿病性）の処置で有用である。さらに、アリスキレン、アムロジピン、およびＨＣＴＺを用いる組み合わせ療法は、内皮機能障害を改善でき、それにより心不全、狭心症（angina pectoris）および糖尿病などの、正常な内皮機能が障害されている疾病において利益をもたらす。さらに、本発明の組み合わせは、続発性アルドステロン症、原発性および続発性肺高血圧症、腎不全症状（糖尿病性ネフロパシー、糸球体腎炎（ＩｇＡネフロパシーを含む）、腎繊維症、強皮症、糸球体硬化症、腎臓疾患のタンパク尿など）、およびまた、腎血管性高血圧症、糖尿病性網膜症の処置または予防、他の血管障害（片頭痛、末梢血管障害、レイノー病、管腔過形成など）、認知機能障害（アルツハイマー病など）、緑内障および脳卒中、肺および肝繊維症、ＴＧＦ−βにより誘発される過剰の細胞外マトリックスの蓄積によりもたらされる繊維症、および平滑筋細胞の増殖性疾患（子宮筋腫など）の管理のために使用し得る。

当業者ならば、前記または後記に示される治療適用における、本発明の組み合わせの有効性を証明するための関連試験モデルを十分選択することができる。典型的な試験としては、以下の方法を適用してアリスキレン、とりわけそのヘミフマル酸塩、アムロジピン、とりわけそのマレイン酸塩または、より好ましくはそのベシル酸塩、およびＨＣＴＺの組み合わせを用いて行う。

本組み合わせの利点は、たとえば、臨床研究または原則的に以下に記載される試験方法において証明される。発明者らの組み合わせを試験するために好適な多くの臨床研究プロトコールが当業者に公知である。発明者らの新規なる組み合わせの予想外の利点を証明するために有用な臨床治験の例は、Ｎussberger Ｊ. et al. （Ｈypertension ２００２Ｊan;３９（１）:Ｅ１−８）に記載されている。本明細書に記載の発明者らの好ましい組み合わせでも、同じプロトコールが実施される。このプロトコールは、出典明示により本明細書の一部とする。

薬物の有効性は、以下に示すものをはじめとする種々の動物モデルにおいて、次に述べるおおよその用量を用いて評価する。アリスキレンは皮下埋植型の浸透圧ミニポンプによりおよそ１〜２００ｍｇ／ｋｇ／日（単独療法）、およびおよそ１〜７５ｍｇ／ｋｇ／日（組み合わせ療法）で投与する。アムロジピンおよびＨＣＴＺは、単独または組み合わせ療法ともに７５ｍｇ／ｋｇ／日以下の用量を経口投与する。

薬物の有効性を評価するのに用いられる動物モデルとしては、デオキシコルチコステロン酢酸塩ラット（ＤＯＣＡ塩）および自然発生高血圧ラット（ＳＨＲ）モデルがあり、通常の塩の飼料または塩付加（ラット飼料中４〜８％の塩濃度、または飲料水中１％ＮａＣｌ）のいずれかで飼育する。ＤＯＣＡ塩試験モデルには、急性または慢性試験プロトコールを利用する。急性試験法には、大腿動脈および静脈カテーテルを留置したラットを用い、６時間にわたる種々の試験物質の作用の評価が含まれる。この急性試験法では、ＤＯＣＡ塩高血圧症が確立された段階における試験物質の降圧能力を評価する。これに対して、慢性試験法では、ＤＯＣＡ塩高血圧症の進行段階における試験物質の、血圧上昇を予防または遅延させる能力を評価する。従って、慢性試験法では無線送信機を用いて血圧をモニタリングすることになる。この無線送信機は、ＤＯＣＡ塩処置開始、つまり高血圧誘発に先立って、ラットの腹大動脈中に外科的に埋め込む。血圧は、６週間まで継続的にモニタリングする（ＤＯＣＡ塩投与約１週間前およびその後５週間）。

酸素吸入剤中２〜３％イソフルレン、次いでアミタールナトリウム（アモバルビタール）１００ｍｇ／ｋｇの腹腔内投与により、ラットを麻酔する。麻酔レベルは、安定で周期的な呼吸パターンから評価する。

急性試験法：
ＤＯＣＡ埋植の際に、ラットの片側の腎臓を摘出する。左横腹および頚背部の体毛を刈り込み、滅菌アルコール消毒綿およびポビドンヨードで拭う。外科手術中は、体温を３７℃に維持するためにラットを電気座布団上に置く。

