PT1507558E - Composição farmacêutica compreendendo um inibidor de renina, um bloqueador do canal de cálcio e um diurético - Google Patents

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ΡΕ1507558 1 DESCRIÇÃO "COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA COMPREENDENDO UM INIBIDOR DE RENINA, UM BLOQUEADOR DO CANAL DE CÁLCIO E UM DIURÉTICO" O sistema renina-angiotensina (RAS - renin angiotensin system) é um sistema hormonal complexo compreendido por um precursor de grande peso molecular, angiotensinogénio, duas enzimas de processamento, enzima conversora de renina e angiotensina (ACE - angiotensin converting enzyme), e o mediador vaso-activo de angiotensina II (Ang II) (J. Cardiovasc. Pharmacol., 15 (Supp B) (1990) p. S1-S5) . A enzima renina catalisa a clivagem do angiotensinogénio no decapeptideo angiotensina I, que tem actividade biológica minima em si mesmo e é convertido no octapeptideo activo Ang II pela ACE. A Ang II tem múltiplas acções biológicas sobre o sistema cardiovascular, incluindo vasoconstrição, activação do sistema nervoso simpático, estimulação de produção de aldosterona, antinatriurese, estimulação de crescimento vascular (isto é, estimulo da proliferação de células musculares lisas e a deposição de material de matriz extracelular em excesso na parede vascular), e estimulo de crescimento cardíaco. A Ang II funciona como uma hormona pressora e está envolvida na patofisiologia de diversas formas de hipertensão. 2 ΡΕ1507558

Os efeitos vasoconstritores da angiotensina II são produzidos através da sua acção sobre as células musculares lisas não estriadas, pelo estimulo da formação das hormonas adrenérgicas epinefrina e norepinefrina, bem como pelo aumento da actividade do sistema nervoso simpático como resultado da formação de norepinefrina. A angiotensina II tem também influência no equilíbrio electro-lítico, produz, por exemplo, efeitos antinatriuréticos e antidiuréticos no rim, promovendo assim a libertação, por um lado, do peptídeo vasopressina da glândula pituitária e, por outro lado, de aldosterona da glomerulosa adrenal. Todas estas influências desempenham um importante papel na regulação da tensão arterial, aumentando o volume circulante e a resistência periférica. A angiotensina II está também envolvida no crescimento e migração celulares e na formação da matriz extracelular. A angiotensina II interage com receptores específicos na superfície da célula-alvo. Foi possível identificar subtipos de receptores que são designados, por exemplo, de receptores ATI e AT2. Nos últimos tempos têm sido feitos grandes esforços para se identificarem substâncias que se ligam ao receptor ATI. Tais princípios activos são frequentemente denominados por antagonistas da angiotensina II. Devido à inibição do receptor ATI, tais antagonistas podem ser usados, por exemplo, como anti-hipertensivos ou para o tratamento de insuficiência cardíaca congestiva, entre outras indicações. Os antagonistas da angiotensina II são, portanto, entendidos como os princípios activos que se ligam ao receptor de subtipo ATI. 3 ΡΕ1507558

Os inibidores do sistema renina-angiotensina são drogas bem conhecidas que baixam a tensão arterial e exercem acções benéficas no tratamento da hipertensão e da insuficiência cardíaca congestiva, conforme descrito, por exemplo, em N. Eng. J. Med. 316, 23 (1987) p. 1429-1435. É conhecido um grande número de inibidores peptídicos e não peptídicos do sistema renina-angiotensina, sendo os mais amplamente estudados os inibidores de ACE, os quais incluem as drogas captopril, enalapril, lisinopril, benazepril e spirapril. Embora um dos principais modos de acção dos inibidores de ACE envolva a prevenção de formação do peptídeo vasoconstritor Ang II, foi relatado na Hypertension, 16, 4 (1990) p. 363-370 que a ACE cliva uma variedade de substratos peptídicos, incluindo os peptídeos vasoactivos bradicinina e substância P. Foi demonstrada a prevenção da degradação de bradicinina por inibidores de ACE, e foi relatada em Circ. Res., 66,1 (1990) p. 242-248 a actividade dos inibidores de ACE nalgumas condições, como sendo mediada por níveis elevados de bradicinina, em vez da inibição da formação de Ang II. Consequentemente, não se pode presumir que o efeito de um inibidor de ACE é unicamente devido à prevenção da formação de angiotensina e à subsequente inibição do sistema renina-angiotensina.

Para além de inibir a conversão da angiotensina I em angiotensina II, ou bloquear o receptor ATI, o RAS pode ser interrompido no início da sua via. Esta etapa inicial (ou seja, a conversão de angiotensinogénio em angiotensina 4 ΡΕ1507558 I) é mediada pela renina e pode ser inibida pelos inibidores de renina (RI - renin inhibitors) . Os inibidores de renina interrompem completamente a formação de angio-tensina II porque actuam sobre a etapa limitante na cascata. Devido ao bloqueio praticamente completo de formação de angiotensina II com Ris, estes agentes podem ter uma eficácia melhorada sobre os inibidores de ACE ou sobre os bloqueadores do receptor ATI. Além disso, devido ao seu elevado grau de especificidade, os Ris estão associados a menos efeitos colaterais do que os inibidores de ACE. Um RI é o aliscireno. Outros são o deticireno, o terlacireno e o zancireno. 0 aliscireno tem a seguinte fórmula química (I):

(I). 0 inibidor de renina com a fórmula (I), quimicamente definido como 2(S),4(S),5(S),7(S)-N-(3-amino-2,2-dimetil-3-oxopropil)-2,7-di(1-metiletil)-4-hidroxi-5-amino-8-[4-metoxi-3-(3-metoxi-propoxi)fenil]-octanamida, é especificamente divulgado na patente EP 678503 A. Especialmente preferido é o sal de hemi-fumarato do mesmo. 5 ΡΕ1507558

