JP5213203B2

JP5213203B2 - ３−デオキシグルコソンおよび皮膚

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Publication number: JP5213203B2
Application number: JP2003586314A
Authority: JP
Inventors: トビア，アネツト; カプラー，フランシス
Original assignee: ダイナミス・セラピユーテイクス・インコーポレーテツド
Priority date: 2002-04-17
Filing date: 2003-04-17
Publication date: 2013-06-19
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Description

発明の背景
生体高分子に対して最も危険な２つの物質は、生命に対して必須である物質と同じ酸素およびグルコースである。

酸素の様々な有害形態は一般に体内で生成される：一重項酸素、スーパーオキシドラジカル、過酸化水素およびヒドロキシルラジカルはすべて組織傷害を引き起こす。これらおよび類似の酸素関連種に関して対応できる用語は「活性酸素種（ｒｅａｃｔｉｖｅｏｘｙｇｅｎｓｐｅｃｉｅｓ）」（ＲＯＳ）である。ＲＯＳは組織タンパク質、脂質および核酸（ＤＮＡ）を損傷し、そしてガン、アテローム硬化症、糖尿病、老化、慢性関節リウマチ、痴呆、外傷、脳卒中および感染のような多くの慢性および急性疾患の終点である。

ＲＯＳはグルコースからも生じる。１つのメカニズムは、後期糖化反応生成物（ＡｄｖａｎｃｅｄＧｌｙｃａｔｉｏｎＥｎｄＰｒｏｄｕｃｔｓ：ＡＧＥｓ）の形成の前駆体として知られているメチルグリオキサール（ＭＧ）および３−デオキシグルコソン（３ＤＧ）のような細胞傷害性カルボニルの形成を介する。

ＡＧＥｓの大変重要な成果は、多くの異なる細胞型上のレセプターへのそれらの結合である。最も良く知られたレセプターはＲＡＧＥであり、これは免疫グロブリンスーパーファミリーに属する。それらのレセプターによるＡＧＥｓのインターナリゼーションは、細胞中に増大したＲＯＳ生産を生じ、そしてサイトカイン、内皮、トロンボモジュリンおよび他の炎症因子を増加させる。ＲＡＧＥレセプターの数は高血糖症で増加することに注目すべきである。

最近、ＡＧＥ形成の阻害は糖尿病ラットにおける腎症の程度を下げることが証明された［Ｎｉｎｏｍｉｙａ，Ｔ．ｅｔａｌ．、ＥＦ６５５５、新規ＡＧＥ生産インヒビターは、ＳＴＺ−誘導化ラットにおける糖尿病性腎症を進行を防止する（要約）（ＥＦ６５５５，ＡｎｏｖｅｌＡＧＥｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｉｎｈｉｂｉｔｏｒ，ｐｒｅｖｅｎｔｓｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎｏｆｄｉａｂｅｔｉｃｎｅｐｈｒｏｐａｔｈｙｉｎＳＴＺ−ｉｎｄｕｃｅｄｒａｔｓ．（Ａｂｓｔｒａｃｔ））。非特許文献１］。したがって３ＤＧのインヒビターのようなＡＧＥ形成を減少させる物質は疾患の進行を制限するはずであり、そして治療的介入のための多くの道具を提供することができる［Ｂｉｅｒｈａｕｓ，Ａ．，ｅｔａｌ．，血管疾患および糖尿病におけるＡＧＥｓおよびそれらのＡＧＥ−レセプターとの相互作用。Ｉ．ＡＧＥ概念（ＡＧＥｓａｎｄｔｈｅｉｒｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｗｉｔｈＡＧＥ−ｒｅｃｅｐｔｏｒｓｉｎｖａｓｃｕｌａｒｄｉｓｅａｓｅａｎｄｄｉａｂｅｔｅｓｍｅｌｌｉｔｕｓ．Ｉ．ＴｈｅＡＧＥｃｏｎｃｅｐｔ．）非特許文献２］、［Ｔｈｏｍａｌｌｅｙ，Ｐ．Ｊ．，最終糖化および糖尿病合併症の発症。グルコース、メチルグリオキサールおよび酸化的ストレスの関連の一体化（Ａｄｖａｎｃｅｄｇｌｙｃａｔｉｏｎａｎｄｔｈｅｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆｄｉａｂｅｔｉｃｃｏｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ．Ｕｎｉｆｙｉｎｇｔｈｅｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔｏｆｇｌｕｃｏｓｅｍｅｔｈｙｌｇｌｙｏｘａｌａｎｄｏｘｉｄａｔｉｖｅｓｔｒｅｓｓ）。非特許文献３］。

ＭＧ生産は解糖の誤りの結果であり、そしてそれ自体は治療的に制御することができない。身体はほとんどのＭＧを、グルタチオン（ＲＯＳ種との直接的相互作用によりＲＯＳから細胞を保護する化合物）を要求するグリオキシラーゼ経路を介して除去する。３ＤＧはグリオキシラーゼ経路による解毒を逃れるが、３−デオキシフルクトース（アルデヒドレダクターゼによる不活性な代謝産物）に転換される：しかし３ＤＧはこの酵素活性も損なう（ｃｏｍｐｒｏｍｉｓｅ）ことができる。

ダイナミスセラピューティクス社（ＤｙｎａｍｉｓＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）は、インビボで３−デオキシグルコソンの濃度を調節することができる数種の独自の化合物を開発した。３ＤＧはＲＯＳを誘導するＡＧＥｓの形成を誘導し、そして重要な抗酸化物質であるグルタチオンの再生の原因である少なくとも２つの重要な酵素を直接不活性化するので、ダイナミスでは３ＤＧの形成を阻害する化合物がＲＯＳに関連する疾患の効果的処置となるはずであると期待する。

図１８の図式的説明は、ＲＯＳにより影響を受ける種々の疾患状態を記載する。

３ＤＧは細胞に多くの毒性効果を有し、そして数種の疾患状態で上昇した濃度で存在する。３ＤＧの有害効果の幾つかを以下に説明する：
３ＤＧは活性酸素種を誘導し、これは酸化的ＤＮＡ傷害をもたらす［Ｓｈｉｍｏｉ，Ｋ．，ｅｔａｌ．、ヒトの臍静脈内皮細胞における高グルコースにより誘導される酸化的ＤＮＡ傷害およびその抑制（ＯｘｉｄａｔｉｖｅＤＮＡｄａｍａｇｅｉｎｄｕｃｅｄｂｙｈｉｇｈｇｌｕｃｏｓｅａｎｄｉｔｓｓｕｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎｈｕｍａｎｕｍｂｉｌｉｃａｌｖｅｉｎｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓ）。非特許文献４］

・３ＤＧは細胞をＲＯＳから保護する最も重要な酵素の幾つかを不活性化する。例えばＲＯＳを除去するためにグルタチオンを使用する中心的な抗酸化酵素であるグルタチオンペルオキシダーゼ、およびグルタチオンを再生するグルタチオンレダクターゼは、両方とも３ＤＧにより不活性化される［ＶａｎｄｅｒＪａｇｔ，Ｄ．Ｌ．，ｅｔａｌ．、４−ヒドロキシノネナルおよび他の内因性アルデヒドによるグルタチオンレダクターゼの不活性化（Ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｏｎｏｆｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅｒｅｄｕｃｔａｓｅｂｙ４−ｈｙｄｒｏｘｙｎｏｎｅｎａｌａｎｄｏｔｈｅｒｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓａｌｄｅｈｙｄｅｓ）非特許文献５］、［Ｎｉｗａ，Ｔ．ａｎｄＳ．Ｔｓｕｋｕｓｈｉ、尿毒合併症における３−デオキシグルコソンおよびＡＧＥｓ：３−デオキシグルコソンによるグルタチオンペルオキシダーゼの不活性化（３−ｄｅｏｘｙｇｌｕｃｏｓｏｎｅａｎｄＡＧＥｓｉｎｕｒｅｍｉｃｃｏｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ：ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｏｎｏｆｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅｐｅｒｏｘｉｄａｓｅｂｙ３−ｄｅｏｘｙｇｌｕｃｏｓｏｎｅ）非特許文献６］。

・３ＤＧはアルデヒドレダクターゼを不活性化する［Ｔａｋａｈａｓｈｉ，Ｍ．，ｅｔａｌ．、アルデヒドレダクターゼ、主な３−デオキシグルコソン還元酵素のインビボ糖化：糖化部位の同定（Ｉｎｖｉｖｏｇｌｙｃａｔｉｏｎｏｆａｌｄｅｈｙｄｅｒｅｄｕｃｔａｓｅ，ａｍａｊｏｒ３−ｄｅｏｘｙｇｌｕｃｏｓｏｎｅｒｅｄｕｃｉｎｇｅｎｚｙｍｅ：ｉｎｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｇｌｙｃａｔｉｏｎｓｉｔｅｓ）非特許文献７］。これはアルデヒドレダクターゼが３ＤＧから身体を保護する細胞性酵素であるので、重要である。ダイナミスは、糖尿病のヒトにおいてはこの３ＤＧの３−デオキシフルクトース（３ＤＦ）への解毒が、それらの尿および血漿の３ＤＧ対３ＤＦの比率が非糖尿病個体とは有意に異なるので、損なわれていることを支持する証拠を有する。［Ｌａｌ，Ｓ．，ｅｔａｌ．、ヒト血漿における３−デオキシグルコソンレベルの定量（Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｏｎｏｆ３−ｄｅｏｘｙｇｌｕｃｏｓｏｎｅｌｅｖｅｌｓｉｎｈｕｍａｎｐｌａｓｍａ）非特許文献８］。

・３ＤＧは糖尿病合併症の発症に寄与する活性酸素種を誘導した［Ａｒａｋｉ，Ａ．，［酸化的ストレスおよび糖尿病：フリーラジカル形成におけるアルファ−ジカルボニル化合物の役割の可能性（Ｏｘｉｄａｔｉｖｅｓｔｒｅｓｓａｎｄｄｉａｂｅｔｅｓｍｅｌｌｉｔｕｓ：ａｐｏｓｓｉｂｌｅｒｏｌｅｏｆａｌｐｈａ−ｄｉｃａｒｂｏｎｙｌｃｏｍｐｏｕｎｄｓｉｎｆｒｅｅｒａｄｉｃａｌｆｏｒｍａｔｉｏｎ］非特許文献９］。具体的には３ＤＧはヘパリン−結合上皮増殖因子、アテローム硬化症斑中で豊富な平滑筋マイトジェンを誘導する。これは３ＤＧの増加が糖尿病におけるアテローム発生を誘発することができることを示唆している。［Ｔａｎｉｇｕｃｈｉ，Ｎ．，ｅｔａｌ．、糖尿病のマクロ血管障害における糖化および酸化的ストレスの関与（Ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔｏｆｇｌｙｃａｔｉｏｎａｎｄｏｘｉｄａｔｉｖｅｓｔｒｅｓｓｉｎｄｉａｂｅｔｉｃｍａｃｒｏａｎｇｉｏｐａｔｈｙ）非特許文献１０］、［Ｃｈｅ，Ｗ．，ｅｔａｌ．、ラット大動脈平滑筋細胞中のメチルグリオキサールおよび３−デオキシグルコソンによるヘパリン−結合上皮増殖因子−様増殖因子の選択的誘導。糖尿病における活性酸素種形成の関与およびアテローム発生との関連の可能性（Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅｉｎｄｕｃｔｉｏｎｏｆｈｅｐａｒｉｎ−ｂｉｎｄｉｎｇｅｐｉｄｅｒｍａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ−ｌｉｋｅｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒｂｙｍｅｔｈｙｌｇｌｙｏｘａｌａｎｄ３−ｄｅｏｘｙｇｌｕｃｏｓｏｎｅｉｎｒａｔａｏｒｔｉｃｓｍｏｏｔｈｍｕｓｃｌｅｃｅｌｌｓ．Ｔｈｅｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔｏｆｒｅａｃｔｉｖｅｏｘｙｇｅｎｓｐｅｃｉｅｓｆｏｒｍａｔｉｏｎａｎｄａｐｏｓｓｉｂｌｅｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｆｏｒａｔｈｅｒｏｇｅｎｅｓｉｓｉｎｄｉａｂｅｔｅｓ）非特許文献１１］。

・３ＤＧは糖尿病胚障害における催奇性因子であり、胚性奇形を導く［Ｅｒｉｋｓｓｏｎ，Ｕ．Ｊ．，ｅｔａｌ．、３−デオキシグルコソンの催奇性および糖尿病胚障害（Ｔｅｒａｔｏｇｅｎｉｃｉｔｙｏｆ３−ｄｅｏｘｙｇｌｕｃｏｓｏｎｅａｎｄｄｉａｂｅｔｉｃｅｍｂｒｙｏｐａｔｈｙ）非特許文献１２］。これは３ＤＧの蓄積から起こり、スーパーオキシドが媒介する胚障害を導くらしい。

・３ＤＧはマクロファージ由来の細胞株にアポトーシスを誘導し［Ｏｋａｄｏ，Ａ．，ｅｔａｌ．マクロファージ由来の細胞株におけるメチルグリオキサールおよび３−デオキシグルコソンによるアポトーシス性細胞死の誘導（Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎｏｆａｐｏｐｔｏｔｉｃｃｅｌｌｄｅａｔｈｂｙｍｅｔｈｙｌｇｌｙｏｘａｌａｎｄ３−ｄｅｏｘｙｇｌｕｃｏｓｏｎｅｉｎｍａｃｒｏｐｈａｇｅ−ｄｅｒｉｖｅｄｃｅｌｌｌｉｎｅｓ）非特許文献１３］、そして培養した皮質ニューロン［Ｋｉｋｕｃｈｉ，Ｓ．，ｅｔａｌ．、培養した皮質ニューロンに対するメチルグリオキサールおよび３−デオキシグルコソンの神経毒性：神経変性疾患に関与する可能性がある糖化と酸化的ストレスとの間の相乗作用（Ｎｅｕｒｏｔｏｘｉｃｉｔｙｏｆｍｅｔｈｙｌｇｌｙｏｘａｌａｎｄ３−ｄｅｏｘｙｇｌｕｃｏｓｏｎｅｏｎｃｕｌｔｕｒｅｄｃｏｒｔｉｃａｌｎｅｕｒｏｎｓ：ｓｙｎｅｒｇｉｓｍｂｅｔｗｅｅｎｇｌｙｃａｔｉｏｎａｎｄｏｘｉｄａｔｉｖｅｓｔｒｅｓｓ，ｐｏｓｓｉｂｌｙｉｎｖｏｌｖｅｄｉｎｎｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅｄｉｓｅａｓｅ）非特許文献１４］、およびＰＣ１２細胞［Ｓｕｚｕｋｉ，Ｋ．，ｅｔａｌ．、アルデヒドレダクターゼの過剰発現はＰＣ１２細胞をメチルグリオキサールまたは３−デオキシグルコソンの細胞傷害性から保護する（ＯｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆａｌｄｅｈｙｄｅｒｅｄｕｃｔａｓｅｐｒｏｔｅｃｔｓＰＣ１２ｃｅｌｌｓｆｒｏｍｔｈｅｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙｏｆｍｅｔｈｙｌｇｌｙｏｘａｌｏｒ３−ｄｅｏｘｙｇｌｕｃｏｓｏｎｅ）非特許文献１５］に対して毒性である。筋萎縮性側索硬化症（運動ニューロン疾患の形態）の原因に関する最近の研究は、３ＤＧの蓄積がＲＯＳ生成の結果として神経毒性を導く可能性を示唆した［Ｓｈｉｎｐｏ，Ｋ．，ｅｔａｌ．、インビトロでの糖化中間産物である反応性ジカルボニル化合物に対する脊髄運動ニューロンの選択的脆弱性：脊髄運動ニューロンにおける不十分なグルタチオン系の関連（Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅｖｕｌｎｅｒａｂｉｌｉｔｙｏｆｓｐｉｎａｌｍｏｔｏｒｎｅｕｒｏｎｓｔｏｒｅａｃｔｉｖｅｄｉｃａｒｂｏｎｙｌｃｏｍｐｏｕｎｄｓ，ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅｐｒｏｄｕｃｔｓｏｆｇｌｙｃａｔｉｏｎ，ｉｎｖｉｔｒｏ：ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆｉｎｅｆｆｉｃｉｅｎｔｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅｓｙｓｔｅｍｉｎｓｐｉｎａｌｍｏｔｏｒｎｅｕｒｏｎｓ）非特許文献１６］。

・ＡＧＥｓは、細胞上のＲＡＧＥと呼ばれる特異的レセプターを有する。内皮細胞、単核食細胞およびリンパ球上の細胞性ＲＡＧＥの活性化は、フリーラジカルの生成および炎症性遺伝子メディエーターの発現を誘起する［Ｈｏｆｍａｎｎ，Ｍ．Ａ．，ｅｔａｌ．、ＲＡＧＥは新規の前炎症軸を媒介する：Ｓ１００／カルグラヌリンポリペプチドの中央細胞表面レセプター（ＲＡＧＥｍｅｄｉａｔｅｓａｎｏｖｅｌｐｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙａｘｉｓ：ａｃｅｎｔｒａｌｃｅｌｌｓｕｒｆａｃｅｒｅｃｅｐｔｏｒｆｏｒＳ１００／ｃａｌｇｒａｎｕｌｉｎｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅｓ）非特許文献１７］。この増加した酸化的ストレスは転写因子ＮＦ−ｋＢの活性化を導き、そしてアテローム硬化症に関連したＮＦ−ｋＢ遺伝子の発現を促進する［Ｂｉｅｒｈａｕｓ，Ａ．，ｅｔａｌ．、血管疾患および糖尿病におけるＡＧＥｓおよびそのＡＧＥ−レセプターとの相互作用。Ｉ．ＡＧＥ概念。非特許文献２］。

・ガンとの関連では、ＲＡＧＥ活性化の遮断が腫瘍の増殖および腫瘍細胞の内皮をわたる移動に関連する幾つかのメカニズム阻害する。これはまた自然な、および移植した腫瘍の両方の増殖および転移も下げる［Ｔａｇｕｃｈｉ，Ａ．ｅｔａｌ．、ＲＡＧＥ−アンホテリンシグナル発信の遮断は、腫瘍増殖および転移を上に押さえる（ＢｌｏｃｋａｄｅｏｆＲＡＧＥ−ａｍｐｈｏｔｅｒｉｎｓｉｇｎａｌｌｉｎｇｕｐｐｒｅｓｓｅｓｔｕｍｏｒｇｒｏｗｔｈａｎｄｍｅｔａｓｔａｓｅｓ）非特許文献１８］。

酸素
酸素の様々な有害形態は一般に体内で生成される：一重項酸素；スーパーオキシドラジカル；過酸化水素；およびヒドロキシラジカルはすべて組織傷害を引き起こす。これらおよび類似の酸素関連種に関して対応できる用語は「活性酸素種」（ＲＯＳ）である。ＲＯＳは中でも組織タンパク質、脂質および核酸（例えばＤＮＡ）を損傷し、そしてガン、アテローム硬化症、糖尿病、老化、慢性関節リウマチ、痴呆、外傷、脳卒中および感染のような多くの慢性および急性疾患の終点である。

グルコース
グルコースは生命の最も重要な燃料であるが、ＲＯＳを導くメチルグリオキサール（ＭＧ）および３−デオキシグルコソン（３ＤＧ）のような細胞傷害性カルボニルも形成する。ＭＧ生産は解糖の誤りの結果であり、そしてそれ自体は治療的に制御することができない。身体はほとんどのＭＧを、グルタチオン（ＲＯＳ種との直接的相互作用によりＲＯＳから細胞を保護する化合物）を要求するグリオキシラーゼ経路を介して除去する。３ＤＧはグリオキシラーゼ経路による解毒を逃れるが、そのレベルは阻害できる必須ではない酵素的反応から生じるので制御することができる。以前にこの酵素を単離し、そして特性決定し、そして「アマドラーゼ（Ａｍａｄｏｒａｓｅ）」と命名した。

ＡＧＥｓ
ＲＯＳの形成に加えて、３ＤＧは後期糖化反応生成物（ＡＧＥｓ）の前駆体であり、これも身体に有害な効果を有し、そして多くの炎症疾患に関与している。還元糖がタンパク質の遊離アミノ基に共有結合し、最終的にＡＧＥｓを形成するタンパク質の非酵素的糖化は、正常な加齢および加速された糖尿病の間に生じることが見いだされた（非特許文献２）。タンパク質の糖化は、ＡＧＥｓを導くメチルグリオキサールおよび３ＤＧのような反応性の二官能性化合物を導く反応カスケードの第１段階である。

ＡＧＥｓの強化された形成および蓄積は、ＡＧＥ形成およびタンパク質の架橋化がタンパク質、脂質成分および核酸の構造および機能的特性を改変する不可逆的プロセスであるので、アテローム硬化症およびアルツハイマー病のようなさらなる疾患の病原にも主要な役割を果たすことが提案された。同上。

ＡＧＥｓの大変重要な間接的結末は、多くの種々の細胞型上のレセプターへのそれらの結合である。最も知られているレセプターはＲＡＧＥであり、これは免疫グロブリンスーパーファミリーに属する。それらのレセプターによるＡＧＥｓのインターナリゼーションは、細胞中に増大したＲＯＳ生産を生じ、そしてサイトカイン、内皮、トロンボモジュリンおよび他の炎症因子を増加させる。ＲＡＧＥレセプターの数は高血糖症で増加することに注目すべきである。

最近、ＡＧＥ形成の阻害が糖尿病ラットにおける腎症の程度を下げることが証明された（非特許文献１）。したがって３ＤＧのインヒビターのようなＡＧＥ形成を減少させる物質は疾患の進行を制限するはずであり、そして治療的介入のための新しい道具を提供することができる（Ｂｉｅｒｈａｕｓ；非特許文献３）。いかなる理論にも拘束されることを望まないが、図１７の図式的説明は、ＲＯＳにより影響を受ける種々の疾患を記載する。

３−デオキシグルコソンはタンパク質の架橋化に関連する有力なタンパク質糖化剤である
３−デオキシグルコソン（３ＤＧ）は、有力なタンパク質架橋剤である１，２−ジカルボニル−３−デオキシ糖であり、催奇性および／または突然変異性であり、アポトーシス、突然変異および活性酸素種の形成を引き起こし、そして後期糖化反応生成物（ＡＧＥ）で修飾されたタンパク質の形成に対する前駆体である。Ｂｒｏｗｎｌｅｅにより概説され、そして図１に示すように、これまでに一般的に受け入れられた３ＤＧの形成に関する経路は、グルコースとリシン−含有タンパク質のε−ＮＨ_２基との間の可逆的反応を含んでなり、シッフ塩基（非特許文献１９）を形成する。このシッフ塩基は転位して、フルクトース−リシン（ＦＬ）または「アマドリ生成物（Ａｍａｄｏｒｉｐｒｏｄｕｃｔ）」として知られているより安定なケトアミンを形成する。３ＤＧ生産は後の非酵素的転位、脱水およびフルクトースリシンを含有するタンパク質の断片化から排他的に生じるというのが定説であった（非特許文献１９；非特許文献２０）（図１を参照にされたい）。しかしより最近の研究では、３ＤＧの生産に関する酵素的経路も存在することが示された（図１および２および特許文献１を参照にされたい）。Ｂｒｏｗｎｅｔａｌ．により提供された開示（特許文献２）は引用により全部、本明細書に編入する。

糖尿病により影響を受けた器官で比較的高濃度の３ＤＧを生産する代謝経路が見いだされた（特許文献１）。また特異的キナーゼがフルクトース−リシンをフルクトース−リシン−３−ホスフェート（ＦＬ３Ｐ）にＡＴＰ依存的反応式で転換し、そしてそのＦＬ３Ｐが分解して、遊離リシン、無機ホスフェートおよび３ＤＧを形成することも見いだされた。同上。３ＤＧ経路の成分を測定することに基づく糖尿病に対するリスクを評価する方法も記載された（特許文献３）。

Ｂｒｏｗｎｅｔａｌ．の特許文献１は、フルクトース−リシンのＦＬ３Ｐへの酵素的転換を阻害し、そしてこれにより３ＤＧの形成を阻害するクラスの化合物を記載する。このクラスの代表的な特別な化合物も記載された（Ｂｒｏｗｎｅｔａｌ．、特許文献４）。例えば尿または血漿３ＤＧはメグルミン、ソルビトールリシン、マンニトールリシンおよびガラクチトールリシンにより減少させることができることが見いだされた。同上。糖化されたタンパク質が高い食物は腎臓に有害であり、そして出生率の減少を引き起こすことが見いだされた。同上。フルクトース−リシン経路は腎臓の発癌に関与することも開示された。同上。さらに以前の実験では、食物および３ＤＧがこの経路に関する発癌に役割を果たしていることを証明している（特許文献５；特許文献６；特許文献４を参照にされたい）。

３ＤＧの解毒
３ＤＧは少なくとも２つの経路により体内で解毒することができる。１つの経路では、３ＤＧをアルデヒドレダクターゼにより３−デオキシフルクトース（３ＤＦ）に還元し、そして３ＤＦは次いで尿中に排出される（非特許文献７）。別の解毒反応は、３ＤＧをオキソアルデヒドデヒドロゲナーゼにより３−デオキシ−２−ケトグルコン酸（ＤＧＡ）に酸化する（非特許文献２１）。

今日までの結果は、これら酵素の少なくとも１つ、アルデヒドレダクターゼの効率が糖尿病において悪影響を受けていることを示す。糖尿病ラットの肝臓から単離した時、この酵素は６７、８４および１４０位のリシン上で糖化され、そして正常な非修飾化酵素と比べた時、低い触媒的効率を有する（非特許文献７）。糖尿病患者は正常血糖値の個体よりも高い割合の糖化タンパク質を有するので、患者は高レベルの３ＤＧ、および３ＤＦへの還元によりこの反応性分子を解毒する能力の低下の両方を有するらしい。アルデヒドレダクターゼの過剰発現が、メチルグリオキサールまたは３ＤＧの細胞傷害性効果からＰＣ１２細胞を保護することも見いだされた（非特許文献１５）。

アルデヒドレダクターゼが作用するメカニズムが研究された。これらの研究は、この重要な解毒酵素がアルドースレダクターゼインヒビター（ＡＲＩｓ）により阻害されることを証明した（非特許文献２２）。ＡＲＩｓは現在、糖尿病の合併症を減らすそれらの能力について臨床検査されているところである。これらの化合物はクラスとして、短期の糖尿病の合併症に幾らか効果があることが示された。しかしそれらは長期の糖尿病の合併症に対して臨床効果が無く、そして高タンパク質食のラットでは腎臓機能を悪化させる。この知見は、リシン回収に関して新たに発見された代謝経路と一致する。

迅速に排出される共有誘導体の形成を介して薬理学的に３ＤＧを解毒する作用物質であるアミノグアニジン（非特許文献２３）は、動物モデルにおいてＡＧＥが関連する網膜、神経、大動脈および腎臓の病状を減らすことが示された（非特許文献１９；非特許文献２４；非特許文献２５；非特許文献２６；および非特許文献２７）。

糖尿病および他の疾患における３ＤＧの役割
過去の実験は糖尿病における３ＤＧの役割に集中していた。糖尿病のヒトは、非糖尿病個体と比べて血漿中（非特許文献２８；非特許文献２９）、および尿中（非特許文献２９）に検出可能に上昇したレベルの３ＤＧおよび３−デオキシフルクトース（３ＤＦ）、３ＤＧの解毒産物を有することが示された。さらに腎症がある糖尿病は、非糖尿病と比べて３ＤＧの上昇した血漿レベルを有することが分かった（非特許文献２８）。

インスリン−依存的糖尿病（ＩＤＤＭ）と非インスリン−依存的糖尿病（ＮＩＤＤＭ）患者とを比較した最近の実験は、３ＤＧおよび３ＤＦレベルが両種の患者群からの血液および尿中で上昇していたことを確認した（非特許文献３０）。さらにグルコースおよびタンパク質をインビトロで、生理学的条件下でインキュベーションすると、３ＤＧが生成されることが示された。

次いで、３ＤＧはタンパク質を糖化し、そして架橋して検出可能なＡＧＥ生成物を生成することが証明された（非特許文献３１；非特許文献３２）。

３ＤＧの還元的解毒に関する正常経路（３ＤＦへの転換）は、それらの尿および血漿中の３ＤＧ対３ＤＦの比率が、非糖尿病個体とは有意に異なるので、糖尿病のヒトでは損なわれているかもしれない（非特許文献３０）。

さらに対照のラット腎臓と比べて、上昇したレベルの３ＤＧ修飾化タンパク質が糖尿病ラットの腎臓で見いだされた（非特許文献３３）。３ＤＧはグルタチオンレダクターゼ（中心的な抗酸化酵素）のような酵素を不活性化する能力を有することが示された。またヘモグロビン−ＡＧＥレベルが糖尿病個体で上昇し（非特許文献３４）、そして他のＡＧＥタンパク質が実験モデルにおいて、糖尿病ラットの網膜、レンズおよび腎皮質で５〜２０週の期間にわたり経時的に蓄積し、５〜５０倍増加することも示された（非特許文献１９）。さらに３ＤＧは糖尿病胚障害における催奇性因子であることが示された（非特許文献１２）。

還元糖が遊離アミノ基に共有結合し、最終的にＡＧＥｓを形成する非酵素的糖化は、正常な加齢で起こり、そして糖尿病では加速されて起こることが見いだされた（非特許文献２）。タンパク質の架橋、それに続くＡＧＥ形成は、タンパク質、脂質成分および核酸の構造および機能的特性を改変する不可逆的なプロセスである（非特許文献２）。これらのプロセスは、腎症、網膜症および神経障害を含む一連の糖尿病の合併症の発症に寄与するものと仮定されてきた（非特許文献３５）。

最近、ＡＧＥ形成の阻害が糖尿病ラットの腎症の程度を下げることが示された（非特許文献１）。したがってＡＧＥ形成および／または酸化的ストレスを阻害する物質は、糖尿病およびその合併症の進行を制限し、そして糖尿病の治療における治療的介入のための新規道具を提供することができると思われる（非特許文献２；非特許文献３）。

まとめると、３ＤＧは細胞に対して数々の毒性効果を有し、そして幾つかの疾患状態では上昇したレベルで存在する。３ＤＧの有害効果には、限定するわけではないが以下を含む。

３ＤＧはヒトの臍静脈内皮細胞に活性酸素種を誘導し、これは酸化的ＤＮＡ傷害をもたらすことが知られている（非特許文献４）。

以前に３ＤＧはＲＯＳから細胞を保護する幾つかの最も重要な酵素を不活性化することが示された。例えばグルタチオンペルオキシダーゼ（中心的な抗酸化酵素）、および細胞中でグルタチオンの再生に必要なグルタチオンレダクターゼは、両方とも３ＤＧにより不活性化される（非特許文献５；非特許文献６）。

これまでの実験は、３ＤＧがアルデヒドレダクターゼを不活性化することを示す（非特許文献７）。これはアルデヒドレダクターゼが３ＤＧから身体を保護する細胞性酵素であるので重要である。ダイナミスは、尿および血漿中の３ＤＧ対３ＤＦの比率が非糖尿病個体とは有意に異なるので、３ＤＧから３−デオキシフルクトース（３ＤＦ）へのこの解毒が糖尿病のヒトでは損なわれていることを支持する証拠を有する（非特許文献８）。

さらに３ＤＧは糖尿病の合併症の発症に寄与する活性酸素種を誘導することが証明された（非特許文献９）。具体的には３ＤＧはヘパリン−結合上皮増殖因子、アテローム硬化症斑中で豊富な平滑筋マイトジェンを誘導する。これは３ＤＧの増加が糖尿病におけるアテローム発生を誘起できることを示唆している（非特許文献１０；非特許文献１１）。

さらに３ＤＧは糖尿病胚障害における催奇性因子であり、胚性奇形を導く（非特許文献１２）。これは３ＤＧの蓄積から起こり、スーパーオキシドが媒介する胚障害を導くと思われる。

さらに最近では、３ＤＧはマクロファージ由来の細胞株にアポトーシスを誘導し（非特許文献１３）、そして培養した皮質ニューロン（非特許文献１４）、およびＰＣ１２細胞（非特許文献１５）に対して毒性であることが証明された。筋萎縮性側索硬化症（運動ニューロン疾患の形態）の原因に関する最近の研究は、３ＤＧの蓄積がＲＯＳ生成の結果として神経毒性を導く可能性を示唆した（非特許文献１６）。

以前の実験では、３ＤＧがタンパク質を糖化し、そして架橋して後期糖化反応生成物（ＡＧＥｓ）と呼ばれる化合物の複雑な混合物を導くことが示された（非特許文献３１；非特許文献３２）。ＡＧＥｓは糖尿病、アテローム硬化症および痴呆のようなほとんどの炎症疾患に関与してきた。それらは通常、コラーゲンのような長寿の構造タンパク質上に形成される。

ヘモグロビン−ＡＧＥレベルは糖尿病個体で上昇し（非特許文献３４）、そして他のＡＧＥタンパク質が実験モデルにおいて、糖尿病ラットの網膜、レンズおよび腎皮質で５〜２０週の期間にわたり経時的に蓄積し、５〜５０倍増加することも示された（非特許文献１９）。

ＡＧＥｓは、細胞上のＲＡＧＥと呼ばれる特異的レセプターを有する。内皮細胞、単核食細胞およびリンパ球上の細胞性ＲＡＧＥの活性化は、フリーラジカルの生成および炎症性遺伝子メディエーターの発現を誘起する（非特許文献１７）。この増加した酸化的ストレスは転写因子ＮＦ−ｋＢの活性化を導き、そしてアテローム硬化症に関連したＮＦ−ｋＢ遺伝子の発現を促進する（非特許文献２）。

ガンとの関連では、ＲＡＧＥ活性化の遮断が腫瘍の増殖および腫瘍細胞の内皮をわたる移動に関連する幾つかのメカニズム阻害する。これはまた自然な、および移植した腫瘍の両方の増殖および転移も下げる（非特許文献１８）。

ラットモデルの腎臓細胞癌腫における腎臓３ＤＧ濃度の上昇は、腫瘍の形成率を増加させ、そして総腫瘍数を３倍に増加させた。

高濃度の３ＤＧがヒトのリンパ芽腫および網膜芽腫および神経芽腫細胞に存在する。多くの腫瘍がＲＯＳを上昇した速度で合成し、そして持続的な酸化的ストレス下にあると思われるので、３ＤＧまたは３ＤＧに由来するＡＧＥｓが関与することができる。

糖尿病のヒトは非糖尿病個体と比べて血漿中（非特許文献２８；非特許文献２９）、および尿中（非特許文献２９）に検出可能に上昇したレベルの３ＤＧおよび３ＤＦを有する。

腎症を有する糖尿病は、他の非糖尿病と比べて３ＤＧの上昇した血漿レベルを有することが分かった（非特許文献２８）。３ＤＧ修飾化タンパク質の上昇したレベルは、対照のラット腎臓に対して糖尿病で見いだされる（非特許文献３３）。

皮膚
ヒトの皮膚は表面成分である表皮、および深部の成分である真皮から構成される複合物質である。表皮の最外層は角質である。この層は皮膚の硬い層であり、同時に周囲の環境に最も影響を受ける層である。角質の下が表皮の内部である。表皮の下が真皮の乳頭層であり、これは皮膚の微起状を定める比較的ゆるい結合組織を構成する。乳頭真皮の下の網状真皮は、空間的に組織された緻密な結合組織である。網状真皮は粗い皺に関連する。真皮の下が皮下の結合組織および脂肪組織である。

皮膚の主要な機能には、保護、排出、分泌、吸着、温度調節、色素形成、蓄積、感覚認知および免疫学的プロセスの調節を含む。これらの機能は老化および皮膚の種々の疾患または傷害による皮膚の構造的変化により悪影響を受ける。正常な皮膚の加齢および光加齢に関連する生理学的変化には、例えば弾力の損失、コラーゲンの減少、コラーゲンおよびエラスチンの架橋、皺、乾燥／粗い肌理、および斑点状の色素過剰を含む。

弾性のような皮膚の機械的特性は、全体を走るコラーゲンおよび弾性繊維のネットワークの密度により調節される。損傷したコラーゲンおよびエラスチンタンパク質はそれらの収縮性を失い、皮膚の皺および皮膚表面の粗さといった事柄をもたらす。皮膚が老化するか、または疾患または障害により悪化し始めると、皮膚はたるみ、条、隆起、または皺をもたらし、粗くなり、変色し、そしてビタミンＤを合成する能力が低下する。また老化した皮膚は薄くなり、そしてコラーゲン、エラスチンおよびグルコサミノグリカンの変化により平坦化した真皮表皮境界面を有する。