皮膚およびその下の筋肉を２０ｍｍ切開して、左側の腎臓を露出させる。腎臓の周囲組織を除去し、体外に出して２本の結紮糸（３−０絹糸）で腎臓動脈および動脈に接合する静脈の近傍をしっかりと縛る。次いで、この腎臓動脈および静脈を切断し、腎臓を摘出する。筋肉および皮膚の創傷は４−０絹ストゥーレおよびステンレススチール製の創傷クリップで閉じる。同時に、頚背部を１５ｍｍ切開して、酢酸デオキシコルチコステロン（１００ｍｇ／ｋｇ）を含有する３週間放出ペレット（Ｉnnovative Ｒesearch of Ａmerica、Ｓarasota、Ｆlorida）を皮下に埋め込む。次いで創傷をステンレススチール製クリップで閉じ、両方の創傷をポビドンヨードで処置する；ラットには、術後にプロカイン・ペニシリンＧ（１００,０００単位）の筋肉内注射、およびブプレノルフィン（０.０５〜０.１ｍｇ／ｋｇ）の皮下注射を行う。このラットを直ちに１％ＮａＣｌ＋０.２％ＫＣｌ飲料水で飼育する；この処置は動物が高血圧症を発症し、実験に使用できるようになるまでの少なくとも３週間は継続する。

実験の４８時間前に動物をイソフルレンで麻酔し、動脈圧測定、血液採取および試験化合物の投与のために、大腿動脈および静脈にカテーテルを埋め込む。ラットは実験用チェンバーともなるＰlexigiasホームケージにつないで、４８時間回復させる。

慢性試験法：
この方法は、片側性の腎臓切除術およびＤＯＣＡならびに塩処置の開始から７〜１０日前にラットに無線通信機を埋め込むこと以外は、前記の方法と同様である。これに加えて、ラットには大腿動脈および静脈カテーテル留置のための外科手術は行わない。無線通信機は、Ｍ.Ｋ. Ｂazil、Ｃ. Ｋrulan and Ｒ.Ｌ. Ｗebb.、Ｔelemetric monitoring of cardiovascular parameters in conscious spontaneously hypertensive rats、Ｊ.Ｃardiovasc. Ｐharmacol. ２２: ８９７−９０５、１９９３に記載されたように埋め込む。

次いで、所定の時間点での血圧測定、心拍数などの測定のために、コンピューター上でプロトコールをセットアップする。種々の時間点において、および種々の時間間隔にわたって基準データを収集する。たとえば、基準値または投与前の値は、通常、データ収集および薬物投与前の３つの連続する２４時間の値の平均からなる。

血圧、心拍数および活性は、薬物投与前、投与期間中および投与後のあらかじめ選択された種々の時間点において測定する。測定はすべて、拘束・阻害のない動物で行う。バッテリーの寿命により決定される最も長い試験期間は、９ヶ月となる可能性がある。

さらに、アムロジピンおよびＨＣＴＺと組み合わせたアリスキレンの作用を試験するためにＳＨＲを用いる。ＳＨＲの高血圧症のバックグラウンドは、ＳＨＲにおいてレニン・アンギオテンシン系（ＲＡＳ）を抑制するための慢性的な塩負荷、またはＲＡＳを活性化するための慢性的な塩枯渇のいずれかにより改変されている。これらの操作は種々の試験物質の有効性をより広範囲に評価するために行われる。自然発生高血圧ラット（ＳＨＲ）で行う実験では、これらの動物はＴaconic Ｆarms、Ｇermantown、Ｎew Ｙork （Ｔac:Ｎ（ＳＨＲ）fＢＲ）から供給される。無線遠隔計測用装置（Ｄata Ｓciences Ｉnternational、Ｉnc.、Ｓt. Ｐaul、Ｍinnesota）を、１４〜１６週令のすべての試験動物の下部腹大動脈に埋め込む。外科的埋植術後、実験開始まで少なくとも２週間、すべてのＳＨＲを回復させる。無線送信機を通して心血管系パラメータを持続的にモニタリングし、受信機に伝達し、そこでデジタル化信号を収集し、コンピューター化データ取得システムを用いて蓄積する。血圧（平均動脈圧、収縮期圧、拡張期圧）および心拍数は覚醒下、ホームケージ中で自由に動き、阻害のないＳＨＲにおいてモニタリングする。動脈血圧および心拍数は、１０分毎に１０秒間計測し、記録する。それぞれのラットについて記録されたデータは、２４時間の間の平均値を表し、１４４の１０分間サンプルを毎日収集する。血圧および心拍数の基準値は、薬物処置を開始する前の３つの連続する２４時間の計測値の平均からなる。すべてのラットは温度および湿度を制御され、１２時間の明暗サイクルで維持されている部屋に個々に収容する。