Uma desvantagem no tratamento de hipertensão e de doenças e condições com ela relacionadas é que a monoterapia estimula frequentemente reflexos compensatórios que contrariam a redução farmacologicamente induzida na tensão arterial. Esta compensação tende a impedir o abaixamento com sucesso da tensão arterial. É portanto desejável desenvolver meios adicionais de tratamento para esta aplicação. A presente invenção refere-se a uma composição farmacêutica compreendendo (i) o inibidor de renina alis-cireno, (ii) o bloqueador do canal de cálcio (CCB) amlodipina, e (iii) a diurético hidroclorotiazida, ou, se apropriado, em cada caso um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos, especialmente para o tratamento de uma doença ou condição conforme aqui anterior ou posteriormente exposto. A invenção refere-se também ao uso de (i) inibidor de renina aliscireno (ii), bloqueador do canal de cálcio (CCB) amlodipina e (iii) diurético hidroclorotiazida, ou, se apropriado, em cada caso ao sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos, para o fabrico de um medicamento para o tratamento de uma doença ou condição, conforme aqui anterior ou posteriormente exposto. A invenção descreve igualmente o tratamento de uma doença ou condição conforme aqui anterior ou pos- 6 ΡΕ1507558 teriormente exposto, compreendendo a administração a um animal, incluindo um ser humano, de uma quantidade terapeu-ticamente eficaz do (i) inibidor de renina aliscireno, (ii) bloqueador do canal de cálcio (CCB) amlodipina, e (iii) diurético hidroclorotiazida, ou, se apropriado, em cada caso a um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos. A presente invenção refere-se ainda a um kit de partes que compreende (i) uma composição farmacêutica do inibidor de renina aliscireno ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, (ii) uma composição farmacêutica do bloqueador do canal de cálcio (CCB) amlodipina ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e (iii) uma composição farmacêutica da diurético hidroclorotiazida ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma, na forma de duas ou três unidades separadas dos componentes (i) a (iii) .

Em cada caso se for apropriado, por exemplo se os compostos não estiverem presentes como um sal farmaceuticamente aceitável per se como no caso da hidroclorotiazida, estes compostos incluem também os seus sais farmaceuticamente aceitáveis. A estrutura dos agentes activos identificados pelos nomes genéricos ou comerciais pode ser retirada da edição actual do compêndio de referência "The Merck índex" ou de bases de dados, como por exemplo da LifeCycle Patents International (por exemplo, IMS World Publications). Qualquer perito na técnica encontra-se completamente habilitado para identificar os agentes activos e, com base nestas 7 ΡΕ1507558 referências, igualmente habilitado para sintetizar e testar as indicações e propriedades farmacêuticas através de modelos de teste padrão, tanto in vitro como in vivo. A presente invenção refere-se ainda à composição farmacêutica anterior para o tratamento de insuficiência cardíaca tal como insuficiência cardíaca congestiva (aguda e crónica), disfunção ventricular esquerda e cardiomiopatia hipertrófica, miopatia cardíaca diabética, arritmias supra-ventriculares e ventriculares, fibrilação atrial, flutter atrial ou remodelação vascular nociva. Pode ainda ser demonstrado que terapia combinada com a combinação inventiva e em particular com aliscireno, especialmente com o sal hemi-fumarato do mesmo, amlodipina, especialmente o maleato ou mais preferencialmente o besilato da mesma, e hidroclorotiazida (HCTZ), prova ser benéfica no tratamento e prevenção de enfarte do miocárdio e suas sequelas. Tal terapia de combinação é também útil no tratamento de ate-rosclerose, angina (estável ou instável), e insuficiência renal (diabética e não diabética). Além disso, tal terapia de combinação pode melhorar a disfunção endotelial, proporcionando assim benefícios em doenças nas quais a função endotelial normal é interrompida, tais como insuficiência cardíaca, angina de peito e diabetes. Além disso, a combinação da presente invenção pode ser usada para o tratamento ou prevenção de aldosteronismo secundário, hipertensão pulmonar primária e secundária, condições de insuficiência renal, tais como nefropatia diabética, glomerulonefrite (incluindo nefropatia IgA) , fibrose renal, esclerodermia, 8 ΡΕ1507558 esclerose glomerular, proteinúria de doença renal, e também hipertensão vascular renal, retinopatia diabética, o controlo de outras desordens vasculares, tais como enxaqueca, doença vascular periférica, doença de Raynaud, hiperplasia luminal, disfunção cognitiva (tal como Alzheimer), glaucoma e acidente vascular cerebral, fibrose pulmonar e hepática, doenças fibróticas resultantes da acumulação de excesso de matriz extracelular induzida por TGF-β e doenças proli-ferativas das células musculares lisas (tais como fibróides uterinos). A presente invenção descreve ainda o tratamento de uma condição ou doença seleccionada do grupo constituído por hipertensão, insuficiência cardíaca tal como insuficiência cardíaca congestiva (aguda e crónica), disfunção ventricular esquerda e cardiomiopatia hipertrófica, miopa-tia cardíaca diabética, arritmias supraventriculares e ventriculares, fibrilação atrial, flutter atrial, remodelação vascular nociva, enfarte do miocárdio e suas sequelas, aterosclerose, angina (instável ou estável), insuficiência renal (diabética e não diabética), insuficiência cardíaca, angina de peito, diabetes, aldosteronismo secundário, hipertensão pulmonar primária e secundária, condições de insuficiência renal, tais como nefropatia diabética, glome-rulonefrite (incluindo nefropatia IgA), fibrose renal, esclerodermia, esclerose glomerular, proteinúria de doença renal, e também hipertensão vascular renal, retinopatia diabética, o controlo de outras desordens vasculares, tais como enxaqueca, doença vascular periférica, doença de 9 ΡΕ1507558