皮膚は重要な器官であり、そして多くの皮膚に関する障害、疾患および状態に効果的な治療および／または診断が無いままである。皮膚の老化、皺等は重大な研究の課題であるという事実にもかかわらず、当該技術分野では長い間、皮膚に関連するこれら、および他の疾患、障害または状態を処置する新規方法の必要性が感じられているままである。本発明はこの必要性を満たす。
米国特許第６，００４，９５８号明細書米国特許第６，００６，９５８号明細書国際公開第９９／６４５６１号パンフレット国際公開第９８／３３４９２号パンフレット国際公開第００／２４４０５号パンフレット国際公開第００／６２６２６号パンフレットＮｉｎｏｍｉｙａ，Ｔ．，ｅｔａｌ．，Ｄｉａｂｅｔｅｓ，２００１．５０Ｓｕｐｐｌ．（２）：ｐ．Ａ１７８−１７９Ｂｉｅｒｈａｕｓ，Ａ，ｅｔａｌ．，Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ．Ｒｅｓ．１９９８．３７（３）：ｐ．５８６−６００Ｔｈｏｒｎａｌｌｅｙ，Ｐ．Ｊ．，Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅｔａｂ．，１９９６．３：ｐ．１４９−１６６Ｓｈｉｍｏｉ，Ｋ．，ｅｔａｌ．，Ｍｕｔａｔ．Ｒｅｓ．２００１．４８０−４８１：ｐ．３７１−８ＶａｎｄｅｒＪａｇｔ，Ｄ．Ｌ．，ｅｔａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１９９７．５３（８）：ｐ．１１３３−４０Ｎｉｗａ，Ｔ．ａｎｄＳ．Ｔｓｕｋｕｓｈ，ＫｉｄｎｅｙＩｎｔ．Ｓｕｐｐｌ．２００１．７８：ｐ．Ｓ３７−４１Ｔａｋａｈａｓｈ，Ｍ．，ｅｔａｔ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９９５．３４（４）：ｐ．１４３３−８Ｌａｌ，Ｓ．，ｅｔａｔ．，Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．１９９７．３４２（２）：ｐ．２５４−６０Ａｒａｋｉ，Ａ．，ＮｉｐｐｏｎＲｏｎｅｎＩｇａｋｋａｉＺａｓｓｈｉ，１９９７．３４（９）：ｐ．７１６−２０Ｔａｎｉｇｕｃｈｉ，Ｎ．，ｅｔａｌ．，Ｄｉａｂｅｔｅｓ，１９９６．４５Ｓｕｐｐｌｅ３：ｐ．Ｓ８１−３Ｃｈｅ．Ｗ．，ｅｔａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．１９９７．２７２（２９）：ｐ．１８４５３−９Ｅｒｉｋｓｓｏｎ，Ｕ．Ｊ．，ｅｔａｌ．，Ｄｉａｂｅｔｅｓ，１９９８．４７（１２）：ｐ．１９６０−６Ｏｋａｄｏ，Ａ．，ｅｔａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１９９６．２２５（１）：ｐ．２１９−２４Ｋｉｋｕｃｈｉ，Ｓ．，ｅｔａｌ．，Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．Ｒｅｓ．１９９９．５７（２）：ｐ．２８０−９Ｓｕｚｕｋｉ，Ｋ．，ｅｔａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．（Ｔｏｋｙｏ），１９９８．１２３（２）：ｐ．３５３−７Ｓｈｉｎｐｏ，Ｋ．，ｅｔａｌ．，ＢｒａｉｎＲｅｓ．２０００．８６１（１）：ｐ．１５１−９Ｈｏｆｍａｎｎ，Ｍ．Ａ．，ｅｔａｌ．，Ｃｅｌｌ，１９９９．９７（７）：ｐ．８８９−９０１Ｔａｇｕｃｈｉ，Ａ．，ｅｔａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ．２０００．４０５（６７８４）：ｐ．３５４−６０Ｂｒｏｗｎｌｅｅｅｔａｌ．，Ｄｉａｂｅｔｅｓ１９９４．４３：８３６−８４１ＭａｋｉｔａｅｔａｌＳｃｉｅｎｃｅ１９９２．２５８：６５１−６５３Ｆｕｊｉｉｅｔａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．１９９５．２１０：８５２Ｂａｒｓｋｉｅｔａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ１９９５．３４：１１２６４Ｈｉｒｓｃｈｅｔａｌ．，Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ．Ｒｅｓ．１９９２．２３２：１２５−１３０Ｂｒｏｗｎｌｅｅｅｔａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ１９８６．２３２：１６２９−１６３２Ｅｌｌｉｓｅｔａｌ．，Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ１９９１．４０：１０１６−１０１９Ｓｏｕｌｉｓ−Ｌｉｐａｒｏｔａｅｔａｌ，．Ｄｉａｂｅｔｅｓ１９９１．４０：１３２８−１３３４Ｅｄｅｌｓｔｅｉｎｅｔａｌ．，Ｄｉａｂｅｔｏｌｏｇｉａ１９９２．３５：９６−９７Ｎｉｗａｅｔａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．ＲｅｓＣｏｍｍｕｎ．１９９３．１９６：８３７−８４３Ｗｅｌｌｓ−Ｋｎｅｃｈｔｅｔａｌ．，Ｄｉａｂｅｔｅｓ．１９９４．４３：１１５２−１１５６Ｌａｌｅｔａｌ．，Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．１９９５３１８：１９１−１９９Ｂａｙｎｅｓｅｔａｌ．，ＭｅｔｈｏｄｓＥｎｚｙｍｏｌ．１９８４．１０６：８８−９８Ｄｙｅｒｅｔａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ１９９１．２６６：１１６５４−１１６６０Ｎｉｗａｅｔａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１９９７．９９：１２７２−１２８０Ｍａｋｉｔａｅｔａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ１９９２．２５８：６５１−６５３Ｒａｈｂａｒｅｔａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１９９９．２６２：６５１−６６０

発明の要約
本発明は本明細書に開示するように、３ＤＧが皮膚に存在するという驚くべき知見に基づく。本発明はさらに皮膚に特異的なキナーゼがフルクトース−リシンをフルクトース−リシン−３−ホスフェート（ＦＬ３Ｐ）にＡＴＰ依存的反応で転換し、そのＦＬ３Ｐが分解して３ＤＧ、無機ホスフェートおよび遊離リシンを形成する代謝経路が存在するという知見に基づく。したがって本発明は、皮膚で酵素的に誘導された３ＤＧ合成分解および蓄積を阻害するための組成物および方法；３ＤＧ機能を阻害するか、または３ＤＧを皮膚から除去するための組成物および方法；ならびに本明細書に記載する代謝経路および組成物および方法に基づき、ならびに３ＤＧおよびその生産を媒介する酵素的経路が皮膚に存在するという驚くべき知見に基づき、３ＤＧの解毒および皮膚からの除去速度を増す組成物および方法を包含する。

発明の詳細な説明
本発明は一般に３ＤＧおよびその生産のための経路（１つまたは複数）が皮膚に存在するという新規知見に関する。さらに３ＤＧレベルは非糖尿病の皮膚よりも糖尿病の皮膚で多く、ならびに非強皮症患者よりも強皮症患者の皮膚で多い。したがって本発明は皮膚における３ＤＧの生産または機能を阻害する方法、および皮膚から３ＤＧを除去する方法を包含する。過剰な３ＤＧは糖尿病および他の疾患の病原に関与することが示されたが、本発明まで皮膚における３ＤＧの存在または不存在は決定されなかった。正常な皮膚機能および皮膚疾患における３ＤＧの役割も調査されなかった。本明細書に記載するデータは初めて３ＤＧがヒトの皮膚に存在し、そして３ＤＧの合成を調節する酵素をコードする遺伝子が皮膚で発現することを証明する。さらに３ＤＧのレベルは強皮症患者の皮膚で多いことが見いだされた。本発明はさらに３ＤＧが架橋化、および皮膚の皺、老化、疾患および障害に関連する他の問題を生じることを阻止できる化合物を開示する。

定義
特に限定しない限り、本明細書で使用するすべての技術および科学用語は本発明が属する分野の当業者が普通に理解している意味と同じ意味を有する。本明細書に記載するものに類似の、または均等な任意の方法および材料を本発明の実施および試験に使用することができるが、好適な方法および材料を本明細書では記載する。

本明細書で使用する以下の各用語は、この章でのその意味を有する。

本明細書で使用する冠詞「ａ」および「ａｎ」は、１以上（すなわち少なくとも１つ）の物体の文法的対象を指す。例えば「要素（ａｎｅｌｅｍｅｎｔ）」は、１つの要素または１より多くの要素を意味する。

本明細書で使用する用語「３ＤＧの蓄積」または「アルファ−ジカルボニル糖の蓄積」とは、経時的な３ＤＧおよび／またはアルファ−ジカルボニル糖レベルの検出可能な増加を指す。

本明細書で使用する「アルファ−ジカルボニル糖」とは３−デオキシグルコソン、グリオキサール、メチルグリオキサールおよびグルコソンを含む化合物のファミリーを指す。

「アルファ−ジカルボニル糖が関連する皮膚の皺、老化、疾患または障害のパラメーター」とは、３ＤＧレベル、３ＤＦレベル、フルクトサミンキナーゼレベル、タンパク質の架橋化およびアルファ−ジカルボニル糖が関連する皮膚の皺、老化、疾患または障害の他のマーカーまたはパラメーターを含む本発明に記載する生物学的マーカーを指す。

本明細書で使用する「３−デオキシグルコソン」または「３ＤＧ」は、１，２−ジカルボニル−３−デオキシ糖（３−デオキシヘキュロソン（ｄｅｏｘｙｈｅｘｕｌｏｓｏｎｅ）としても知られている）を指し、これは酵素的経路を介して形成することができ、または非酵素的経路を介して形成することができる。本記載の目的には、用語３−デオキシグルコソンは、図１に記載する非酵素的経路、および図２に記載するＦＬ３Ｐの分解を生じる酵素的経路を含む経路を介して形成することができるアルファ−ジカルボニル糖である。３ＤＧの別の供給源は食物である。３ＤＧはアルファ−ジカルボニル糖ファミリーの一員であり、２−オキソアルデヒドとしても知られている。

本明細書で使用する「３ＤＧ関連（３ＤＧａｓｓｏｃｉａｔｅｄ）」または「３ＤＧ関連（３ＤＧｒｅｌａｔｅｄ）」疾患または障害とは、３ＤＧにより引き起こされる、示される、または付随する疾患、状態または障害を指し、強化された３ＤＧの合成、生産、形成および蓄積に関する欠損、ならびに減少したレベルの３ＤＧの分解、解毒、結合およびクリアランスにより引き起こされ、媒介され、または付随する疾患、状態または障害を含む。

化合物の「３ＤＧ阻害量」または「アルファ−ジカルボニル阻害量」とは、３ＤＧまたは別のアルファ−ジカルボニル糖の合成、形成、蓄積および／または機能のような目的の機能またはプロセスを阻害するために十分な化合物の量を指す。

「３−Ｏ−メチルソルビトールリシン（３−Ｏ−Ｍｅ−ソルビトールリシン）」は、本明細書に記載するフルクトサミンキナーゼのインヒビターである。これは用語「ＤＹＮ１２と互換的に使用する。

本明細書で使用する「疾患または障害の症状を緩和する」とは、症状の重篤度を下げることを意味する。

本明細書で使用する用語「ＡＧＥ−タンパク質」（後期糖化反応生成物で修飾されたタンパク質）は、糖とタンパク質との間の反応の生成物を指す（Ｂｒｏｗｎｌｅｅ，１９９２，ＤｉａｂｅｔｅｓＣａｒｅ，１５：１８３５；Ｎｉｗａｅｔａｌ．，１９９５，Ｎｅｐｈｒｏｎ，６９：４３８）。例えばタンパク質のリシン残基とグルコースとの間の反応、これはフルクトース−リシン（ＦＬ）の形成で止まらない。ＦＬは多数の脱水を受け、そして転位反応により非酵素的な３ＤＧを生成し、これは遊離アミノ基と再び反応して関与するタンパク質の架橋化および褐変を導く。ＡＧＥｓは限定するわけではないが図１６に示すような３ＤＧと他の化合物との反応から形成される生成物も含む。

本明細書で使用する「アマドラーゼ」は、３−ＤＧ生産の原因であるフルクトサミンキナーゼを指す。さらに具体的にはこれは、高エネルギーホスフェート源がさらに供給された時、上で定義したＦＬをＦＬ３Ｐに酵素的に転換することができるタンパク質を称する。

本明細書で使用する用語「アマドリ生成物（Ａｍａｄｏｒｉｐｒｏｄｕｃｔｓ）」は、限定するわけではないがフルクトースリシンのようなケトアミンを指し、グルコースとリシン含有タンパク質のε−ＮＨ_２基との相互作用後の転位生成物である。

本明細書で使用する「アミノ酸」は以下の表に示すように、それらの完全名により、それらに対する３文字暗号により、またはそれらに対する１文字暗号により表される：

用語「結合する」は、限定するわけではないが酵素対基質、リガンド対レセプター、抗体対抗原、タンパク質のＤＮＡ結合ドメイン対ＤＮＡ、およびＤＮＡまたはＲＮＡ鎖対相補鎖のような分子の互いの付着を指す。

本明細書で使用する「結合パートナー」とは、別の分子へ結合することができる分子を指す。

本明細書で使用する用語「生物学的サンプル」は、皮膚、毛髪、組織、血液、血漿、細胞、汗および尿を含む生きている器官から得られるサンプルを指す。

本明細書で使用する用語「クリアランス」は、拡散、剥離、血流による除去、および尿中への排出により、または他の汗もしくは他の流体を介するような化合物または分子の除去の生理学的プロセスを指す。

遺伝子の「コード領域」は、遺伝子の転写により生成されるｍＲＮＡ分子のコード領域にそれぞれ相同的もしくは相補的な遺伝子のコード領域のヌクレオチド残基および非コード領域のヌクレオチドからなる。

本明細書で使用する「相補的」とは、２つの核酸間、例えば２つのＤＮＡ分子の間のサブユニット配列の相補性の広い概念を指す。両分子中のヌクレオチド位が、通常は互いに塩基対合できるヌクレオチドにより占められている時、核酸はその位置で互いに相補的であると考えられる。すなわち２つの核酸は、各分子において対応する位置の実質的数（少なくとも５０％）が、通常、互いに塩基対合できるヌクレオチド（例えばＡ：ＴおよびＧ：Ｃヌクレオチド対）により占有されている時、互いに相補的である。このように第１核酸領域のアデニン残基は、第１領域に逆平行である第２核酸領域の残基と、この残基がチミンまたはウラシルならば特異的な水素結合（「塩基対」）を形成することができることが知られている。同様に第１核酸鎖のシトシン残基は、第１鎖に逆平行である第２核酸鎖の残基と、この残基がグアニンならば塩基対を形成することができることが知られている。２つの領域が逆平行の様式で並べられた時、第１領域の少なくとも１つのヌクレオチド塩基が第２領域の残基と塩基対合できる場合、核酸の第１領域は、同じかまたは異なる核酸の第２領域に相補的である。好ましくは第１領域は第１部分を含んでなり、そして第２領域は第２部分を含んでなり、これにより第１および第２部分が逆平行の様式で並べられた時、少なくとも約５０％、そして好ましくは少なくとも約７５％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％の第１部分のヌクレオチド残基が、第２部分のヌクレオチド残基と塩基対合することができる。より好ましくは第１部分のすべてのヌクレオチド残基が、第２部分のヌクレオチドと塩基対合することができる。

本明細書で使用する「化合物」は、通常は薬剤または薬剤としての使用の候補物質と考えられる任意の種類の物質または作用物質（ａｇｅｎｔ）、ならびに上記の組み合わせおよび混合物、化合物の修飾された変更体または誘導体を指す。

本明細書で使用する用語「保存的変異」または「保存的置換」とは、別の生物学的に類似する残基によるアミノ酸残基の置き換えを指す。保存的変異または置換は、ペプチド鎖の形状を有意に変えないと思われる。保存的変異または置換の例には、イソロイシン、バリン、ロイシンもしくはアラニンのような疎水性残基の別の残基への置き換え、またはアルギニンからリシンへの、グルタミン酸へアスパラギン酸からの、またはグルタミンからアスパラギンへのような１つの荷電したアミノ酸の別のアミノ酸への置換を含む。

３ＤＧの「解毒」とは、３ＤＧのその正常な機能を行うことができない形態への分解または転換を指す。解毒は「薬理学的解毒」、または３ＤＧの解毒を引き起こすことができる代謝経路を含む任意の組成物または方法によりもたらされるか、または刺激することができる。

３ＤＧまたは他のアルファ−ジカルボニル糖の「薬理学的解毒」とは、化合物が３ＤＧに結合または修飾し、次いでこれを不活性となるようにするか、または限定するわけではないが排出のような代謝的経路により除去されるプロセスを指す。

「疾患」は、動物が恒常性を維持することができず、そして疾患が緩和されなければ、動物の健康が悪化し続ける、動物の健康状態を指す。本明細書で使用するように、正常な加齢は疾患として含む。

動物の「障害」は、動物が恒常性を維持することができるが、動物の健康状態は障害が無い場合よりも順調ではない、動物の健康状態を指す。未処置のままで、障害は動物の健康状態にさらなる低下を必ずしも引き起こさない。

本明細書で使用する用語「ドメイン」は、限定するわけではないが疎水性、極性、球状および螺旋状ドメインのような共通する物理化学的特徴、またはリガンド結合、シグナル伝達、細胞透過等のような特性を共有する分子または構造の部分を指す。結合ドメインの具体例は、限定するわけではないが、ＤＮＡ結合ドメインおよびＡＴＰ結合ドメインを含む。

化合物の「有効量」または「治療に有効な量」は、化合物が投与される個体に有益な効果を提供するか、または化粧料として治療的効果を提供する外観を与えるために十分な化合物の量である。

本明細書で使用する用語「エフェクタードメイン」は、生物学的経路を調節することができる細胞質中のエフェクター分子、化学物質または構造と直接相互作用することができるドメインを指す。

「コードする」とは、定めたヌクレオチド配列（すなわちｒＲＮＡ、ｔＲＮＡおよびｍＲＮＡ）または定めたアミノ酸配列のいずれか、およびそれらから生じる生物学的特性を有する、生物学的プロセスにおける他のポリマーまたは高分子の合成に鋳型として役立つための遺伝子、ｃＤＮＡまたはｍＲＮＡのようなポリヌクレオチド中のヌクレオチドの特別な配列の固有な特性を指す。すなわち遺伝子は、その遺伝子に対応するｍＲＮＡの転写および翻訳が、細胞または他の生物学的系でタンパク質を生産する場合、そのタンパク質をコードする。コード鎖（そのヌクレオチド配列はｍＲＮＡ配列と同一であり、そして通常は配列表に提供されている）、および非コード鎖（遺伝子またはｃＤＮＡの転写の鋳型として使用される）の両方が、その遺伝子またはｃＤＮＡのタンパク質または他の産物をコードすると言うことができる。外に特定しない限り、「アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列」は、互いの縮重変異体であり、そして同じアミノ酸配列をコードするすべてのヌクレオチド配列を含む。タンパク質およびＲＮＡをコードするヌクレオチド配列はイントロンを含むことができる。

本明細書で使用する用語「自由な（ｆｌｏａｔｉｎｇ）」とは、置換基が環構造上に任意の利用可能な炭素連結で結合することができるような環構造への置換基の結合を指す。「固定」結合とは、置換基が特定の部位で結合することを意味する。

「３ＤＧの形成」は、合成経路を介して必ずしも形成される必要はないが、自然な、または誘導された前駆体の分解のような経路を介して形成することができる３ＤＧを指す。

本明細書で使用するタンパク質またはペプチドに適用する用語「断片」は、通常、少なくとも約３〜１５アミノ酸長、少なくとも約１５〜２５アミノ酸、少なくとも約２５〜５０アミノ酸長、少なくとも約５０〜７５アミノ酸長、少なくとも約７５〜１００アミノ酸長、そして１００アミノ酸長よりも大きくなることができる。

核酸に適用する本明細書で使用する用語「断片」は、通常、少なくとも約２０ヌクレオチド長、典型的には少なくとも約５０ヌクレオチド長、さらに典型的には約５０ヌクレオチド〜約１００ヌクレオチド、好ましくは少なくとも約１００〜約２００ヌクレオチド、一層好ましくは少なくとも約２００〜約３００ヌクレオチド、より一層好ましくは少なくとも約３００〜約３５０ヌクレオチド、さらにより一層好ましくは少なくとも約３５０〜約５００ヌクレオチド、さらにより一層好ましくは少なくとも約５００〜約６００ヌクレオチド、さらにより一層好ましくは少なくとも約６００ヌクレオチド〜約６２０ヌクレオチド、さらにより一層好ましくは少なくとも約６２０〜約６５０、そして最も好ましくは核酸断片は約６５０ヌクレオチド長より大きくなるだろう。

本明細書で使用する用語「フルクトース−リシン（ＦＬ）」は、タンパク質／ペプチドに包含されていても、またはタンパク質／ペプチドからタンパク質分解的消化により放出されても任意の糖化リシンを示すために使用する。この用語は、タンパク質のリシン残基とグルコースとの反応から形成されると報告されるフルクトース−リシンと一般に呼ばれる化学構造に特に限定されない。上記のように、リシンのアミノ基は広い種々の糖と反応することができる。実際に１つの報告は、グルコースが試験した１６種の糖の中で最も反応性の低い糖であることを示している（Ｂｕｎｎｅｔａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２１３：２２２（１９８１））。すなわち自然に存在してもしなくても、すべての他の糖との縮合生成物であるので、この記載では用語フルクトース−リシンを挙げていも、グルコースと同様にガラクトースとリシンとから形成されるタガトース−リシンも含める。本明細書の記載から、タンパク質−リシン残基と糖との間の反応には多くの反応段階が関与していると考えられるだろう。この反応順序の最終段階にはタンパク質の架橋化およびＡＧＥ−タンパク質として知られている多量体種（その幾つかは蛍光性である）の生成が関与する。いったんＡＧＥタンパク質が形成されれば、そのようなＡＧＥ−タンパク質のタンパク質分解的消化は糖部分に共有結合したリシンを生じない。このようにこれらの種は本明細書で使用するような「フルクトース−リシン」の意味には含めない。

本明細書で使用する用語「フルクトース−リシン−３−ホスフェート」は、ＡＴＰからの高エネルギーリン酸基をＦＬに酵素的に転移することにより形成される化合物を指す。本明細書で使用する用語、フルクトース−リシン−３−ホスフェート（ＦＬ３Ｐ）は、遊離もしくはタンパク質に結合していても、酵素的に形成され得るすべてのリン酸化されたフルクトース−リシン部分を含むことを意味する。

本明細書で使用する「フルクトース−リシン−３−ホスフェートキナーゼ」（ＦＬ３Ｋ）は、アマドラーゼのような１以上のタンパク質を指し、これは高エネルギーホスフェート源を供給した時、本明細書に記載するようにＦＬをＦＬ３Ｐに酵素的に転換することができる。この用語は「フルクトース−リシンキナーゼ（ＦＬＫ）」および「アマドラーゼ」と互換的に使用する。

本明細書で使用する用語「ＦＬ３Ｐリシン回収経路」は、ヒトの皮膚および腎臓、そして恐らくは他の組織に存在し、そして非修飾リシンを遊離アミノ酸として、またはポリペプチド鎖に取り込まれたものとして再生するリシン回収経路を指す。

本明細書で使用する用語「糖化された食物」とは、標準的なタンパク質の割合が糖化されたタンパク質に置き換えられている上記の任意の食物を指す。「糖化された食物」および「糖化されたタンパク質食」は本明細書で互換的に使用する。

本明細書で使用する「糖化されたリシン残基」とは、還元糖とリシン含有タンパク質の反応により生成される安定な付加産物の修飾されたリシン残基を指す。

タンパク質のリシン残基のほとんどは、正に荷電したアミノ酸について予想されるようにタンパク質の表面上に位置する。すなわち血清または他の生物学的流体と接触することになるタンパク質上のリシン残基は、溶液中の糖分子と自由に反応することができる。反応は多段階で起こる。最初の段階にはリシンの遊離アミノ基と糖のケト基との間のシッフ塩基の形成が含まれる。この初期生成物はアマドリ転位を受けて、安定なケトアミン化合物を生成する。

この一連の反応は、種々の糖で生じることができる。関与する糖がグルコースである時、最初のシッフ塩基生成物は、グルコースのＣ−１上のアルデヒド部分とリシンのε−アミノ基との間のイミン形成を含む。アマドリ転位は、フルクトースのＣ−１炭素上へ結合したリシンの形成、本明細書でフルクトース−リシンまたはＦＬと呼ぶ１−デオキシ−１−（ε−アミノリシン）−フルクトースを生じる。同様の反応が他のアルドース糖、例えばガラクトースおよびリボースとも起こる（Ｄｉｌｌｓ，１９９３，Ａｍ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｎｕｔｒ．５８：Ｓ７７９）。本発明の目的には、任意の還元糖とタンパク質のリシンのε−アミノ残基との反応の初期生成物を、修飾された糖分子の正確な構造にかかわらず、糖化されたリシン残基の意味に含める。

本明細書で使用する「相同的」とは、２つのポリマー性分子の間、例えば２つの核酸分子、例えば２つのＤＮＡ分子もしくは２つのＲＮＡ分子、または２つのポリペプチド分子間のサブユニット配列の類似性を指す。２つの両方の分子中のサブユニット位が同じモノマー性サブユニットにより占められている場合、例えば２つの各ＤＮＡ分子の位置がアデニンにより占められている場合、それらはその位置で相同的である。２つの配列の相同性は、対合または相同的位置の数の直接関数であり、例えば２つの化合物の配列のうちの半分（例えば１０個のサブユニット長のポリマーの５個の位置）が相同的ならば、２つの配列は５０％相同的であり、もし位置の９０％、例えば１０のうちの９が対合または相同的ならば、２つの配列は９０％の相同性を共有する。例として、３’ＡＴＴＧＣＣ５’および３’ＴＡＴＧＧＣは５０％の相同性を共有する。

本明細書で使用する「相同的」または「相同性」は、「同一性」と同義的に使用する。２つのヌクレオチドもしくはアミノ酸配列間の同一性または相同性の割合の決定は、数学的アルゴリズムを使用して計算することができる。例えば２つの配列を比較するために有用な数学的アルゴリズムは、ＫａｒｌｉｎおよびＡｌｔｓｃｈｕｌ（１９９０，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８７：２２６４−２２６８）、ＫａｒｌｉｎおよびＡｌｔｓｃｈｕｌの修飾（１９９３，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９０：５８７３−５８７７）である。このアルゴリズムはＡｌｔｓｃｈｕｌ，ｅｔａｌ．のＮＢＬＡＳＴおよびＸＢＬＡＳＴプログラムに包含され（１９９０，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３−４１０）、そして例えばナショナルセンターフォーバイオテクノロジーインフォメーション（ＮａｔｉｏｎａｌＣｅｎｔｅｒｆｏｒＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙＩｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ：ＮＣＢＩ）の世界中のウェッブサイトからアクセスすることができる。ＢＬＡＳＴヌクレオチドサーチは、ＮＢＬＡＳＴプログラム（ＮＣＢＩのウェブサイトでは“ｂｌａｓｔｎ”と命名されている）を用いて、以下のパラメーター：ギャップペナルティー＝５；ギャップエクステンションペナルティー＝２；ミスマッチペナルティー＝３；マッチリワード＝１：期待値１０．０；およびワードサイズ＝１１を使用して行って、本明細書に記載する核酸に対して相同的なヌクレオチド配列を得ることができる。ＢＬＡＳＴタンパク質サーチは、ＸＢＬＡＳＴプログラム（ＮＣＢＩのウェブサイトでは“ｂｌａｓｔｎ”と命名されている）またはＮＣＢＩ“ｂｌａｓｔｐ”を用いて、以下のパラメーター：期待値１０．０、ＢＬＯＳＵＭ６２スコアリングマトリックスを使用して、本明細書に記載するタンパク質に対して相同的なアミノ酸配列を得ることができる。比較の目的でギャプ化アライメントを得るために、ギャップ化ＢＬＡＳＴを、Ａｌｔｓｃｈｕｌ，ｅｔａｌ．（１９９７，ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓＲｅｓ．２５：３３８９−３４０２）に記載されているように利用することができる。あるいはＰＳＩ−ＢｌａｓｔまたはＰＨＩ−Ｂｌａｓｔは使用して、分子間（Ｉｄ．）の顕著な関係および共通パターンを共有する分子間の関係を検出する反復調査を行うことができる。ＢＬＡＳＴ、ギャップ化ＢＬＡＳＴ、ＰＳＩ−ＢｌａｓｔおよびＰＨＩ−Ｂｌａｓｔプログラムを利用する時、各プログラムのデフォルトパラメーター（例えばＸＢＬＡＳＴおよびＮＢＬＡＳＴ）を使用することができる。

２つの配列間の同一性の割合は、ギャップを認め、または認めずに上記に類似する技術を使用して決定することができる。同一の割合を計算するにあたり、典型的には正確な対合をカウントする。本明細書で使用する用語「３ＤＧの誘導」または「３ＤＧを誘導する」は、３ＤＧの合成、生産もしくは形成またはそのレベルの増加を導く経路または出来事を開始または刺激するか、あるいは３ＤＧ機能の上昇を刺激する方法または手段を指す。同様に、「アルファ−ジカルボニル糖の誘導」という句は、３ＤＧ、グリオキサール、メチルグリオキサールおよびグルコソンを含むアルファ−ジカルボニル糖ファミリーの員の誘導を指す。

本明細書で使用する「３ＤＧを阻害する」とは、３ＤＧ合成、生産、形成、蓄積、または機能を阻害する任意の方法または技術、ならびに３ＤＧの合成、形成、蓄積または機能の誘導または刺激を阻害する方法を指す。またこの用語は３ＤＧ機能または誘導を調節できる任意の代謝経路も指す。またこの用語は３ＤＧを解毒することにより、または３ＤＧのクリアランスを引き起こすことにより、３ＤＧ機能を阻害するための組成物または方法も指す。阻害は直接的または間接的であることができる。誘導とは３ＤＧの合成の誘導または機能の誘導を指す。同様に「アルファ−ジカルボニル糖を阻害する」という句は、３ＤＧ、グリオキサール、メチルグリオキサールおよびグルコソンを含むアルファ−ジカルボニル糖ファミリーの員を阻害することを指す。

本明細書で使用する用語「３ＤＧの蓄積を阻害する」とは、結果が組成物または方法で処置しなかった組織中のレベルと比較して、調査または処置した組織中で３ＤＧもしくは機能的３ＤＧが低いレベルとなるように、３ＤＧの合成を減少させ、分解を増加し、またはクリアランスを増加する任意の組成物または方法の使用を指す。同様に、句「アルファ−ジカルボニル糖の蓄積を阻害する」とは、３ＤＧ、グリオキサール、メチルグリオキサールおよびグルコソンおよびそれらの中間体を含むアルファ−ジカルボニル糖ファミリーの員の蓄積を阻害することを指す。

本明細書で使用する「使用説明書」には、本明細書で言う種々の疾患または障害の緩和を行うキットの中の本発明のペプチドの有用性を伝えるために使用することができる刊行物、記録、図および任意の表現媒体を含む。場合によりまたは選択的に、使用説明書は哺乳動物の細胞または組織における疾患または障害を緩和する１以上の方法を記載することができる。本発明のキットの使用説明書は例えば、確認された化合物発明を含む容器に張り付けられ、または確認された化合物を含む容器と一緒に輸送され得る。あるいは使用説明書は、使用説明書および化合物が受容者に協同して使用されることを意図して、容器と別個に輸送することができる。

「単離された核酸」は、自然に存在する状態でそれを挟む配列から分離された核酸セグメントまたは断片、例えば通常は断片に隣接する配列、例えば自然に存在するゲノム中で断片に隣接する配列が除去されたＤＮＡ断片を指す。この用語は、核酸に自然に付随する他の成分、例えば細胞中で自然に付随するＲＮＡまたはＤＮＡまたはタンパク質から実質的に精製された核酸配列にも適用する。したがってこの用語は、例えばベクターに、自律的に複製するプラスミドもしくはウイルスに、または原核もしくは真核生物のゲノムＤＮＡに組み込まれた、あるいは他の配列から独立して別個の分子として存在する（例えばｃＤＮＡまたはＰＣＲもしくは制限酵素消化により生成されたゲノムもしくはｃＤＮＡ断片）組換えＤＮＡを含む。これはまたさらなるポリペプチド配列をコードするハイブリッド遺伝子の一部である組換えＤＮＡも含む。本明細書で使用する「修飾された」化合物は、化合物の機能的能力または活性を増すか、または変えるために、化学的に化合物を改変するような、化学的修飾であることができる化合物の修飾または誘導化を指す。

用語「突然変異性」とは、化合物が突然変異を誘導するか、またはその頻度を上げる能力を指す。用語「核酸」は典型的には大きなポリヌクレオチドを指す。

用語「オリゴヌクレオチド」は典型的には、一般に約５０ヌクレオチドよりは大きくない短いポリヌクレオチドを指す。これはヌクレオチド配列がＤＮＡ配列（すなわちＡ、Ｔ、Ｇ、Ｃ）により表される時、これは“Ｔ”を“Ｕ”に置き換えるＲＮＡ配列（すなわちＡ、Ｕ、Ｇ、Ｃ）も含むと理解されるだろう。

用語「ペプチド」は典型的には短いポリペプチドを指す。

本明細書で使用する「透過（ｐｅｒｍｅａｔｉｏｎ）強化」および「透過強化剤」とは、すなわち薬剤が皮膚を通り、そして血流に入る速度が増すように、皮膚を良く透過しない薬理学的に活性な作用物質に対する皮膚の透過性を上げることをもたらすプロセスおよび添加材料に関する。「透過強化剤」とは「浸透（ｐｅｎｅｔｒａｔｉｏｎ）強化剤」と互換的に使用する。

本明細書で使用する用語「製薬学的に許容され得る担体」は、それと適切な化合物または誘導体とを組み合わせることができ、そして組み合わせた後、適切な化合物を個体に投与するために使用することができる化学的組成物を意味する。

本明細書で使用する用語「生理学的に許容され得る」エステルまたは塩は、製薬学的組成物の他の成分と適合性であり、組成物が投与される個体に対して有害ではない有効成分のエステルまたは塩形態を意味する。

「ポリペプチド」はアミノ酸残基からなるポリマー、関連する自然に存在する構造バリアント、およびペプチド結合を介して連結されたその合成の自然には存在しない同族体、関連する自然に存在する構造バリアント、およびその合成の自然には存在しない同族体を指す。

「ポリヌクレオチド」は核酸の１本鎖または平行および逆平行鎖を意味する。すなわちポリヌクレオチドは１本鎖または２本鎖核酸のいずれかでよい。

「プライマー」は設計したポリヌクレオチド鋳型に特異的にハイブリダイズし、そして相補的ポリヌクレオチドの合成のための開始点を提供することができるポリヌクレオチドを指す。そのような合成はポリヌクレオチドプライマーが、合成が誘導される条件下、すなわちヌクレオチド、相補的なポリヌクレオチド鋳型およびＤＮＡポリメラーゼのような重合のための作用物質の存在下に配置された時に起こる。プライマーは典型的には１本鎖であるが、２本鎖でもよい。プライマーは典型的にはデオキシリボ核酸であるが、広い種々の合成および自然に存在するプライマーが多くの応用に有用である。プライマーは、それにハイブリダイズして合成の開始に部位として役立つように設計された鋳型に相補的であるが、鋳型の正確な配列を反映する必要はない。そのような場合、プライマーの鋳型に対する特異的ハイブリダイゼーションは、ハイブリダイゼーション条件のストリンジェンシーに依存する。プライマーは例えば発色性、放射性または蛍光性部分で標識し、そして検出可能な部分として使用することができる。

本明細書で使用する用語「プロモーター／調節配列」は、プロモーター／調節配列に操作可能に連結された遺伝子産物の発現に必要な核酸配列を意味する。場合により、この配列はコアのプロモーター配列でよく、そして他の場合にはこの配列はエンハンサー配列および遺伝子産物の発現に必要な他の調節要素も含んでよい。プロモーター／調節配列は例えば、組織特異的様式で遺伝子産物を発現するものでよい。

「構成的プロモーター」は、操作可能に連結された遺伝子の発現を細胞中で一定の様式で駆動するプロモーターである。例として、細胞のハウスキーピング遺伝子の発現を駆動するプロモーターは構成的プロモーターであると考えられる。

「誘導性」プロモーターは、遺伝子産物をコードまたは特定するポリヌクレオチドに操作可能に連結された時、プロモーターに対応するインデューサーが細胞に存在する時にのみ実質的に遺伝子産物を生きている細胞で生産させるヌクレオチド配列である。

「組織−特異的」プロモーターは、遺伝子産物をコードまたは特定するポリヌクレオチドに操作可能に連結された時、細胞がプロモーターに対応する組織型の細胞である場合にのみ実質的に遺伝子産物を生きている細胞で生産させるヌクレオチド配列である。

「予防的」処置は、疾患に関連する病状が発症するリスクを下げる目的で、疾患の兆候を表していないか、または疾患の初期兆候を表しているだけの個体へ投与される処置である。

「タンパク質」は典型的には大きなポリペプチドを指す。

酸素の種々の有害な形態である活性酸素種は、体内で生成される；１重項酸素、スーパーオキシドラジカル、過酸化水素およびヒドロキシルラジカルはすべて組織傷害を引き起こす。これらおよび類似の酸素関連種に関して適用できる用語は、「活性酸素種（ＲＯＳ）」である。この用語はＡＧＥｓの細胞へのインターナリゼーションにより形成されたＲＯＳ、およびそれらから形成されるＲＯＳも含む。

本明細書で使用する「３−デオキシグルコソンを除去する」は、組成物の不存在下での３ＤＧのレベルまたは機能的３ＤＧのレベルと比べた時、任意の組成物または方法を使用することにより、より低いレベルの３−デオキシグルコソン（３ＤＧ）またはより低いレベルの機能的３ＤＧをもたらす任意の組成物および方法を指す。より低レベルの３ＤＧは、その減少した合成または形成、上昇した分解、上昇したクリアランスまたはそれらの任意の組み合わせから生じ得る。より低レベルの機能的３ＤＧは、３ＤＧが糖化のプロセスで効率的には機能できないように３ＤＧを修飾することから生じることができ、または３ＤＧが機能する能力を遮断阻害する別の分子と３ＤＧとの結合から生じ得る。より低レベルの３ＤＧは、尿中の３ＤＧの増加したクリアランスおよび排出からも生じることができる。この用語は「３ＤＧの蓄積を阻害する」とも互換的に使用する。同様に、句「アルファ−ジカルボニル糖を除去する」とは、３ＤＧ、グリオキサール、メチルグリオキサールおよびグルコソンを含むアルファ−ジカルボニル糖ファミリーの員の除去を指す。

また本明細書では互換的に使用する用語、糖化されたリシン残基、糖化されたタンパク質およびグリコシル化されたタンパク質もしくはリシン残基は、そのような用語が技術的に認識されて互換的に使用される当該技術分野での現在の使用と一致している。