心血管系パラメータに加えて、体重の週毎の測定値も、すべてのラットについて記録する。処置薬は、飲料水中に混ぜて、毎日の強制経口投与を介して、または前記の浸透ミニポンプで投与する。飲料水に混ぜて投与する場合は、摂水量を１週間に５回測定する。次いで個々のラットの薬物用量を、各々のラットの摂水量、飲料水中の薬物濃度、および個々の体重をもとにして計算する。飲料水中の薬物溶液はすべて、３日〜４日毎に新しく調製する。

慢性試験の終了時に、ＳＨＲまたはＤＯＣＡ塩ラットを麻酔して心臓を迅速に摘出する。心房の付属器を分離、除去した後、左心室および左＋右心室（合計）の重量を測り、記録する。次いで左心室および合計重量を体重に対してノーマライズし、記録する。血圧および心臓重量に関して記録されたすべての値は群平均±標準誤差として表す。

組み合わせの有利な作用を評価するために、処置後に血管機能および構造を評価する。Ｉntengan ＨＤ、Ｔhibault Ｇ、Ｌi ＪＳ、Ｓchiffrin ＥＬ、Ｃirculation １９９９、１００（２２）: ２２６７−２２７５により記載された方法に従って、ＳＨＲを用いて試験する。同様に、ＤＯＣＡ塩ラットにおける血管機能を評価する方法は、Ｉntengan ＨＤ、Ｐark ＪＢ、Ｓchiffrin、ＥＬ、Ｈypertension、１９９９,３４（４Ｐart ２）: ９０７−９１３に記載されている。

糖尿病性腎疾患を阻害するための薬物有効性を、自然発生糖尿病（db／db）マウス（Ｚiyadeh Ｆ，Ｈoffman Ｂ，Ｈan Ｄ，Ｉglesias−de la Ｃruz Ｍ，Ｈong Ｓ，Ｉsono Ｍ，Ｃhen Ｓ，ＭcＧowan Ｔ，Ｓharma Ｋ. Ｌong−term prevention of renal insufficiency、excess matrix gene expression、and glomerular mesangial matrix expansion by treatment with monoclonal antitransforming growth factor−β antibody in db／db diabetic mice. Ｐroc Ｎatl Ａcad Ｓci. ２０００;９７:８０１５−８０２０）をはじめとする種々の動物モデルにおいて評価する。db／dbマウスは、広く使用されている非インスリン依存性糖尿病（２型糖尿病）に見られる腎糸球体障害のモデルである。マウスを毎日ビヒクル、単独療法または組み合わせ療法で処置する。試験期間中を通して２週間毎に、尿を採取して尿中アルブミン排泄を測定する。実験の終わりに、血液を採取して血漿クレアチニンレベルを測定する。腎臓は、in situで潅流固定により保存する。それらを除去し、腎臓病変を光学顕微鏡および画像解析装置により定量的に評価する。薬物の有効性は、（ｉ）尿中アルブミン排泄、（ｉｉ）血漿クレアチニンの減少（ビヒクル対照に対して）、および（ｉｉｉ）腎糸球体硬化症の阻害により判定される。

腎繊維症を阻害するための薬物有効性は、ラットの片側性尿管閉塞モデル（Ｉshidoya、Ｓ; Ｍorrissey、Ｊ; ＭcＣracken、Ｒ; Ｒeyes、Ａ; Ｋlahr、Ｓ. Ａngiotensin ＩＩ receptor antagonist ameliorates renal tubulointerstitial fibrosis caused by unilateral ureteral obstruction. Ｋid Ｉnt. ４７:１２８５−１２９４、１９９５）をはじめとする種々の動物モデルにおいて評価する。このモデルは、１本の尿管を結紮し、その尿管により排尿される腎臓が５日間で腎臓繊維化を起こしたものである。薬物有効性は、光学顕微鏡および画像解析装置を用いて、処置群の腎繊維症の程度を評価する。ＡＣＥ阻害薬およびＡＴ１受容体ブロッカーはこのモデルにおいて腎繊維症を阻害する（Ｋlar、Ｓ; Ｉshidoya、Ｓ; Ｍorrissey、Ｊ. Ｒole of angiontensin ＩＩ in the tubulointerstitial fibrosis of obstructive nrphtopathy. Ａmer ＪＫid Ｄis. ２６:１４１−１４６、１９９５）。従って、アリスキレン、アムロジピン、およびＨＣＴＺの組み合わせ療法は単独療法と比較すると増強された保護作用が提供されることが示され得る。