Raynaud, hiperplasia luminal, disfunção cognitiva (tal como Alzheimer), glaucoma e acidente vascular cerebral, fibrose pulmonar e hepática, doenças fibróticas resultantes da acumulação de excesso de matriz extracelular induzida por TGF, e doenças proliferativas das células musculares lisas, incluindo fibróides uterinos, compreendendo a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma combinação de (i) um inibidor de renina, (ii) um CCB, e (iii) um diurético, ou de sais farmacêuticamente aceitáveis dos mesmos e um veiculo farmaceuticamente aceitável a um mamífero necessitado de tal tratamento. De preferência, o inibidor de renina é aliscireno, o CCB é amlodipina e o diurético é HCTZ. A invenção refere-se igualmente ao uso de uma combinação do (i) inibidor de renina aliscireno, (ii) CCB amlodipina e (iii) diurético hidroclorotiazida, ou de sais farmacêuticamente aceitáveis para o tratamento de uma doença ou condição, conforme acima ou abaixo descrito.

Da forma como é usado em toda a especificação e nas reivindicações, o termo "tratamento" abrange todas as diferentes formas ou modos de tratamento conhecidos dos envolvidos na técnica afim e inclui em particular o tratamento preventivo, curativo e paliativo. 0 diurético activa o RAS, tornando assim a inibição do RAS através do inibidor de renina (RI) mais eficaz. A adição de CCB ao RI, cuja actividade é potenciada 10 ΡΕ1507558 pelo diurético, baixará por exemplo a tensão arterial por um mecanismo separado do RAS. 0 CCB tem mostrado ser renoprotector pelo menos em parte através de (i) inibição da expressão glomerular de TGF-beta- e alfa-actina de células musculares lisas (Nephron Nov 2000, 86 (3) : 315-26) e (ii) manifestação de actividade inibitória do crescimento através da inibição das vias de sinal de células múltiplas (J Hypertens 2002 Jan; 20(1):95-102).

Surpreendentemente, verificou-se que o uso da combinação inventiva de mecanismos divergentes maximiza a possibilidade de se evitar a activação de mecanismos compensatórios que regulam a tensão arterial que são estimulados com tratamento anti-hipertensivo por mono-terapia. Inesperadamente, o bloqueio do RAS é mais eficaz quando o sistema é activado. Assim, é possível alcançar uma maior inibição farmacológica do RAS quando os bloqueadores deste sistema são administrados simultaneamente com activadores moderados do RAS. Tal activação do RAS pode ser efectuada com os bloqueadores dos canais de cálcio e diuréticos. Além disso, cada uma destas terapias por si só é anti-hipertensiva. O uso de um RI nesta combinação proporciona o bloqueio mais eficaz e completo do RAS. A vantagem inesperada de uma combinação tripla vs dupla é (i) o efeito potenciado de abaixamento da tensão arterial e (ii) o efeito anti-proliferativo mais eficaz através das acções combinadas de inibição da renina (potenciado pelo diurético) e CCB. Ambas as actividades são traduzidas numa protecção melhorada dos tecidos. A actividade e benefícios 11 ΡΕ1507558 melhorados face à combinação dupla resulta de uma potenciação ou mesmo de interacções sinérgicas entre 3 componentes. Além disso, podem ser manifestados menos efeitos colaterais devido à capacidade para se usarem doses menores dos parceiros a serem combinados. Por exemplo, as doses dos componentes individuais podem ser reduzidas 2-7 vezes ou reduzidas 3-7, 4-7, 5-7 ou 6-7 vezes, quando administradas em combinação e conseguir-se ainda uma actividade de abaixamento da tensão arterial comparável à conseguida com cada agente individual. Nos seres humanos, a superioridade ou as vantagens surpreendentes da combinação tripla face à dupla podem ser demonstradas, por exemplo, através de testes da combinação no que diz respeito aos benefícios na redução da tensão arterial, hipertrofia ventricular esquerda, protecção renal (por exemplo, invertendo, melhorando ou retardando o agravamento da proteinúria; retardando o declínio na taxa de filtração glomerular ou depuração da creatinina, retardando a duplicação da creatinina sérica). A doença vascular hipertensiva prolongada e descontrolada conduz em última análise a uma variedade de alterações patológicas nos órgãos alvo, tais como o coração e os rins. A presença de diabetes exacerba estas alterações. A hipertensão sustida pode levar também a um aumento da ocorrência de acidente vascular cerebral. Por conseguinte, há uma forte necessidade de avaliar a eficácia da terapia anti-hipertensiva, de um exame dos desfechos cardiovasculares adicionais, para além daqueles de redução da tensão arterial, para se obter um conhecimento mais 12 ΡΕ1507558 profundo sobre os benefícios do tratamento combinado. A natureza das doenças vasculares hipertensivas é multifac-torial. Sob certas circunstâncias, têm sido combinadas drogas com diferentes mecanismos de acção. No entanto, usando-se simplesmente qualquer combinação de drogas com diferentes modos de acção não conduz necessariamente a combinações com efeitos vantajosos. A potenciação é o aumento do efeito biológico de um agente por outro agente para produzir-se um efeito biológico aditivo, ou superior a este, quando comparado com os efeitos dos agentes individuais, ao passo que o sinergismo é o aumento do efeito biológico de um agente por outro agente para produzir-se um efeito biológico que é superior ao previsto por adição dos efeitos dos componentes individuais. A presente invenção refere-se a uma composição farmacêutica compreendendo (i) aliscireno, (ii) amlodi-pina, e (ii) hidroclorotiazida (HCTZ) ou sais farmaceu-ticamente eficazes dos mesmos. A presente invenção pode ser usada para o tratamento de condições cardíacas, renais e afins por administração da composição farmacêutica compreendendo (i) aliscireno, especialmente o sal de hemi-fumarato do mesmo, amlodipina, especialmente o maleato ou mais preferencialmente o besilato da mesma, e HCTZ. 13 ΡΕ1507558

Os compostos a serem combinados podem estar presentes como sais farmaceuticamente aceitáveis. Se estes compostos tiverem, por exemplo, pelo menos um centro básico, podem formar sais de adição de ácido. Sais de adição de ácido correspondentes podem também ser formados tendo, se desejado, um centro básico adicional presente. Os compostos com pelo menos um grupo ácido (por exemplo COOH) podem também formar sais com bases. Podem ainda ser formados sais internos correspondentes, se um composto compreender, por exemplo, um grupo carboxi e um amino.