本明細書で使用する用語「皮膚」は、一般的に使用されている皮膚の定義、例えば表皮および真皮、および皮膚を構成する細胞、腺、粘膜および結合組織を指す。

本明細書で使用する用語「標準」は、比較に使用されるものを指す。例えば試験化合物を投与した時に結果を比較するために投与および使用される既知の標準的な作用物質または化合物であることができ、あるいはパラメーターまたは機能について作用物質または化合物の効果を測定する時、対照値を得るために測定される標準的パラメーターまたは機能であることができる。「標準」は、既知の量でサンプルに加えられ、そしてサンプルが精製もしくは抽出手順で処理された、またはかけられた時、目的のマーカーを測定する前に、精製もしくは回収率のような事柄を測定するために有用な作用物質または化合物のような「内部標準」も指す。内部標準はしばしば、しかし限定するわけではないが、放射性同位体のような標識された目的の精製されたマーカーであり、サンプル中の内因性物質から区別することが可能である。

本明細書で使用する「感受性の試験動物」は、例えば特定の遺伝子突然変異の存在により、糖尿病、ガン等のような選択した疾患障害または状態に対して高い傾向を有する実験動物の種を指す。

本明細書で使用する「３ＤＧの合成」は、３ＤＧの形成または生産を指す。３ＤＧは酵素依存的経路または非酵素依存的経路に基づき形成され得る。同様に、句「アルファ−ジカルボニル糖の合成」は、３ＤＧ、グリオキサール、メチルグリオキサールおよびグルコソンおよび本明細書に開示する付加物を含むアルファ−ジカルボニル糖のファミリーの員の合成または自然な形成を指す。

「合成ペプチドまたはポリペプチド」は、自然には存在しないペプチドまたはポリペプチドを指す。合成ペプチドまたはポリペプチドは、例えば自動化ポリペプチド合成器を使用して合成することができる。当業者は種々の固相ペプチド合成法について知っている。

「治療的」処置は、病気の兆候を消失または排除する目的で、病気の兆候を表す個体に投与される処置である。

「経皮的（ｔｒａｎｓｄｅｒｍａｌ）」送達は、経皮的（または「経皮的（ｐｅｒｃｕｔａｎｅｏｕｓ）」および経粘膜（ｔｒａｎｓｍｕｃｏｓａｌ）投与、すなわち薬剤の皮膚または粘膜組織を通した血流への送達の両方を意図する。経皮的とはまた、皮膚に薬剤または化合物を局所適用することにより、薬剤または化合物の投与のためのポータル（ｐｏｒｔａｌ）としての皮膚を指す。

本明細書で使用する用語「局所適用」は、皮膚のような表面への投与を指す。この用語は「皮膚適用」と互換的に使用する。

本明細書で使用する用語「処置する」は、患者または個体が経験する症状の頻度を下げること、または経験される症状の頻度を下げるための作用物質または化合物を投与すること意味する。

本明細書で使用する「疾患または障害を処置する」とは、患者が経験する疾患または障害の症状の頻度を下げることを意味する。疾患および障害は本明細書では互換的に使用する。

本明細書で使用する用語「野生型」とは、自然に存在する種のほとんどの員に特徴的な遺伝型および表現型を指し、そして変異体の遺伝型および表現型とは対照的である。

皮膚における３ＤＧおよび他のアルファ−ジカルボニル糖の合成、形成および蓄積を阻害する方法
本発明では、３ＤＧ生産の酵素的合成経路に関与する酵素が皮膚に高レベルで存在することが見いだされた（実施例２０を参照にされたい）。さらに本発明では、３ＤＧが皮膚に高レベルで存在することも見いだされた（実施例１９を参照にされたい）。したがって本発明は皮膚における３ＤＧの酵素的または非酵素的に基づく両方の合成または形成を妨害し、ならびに皮膚における３ＤＧの機能も妨害する組成物および方法を含む。３ＤＧはアルファ−ジカルボニル糖と呼ばれる化合物のファミリーの一員である。このファミリーの他の員にはグリオキサール、メチルグリオキサールおよびグルコソンを含む。本発明は皮膚における３ＤＧおよび他のアルファ−ジカルボニル糖の蓄積を阻害するための、および３ＤＧに依存的または関連する皮膚の皺、皮膚の老化または他の皮膚の疾患または障害、ならびに他のアルファ−ジカルボニル糖が関連する皮膚の皺、皮膚の老化または他の皮膚の疾患または障害を阻害する組成物および方法に関する。また本発明は、３ＤＧの解毒、分解または皮膚からのクリアランスを導く経路、または経路の成分を刺激する組成物および方法を使用して、皮膚の３ＤＧの蓄積を阻害することを含む。

３ＤＧはアルファ−ジカルボニル糖ファミリーの分子の員であることに注目すべきである。またアルファ−ジカルボニル糖ファミリーの他の員は本明細書に記載するように３ＤＧに類似する機能および３ＤＧ様の機能を行うことができ、アルファ−ジカルボニル糖ファミリーの他の員の機能も阻害可能であることに注目すべきである。このように本発明は他のアルファ−ジカルボニル糖の合成、形成および蓄積も阻害する方法を含むと解釈すべきである。

皮膚における３ＤＧ合成、形成および蓄積の阻害は、直接的または間接的であることができる。例えば３ＤＧ合成の直接的阻害は、アマドラーゼ、またはフルクトース−リシン−３−ホスフェート（ＦＬ３Ｐ）の３ＤＧ、リシンおよび無機ホスフェートへの転換を遮断するような３ＤＧ合成または形成の経路において、直前または上流で起こる出来事を遮断することを指す。間接的阻害は、３ＤＧの合成を導く上流の前駆体、酵素または経路の遮断または阻害することを含むことができる。上流経路の成分には例えば、アマドラーゼ遺伝子およびアマドラーゼｍＲＮＡを含む。本発明は本明細書に記載する酵素的および非酵素的経路の阻害のみを含むと解釈されるべきではなく、皮膚における３ＤＧ合成、形成および蓄積の他の酵素的および非酵素的経路を阻害する方法も含むと解釈すべきである。本発明は応用可能な場合はグリオキサール、メチルグリオキサールおよびグルコソンを含むアルファ−ジカルボニル糖ファミリーの他の員を含むとも解釈すべきである。

本明細書に記載する様々なアッセイが３ＤＧ合成または３ＤＧのレベルを直接測定するために使用することができ、あるいはアッセイは３ＤＧの分解生成物である３ＤＦの測定のような３ＤＧ合成またはレベルと相関的なアッセイを使用してもよい。

本発明は皮膚における３ＤＧ合成の新規阻害法を含む。好ましくは皮膚は哺乳動物の皮膚であり、そしてより好ましくは哺乳動物の皮膚はヒトの皮膚である。

１つの観点では、インヒビターは３ＤＧの合成に関与する酵素を阻害する。１つの態様では、酵素はフルクトサミンキナーゼである。さらに別の態様では、フルクトサミンキナーゼは米国特許第６，００４，９５８号明細書に記載されているようなアマドラーゼである。

本発明のさらに別の観点では、インヒビターは皮膚における３ＤＧの非酵素的合成および形成を阻害する。

本発明の１つの態様では、インヒビターは皮膚における３ＤＧの蓄積を阻害する。１つの観点では、３ＤＧは皮膚で合成または形成される。しかしインヒビターは３ＤＧの供給源が皮膚以外である皮膚における３ＤＧの蓄積を阻害することもできる。１つの観点では、３ＤＧの供給源は食物であり、すなわち３ＤＧは内部の供給源ではなく外部の供給源に由来し、次いで皮膚に蓄積する。このように本発明の１つの観点には、皮膚における３ＤＧ合成または形成の阻害、および／または皮膚における３ＤＧの蓄積の阻害を含む。後者の場合、３ＤＧの供給源は皮膚で直接的な３ＤＧの酵素的合成、皮膚以外の組織中での３ＤＧの酵素的合成、皮膚または皮膚ではない組織での３ＤＧの非酵素的合成または形成でよく、あるいは３ＤＧの供給源は例えば食物のような外部の供給源でよい。３ＤＧまたは他のアルファ−ジカルボニル糖の蓄積を、これらの経路のいずれか１つを介して阻害するために使用する方法を本明細書のいたるところでさらに完全に記載する。

皮膚から３ＤＧを除去する方法
また本発明は３ＤＧおよび他のアルファ−ジカルボニル糖を皮膚から除去し、そして３ＤＧに依存的または関連する皮膚の皺、皮膚の老化または他の皮膚の疾患もしくは障害、ならびに他のアルファ−ジカルボニル糖が関連する皮膚の皺、皮膚の老化または他の皮膚の疾患および障害を抑制する組成物および方法に関する。このために、本発明は皮膚における３ＤＧの生産、合成、形成および蓄積を阻害する組成物および方法を含む。また本発明は３ＤＧの解毒、分解または皮膚からのクリアランスを導く経路、または経路の成分を刺激する組成物および方法も含む。

３ＤＧ合成を阻害する抗体の使用
本発明の１つの観点では、フルクトサミンキナーゼのインヒビターは抗体である。抗体は当該技術分野で知られている任意の抗体であることができ、または既知の技術およびフルクトサミンキナーゼ／アマドラーゼの公開された配列（寄託番号ＮＰ０７１４４１）を使用して調製された抗体であることができる。また抗体は、３ＤＧの任意の前駆体に対して、またはフルクトサミンキナーゼもしくは３ＤＧの前駆体から上流の３ＤＧ合成を調節する分子に対して調製されるものでもよい。

１つの観点では、抗体はポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体および合成抗体からなる群から選択される。

本発明は、抗体インヒビターを生成することができ、そして３ＤＧ合成または機能のインヒビターとして使用することができる方法を含む。抗体はフルクトサミンキナーゼまたは３ＤＧ合成の酵素的経路の他のタンパク質に対して、または３ＤＧの前駆体を含む経路の一部である他の分子に対して調製することができる。タンパク質合成または機能を阻害するための、あるいは他の分子もしくはそれらの合成を阻害するための抗体の調製および使用は、当該技術分野において周知であり、そして例えばＨａｒｌｏｗｅｔａｌ．（Ｈａｒｌｏｗｅｔａｌ．、１９８８、抗体：アラボラトリーマニュアル（Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ）、コールドスプリングハーバー、ニューヨーク；Ｈａｒｌｏｗｅｔａｌ．、１９９９，抗体を使用して；アラボラトリーマニュアル（ＵｓｉｎｇＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ）、コールドスプリングハーバーラボラトリー出版、ニューヨーク州）に記載されている。本発明の抗体は、３ＤＧ経路の成分であるかもしれないタンパク質または他の分子を検出するためにも使用することができる。

ポリクローナル抗体の生成は、所望の動物に抗原を接種し、そして抗原に特異的に結合する抗体をそれらから単離することによりなされる。

モノクローナル抗体は、取り込みの問題を回避するために、遺伝子をクローニングし、そして抗体をコードする遺伝子をトランスフェクションすることにより、細胞内で効果的に使用することができる。本明細書に記載する手順を使用して得たモノクローナル抗体遺伝子をコードするような核酸は、当該技術分野で利用可能な技術を使用してクローン化し、そしてシークエンシングすることができる。

タンパク質またはペプチドの完全長またはペプチド断片に対するモノクローナル抗体は、周知なモノクローナル抗体調製手法を使用して調製することができる。所望するペプチドの量は、化学的合成技術を使用しても合成することができる。あるいは所望のペプチドをコードするＤＮＡをクローン化し、そして大量のペプチドを生成するために適する細胞中で適切なプロモーター配列から発現させることができる。ペプチドまたは他の分子に対するモノクローナル抗体は、本明細書に引用した標準的手法を使用して、ペプチドで免疫感作したマウスから生成される。本明細書に記載した手法を使用して得た、モノクローナル抗体をコードする核酸を、当該技術分野で利用可能で、そして例えばＷｒｉｇｈｔｅｔａｌ．（１９９２，ＣｒｉｔｉｃａｌＲｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２：１２５−１６８）およびそこに引用されている参考文献に記載されている技術を使用してクローン化し、そして配列決定することができる。さらに本発明の抗体は、例えばＷｒｉｇｈｔｅｔａｌ．同上およびそこに引用されている参考文献、およびＧｕｅｔａｌ．（１９９７，ＴｈｒｏｍｂｏｓｉｓａｎｄＨｅｍａｔｏｃｙｓｔ７７：７５５−７５９）、に記載されている既存の技術、および当該技術分野で周知な、またはこれから開発される抗体をヒト化する他の方法を使用して「ヒト化」することができる。そのように抗体を修飾して細胞に留まるように修飾する技術も当該技術分野では周知である。本発明は抗体をコードする核酸を投与することを包含し、ここで分子はさらに細胞内保持配列（ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｒｅｔｅｎｔｉｏｎｓｅｑｕｅｎｃｅ）を含んでなる。しばしば「イントラボディ（ｉｎｔｒａｂｏｄｉｅｓ）」と呼ばれるそのような抗体は、当該技術分野では周知であり、そして例えばＭａｒａｓｃｏｅｔａｌ．（米国特許第６，００４，４９０号明細書）およびＢｅｅｒｌｉｅｔａｌ．（１９９６，ＢｒｅａｓｔＣａｎｃｅｒＲｅｓｅａｒｃｈａｎｄＴｒｅａｔｍｅｎｔ３８：１１−１７）に記載されている。

所望のタンパク質、例えば所望の抗体をファージ表面に発現するファージ抗体ライブラリーを作成するために、最初にｃＤＮＡライブラリーを、細胞（例えばハイブリドーマ）から単離されたｍＲＮＡから得る。ｍＲＮＡのｃＤＮＡコピーは、逆転写酵素を使用して生成する。免疫グロブリン断片を特定するｃＤＮＡはＰＣＲにより得、そして生成したＤＮＡを適当なバクテリオファージベクターにクローン化して、免疫グロブリン遺伝子を特定するＤＮＡを含んでなるバクテリオファージＤＮＡライブラリーを作成する。ヘテロロガスなＤＮＡを含んでなるバクテリオファージライブラリーを作成するための手法は、当該技術分野では周知であり、そして例えばＳａｍｂｒｏｏｋｅｔａｌ．（１９８９、モレキュラークローニング：アラボラトリーマニュアル（ＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ）、コールドスプリングハーバー、ニューヨーク州）に記載されている。

所望の抗体をコードするバクテリオファージは、抗体の対応する結合タンパク質、例えば抗体が向けられる抗原に対する結合に利用できるような様式で、タンパク質がその表面に展示されるように工作することができる。すなわち特異的抗体を発現するバクテリオファージが対応する抗原を発現する細胞の存在下でインキュベーションされる時、バクテリオファージは細胞に結合する。抗体を発現しないバクテリオファージは、細胞に結合しない。そのようなパンニング（ｐａｎｎｉｎｇ）技術は当該技術分野では周知であり、そして例えばＷｒｉｇｈｔｅｔａｌ．（同上）に記載されている。

上記のような方法は、Ｍ１３バクテリオファージ展示を使用したヒト抗体の生産に開発された（Ｂｕｒｔｏｎｅｔａｌ．，１９９４，Ａｄｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．５７：１９１−２８０）。本質的にｃＤＮＡライブラリーは抗体生産細胞の集団から得たｍＲＮＡから生成される。ｍＲＮＡは再配列した免疫グロブリン遺伝子をコードし、そしてすなわちｃＤＮＡをはそれをコードする。増幅したｃＤＮＡはＭ１３発現ベクターにクローン化され、表面にヒトＦａｂ断片を発現するファージのライブラリーを作成する。目的の抗体を展示するファージは抗原の結合により選択され、そしてバクテリア中で増殖させて可溶性のヒトＦａ免疫グロブリンを生産する。このように、通常のモノクローナル抗体合成とは対照的に、この手法はヒトの免疫グロブリンを発現する細胞ではなくヒトの免疫グロブリンをコードするＤＮＡを不滅化する。

今、提示した手順は、抗体分子のＦａｂ部分をコードするファージの生成を記載する。しかし本発明はＦａｂ抗体をコードするファージの生成にのみ限定されるとは解釈すべきではない。むしろ単鎖抗体（ｓｃＦｖ／ファージ抗体ライブラリー）をコードするファージも本発明に含まれる。Ｆａｂ分子は全Ｉｇ軽鎖を含んでなり、すなわちそれらは軽鎖の可変および定常領域の両方を含んでなるが、重鎖の可変領域および第１定常領域（ＣＨ１）のみを含む。単鎖抗体分子は、ＩｇＦｖ断片を含んでなるタンパク質の単鎖を含んでなる。ＩｇＦｖ断片は抗体の重および軽鎖の可変領域のみを含み、それらに含まれる定常領域は無い。ｓｃＦｖＤＮＡを含んでなるファージライブラリーは、Ｍａｒｋｓｅｔａｌ．（１９９１，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１−５９７）に記載されている手順に従い生成することができる。所望の抗体を単離するためにそのように生成されたファージのパンニングは、ＦａｂＤＮＡを含んでなるファージライブラリーについて記載した様式に準じて行われる。

本発明は、重および軽鎖可変領域がほぼすべての可能な特異性を含むように、それらを合成できる合成のファージ展示ライブラリーを含むと解釈すべきである（Ｂａｒｂａｓ，１９９５，ＮａｔｕｒｅＭｅｄｉｃｉｎｅ１：８３７−８３９；ｄｅＫｒｕｉｆｅｔａｌ．１９９５，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２４８：９７−１０５）。

本明細書で使用する用語「合成抗体」は、例えば本明細書に記載するバクテリオファージにより発現される抗体のような、組換えＤＮＡ技術を使用して生成された抗体を意味する。またこの用語は抗体をコードするＤＮＡ分子を合成により生成された抗体を意味すると解釈すべきであり、そしてそのＤＮＡ分子は抗体タンパク質または抗体を特定するアミノ酸配列を発現し、ここでＤＮＡまたはアミノ酸配列は当該技術分野で利用可能な周知の合成のＤＮＡまたはアミノ酸配列技術を使用して得られた。

１つの態様では、抗体はアマドラーゼ（配列番号２）に対して、またはその誘導体または断片に対して作成される。別の態様では、抗体は３ＤＧに対して作成される、本発明の別の観点では、抗体は３ＤＧ経路の他の成分に対して作成される。そのような抗体は、そのコグネイト抗原に結合し、そしてその機能を阻害するように調製することができる。別の態様では抗体はアルファ−ジカルボニル糖ファミリーの分子の他の員に対して作成される。

アンチセンス技法を使用してフルクトサミンキナーゼ機能を阻害することによる３ＤＧ合成、生産、蓄積および機能の阻害
１つの態様では、フルクトサミンキナーゼｍＲＮＡに相補的なアンチセンス核酸を使用して、対応するｍＲＮＡの発現または翻訳を遮断することができる（配列番号１を参照にされたい）（実施例２０および２２を参照にされたい）。アマドラーゼのようなフルクトサミンキナーゼをコードする核酸に相補的なアンチセンス核酸を含んでなるアンチセンスオリゴヌクレオチドおよび発現ベクターは、当業者により日常的に行われ、そして例えばＳａｍｂｒｏｏｋｅｔａｌ．（１９８９，モレキュラークローニング：アラボラトリーマニュアル、コールドスプリングハーバーラボラトリー、ニューヨーク）に、Ａｕｓｕｂｅｌｅｔａｌ．（１９９７，分子生物学における現在のプロトコール（ＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ）、ジョンウィリー＆サンズ（ＪｏｈｎＷｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ）、ニューヨーク）に、およびＧｅｒｈａｒｄｔｅｔａｌ．（編集、１９９４、一般および分子細菌学のための方法（ＭｅｔｈｏｄｓｆｏｒＧｅｎｅｒａｌａｎｄＭｏｌｅｃｕｌａｒＢａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ）、アメリカ微生物学会（ＡｍｅｒｉｃａｎＳｏｃｉｅｔｙｆｏｒＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ）、ワシントン、ＤＣ．）に記載されている技術に基づき調製し、そして使用することができる。本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、限定するわけではないがホスホロチオエートオリゴヌクレオチドおよびオリゴヌクレオチドの他の修飾体を含む。オリゴヌクレオチド、ホスホロチオエートオリゴヌクレオチドおよび他の修飾されたオリゴヌクレオチドを合成する方法は、当該技術分野では周知である（米国特許第５，０３４，５０６号明細書；Ｎｉｅｌｓｅｎｅｔａｌ．１９９１，Ｓｃｉｅｎｃｅ２５４：１４９７）。少なくとも１つのホスホロチオエート修飾を含むオリゴヌクレオチドは、オリゴヌクレオチドにヌクレアーゼに対する強化された耐性を付与することが知られている。修飾されたオリゴヌクレオチドの具体例には、ホスホロチオエート、ホスホロトリエステル、メチルホスホネート、短鎖アルキルもしくはシクロアルキル糖間連結、または短鎖ヘテロ原子もしくは複素環式糖間（「骨格」）連結を含むものを含む。さらにモルホリノ骨格構造（米国特許第５，０３４，５０６号明細書）またはポリアミド骨格構造（Ｎｉｅｌｓｅｎｅｔａｌ．１９９１，Ｓｃｉｅｎｃｅ２５４：１４９７）を有するオリゴヌクレオチドを使用してもよい。

本明細書に記載するオリゴヌクレオチド修飾の例は網羅的ではなく、そして本発明は本発明のオリゴヌクレオチドのアンチセンスのさらなる修飾を含み、この修飾はアンチセンスオリゴヌクレオチドの基本的配列を認め得るほどに変化させることなくアンチセンスオリゴヌクレオチドの治療的特性を強化するために役立つと理解される。

ヌクレアーゼ分解に対して大変低い感度を有するホスホロチオエートオリゴヌクレオチドを使用することができる。オリゴヌクレオチドの中にはＣＧモチーフを含まずに調製できるものもあり、これはインビボ使用で毒性を下げるために役立つ。

別の観点では、アマドラーゼｍＲＮＡのようなフルクトサミンキナーゼｍＲＮＡに相補的なアンチセンス核酸は、フルクトサミンキナーゼｍＲＮＡの翻訳を阻害することにより、フルクトサミンキナーゼの機能、そして続いて３ＤＧ合成および機能を遮断するために使用することができる。これは適切なアンチセンス配列をトランスフェクションすることにより行うことができる。フルクトサミンキナーゼ遺伝子は配列決定され、そしてこれらのデータに基づき、アンチセンス核酸は当業者に知られている技術を使用して容易に調製することができる。

フルクトサミンキナーゼのアンチセンスオリゴヌクレオチドインヒビターは、本質的に本明細書に記載するように（実施例２０〜２２を参照にされたい）細胞培養系で独立して使用されるか、または動物に投与することができる。本発明の１つの態様では、フルクトサミンキナーゼのインヒビターは好ましくは５〜２５ヌクレオチド長のオリゴヌクレオチドである。別の態様では、オリゴヌクレオチドは２５〜５０ヌクレオチド長である。さらに別の態様では、オリゴヌクレオチドは５０〜１００ヌクレオチド長である。さらなる態様では、オリゴヌクレオチドは１００〜４００ヌクレオチド長である。

ホスホロチオエートオリゴヌクレオチドは、トランスフェクションまたは電気穿孔の必要無しに細胞に容易に入り、これにより実験を混乱させるかもしれないストレス応答の非特異的インデューサーに細胞を供することが避けられる。オリゴヌクレオチドは当業者に知られ、そして本明細書に記載する幾つかの技法を使用して投与することができる。ホスホロチオエートの効果的な阻害濃度は１から５０μＭの間の範囲であるので、ウエスタンブロットにおけるフルクトサミンキナーゼシグナルの減少に関する滴定曲線は、使用する各オリゴヌクレオチドに関して効果的濃度を確立するために作成することができる。いったん細胞内に入れば、ホスホロチオエート−オリゴヌクレオチドは転写開始部位（アンチセンスオリゴヌクレオチド阻害に最も大きな効果を有する部位）に大変近くで新生ｍＲＮＡにハイブリダイズする。

フルクトサミンキナーゼまたは他の遺伝子の転写を、特異的なアンチセンス分子で選択的に阻害する能力は、皮膚疾患または障害における３ＤＧの合成または誘導に関与する増大したフルクトサミンキナーゼ合成または他のタンパク質の誘導の阻害も可能にすると期待される。すなわち本発明は目的のタンパク質の定常状態レベルの減少に効果的となるアンチセンスオリゴヌクレオチドの使用法を提供する。さらにフルクトサミンキナーゼまたは他の重要なタンパク質の阻害は、３ＤＧの合成、生産、蓄積または機能に関与するタンパク質の定常状態の合成を下げる。本発明は３ＤＧだけでなくアルファ−ジカルボニル糖ファミリーの分子の他の員も含むと解釈されるべきできる。

本発明はアンチセンス技法を使用したフルクトサミンキナーゼ阻害のみを含むと解釈するべきではなく、３ＤＧ合成経路に関与する他の遺伝子およびそれらのタンパク質の阻害も含むと解釈するべきである。さらに本発明は本明細書に記載するこれらの特定なアンチセンス法のみを含むと解釈すべきではない。

３ＤＧ合成を阻害する化合物の使用
１つの態様では、本発明は哺乳動物の皮膚における３ＤＧ合成の阻害法を含み、該方法は哺乳動物に有効量の３ＤＧ合成のインヒビター、またはその誘導体または修飾体を投与し、これにより哺乳動物の皮膚における３ＤＧ合成の阻害することを含んでなる。好ましくは哺乳動物はヒトである。

１つの態様では、インヒビターは製薬学的組成物の約０．０００１％〜約１５重量％を構成する。１つの観点では、インヒビターは放出制御製剤として投与される。別の観点では、製薬学的組成物はローション、クリーム、ゲル、塗布剤、軟膏、ペースト、歯磨き粉、口中洗浄剤、経口リンス、コーティング、溶液、粉末および懸濁液を含んでなる。さらに別の観点では、組成物はさらに保湿剤、湿潤剤、粘滑剤、油、水、乳化剤、増粘剤、希釈剤、表面活性剤、香料、保存剤、抗酸化物質、水屈性剤、錯化剤、ビタミン、ミネラル、浸透強化剤、化粧用補助剤、漂白剤、脱色素剤、発泡剤、コンディショナー、粘度調整剤、緩衝剤およびサンスクリーンを含んでなる。

本発明は局所、経口、筋肉内および静脈内を含む種々の投与法を含むと解釈すべきである。
本発明の１つの観点では、３ＤＧ合成のインヒビターはフルクトサミンキナーゼ／アマドラーゼのインヒビターである。フルクトサミンキナーゼのインヒビターは、式（式ＸＩＸ）：

式中、Ｘは、−ＮＲ’−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）_２−または−Ｏ−であり、Ｒ’はＨ、および直鎖もしくは分枝鎖アルキル基（Ｃ_１−Ｃ_４）および非置換もしくは置換アリール基（Ｃ_６−Ｃ_１０）またはアラアルキル基（Ｃ_７−Ｃ_１０）またはｎ＝１〜５のＣＨ_２（ＣＨＯＲ_２）_ｎＣＨ_２ＯＲ_２、またはｎ＝１〜４のＣＨ（ＣＨ_２ＯＲ_２）（ＣＨＯＲ_２）_ｎＣＨ_２ＯＲ_２（ここでＲ_２はＨ、アルキル（Ｃ_１−Ｃ_４）または非置換もしくは置換アリール基（Ｃ_６−Ｃ_１０）またはアラアルキル基（Ｃ_７−Ｃ_１０）である）からなる群から選択され；Ｒは、Ｈ、アミノ酸残基、ポリアミノ酸残基、ペプチド鎖、直鎖もしくは分枝鎖脂肪族基（Ｃ_１−Ｃ_８）（これは非置換であるか、または少なくとも１つの窒素−もしくは酸素−含有置換基で置換される）、直鎖もしくは分枝鎖脂肪族基（Ｃ_１−Ｃ_８）（これは非置換であるか、または少なくとも１つの窒素−もしくは酸素−含有置換基で置換され、そして少なくとも１つの−Ｏ−、−ＮＨ−または−ＮＲ_３−部分で中断される）からなる群から選択される置換基であり、Ｒ_３は、直鎖もしくは分枝鎖アルキル基（Ｃ_１−Ｃ_６）および非置換もしくは置換アリール基（Ｃ_６−Ｃ_１０）またはアラルキル基（Ｃ_７−Ｃ_１０）であり、ただしＸが−ＮＲ_１−を表し、ＲおよびＲ_１がそれらに結合している窒素原子と一緒に５〜７個の環原子を有する置換もしくは非置換複素環式環（少なくとも１つの窒素および酸素が該環中の唯一のヘテロ原子である）を表すことができる時、該アリール基（Ｃ_６−Ｃ_１０）またはアラルキル基（Ｃ_７−Ｃ_１０）および該複素環式環置換基は、Ｈ、アルキル（Ｃ_１−Ｃ_６）、ハロゲン、ＣＦ_３、ＣＮ、ＮＯ_２および−Ｏ−アルキル（Ｃ_１−Ｃ_６）からなる群から選択される、のような化合物であることができる。

別の適当な反応物には限定するわけではないが、非置換もしくは置換アリール（Ｃ_６−Ｃ_１０）化合物（ここで置換基はアルキル（Ｃ_１−Ｃ_３）、アルコキシ、カルボキシ、ニトロまたはハロゲン基であることができ）、非置換もしくは置換アルカン（ここで置換基は少なくとも１つのアルコキシ基であることができる）；あるいは非置換もしくは置換の窒素−含有複素環式化合物（ここで置換基はアルキル（Ｃ_１−Ｃ_３）、アリール（Ｃ_６−Ｃ_１０）、アルコキシ、カルボキシ、ニトロまたはハロゲン基であることができる）を含む。反応物の最後に挙げた基の具体例には、ｍ−メチル−、ｐ−メチル−、ｍ−メトキシ−、ｏ−メトキシ−およびｍ−ニトロ−アミノベンゼン、ｏ−およびｐ−アミノ安息香酸；ｎ−プロピルアミン、ｎ−ブチルアミン、３−メトキシプロピルアミン；モルホリンおよびピペルジンを含む。

本発明の１つの観点では、上記式を有する代表的なインヒビター化合物には、ガラクチトールリシン、３−デオキシソルビトールリシン、３−デオキシ−３−フルオロ−キシリトールリシンおよび３−デオキシ−３−シアノソルビトールリシンおよび３−Ｏ−メチルソルビトールリシンを含む。本発明の実施においてインヒビターとして使用できる既知の化合物の例には、限定するわけではないがメグルミン、ソルビトールリシン、ガラクチトールリシンおよびマンニトールリシンを含む。好適なインヒビターは、３−Ｏ−ソルビトールリシンである。

本発明の化合物は、本明細書に記載する数種の方法により、および当業者に既知な他の方法により、例えば細胞、組織または個体に投与することができる。

本発明は式ＸＩＸおよび本明細書に記載する代表的化合物の修飾体、誘導体または置換体のみを含むと解釈すべきではない。また本発明は本明細書に記載しない他の修飾体、ならびに式ＸＩＸを表す本明細書には記載しない化合物も含むと解釈すべきである。

１つの観点では、３ＤＧの酵素的合成を阻害する本発明のインヒビターは、当該技術分野で既知の技術を使用してインビトロで合成することができる（実施例８を参照にされたい）。

３ＤＧ機能を阻害するために有用な化合物および方法
本明細書に記載するように本発明は、種々の皮膚疾患および障害の発症における３ＤＧの関与、および３ＤＧに関連する皮膚疾患および障害を緩和また処置するために３ＤＧの機能を阻害する方法に関する。また本発明は、歯肉疾患または障害のような他の疾患および障害における３ＤＧの関与に関する。そのような歯肉疾患および疾患には限定するわけではないが、歯肉炎、歯肉の退化、および他の３ＤＧまたはアルファ−ジカルボニル糖が関連する歯肉疾患および疾患を含む。上記のように、３ＤＧ機能の阻害は直接的または間接的であることができる。したがって３ＤＧ機能は、本明細書に記載する多くの取り組みを使用して阻害または低下を引き起こすことができる。３ＤＧ機能の阻害は、本明細書に記載する技術ならびに当業者に知られている他の技術を使用してアッセイまたはモニタリングすることができる。機能は直接測定することができ、または３ＤＧ機能と相関すると知られているパラメーターを測定する技術を使用して予測することができる。例えばタンパク質の架橋化およびタンパク質生産は、電気泳動分析（図１２および実施例７および１８を参照にされたい）ならびに他の技術（実施例２１〜２４を参照されたい）のような技術を使用して直接測定することができる。本発明は３ＤＧが誘導するコラーゲン、エラスチンおよびプロテオグリカンのような分子の架橋化を防止するために有用な化合物だけを含むと解釈すべきではなく、他の分子の架橋化も阻害する化合物を含むと解釈すべきである。本発明は、アポトーシスおよび活性酸素種の形成のような他の３ＤＧ機能をモジュレートするための化合物の使用も含むと解釈すべきである。マクロファージに由来する細胞では、アポトーシスによる細胞死がメチルグリオキサールおよび３ＤＧにより誘導できることが知られている（Ｏｋａｄｏｅｔａｌ．，１９９６，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．２２５：２１９−２２４）。さらに本発明の別の観点では、３ＤＧのインヒビターは活性酸素種を阻害する（ＶａｎｄｅｒＪａｇｔｅｔａｌ．，１９９７，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５３：１１３３−１１４０）。本発明は他のアルファ−ジカルボニル等も含むと解釈すべきである。３ＤＧおよびその解毒産物である３ＤＦは、細胞、組織、血液、血漿および尿サンプルを使用して数種の方法で測定することができ（実施例４、５、６、１４、１５および１７）、そして３ＤＧの合成中に生成される生成物であるＦＬ（実施例５を参照にされたい）も、ＦＬ３Ｐ（図１および２、および実施例１、２および３を参照にされたい）の前駆体のように測定することができる。

本発明は、皮膚における３ＤＧ機能を阻害するために有用な方法を開示する。そのような方法には１以上の３ＤＧ機能のインヒビター、またはその修飾体または誘導体の有効量を製薬学的組成物中で個体に投与することを含む。

本発明の１つの観点では、３ＤＧ機能のインヒビターはタンパク質の架橋化を阻害する。別の観点ではインヒビターは後期糖化反応生成物で修飾されたタンパク質の形成を阻害する。別の観点では、３ＤＧ機能のインヒビターは、構造式Ｉ−ＸＩＸの１つの構造を含んでなるか、またはそれはアルギニンまたはその誘導体または修飾体である。

当業者は本明細書に提供する開示に基づき、タンパク質架橋化のインヒビターが図１８に例示し、そして絵で表すような広い種々の付加物の形成を阻害すると考えるだろう。本発明は本明細書に開示する付加物に限定されず、本明細書に提供する開示に基づき当業者に明白であるような付加物、および将来知られるようになるような付加物も含む。

本発明は局所、経口、筋肉内および静脈内を含む種々の投与法を含むと解釈すべきである。

例とて３ＤＧ機能のインヒビターは、フルクトサミンキナーゼのｍＲＮＡに相補的であり、そしてアンチセンス方向の核酸をコードする単離された核酸であることができる。他のインヒビターにはアンチセンスオリゴヌクレオチド、抗体、または低分子のような他の化合物または作用物質を含む。

３ＤＧの合成または生産を導く経路、出来事および前駆体を阻害する組成物および方法は、３ＤＧ合成を阻害するだけでなく、その蓄積および最終的にはその機能も阻害すると理解すべきである。本発明は３ＤＧ合成を導くすべての経路および前駆体を阻害する組成物および方法を含むと解釈すべきである（図１および２を参照にされたい）。

本発明の別の態様では、この開示は種々の皮膚疾患および障害と関連する３ＤＧの機能を直接阻害する方法を提供する。１つの観点では、皮膚における３ＤＧ機能を阻害する方法は、３ＤＧを本明細書に記載する構造式Ｉ−ＸＶＩＩＩを含んでなるもののような化合物で阻害することを含む。これらの式を含んでなる化合物は、本明細書に記載するように３ＤＧに結合し、かつ／またはその機能を阻害する。さらに本発明は抗体のような結合し、そして３ＤＧ機能を遮断することができる他の分子を含む。

本発明の方法は３ＤＧ機能の阻害または遮断するために、構造式により具体的に説明される以下の化合物の使用を含む。

本発明の実施に使用することができる化合物には、以下の１以上の（すなわち組み合わせ）を含む：
式Ｉは、Ｒ_１およびＲ_２が独立して水素、低級アルキル、低級アルコキシまたはアリール基であるか、または窒素原子と一緒に１〜２個のヘテロ原子および２〜６個の炭素原子を含有する複素環式環を形成し、第２の該ヘテロ原子は窒素、酸素および硫黄からなる群から選択される構造を含んでなり、そしてそれらの生物適合性の、そして製薬学的に許容され得る酸付加塩を含む。

式（Ｉ）の化合物中の低級アルキル基は１〜６個の炭素原子を含み、そしてメチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシルおよび対応するそれらの分枝鎖異性体を含む。低級アルコキシ基は１〜６個の炭素原子を含み、そしてメトキシ、エトキシ、プロポキシ、ブトキシ、ペンチルオキシおよびヘキシルオキシおよび対応するそれらの分枝鎖異性体を含む。アリール基は置換および非置換の両方のフェニルおよびピリジル基を含む。典型的なアリール基置換基は、低級アルキル基、フッ素、塩素、臭素およびヨウ素原子のようなものである。

式Ｉに包含される化合物の中で、特定の置換基の組み合わせが好適である。例えばＲ，が水素原子である時、Ｒ_２は好ましくは水素またはアリール基である。

Ｒ，およびＲ_２が両方ともアルキル基である時、同一のＲ，およびＲ_２アルキル基を有する化合物が好ましい。

Ｒ，およびＲ_２が窒素原子と一緒に１〜２個のヘテロ原子を含む複素環式環を形成する時、該ヘテロ原子は、窒素、酸素および硫黄からなる群から選択され、好適な複素環式環はモルホリノ、ピペラジニル、ピペリジニルおよびチオモルホリノとなり、モルホリノが最も好ましい。