治療上有効な量の本発明の組み合わせの各成分は、個別的、同時的または逐次的および任意の順番で投与してよい。また、単位投与形は一定の組み合わせであってよい。

相当する活性成分またはその医薬上許容される塩はまた、水和物の形態で使用されてよく、または結晶化のために使用される他の溶媒を含んでもよい。本発明の医薬組成物は、それ自体公知の方法で調製でき、ヒトをはじめとする哺乳類（温血動物）への経口または直腸投与のような経腸的投与、および非経口投与に好適であり、治療上有効な量の薬理活性化合物を、単独または１以上の医薬上許容される担体と共に含み、特に経腸または非経口適用に好適である。典型的な経口用製剤には、錠剤、カプセル剤、シロップ剤、エリキシル剤および懸濁剤が含まれる。典型的な注射用製剤には、溶液剤および懸濁剤が含まれる。

本発明はまた、別々の医薬組成物を組み合わせたキット形態にも関する。それは、２つまたは３つの個別単位のキットであり（たとえばアリスキレン医薬組成物、アムロジピン医薬組成物、およびＨＣＴＺ医薬組成物）、または２つの個別単位の場合のキットは、２つの活性物質の医薬組成物および残りの活性成分の医薬組成物の組み合わせである。このキットの形態は、個別の成分を異なる投与形（たとえば、非経口アリスキレン製剤、ならびに経口アムロジピンおよびＨＣＴＺ製剤）で投与しなくてはならない場合、または異なる投与間隔で投与される場合に、特に有利である。

ある好ましい実施形態において、（市販の）製品は、活性成分として本発明の組み合わせを（成分（ｉ）〜（ｉｉｉ）の２つまたは３つの個別単位の形態）、本明細書に記載の疾病の進行の遅延または処置に際して、同時的、個別的または逐次的、またはその任意の組み合わせで用いるための使用説明書とともに含む、市販用パッケージである。

これらの医薬調製物は、恒温動物への経口およびまた直腸のような経腸投与、または非経口投与用であり、その調製物は薬理活性化合物を単独で、または慣用される医薬補助物質とともに含む。たとえば、その医薬調製物は、約０.１％〜９０％、好ましくは約１％〜約８０％の活性化合物からなる。経腸的または非経口投与のための医薬調製物は、たとえばコーティング錠、錠剤、カプセル剤または坐剤、およびまたアンプルのような単位投与形である。これらは、たとえば通常の混合、顆粒化、コーティング、可溶化または凍結乾燥といった工程により、それ自体公知の方法で調製される。従って、経口投与のための医薬調製物は、活性化合物を固体賦形剤と配合し、所望により得られた混合物を顆粒化し、必要に応じて、好適な補助物質を加えた後に、その混合物または顆粒を錠剤またはコーティング錠核に加工することにより得られる。

活性化合物の用量は、投与方法、恒温動物種、年齢および／または個々の病状によって異なる。

本発明の医薬組み合わせ剤の活性成分の好ましい用量は、治療上有効な用量、特に市販されているものである。

アリスキレンは、患者に適用し得る、たとえば約１〜約１,０００ｍｇ、好ましくは約１５０〜約５００ｍｇの、治療上有効な量のアリスキレンを含む、たとえばカプセルまたは錠剤のような、好適な単位投与形で供給される。好ましくは、アリスキレンは１日１回適用される。

アムロジピンの場合は、好ましい単位投与形は、経口投与の場合、たとえば約１ｍｇ〜約４０ｍｇ／日、好ましくは２.５〜２０ｍｇ／日を含む錠剤またはカプセル剤である。ＨＴＣＺの場合は、好ましい単位投与形は、たとえば約５ｍｇ〜約５００ｍｇ、好ましくは約５ｍｇ〜約２５ｍｇを含む錠剤またはカプセル剤であり、経口で１日１回投与される。上記の用量は、治療上有効な量の本発明の活性成分を包含する。

好ましい組成物の例は、１４０〜２２０ｍｇ、たとえば１６０ｍｇの量のアリスキレン、２〜１２ｍｇ（たとえば、２.５または５または１０ｍｇ）の量のアムロジピン、および５〜３０ｍｇ、好ましくは５〜１５ｍｇ（たとえば、１２.５ｍｇまたは６.２５ｍｇ）の量のＨＣＴＺを含む。