Descobriu-se surpreendentemente que uma combinação de aliscireno, amlodipina e HCTZ atinge um efeito terapêutico maior do que a administração de cada um destes agentes isolados. Uma maior eficácia pode também ser documentada como uma duração de acção prolongada. A duração da acção pode ser monitorizada quer como o tempo necessário para voltar à linha de base antes da próxima dose, ou como a área sob a curva (AUC - área under the curve) , e é expressa como o produto da alteração na tensão arterial em milímetros de mercúrio (alteração em mmHg) e a duração do efeito (minutos, horas ou dias).

Outros benefícios são o facto de se poderem usar doses menores das drogas individuais a serem combinadas de acordo com a presente invenção para se reduzir a dosagem, por exemplo, as doses não precisam apenas de ser menores, mas são também muitas vezes aplicadas com menos frequência, ou podem ser usadas para diminuir-se a incidência de 14 ΡΕ1507558 efeitos colaterais. A administração combinada de aliscireno, amlodipina e HCTZ ou de sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos resulta numa resposta significativa numa percentagem maior de pacientes tratados, isto é, resulta uma maior taxa de respondedores, independentemente da etiologia subjacente da condição. Isto está em conformidade com os desejos e necessidades dos pacientes a serem tratados.

Pode-se mostrar que a terapia de combinação com aliscireno, especialmente com o sal de hemi-fumarato do mesmo, amlodipina, especialmente o maleato ou mais preferencialmente o besilato da mesma, e HCTZ, resulta numa terapia anti-hipertensiva mais eficaz (quer para hipertensão maligna, essencial, reno-vascular, diabética, sistó-lica isolada ou outro tipo secundário) através de uma eficácia melhorada, bem como de uma maior taxa de respondedores. A combinação é também útil no tratamento ou prevenção de insuficiência cardíaca tal como insuficiência cardíaca congestiva (aguda e crónica), disfunção ventricular esquerda e cardiomiopatia hipertrófica, miopatia cardíaca diabética, arritmias supraventriculares e ventriculares, fibrilação atrial, flutter atrial ou remodelação vascular nociva. Pode ainda mostrar-se que a terapia de combinação com aliscireno, amlodipina e HCTZ prova ser benéfica no tratamento e prevenção de enfarte de miocárdio e suas sequelas. Uma terapia de combinação com aliscireno, amlodipina e HCTZ é também útil no tratamento de aterosclerose, angina (estável ou instável), e insufi- 15 ΡΕ1507558 ciência renal (diabética e não diabética). Além disso, a terapia de combinação usando-se aliscireno, amlodipina e HCTZ pode melhorar a disfunção endotelial, proporcionando assim benefícios em doenças nas quais a função endotelial normal é interrompida, tais como insuficiência cardíaca, angina de peito e diabetes. Além disso, a combinação da presente invenção pode ser usada para o tratamento ou prevenção de aldosteronismo secundário, hipertensão pulmonar primária e secundária, condições de insuficiência renal, tais como nefropatia diabética, glomerulonefrite (incluindo nefropatia IgA), fibrose renal, esclerodermia, esclerose glomerular, proteinúria de doença renal, e também hipertensão vascular renal, retinopatia diabética, controlo de outras desordens vasculares, tais como enxaqueca, doença vascular periférica, doença de Raynaud, hiperplasia luminal, disfunção cognitiva (como Alzheimer), glaucoma e acidente vascular cerebral, fibrose pulmonar e hepática, doenças fibróticas resultantes da acumulação de excesso de matriz extracelular induzida por TGF-β e doenças proliferativas das células musculares lisas (como fibróides uterinos).

Os peritos na técnica afim estão inteiramente capacitados para seleccionarem um modelo de teste relevante para comprovar a eficácia de uma combinação da presente invenção nas indicações terapêuticas aqui anterior e posteriormente indicadas. Estudos representativos são efectuados com uma combinação de aliscireno, especialmente o sal de hemi-fumarato do mesmo, amlodipina, especialmente 16 ΡΕ1507558 o maleato ou mais preferencialmente o besilato da mesma, e HCTZ, aplicando-se a seguinte metodologia.

As vantagens das presentes combinações são, por exemplo, demonstradas num estudo clinico ou no procedimento de teste conforme é essencialmente abaixo descrito. Muitos protocolos de estudos clínicos adaptados para se testarem as nossas combinações são conhecidos dos peritos na técnica. Um exemplo de um ensaio clínico útil para se demonstrarem as vantagens inesperadas das nossas novas combinações é descrito por Nussberger J. et al. (Hypertension 2002 Jan; 39 (1): El-8). O mesmo protocolo é efectuado com as nossas combinações preferidas, tal como se descreve. A eficácia da droga é avaliada em vários modelos animais, incluindo os abaixo indicados, usando-se as seguintes dosagens aproximadas. O aliscireno é administrado através de mini-bombas osmóticas implantadas subcutanea-mente a aproximadamente 1-200 mg/kg/dia (monoterapia), e aproximadamente 1-75 mg/kg/dia (terapia de combinação). A amlodipina e a HCTZ são administradas por via oral em dosagens abaixo dos 75 mg/kg/dia como monoterapia ou terapia de combinação.