式（Ｉ）の代表的化合物は：
Ｎ，Ｎ−ジメチルイミドジカルボンイミド酸ジアミド；
イミドジカルボンイミド酸ジアミド；
Ｎ−フェニルイミドジカルボンイミド酸ジアミド；
Ｎ−（アミノイミノメチル）−４−モルホリンカルボキシミドアミド；
Ｎ−（アミノイミノメチル）−４−チオモルホリンカルボキシミドアミド；
Ｎ−（アミノイミノメチル）−４−メチル−１−ピペリジンカルボキシミドアミ；
Ｎ−（アミノイミノメチル）−１−ピペリジンカルボキシミドアミド；
Ｎ−（アミノイミノメチル）−１−ピロリジンカルボキシミドアミド；
Ｎ−（アミノイミノメチル）−Ｉ−ヘキサヒドロアゼピンカルボキシミドアミド；
（アミノイミノメチル）−Ｉ−ヘキサヒドロアゼピンカルボキシミドアミド；
Ｎ−４−ピリジルイミドジカルボンイミド酸ジアミド；
Ｎ，Ｎ−ジ−ｎ−ヘキシルイミドジカルボンイミド酸ジアミド；
Ｎ，Ｎ−ジ−ｎ−ペンチルイミドジカルボンイミド酸ジアミド；
Ｎ，Ｎ−ｄ−ｎ−ブチルイミドジカルボンイミド酸ジアミド；
Ｎ，Ｎ−ジプロピルイミドジカルボンイミド酸ジアミド；
Ｎ，Ｎ−ジエチルイミドジカルボンイミド酸ジアミドおよびそれらの製薬学的に許容され得る酸付加塩である。

式（ＩＩ）はＺがＮまたはＣＨ−−であり；Ｘ、ＹおよびＱがそれぞれ独立して水素、アミノ、ヘテロシクロ、アミノ低級アルキル、低級アルキルまたはヒドロキシ基であり、そしてＲ_３が水素またはアミノ基である構造、それらの対応する３−オキシドを含んでなり、そしてそれらの生物適合性の、そして製薬学的に許容され得る塩を含む。

Ｘ、ＹまたはＱ置換基が環の窒素上にある式（ＩＩ）の化合物は互換異性体として存在し、すなわち２−ヒドロキシピリミジンは２−（１Ｈ）−ピリミジンとしても存在することができる。両形態を本発明の実施に使用することができる。

式（ＩＩ）の化合物中の低級アルキル基は１〜６個の炭素原子を含み、そしてメチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシルおよび対応するそれらの分枝鎖異性体を含む。式（ＩＩ）の化合物の複素環式基は３〜６個の炭素原子を含み、そしてピロリジニル、−メチルピロリジニル、ピペリジノール、２−メチルピペリジノモルホリノおよびヘキサメチレンアミノのような基により例示される。

式（ＩＩ）中の「自由な」Ｘ、Ｙ、ＱおよびＮＨＲ_３結合は、これらのバリアントが利用可能な炭素結合で環構造に結合できることを示す。Ｘ、ＹおよびＱのヒドロキシバリアントは、窒素原子上でも存在することができる。

式ＩＩにより包含される化合物の中で、特定の置換基の組み合わせが好適である。例えばＲ_３を水素として、ＣＨ基として、そして少なくとも１つのＸ、ＹおよびＱを別のアミノ基として有する化合物が好適である。Ｒ_３が水素であり、ＺがＣＨ基であり、そしてＸまたはＹの１つがアミノ低級アルキル基である化合物群も好適である。別の好適な化合物群は、Ｒが水素であり、そしてＺがＮ（窒素）であるものである。特定の置換パターンが好適であり、すなわち６−位（ＩＵＰＡＣ番号付け、Ｚ．ｂｄｂ．ＣＨ）が好ましくは置換され、そして最も好ましくはアミノまたはニトロ含有基により置換される。また好適であるのは、Ｘ、ＹおよびＱの２以上が水素以外である化合物である。

式ＩＩの代表的化合物は：４，５−ジアミノピリミジン；４−アミノ−５−アミノメチル−２−メチルピリミジン；６−（ピペリジノ）−２，４−ジアミノピリミジン３−オキシド；４，６−ジアミノピリミジン；４，５，６−トリアミノピリミジン；４，５−ジアミノ−６−ヒドロキシピリミジン；２，４，５−トリアミノ−６−ヒドロキシピリミジン；２，４，６−トリアミノピリミジン；４，５−ジアミノ−２−メチルピリミジン；４，５−ジアミノ−２，６−ジメチルピリミジン；４，５−ジアミノ−２−ヒドロキシ−ピリミジン；および４，５−ジアミノ−２−ヒドロキシ−６−メチルピリミジンである。

式ＩＩＩは、Ｒ_４が水素またはアシルであり、Ｒ_５が水素または低級アルキルであり、Ｘａが低級アルキル、カルボキシ、カルボキシメチル、場合によりハロゲン、低級アルキル、ヒドロキシ低級アルキル、ヒドロキシまたはアセチルアミノ基で置換されたフェニルまたはピリジル基からなる群から選択される置換基であり、ただしＸが場合によっては置換されたフェニルまたはピリジル基である時、Ｒ_５は水素である構造を含んでなり、そしてそれらの生物適合性があり、そして製薬学的に許容され得る酸付加塩を含む。

式（ＩＩＩ）の化合物中の低級アルキル基は１〜６個の炭素原子を含み、そしてメチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、および対応するそれらの分枝鎖異性体を含む。ハロバリアントは、フルオロ、クロロ、ブロモまたはヨード置換基であることができる。

本発明の目的について、式ＩＩＩの化合物の均等物は、それらの生物適合性があり、そして製薬学的に許容され得る塩である。

塩は、限定するわけではないがメタンスルホン酸、塩酸、トルエンスルホン酸、硫酸、マレイン酸、酢酸およびリン酸を含む種々の有機および無機酸から誘導することができる。

式ＩＩＩにより包含される化合物の中で、特定の置換基が好適である。例えばＲ_４は好ましくはメチル基であり、そしてＸａは好ましくはフェニルまたは置換フェニル基である。

式ＩＩＩの代表的化合物は：Ｎ−アセチル−２−（フェニルメチレン）ヒドラジンカルボキシミドアミド；２−（フェニルメチレン）ヒドラジンカルボキシミドアミド；２−（２，６−ジクロロフェニルメチレン）ヒドラジンカルボキシミドアミドピリドキサールグアニルヒドラゾン；ピリドキサールホスフェートグアニルヒドラゾン、２−（１−メチルエチリデン）ヒドラジンカルボキシミドアミド；ピルビン酸グアニルヒドラゾン；４−アセトアミドベンズアルデヒドグアニルヒドラゾン；４−アセトアミドベンズアルデヒドＮ−アセチルグアニルヒドラゾン；アセト酢酸グアニルヒドラゾンおよびそれらの生物学的に適合性があり、そして製薬学的に許容され得る酸付加塩である。

式ＩＶは、Ｒ_６が水素または低級アルキル基、または１〜３個のハロ、アミノ、場合によってはヒドロキシまたは低級アルキル基により置換されるフェニル基であり、Ｒ_７が水素、低級アルキル基またはアミノ基であり、そしてＲ_８が水素または低級アルキル基である構造を含んでなり、そしてそれらの生物学的に適合性があり、そして製薬学的に許容され得る酸付加塩を含む。

式（ＩＶ）の化合物中の低級アルキル基は１〜６個の炭素原子を含み、そしてメチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、および対応するそれらの分枝鎖異性体を含む。ハロバリアントは、フルオロ、クロロ、ブロモまたはヨード置換基であることができる。フェニル環が置換されている場合、置換基の点（１つまたは複数）は、直鎖分子に対してオルトメタまたはパラのフェニル環の結合点であることができる。

式ＩＶの代表的合物は：等価のｎ−ブタンヒドラゾン酸ヒドラジド；４−メチルベンズアミドラゾン；Ｎ−メチルベンゼンカルボキシミド酸ヒドラジド；ベンゼンカルボキシミド酸１−メチルヒドラジド；３−クロロベンズアミドラゾン；４−クロロベンズアミドラゾン；２−フルオロベンズアミドラゾン；３−フルオロベンズアミドラゾン；４−フルオロベンズアミドラゾン；２−ヒドロキシベンズアミドラゾン；３−ヒドロキシベンズアミドラゾン；４−ヒドロキシベンズアミドラゾン；２−アミノベンズアミドラゾン；ベンゼンカルボヒドラゾン酸ヒドラジド；ベンゼンカルボヒドラゾン酸１−メチルヒドラジド；およびそれらの生物学的に適合性があり、そして製薬学的に許容され得る塩である。

式Ｖは、Ｒ_９およびＲ_１０が独立して水素、ヒドロキシ、低級アルキルまたは低級アルコキシ基である構造を含んでなり、ただし「自由な」アミノ基が固定されたアミノ基に隣接し、そしてそれらの生物学的に適合性があり、そして製薬学的に許容され得る酸付加塩を含む。

式（Ｖ）の化合物中の低級アルキル基は１〜６個の炭素原子を含み、そしてメチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシルおよび対応するそれらの分枝鎖異性体を含む。同様に式（Ｖ）の化合物中の低級アルコキシ基は１〜６個の炭素原子を含み、そしてメトキシ、エトキシ、プロポキシ、ブトキシ、ペントキシおよびヘキソキシおよび対応するそれらの分枝鎖異性体を含む。

本発明の目的に関して式Ｖの化合物に均等であるのは、それらの生物学的に適合性があり、そして製薬学的に許容され得る塩である。

そのような塩は限定するわけではないが、メタンスルホン酸、塩酸、トルエンスルホン酸、硫酸、マレイン酸、酢酸およびリン酸を含む種々の有機および無機酸から誘導することができる。

式Ｖにより包含される化合物の中で、特定の置換基が好適である。例えばＲ_９が水素である時、Ｒ_１０も好ましくは水素である。

式Ｖの代表的化合物は：３，４−ジアミノピリジン；２，３−ジアミノピリジン；５−メチル−２，３−ジアミノピリジン；４−メチル−２，３−ジアミノピリジン；６−メチル−２，３−ピリジンジアミン；４，６−ジメチル−２，３−ピリジンジアミン；６−ヒドロキシ−２，３−ジアミノピリジン；６−エトキシ−２，３−ジアミノピリジン：６−ジメチルアミノ−２，３−ジアミノピリジン；ジエチル２−（２，３−ジアミノ−６−ピリジル）マロネート；６（４−メチル−１−ピペラジニル）−２，３−ピリジンジアミン；６（メチルチオ）−５−（トリフルオロメチル）−２，３−ピリジンジアミン；５−（トリフルオロメチル）−２，３−ピリジンジアミン；６−（２，２，２−トリフルオロエトキシ）−５−（トリフルオロメチル）−２，３−ピリジンジアミン；６−クロロ−５−（トリフルオロメチル）−２，３−ピリジンジアミン；５−メトキシ−６−（メチルチオ）−２，３−ピリジンジアミン；５−ブロモ−４−メチル−２，３−ピリジンジアミン；５−（トリフルオロメチル−２，３−ピリジンジアミン；６−ブロモ−４−メチル−２，３−ピリジンジアミン；５−ブロモ−６−メチル−２，３−ピリジンジアミン；６−メトキシ−３，４−ピリジンジアミン；２−メトキシ−３，４−ピリジンジアミン；５−メチル−３，４−ピリジンジアミン；５−メトキシ−３，４−ピリジンジアミン；５−ブロモ−３，４−ピリジンジアミン；２，３，４−ピリジントリアミン；２，３，５−ピリジントリアミン；４−メチル−２，３，６−ピリジントリアミン；４−（メチルチオ）−２，３，６−ピリジントリアミン；４−エトキシ−２，３，６−ピリジントリアミン；２，３，６−ピリジントリアミン；３，４，５−ピリジントリアミン；４−メトキシ−２，３−ピリジンジアミン；５−メトキシ−２，３−ピリジンジアミン；６−メトキシ−２，３−ピリジンジアミンおよびそれらの生物学的に適合性があり、そして製薬学的に許容され得る塩である。

式ＶＩは、ｎが１または２であり、Ｒ_１１がアミノ基またはヒドロキシエチル基であり、そしてＲ_１２がアミノ、ヒドロキシアルキルアミノ、低級アルキ基または式ａｌｋ−Ｙａの基であり、ここでａｌｋは低級アルキレン基であり、そしてＹａがヒドロキシ、低級アルコキシ、低級アルキルチオ、低級アルキルアミノ、および４〜７環の員および１〜３個のヘテロ原子を含む複素環式基からなる群から選択され、ただしＲ_１１がヒドロキシエチル基である時、Ｒ，はアミノ基である構造；それらの生物学的に適合性があり、そして製薬学的に許容され得る酸付加塩を含んでなる。

本明細書で言う低級アルキル基、低級アルキレンおよび低級アルコキシ基は１〜６個の炭素原子を含み、そしてメチル、メチレン、メトキシ、エチル、エチレン、エトキシ、プロピル、プロピレン、プロポキシ、ブチル、ブチレン、ブトキシ、ペンチル、ペンチレン、ペンチルオキシ、ヘキシル、ヘキシレン、ヘキシルオキシ、および対応するそれらの分枝鎖異性体を含む。本明細書で言う複素環式基は、少なくとも１個、そして最高３個のヘテロ原子をその中に有する４〜７員環を含む。

代表的な複素環式基は、モルホリノ、ピペリジノ、ピペラジノ、メチルピペラジノおよびヘキサメチレンイミノのような基である。

本発明の目的に関して式ＶＩの化合物に均等であるのは、それらの生物学的に適合性があり、そして製薬学的に許容され得る塩である。

式ＶＩの化合物の中で、特定の置換基の組み合わせが好適である。例えばＲ_１１がヒドロキシエチル基である時、Ｒ_１２はアミノ基である。Ｒ_１１がアミノ基である時、Ｒ_１２は好ましくはヒドロキシ低級アルキルアミノ、低級アルキル基、または式ａｌｋ−Ｙの基であり、ここでａｌｋは低級アルキレン基であり、そしてＹはヒドロキシ、低級アルコキシ、低級アルキルチオ、低級アルキルアミノ、および４〜７環の員および１〜３個のヘテロ原子を含む複素環式基からなる群から選択される。

代表的な式（ＶＩ）の化合物は：１−アミノ−２−［２−（２−ヒドロキシエチル）ヒドラジノ］−２−イミダゾリン；１−アミノ−［２−（２−ヒドロキシエチル）ヒドラジノ］−２−イミダゾリン；１−アミノ−２−（２−ヒドロキシエチルアミノ）−２−イミダゾリン；１−（２−ヒドロキシエチル）−２−ヒドラジノ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン；１−（２−ヒドロキシエチル）２−ヒドラジノ−２−イミダゾリン；１−アミノ−２−（［２−（４−モルホリノ）エチル］アミノ）イミダゾリン；（［２−（４−モルホリノ）エチル］アミノ）イミダゾリン；１−アミノ−２−（［３−（４−モルホリノ）プロピル］アミノ）イミダゾリン；１−アミノ−２−（［３−（４−メチルピペラジン−１−イル）プロピル］アミノ）イミダゾリン；１−アミノ−２−（［３−（ジメチルアミノ）プロピル］アミノ）イミダゾリン；１−アミノ−２−（［３−（エトキシプロピル）アミノ］イミダゾリン、１−アミノ−２−（［３−（１−イミダゾリル）プロピル］アミノ）イミダゾリン、１−アミノ−２−（２−メトキシエチルアミノ）−２−イミダゾリン、（２−メトキシエチルアミノ）−２−イミダゾリン、１−アミノ−２−（３−イソプロポキシプロピルアミノ）−２−イミダゾリン；１−アミノ−２−（３−メチルチオプロピルアミノ）−２−イミダゾリン；１−アミノ−２−［３−（１−ピペリジノ）プロピルアミノ）イミダゾリン；１−アミノ−２−［２，２−ジメチル−３−（ジメチルアミノ）プロピルアミノ］−２−イミダゾリン；１−アミノ−２−（ネオペンチルアミノ）−２−イミダゾリン；およびそれらの生物学的に適合性があり、そして製薬学的に許容され得る塩である。

式ＶＩＩは、Ｒ_１３が水素またはアミノ基であり、Ｒ_１４およびＲ_１５は独立してアミノ基、ヒドラジノ基、低級アルキル基またはアリール基であり、ただしＲ_１３、Ｒ_１４およびＲ_１５の１つはアミノ基またはヒドラジノ基でなければならない構造を含んでなり、そしてそれらの生物学的に、そして製薬学的に許容され得る酸またはアルカリ付加塩を含む。

上で言う低級アルキル基は、好ましくは１〜６個の炭素原子を含み、そしてメチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、および対応するそれらの分枝鎖異性体を含む。

式ＶＩＩにより包含されるアリール基は、フェニルおよび低級アルキル置換フェニル、例えばトリルおよびキシリル、および１〜２個のハロ、ヒドロキシまたは低級アルコキシ基で置換されたフェニルのような、６〜１０個の炭素原子を含むものである。

式ＶＩＩ中のハロ原子は、フルオロ、クロロ、ブロモまたはヨードであることができる。低級アルコキシ基は１〜６個、好ましくは１〜３個の炭素原子を含み、そしてメトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、イソプロポキシ等により具体的に説明される。

本発明の目的に関して式ＶＩＩの化合物に均等であるのは、それらの生物学的に、そして製薬学的に許容され得る酸付加塩である。そのような酸付加塩は、硫酸、リン酸、塩酸、臭化水素酸、スルファミン酸、クエン酸、乳酸、マレイン酸、コハク酸、酒石酸、桂皮酸、酢酸、安息香酸、グルコン酸、アスコルビン酸および関連する酸のような種々の有機および無機酸から誘導することができる。

式ＶＩＩにより包含される化合物の中で、特定の置換基の組み合わせが好適である。例えばＲ_１３が水素である時、Ｒ_１４は好ましくはアミノ基である。Ｒ_１４がヒドラジノ基である時、Ｒは好ましくはアミノ基である。

代表的な式（ＶＩＩ）の化合物は：３，４−ジアミノ−５−メチル−１，２，４−トリアゾール；３，５−ジメチル−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−４−アミン；４−トリアゾール−４−アミン；４−トリアゾール−４−アミン；４−トリアゾール−４−アミン；４−トリアゾール−４−アミン；２，４−トリアゾール−３，４−ジアミン；５−（１−エチルプロピル）−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３，４−ジアミン；５−イソプロピル−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３，４−ジアミン；５−シクロヘキシル−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３，４−ジアミン；５−メチル−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３，４−ジアミン；５−フェニル−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３，４−ジアミン；５−プロピル−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３，４−ジアミン；５−シクロヘキシル−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３，４−ジアミンである。

式ＶＩＩＩは、Ｒ_１６が水素またはアミノ基であり、Ｒ_１７はＲ_１６が水素である時、アミノ基またはグアニジノ基であるか、あるいはＲ_１７はＲ_１６がアミノ基である時、アミノ基であり、Ｒ_１８およびＲ_１９が独立して水素、ヒドロキシ、低級アルキル基、低級アルコキシ基またはアリール基である構造を含んでなり、そしてそれらの生物学的または製薬学的に許容され得る酸またはアルカリ付加塩を含む。

式ＶＩＩＩの化合物中の低級アルキル基は、好ましくは１〜６個の炭素原子を含み、そしてメチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシルおよび対応するそれらの分枝鎖異性体を含む。低級アルコキシ基も同様に１〜６個の炭素原子を含み、そして好ましくは１〜３個の炭素原子を含み、そしてメトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、イソプロポキシ等により具体的に説明される。

上記式により包含されるアリール基は、フェニルおよび低級アルキル置換フェニル、例えばトリルおよびキシリル、および１〜２個のハロ、ヒドロキシまたは低級アルコキシ基で置換されたフェニルのような、６〜１０個の炭素原子を含むものである。

上記式ＶＩＩＩの化合物中のハロ原子は、フルオロ、クロロ、ブロモまたはヨードであることができる。

式ＶＩＩＩの化合物の生物学的または製薬学的に許容され得る塩は、哺乳動物の身体により耐容されるものであり、そして硫酸、リン酸、塩酸、スルファミン酸、クエン酸、乳酸、マレイン酸、コハク酸、酒石酸、桂皮酸、酢酸、安息香酸、グルコン酸、アスコルビン酸および関連する酸のような種々の有機および無機酸から誘導することができる酸付加塩を含む。式ＶＩＩＩの化合物に包含される化合物の中で、特定の置換基が好ましい。例えばＲ，がアミノ基である化合物は好適な基である。

代表的な式（ＶＩＩＩ）の化合物は：２−グアニジノベンズイミダゾール；１，２−ジアミノベンズイミダゾール；１，２−ジアミノベンズイミダゾールヒドロクロライド；５−ブロモ−２−グアニジノベンズイミダゾール；５−メトキシ−２−グアニジノベンズイミダゾール；５−メチルベンズイミダゾール−１，２−ジアミン：５−クロロベンズイミダゾール−１，２−ジアミン；および２，５−ジアミノベンズイミダゾールである。

Ｒ_２０−ＣＨ−（ＮＨＲ２１）−ＣＯＯＨ（ＩＸ）を含んでなる式ＩＸは、Ｒ_２０が水素；１または２個のヒドロキシ、チオール、フェニル、ヒドロキシフェニル、低級アルキルチオール、カルボキシ、アミノカルボキシまたはアミノ基で場合により置換された低級アルキルからなる群から選択され、そしてＲ_２１が水素およびアシル基からなる群から選択される構造式；およびそれらの生物適合性の、そして製薬的学的に許容され得る酸付加塩である。

式ＩＸの化合物中の低級アルキル基は１〜６個の炭素原子を含み、そしてメチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシルおよび対応するそれらの分枝鎖異性体を含む。

本明細書で言うアシル基は、２〜１０個の炭素原子を有する低級アルキル、アリールおよびヘテロアリールカルボン酸の残基である。それらはアセチル、プロピオニル、ブタノイル、バレリル、ヘキサノイルおよび対応するより高級な鎖およびそれらの分枝鎖同族体により典型的に表される。アシル残基は１以上の二重結合および／またはさらなる酸官能基、例えばグルタリルまたはスクシニルも含むことができる。

本明細書で使用するアミノ酸はＬ＆Ｄ；立体化学的配座を有するか、またはそれらの混合物として使用することができる。しかしＬ−立体配座が好適である。

本発明の目的について式ＩＸの化合物に均等であるのは、それらの生物学的に適合性があり、そして製薬学的に許容され得る塩である。そのような塩は、メタンスルホン酸、塩酸、トルエンスルホン酸、硫酸、マレイン酸、酢酸、リン酸および関連する酸のような種々の無機および有機酸から誘導することができる。

代表的な式ＩＸの化合物は；リシン；２，３−ジアミノコハク酸；システインおよびそれらの生物適合性があり、そして製薬学的に許容され得る塩である。

式Ｘは、Ｒ_２２およびＲ_２３が独立して水素、アミノ基またはモノ−もしくはジ−アミノ低級アルキル基であり、Ｒ_２４およびＲ_２５が独立して水素、低級アルキル基、アリール基またはアシル基であり、ただしＲ_２２およびＲ_２３の１つはアミノ基またはモノ−もしくはジ−アミノ低級アルキル基でなければならない構造を含んでなり、そしてそれらの生物学的または製薬的学的に許容され得る酸またはアルカリ付加塩を含む。

式Ｘの化合物中の低級アルキル基は１〜６個の炭素原子を含み、そしてメチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシルおよび対応するそれらの分枝鎖異性体を含む。モノ−もしくはジ−アミノ低級アルキル基は、１または２個のアミノ基により鎖中が置換された低級アルキル基である。

本明細書で言うアリール基は、フェニルおよび低級アルキル置換フェニル、例えばトリルおよびキシリル、および１〜２個のハロ、ヒドロキシおよび低級アルコキシ基で置換されたフェニルのような、６〜１０個の炭素原子を含むものである。本明細書で言うアシル基は、低級アルキル、アリールおよび２〜１０個の炭素原子を有するヘテロアリールカルボン酸の残基である。それらはアセチル、プロピオニル、ブタノイル、バレリル、ヘキサノイルおよび対応するより高級な鎖およびそれらの分枝鎖同族体により典型的に表される。アシル残基は１以上の二重結合および／またはさらなる酸官能基、例えばグルタリルまたはスクシニルも含むことができる。

上で言うヘテロアリール基は、３〜６個の炭素原子および酸素、窒素または硫黄のような１以上のヘテロ原子を含有する芳香族複素環式基を包含する。

上記式Ｘ中のハロ原子は、フルオロ、クロロ、ブロモまたはヨードであることができる。低級アルコキシ基は１〜６個、そして好ましくは１〜３個の炭素原子を含み、そしてメトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ等により具体的に説明される。

生物学的または製薬学的に許容され得る塩という用語は、哺乳動物の身体により耐容されるものであり、そして硫酸、リン酸、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、スルファミン酸、クエン酸、乳酸、マレイン酸、コハク酸、酒石酸、桂皮酸、酢酸、安息香酸、グルコン酸、アスコルビン酸および関連する酸のような種々の有機および無機酸から誘導することができる酸付加塩により例示される。

式Ｘにより包含される化合物の中で、特定の置換基の組み合わせが好適である。例えばＲ_２２およびＲ_２３が両方ともアミノ基である時、Ｒ_２４およびＲ_２５は好ましくは両方とも水素原子である。Ｒ_２２またはＲ_２３がアミノ基であり、そしてＲ_２４またはＲ_２５の１つがアリール基である時、もう１つのＲ_２４およびＲ_２５は好ましくは水素である。

代表的な式Ｘの化合物は：１，２−ジアミノ−４−フェニル［１Ｈ］イミダゾール；１，２−ジアミノイミダゾール；１−（２，３−ジアミノプロピル）イミダゾールトリヒドロクロライド；４−（４−ブロモフェニル）イミダゾール−１，２−ジアミン；４−（４−クロロフェニル）イミダゾール−１，２−ジアミン；４−（４−ヘキシルフェニル）イミダゾール−１，２−ジアミン；４−（４−メトキシフェニル）イミダゾール−１，２−ジアミン；４−フェニル−５−プロピルイミダゾール−１，２−ジアミン；１，２−ジアミノ−４−メチルイミダゾール；１，２−ジアミノ−４，５−ジメチルイミダゾール；および１，２−ジアミノ−４−メチル−５−アセチルイミダゾールである。

式ＸＩは、Ｒ_２６がヒドロキシ、低級アルコキシ、アミノ、アミノ低級アルコキシ、モノ−低級アルキルアミノ低級アルコキシ、ジ−低級アルキルアミノ低級アルコキシまたはヒドラジノ基、または式−−ＮＲ_２９Ｒ_３０の基であり、ここでＲ_２９が水素または級アルキルであり、そしてＲ_３０が１〜２０個の炭素原子のアルキル基、アリール基、ヒドロキシ低級アルキル基、カルボキシ低級アルキル基、シクロ低級アルキル基または４〜７個の環員および１〜３個のヘテロ原子を含む複素環式基であるか；あるいはＲ_２９およびＲ_３０は窒素と一緒にモルホリノ、ピペリジニルまたはピペラジニル基を形成し；あるいはＲ_２９が水素である時、Ｒ_３０もヒドロキシ基であることができ；Ｒ_２７が０〜３個のアミノまたはニトロ基、および／またはヒドラジノ基、ヒドラジノスルホニル基、ヒドロキシエチルアミノまたはアミジノ基であり；Ｒ_２８が水素、または１もしくは２個のフルオロ、ヒドロキシ、低級アルコキシ、カルボキシ、低級アルキルアミノ、ジ−低級アルキルアミノまたはヒドロキシ低級アルキルアミノ基であり；ただしＲ_２６がヒドロキシまたは低級アルコキシ基である時、Ｒ_２７は非−水素置換基であり；さらにＲ_２６がヒドラジノである時、少なくとも２つの非−水素置換基がフェニル環上になければならず；そしてさらにＲ_２８が水素である時、Ｒ_３０はアミノイミノ、グアニジル、アミノグアニジニルまたはジアミノグアニジル基であることもできる構造を含んでなり、そしてそれらの製薬学的に許容され得る塩および水和物を含む。

式ＸＩの化合物の低級アルキル基は１〜６個の炭素原子を含み、そしてメチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシルおよび対応するそれらの分枝鎖異性体を含む。シクロアルキル基は４〜７個の炭素原子を含み、そしてシクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、４−メチルシクロヘキシルおよびシクロヘプチル基のような基により例示される。

式ＸＩの化合物の複素環式基には、少なくとも１個および最高３個のヘテロ原子、例えば酸素、窒素または硫黄を中に有し、そして様々な不飽和度を含む４〜７員環を含む。

代表的なそのような複素環式基は、モルホリノ、ピペリジノ、ホモピペリジノ、ピペラジノ、メチルピペラジノ、ヘキサメチレンイミノ、ピリジル、メチルピリジル、イミダゾリル、ピロリジニル、２，６−ジメチルモルホリノ、フルフラル、１，２，４−トリアゾイリル、チアゾリル、チアゾリニル、メチルチアゾリル等のような基である。

本発明の目的に関して、式ＸＩの化合物に均等であるのは、それらの生物学的に適合性があり、そして製薬学的に許容され得る塩および水和物である。そのような塩は、限定するわけではないがメタンスルホン酸、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、トルエンスルホン酸、硫酸、マレイン酸、酢酸およびリン酸を含む種々の有機および無機酸から誘導することができる。

式ＸＩの化合物が１以上の不斉炭素原子を含む時、鏡像異性体の混合物ならびに純粋な（Ｒ）もしくは（Ｓ）鏡像異性体を本発明の実施に使用することができる。

さらに、フェニル環上に３，４−ジアミノまたは２，３−ジアミノ−５−フルオロ置換基のパターンを有する化合物が高度に好適である。

代表的な式ＸＩの化合物は：４−（シクロヘキシルアミノ−カルボニル）−ｏ−フェニレンジアミンヒドロクロライド；３，４−ジアミノベンズヒドラジド；４−（ｎ−ブチルアミノ−カルボニル）−ｏ−フェニレン−ジアミンジヒドロクロライド；４−（エチルアミノ−カルボニル）−ｏ−フェニレン−ジアミンジヒドロクロライド；４−カルバモイル−ｏ−フェニレンジアミンヒドロクロライド；４−（モルホリノ−カルボニル）−ｏ−フェニレン−ジアミンヒドロクロライド；４−［（４−モルホリノ）ヒドラジノ−カルボニル］−ｏ−フェニレンジアミン；４−（１−ピペリジニルアミノ−カルボニル）−ｏ−フェニレンジアミンジヒドロクロライド；２，４−ジアミノ−３−ヒドロキシ安息香酸；４，５−ジアミノ−２−ヒドロキシ安息香酸；３，４−ジアミノベンズアミド；３，４−ジアミノベンズヒドラジド；３，４−ジアミノ−Ｎ，Ｎ−ビス（１−メチルエチル）ベンズアミド；３，４−ジアミノ−Ｎ，Ｎ−ジエチルベンズアミド；３，４−ジアミノ−Ｎ，Ｎ−ジプロピルベンズアミド；３，４−ジアミノ−Ｎ−（２−フラニルメチル）ベンズアミド；３，４−ジアミノ−Ｎ−（２−メチルプロピル）ベンズアミド；ベンズアミド；３，４−ジアミノ−Ｎ−（５−メチル−２−チアゾリル）ベンズアミド；３，４−ジアミノ−Ｎ−（６−メトキシ−２−ベンゾチアゾリル）ベンズアミド；３，４−ジアミノ−Ｎ−（６−メトキシ−８−キノリニル）ベンズアミド；３，４−ジアミノ−Ｎ−（６−メチル−２−ピリジニル）ベンズアミド；３，４−ジアミノ−Ｎ−（１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル）ベンズアミド；３，４−ジアミノ−Ｎ−（２−ピリジニル）ベンズアミド；３，４−ジアミノ−Ｎ−（２−チアゾリル）ベンズアミド；３，４−ジアミノ−Ｎ−（４−ピリジニル）ベンズアミド；３，４−ジアミノ−Ｎ−［９Ｈ−ピリド（３，４−ｂ）インドール−６−イル］ベンズアミド３，４−ジアミノ−Ｎ−ブチルベンズアミド；３，４−ジアミノ−Ｎ−シクロヘキシルベンズアミド；３，４−ジアミノ−Ｎ−シクロペンチルベンズアミド；３，４−ジアミノ−Ｎ−デシルベンズアミド；３，４−ジアミノ−Ｎ−ドデシルベンズアミド；３，４−ジアミノ−Ｎ−メチルベンズアミド；３，４−ジアミノ−Ｎ−オクチルベンズアミド；３，４−ジアミノ−Ｎ−ペンチルベンズアミド；３，４−ジアミノ−Ｎ−フェニルベンズアミド；４−（ジエチルアミノ−カルボニル）−ｏ−フェニレンジアミン；４−（ｔｅｒｔ−ブチルアミノ−カルボニル）−ｏ−フェニレンジアミン；４−イソブチルアミノ−カルボニル）−ｏ−フェニレンジアミン；４−（ネオペンチルアミノ−カルボニル）−ｏ−フェニレンジアミン；４−（ジプロピルアミノ−カルボニル）−ｏ−フェニレンジアミン；４−（ｎ−ヘキシルアミノ−カルボニル）−ｏ−フェニレンジアミン、４−（ｎ−デシルアミノ−カルボニル）−ｏ−フェニレンジアミン；４−（ｎ−ドデシルアミノ−カルボニル）−ｏ−フェニレンジアミン；４−（１−ヘキサデシルアミノ−カルボニル）−ｏ−フェニレンジアミン；４−（オクタデシルアミノ−カルボニル）−ｏ−フェニレンジアミン；４−（ヒドロキシルアミノ−カルボニル）−ｏ−フェニレンジアミン；４−（２−ヒドロキシエチルアミノ−カルボニル）−ｏ−フェニレン；４−［（２−ヒドロキシエチルアミノ）エチルアミノ−カルボニル］−ｏ−フェニレンジアミン；４−［（２−ヒドロキシエチルオキシ）エチルアミノ−カルボニル］−ｏ−フェニレンジアミン；４−（６−ヒドロキヘキシルアミノ−カルボニル）−ｏ−フェニレンジアミン；４−（３−エトキシプロピルアミノ−カルボニル）−ｏ−フェニレンジアミン；４−（３−イソプロポキシプロピルアミノ−カルボニル）−ｏ−フェニレンジアミン；４−（３−ジメチルアミノプロピルアミノ−カルボニル）−ｏ−フェニレンジアミン；４−［４−（２−アミノエチル）モルホリノ−カルボニル］−ｏ−フェニレンジアミン；４−［４−（３−アミノプロピル）モルホリノ−カルボニル］−ｏ−フェニレンジアミン；４−Ｎ−（３−アミノプロピル）ピロリジノ−カルボニル］−ｏ−フェニレンジアミン；４−［３−（Ｎ−ピペリジノ）プロピルアミノ−カルボニル］−ｏ−フェニレンジアミン；４−［３−（４−メチルピペラジニル）プロピルアミノ−カルボニル］−ｏ−フェニレンジアミン；４−（３−イミダゾイルプロピルアミノ−カルボニル）−ｏ−フェニレンジアミン；４−（３−フェニルプロピルアミノ−カルボニル）−ｏ−フェニレンジアミン；４−［２−（Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノ）エチルアミノ−カルボニル］−ｏ−フェニレンジアミン；４−（イミダゾリルアミノ−カルボニル）−ｏ−フェニレンジアミン；４−（ピロリジニル−カルボニル）−ｏ−フェニレンジアミン；４−（ピペリジノ−カルボニル）−ｏ−フェニレンジアミン；４−（１−メチルピペラジニル−カルボニル）−ｏ−フェニレンジアミン；４−（２，６−ジメチルモルホリノ−カルボニル）−ｏ−フェニレンジアミン；４−（ピロリジン−１−イルアミノ−カルボニル）−ｏ−フェニレンジアミン；４−（ホモピぺリジン−１−イルアミノ−カルボニル）−ｏ−フェニレンジアミン；４−（４−メチルピぺラジン−１−イルアミノ−カルボニル）−ｏ−フェニレンジアミン；４−（１，２，４−トリアゾール−１−イルアミノ−カルボニル）−ｏ−フェニレンジアミン；４−（グアニジニル−カルボニル）−ｏ−フェニレンジアミン；４−（グアニジニルアミノ−カルボニル）−ｏ−フェニレンジアミン；４−アミノグアニジニルアミノ−カルボニル）−ｏ−フェニレンジアミン、４−（ジアミノグアニジニルアミノ−カルボニル）−ｏ−フェニレンジアミン、３，４−アミノサリチル酸４−グアニジノ安息香酸；３，４−ジアミノベンゾヒドロキサム酸；３，４，５−トリアミノ安息香酸；２，３−ジアミノ−５−フルオロ−安息香酸；および３，４−ジアミノ安息香酸であり；そしてそれらの製薬学的に許容され得る塩を含む。

式ＸＩＩは、Ｒ_３１が水素、低級アルキル基またはヒドロキシ基であり；Ｒ_３２が水素、ヒドロキシ低級アルキル基、低級アルコキシ基、低級アルキル基またはアリール基であり；Ｒ_３３が水素またはアミノ基である構造；およびそれらの生物学的または製薬学的に許容され得る酸付加塩を含んでなる。

式ＸＩＩの化合物の低級アルキル基は１〜６個の炭素原子を含み、そしてメチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシルおよび対応するそれらの分枝鎖異性体を含む。同様に低級アルコキシ基は１〜６個、そして好ましくは１〜３個の炭素原子を含み、そしてメトキシ、エトキシ、イソプロポキシ、プロポキシ等を含む。ヒドロキシ低級アルキルは、１級、２級および３級アルコール置換基パターンを含む。

式ＸＩＩの化合物のアリール基は、フェニルおよび低級アルキル置換フェニル、例えばトリルおよびキシリル、および１〜２個のハロ、ヒドロキシまたは低級アルコキシ基で置換されたフェニルのような、６〜１０個の炭素原子を含むものを包含する。

上記式ＸＩＩのハロ原子は、フルオロ、クロロ、ブロモおよびヨードであることができる。

生物学的または製薬学的に許容され得る塩という用語は、哺乳動物の身体により耐容されるものを指し、そして硫酸、リン酸、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、スルファミン酸、クエン酸、乳酸、マレイン酸、コハク酸、酒石酸、桂皮酸、酢酸、安息香酸、グルコン酸、アスコルビン酸および関連する酸のような種々の有機および無機酸から誘導することができる酸付加塩により例示される。