好ましい組成物のもう一つの例は、３５０〜５５０ｍｇ、たとえば４５０ｍｇの量のアリスキレン、２〜１２ｍｇ（たとえば、２.５または５または１０ｍｇ）の量のアムロジピン、および５〜３０ｍｇ、好ましくは１０〜３０ｍｇ（たとえば、１２.５ｍｇまたは２５ｍｇ）の量のＨＣＴＺを含む。

好ましい組成物のもう一つの例は、５５０〜７００ｍｇ、たとえば６４０ｍｇの量のアリスキレン、２〜１２ｍｇ（たとえば、２.５または５または１０ｍｇ）の量のアムロジピン、および５〜３０ｍｇ、好ましくは１０〜３０ｍｇ（たとえば、１２.５ｍｇまたは２５ｍｇ）の量のＨＣＴＺを含む。

Claims

有効成分として、遊離形または医薬上許容される塩形の、（ｉ）アリスキレン、（ｉｉ）アムロジピン、および（ｉｉｉ）ヒドロクロロチアジドを含む、高血圧症の処置のための医薬組成物。
アリスキレンが１〜１,０００ｍｇであり、アムロジピンが１〜４０ｍｇであり、そしてヒドロクロロチアジドが５〜２００ｍｇである、請求項１に記載の医薬組成物。
アリスキレンが１４０〜５５０ｍｇであり、アムロジピンが２〜１２ｍｇであり、そしてヒドロクロロチアジドが５〜３０ｍｇである、請求項１または２に記載の医薬組成物。
アリスキレンが１５０〜５００ｍｇである、請求項２または３に記載の医薬組成物。
アリスキレンが１４０〜２２０ｍｇである、請求項２または３に記載の医薬組成物。
アリスキレンが１５０ｍｇである、請求項２または３に記載の医薬組成物。
アムロジピンが５または１０ｍｇである、請求項２〜６のいずれかに記載の医薬組成物。
ヒドロクロロチアジドが１２．５または２５ｍｇである、請求項２〜７のいずれかに記載の医薬組成物。
有効成分として、遊離形または医薬上許容される塩形の、（ｉ）アリスキレン、（ｉｉ）アムロジピン、および（ｉｉｉ）ヒドロクロロチアジドを含む、高血圧症の処置のための医薬的組合せ剤。
アリスキレンが１〜１,０００ｍｇであり、アムロジピンが１〜４０ｍｇであり、そしてヒドロクロロチアジドが５〜２００ｍｇである、請求項９に記載の組合せ剤。
アリスキレンが１４０〜５５０ｍｇであり、アムロジピンが２〜１２ｍｇであり、そしてヒドロクロロチアジドが５〜３０ｍｇである、請求項９または１０に記載の組合せ剤。
アリスキレンが１５０〜５００ｍｇである、請求項１０または１１に記載の組合せ剤。
アリスキレンが１４０〜２２０ｍｇである、請求項１０または１１に記載の組合せ剤。
アリスキレンが１５０ｍｇである、請求項１０または１１に記載の組合せ剤。
アムロジピンが５または１０ｍｇである、請求項１０〜１４のいずれかに記載の組合せ剤。
ヒドロクロロチアジドが１２．５または２５ｍｇである、請求項１０〜１５のいずれかに記載の組合せ剤。
有効成分として、遊離形または医薬上許容される塩形の、（ｉ）アリスキレン、（ｉｉ）アムロジピン、および（ｉｉｉ）ヒドロクロロチアジドを、成分（ｉ）〜（ｉｉｉ）の２つまたは３つの個別単位の形態で含む、高血圧症の処置のためのキット。
アリスキレンが１〜１,０００ｍｇであり、アムロジピンが１〜４０ｍｇであり、そしてヒドロクロロチアジドが５〜２００ｍｇである、請求項１７に記載のキット。
アリスキレンが１４０〜５５０ｍｇであり、アムロジピンが２〜１２ｍｇであり、そしてヒドロクロロチアジドが５〜３０ｍｇである、請求項１７または１８に記載のキット。
アリスキレンが１５０〜５００ｍｇである、請求項１８または１９に記載のキット。
アリスキレンが１４０〜２２０ｍｇである、請求項１８または１９に記載のキット。
アリスキレンが１５０ｍｇである、請求項１８または１９に記載のキット。
アムロジピンが５または１０ｍｇである、請求項１８〜２２のいずれかに記載のキット。
ヒドロクロロチアジドが１２．５または２５ｍｇである、請求項１８〜２３のいずれかに記載のキット。
同時的、個別的、または逐次的使用のための説明書をさらに含む、請求項１７〜２４のいずれかに記載のキット。