Entre os modelos animais utilizados para avaliar-se a eficácia da droga encontram-se os modelos de sal de acetato de desoxicorticosterona em rato (DOCA-sal) e de ratos espontaneamente hipertensos (SHR), quer mantidos numa dieta normal de sal quer com carga de sal (4-8% de sal em ração para ratos ou 1% de NaCl em água para beber) . 0 17 ΡΕ1507558 modelo de teste DOCA-sal utiliza um protocolo de estudo agudo ou crónico. Um procedimento de estudo agudo envolve a avaliação dos efeitos de várias substâncias de teste durante um período experimental de seis horas usando-se ratos com cateteres femurais permanentes arteriais e venosos. 0 Procedimento de Estudo Agudo avalia as substâncias de teste relativamente à sua capacidade para reduzirem a tensão arterial durante a fase estabelecida da hipertensão DOCA-sal. Em contraste, o Procedimento de Estudo Crónico avalia a capacidade das substâncias de teste prevenirem ou retardarem o aumento na tensão arterial durante a fase de desenvolvimento da hipertensão DOCA-sal. Por conseguinte, a tensão arterial será monitorizada no procedimento de estudo crónico através de um radio-transmissor. 0 radiotransmissor é implantado cirurgicamente na aorta abdominal dos ratos, antes do início do tratamento DOCA-sal e, portanto, antes da indução da hipertensão. A tensão arterial é monitorizada cronicamente durante períodos de até 6 semanas (aproximadamente uma semana antes da administração de DOCA-sal e durante 5 semanas depois).

Os ratos são anestesiados com isoflurano a 2-3% em oxigénio inalante seguido por 100 mg/kg, ip, de Amital sódico (amobarbital). O nível de anestesia é avaliado por um padrão respiratório de ritmo constante.

Procedimento de estudo agudo:

Os ratos são submetidos a nefrectomia unilateral no momento da implantação DOCA. 0 pelo é cortado no flanco 18 ΡΕ1507558 esquerdo e na parte de trás do pescoço e esfregado com tampões com álcool estéril e povidona/iodo. Durante a cirurgia os ratos são colocados numa almofada com aquecimento para manter-se a temperatura corporal a 37 graus C. É feita uma incisão de 20 mm através da pele e músculo subjacente para se expor o rim esquerdo. 0 rim é liberto do tecido circundante, exteriorizado e colocam-se duas ligaduras (seda 3-0) de forma firme ao redor da artéria e veia renal proximal à sua junção com a aorta. A artéria e a veia renal são então separadas e os rim removido. Os ferimentos do músculo e da pele são fechados com sutura de seda 4-0 e grampos de sutura de aço inoxidável, respectivamente. Ao mesmo tempo, é feita uma incisão de 15 mm na parte de trás do pescoço e implantada subcutaneamente um pelete de libertação em 3 semanas (Innovative Research of America, Sarasota, Flórida) contendo acetato de desoxicorticosterona (100 mg/kg). A ferida é então fechada com grampos de aço inoxidável e ambas as feridas são tratadas com povidona/iodo; os ratos recebem uma injeção intramuscular pós-cirúrgica de penicilina G procaina (100 000 U) e buprenorfina (0,05-0,1 mg/kg) s.c. Os ratos são imediatamente alimentados com água potável com 1% NaCl + 0,2% KC1; este tratamento continua durante pelo menos 3 semanas, altura em que os animais se tornaram hipertensos e disponíveis para experimentação.

Quarenta e oito horas antes da experimentação, os animais são anestesiados com isoflurano e os cateteres 19 ΡΕ1507558 implantados na artéria e veia femurais para medição da tensão arterial, recolha de sangue e administração dos compostos de teste. Deixa-se que os ratos recuperem durante 48 horas presos numa gaiola Plexiglas, que serve também como a câmara experimental.

Procedimento de estudo crónico:

Este procedimento é o mesmo que o anterior, com a excepção dos ratos serem implantados com um radiotrans-missor, 7-10 dias antes da nefrectomia unilateral e inicio do DOCA e sal. Além disso, os ratos não são submetidos a cirurgia para a colocação dos cateteres femurais arteriais e venosos. Os radiotransmissores são implantados conforme descrito em M.K. Bazil, C. Krulan e R.L. Webb, Telemetric monitoring of cardiovascular parameters in conscious spontaneously hypertensive rats, J. Cardiovasc. Pharmacol. 22: 897-905, 1993.

Os protocolos são então implementados no computador para medição da tensão arterial, frequência cardíaca, etc., em momentos pré-determinados. Os dados da linha de base são recolhidos em vários instantes e durante diversos intervalos de tempo. Por exemplo, a linha de base ou os valores da pré-dose são geralmente constituídos por dados recolhidos e ponderados para se obter a média durante 3 períodos de 24 horas consecutivos antes da administração da droga. 20 ΡΕ1507558 A tensão arterial, a frequência e a actividade cardíacas são determinadas em vários instantes pré-selec-cionados, antes, durante e após a administração da droga. Todas as medições são feitas em animais não limitados e sem perturbações. O tempo de estudo máximo, determinado pela duração da bateria, poderá ser de até nove meses.