式ＸＩＩの化合物に包含される化合物の中で、特定の置換基が好ましい。例えばＲ_３２がヒドロキシであり、そしてＲ_３３がアミノ基である化合物が好適である。

代表的な式ＸＩＩの化合物は：３，４−ジアミノピラゾール；３，４−ジアミノ−５−ヒドロキシピラゾール；３，４−ジアミノ−５−メチルピラゾール；３，４−ジアミノ−５−メトキシピラゾール；３，４−ジアミノ−５−フェニルピラゾール；１−メチル−３−ヒドロキシ−４，５−ジアミノピラゾール；１−（２−ヒドロキシエチル）−３−ヒドロキシ−４，５−ジアミノピラゾール；１−（２−ヒドロキシエチル）−３−フェニル−４，５−ジアミノピラゾール；１−（２−ヒドロキシエチル）−３−メチル−４，５−ジアミノピラゾール；１−（２−ヒドロキシエチル）−４，５−ジアミノピラゾール；１−（２−ヒドロキシプロピル）−３−ヒドロキシ−４，５−ジアミノピラゾール；３−アミノ−５−ヒドロキシピラゾール；および１−（２−ヒドロキシ−２−メチルプロピル）−３−ヒドロキシ−４，５−ジアミノピラゾール；およびそれらの生物学的および製薬学的に許容され得る酸付加塩である。

式ＸＩＩＩは、Ｘが−ＮＲ_１−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）_２−または−Ｏ−であるｎ＝１〜６の場合、Ｒ_１がＨ、直鎖アルキル基（Ｃ_１−Ｃ_６）および分枝鎖アルキル基（Ｃ_１−Ｃ_６）からなる群から選択される構造を含んでなる。Ｙ＝−Ｎ−、−ＮＨ−または−Ｏ−、そしてＺがＨ、直鎖アルキル基（Ｃ_１−Ｃ_６）および分枝鎖アルキル基（Ｃ_１−Ｃ_６）からなる群から選択される。

式ＸＩＶについて、式中、Ｒ_３７が低級アルキル基、または式ＮＲ４１ＮＲ４２の基（式中、Ｒ_４１が水素であり、そしてＲ_４２が低級アルキル基またはヒドロキシ（低級）アルキル基であるか；あるいはＲ_４１およびＲ_４２が窒素原子と一緒に、４〜６個の炭素原子および窒素原子に加えて、０〜１個の酸素、窒素または硫黄原子を含む複素環式基である）あり：Ｒ_３８が水素またはアミノ基であり；Ｒ_３９が水素またはアミノ基であり；Ｒ_４０が水素または低級アルキル基であり；ただしＲ_３８、Ｒ_３９およびＲ_４０の少なくとも１つは水素以外であり；そしてさらにＲ_３７およびＲ_３８は両方がアミノ基であることはできず；およびそれらの製薬学的に許容され得る酸付加塩。

式ＸＩＶの化合物の低級アルキル基は１〜６個の炭素原子を含み、そしてメチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシルおよび対応するそれらの分枝鎖異性体を含む。

ＮＲ４１Ｒ_４２基により形成される複素環式基には、０〜１個のさらなるヘテロ原子、例えば酸素、窒素または硫黄を中に有し、そして様々な不飽和度を含む４〜７員環である。代表的なそのような複素環式基は、モルホリノ、ピペリジノ、ヘキサヒドロアゼピノ、ピペラジノ、メチルピペラジノ、ヘキサメチレンイミノ、ピリジル、メチルピリジル、イミダゾリル、ピロリジニル、２，６−ジメチルモルホリノ、１．２．４−トリアゾイリル、チアゾリル、チアゾリニル等のような基である。

本発明の目的に関して式ＸＩＶの化合物に均等であるものは、それらの生物学的に適合性があり、そして製薬学的に許容され得る塩である。そのような塩は限定するわけではないが、メタンスルホン酸、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、トルエンスルホン酸、硫酸、マレイン酸、酢酸およびリン酸を含む種々の有機および無機酸から誘導することができる。

式ＸＩＶの化合物が１以上の不斉炭素原子を含む時、鏡像異性体の混合物ならびに純粋な（Ｒ）もしくは（Ｓ）鏡像異性体を本発明の実施に使用することができる。

式ＸＩＶにより包含される化合物の中で、特定の置換基の組み合わせが好適である。例えばＲ_３７が複素環式基、そして特にモルホリノまたはヘキサヒドロアゼピノ基である化合物が高度に好ましい。

代表的な式ＸＩＶの化合物は：２−（２−ヒドロキシ−２−メチルプロピル）ヒドラジンカルボキシミド酸ヒドラジド；Ｎ−（４−モルホリノ）ヒドラジンカルボキシミドアミド；１−メチル−Ｎ−（４−モルホリノ）ヒドラジンカルボキシミドアミド；１−メチル−Ｎ−（４−ピペリジノ）ヒドラジンカルボキシミドアミド；１−（Ｎ−ヘキサヒドロアゼピノ）ヒドラジンカルボキシミドアミド；Ｎ，Ｎ−ジメチルカルボンイミド酸ジヒドラジド；１−メチルカルボンイミド酸ジヒドラジド；２−（２−ヒドロキシ−２−メチルプロピル）カルボヒドラゾン酸ジヒドラジドおよびＮ−エチルカルボンイミド酸ジヒドラジである。

式ＸＶは、（Ｒ４３ＮＨ＝）ＣＲ４４−Ｗ−ＣＲ４５（＝ＮＨＲ４３）（ＸＶ）：
を含んでなる構造であり、式中、Ｒ_４３がピリジル、フェニルまたは式のカルボン酸置換フェニル基であり；式中、Ｒ_４６が水素、低級アルキル基または水−可溶化エステル部分であり；Ｗが炭素−炭素結合または１〜３個の炭素原子のアルキレン基であり、Ｒ_４４が低級アルキル基、アリール基またはヘテロアリール基であり、そしてＲ_４５が水素、低級アルキル基、アリール基またはヘテロアリール基であり；そしてこれはそれらの生物学的または製薬学的に許容され得る酸付加塩を含む。

式ＸＶの化合物の低級アルキル基は、好ましくは１〜６個の炭素原子を含み、そしてメチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシルおよび対応するそれらの分枝鎖異性体を含む。これらの基は１以上のハロ、ヒドロキシ、アミノまたは低級アルキルアミノ基により場合によっては置換される。

式ＸＶの化合物のアルキレン基も同様に、直鎖もしくは分枝鎖であることができ、そしてエチレン、プロピレン、ブチレン、ペンチレン、ヘキシレンおよびそれらの対応する分枝鎖異性体により例示される。

この式のカルボン酸置換フェニル基であるＲ基において：
式中、Ｒ_４４は水素、低級アルキルまたは水−可溶化エステル部分であり、水−可溶化エステル部分は当該技術分野で知られているそのような種々のエステルから選択することができる。典型的にはこれらのエステルは、ジアルキレンまたはトリアルキレングリコールまたはそれらのエーテル、ジヒドロキシアルキル基、アリールアルキル基、例えばニトロフェニルアルキルおよびピリジルアルキル基、およびヒドロキシおよびカルボキシ置換アルキル基のカルボン酸エステルおよびリン酸エステルに由来する。特に好適な水可溶化エステル部分は、２，３−ジヒドロキシプロパンおよび２−ヒドロキシエチルホスフェートに由来するものである。

上記式ＸＶにより包含されるアリール基は、フェニルおよび低級アルキル置換フェニル、例えばトリルおよびキシリル、および１〜２個のハロ、ヒドロキシまたは低級アルコキシ基で場合により置換されたフェニルのような、６〜１０個の炭素原子を含むものである。フェニルまたはアリール環の置換について可能性がある場合、置換基の位置はヒドラジン基の窒素に関するフェニルまたはアリール環の結合点に対して、オルト、メタまたはパラであることができる。

上記式ＸＶ中のハロ原子は、フルオロ、クロロ、ブロモまたはヨードであることができる。低級アルコキシ基は、１〜６個、そして好ましくは１〜３個の炭素原子を含み、そしてメトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、イソプロポキシ等により具体的に説明される。

上記式ＸＶ中のヘテロアリール基は１〜２個のヘテロ原子、すなわち窒素、酸素または硫黄を含み、そしてそしてフリル、ピロリニル、ピリジル、ピリミジニル、チエニル、キノリルおよび対応するアルキル置換化合物により例示される。

本発明の目的に関して、式ＸＶの化合物に均等であるのは、それらの生物学的および製薬学的に許容され得る酸付加塩である。そのような酸付加塩は、硫酸、リン酸、塩酸、臭化水素酸、スルファミン酸、クエン酸、乳酸、マレイン酸、コハク酸、酒石酸、桂皮酸、酢酸、安息香酸、グルコン酸、アスコルビン酸、メタンスルホン酸および関連する酸のような種々の有機および無機酸から誘導することができる。

式ＸＶにより包含される化合物の中で特定の置換基が好適である。例えばＷが炭素−炭素結合であり、Ｒ_４４がメチル基であり、そしてＲ_４５が水素である化合物が好ましい。

代表的な式ＸＶの化合物は：メチルグリオキサールビス−（２−ヒドラジノ−安息香酸）ヒドラゾン；メチルグリオキサールビス−（ジメチル−２−ヒドラジノベンゾエート）ヒドラゾン；メチルグリオキサールビス−（フェニルヒドラジン）ヒドラゾン；メチルグリオキサールビス−（ジメチル−２−ヒドラジノベンゾエート）ヒドラゾン；メチルグリオキサールビス−（４−ヒドラジノ安息香酸）ヒドラゾン；メチルグリオキサールビス−（ジメチル−４−ヒドラジノベンゾエート）ヒドラゾン；メチルグリオキサールビス−（２−ピリジル）ヒドラゾン；メチルグリオキサールビス−（ジエチレングリコールメチルエーテル−２−ヒドラジノベンゾエート）ヒドラゾン；メチルグリオキサールビス−［１−（２，３−ジヒドロキシプロパン）−２−ヒドラジンベンゾエートヒドラゾン；メチルグリオキサールビス−［１−（２−ヒドロキシエタン）−２−ヒドラジノベンゾエート］ヒドラゾン；メチルグリオキサールビス−［（１−ヒドロキシメチル−１−アセトキシ））−２−ヒドラジノ−２−ベンゾエート］ヒドラゾン；メチルグリオキサールビス−［（４−ニトロフェニル）−２−ヒドラジノベンゾエート］ヒドラゾン；メチルグリオキサールビス−［（４−メチルピリジル）−２−ヒドラジノベンゾエート］ヒドラゾン；メチルグリオキサールビス−（トリエチレングリコール２−ヒドラジノベンゾエート）ヒドラゾンおよびメチルグリオキサールビス−（２−ヒドロキシエチルホスフェート−２−ヒドラジンベンゾエート）ヒドラゾンである。

式ＸＶＩは、Ｒ_４７およびＲ_４８がそれぞれ水素であるか、または一緒に２〜３個の炭素原子のアルキレン基であり、あるいはＲ_４７が水素である時、Ｒ_４８は式ａｌｋ−−Ｎ−Ｒ_５０Ｒ_５１の基であることができ、ここでａｌｋは１〜８個の炭素原子の直鎖もしくは分枝鎖のアルキレン基であり、そしてＲ_５０およびＲ_５１は独立してそれぞれ１〜６個の炭素原子の低級アルキル基であるか、あるいは該窒素原子と一緒にモルホリノ、ピペリジニルまたはメチルピペラジニル基を形成し；Ｒ_４９が水素であるか、またはＲ_４７およびＲ_４８が一緒に２〜３個の炭素原子のアルキレン基である時、ヒドロキシエチル基であり；Ｗが炭素−炭素結合または１〜３個の炭素原子のアルキレン基であり、そしてＲ_５２が低級アルキル、アリールまたはヘテロアリール基であり、そしてＲ_５３が水素、低級アルキル、アリールまたはヘテロアリール基であり；ただしＷが炭素−炭素結合である時、Ｒ_５２およびＲ_５３は一緒に１，４−ブチレン基であることもでき；あるいはＷが場合により１もしくは２個の低級アルキルまたはアミノ基で置換された１，２−、１，３−または１，４−フェニレン基、２，３−ナフチレン基；２，５−チオフェニレン基；または２，６−ピリジレン基であり；そしてＲ_５２およびＲ_５３が両方とも水素であるか、または両方が低級アルキル基であり；あるいはＷがエチレン基であり、そしてＲ_５２およびＲ_５３が一緒にエチレン基であるか；あるいはＷがエテニレン基であり、そしてＲ_５２およびＲ_５３が一緒にエテニレン基であるか；あるいはＷがメチレン基であり、そしてＲ_５２およびＲ_５３が一緒に式＝Ｃ（−ＣＨ_３）−Ｎ−（Ｈ_３Ｃ−）Ｃ＝またはＣ−Ｗ−Ｃ−の基であり、そしてＲ_５２およびＲ_５３が一緒にビシクロ−（３，３，１）−ノナンまたはビシクロ−３，３，１−オクタン基を形成し、そしてＲ_４７およびＲ_４８が一緒に２〜３個の炭素原子のアルキレン基であり、そしてＲ_４９が水素である構造を含んでなり；そしてそれらの生物学的または製薬学的に許容され得る酸付加塩を含む。

式ＸＶＩの化合物の低級アルキル基は、好ましくは１〜６個の炭素原子を含み、そしてメチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシルおよび対応するそれらの分枝鎖異性体を含む。これらの基は１以上のハロ、ヒドロキシ、アミノまたは低級アルキルアミノ基により場合によっては置換される。

式ＸＶＩの化合物のアルキレン基も同様に、直鎖もしくは分枝鎖であることができ、そしてエチレン、プロピレン、ブチレン、ペンチレン、ヘキシレンおよびそれらの対応する分枝鎖異性体により例示される。

上記式ＸＶＩにより包含されるアリール基は、フェニルおよび低級アルキル置換フェニル、例えばトリルおよびキシリル、および１〜２個のハロ、ヒドロキシまたは低級アルコキシ基で場合により置換されたフェニルのような、６〜１０個の炭素原子を含むものである。

上記式ＸＶＩ中のハロ原子は、フルオロ、クロロ、ブロモまたはヨードであることができる。低級アルコキシ基は、１〜６個、そして好ましくは１〜３個の炭素原子を含み、そしてメトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、イソプロポキシ等により具体的に説明される。

上記式ＸＶＩ中のヘテロアリール基は１〜２個のヘテロ原子、すなわち窒素、酸素または硫黄を含み、そしてそしてフリル、ピロリニル、ピリジル、ピリミジニル、チエニル、キノリルおよび対応するアルキル置換化合物により例示される。

本発明の目的に関して、式ＸＶＩの化合物に均等であるのは、それらの生物学的および製薬学的に許容され得る酸付加塩である。そのような酸付加塩は、硫酸、リン酸、塩酸、臭化水素酸、スルファミン酸、クエン酸、乳酸、マレイン酸、コハク酸、酒石酸、桂皮酸、酢酸、安息香酸、グルコン酸、アスコルビン酸、メタンスルホン酸および関連する酸のような種々の有機および無機酸から誘導することができる。

式ＸＶＩにより包含される化合物の中で特定の置換基が好適である。例えばＲ_４８およびＲ_４９が一緒に２〜３個の炭素原子のアルキレン基である化合物が好適である、Ｒ_５２およびＲ_５３が一緒にブチレン、エチレンまたはエテニレン基である化合物、およびＲ_５２およびＲ_５３が両方ともメチルまたはフリル基である化合物も高度に好ましい。

代表的な式ＸＶＩの化合物は：メチルグリオキサールビス（グアニルヒドラゾン）；メチルグリオキサールビス（２−ヒドラジノ−２−イミダゾリン−ヒドラゾン）；テレフタルジカルボキシアルデヒドビス（２−ヒドラジノ−２−イミダゾリン−ヒドラゾン）；テレフタルジカルボキシアルデヒドビス（グアニルヒドラゾン）；フェニルグリオキサールビス（２−ヒドラジノ−２−イミダゾリン−ヒドラゾン）；フリルグリオキサールビス（２−ヒドラジノ−２−イミダゾリン−ヒドラゾン）；メチルグリオキサールビス（１−（２−ヒドロキシエチル）−２−ヒドラジノ−２−イミダゾリンヒドラゾン）；メチルグリオキサールビス（１−（２−ヒドロキシエチル）−２−ヒドラジノ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジンヒドラゾン）；フェニルグリオキサールビス（グアニルヒドラゾン）；フェニルグリオキサールビス（１−（２−ヒドロキシエチル）−２−ヒドラジノ−２−イミダゾリン−ヒドラゾン）；フリルグリオキサールビス（１−（２−ヒドロキシエチル）−２−ヒドラジノ−２−イミダゾリンヒドラゾン）；フェニルグリオキサールビス（１−（２−ヒドロキシエチル）−２−ヒドラジノ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジンヒドラゾン）；フリルグリオキサールビス（１−（２−ヒドロキシエチル）−２−ヒドラジノ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−ヒドラゾン）；２，３−ブタンジオンビス（２−ヒドラジノ−２−イミダゾリン−ヒドラゾン）；１，４−シクロヘキサンジオンビス（２−ヒドラジノ−２−イミダゾリン−ヒドラゾン）；ｏ−フタル酸ジカルボキシアルデヒドビス（２−ヒドカルボキシミド酸ヒドラゾン）；フリルグリオキサールビス（グアニルヒドラゾン）ジヒドロクロライドジハイドレート；２，３−ペンタンジオンビス（２−テトラヒドロピリミジン）ヒドラゾンジヒドロブロミド；１，２−シクロヘキサンジオンビス（２−テトラヒドロピリミジン）ヒドラゾンジヒドロブロミド；２，３−ヘキサンジオンビス（２−テトラヒドロピリミジン）ヒドラゾンジヒドロブロミド；１，３−ジアセチルビス（２−テトラヒドロピリミジン）ヒドラゾンジヒドロブロミド；２，３−ブタンジオンビス（２−テトラヒドロピリミジン）ヒドラゾンジヒドロブロミド；２，６−ジアセチルピリジン−ビス−（２−ヒドラジノ−２−イミダゾリンヒドラゾン）ジヒドロブロミド；２，６−ジアセチルピリジンビス（グアニルヒドラゾン）ジヒドロクロライド；２，６−ピリジンジカルボキシアルデヒド−ビス−（２−ヒドラジノ−２−イミダゾリンヒドラゾン）ジヒドロブロミドトリハイドレート；２，６−ピリジンジカルボキシアルデヒド−ビス（グアニルヒドラゾン）ジヒドロクロライド；１，４−ジアセチルベンゼン−ビス−（２−ヒドラジノ−２−イミダゾリンヒドラゾン）ジヒドロブロミドジハイドレート：１，３−ジアセチルベンゼン−ビス−（２−ヒドラジノ−２−イミダゾリン）ヒドラゾンジヒドロブロミド；１，３−ジアセチルベンゼン−ビス−（グアニル）ヒドラゾンジヒドロクロライド；イソフタルアルデヒド−ビス−（２−ヒドラジノ−２−イミダゾリン）ヒドラゾンジヒドロブロミド；イソフタルアルデヒド−ビス−（グアニル）ヒドラゾンジヒドロクロライド；２，６−ジアセチルアニリンビス−（グアニル）ヒドラゾンジヒドロクロライド；２，６−ジアセチルアニリンビス−（２−ヒドラジノ−２−イミダゾリン）ヒドラゾンジヒドロブロミド；２，５−ジアセチルチオフェンビス（グアニル）ヒドラゾンジヒドロクロライド；２，５−ジアセチルチオフェンビス−（２−ヒドラジノ−２−イミダゾリン）ヒドラゾンジヒドロブロミド；１，４−シクロヘキサンジオンビス（２−テトラヒドロピリミジン）ヒドラゾンジヒドロブロミド；３，４−ヘキサンジオンビス（２−テトラヒドロピリミジン）ヒドラゾンジヒドロブロミド；メチルグリオキサール−ビス−（４−アミノ−３−ヒドラジノ−１，２，４−トリアゾール）ヒドラゾンジヒドロクロライド；メチルグリオキサール−ビス−（４−アミノ−３−ヒドラジノ−５−メチル−１，２，４−トリアゾール）ヒドラゾンジヒドロクロライド；
２，３−ペンタンジオン−ビス−（２−ヒドラジノ−３−イミダゾリン）ヒドラゾンジヒドロブロミド；２，３−ヘキサンジオン−ビス−（２−ヒドラジノ−２−イミダゾリン）ヒドラゾンジヒドロブロミド；３−エチル−２，４−ペンタンジオン−ビス−（２−ヒドラジノ−２−イミダゾリン）ヒドラゾンジヒドロブロミド；メチルグリオキサール−ビス−（４−アミノ−３−ヒドラジノ−５−エチル−１，２，４−トリアゾール）ヒドラゾンジヒドロクロライド、メチルグリオキサール−ビス−（４−アミノ−３−ヒドラジノ−５−イソプロピル−１，２，４−トリアゾール）ヒドラゾンジヒドロクロライド；メチルグリオキサール−ビス−（４−アミノ−３−ヒドラジノ−５−シクロプロピル−１，２，４−トリアゾール）ヒドラゾンジヒドロクロライメチルグリオキサール−ビス−（４−アミノ−３−ヒドラジノ−５−シクロブチル−１，２，４−トリアゾール）ヒドラゾンジヒドロクロライド；１，３−シクロヘキサンジオン−ビス−（２−ヒドラジノ−２−イミダゾリン）ヒドラゾンジヒドロブロミド；６−ジメチルピリジンビス（グアニル）ヒドラゾンジヒドロクロライド；３，５−ジアセチル−１，４−ジヒドロ−２，６−ジメチルピリジンビス−（２−ヒドラジノ−２−イミダゾリンヒドラゾンジヒドロブロミド；ビシクロ−（３，３，１）ノナン−３，７−ジオンビス−（２−ヒドラジノ−２−イミダゾリン）ヒドラゾンジヒドロブロミドおよびシス−ビシクロ−（３，３，１）オクタン−３，７−ジオンビス−（２−ヒドラジノ−２−イミダゾリン）ヒドラゾンジヒドロブロミドである。

式ＸＶＩＩは、Ｒ_５４およびＲ_５５が水素、ヒドロキシ（低級）アルキル基、低級アシルオキシ（低級）アルキル基、低級アルキル基からなる群から独立して選択されるか、またはＲ_５４およびＲ_５５がそれらの環の炭素と一緒に芳香族縮合環であることができ；Ｚａが水素またはアミノ基であり；
Ｙａが水素、または式−ＣＨ_２Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ_５６の基（式中、Ｒは低級アルキル、アルコキシ、ヒドロキシ、アミノまたはアリール基であり）；または式−−ＣＨＲ’の基（式中、Ｒ’は水素または低級アルキル、低級アルキニルまたはアリール基であり）であり；そしてＡはハライド、トシラート、メタンスルホネートまたはメシチレンスルホネートイオンである構造を含んでなる。

式ＸＶＩＩの化合物の低級アルキル基は１〜６個の炭素原子を含み、そしてメチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシルおよび対応するそれらの分枝鎖異性体を含む。低級アルキニル基は２〜６個の炭素原子を含む。同様に低級アルコキシ基も１〜６個の炭素原子を含み、そしてメトキシ、エトキシ、プロポキシ、ブトキシ、ペントキシおよびヘキソキシおよび対応するそれらの分枝鎖異性体を含む。これらの基は１以上のハロ、ヒドロキシ、アミノまたは低級アルキルアミノ基により場合によっては置換される。

上記式ＸＶＩＩにより包含される低級アシルオキシ（低級）アルキル基は、アシルオキシ部分が２〜６個の炭素原子を含み、そして低級アルキル部分が１〜６個の炭素原子を含むものを含む。

典型的なアシルオキシ部分はアセトキシまたはエタノイルオキシ、プロパノイルオキシ、ブタノイルオキシ、ペンタノイルオキシ、ヘキサノイルオキシおよび対応するそれらの分枝鎖異性体のようなものである。典型的な低級アルキル部分は、本明細書の上記のような部分である。上記式により包含されるアリール基は、フェニルおよび低級アルキル置換−フェニル、例えばトリルおよびキシリルのような６〜１０個の炭素原子を含むものであり、そしてに場合より１〜２個のハロ、ヒドロキシまたは低級アルコキシまたはジ（低級）アルキルアミノ基で置換される。好適なアリール基はフェニル、メトキシフェニルおよび４−ブロモフェニル基である。

上記式ＸＶＩＩのハロ原子は、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素であることができる。

本発明の目的に関して、式ＸＶＩＩの化合物は生物学的および製薬学的に許容され得る塩として形成される。有用な塩の形態はハライド、特にブロミドおよびクロライド、トシラート、メタンスルホネートおよびメシチレンスルホネート塩である。他の関連する塩は同様に非毒性の、そして生物学的および製薬学的に許容され得るアニオンを使用して形成することができる。

式ＸＶＩＩにより包含される化合物の中で、特定の置換基が好適である。例えばＲ_５４およびＲ_５５が低級アルキル基である化合物が好適である。また高度に好適であるのは、Ｙａが２−フェニル−２−オキソエチルまたは２−［４’−ブロモフェニル］−２−オキソエチル基である化合物である。

代表的な式ＸＶＩＩの化合物は：３−アミノチアゾリウムメシチレンスルホネート；３−アミノ−４，５−ジメチルアミノチアゾリウムメシチレンスルホネート；２，３−ジアミノチアゾリウムメシチレンスルホネート；３−（２−メトキシ−２−オキソエチル）−チアゾリウムブロミド；３−（２−メトキシ−２−オキソエチル）−４，５−ジメチルチアゾリウムブロミド；３−（２−メトキシ−２−オキソエチル）−４−メチルチアゾリウムブロミド；３−（２−フェニル−２−オキソエチル）−４−メチルチアゾリウムブロミド；３−（２−フェニル−２−オキソエチル）−４，５−ジメチルチアゾリウムブロミド；３−アミノ−４−メチルチアゾリウムメシチレンスルホネート；３−（２−メトキシ−２−オキソエチル）−５−メチルチアゾリウムブロミド、３−（３−（２−フェニル−２−オキソエチル）−５−メチルチアゾリウムブロミド；３−［２−（４’−ブロモフェニル）−２−オキソエチル］チアゾリウムブロミド；３−［２−（４’−ブロモフェニル）−２−オキソエチル］−４−メチルチアゾリウムブロミド；３−［２−（４’−ブロモフェニル）−２−オキソエチル］−５−メチルチアゾリウムブロミド；３−［２−（４’−ブロモフェニル）−２−オキソエチル］−４，５−ジメチルチアゾリウムブロミド；３−（２−メトキシ−２−オキソエチル）−４−メチル−５−（２−ヒドロキシエチル）チアゾリウムブロミド；３−（２−フェニル−２−オキソエチル）−４−メチル−５−（２−ヒドロキシエチル）チアゾリウムブロミド；３−［２−（４’−ブロモフェニル）−２−オキソエチル］−４−メチル−５−（２−ヒドロキシエチル）チアゾリウムブロミド；３，４−ジメチル−５−（２−ヒドロキシエチル）チアゾリウムヨージド；３−エチル−５−（２−ヒドロキシエチル）−４−メチルチアゾリウムブロミド；３−ベンジル−５−（２−ヒドロキシエチル）−４−メチルチアゾリウムクロライド；３−（２−メトキシ−２−オキソエチル）ベンゾチアゾリウムブロミド；３−（２−フェニル−２−オキソエチル）ベンゾチアゾリウムブロミド；３−［２−（４’−ブロモフェニル）−２−オキソエチル］ベンゾチアゾリウムブロミド；３−（カルボキシメチル）ベンゾチアゾリウムブロミド；２，３−（ジアミノ）ベンゾチアゾリウムメシチレンスルホネート；３−（２−アミノ−２−オキソエチル）チアゾリウムブロミド；３−（２−アミノ−２−オキソエチル）−４−メチルチアゾリウムブロミド；３−（２−アミノ−２−オキソエチル）−５−メチルチアゾリウムブロミド；３−（２−アミノ−２−オキソエチル）４，５−ジメチルチアゾリウムブロミド；３−（２−アミノ−２−オキソエチル）ベンゾアゾリウムブロミド；３−（２−アミノ−２−オキソエチル）４−メチル−５−（２−ヒドロキシエチル）チアゾリウムブロミド；３−アミノ−５−（２−ヒドロキシエチル）−４−メチルチアゾリウムメシチレンスルホネート；３−（２−メチル−２−オキソエチル）チアゾアゾリウムクロライド；３−アミノ−４−メチル−５−（２−アセトキシエチル）チアゾアゾリウムメシチレンスルホネート；３−（２−フェニル−２−オキソエチル）チアゾリウムブロミド；３−（２−メトキシ−２−オキソエチル）−４−メチル−５−（２−アセトキシエチル）チアゾリウムブロミド；３−（２−アミノ−２−オキソエチル）−４−メチル−５−（２−アセトキシエチル）チアゾリウムブロミド、２−アミノ−３−（２−メトキシ−２−オキソエチル）チアゾリウムブロミド；２−アミノ−３−（２−メトキシ−２−オキソエチル）ベンゾチアゾリウムブロミド；２−アミノ−３−（２−アミノ−２−オキソエチル）チアゾリウムブロミド；２−アミノ−３−（２−アミノ−２−オキソエチル）ベンゾチアゾリウムブロミド；３−［２−（４’−メトキシフェニル）−２−オキソエチル］チアゾリウムブロミド；３−［２−（２’，４’−ジメトキシフェニル）−２−オキソエチル］−チアゾリニウムブロミド；３−［２−（４’−フルオロフェニル）−２−オキソエチル］チアゾリニウムブロミド；３−［２−（２’，４’−ジフルオロフェニル）−２−オキソエチル］−チアゾリニウムブロミド；３−［２−（４’−ジエチルアミノフェニル）−２−オキソエチル］チアゾリニウムブロミド、３−プロパルギル−チアゾリニウムブロミド；３−プロパルギル−４−メチルチアゾリニウムブロミド；３−プロパルギル−５−メチルチアゾリニウムブロミド；３−プロパルギル−４，５−ジメチルチアゾリニウムブロミド；および３−プロパルギル−４−メチル−５−（２−ヒドロキシエチル）−チアゾリニウムブロミドである。

式ＸＶＩＩＩは、Ｒ_５７がＯＨ、ＮＨＣＯＮＣＲ_６１Ｒ_６２またはＮ＝Ｃ（ＮＲ_６１Ｒ_６２）_２であり；
Ｒ_６１およびＲ_６２はそれぞれ、水素；直鎖もしくは分枝鎖のＣ_１−１０アルキル；アリールＣ_１−４アルキル；およびモノ−もしくはジ−置換アリールＣ_１−４アルキル（ここで置換基はフルオロ、クロロ、ブロモ、ヨード、または直鎖もしくは分枝鎖のＣ_１−１０アルキルである）から独立して選択され；
さらにここでＲ_５８およびＲ_５９がそれぞれ、水素、アミノおよびモノ−もしくはジ−置換アミノからなる群から独立して選択され（ここで置換基はＣ_１−１０アルキル、直鎖もしくは分枝鎖のＣ_３−８シクロアルキルであり；ただしＲ_５８およびＲ_５９が両方ともアミノまたは置換アミノではなく）；そして
Ｒ_６０が水素、トリフルオロメチル；フルオロ；クロロ；ブロモ；またはヨードである構造、またはそれらの製薬学的に許容され得る塩を含んでなる。

本発明の別の観点では、３ＤＧ機能のインヒビターは、３ＤＧと不可逆的に反応してイミダゾロンと呼ばれる５員環を形成するアミノ酸のアルギニンのような化合物であることができる。いったん反応が起こると、３ＤＧは活性な架橋剤が除去されているので架橋化を引き起こすことができない。このようにアルギニンと３ＤＧとの結合は、タンパク質の架橋化を防止する（実施例１８および図１２を参照にされたい）。本明細書に記載するように、コラーゲンを３ＤＧで処理すると、コラーゲンがまるでより高分子量を有するかのような電気泳動的移動を引き起こし、これは架橋化を指示している。しかしコラーゲンのサンプルをアルギニンの存在下で３ＤＧで処理すると、よりゆっくりと移動するタンパク質の出現が防止された（実施例１８および図１２を参照にされたい）。アルギニンは他のアルファ−ジカルボニル糖も阻害すると解釈すべきである。本発明はアルギニンを含むだけと解釈すべきではなく、それらの誘導体および修飾体も含むと解釈すべきである。本発明の１つの観点では、アルギニンは誘導化または修飾化されて皮膚または他の組織を透過もしくは通過するより高い効率を確実とし、またはより効力のある結果を確実とする。

アミノ酸アルギニンは構造：

を有する。

本発明の別の観点では、３ＤＧまたは他のアルファ−ジカルボニル糖機能のインヒビターは、Ｌ−システインまたはα−アミノ−β，β−メルカプト−β，β−ジメチル−エタンのような誘導体、またはその誘導体もしく修飾体であることができる。α−アミノ−β，β−メルカプト−β，β−ジメチル−エタンの員には、限定するわけではないが、Ｄ−ペニシラミン、Ｌ−ペニシラミンおよびＤ，Ｌ−ペニシラミンのような化合物（Ｊａｃｏｂｓｏｎｅｔａｌ．、国際公開第０１／７８７１８号パンフレットを参照にされたい）を含む。阻害される機能には、限定するわけではないが、タンパク質および他の分子の架橋化を阻害すること、ならびにタンパク質、脂質およびＤＮＡのような分子に傷害を引き起こす機能のような本明細書に記載する種々の機能を含む。例えば脂質に対する傷害には脂質の過酸化を含むことができ、そしてＤＮＡに対する傷害には突然変異誘発のような傷害を含むことができる。

本発明の１つの観点では、α−アミノ−β，β−メルカプト−β，β−ジメチル−エタンは誘導化または修飾されて皮膚または他の組織を透過もしくは通過するより高い効率を確実とし、または３ＤＧおよび他のアルファ−ジカルボニル糖の所望する機能の阻害により大きな効率を確実とする。

例えばα−アミノ−β，β−メルカプト−β，β−ジメチル−エタン誘導体、Ｄ−ペニシラミンは、構造：

を有する。

本明細書に記載する化合物は、３ＤＧ機能を阻害するか、または３ＤＧに関連する皮膚疾患または障害あるいは他の組織および細胞の疾患および障害を処置することができる化合物だけではないと解釈すべきである。当業者は、３ＤＧ機能の阻害に関連して本明細書に記載する本発明の様々な態様は、３ＤＧ機能を阻害するために有用な他の方法および化合物も包含すると認識するだろう。また当業者は本発明を実施するために他の化合物および技術を使用することができると認識するだろう。本発明は、３ＤＧ機能を阻害し、そして３ＤＧが関連する皮膚疾患または障害を処置する能力のために有用な化合物および方法を含むだけと解釈すべきではなく、グリオキサール、メチルグリオキサールおよびグルコソンを含むアルファ−ジカルボニル糖ファミリーの化合物の他の員の機能を阻害する能力も含むと解釈すべきである。本発明は３ＤＧが関連する歯肉疾患または障害のように、皮膚以外の３ＤＧが関連する疾患および障害を処置することも含むと解釈すべきである。

３ＤＧおよび他のアルファ−ジカルボニル糖の合成、生産、蓄積および機能を阻害する化合物の同定法
本発明は、３ＤＧインヒビターとして有用なさらなる化合物を同定するための様々な方法を含む。そのような方法は、試験化合物が３Ｄの合成、生産、形成、蓄積、機能および解毒に及ぼす効果を測定するために設計されるスクリーニングアッセイにおいて、試験化合物の使用を含む。３Ｄの合成、生産、形成、蓄積、機能および解毒は、本明細書に記載する様々なアッセイで測定することができ、すなわち試験化合物が３Ｄの合成、生産、形成、蓄積、機能および解毒に及ぼす効果もこれらのアッセイで測定することができる。同様に試験化合物が他のアルファ−ジカルボニル糖の合成、生産、形成、蓄積、機能および解毒に影響する能力も測定することができる。

１つの観点では、３ＤＧ合成の有力なインヒビターのスクリーニングに使用する方法には、フルクトサミンキナーゼ／アマドラーゼ活性またはアマドラーゼｍＲＮＡレベルを測定する１以上のアッセイの使用を含む（実施例１７、２１および２２を参照にされたい）。別の観点では、そのようなアッセイは^３１ＰＮＭＲ分析を使用して、ＦＬ３Ｐの３ＤＧおよびＦＬへの転換を測定する（実施例３を参照にされたい）。さらに別の観点では、３ＤＧ合成のインヒビターをスクリーニングするために使用する方法は、サンプル中の３ＤＧのレベルを測定するか、またはサンプル中のその分解産物である３ＤＦを測定する方法を含む。例えば尿、唾液、血漿、血液、組織、汗または細胞のようなサンプル中に得られる３ＤＧは、本明細書に記載するようにガスクロマトグラフィー−質量分析を使用して測定することができ、そして３ＤＦはＨＰＬＣを使用して測定することができる（実施例５、１４および１５を参照にされたい）。ＦＬはＨＰＬＣを使用しても測定することができる。上記の種々の成分のレベルを決定するためのアッセイは、動物、好ましくはヒトから得た細胞、組織、血液、血漿、汗、唾液および尿サンプルについて行うことができる。さらに別の態様では、本発明は限定するわけではないが低分子、薬剤または他の作用物質を含む化合物の、架橋化タンパク質の形成を引き起こす３ＤＧ機能または３ＤＧと他の分子の相互作用を破壊する能力について同定することを含む。１つのアッセイは、３ＤＧが架橋化タンパク質を誘導する能力に基づく。本発明はコラーゲン、エラスチンおよびプロテオグリカンのような分子の架橋化を含むと解釈すべきである。１つの観点では、本発明はグリオキサール、メチルグリオキサールおよびグルコソンを含むアルファ−ジカルボニル糖ファミリーの化合物の他の員の機能を破壊する能力に基づく化合物の同定も含む。