Além disso, o SHR é utilizada para se estudarem os efeitos de aliscireno em combinação com amlodipina e HCTZ. Os antecedentes de hipertensão do SHR são modificados pela carga de sal crónica num esforço para se suprimir o sistema renina-angiotensina (RAS), ou pela depleção de sal crónica para se activar o RAS no SHR. Estas manipulações serão efectuadas para se avaliar mais extensivamente a eficácia das diferentes substâncias de teste. Para experiências realizadas em ratos espontaneamente hipertensos (SHR), estes animais são fornecidos pela Taconic Farms, Germantown, Nova Iorque (Tac:N(SHR)fBR) . É implantado um dispositivo radiotelemétrico (Data Sciences International, Inc., St. Paul, Minnesota) na aorta abdominal inferior de todos os animais de teste entre as idades de 14 a 16 semanas. Todos os SHR são deixados recuperar do procedimento de implante cirúrgico durante pelo menos 2 semanas antes do início das experiências. Os parâmetros cardiovasculares são continuamente monitorizados através do radiotransmissor e transmitidos para um receptor onde o sinal digitalizado é então recebido e armazenado utilizando-se um sistema de aquisição de dados computorizado. A tensão arterial (pressão arterial, sistólica e diastólica 21 ΡΕ1507558 médias) e a frequência cardíaca são monitorizadas em SHRs conscientes, que se movimentam livremente e sem perturbações nas suas gaiolas. A tensão arterial e a frequência cardíaca são medidas a cada 10 minutos durante 10 segundos e gravadas. Os dados reportados para cada rato representam os valores médios dos obtidos durante um período de 24 horas e são constituídos pelas 144 amostras recolhidas nos períodos de 10 minutos em cada dia. Os valores da linha de base para a tensão arterial e frequência cardíaca dizem respeito à média de três leituras consecutivas de 24 horas feitas previamente ao início dos tratamentos com a droga. Todos os ratos são alojados individualmente numa sala com temperatura e humidade controladas e são mantidos num ciclo de 12 horas de luz-escuridão.

Para além dos parâmetros cardiovasculares, são também registadas as determinações semanais do peso corporal em todos os ratos. Os tratamentos são administrados na água para consumo, via gavagem oral diária, ou através de minibombas osmóticas, conforme acima indicado. Se administrado na água para beber, o consumo de água é medido cinco vezes por semana. As doses de drogas para ratos individuais são, então, calculadas com base no consumo de água para cada rato, na concentração da substância de droga na água para consumo, e nos pesos corporais individuais. Todas as soluções de droga na água para consumo são refeitas a cada três ou quatro dias.

Após a conclusão dos estudos crónicos, os ratos 22 ΡΕ1507558 SHR ou DOCA-sal são anestesiados e o coração rapidamente removido. Após separação e remoção dos apêndices atriais, o ventrículo esquerdo e o ventrículo esquerdo mais o direito (total) são pesados e registados. A massa ventricular esquerda e a total são então normalizadas face ao peso corporal e anotadas. Todos os valores reportados para a tensão arterial e para a massa cardíaca representam a média do grupo ± desvio padrão da média (sem - Standard error of the mean). A função e estrutura vasculares são avaliadas após o tratamento para se estimarem os efeitos benéficos da combinação. Os SHRs são estudados de acordo com os métodos descritos por Intengan HD, Thibault G, Li JS, Schiffrin EL, Circulation 1999, 100 (22) : 2267-2275. Da mesma forma, a metodologia para avaliação da função vascular em ratos DOCA-sal é descrita em Intengan HD, Park JB, Schiffrin, EL, Hypertension, 1999, 34(4 Parte 2): 907-913. A eficácia da droga para a inibição da doença renal diabética é avaliada em diversos modelos animais, incluindo os ratinhos espontaneamente diabéticos (db/db) (Ziyadeh F, Hoffman B, Han D, Iglesias-de la Cruz M, Hong S, Isono M, Chen S, McGowan T, Sharma K. Long-term prevention of renal insufficiency, excess matrix gene expression, and glomerular mesangial matrix expansion by treatment with monoclonal antitransforming growth factor-B antibody in db/db diabetic mice. Proc Natl Acad Sei. 2000; 97:8015-8020). O ratinho db/db é um modelo amplamente 23 ΡΕ1507558 utilizado para as lesões glomerulares renais vistas em diabetes não insulino-dependentes (diabetes tipo 2). Os ratinhos são tratados diariamente com veiculo, por monoterapia ou terapia de combinação. Em cada 2 semanas ao longo do estudo é recolhida urina para se medir a excreção urinária de albumina. No final da experiência, é recolhido sangue para se determinarem os níveis de creatinina plasmática. Os rins são preservados in situ por fixação por perfusão, são removidos e a patologia renal avaliada quantitativamente por microscopia de luz e análise de imagem. A eficácia da droga é definida pela redução (vs veículo de controlos) de (i) excreção urinária de albumina, (ii) creatinina plasmática, e (iii) pela inibição de glomeruloesclerose renal. A eficácia da droga para inibir a fibrose renal é avaliada em vários modelos animais, incluindo o modelo de obstrução ureteral unilateral em ratos (Ishidoya, S; Morrissey, J; McCracken, R; Reyes, A; Klahr, S. Angiotensin II receptor antagonist ameliorates renal tubulointerstitial fibrosis caused by unilateral ureteral obstruction. Kid Int. 47:1285-1294, 1995). Este modelo envolve a ligação de um ureter, o que resulta em fibrose renal durante 5 dias no rim drenado por aquele ureter. A eficácia da droga é avaliada por quantificação, com microscopia de luz e análise de imagem, da extensão da fibrose renal entre os grupos tratados. Os inibidores da ACE e os bloqueadores do receptor ATI inibem a fibrose renal neste modelo (Klar, S; Ishidoya, S; Morrissey, J. Role of angiotensin II in the 24 ΡΕ1507558 tubulointerstitial fibrosis of obsructive nephropathy. Amer J Kid Dis. 26:141-146, 1995). Pode portanto demonstrar-se que a terapia de combinação com aliscireno, amlodipina e HCTZ proporciona maior protecção vs monoterapia.

Uma quantidade terapeuticamente eficaz de cada um dos componentes da combinação da presente invenção pode ser administrada separadamente, simultaneamente ou sequencialmente e em qualquer ordem. A forma de dose unitária pode também ser uma combinação fixa. O principio activo correspondente ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo pode também ser usado na forma de um hidrato ou incluir outros solventes usados para cristalização.