１つの態様では、本発明は３ＤＧ合成の酵素的経路の成分を阻害する化合物の同定を含む。そのような化合物には構造式ＸＩＸの化合物を含む。１つの観点では、本発明は哺乳動物の皮膚における３ＤＧ合成を阻害する化合物の同定法を含む。そのような方法は、試験化合物を該哺乳動物に投与し、そして該哺乳動物の皮膚における３ＤＧ合成のレベルを、該試験化合物を投与しないこと以外は同一である哺乳動物の皮膚における３ＤＧ合成のレベルと比較することを含んでなる。該試験化合物を投与した動物における低いレベルの３ＤＧ合成は、該試験化合物が３ＤＧ合成を阻害することの指標である。好ましくは試験化合物は試験化合物を受けなかった対照群と比べて、３ＤＧ合成を少なくとも２０％まで阻害する。より好ましくは試験化合物は３ＤＧ合成を少なくとも５０％まで阻害する。

別の態様では本発明は、構造式Ｉ−ＸＶＩＩＩを含んでなる化合物のような、３ＤＧに結合するか、または後期糖化反応生成物により修飾されたタンパク質および架橋化タンパク質の形成を引き起こす３ＤＧの能力を直接遮断する化合物の同定を含む。

さらに別の態様では、本発明は３ＤＧ合成の非酵素的経路を阻害する化合物の同定を含む。

本発明の別の態様では、本発明はグリオキサール、メチルグリオキサールおよびグルコソンを含むアルファ−ジカルボニル糖ファミリーの化合物の員の蓄積および機能を阻害する化合物の同定を含む。本発明の別の観点では、本発明はアルファ−ジカルボニル糖合成の酵素的経路を阻害する化合物の同定を含む。

一般に、３ＤＧ（またはアルファ−ジカルボニル糖）の合成、生産、蓄積または機能に影響する化合物の同定法は、以下の一般工程を含む：
試験化合物を測定を行う細胞、組織、サンプルまたは個体に投与する。対照は試験化合物が加えられなかった細胞、組織、サンプルまたは個体である。より高い、またはより低いレベルの指標またはパラメーターが試験されれば、すなわち試験化合物により処理されなかったサンプル中の指標またはパラメーターのレベルに比べて、試験化合物の存在下で３ＤＧレベル、合成、機能、分解等は、試験化合物が測定した指標またはパラメーターに効果を有することの指標であり、そしてそのままで所望した活性の阻害の候補である。試験化合物は使用すべき化合物の有効量、およびそれが投与されるべき効果的間隔を決定するために、変動する用量および頻度で加えることができる。別の観点では、試験化合物の誘導体または修飾体を使用することができる。

本発明の別の観点では、３ＤＧ機能インヒビターはタンパク質の架橋化を阻害する。別の観点では、インヒビターは後期糖化反応生成物により修飾されたタンパク質の形成を阻害する。さらに別の観点では、３ＤＧ機能のインヒビターは構造式Ｉ−ＸＩＸの１つの構造を含んでなるか、またはアルギニンまたはその誘導体もしくは修飾体である。

１つの態様では、インヒビターは製薬学的組成物の約０．０００１％〜約１５重量％を構成する。１つの観点では、インヒビターは放出制御製剤として投与される。別の観点では製薬学的組成物は、ローション、クリーム、ゲル、塗布剤、軟膏、ペースト歯磨き粉、口中洗浄剤、経口リンス、コーティング、溶液、粉末および懸濁液を含んでなる。さらに別の観点では組成物は、保湿剤、湿潤剤、粘滑剤、油、水、乳化剤、増粘剤、希釈剤、表面活性剤、香料、保存剤、抗酸化物質、水屈性剤、錯化剤、ビタミン、ミネラル、浸透強化剤、化粧用補助剤、漂白剤、脱色素剤、発泡剤、コンディショナー、粘度調整剤、緩衝剤およびサンスクリーンを含んでなる。

３ＤＧおよび他のアルファ−ジカルボニル糖の合成、形成、蓄積および機能の阻害を試験するアッセイ
本開示は、３ＤＧの合成、形成、蓄積および機能の阻害を同定し、ならびに３ＤＧの合成、形成、蓄積および機能に及ぼす種々のインヒビターの効果を測定するための一連のアッセイを提供する。またこのアッセイは３ＤＧの分解、解毒およびクリアランスを測定するために使用されるアッセイも含む。本発明のアッセイには限定するわけではないが、ＨＰＬＣアッセイ、電気泳動アッセイ、ガスクロマトグラフィー−質量分析アッセイ、アミノ酸分析、酵素活性アッセイ、最終糖化アッセイ、タンパク質架橋化アッセイ、ＮＭＲ分析、イオン交換クロマトグラフィー、種々の化学分析、種々の標識技術、外科的および肉眼での切開技術、ＲＮＡの単離、ＲＴ−ＰＣＲ、組織学的技術、種々の化学的、生化学的および分子合成技術、催奇性、突然変異誘発性および発癌性アッセイ、尿のアッセイ、排出物アッセイ、および様々な動物、組織、血液、血漿、細胞、生化学および分子技術を含む。合成技術を使用して：ＦＬ３Ｐの化学的または酵素的生産（実施例１、２および３）；ポリオールリシン（実施例４）；３−Ｏ−メチルソルビトールリシン（実施例８）；フルクトシルスペルミン（実施例９）；および糖化されたタンパク質食物（実施例１３）のような化合物を生成することができる。本明細書には記載しないが、当業者には知られている他の技法を使用してもよい。

本発明の１つの態様では、新規な作用物質または化合物を試験する時、または本明細書に記載する種々のパラメーターを測定する時、標準を使用することができる。例えばフルクトース−リシンは３ＤＧおよび３ＤＦの既知のモジュレーターであり、そして試験作用物質または化合物の効果を比較することができる標準または対照として群または個体に投与することができる。さらにパラメーターを測定する時、標準の測定は個体が試験化合物で処置される前に個体から得た組織または流体中の３ＤＧまたは３ＤＦ濃度のようなパラメーターを測定すること含むことができ、そして同じパラメーターを試験化合物での処置後に測定することができる。本発明の別の観点では、標準は外部から加えた標準であることができ、これはサンプルに加えられ、そして特にサンプルが幾つかの工程または手順を通して処理され、各工程で目的のマーカーの回収量を定めなければならない場合、内部対照として有用な作用物質または化合物である。そのような外部から加えられる内部標準は標識された形態、すなわち放射性同位体で加えられることが多い。

３ＤＧに関連する皮膚の疾患または障害を診断する方法
本発明は皮膚における３ＤＧの存在および皮膚における３ＤＧレベルを測定する方法、および皮膚における３ＤＧ合成の原因である酵素を測定する方法を開示する（実施例１９および２０を参照にされたい）。また本発明は、皺、老化または他の様々な皮膚疾患もしくは障害と関連し得る皮膚における３ＤＧレベルの変化を診断するために使用することができる方法も包含する。本発明は皮膚疾患および障害に関連する３ＤＧを診断する方法のみを含むと解釈すべきではなく、他のアルファ−ジカルボニル糖が関連する皮膚疾患および障害を診断する方法も含むと解釈すべきである。本発明は限定するわけではないが歯肉疾患および障害を含む他の細胞および組織の３ＤＧが関連する疾患または障害を診断する方法も含むと解釈すべきである。

本発明の１つの態様では、皮膚の皺、皮膚の老化または他の皮膚疾患もしくは障害がある患者を診断試験に供して、例えば皮膚中の３ＤＧのレベル、３ＤＧの機能的活性、３ＤＦのレベル、３ＤＦ／３ＤＧ比、存在するアマドラーゼタンパク質またはｍＲＮＡの量、またはアマドラーゼ活性のレベルを決定することができる。そのような試験は本明細書に記載する種々の方法およびアッセイに基づくか、または当業者に既知である。影響を受けていない皮膚の領域または正常な患者の皮膚に比べて高いレベルの３ＤＧもしくはアマドラーゼもしくはそれらの活性、または低いレベルの３ＤＦは、皮膚の皺、皮膚の老化または他の皮膚疾患もしくは障害が３ＤＧに関連し、そして本発明の３ＤＧインヒビターがこの問題に適切な処置となることの指標である。本発明は３ＤＧ以外のアルファ−ジカルボニル糖ファミリーの分子が関連する皮膚疾患および障害を含むとも解釈されるべきである。

本発明の１つの観点では、３ＤＧ関連皮膚疾患または障害のさらなるマーカーを測定することができ、それらは限定するわけではないが３ＤＦおよびＦＬレベル、架橋化タンパク質のレベル、ならびにグリオキサール、メチルグリオキサールおよびダルコソンのような他のアルファ−ジカルボニル糖のレベルを測定することを含む。

３ＤＧの前駆体を測定することを含め、３ＤＧレベルおよび機能を測定する多数のアッセイが本開示を通して記載されている（実施例１〜２２を参照にされたい）。しかし本発明は本明細書に記載するアッセイを含むだけと解釈されるべきではなく、３ＤＧレベルまたは機能活性を測定する間接的なアッセイまたは技法を含め、３ＤＧレベルまたは機能を測定する他のアッセイを含むと解釈すべきである。例えば本発明の１つの観点では、３ＤＧレベルおよび機能の間接的測定は、３ＤＦ、タンパク質の架橋化、プロテオグリカン架橋化のレベルのような事柄を測定すること、または３ＤＧレベルと相関的であることが示された任意の他のアッセイにより決定することができる。

本発明の１つの観点では、３ＤＧレベル等を測定するために使用するサンプルは皮膚のサンプルである。皮膚のサンプルは限定するわけではないが、穿刺生検、掻き取りおよび水疱形成技術を含む方法により得ることができる。

本発明の別の観点では、３ＤＧ関連皮膚疾患または障害に相関的な皮膚における３ＤＧレベルまたは機能の間接的アッセイを使用することができる。このアッセイには限定するわけではないが、他の組織、汗、血液、血漿、唾液または尿中の３ＤＧレベルまたは機能を測定するためのアッセイを含む。

本発明は３ＤＧまたは他のアルファ−ジカルボニル糖が関連する皮膚疾患または障害を診断する方法を開示し、被検者から生物学的サンプルを得、そして３ＤＧまたは他のアルファ−ジカルボニル糖が関連する皮膚の皺、老化、疾患または障害のパラメーターのレベルを、対照個体に由来する他は同一の生物学的サンプル中の同じパラメーターのレベルと比べることを含んでなる。対照は、同じ個体の影響を受けていない領域、または３ＤＧまたは他のアルファ−ジカルボニル糖が関連する皮膚疾患または障害により影響を受けていない個体に由来することができる。被検体中のより高いレベルのパラメーターは、被検体が３ＤＧまたは他のアルファ−ジカルボニル糖に関連する皮膚の皺、老化、疾患または障害を有することの指標である。測定できるパラメーターは本明細書に記載されているか、または当業者に知られており、そして限定するわけではないが、３ＤＧ、タンパク質の架橋化、プロテオグリカンの架橋化、後期糖化反応生成物で修飾化されたタンパク質、３ＤＦ、フルクトサミンキナーゼ／アマドラーゼレベルおよび活性、およびフルクトサミンキナーゼ／アマドラーゼｍＲＮＡ、活性酸素種のレベルにおける変化を含む。

本発明のさらに別の観点において、３ＤＧまたは他のアルファ−ジカルボニル糖は、皮膚の老化、光加齢、皮膚の皺、皮膚ガン、角質増殖症、過形成、表皮肥厚症、乳頭腫症、皮膚病、色素過剰症、鼻瘤、強皮症および酒さを含んでなる群から選択される皮膚の疾患、障害状態、およびこれらの疾患、障害および状態の外観に関連し得る。本発明の別の観点では、３ＤＧは限定するわけではないがタンパク質の架橋化、突然変異誘発性、催奇性、アポトーシス、活性酸素種の形成により引き起こされる酸化的傷害を含む機能に関連する。３ＤＧおよび他のアルファ−ジカルボニル糖は、タンパク質だけでなく脂質およびＤＮＡにも傷害を引き起こす機能と関連すると理解されている。本発明の観点では３ＤＧまたは他のアルファ−ジカルボニル糖は、限定するわけではないが、歯肉疾患および障害、膣および肛門粘膜疾患等を含む皮膚（限定するわけではないが粘膜を含む）の疾患および障害にも関連し得る。

本発明のさらに別の観点では、３ＤＧレベルおよび機能を測定するアッセイは、皮膚の厚さまたは弾性および／または水分を測定するような皮膚の疾患および障害を測定するための他の方法と一緒に使用することができる。多くのこれらのアッセイを本発明に記載する。当業者は本明細書に記載されていない他のアッセイが３ＤＧアッセイと一緒に使用されて、関与する皮膚の問題の種類および３ＤＧが皮膚の問題に関連しているかどうかの完全な診断を形成することができると考えるだろう。

本発明はアルファ−ジカルボニル糖３ＤＧのレベルを単に測定することにより皮膚疾患、状態または障害を診断することを含むと解釈されるべきではなく、アルファ−ジカルボニル糖ファミリーの他の員のレベル、ならびに限定するわけではないが３−デオキシフルクトースを含むそれらの分解産物を測定することも含むと解釈すべきである。

このように３ＤＧと皮膚疾患または障害との間の関係を決定する診断アッセイの使用により、３ＤＧのインヒビターでの処置を開始する前に適切な課題を選択できるようになる。

３ＤＧまたは他のアルファ−ジカルボニル糖が関連する皮膚の皺、皮膚の老化または他の皮膚疾患、障害または状態を抑制または処置する方法
本発明は３ＤＧに関連する皮膚疾患または障害を抑制または処置する方法も開示する。３ＤＧが関連する疾患または障害の幾つかの例には、限定するわけではないが、皮膚ガン、乾癬、老化、皺、角質増殖症、過形成、表皮肥厚症、乳頭腫症、皮膚病、鼻瘤、および酒さを含む。ガンまたは他の疾患または障害は、本明細書に開示してきた任意の群のガンまたは他の疾患または障害、ならびに当業者に知られている任意の他の関連するガンまたは他の疾患または障害に属することができる。

本発明は、現在は知られていない他の３ＤＧ関連疾患または障害もいったん知られれば、本発明の方法を使用して処置できるので、これらの例のみに限定されると解釈するべきではない。当業者は３ＤＧインヒビターが、３ＤＧが皮膚の疾患または障害に関連することが知られているか、または知られるようになる皮膚の幾つかの疾患または障害に予防的に使用できると考える。例えば３ＤＧインヒビターは日光（光加齢／光傷害）、熱、化学物質または寒冷のような苛酷な環境要素に暴露された個体の皺または他の皮膚の問題を防止するために適用することができる。そのような問題は３ＤＧまたはアルファ−ジカルボニル糖により引き起こされるタンパク質または脂質もしくは核酸のような他の分子に対する傷害による。

当業者は本明細書に提供する開示に基づき、３ＤＧが酸化的ストレスを増加し、そしてＡＧＥｓは次いで神経症および循環不全と関連するので、本発明が老化、強皮症および／または糖尿病の皮膚における微小循環および／または神経支配の損失を防ぐための方法を包含すると考えるだろう。

また本発明は、老化、強皮症および／または糖尿病の個体群における微小循環の損失および／または神経支配の損失に関連する、またはそれが媒介する毛髪の損失の防止法も包含する。これは３ＤＧが、神経症の発症の原因に関係することが知られているＡＧＥｓの形成の既知の前駆体だからである。予備的データでは、ＤＹＮ１２で処置し、そして覚醒中の筋肉強度について測定した糖尿病のラットが、そのような処置をしなかった糖尿病のラットよりも強い筋肉強度を有することが示された。これは神経支配を支持する神経伝達（ｎｅｒｖｅｃｏｎｄｕｃｔｉｏｎ）および微小循環の維持が、ＡＧＥｓだけでなく３ＤＧによっても悪い影響を受けるという概念を支持する。同様に神経症の場合のように、３ＤＧが毛包の神経支配を支持する微小循環の遮断を引き起こす場合、毛包は衰退し、そして死ぬ。したがって本発明は毛髪の損失を防止する方法を含み、ここでそのような毛髪の損失は毛包／毛幹に近い皮膚中の３ＤＧの存在に関連するか、または媒介される。

同様に本発明は、毛髪の白髪化を防止する方法を含む。これは毛髪の損失に関してすでに検討したように、毛包または毛幹に関連する皮膚中の３ＤＧの存在および／または活性を阻害することが、そのような毛髪に影響する微小循環に対する３ＤＧの有害効果を防止でき、次いでそのような有害効果による毛髪の白髪化を防止するからである。

このように当業者は本明細書に提供される開示に基づき、本発明が毛髪の損失および／または毛髪の白髪化の防止に関する方法および組成物を包含すると考えるだろう。そのような組成物および方法には限定するわけではないが、３ＤＧおよび／またはアマドラーゼの形成、蓄積および／または機能を阻害するように、本発明の化合物を投与する毛包に関連する毛髪および皮膚に適用することができるシャンプーまたは他の組成物を包含する。本明細書に提供する開示に基づき、当業者はそのような化合物には限定するわけではないが、メグルミンを含むと理解するだろう。さらに毛包に適用する組成物の製剤およびそれらの投薬用量および処方を本明細書に開示し、そしてそれはまた当業者には周知である。

本発明は皮膚の創傷治癒の処置法を包含する。これはＲＯＳが創傷の発生に関連しているからである。したがって当業者は本明細書に提供される開示に基づき、ＲＯＳの任意のインヒビターが創傷治癒に正に作用すると考えるだろう。ＲＯＳ発生（ｏｒｉｇｉｎａｔｉｎ）における３ＤＧの役割を仮定すれば、３ＤＧの生成を阻害することによるＲＯＳの阻害は創傷を防止し、そして処置するために有用な方法をもたらすことができる。さらにすでに本明細書のいたるところで検討したように、糖尿病では３ＤＧレベルが上昇し、そして非糖尿病よりも３ＤＧの解毒効率が低いので、有用な創傷治療として皮膚における３ＤＧ阻害の使用の支持は、ジカエティックス（ｄｉｑａｅｔｉｃｓ）が特に創傷治癒の問題を起こす傾向があることを示す実験により提供される。このように３ＤＧならびにその酵素的合成の原因となる酵素が皮膚に存在するという驚くべき知見は、初めて特に糖尿病について創傷治癒を促進するための新規治療薬の開発を可能とする。

３ＤＧおよびその形成の経路が皮膚に存在し、そしてＲＯＳの生成に関与し、そしてＲＯＳが次いで炎症に関与するので、当業者は本発明が粘膜の炎症に関連する疾患、障害または状態も処置または改善する方法を包含すると考えるだろう。皮膚における３ＤＧの形成、機能および／または蓄積の阻害は粘膜の炎症を抑えることができるので、粘膜（例えば鼻孔、膣、直腸、口腔等）の炎症に関係する状態はそのような阻害により抑制できる。例えば３ＤＧの阻害は歯の褐変、口中の炎症、歯肉炎、歯周病、疱疹びらん等をモジュレートするために使用できる。

さらに３ＤＧ阻害は粘膜炎症を防止でき、そして創傷治癒を誘導することができるので、そのような阻害は感染が皮膚および／または粘膜を介する病原体の感染により媒介されるウイルス、バクテリアまたは真菌感染の防止および／または処置にも有用な治療薬を提供することができる。したがって本発明はアマドラーゼおよび／または３ＤＧの不活性化剤（ｉｎａｃｔｉｖａｔｏｒ）を処置が必要な患者に提供することにより、真菌、ウイルスおよびバクテリア感染を防止または処置する方法および組成物を含む。

本発明は歯肉炎、歯周病、歯の黄ばみ等を処置または防止する方法を包含する。これは本明細書に記載するデータが、３ＤＧが唾液中に存在し、そして皮膚に存在することを証明し、これは３ＤＧが粘膜に存在する事を示唆すからである。すなわち当業者は本明細書に提供される開示に基づき、口中の粘膜に関連する３ＤＧの阻害が、限定するわけではないが、歯肉炎、歯周病、歯の変色を含め、この分子に関連するか、または媒介される有害効果を抑えることができると考えるだろう。これは酸化的ストレスおよびＡＧＥｓがこれらの状態に関係し、そして３ＤＧが酸化的ストレスおよびＡＧＥｓを誘導するからである。さらに当業者は本明細書に提供される教示から着手すれば、本発明がウィルソン病、慢性、関節リウマチ、進行性全身性硬化症、線維性肺疾患、レーノー現象、関節拘縮、シェーグレン症候群等を処置する方法を包含すると理解するだろう。これは３ＤＧが活性酸素種の誘導を引き起こし、そして活性酸素種が炎症を引き起こし、ＲＯＳにより媒介されるか、またはＲＯＳが関連する炎症に関連する疾患は、３ＤＧの阻害により防止または処置できるからである。したがってウィルソン病、慢性関節リウマチ、進行性全身性硬化症、線維性肺疾患、レーノー現象、関節拘縮、シェーグレン症候群等は、３ＤＧおよびまたはアマドラーゼを阻害することに関して本明細書に説明する方法に従い処置することができる。

本発明は、乳ガンを処置する方法を含む。これは本明細書中のいたるところでさらに詳細に説明しているように、本明細書に開示するデータが、３ＤＧが汗に存在することを証明するからである。乳腺は高度に特異化された汗腺であるので、当業者は本明細書に提供される開示に基づき、有害効果が３ＤＧに関連するか、または媒介されると仮定すれば、そのような組織における３ＤＧの阻害は有益な効果を提供すると考えるだろう。

本明細書に提供される開示に基づき当業者により想定されるように、３ＤＧが酸化的ストレスおよび活性酸素種の形成を引き起こし、そして酸素的ストレスに打ち勝つ酵素を阻害するので、皮膚における３ＤＧの阻害は乳ガンの処置に有用な治療薬を提供することができる。すなわち３ＤＧは炎症に対して身体の防御を消耗させ、特に皮膚に高レベルの３ＤＧが存在すると、皮膚および粘膜に存在する防御を悪く消耗させる。このように特定の理論に拘束されることは望まないが、３ＤＧの効果は主にその酸化的ストレスに対する効果により、次いで全炎症カスケードによるものである。すなわち乳ガンでは１つの点突然変異ではなく、長期の酸化的ストレスがこの疾患を引き起こすと考えられていることが重要である。

同様に当業者は本明細書に開示する技術から着手すれば、３ＤＧを含んでなる唾液、汗、リンパ液、尿、精液および血液のような体液が、皮膚により、または皮膚に関連して生産される場合、そのような流体と細胞、組織または器官との接触により媒介される疾患、障害または状態を、３ＤＧの阻害により処置できると理解するだろう。体液中に存在する３ＤＧにより媒介される、または関連するそのような疾患、障害または状態には、限定するわけではないが、非ホジキンリンパ腫を含み、この場合、３ＤＧを含んでなる汗がリンパ腺を飽和する。さらに本発明は、３ＤＧ付加物も本明細書のいたるところに開示するものを含む３ＤＧに関連する疾患、障害または状態に貢献するので、３ＤＧ付加物の形成を阻害し、および／またはこれらの付加物を不活性化する方法を含む。すなわち３ＤＧの形成、蓄積および／または機能の防止が、老化および疾患に関連する化合物の有害効果、そしてさらに具体的には本明細書のいたるところに開示する皮膚に及ぼす３ＤＧの有害効果を防止するように、いかなる場所で見いだされても３ＤＧ付加物および／または中間体の有害効果を阻止することは、同様にそれらの有害効果を防止する。当業者はいったん本明細書に提供される教示から着手すれば、そのような３ＤＧ付加物／中間体が、限定するわけではないが図１８に表されるものを含み、そして３ＤＧから形成されるそのような中間体／付加物がいかなる場所で見いだされても老化および疾患に貢献していると理解するだろう。

これらの付加物はこれまで未知であり、そして当業者は本明細書のそれらの新規開示に基づき、それら付加物を阻害することは皮膚において、およびそのような付加物が存在するいかなる場所でも付加物により媒介される、または関連する疾患プロセスを阻止すると考えるだろう。このように本発明は、当該技術分野で知られている本明細書に開示する、または将来開発される検出法を使用して検出される場合はいつでも、そのような３ＤＧ付加物の合成、形成および蓄積を阻害することを包含する。

本発明は、疾患の広い多血症を処置または改善する方法を包含し、この疾患は３ＤＧと皮膚中のタンパク質、例えばコラーゲンおよびエラスチンとの相互作用による皮膚中の変化、およびＲＯＳの誘導、そして続いてそれらの皮膚中の成分との反応により媒介されるか、または関連する。すなわち本明細書に開示するデータは、皮膚中の３ＤＧがコラーゲンの架橋化、そして次に皮膚の肥厚化を媒介し、またはそれに関連するので、皮膚の３ＤＧおよび／またはアマドラーゼの蓄積、形成、機能を防止し、および／またはクリアランスを増加させることは、そのような肥厚化に媒介されるか、または関連する疾患障害または状態に治療的利益を提供することができる。

加えて、本発明は酸化的ストレスに媒介されるか、またはそれに関連する疾患、障害または状態を処置または改善することを包含する。これは３ＤＧが酸化的ストレスを誘導する、すなわち３ＤＧが酸化的ストレスを直接的に、またはＡＧＥｓの形成を通して誘導し、したがって３ＤＧが炎症反応に関与するからである。このように３ＤＧを阻害することは、炎症に関連する疾患、障害または状態を処置または防止する。そのような疾患、障害または状態には限定するわけではなが、歯肉炎、歯周病、歯の褐変／黄ばみ、疱疹損傷および瘢痕を含み、なぜならこれらはＲＯＳにより媒介されるか、または関連するからである。したがって例えば歯および／または口の組織（例えば歯肉等）を３ＤＧのインヒビター、例えばメグルミンで処置することによりＲＯＳを防止することは、前述の疾患、障害または状態のような口腔前庭中のＲＯＳの有害効果を減らすことができる。

本発明はさらに３ＤＧ、その付加物／中間体の阻害、ならびにアマドラーゼおよび３ＤＧの合成の阻害に基づく皮膚の外観に影響を及ぼす処置を包含する。すなわちたとえ状態、障害または疾患が処置または改善されない場合でも、本発明は皮膚の外観に影響を及ぼす処置法を含むので、わずかでも処置が無い場合よりも状態、障害または疾患が皮膚の外観に影響する程度は少なくなる。したがってこれらは化粧料であり、そして身体的外観に改善をもたらすことができる。

本発明は皮膚の弾力の損失に関連する皮膚の老化を処置する方法を含む。これは本明細書のいたるところでより完全に説明されているように、本明細書に開示するデータが初めて、３ＤＧおよびその合成に関連する酵素が皮膚に存在し、そして３ＤＧを阻害することが皮膚におけるその存在に関連する皮膚の弾力の損失を防止できるか、または逆行させることができることを示したからである。したがって当業者はいったん本明細書に提供される教示から着手すれば、皮膚の３ＤＧを阻害することが皮膚における老化を減少させることができるので、本発明は皮膚の老化および皮膚の弾力の損失を抑制する有用な治療薬を提供すると考えるだろう。当業者はさらに皮膚の老化の治療薬が、限定するわけではないが、本明細書に開示する種々の処置を実行するために使用できる皮膚のラップ、剥離物（ｅｘｆｏｉａｎｔｓ）、マスク等を含め限定するわけでないが皮膚科学および美容外科学の技術において周知な様々の処置法を包含すると理解するだろう。

本発明は特に口中、直腸および膣経路におけるウイルス、真菌およびバクテリア感染に対する感受性を、アマドラーゼを阻害することにより、および／または３ＤＧを不活性化することにより防止する方法を包含する。具体的には例えばＨＩＶ、パピローマウイルスおよびエプスタイン−バーウイルスによる感染に対する感受性を低下させることができ、それは皮膚中の変化が疾患に対する受容性に影響し、そして３ＤＧがＲＯＳおよびＡＧＥｓの形成を誘導し、そしてまた皮膚のタンパク質、特にコラーゲンおよびエラスチンと活発に相互作用して、それらは受容性が改変されるように皮膚に影響を及ぼすからである。

当業者は本明細書に提供される開示に基づき、本発明が皮膚中の３ＤＧに関連する疾患、障害または状態の広い多血症に有用な治療薬を提供することを理解するだろう。これはとりわけ、当該技術分野では３ＤＧがＲＯＳの形成を媒介し、これは次に本明細書に説明する広い様々な疾患、障害または状態に関与することは周知であると知られているからである。

また本発明は、３ＤＧ以外のアルファ−ジカルボニル糖ファミリーの化合物の員と関連する皮膚の疾患または障害を抑制または処置する方法を含む。

本発明の１つの観点では、皮膚中の様々な変化を３ＤＧのインヒビターで処置した後に測定することができる。皮膚の形状的特徴は：（ａ）皺の数；（ｂ）皺の総面積；（ｃ）皺の全長（ｄ）皺の平均長；および（ｅ）皺の平均の深さのようなパラメーターにより定めることができる。皺の種類は、深さ、長さおよび面積に基づき定めることができる。これらの特徴は、疾患または障害または皮膚に及ぼす処置の効果による皮膚中の変化を評価する時に使用することができる。様々な皮膚の質に及ぼす３ＤＧレベルおよび機能の変化の効果は、当該技術分野で知られている技術に基づき決定することができる。皮膚の質を測定する方法には、限定するわけではないがバリストメーター（ｂａｌｌｉｓｔｏｍｅｔｅｒ）のような装置を用いて粘弾性を測定すること、カットメーター（ｃｕｔｏｍｅｔｅｒ）のような装置を用いて皮膚の機械的／垂直歪み特性を測定すること、コルネオメーター（ｃｏｒｎｅｏｍｅｔｅｒ）のような装置を使用して水和の程度における変化から生じる皮膚のキャパシタンスの変化を測定することを含む。

本発明は、本発明の方法を実行するために製薬学的または化粧用組成物中で同定された化合物の投与に関し、この組成物は化合物または化合物の適切な誘導体または断片および製薬学的に許容され得る担体を含んでなる。例えば３ＤＧの酵素依存的または非酵素依存的生産の適当なインヒビター、または３ＤＧ蓄積もしくは機能のインヒビター、または３ＤＧ除去、解毒もしくは分解の刺激物が組み合わされた化学的組成物が、適当な化合物を動物に投与するために使用される。本発明は３ＤＧのインヒビターまたは３ＤＧ除去、分解または解毒の刺激物の１つ、または１以上の同時使用を含むと解釈すべきである。１より多くの刺激物またはインヒビターが使用される時、それらは一緒に投与することができるか、またはそれらは別個に投与することができる。

１つの態様では本発明の実施に有用な製薬学的組成物は、１ｎｇ／ｋｇ／日から１００ｍｇ／ｋｇ／日の間の用量で送達するために投与することができる。別の態様では本発明の実施に有用な製薬学的組成物は、１ｎｇ／ｋｇ／日から１００ｇ／ｋｇ／日の用量を送達するために投与することができる。

有用な製薬学的に許容され得る担体には、限定するわけではないが、グリセロール、水、塩水、エタノールおよびリン酸塩および有機酸の塩のような他の製薬学的に許容され得る塩溶液を含む。これらおよび他の製薬学的に許容され得る担体の例は、レミングトンの製薬科学（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ）（１９９１、マック（Ｍａｃｋ）出版社、ニュージャージー）に記載されている。

製薬学的組成物は、滅菌性の注入可能な水性または油性の懸濁液または溶液の状態で調製、包装または販売され得る。この懸濁液または溶液は既知の技術に従い製剤され、そして有効成分に加えて、本明細書に記載する分散剤、加湿剤または沈殿防止剤のようなさらなる成分を含んでなることができる。そのような滅菌性の注入可能な製剤は、例えば水または１，３−ブタンジオールのような非毒性の非経口的に許容され得る希釈剤または溶媒を使用して調製することができる。他の許容され得る希釈剤および溶媒には限定するわけではないが、リンゲル溶液、等張性塩化ナトリウム溶液、および合成モノ−またはジ−グリセリドのような固定油を含む。

本発明の方法に有用な製薬学的組成物は、経口、直腸、膣、非経口、局所、肺、鼻内、頬内、眼内または他の投与経路に適する製剤で投与され、調製され、包装され、かつ／または販売すれることができる。他の意図する製剤には、放射放出されるナノ粒子、リポソーム調製物、有効成分を含む再封入赤血球、および免疫学に基づく製剤を含む。

本発明の組成物は、限定するわけではないが経口、直腸、膣、非経口、局所、肺、鼻内、頬内または眼内投与経路を含む多数の経路を介して投与することができる。投与経路（１つまたは複数）は当業者には直ちに明白であり、そして処置する疾患の種類および重篤度、処置される動物またはヒト患者の種類および年齢等を含む任意の数の因子に依存する。

本発明の方法に有用な製薬学的組成物は、経口の固体製剤、眼内製剤、座薬、エーロゾル、局所または他の類似製剤で全身的に投与することができる。ヘパリン硫酸塩またはその生物学的均等物のような化合物に加えて、そのような製薬的組成物は、製薬学的に許容され得る担体および薬剤の投与を強化し、そして促進することが知られている他の成分を含むことができる。ナノ粒子、リポソーム、再封入赤血球および免疫学的に基づく系のような他の可能性のある製剤を使用して、本発明の方法による化合物を投与することもできる。

本明細書に記載する任意の方法を使用して同定される化合物を配合し、そして皮膚の老化、皮膚の皺、および本明細書に記載する種々の皮膚に関連する疾患、障害または状態を処置するために哺乳動物に投与することができる。

本発明は、皮膚の老化、光加齢および皮膚の皺を含む本明細書に記載する種々の皮膚に関連する疾患、障害または状態を処置するために有用な化合物を含んでなる製薬学的組成物の調製および使用を包含する。また本発明は限定するわけではないが、歯肉疾患および障害を含む皮膚以外の３ＤＧが関連する疾患および障害も包含する。そのような製薬学的組成物は、個体に投与するために適当な形態の有効成分のみからなることができ、または製薬学的組成物は少なくとも１つの有効成分および１以上の製薬学的に許容され得る担体、１以上のさらなる成分、またはこれらの幾つかの組み合わせを含んでなるものでよい。有効成分は製薬学的組成物中に、当該技術分野で周知である生理学的に許容され得るカチオンもしくはアニオンとの組み合わせのような、生理学的に許容され得るエステルまたは塩の形態で存在することができる。

薬品の局所的投与に関する障害物は、表皮の角質層である。角質層はタンパク質、コレステロール、スフィンゴ脂質、遊離脂肪酸および様々な他の脂質を含んでなる高度に耐性の層であり、そして角化した、および生きている細胞を含む。角質層を通過する化合物の浸透速度（流れ）を制限する因子の１つは、皮膚表面上に乗せるか、または適用され得る活性物質の量である。皮膚の単位面積あたりに適用される活性物質の量が多いほど、皮膚表面と皮膚のより下層との間の濃度勾配が大きく、次に皮膚を通過する活性物質の拡散力（ｄｉｆｆｕｓｉｏｎｆｏｒｃｅ）が大きい。したがって他が同じで、より低い濃度を要する製剤よりは、高濃度の活性物質を含む製剤は、活性物質が皮膚をより浸透し易くなり、そして浸透が多くなり、そしてより一定速度となる。

本明細書に記載する製薬学的組成物の製剤は、薬理学の分野で既知の、または今後開発される方法により調製することができる。一般にそのような調製法は、有効成分を担体または１以上の他の補助的成分と合わせるようにし、そして次いで必要または所望する場合、生成物を所望する単一−もしくは多−投与単位に成形または包装する工程を含む。

本明細書に提供する製薬学的組成物の記載は、主に認定基準に合ったヒトへの投与に適する製薬学的組成物を対象としているが、当業者にはそのような組成物が一般にすべての種の動物へ投与するためにも適すると理解するだろう。

組成物を種々の動物への投与に適するようにするために、ヒトへの投与に適する製薬学的組成物の修飾は十分に理解されており、そして通常の獣医薬理学者は、もし必要ならば実験を行って、単に通常のそのような修飾を計画し、そして行うことができる。本発明の製薬学的組成物が投与される個体は、限定するわけではないがヒトおよび他の霊長類、牛、ブタ、ウマ、ヒツジ、ネコおよびイヌのような商業的に興味のある哺乳動物を含む哺乳動物を含む。

本発明の方法に有用な製薬学的組成物は、経口、直腸、膣、非経口、局所、肺、鼻内、頬内、眼内、硬膜下腔内または他の投与経路に適する製剤で調製され、包装され、または販売することができる。他の意図する製剤には、放射放出されるナノ粒子、リポソーム調製物、有効成分を含む再封入赤血球、および免疫学に基づく製剤を含む。

本発明の製薬学組成物は、バルクで、単回の単位用量として、または複数の単位用量として調製され、包装され、または販売することができる。本明細書で使用する「単位用量（ｕｎｉｔｄｏｓｅ）」とは、予め定めた量の有効成分を含んでなる製薬学的組成物の別個の量である。有効成分の量は一般に個体に投与される有効成分の投薬用量に等しいか、またはそのような投薬用量の例えば１／２または１／３のような便利な画分である。

本発明の製薬学的組成物中の有効成分、製薬学的に許容され得る担体および任意のさらなる成分の相対量は、処置する個体の同一性、サイズおよび状態に依存して、さらに組成物が投与される経路に依存して変動する。例として組成物は０．１％から１００（重量／重量）％の有効成分を含んでなることができる。

有効成分に加えて、本発明の製薬学的組成物はさらに１以上の製薬学的に活性な作用物質を含んでなることができる。特に意図するさらなる作用物質には、制吐剤およびシアニドおよびシアネートスカベンジャーのようなスカベンジャーを含む。

本発明の製薬学的組成物の放出制御−または徐放性製剤は、通常の技術を使用して作成することができる。

局所的投与に適する製剤は、限定するわけではないが塗布剤、ローション、クリーム、軟膏もしくはペーストのような水中油および油中水乳液のような液体または半液体調製物、および溶液または懸濁液を含む。局所的に投与可能な製剤は、例えば約１％〜約１０（重量／重量）％の有効成分を含んでなることができるが、有効成分の濃度は溶媒中の有効成分の溶解限界まででよい。局所投与用の製剤は、さらに本明細書に記載する１以上のさらなる成分を含んでなることができる。

浸透の強化剤を使用してもよい。これらの物質は皮膚をわたる薬剤の透過速度を増す。当該技術分野で典型的な強化剤には、エタノール、グリセロールモノラウレート、ＰＧＭＬ（ポリエチレングリコールモノラウレート）、ジメチルスルフォキシド等を含む。他の強化剤にはオレイン酸、オレイルアルコール、エトキシジグリコール、ラウロカプラム、アルカンカルボン酸、ジメチルスルフォキシド、極性脂質またはＮ−メチル−２−ピロリドンを含む。

本発明の組成物の幾つかを局所送達するために許容され得る賦形剤は、リポソームを含んでなることができる。リポソームの組成物およびそれらの使用は、当該技術分野では知られている（例えばＣｏｎｓｔａｎｚａ、米国特許第６，３２３，２１９号明細書を参照にされたい）。

配合される活性化合物の供給源は、一般に化合物の特定の形態に依存する。低分子有機分子およびペプチドまたはオリゴ断片を化学的に合成し、そして製薬学的／化粧料用途に適する純粋状態で提供することができる。天然抽出物質の産物は、当該技術分野で既知の技術に従い精製することができる。組換え起源の化合物も当業者により利用可能である。

別の態様では局所的に活性な製薬学的または化粧料組成物は、保湿剤、化粧用補助剤、抗酸化物質、錯化剤、漂白剤、チロシンインヒビターおよび他の既知の脱色素剤、表面活性剤、発泡剤、コンディショナー、浸潤剤、加湿剤、乳化剤、香料、粘度調整剤、緩衝剤、保存剤、サンスクリーン等のような他の成分と任意に合わせることができる。別の態様では、浸透強化剤を欠く組成物に対して、浸透および透過強化剤は組成物に含められ、そして有効成分の角質中、そしてそれを通る皮下透過の改善に効果的である。オレイン酸、オレイルアルコール、エトキシジグリコール、ラウロカプラム、アルカンカルボン酸、ジメチルスルフォキシド、極性脂質またはＮ−メチル−２−ピロリドンを含む種々の浸透強化剤は、当業者には知られている。別の観点では、組成物はさらに角質の構造における障害を増すように機能する水分屈性剤を含んでなることができ、これにより角質をわたる輸送を増すようにする。イソプロピルアルコール、プロピレングリコール、またはキシレンスルホン酸ナトリウムのような種々の水分屈性剤が当業者には知られている。本発明の組成物は、例えばトレチノイン、レチノール、トレチノインおよび／またはレチノールのエステル等を含む活性量のレチノイド（すなわちレチノイドレセプターのファミリーの任意の員に結合する化合物）を含んでもよい。

局所的に活性な製薬学的または化粧料組成物は、所望の変化を及ぼすために有効な量で適用すべきである。本明細書で使用する「有効量」は、変化を望む皮膚表面の領域を覆うために十分な量を意味する。活性化合物は、組成物の約０．０００１％〜約１５重量容量％の量で存在すべきである。より好ましくは、これは組成物の約０．０００５％〜約５％の量で存在すべきであり；最も好ましくは組成物の約０．００１％〜約１％の量で存在すべきである。そのような化合物は合成に、または天然に由来することができる。

生物起源から直接作成された液体誘導体および天然抽出物を、約１〜約９９（重量／容量）％の濃度で本発明の組成物に使用することができる。天然抽出物の画分およびプロテアーゼインヒビターは、組成物の約０．０１％〜約２０％、そしてより好ましくは約１％〜約１０％の異なる好適な範囲を有する。もちろん本発明の活性剤の混合物を組み合わせ、そして同じ製剤中で、または異なる製剤の順次適用で使用することができる。

本発明の組成物は組成物の総重量の約０．００５％〜２．０％の保存剤を含んでなることができる。保存剤は、治療用ゲルまたはクリームのような本発明の組成物を適用するために使用する指との接触を含め、組成物が空気または患者の皮膚に対する暴露から環境中の混入物に暴露された時に、水性ゲルの場合に患者の繰り返し使用から腐敗を防ぐために使用する。本発明に従い有用な保存剤の例は、限定するわけではないがベンジルアルコール、ソルビン酸、パラベン、イミドウレアおよびそれらの組み合わせを含む。特に好適な保存剤は、約０．５％〜２．０％のベンジルアルコールと０．０５％〜０．５％ソルビン酸との組み合わせである。

組成物は好ましくは、水性ゲル製剤中での本発明の使用のための化合物の分解を阻害する抗酸化物質および錯化剤を含む。幾つかの化合物に好適な抗酸化物質は約０．０１％〜０．３％の好適な範囲でのＢＨＴ、ＢＨＡ、アルファトコフェロールおよびアスコルビン酸であり、そしてより好ましくは組成物の総重量の０．０３％〜０．１重量％の範囲のＢＨＴである。好ましくは錯化剤は組成物の総重量の０．０１％〜０．５重量％の量で存在する。特に好適な錯化剤は、組成物の総重量の約０．０１〜０．２０％の重量範囲、そしてより好ましくは０．０２〜０．１０重量％のエデト酸塩（例えばエデト酸二ナトリウム）およびクエン酸を含む。錯化剤は製剤の寿命に有害となり得る組成物中の金属イオンを錯化するために有用である。ＢＨＴおよびエデト酸二ナトリウム塩はそれぞれ、幾つかの化合物に特に好適な抗酸化物質および錯化剤であるが、当業者に知られているように他の適当かつ均等な抗酸化物質および錯化剤も、それらに置き換えることができる。

放出制御調製物も使用でき、そしてそのような調製物の使用のための方法は、当業者に知られている。

幾つかの場合では、使用する剤形は所望の放出プロフィールを変動する比率で提供するために、例えばヒドロプロピルメチルセルロース、他のポリマー性マトリックス、ゲル、浸透膜、浸透系、多層コーティング、微粒子、リポソーム、または微小球またはそれらの組み合わせを使用して、中の１以上の有効成分の緩効性または制御放出を提供することができる。本明細書に記載するものを含め当業者に知られている適当な放出制御製剤は、本発明の製薬学的組成物に使用するために容易に選択することができる。すなわち放出制御に適合した錠剤、カプセル、ゲルキャップおよびキャプレットのような経口投与用の単一の単位剤形が本発明に包含される。

すべての放出制御型の製薬学的製品は、非制御型により達成される薬剤治療を改善する共通目標を有する。理想的には薬剤処置において最適に設計された放出制御調製物の使用は、最少量の薬剤物質が最小量の時間で状態を治癒または制御するために使用されることを特徴とする。放出制御製剤の利点には、薬剤の長期活性、低減された投薬頻度および上昇した患者のコンプライアンスを含む。さらに放出制御製剤は、作用開始時期または薬剤の血中レベルのような他の特性に影響を与えるように使用することもでき、すなわち副作用の同時発生に影響を与える可能性がある。

最も放出が制御された製剤は、所望の治療効果を即座に生成する薬剤の量を最初に放出し、そしてこの治療効果のレベルを長期にわたり維持するために、別の薬剤量を徐々に、しかも持続的に放出するように設計されている。体内の一定の薬剤レベルを維持するために、薬剤は体内で代謝され、そして排出される薬剤の量を置き換える速度で剤形から放出されなければならない。

有効成分の放出制御は、種々のインデューサー、例えばｐＨ、温度、酵素、水または他の生理学的状態または化合物により刺激され得る。本発明の内容において用語「放出制御成分（ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ−ｒｅｌｅａｓｅｃｏｍｐｏｎｅｎｔ）」とは、本明細書では有効成分の放出制御を促進する化合物（１つまたは複数）と定め、それらには限定するわけではないがポリマー、ポリマー性マトリックス、ゲル、浸透膜、リポソーム、または微小球またはそれらの組み合わせを含む。

液体懸濁液は、水性または油性賦形剤に有効成分を懸濁液を達成する常法を使用して調製することができる。水性賦形剤には例えば、水および等張性塩水を含む。油性賦形剤には例えば、アーモンド油、油性エステル、エチルアルコール、落花生、オリーブ、ゴマ、またはヤシ油のような植物油、分別植物油、および液体パラフィンのような鉱物油を含む。液体懸濁液は限定するわけではないが、沈殿防止剤、分散剤または加湿剤、乳化剤、粘滑剤、保存剤、バッファー、塩、風味剤、着色剤および甘味料を含む１以上のさらなる成分をさらに含んでなることができる。油性懸濁液はさらに増粘剤を含むことができる。既知の沈殿防止剤には限定するわけではないが、ソルビトールシロップ、水素化可食脂肪、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、トラガカントガム、アラビアガム、およびカルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースのようなセルロース誘導体を含む。既知の分散または加湿剤には限定するわけではないが、レシチンのような自然に存在するホスファチド、アルキレンオキシドと脂肪酸との、長鎖脂肪族アルコールとの、脂肪酸とヘキシトールに由来する部分エステルとの、または脂肪酸とヘキシトール無水物に由来する部分エステルとの（それぞれ例えばポリオキシエチレンステアレート、ヘプタデカエチレンオキシセタノール、ポリオキシエチレンソルビトールモノオレート、およびポリオキシエチレンソルビタンモノオレート）の縮合生成物を含む。既知の乳化剤には限定するわけではないが、レシチンおよびアラビアガムを含む。既知の保存剤には限定するわけではないが、メチル、エチルまたはｎ−プロピル−パラ−ヒドロキシベンゾエート、アスコルビン酸およびソルビン酸を含む。既知の甘味料には限定するわけではないが、例えばグリセロール、プロピレングリコール、ソルビトール、シュクロースおよびサッカリンを含む。油性懸濁液用の既知の増粘剤には、例えば蜜蝋、硬質パラフィンおよびセチルアルコールを含む。

水性または油性溶媒中の有効成分の液体溶液は、液体懸濁液と実質的に同じ様式で調製することができ、主要な変更は有効成分が溶媒に懸濁されるのではなく溶解される点である。本発明の製薬学的組成物の液体溶液は、液体懸濁液に関して記載した各成分を含んでなることができるが、沈殿防止剤は有効成分を溶媒に溶解することを必ずしも促進する必要はないと考えられる。水性溶媒には例えば水および等張性塩水を含む。油性溶媒には例えば、アーモンド油、油性エステル、エチルアルコール、落花生、オリーブ、ゴマ、またはヤシ油のような植物油、分別植物油、および液体パラフィンのような鉱物油を含む。

本発明の製薬学的調製物の粉末および粒状製剤は、既知の方法を使用して調製することができる。そのような製剤は例えば錠剤を形成するために、カプセルに充填するために、またはそれらに水性もしくは油性賦形剤を加えることにより水性もしくは油性懸濁液もしくは溶液を形成するために使用して、個体に直接投与することができる。これらの各製剤は、さらに１以上の分散または加湿剤、沈殿防止剤および保存剤を含んでなることができる。充填剤および甘味料、風味剤、着色剤のようなさらなる補形剤もこれらの製剤に含めることができる。

本発明の製薬学的組成物は、水中油型乳液または油中水型乳液の形態で調製、包装または販売することができる。油性相はオリーブまたは落花生油のような植物油、液体パラフィンのような鉱物油、またはこれらの組み合わせでよい。そのような組成物はさらに、アラビアガムまたはトラガカントガムのような自然に存在するガム、ダイズまたはレシチンホスファチドのような自然に存在するホスファチド、ソルビタンモノオレートのような脂肪酸およびヘキシトール無水物との縮合生成物の組み合わせに由来するエステルまたは部分エステル、およびポリオキシエチレンソルビタンモノオレートのようなエチレンオキシドとの部分エステルのような縮合生成物のような１以上の乳化剤を含んでなることができる。これらの乳液は、例えば甘味料または風味剤を含むさらなる成分も含むことができる。

本明細書で使用する「油性」液体は、炭素を含有する液体分子を含んでなり、そして水より低い極性を表すものである。

経口投与に適する本発明の製薬学的組成物の製剤は、限定するわけではないが各々が予め定めた量の有効成分を含有する錠剤、硬質もしくは軟質カプセル、小袋、トローチまたはロゼンジを含む別個の固体用量単位の状態で調製、包装または販売することができる。経口投与に適する他の製剤には限定するわけではないが、粉末化または粒状製剤、水性もしくは油性懸濁液、水性もしくは油性溶液、ペースト、ゲル、歯磨き粉、口中洗浄剤、コーティング、経口リンス、または乳液を含む。経口リンスおよび口中洗浄剤という用語は、本明細書では互換的に使用する。

本発明の製薬学的組成物は、経口もしくは頬内投与に適する製剤で調製、包装または販売することができる。そのような製剤には限定するわけではないが、ゲル、液体、懸濁液、ペースト、歯磨き粉、口中洗浄剤もしくは経口リンスおよびコーティングを含んでなることができる。例えば本発明の経口リンスは、約１．４％の本発明の化合物、クロルヘキシジングルコネート（０．１２％）、エタノール（１１．２％）、サッカリンナトリウム（０．１５％）、ＦＤ＆ＣＢｌｕｅＮｏ．１（０．００１％）、ペパーミント油（０．５％）、グリセリン（１０．０％）、Ｔｗｅｅｎ６０（０．３％）を含んでなり、水を加えて１００％とすることができる。別の態様では本発明の歯磨き粉は、約５．５％の本発明の化合物、ソルビトール、水中７０％（２５．０％）、サッカリンナトリウム（０．１５％）、ラウリル硫酸ナトリウム（１．７５％）、カルボポール９３４、６％分散物で（１５％）、スペアミントの油（１．０％）、水酸化ナトリウム、水中５０％（０．７６％）、二塩基性リン酸カルシウム二水和物（４５％）を含んでなり、水を加えて１００％とすることができる。本明細書に記載する製剤の例は網羅的ではなく、そして本発明は本明細書には記載しないこれらおよび他の製剤のさらなる修飾を含むが、それらは当業者には知られていると考えられる。

有効成分を含んでなる錠剤は、例えば有効成分、場合により１以上のさらなる成分を圧縮もしくは成形することにより作成することができる。圧縮錠剤は、適当なデバイス中で粉末または粒状調製物のような自由に流動する状態の有効成分を、場合により１以上の結合剤、潤滑剤、賦形剤、表面活性剤および分散剤と混合して圧縮することにより調製できる。成形された錠剤は、適当なデバイス中で有効成分、製薬学的に許容され得る担体および少なくとも混合物を湿らせるために十分な液体の混合物を成形することにより調製できる。錠剤の製造に使用される製薬学的に許容され得る補形剤には、限定するわけではないが不活性な希釈剤、造粒および崩壊剤、結合剤および潤滑剤を含む。既知の分散剤には限定するわけではないが、ジャガイモ澱粉およびグリコール酸ナトリウム澱粉を含む。既知の表面活性剤には限定するわけではないが、ラウリル硫酸ナトリウムを含む。既知の希釈剤には限定するわけではないが、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、ラクトース、微結晶セルロース、リン酸カルシウム、リン酸水素カルシウムおよびリン酸ナトリウムを含む。既知の造粒および崩壊剤には限定するわけではないがトウモロコシ澱粉およびアルギン酸を含む。既知の結合剤には限定するわけではないが、ゼラチン、アラビアガム、糊化トウモロコシ澱粉、ポリビニルピロリドンおよびヒドロキシプロピルメチルセルロースを含む。既知の潤滑剤には限定するわけではないが、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、シリカおよびタルクを含む。

錠剤はコートされていないか、または既知の方法を使用してコートして、個体の胃腸管で遅延した崩壊を達成し、これにより徐放性および有効成分の吸収を提供することができる。例としてモノステアリン酸グリセリルまたはジステアリン酸グリセリルのような物質を錠剤をコートするために使用することができる。さらに例として、錠剤は米国特許第４，２５６，１０８号；同第４，１６０，４５２号；および同第４，２６５，８７４号明細書に記載にれている方法を使用してコートして、浸透圧で放出制御される錠剤を形成することができる。錠剤はさらに製薬学的に洗練され、そして味が良い調製物を提供するために、甘味料、風味剤、着色剤、保存剤またはこれらの幾つかの組み合わせを含んでなることができる。有効成分を含んでなる硬質カプセルは、ゼラチンのような生理学的に分解可能な組成物を使用して作成することができる。そのような硬質カプセルは有効成分を含んでなり、そして例えば炭酸カルシウム、リン酸カルシウムまたはカオリンのような不活性な固体希釈剤を含むさらなる成分をさらに含んでなることができる。

有効成分を含んでなる軟質ゼラチンカプセルは、ゼラチンのような生理学的に分解可能な組成物を使用して作成することができる。そのような軟質カプセルは、水またはピーナッツ油、液体パラフィンまたはオリーブ油のような油性媒質と混合できる有効成分を含んでなる。

経口投与に適する本発明の製薬学的組成物の液体製剤は、液体状態、または水もしくは別の適当な賦形剤で使用前に再構成することを意図する乾燥生成物の状態で調製、包装、そして販売することができる。

本発明の製薬学的組成物は、直腸投与に適する製剤で調製、包装または販売することができる。そのような組成物は例えば座薬、滞留浣腸調製物および直腸もしくは結腸潅注用の溶液形態であることができる。

座薬製剤は有効成分を、通常の室温（すなわち約２０℃）では固体であり、そして個体の直腸温度（すなわち健康なヒトでは約３７℃）では液体である非炎症性の製薬学的に許容されうる補形剤と合わせることにより作成することができる。適当な製薬学的に許容され得る補形剤には限定するわけではないが、カカオ脂、ポリエチレングリコールおよび種々のグリセリドを含む。座薬製剤は限定するわけではないが、抗酸化物質および保存剤のような様々なさらなる成分をさらに含んでなることができる。

直腸もしくは結腸潅注用の滞留浣腸調製物または溶液は、有効成分を製薬学的に許容され得る液体担体と合わせることにより作成することができる。当該技術分野で周知であるように、浣腸調製物は個体の直腸の解剖学的構造に適合した送達デバイスを使用して投与し、そしてその中に包装することができる。浣腸調製物は限定するわけではないが、抗酸化物質および保存剤のような様々なさらなる成分をさらに含んでなることができる。

本発明の製薬組成物は、膣投与に適当な製剤で調製、包装または販売することができる。そのような組成物は例えば座薬、タンポンのような含浸またはコートした膣に挿入可能な材料、洗浄調製物、または膣潅注用のゲルもしくはクリームもしくは溶液の形態であることができる。

材料を化学組成物で含浸またはコートする方法は当該技術分野では知られており、そして限定するわけではないが、表面に化学組成物を沈積または結合する方法、化学組成物を材料の合成中に材料の構造に包含させる方法（すなわち、生理学的に分解可能な材料を用いるような）、および後の乾燥を含むか、または含まない、水性もしくは油性溶液または懸濁液の吸収材料への吸収法を含む。

膣潅注用の洗浄調製物または溶液は、有効成分を製薬学的に許容され得る液体担体と合わせることにより作成することができる。当該技術分野で周知であるように、洗浄調製物は個体の膣の解剖学的構造に適合した送達デバイスを使用して投与し、そしてその中に包装することができる。洗浄調製物は限定するわけではないが、抗酸化物質、抗生物質、抗カビ・菌剤および保存剤を含む様々なさらなる成分をさらに含んでなることができる。本明細書で使用する製薬学的組成物の「非経口投与」には、個体の組織を物理的に裂く（ｂｒｅａｃｈｉｎｇ）ことを特徴とする投与、および組織中の裂傷（ｂｒｅａｃｈ）を介する製薬学組成物の投与の任意の経路を含む。このように非経口投与には限定するわけではないが、組成物の注入による、外科的切開を介する組成物の適用による、組織を透過する非外科的創傷を介する組成物の適用等による製薬学的組成物の投与を含む。特に非経口投与には限定するわけではないが、皮下、腹腔内、筋肉内、胸骨内注入、および腎臓透析潅流法を含むことを意図する。

非経口投与に適する製薬学的組成物の製剤は、滅菌水または滅菌等張性塩水のような製薬学的に許容され得る担体と合わせた有効成分を含んでなる。そのような製剤は、ボーラス投与または連続投与に適する形態で調製、包装または販売することができる。注入用製剤は、アンプルのような単位剤形または保存剤を含む多回投薬容器で調製、包装または販売することができる。非経口投与用の製剤には限定するわけではないが、懸濁液、溶液、油性もしくは水性賦形剤中の乳液、ペーストおよび移植可能な徐放性または生分解性製剤を含む。そのような製剤は、限定するわけではないが沈殿防止、安定化または分散剤を含む１以上のさらなる成分をさらに含んでなることができる。非経口投与用の製剤の１つの態様では、再構成した組成物の非経口投与前に、適当な賦形剤（例えば滅菌性の発熱物質を含まない水）で再構成するために、有効成分が乾燥（すなわち粉末または粒状）状で提供される。

製薬組成物は、滅菌性の注入可能な水性もしくは油性懸濁液または溶液の状態で調製、包装または販売されることができる。この懸濁液または溶液は、既知の技術に従い配合されることができ、そして有効成分に加えて、本明細書に記載する分散剤、加湿剤または沈殿防止剤のようなさらなる成分を含んでなることができる。そのような滅菌性の注入可能な製剤は、例えば水または１，３−ブタンジオールのような非毒性の非経口的に許容され得る希釈剤または溶媒を使用して調製することができる。他の許容され得る希釈剤および溶媒には、限定するわけではないが、リンゲル溶液、等張性塩化ナトリウム溶液、および合成モノ−もしくはジ−グリセリドのような固定油を含む。有用な他の非経口的に投与可能な製剤には、微結晶形態で、リポソーム調製物に、または生分解性ポリマー系の成分として有効成分を含んでなるものを含む。徐放性または移植用の組成物は、乳液、イオン交換樹脂、溶解し難いポリマーまたは溶解し難い可溶性塩のよう製薬学的に許容され得るポリマー性または疎水性材料を含んでなることができる。

本発明の製薬学的組成物は、頬内投与に適する形態で調製、包装または販売することができる。そのような製剤は例えば、常法を使用して作成された錠剤またはロゼンジの形態でよく、そして例えば０．１〜２０（重量／重量）％の有効成分、経口で溶解可能または分解可能な組成物を含んでなるバランス、および場合により本明細書に記載する１以上のさらなる成分でよい。あるいは頬内投与に適する製剤は、有効成分を含んでなる粉末またはエーロゾル化または噴霧化溶液または懸濁液を含んでなることができる。そのような粉末化、エーロゾル化またはエーロゾル化製剤は、分散した時、好ましくは約０．１〜約２００ナノメーターの範囲の平均粒子または小滴サイズを有し、そしてさらに本明細書に記載する１以上のさらなる成分を含んでなることができる。

本明細書で使用する「さらなる成分」には限定するわけではないが以下の１以上を含む；補形剤；表面活性剤；分散剤；不活性希釈剤；造粒および崩壊剤；結合剤；潤滑剤；甘味料；風味剤；着色剤；保存剤；ゼラチンのような生理学的に分解可能な組成物；水性賦形剤および溶媒；油性賦形剤および溶媒；沈殿防止剤；分散または加湿剤；乳化剤、粘滑剤；バッファー；塩；増粘剤；充填剤；乳化剤；抗酸化剤；抗生物質；抗カビ・菌剤；安定化剤；および製薬学的に許容され得るポリマー性または疎水性材料。本発明の製薬学的組成物に含むことができる他の「さらなる成分」は当該技術分野では知られており、そして例えば引用により本明細書に編入するＧｅｎａｒｏ編集（１９８５，レミングトンの製薬科学、マック出版社、イーストン、ペンシルバニア州）に記載されている。

典型的には動物、好ましくはヒトに投与することができる本発明の化合物の投薬用量は、限定するわけではないが、処置する動物の種類および疾患状態の種類、動物の年齢および投与経路を含む任意の数の因子に依存して変動するだろう。

化合物は、１日に数回もの頻度で投与でき、または１日に１回、１週間に１回、２週間に１回、１カ月に１回のようなより少ない頻度で、あるいは数カ月に１回またはさらに１年に１回以下のようなさらに少ない頻度で動物に投与することができる。投与の頻度は当業者には直ちに明白であり、そして限定するわけではないが、処置する疾患の種類および重篤度、動物の種類、年齢等のような任意の数の因子に依存するだろう。

当業者は、３ＤＧを阻害するか、または３ＤＧ関連疾患または状態を処置する方法に関連する上記の本発明の様々な態様が、本明細書には記載しない他の疾患および状態を含むと認識するだろう。

キット
本発明は、３ＤＧを阻害または刺激し、３ＤＧに関連する皮膚の疾患および障害を処置するキット、３ＤＧおよび３ＤＧ関連パラメーターを測定するキット、および３ＤＧに関連する皮膚の疾患および障害を診断するキットも含むと解釈すべきである。本発明は３ＤＧ以外のアルファ−ジカルボニル糖に関するキットも含むと解釈すべきである。

本発明は３ＤＧのインヒビターまたは本発明で同定する化合物、標準、およびインヒビターまたはインヒビターもしくは化合物を含んでなる組成物を細胞または動物に投与することを記載する使用説明書を含んでなるキットを含む。これは標準、および細胞または動物に化合物を投与する前に、本発明の組成物を溶解または懸濁するために適当な（好ましくは滅菌性）溶媒を含んでなるキットのような当業者に知られているものである他のキットの態様を含むと解釈すべきである。好ましくは動物は哺乳動物である。より好ましくは哺乳動物はヒトである。

また本発明は、３ＤＧ分解、解毒またはクリアランスの刺激物、あるいは本発明で同定されるそのような刺激化合物、標準および細胞もしくは動物に刺激物、または刺激物もしくは化合物を含んでなる組成物を投与することを記載する使用説明書を含んでなるキットを含む。これは標準、および化合物を細胞もしくは動物に投与する前に、本発明の組成物を溶解または懸濁するために適する（好ましくは滅菌性）溶媒を含んでなるキットのような当業者に知られている他のキットの態様を含むと解釈されるべきである。

上記のように、または以下の実施例に記載するように、本発明に従い当業者に周知の通例の化学的、細胞的、組織化学的、生化学的、分子生物学的、微生物学的および組換えＤＮＡ技術を使用することができる。そのような技術は文献に完全に説明されている。例えばＳａｍｂｒｏｏｋｅｔａｌ．，１９８９モレキュラークローニング−アラボラトリーマニュアル（ＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ：ａＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ）、コールドスプリングハーバー出版；Ｇｌｏｖｅｒ、（１９８５）ＤＮＡクローニング：実践的取り組み（ａＰｒａｃｔｉｃａｌＡｐｐｒｏａｃｈ）；Ｇａｉｔ，（１９８４）オリゴヌクレオチド合成（ＯｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅＳｙｎｔｈｅｓｉｓ）；Ｈａｒｌｏｗｅｔａｌ．、１９８８、抗体−アラボラトリーマニュアル、コールドスプリングハーバー出版；Ｒｏｅｅｔａｌ．、１９９６ＤＮＡ単離およびシークエンシング；必須技術（ＤＮＡＩｓｏｌａｔｉｏｎａｎｄＳｅｑｕｅｎｃｉｎｇ：ＥｓｓｅｎｔｉａｌＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ）、ジョンウィリー（ＪｏｈｎＷｉｌｅｙ）；およびＡｕｓｕｂｅｌｅｔａｌ．、１９９５分子生物学の現在のプロトコール（ＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ）、グリーネ（Ｇｒｅｅｎｅ）出版を参照にされたい。

さらに記載しないが、当業者は前述の記載およびこれから具体的に説明する実施例を使用して、本発明の化合物を作成そして利用し、そして特許請求する方法を実施することができると考えられる。したがって以下の作業実施例は本発明の好適な態様を具体的に指摘するものであり、そして開示の残りを限定すると解釈されるべきではない。

本発明を今、以下の実施例を参考にして説明する。これらの実施例は具体的説明の目的のみに提供され、そして本発明をこれらの実施例に限定すると解釈されるべきではなく、むしろ本明細書に提供する教示の結果として明らかになるありとあらゆる変更を包含すると解釈すべきである。
［実施例１］

ＦＬ３Ｐの単離および同定：
以下のアッセイはフルクトース−リシン（ＦＬ）がそのリン酸化された状態、例えばＦＬ３Ｐで同定できることを確認するために行った。糖尿病のラット腎臓の過塩素酸抽出物の^３１ＰＮＭＲ分析を行い、そして非腎臓組織中には観察されず、そして非糖尿病の腎臓で大変低減したレベルで存在する６．２４ｐｐｍでの新規な糖のモノホスフェート共鳴が示された。観察された共鳴の原因である化合物は、抽出物のクロマトグラフィーにより微晶質セルロースカラムで溶出液として１−ブタノール−酢酸−水（５：２：３）を使用して単離した。構造はプロトン２ＤＣＯＳＹによりフルクトース−リシン−３−ホスフェートであることが決定された。これは以前に記載された（ＦｉｎｏｔａｎｄＭａｕｓｏｎ，１９６９，Ｈｅｌｖ．Ｃｈｉｍ．Ａｃｔａ，５２：１４８８）ように調製したＦＬを動物に注射することにより後に確認し、そしてＦＬ３Ｐへの直接的リン酸化が示された。

３−位を特異的に重水素化したＦＬを使用して、炭素−３でのホスフェートの位置を確認した。これはカップリングおよび脱カップリングの両方で、^３１ＰＮＭＲスペクトルを分析することにより行った。標準Ｐ−Ｏ−Ｃ−Ｈカップリング手順では、１０．３ＨｚのＪ値を有するＦＬ３Ｐに二重項を生じ；一方、Ｐ−Ｏ−Ｃ−Ｄはカップリングが無く、そして３−重水素化ＦＬ３Ｐについて見いだされたようにカップリングまたは脱カップリングの両方に単重項を生じる。ＦＬ３Ｐの独自な特性は、水素化ホウ素ナトリウムで処理した時、これが２つの新規共鳴を、マンニトールおよびソルビトール−リシン−３−ホスフェートに対応する５．８５および５．９５ｐｐｍに転換する点である。
［実施例２］

ＦＬ３Ｐの合成：
１ミリモルのジベンジル−グルコース−３−ホスフェートおよび０．２５ミリモルのα−カルボベンゾキシ−リシンを、５０ｍｌをＭｅＯＨ中で３時間還流した。溶液を１００ｍｌの水で希釈し、そしてピリジニウム形のＤｏｗ−５０カラム（２．５×２０ｃｍ）でクロマトグラフィーを行い、そして最初に水（２００ｍｌ）で、次いで６００ｍｌのバッファー（０．１Ｍピリジンおよび０．３Ｍ酢酸）で溶出した。標的化合物は水洗浄の終わりおよびバッファー洗浄の始めに溶出した。結果は５％Ｐｄ／Ｃを用いて２０ｐｓｉの水素によるｃｂｚおよびベンジルブロッキング基の除去により、６％収率でＦＬ３Ｐを与えることが示された。
［実施例３］

ＦＬおよびＡＴＰからＦＬ３Ｐの酵素的生産およびインヒビターをスクリーニングするためのアッセイ：
最初に^３１ＰＮＭＲを使用して腎臓皮質にキナーゼ活性を示した。３ｇの新鮮なブタ腎臓皮質のサンプルを、９ｍｌの５０ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ（１５０ｍＭＫＣｌ、５ｍＭＤＴＴ、１５ｍＭＭｇＣｌ_２、ｐＨ７．５を含む）中で均一化した。これを１０，０００ｇで３０分間遠心し、次いで上清を１００，０００ｇで６０分間遠心した。硫酸アンモニウムを６０％飽和まで加えた。４℃で１時間後、沈殿を遠心により回収し、そして５ｍｌの初めのバッファーに溶解した。この溶液の２ｍｌのアリコートを１０ｍＭＡＴＰおよび１０ｍＭのＦＬ（上記実施例１に従い調製した）と、３７℃で２時間インキュベーションした。反応は３００μｌの過塩素酸により停止し、タンパク質を除去するために遠心し、そしてＳｅｐｈａｄｅｘＧ１０（５×１０ｃｍ）のカラムで脱塩した。反応混合物の^３１ＰＮＭＲ分析によりＦＬ３Ｐの形成が検出された。

このようにして得られたキナーゼ活性の証拠に基づき、放射性アッセイを開発した。このアッセイはＦＬ３ＰによるＤｏｗ−５０カチオン交換樹脂への結合を利用するように設計した。このＦＬ３Ｐの特性はそれを単離する試みの最中に見いだされた。ほとんどのホスフェートがこの樹脂に結合しないので、ＡＴＰならびに過剰なＡＴＰと反応するすべての化合物の大半は結合しないと予想された。第１段階はこのアッセイからＡＴＰを除去するために必要な樹脂の量を決定することであった。これは混合物を２００ｍｇのＤｏｗ−１の懸濁液（０．９ｍｌのＨ_２Ｏ中）にピペットで入れ、ボルテックス混合し、そして遠心して樹脂をつめることにより行った。これから０．８ｍｌの上清を２００ｍｇの新たな乾燥樹脂にピペットで入れ、ボルテックス混合し、そして遠心した。０．５ｍｌ容量の上清を１０ｍｌのＥｃｏｓｃｉｎｔＡにピペットで入れ、そしてカウントした。残存カウントは８５ｃｐｍであった。この手順をアッセイに使用した。粗皮質ホモジネートの６０％硫酸アンモニウム沈殿からの沈殿を、４℃のホモジネートバッファーに再溶解した。アッセイは１０ｍＭ γ^３３Ｐ−ＡＴＰ（４０，０００ｃｐｍ）、１０ｍＭＦＬ、１５０ｍＭＫＣｌ、１５ｍＭＭｇＣｌ_２、５ｍＭＤＴＴを０．１ｍｌの５０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７．５中に含んだ。ＦＬ３Ｐ生成の速度と酵素濃度との間の関係を、１、２および４ｍｇのタンパク質を用いた３７℃で３０分間の３回の測定を使用して決定した。ＦＬ無しのブランク実験を差し引き、そしてデータを記録した。観察された活性は、約２０ナノモル／時間／ｍｇタンパク質のＦＬ３Ｐ合成速度に相当した。
［実施例４］

メグルミンおよび種々のポリオールリシンによる３−デオキシグルコソンの形成阻害：
ａ．一般的なポリオールリシン合成：
糖（１１ミリモル）、α−カルボベンゾキシ−リシン（１０ミリモル）およびＮａＢＨ_３ＣＮ（１５ミリモル）を、５０ｍｌのＭｅＯＨ−Ｈ_２Ｏ（３：２）に溶解し、そして２５℃で１８時間撹拌した。溶液を過剰なＤｏｗ−５０（Ｈ）イオン交換樹脂で処理して過剰なＮａＢＨ_３ＣＮを分解した。この混合物（液体に樹脂を加えたもの）を、Ｄｏｗ−５０（Ｈ）カラム（２．５×１５ｃｍ）に移し、そして水で十分に洗浄して、過剰な糖およびホウ酸を除去した。カルボベンゾキシ−ポリオールリシンを５％ＮＨ_４ＯＨで溶出した。得られた残渣を蒸発させ、そして水−メタノール（９：１）に溶解し、そして水素ガス（２０ｐｓｉ）を用いて１０％活性炭担持パラジウム触媒を使用して還元した。濾過および蒸発によりポリオールリシンを得る。
ｂ．ソルビトールリシン、マンニトールリシンおよびガラクチトールリシンによる尿および血漿３−デオキシグルコソンを減らす実験的プロトコール：
尿は６匹のラットから３時間集めた。血漿サンプルも得た。次いで動物は１０マイクロモルのソルビトールリシン、マンニトールリシンまたはガラクチトールリシンのいずれかを腹腔内注射により与えられた。尿はさらに３時間集め、そして血漿サンプルは３時間の終わりに集めた。
ａ．サンプル中の３−デオキシグルコソンは以下の実施例５に記載するように測定し、そして可変容量をクレアチニンに対して標準化した。尿の３−デオキシグルコソンの平均減少は、ソルビトールリシンにより５０％、マンニトールリシンにより３５％、そしてガラクチトールリシンにより３５％であった。血漿の３−デオキシグルコソンの減少は、ソルビトールリシンにより４０％、マンニトールリシンにより５８％、そしてガラクチトールリシンにより５０％であった。
ｂ．尿の３−デオキシグルコソンを減少させるためのメグルミンの使用：
３匹のラットは、上に挙げたリシン誘導体の代わりにメグルミン（１００マイクロモル）を腹腔内注射することを除き、直前のｂ）のように処置した。注射から３時間後、尿中の平均３−デオキシグルコソン濃度は４２％減少した。
［実施例５］

糖化されたタンパク質を摂取した後のヒトの尿中のＦＬ、３ＤＧおよび３ＤＦの上昇
ａ．糖化タンパク質を含む食品の調製：
２６０ｇのカゼイン、１２０ｇのグルコースおよび７２０ｍｌの水を混合して、均一な混合物を生成した。この混合物を金属プレートに移し、そして６５℃で６８時間加熱した。次いで生成したケーキを粗い粉末に微粉化した。

この粉末はケルダール法で測定した時、６０％タンパク質を含んだ。
ｂ．糖化リシン含量の測定：
上記工程ａで調製した１グラムの粉末は、６ＮＨＣｌで２０時間還流することにより加水分解した。生成した溶液をＮａＯＨ溶液でｐＨ１．８に合わせ、そして１００ｍｌに希釈した。フルクトースリシン含量はフロシン（フルクトースリシンの酸加水分解により得た生成物）としてアミノ酸分析機で測定した。このように、ケーキは５．５（重量／重量）％のフルクトースリシンを含有すると決定された。
ｃ．実験プロトコール：
有志者は２日間、フルクトースリシンを含まない食物を取り、次いで２２．５ｇの本明細書に記載したように調製した食品を摂取し、これで２グラム用量のフルクトースリシンを効果的に得た。尿は２時間間隔で１４時間採取し、そして最終的な採取を２４時間目に行った。
ｄ．尿中のＦＬ、３ＤＧおよび３ＤＦの測定：
ＦＬは４６℃でウォーターズ（Ｗａｔｅｒｓ）Ｃ１８フリーアミノ酸カラム、およびアセトニトリル−メチルアルコール−水（４５：１５：４０）からアセトニトリル−酢酸ナトリウム−水（６：２：９２）の勾配溶出系を１ｍｌ／分で使用して、ウォーターズ９９６ダイオードアレイを用いたＨＰＬＣにより測定した。定量は、メグルミンの内部標準を使用した。