As composições farmacêuticas de acordo com a invenção podem ser preparadas de uma maneira conhecida per se e são as adequadas à administração entérica, tais como oral ou rectal, e parentérica a mamíferos (animais de sangue quente), incluindo o ser humano, compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz do composto farmacolo-gicamente activo, sozinho ou em combinação com um ou mais veículos farmaceuticamente aceitáveis, especialmente adequados para aplicação entérica ou parentérica. Formulações orais típicas incluem comprimidos, cápsulas, xaropes, elixires e suspensões. Formulações injectáveis típicas incluem soluções e suspensões. 25 ΡΕ1507558 A invenção refere-se também à combinação de composições farmacêuticas separadas na forma de kit. Ou seja, um kit combinando duas ou três unidades separadas, por exemplo uma composição farmacêutica de aliscireno, uma composição farmacêutica de amlodipina e uma composição farmacêutica de HCTZ, ou no caso de duas unidades separadas um kit que combina uma composição farmacêutica de dois dos agentes activos e uma composição farmacêutica do outro principio activo. A forma de kit é particularmente vantajosa quando os componentes separados devem ser administrados em formas de dosagem diferentes (por exemplo, formulação de aliscireno parentérica e formulações de amlodipina e HCTZ orais), ou quando são administrados em intervalos de dosagem diferente.

Numa concretização preferida, o produto (comercial) é uma embalagem comercial que compreende como princípios activos a combinação de acordo com a presente invenção (na forma de duas ou três unidades separadas dos componentes (i) a (iii)), juntamente com instruções para o seu uso simultâneo, separado ou sequencial, ou em qualquer combinação dos mesmos, para o atraso da progressão ou tratamento das doenças aqui mencionadas.

Estas preparações farmacêuticas são para administração entérica, tal como oral, e também rectal ou parentérica a homeotérmicos, compreendendo as preparações o composto farmacologicamente activo isolado ou conjuntamente com substâncias auxiliares farmacêuticas usuais. Por 26 ΡΕ1507558 exemplo, as preparações farmacêuticas são constituídas por cerca de 0,1% a 90%, de preferência cerca de 1% a cerca de 80%, dos compostos activos. As preparações farmacêuticas para administração entérica ou parentérica são, por exemplo, em formas de dosagem unitária, tais como comprimidos revestidos, comprimidos, cápsulas ou supositórios e também ampolas. Estas são preparadas de uma forma que é conhecida per se, por exemplo usando-se processos convencionais de mistura, granulação, revestimento, solubilização ou liofilização. Assim, as preparações farmacêuticas para uso oral podem ser obtidas por combinação dos compostos activos com excipientes sólidos, se desejado procedendo-se à granulação de uma mistura que foi obtida, e, se exigido ou necessário, processando-se a mistura ou granulado em comprimidos ou núcleos de comprimidos revestidos, após se terem adicionado substâncias auxiliares adequadas. A dosagem do composto activo pode depender de uma variedade de factores, tais como o modo de administração, as espécies homeotérmicas, idade e/ou condição individual.

As dosagens preferidas para os princípios activos da combinação farmacêutica de acordo com a presente invenção são dosagens terapeuticamente eficazes, especialmente aquelas que estão comercialmente disponíveis. O aliscireno é fornecido na forma de unidade de dosagem unitária adequada, por exemplo, uma cápsula ou comprimido, e compreendendo uma quantidade terapeuticamente 27 ΡΕ1507558 eficaz, por exemplo cerca de 1 a cerca de 1000 mg, de preferência cerca de 150 a cerca de 500 mg de aliscireno, o qual pode ser aplicado aos pacientes. De preferência, o aliscireno é aplicado uma vez por dia.

No caso da amlodipina, as formas de dosagem unitárias preferidas, por exemplo, comprimidos ou cápsulas, compreendem por exemplo cerca de 1 mg a cerca de 40 mg, de preferência 2,5 a 20 mg por dia, quando administradas por via oral. No caso da HCTZ, as formas de dosagem unitárias preferidas são, por exemplo, comprimidos ou cápsulas compreendendo por exemplo cerca de 5 mg a cerca de 200 mg, de preferência cerca de 5 mg a cerca de 25 mg, administradas por via oral uma vez ao dia. As doses anteriores abrangem uma quantidade terapeuticamente eficaz dos princípios activos da presente invenção.

Um exemplo de uma composição preferida compreende uma quantidade de Aliscireno entre 140 e 220 mg, por exemplo 160 mg, uma quantidade de amlodipina entre 2 e 12 mg (por exemplo 2,5 ou 5 ou 10 mg) e uma quantidade de HCTZ entre 5 e 30 mg, de preferência entre 5 e 15 (por exemplo 12,5 ou 6,2 5 mg) .

Outro exemplo de uma composição preferida compreende uma quantidade de Aliscireno entre 350 e 550 mg, por exemplo 450 mg, uma quantidade de amlodipina entre 2 e 12 mg (por exemplo 2,5 ou 5 ou 10 mg) e uma quantidade de HCTZ 28 ΡΕ1507558 entre 5 e 30 mg, de preferência entre 10 e 30 (por exemplo 12.5 mg ou 25 mg).

Outro exemplo de uma composição preferida compreende uma quantidade de Aliscireno entre 550 e 7 00 mg, por exemplo 64 0 mg, uma quantidade de amlodipina entre 2 e 12 mg (por exemplo 2,5 ou 5 ou 10 mg) e uma quantidade de HCTZ entre 5 e 30 mg, de preferência entre 10 e 30 (por exemplo 12.5 mg ou 25 mg).

Lisboa, 7 de Novembro de 2011

Claims (9)

1. ΡΕ1507558 1 REIVINDICAÇÕES 1. Uma composição farmacêutica compreendendo (i) aliscireno, (ii) amlodipina, e (iii) hidroclorotiazida ou, se apropriado, em cada caso um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos.
2. 2. Uma composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 1 contendo aliscireno numa quantidade compreendida na gama de 1 a 1000 mg, amlodipina numa quantidade compreendida na gama de 1 a 40 mg, e hidroclorotiazida numa quantidade compreendida na gama de 5 a 200 mg.
3. 3. Uma composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 2 contendo aliscireno numa quantidade compreendida na gama de 140 a 550 mg, amlodipina numa quantidade compreendida na gama de 2 a 12 mg, e hidroclorotiazida numa quantidade compreendida na gama de 5 a 30 mg.
4. 4. Uma combinação de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3 para uso no tratamento de uma condição ou doença seleccionada do grupo constituído por hipertensão, insuficiência cardíaca tal como insuficiência cardíaca congestiva (aguda e crónica), disfunção ventri- 2 ΡΕ1507558 cular esquerda e cardiomiopatia hipertrófica, miopatia cardíaca diabética, arritmias supraventriculares e ventriculares, fibrilação atrial, flutter atrial, remodelação vascular nociva, enfarte do miocárdio e suas sequelas, aterosclerose, angina (instável ou estável), insuficiência renal (diabética e não diabética) , insuficiência cardíaca, angina de peito, diabetes, aldosteronismo secundário, hipertensão pulmonar primária e secundária, condições de insuficiência renal, tais como nefropatia diabética, glomerulonefrite (incluindo nefropatia IgA), fibrose renal, esclerodermia, esclerose glomerular, proteinúria de doença renal, e também hipertensão vascular renal, retinopatia diabética, o controlo de outras desordens vasculares, tais como enxaqueca, doença vascular periférica, doença de Raynaud, hiperplasia luminal, disfunção cognitiva (tal como Alzheimer), glaucoma e acidente vascular cerebral, fibrose pulmonar e hepática, doenças fibróticas resultantes da acumulação de excesso de matriz extracelular induzida por TGF, e doenças proliferativas das células musculares lisas, incluindo fibróides uterinos.
5. 5. O uso de uma combinação de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3 para o fabrico de um medicamento para o tratamento de uma condição ou doença seleccionada do grupo constituído por hipertensão, insuficiência cardíaca tal como insuficiência cardíaca congestiva (aguda e crónica), disfunção ventricular esquerda e cardiomiopatia hipertrófica, miopatia cardíaca diabética, arritmias supraventriculares e ventriculares, fibrilação 3 ΡΕ1507558 atrial, flutter atrial, remodelação vascular nociva, enfarte do miocárdio e suas sequelas, aterosclerose, angina (instável ou estável), insuficiência renal (diabética e não diabética), insuficiência cardíaca, angina de peito, diabetes, aldosteronismo secundário, hipertensão pulmonar primária e secundária, condições de insuficiência renal, tais como nefropatia diabética, glomerulonefrite (incluindo nefropatia IgA), fibrose renal, esclerodermia, esclerose glomerular, proteinúria de doença renal, e também hipertensão vascular renal, retinopatia diabética, o controlo de outras desordens vasculares, tais como enxaqueca, doença vascular periférica, doença de Raynaud, hiperplasia luminal, disfunção cognitiva (tal como Alzheimer), glaucoma e acidente vascular cerebral, fibrose pulmonar e hepática, doenças fibróticas resultantes da acumulação de excesso de matriz extracelular induzida por TGF, e doenças proli-ferativas das células musculares lisas, incluindo fibróides uterinos.
6. 6. Uma embalagem comercial que compreende (i) aliscireno ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, (ii) amlodipina ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma, e (iii) hidroclorotiazida ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma, na forma de duas ou três unidades separadas dos componentes 4 ΡΕ1507558 (i) a (iii), juntamente com instruções para uso simultâneo, separado ou sequencial dos mesmos para retardar a progressão ou para o tratamento de uma condição ou doença seleccionada do grupo constituído por hipertensão, insuficiência cardíaca tal como insuficiência cardíaca congestiva (aguda e crónica), disfunção ventricular esquerda e cardiomiopatia hipertrófica, miopatia cardíaca diabética, arritmias supraventriculares e ventriculares, fibrilação atrial, flutter atrial, remodelação vascular nociva, enfarte do miocárdio e suas sequelas, ateros-clerose, angina (instável ou estável), insuficiência renal (diabética e não diabética), insuficiência cardíaca, angina de peito, diabetes, aldosteronismo secundário, hipertensão pulmonar primária e secundária, condições de insuficiência renal, tais como nefropatia diabética, glomerulonefrite (incluindo nefropatia IgA), fibrose renal, esclerodermia, esclerose glomerular, proteinúria de doença renal, e também hipertensão vascular renal, retinopatia diabética, o controlo de outras desordens vasculares, tais como enxaqueca, doença vascular periférica, doença de Raynaud, hiperplasia luminal, disfunção cognitiva (tal como Alzheimer), glaucoma e acidente vascular cerebral, fibrose pulmonar e hepática, doenças fibróticas resultantes da acumulação de excesso de matriz extracelular induzida por TGF, e doenças proliferativas das células musculares lisas, incluindo fibróides uterinos.
7. 7. Um kit de partes compreendendo 5 ΡΕ1507558 (i) uma composição farmacêutica de aliscireno ou de um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, (ii) uma composição farmacêutica de amlodipina ou de um sal farmaceuticamente aceitável da mesma, e (iii) uma composição farmacêutica de hidroclorotiazida ou de um sal farmaceuticamente aceitável da mesma na forma de duas ou três unidades separadas dos componentes (i) a (iii) .
8. 8. Um kit de partes de acordo com a reivin dicação 7, em que o aliscireno está presente numa quantidade compreendida na gama de 1 a 1000 mg, a amlodipina numa quantidade compreendida na gama de 1 a 4 0 mg, e a hidroclorotiazida numa quantidade compreendida na gama de 5 a 200 mg.
9. 9. Um kit de partes de acordo com a reivindicação 7, em que o aliscireno está presente numa quantidade compreendida na gama de 140 a 550 mg, a amlodipina numa quantidade compreendida na gama de 2 a 12 mg, e a hidroclorotiazida numa quantidade compreendida na gama de 5 a 30 mg. Lisboa, 7 de Novembro de 2011