３ＤＦはサンプルの脱イオン化後にＨＰＬＣにより測定した。分析は、ＰＡ１カラム（ダイオネックス：Ｄｉｏｎｅｘ）を使用し、そして３２ｍＭの水酸化ナトリウムで１ｍｌ／分の溶出を使用するダイオネックスＤＸ−５００ＨＰＬＣ系で行った。定量は、合成３ＤＦで毎日得た標準曲線から行った。

３ＤＧはサンプルの脱イオン化後にＧＣ−ＭＳにより測定した。３ＤＧは１０倍過剰のジアミノナフタレン（ＰＢＳ中）で誘導化した。酢酸エチル抽出により塩を含まない画分を得、これをＴｒｉ−Ｓｉｌ（ピアス：Ｐｉｅｒｃｅ）でトリメチルシリルエーテルに転換した。分析はヒューレット−パッカード（Ｈｅｗｌｅｔｔ−Ｐａｃｋａｒｄ）５８９０選択イオンモニタリングＧＣ−ＭＳシステムで行った。ＧＣは融合シリカキャピラリーカラム（ＤＢ−５、２５ｍｘ．２５ｍｍ）を用いて、以下の温度プログラムを使用して行った：注入口２５０℃、初期カラム温度１５０℃、これは１分間保持し、次いで２９０℃に１６℃／分で上昇させ、そして１５分間保持する。３ＤＧの定量にはＵ−１３Ｃ−３ＤＧの内部標準を使用する選択イオンモニタリングを使用した。

この実施例に記載した実験の結果を今、提示する。

図３に表すグラフは、糖化タンパク質を摂取した後の１名の有志者の尿中のＦＬ、３ＤＦおよび３ＤＧ生産を表す。３種すべての代謝産物の迅速な出現が明白である。３ＤＦおよび３ＤＧの両方が２４時間後でもわずかに上昇を示す。

図４に示すグラフは、７名の試験群の各員における３ＤＦの形成を表す。同様なパターンがすべての場合で見られた。図４に示すように、３ＤＦ排出はＦＬボーラスの約４時間後にピークとなり、そして３ＤＦのわずかな上昇がボーラスから２４時間後でも顕著である。
［実施例６］

糖化タンパク質が増加した食物摂取の効果：
Ｎ−アセチル−β−グルコサミニダーゼ（ＮＡＧａｓｅ）は、糖尿病では尿中に高濃度で排出される酵素である。これは尿細管傷害の初期マーカーであると考えられるが、尿中で増加するＮＡＧａｓｅの病因は十分に理解されていない。糖尿病におけるＮＡＧａｓｅの増加した尿への排出は、糖尿病により誘導される尿細管付近のリソソームの活性化により、細胞の破壊よりも尿中への排出が増加すると提案された。

ラットに０．３％の糖化されたタンパク質を含む食物または対照食餌を、数カ月間にわたり与えた。ＮＡＧａｓｅおよび３ＤＦの尿排出は、図５に示す様々な時点で測定した。尿中に排出された３ＤＧの量も測定した。

この実験から得られた結果は、すべての比較で３ＤＦおよびＮＡＧａｓｅレベルが対照よりも実験群で上昇することを示す。このように糖化されたタンパク質を与えた動物は、糖尿病で得られた結果と同様に過剰なＮＡＧａｓｅを尿中に排出する。ＮＡＧａｓｅ排出は対照動物と比較して実験群で約５０％まで増加した。実験動物は対照と比較して尿中３ＤＦにも５倍の上昇があった。図５および６に見ることができるように、尿中３ＤＦは３ＤＧと大変良く相関することが分かった。
［実施例７］

腎臓タンパク質の電気泳動的分析：
２匹のラットに毎日、５マイクロモルのＦＬまたはマンニトール（対照として使用した）のいずれかを５日間注射した。動物を屠殺し、そして腎臓を摘出し、そして皮質および髄質に切開した。組織は５容量の５０ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ（１５０ｍＭＫＣｌ、１５ｍＭＭｇＣｌ_２および５ｍＭＤＴＴ、ｐＨ７．５を含む）中で均一化した。細胞屑は１０，０００×ｇで１５分間遠心することにより除去し、次いで上清を１５０，０００×ｇで７０分間遠心した。可溶性タンパク質を１２％ポリアクリルアミドゲルならびに４〜１５および１０〜２０％の勾配ゲルでＳＤＳ−ＰＡＧＥにより分析した。

すべての場合で、マンニトールを注射した動物に比べた時、ＦＬを注射した動物の腎臓抽出物からは低分子量バンドが無いか、または視覚的に減っていた。
［実施例８］

３−Ｏ−メチルソルビトールリシン（構造ＸＩＸ）の合成
３−ＯＭｅグルコース（２５グラム、１２９ミリモル）およびα−Ｃｂｚ−リシン（１２グラム、４３ミリモル）を２００ｍｌの水−メタノール（２：１）に溶解した。水素化ホウ素ナトリウム（１０グラム、１６２ミリモル）を加え、そして反応物を室温で１８日間撹拌した。α−Ｃｂｚ−リシンの反応は、視覚化にニンヒドリンを使用する１−ブタノール−酢酸−水（４：１：１）を採用したシリカゲルでの薄層クロマトグラフィーによりモニタリングした。反応はα−Ｃｂｚ−リシンが無くなった時に完了させた。溶液をＨＣｌでｐＨ２に調整して過剰なシアノボロ水素化物を分解し、中和し、次いでＤｏｗｅｘ−５０（Ｈ＋）のカラム（５×５０ｃｍ）に乗せ、そしてカラムを水で洗浄して過剰な３−Ｏ−ｍｅ−グルコースを除去した。標的化合物は５％水酸化アンモニウムで溶出した。蒸発後、残渣を５０ｍｌの水−メタノール（２：１）に溶解し、そして１０％Ｐｄ／Ｃ（０．５グラム）を加えた。混合物を２０ｐｓｉの水素下で１時間振盪した。活性炭を濾去し、そして濾液を白色粉末（１０．７グラム、α−Ｃｂｚ−リシンに基づき７７％収量）に蒸発させ、これは逆相ＨＰＬＣにより分析した時、フェニルイソチオシアネート誘導体として均一であった。元素分析：Ｃ_１３Ｈ_２８Ｎ_２Ｏ_７ＣＨ_３ＯＨ２Ｈ_２Ｏに関する理論値Ｃ，４２．８６；Ｈ，９．１８；Ｎ，７．１４、測定値：Ｃ，４２．９４；Ｈ，８．５０；Ｎ，６．９５。

上記式（ＸＩＸ）の構造を有する他の具体的化合物は、例えば選択した窒素−または酸素−含有出発材料（これはアミノ酸、ポリアミノ酸、ペプチド等でよい）を、所望により当業者には周知な手順に従い化学的に修飾することができるフルクトースのような糖化剤を用いた糖化により作成することができる。
［実施例９］

ＦＬ３Ｐキナーゼ活性のさらなるアッセイ：
ａ．ストック溶液の調製：
１００ｍＭＨＥＰＥＳｐＨ８．０、１０ｍＭＡＴＰ、２ｍＭＭｇＣｌ_２、５ｍＭＤＴＴ、０．５ｍＭＰＭＳＦであるアッセイバッファー溶液を調製した。２ｍＭフルクトシル−スペルミンＨＣｌであるフルクトシル−スペルミンストック溶液を調製した。２ｍＭスペルミンＨＣｌである対照溶液を調製した。
ｂ．フルクトシル−スペルミンの合成：
フルクトシル−スペルミンの合成は、既知の手順（Ｊ．ＨｏｄｇｅａｎｄＢ．Ｆｉｓｈｅｒ，１９６３，ＭｅｔｈｏｄｓＣａｒｂｏｈｙｄｒ．Ｃｈｅｍ．，２：９９−１０７）を適合させることにより行った。スペルミン（５００ｍｇ）、グルコース（５００ｍｇ）およびピロ亜硫酸ナトリウム（８０ｍｇ）の混合物を、８：４：１（スペルミン：グルコース：ピロ亜硫酸塩）のモル比で５０ｍｌのメタノール−水（１：１）中に調製し、そして１２時間還流した。生成物を水で２００ｍｌに希釈し、そしてＤＯＷ−５０カラム（５×９０ｃｍ）に乗せた。未反応グルコースは、２カラム容量の水で除去し、そして生成物および未反応スペルミンを０．１ＭＮＨ_４ＯＨで除去した。生成物のプールしたピーク画分を凍結乾燥させ、そしてフルクトシル−スペルミンの濃度は、生成物の定量的^１３ＣＮＭＲスペクトル（ＮＭＲデータは、４５゜パルス、１０秒のリラクゼーションディレイ、ＮＯＥ脱カップリング無しで得た）中のＣ−２フルクトシルピークの積算を測定することにより決定した。
ｃ．精製を決定するためのキナーゼアッセイ：
１０μｌの酵素調製物、１０μｌのアッセイバッファー、１．０μＣｉの^３３ＰＡＴＰ、１０μｌのフルクトシル−スペルミンストック溶液および７０μｌの水を含むインキュベーション混合物を、３７℃で１時間インキュベーションした。インキュベーションの終わりに、９０μｌ（２×４５μｌ）のサンプルを２枚の２．５ｃｍ直径のリン酸セルロースディスク（ワットマン（Ｗｈａｔｍａｎ）Ｐ−８１）に滴下し、そして乾燥させた。このディスクを水で徹底的に洗浄した。乾燥後、ディスクをシンチレーションバイアル中に入れ、そしてカウントした。

各酵素画分は、適切なスペルミン対照を用いて２連でアッセイした。
［実施例１０］

糖化されたタンパク質食の試験動物で観察された腎臓の病状：
３匹のラットは糖化されたタンパク質食（２０％の全タンパク質：３％糖化）で８カ月間維持し、そして対照食で維持した同じ年齢の９匹のラットと比べた。糖化タンパク質食物は、非糖化タンパク質を３％糖化タンパク質に置き換えた標準栄養食からなった。糖化されたタンパク質はカゼインおよびグルコース（２：１）を一緒に混合し、水（乾燥材料の２Ｘの重量）を加え、そして混合物を６０℃で７２時間焼くことにより作成した。対照は水を使用せず、そしてカゼインおよびグルコースを焼成する前に混合しないことを除き、同様に調製した。

主な知見は、糖化した食物では動物が傷害を受けた糸球体が実質的に増加したことであった。これら動物に観察された典型的な病変は、ボーマン嚢に癒着した糸球体房の部分的硬化症、壁側上皮の細管の化生および間隙性線維症であった。糖化されたタンパク質食のすべての動物、および対照食の１匹の動物が１３％より高い傷害糸球体を示した。偶然による発生の確率は２％未満である。糸球体に観察される病理学的変化に加えて、多数のヒアリン化円柱が細管の中に観察された。これらのヒアリン化円柱は糖化食の動物でより多く見られたが、これらを定量しなかった。ＮＡＧａｓｅの上昇したレベルも、糖化食の動物で観察された。

この実験の結果に基づき、糖化食は試験動物に糖尿病の腎臓に見られるものに類似する一連の組織学的病変を発症させると思われた。
［実施例１２］

フルクトースリシン経路の発癌効果：
フルクトースリシン経路で形成される代謝産物の発癌性を調査するために、実験を腎臓ガンに対して高い感受性を持つラット種を用いて行った。

４匹のラットには糖化タンパク質食を、そして３匹のラットには対照食を与えた。この食物で１０週後、動物を屠殺し、そしてそれらの腎臓を調査した。

この食物の４匹のすべてで腎臓癌腫のサイズは１ｍｍより大きいことが見いだされ、一方、対照動物ではこの大きさの病変は無かった。偶然によるこの出来事の確率は、２％未満である。

データは、腎臓の細管の細胞中（ほとんどの腎臓癌腫の起源の細胞となることが知られている）に、食物中の糖化タンパク質に由来する過剰なフルクトースリシンに引き起こされる３ＤＧレベルの上昇があり、そして３ＤＧは細胞のＤＮＡと相互作用することができ、種々の突然変異性および最終的に発癌性の出来事を導くことができることをを示す。このプロセスは腎臓および至る所でヒトのガンの発症に重要となる可能性がある。
［実施例１３］

感受性ラットにおける腎細胞癌腫に及ぼす糖化タンパク質食の食物効果：
上記実験に加えて、糖化タンパク質食と腎細胞癌腫との間の関係を評価するための実験を行った。

腎臓癌腫の発症に感受性とする突然変異を有する２８匹のラットを、２つのコホートに分割した。１つのコホートは糖化タンパク質食を与え、そしてもう１つのコホートには対照食を与えた。糖化タンパク質食は３％の糖化タンパク質が加えられた標準栄養食からなった。糖化されたタンパク質はカゼインおよびグルコース（２：１）を一緒に混合し、水（乾燥した材料の２Ｘの重量）を加え、そして混合物を６０℃で７２時間焼くことにより作成した。対照は水を使用せず、そしてカゼインおよびグルコースを焼成する前に混合しないことを除き、同様に調製した。ラットは３週齢で隔離した直後にこの食物に配置し、そして続く１６週間、その食物を自由に与えて維持した。次いで動物を屠殺し、腎臓を固定し、そしてヘマトキシリンおよびエオシン切片を調製した。

組織学的サンプルは病理学者により調査された。４種類の病変が同定された。これらには：嚢腫；典型的には１０細胞未満の、大変少ない腫瘍−様細胞の集まり；小さい腫瘍、０．５ｍｍ以下；および０．５ｍｍより大きい腫瘍を含んだ。４種の病変は以下の表（表Ａ）に示すように対照食よりも糖化食の動物で多く観察された。

結果をまとめるために、腎臓切片あたりの病変の平均数を各食物についてコンピューターで計算した。対照および糖化食について、それぞれ０．８２±０．７４および２．４３±２．３３であった。偶然によるこの発生の見込みは、約２／１００，０００である。

これらの結果は、リシン回収経路（この発見が本発明の基にある）の効果が突然変異を引き起こすことにも広がり、そしてこれが発癌効果も生じるという前提を強く支持する。これらの結果は腎臓ならびにこの経路が同様の効果を有することができる他の器官におけるガンを減らすために、この経路を阻害する治療法および作用物質の開発に基礎を提供する。
［実施例１４］

３−デオキシ−フルクトースの尿排出は、Ｉ型糖尿病患者のミクロアルブミン尿に対する進行の指標である：
本明細書で説明するように、糖化中間体、３デオキシ−グルコソン（３ＤＧ）およびその還元的解毒産物、３デオキシ−フルクトース（３ＤＦ）の血清レベルは、糖尿病で上昇する。これら化合物のベースラインレベルとその後のミクロアルブミン尿（ＭＡ）の進行との間の相関が、ジョスリン糖尿病センター（ＪｏｓｌｉｎＤｉａｂｅｔｅｓＣｅｎｔｅｒ）で、インスリン依存性糖尿病（ＩＤＤＭ）およびミクロアルブミン尿（１９９０〜１９９３年の間に開始した２年間のベースライン中の多くの測定に基づく）の見込み患者の３９名の個体群で調査され、そしてＡＣＥインヒビターについては調査しなかった。

無作為なスポットでの尿中の３ＤＦおよび３ＤＧのベースラインを、ＨＰＬＣおよびＧＣ−ＭＳで測定した。続く４年間に高レベルのＭＡまたはタンパク質尿のいずれかに進行した個体（ｎ＝２４）は、非進行者（ｎ＝１５）に比べて、有意に高いベースラインレベルのｌｏｇ３ＤＦ／尿クレアチニン比を有した（ｐ＝０．０２）。

この実験で決定されたベースラインレベルは進行者での約０．２４マイクロモル／ｍｇクレアチニン対非進行者での約０．１８マイクロモル／ｍｇクレアチニンであった。ベースライン３ＤＧ／尿クレアチニン比は群間で変わらなかった。ＨｇＡ_Ｉｃ（糖化ヘモグロビンの主要画分）のベースラインレベルの調整は、これらの知見を実質的に変えなかった。これらの結果は糖尿病について、さらに尿の３ＤＦと腎臓の合併症の進行との間の関連の証拠を提供する。
ａ．３−デオキシフルクトースの定量：
サンプルは試験サンプルの０．３ｍｌのアリコートを、０．１５ｍｌのＡＧ１−Ｘ８および０．１５ｍｌのＡＧ５０Ｗ−Ｘ８樹脂を含むイオン交換カラムに通すことにより処理した。次いでカラムは０．３ｍｌの脱イオン水で２回洗浄し、自由な液体を除去するために吸引し、そして０．４５ｍｍのミリポア（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）フィルターを通して濾過した。

処理したサンプルの注入物（５０μｌ）は、ダイオネックスＤＸ５００クロマトグラフィーシステムを使用して分析した。ｃａｒｂｏｐａｃＰＡ１アニオン−交換カラムは、１６％水酸化ナトリウム（２００ｍＭ）および８４％脱イオン水からなる溶出液を用いて使用した。３ＤＦはパルス化電流測定検出器を使用して電気化学的に検出した。予想する３ＤＦ濃度に広がる標準３ＤＦ溶液は、各々の未知のサンプルの前および後の両方で流した。
ｂ．尿中クレアチニンの測定：
尿中クレアチニン濃度は、プレートリーダー用に変更した終点比色法により測定した（シグマ診断キット５５５−Ａ）。クレアチニン濃度評価して、中に存在する代謝産物を測定するために、尿用量を標準化した。
ｃ．尿中アルブミンの測定：
被検体の尿中のアルブミンレベルを評価するために、スポット尿を集め、そしてイムノエフェロメトリー（ｉｍｍｕｎｏｅｐｈｒｌｏｍｅｔｒｙ）をＮ−アルブミンキット（ベーリング：Ｂｅｈｒｉｎｇ）を用いてＢＮ１００装置で行った。抗−アルブミン抗体は市販されている。尿中のアルブミンレベルは限定するわけではないが、ＥＬＩＳＡアッセイ、ラジオイムノアッセイ、ウエスタンおよびドットブロッティングを含む任意の適切なアッセイにより評価することができる。

ジョスリン糖尿病センターの患者の実験で得られたデータに基づき、上昇したレベルの尿中の３ＤＦは、糖尿病のミクログロブリン尿の進行に関連することが明らかである。この考察により、糖尿病に罹患している患者における重篤な腎臓合併症の進行の見込みを評価するための新規な診断パラメーターが提供される。
［実施例１５］

３−Ｏ−メチルソルビトールリシンは、正常および糖尿病ラットにおける３ＤＧの全身レベルを下げる
１２匹の糖尿病ラットのコホートを、６匹の２群に分割した。第１群は塩水注射のみを受け、そして第２群は塩溶液中の３−Ｏ−メチルソルビトールリシン（５０ｍｇ／ｋｇ体重）の注射を受けた。同じ手順を１２匹の非糖尿病ラットのコホートについて行った。

表Ｂにまとめるように、１週間内に３−Ｏ−メチルソルビトールリシン処置が、糖尿病および非糖尿病の両方のラットで各塩水対照と比べて、血漿３ＤＧレベルを有意に下げた。

３−Ｏ−メチルソルビトールリシンが全身性３ＤＧレベルを下げる能力は、腎症以外の糖尿病の合併症（例えば網膜症および大動脈が堅くなること）もアマドラーゼインヒビター治療により制御できることを示唆している。
［実施例１６］

インビボで３−Ｏ−メチルソルビトールリシンの取り込み部位は腎臓である：
６匹のラットに１３．５ナノモル（４．４ｍｇ）の３−Ｏ−メチルソルビトールリシンを腹腔内注射した。尿を３時間集め、その後、ラットを屠殺した。分析する組織を取り出し、そして液体窒素でフリーズクランプした。組織の過塩素酸抽出物を代謝産物分析に使用した。調査する組織は、脳、心臓、筋肉、座骨神経、脾臓、膵臓、肝臓および腎臓から摘出した。血漿も分析した。

３−Ｏ−メチルソルビトールリシンを含むことが分かった唯一の組織は腎臓の組織であった。尿も３−Ｏ−メチルソルビトールリシンを含んだが、血漿は含まなかった。尿および腎臓から回収した注射容量の割合は、以下の表Ｃに示すように３９から９６％の間で変動した。

［実施例１７］

大部分の３ＤＧ生産の原因となるアマドラーゼ／フルクトサミンキナーゼ活性：
３ＤＧの酵素的生産は、それらの３ＤＧ生産における重要性を評価するために、種々の重要な成分（１０ｍＭＭｇ−ＡＴＰ、部分精製アマドラーゼ、２．６ｍＭＦＬ）を反応から省略したインビトロアッセイで示された。結果は、３ＤＧ生産がアマドラーゼおよびその基質を含む腎臓抽出物の存在下で２０倍高い（表Ｄ、反応１および３を比較されたい）。明らかに、大部分の３ＤＧ生産はアマドラーゼの存在下で酵素的に媒介されている。

［実施例１８］

コラーゲンの架橋化に及ぼす３ＤＧ、および３ＤＧ阻害の効果：
コラーゲンは皮膚に高レベルで存在する。このために、３ＤＧがどのような効果をコラーゲンの架橋化に有するのかを決定した。

コラーゲンＩはインビトロで３ＤＧの存在または不存在下でインキュベーションした。ウシの皮膚のＩ型コラーゲン（１．３ｍｇ；シグマ（Ｓｉｇｍａ））を、２０ｍＭＮａ−ホスフェートバッファー、ｐＨ７．２５中で、単独または５ｍＭ３ＤＧまたは５ｍＭ３ＤＧに１０ｍＭのアルギニンを加えて、１ｍｌの総容量にて３７℃で２４時間インキュベーションし、次いで凍結、そして凍結乾燥した。残渣を０．５ｍｌの７０％ギ酸に溶解し、そして臭化シアンを加えた（２０：１、重量／重量）。この溶液を３０℃で１８時間インキュベーションした。サンプルは０．１２５ＭＴｒｉｓ、ｐＨ６．８（２％ＳＤＳおよび２％グリセロールを含有する）に対して、１０，０００の分子量カットオフを有する透析チューブ中で透析した。サンプルはすべて１ｍｌの容量に調整した。コラーゲンの架橋化の程度は、コラーゲンの移動度に及ぼす３ＤＧの効果により決定されるので、等容量のサンプルを適用し、そしてＳＤＳ−ＰＡＧＥ電気泳動（１６．５％Ｔｒｉｓ−トリシンゲル）により分析することにより決定した。

３ＤＧでのコラーゲン処理は、コラーゲンがまるでより高い分子量を有する（これは架橋の指標である）かのように移動させたことが分かった。図１２の銀染色したゲルの像は、より少ない高分子量バンドが、コラーゲンのみを含む群あるいはコラーゲンに３ＤＧを加え、アルギニンを加えた群にあることを示す。より高分子量のバンドが、３ＤＧインヒビターの不存在下、３ＤＧで処理した群に存在する。３ＤＧのみで処理したサンプル中でタンパク質がより多いと思われる。すべての３種のサンプルが同じサンプル量（ｍｏｕｎｔ）から始めたので、いかなる理論にも拘束されることなく、より多くの架橋化が生成されるほど、より高分子量タンパク質が保持されるので、透析中に少量のペプチドが３ＤＧ処理サンプルから漏れたと結論することができる。換言すると、対照およびアルギニンを加えた３ＤＧの群では、より低分子量のペプチドが透析中に拡散したので、タンパク質が少ないようである。
［実施例１９］

皮膚における３ＤＧの局在性：
本開示に記載するように本発明は、皮膚における３ＤＧの存在を初めて確認する。

マウスの皮膚モデルを使用した。１センチメートル（１ｃｍ）四方の皮膚を調製し、そして過塩素酸での抽出にかけた。３ＤＧは上記のように測定した。６匹のマウスを使用し、そして皮膚で検出される３ＤＧの平均量は１．４６＋／−０．３μＭであった。この値は同じ動物で検出される３ＤＧの血漿濃度（０．１９＋／−０．０５μＭ）よりも実質的に高かった。これらのデータおよび以下の実施例２０に記載するデータは、皮膚における高レベルの３ＤＧは、皮膚における３ＤＧの生産によることを示唆している。
［実施例２０］

皮膚におけるアマドラーゼｍＲＮＡの局在性：
高レベルの３ＤＧが皮膚で見いだされたが（前述の実施例を参照にされたい）、３ＤＧが局所的に形成されるのかどうか、および皮膚は３ＤＧを酵素的に生産する能力を有するのかどうかは分からなかった。アマドラーゼｍＲＮＡの存在を分析し、そして皮膚に存在する３ＤＧを生産する皮膚の能力の１つの尺度として利用した（前述の実施例を参照にされたい）。

ヒト腎臓および皮膚から単離したポリＡ＋メッセンジャーＲＮＡを、ストラタジーン（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）から購入した。ｍＲＮＡはＲＴ−ＰＣＲ手法で使用した。アマドラーゼについて公開された配列（Ｄｅｌｐｉｅｒｒｅｅｔａｌ．，２０００，Ｄｉａｂｅｔｅｓ４９：１０：１６２７−１６３４；Ｓｚｗｅｒｇｏｌｄｅｔａｌ．，２００１，Ｄｉａｂｅｔｅｓ５０：２１３９−２１４７）を使用して、遺伝子（ｂｐ９３０−９１２）の３’末端に対するリバースプライマーをＲＴにかけて、ＲＣＲ用のｃＤＮＡ鋳型を作成した。この同じプライマーを、アマドラーゼ遺伝子（ｂｐ４１２−４３１）の中央に由来するフォワードプライマーと一緒に使用して、ｃＤＮＡ鋳型からアマドラーゼ遺伝子を増幅させた。ＰＲＣの産物は５１９ｂｐ断片となるはずである。ヒトの皮膚および腎臓サンプルをＲＴ−ＰＣＲにかけ、アガロースゲル電気泳動により分析し、そしてｃＤＮＡ鋳型を含まない対照も分析した。

結果は皮膚が実際にアマドラーゼｍＲＮＡを発現することを示す。引き続くタンパク質の発現が皮膚における３ＤＧ生産の原因であろう。予想どおり、５１９ｂｐ産物が観察された（図１３を参照にされたい）。５１９ｂｐの断片は腎臓（レーン１）で見いだされただけでなく、皮膚（レーン３）でも見いだされた。この５１９ｂｐ断片はｃＤＮＡ鋳型を受容しなかった群では検出されなかった（レーン２および４）。
［実施例２１］

インビトロの腎臓細胞に及ぼすフルクトースリシンの効果：
上記のように、糖化タンパク質が高い食物（例えばフルクトースリシン）は、インビボで代謝に甚大な効果を有する。したがってフルクトースリシンの効果をインビトロの腎臓細胞について直接試験した。

結果は、インビトロの腎臓細胞に投与したフルクトースリシンが細胞中のＩＶ型コラーゲンレベルの上昇を引き起こすことを示す。ＩＶ型コラーゲン生産を、マウスの糸球体間質細胞で測定した。対照（１０％グルコースで成長させた）は、１０，０００細胞あたり３００ｎｇのＩＶ型コラーゲンを生産し、一方、フルクトースリシンで処理した細胞（１０ｍＭのグルコースを含む５または１０ｍＭフルクトースリシン）は５６０および１１００ｎｇ／１０，０００細胞を生産した。
［実施例２２］

アマドラーゼｍＲＮＡおよびタンパク質を阻害することによる３ＤＧの阻害：
３ＤＧ合成は、その合成を導く酵素的経路の成分を阻害することにより阻害することができる。これは幾つかの方法により行うことができる。例えば本明細書でアマドラーゼと呼ぶ３ＤＧの合成を導く酵素（フルクトサミン−３−キナーゼ）は上記の化合物を使用して作用を抑制することができるが、上記のように化合物以外でも、そのメッセージまたはタンパク質の合成を遮断するか、あるいはタンパク質自体を遮断することによっても阻害することができる。

アマドラーゼｍＲＮＡおよびタンパク質合成および機能は、転写もしくは翻訳インヒビター、抗体、アンチセンスメッセージもしくはオリゴヌクレオチド、または競合的インヒビターのような化合物または分子を使用して阻害することができる。
核酸およびタンパク質配列
以下はアマドラーゼ（フルクトサミン−３−キナーゼ）、寄託番号ＮＭ０２２１５８（配列番号１）（図１０を参照にされたい）に関する９８８ｂｐのｍＲＮＡに由来するＤＮＡ配列を表す：

以下はヒトのアマドラーゼ（フルクトサミン−３−キナーゼ）、寄託番号ＮＰ０７１４４１（配列番号２）（図１１を参照にされたい）の３０９アミノ酸残基配列を表す：

上記に同定される配列は、Ｄｅｌｐｉｅｒｒｅｅｔａｌ．（２０００，Ｄｉａｂｅｔｅｓ４９：１６２２７−１６３４）により提出された。Ｓｚｗｅｒｇｏｌｄｅｔａｌ．（２００１，Ｄｉａｂｅｔｅｓ５０：２１３９−２１４７）の配列データは、Ｄｅｌｐｉｅｒｒｅｅｔａｌ．の配列データと非常に一致する。例えばＳｚｗｅｒｇｏｌｄｅｔａｌ．（２００１，Ｄｉａｂｅｔｅｓ５０：２１３９−２１４７）により推定されるタンパク質は、Ｄｅｌｐｉｅｒｒｅｅｔａｌ．（２０００，Ｄｉａｂｅｔｅｓ４９：１６２２７−１６３４）のクローン化されたヒトフルクトサミン−３−キナーゼ配列に３０９アミノ酸残基の３０７で同一である。このようにいずれのグループの公開された配列の信頼性には問題はないが、タンパク質の配列を使用する時に問題が起こらないことを確実にするために、２つの公開された配列間で異ならない配列の部分のみを使用する。
［実施例２３］

汗中のアルファ−ジカルボニル糖の存在
本明細書に記載するようにアルファ−ジカルボニル糖は皮膚に存在するが、それらの汗中の存在は決定されなかった。皮膚の機能の１つは排出器官として作用することであり、したがってアルファ−ジカルボニル糖が汗中に排出されるかどうかを決定した。

ヒトの汗のサンプルを３ＤＧの存在について上記のように分析した。４名の個体に由来するサンプルを得、そして３ＤＧがそれぞれ０．１８９、２．８、０．３１２および０．１１μＭのレベルで存在することが測定された。したがってこの結果は汗に３ＤＧが存在することを示す。
［実施例２４］

皮膚の弾力に及ぼすＤＹＮ１２（３−Ｏ−メチルソルビトールリシン）の効果
アマドラーゼの低分子量インヒビターであるＤＹＮ１２の投与は、糖尿病および非糖尿病動物の血漿中の３ＤＧレベルを低下させる（Ｋａｐｐｌｅｒｅｔａｌ．，２００２，ＤｉａｂｅｔｅｓＴｅｃｈｎｏｌ．Ｔｈｅｒ．，Ｗｉｎｔｅｒ３：４：６０６−６０９）。

実験はＤＹＮ１２が糖尿病に関連する皮膚の弾力の損失に及ぼす効果を測定するために行った。このために、２群のＳＴＺ−糖尿病ラットおよび２群の正常ラットをＤＹＮ１２または塩水の処置に供した。１群のＳＴＺ−糖尿病ラット（ｎ＝９）は、１群の正常ラットが受けたように（ｎ＝６）、５０ｍｇ／ｋｇのＤＹＮ１２の皮下注射を８週間毎日受けた。１群の対照糖尿病ラット（ｎ＝１０）および１群の正常ラット（ｎ＝６）は、ＤＹＮ１２の代わりに塩水を受けた。１匹のラットは血中グルコースの読みが他の糖尿病ラットと調和しないので（低すぎる）、２週間後に糖尿病ＤＹＮ１２群から除いた。

皮膚の弾力測定デバイスを利用するサイバーダーム（ＣｙｂｅｒＤＥＲＭ）社の技術に基づく非侵襲的手法を使用して、ＤＹＮ１２処置が皮膚の弾力に及ぼす効果を試験した。この手法は皮膚をずらす（ｄｉｓｐｌａｃｅ）ために必要な真空の引っ張り（ｐｕｌｌ）の量に基づく皮膚の弾力の非侵襲的測定を提供する。吸引カッププローブは気密な密閉を形成するために剃った皮膚の領域に付けられる。次いで皮膚がプローブの内側に配置されたセンサーを越えて置き換わるまで、吸引カップの内側の皮膚の領域に真空を適用する。したがって皮膚を置き換えるために必要な圧力が高いほど、皮膚の弾力は低い。

データは８週間の処置後、ＤＹＮ１２で処置した糖尿病ラットの皮膚の弾力が、塩水で処置した糖尿病動物の皮膚の弾力よりも大きかったことを示す。図１４に見られるように、塩水で処置した糖尿病ラットの皮膚をずらすために必要な圧力の量（７．２＋／−３．０ｋＰＡ）は、ＤＹＮ１２で処置した糖尿病動物の皮膚をずらすために必要な圧力（３．２＋／−１．２ｋＰＡ）よりも約２〜２．２５倍高かった。またＤＹＮ１２で処置した糖尿病ラットで観察された弾力値は、塩水で処置した非糖尿病ラットで見られる値と統計的に異ならなかった（ｐ＝０．３９）（表Ｅ）。このように、ＤＹＮ１２（３ＤＧの間接的インヒビター）による糖尿病動物の処置の結果は、塩水のみを受けた糖尿病動物の皮膚よりも大きな弾力を持つ皮膚をもたらした。

上記のデータは、糖尿病ラットへのＤＹＮ１２の投与が、未処置の糖尿病ラットで典型的に観察される皮膚の弾力の損失（例えば強皮症および皮膚の基底膜の肥厚化）を防止することを示し、これは糖尿病で見られる過剰な３ＤＧが弾力の損失の原因であることの証拠である。本明細書に開示するデータは、さらに３ＤＧレベルを下げることが正常な個体の皮膚の弾性を維持するためにも役立つことができることを示す。

皮膚の弾力の測定は上記のような被検体についても行ったが、測定前に試験動物を沈静化しなかった。図１５は被検体の後脚について測定した皮膚の弾力測定を具体的に説明し、この間、個体は警戒し、そして技師により制止されていた。

これらの実験で、動物は荒々しい戦闘を制止され、そして結果が異なる。薬剤処置無しの糖尿病動物は、吸引カップを「引き離す」能力が低いことが示され、したがって「引っ張りに対する抵抗」が低いことを示した。一方、薬剤を受けている糖尿病動物および標準動物の両方が、吸引カップから引っ張るより大きな能力を有し、そして両群の動物が堅さおよびより大きな筋肉の張力を有した。これは酵素の阻害、そして恐らくは３ＤＧの不活性化が、糖尿病状態を典型的に表すミクロ循環の悪化および神経−悪化をゆるやかにすることを示している。
［実施例２５］

強皮症の皮膚中の３ＤＧレべル
以前、本明細書のいたるところで開示した方法に従い、正常な皮膚が以下の濃度の３ＤＧを有することを測定した（数名の個体からのデータ）：０．９μＭ、０．６μＭおよび０．７μＭ。数名の強皮症患者に由来する数種の皮膚サンプルを同様にアッセイし、そして以下のレベルの３ＤＧを有した：１５μＭ、１３０μＭおよび３．５μＭ。したがってこれらのデータは、強皮症患者の皮膚における３ＤＧのレベルが、正常なヒトの皮膚中の３ＤＧレベルに比べて、有意に上昇していることを示す。

本明細書に引用した各々の、そしていずれの特許、特許出願および公報開示も全部、参考文献により本明細書に編入する。

本発明は具体的な態様を参照にして開示してきたが、本発明の他の態様および変更が当業者により本発明の真の精神および範囲から逸脱することなく考案できることは明白である。添付する特許請求の範囲は、すべてのそのような態様および均等な変更を含むと解釈されることを意図する。

前述の要約、ならびに本発明の好適な態様の詳細な説明は、添付する図面と一緒に読む時により良く理解されるだろう。本発明を具体的に説明する目的で、現在好適な態様を図面で示す。しかし本発明は示した正確な取り合わせおよび手段に限定されないと理解されるべきである。図面では：
タンパク質の架橋化を導く多段階反応が関与する最初の段階を表す概略図である。リシン回収経路が関与する反応を具体的に説明する概略図である。フルクトース−リシン（ＦＬ）はアマドラーゼのようなフルクトサミンキナーゼによりリン酸化されて、フルクトースリシン−３−ホスフェート（ＦＬ３Ｐ）を形成する。ＦＬ３Ｐは自然にリシン、Ｐｉおよび３ＤＧに分解する（Ｂｒｏｗｎｅｔａｌ．、米国特許第６，００４，９５８号明細書）。２グラムのＦＬを与えた１個体に由来し、そして２４時間追跡した３ＤＦ、３ＤＧおよびＦＬの経時的変動を示す尿のプロフィールを表すグラフである。２グラムのフルクトースリシンを与えた７名の有志者に由来する経時的な尿中への３ＤＦ排出を表すグラフである。対照動物および０．３％糖化タンパク質（Ｂｒｏｗｎｅｔａｌ．）を給餌して維持した実験群における３ＤＦおよびＮ−アセチル−β−グルコサミニダーゼ（ＮＡＧ）レベルをグラフで比較する。対照食または糖化タンパク質（Ｂｒｏｗｎｅｔａｌ．、米国特許第６，００４，９５８号明細書）の濃度が高い食物のいずれかを与えたラットの尿中の３ＤＦと３ＤＧレベルとの間の直線関係を示すグラフである。図７Ａおよび図７Ｂを含んでなり、断食レベルの３ＤＦに対してプロットした、正常個体および糖尿病患者における断食レベルの尿中３ＤＧをグラフで表す。図８Ａおよび図８Ｂを含んでなり、高レベルの糖化タンパク質を含む食物が腎臓に及ぼす効果を具体的に説明する顕微鏡写真の像を表す。過ヨウ素酸およびシッフ（ＰＡＳ）染色した腎臓切片は、穏やかに糖化したタンパク質（図８Ａ）が高い食物を与えたラット、および標準食物（図８Ｂ）を与えたラットから調製した。この実験では、非糖尿病ラットに３％糖化タンパク質を含む食物を８カ月間与えた。この食物はＦＬおよびその代謝産物のレベルが実質的に上昇した（＞腎臓で３倍）。図８Ａは糖化した食物を８カ月間与えたラットに由来する糸球体の顕微鏡写真の像である。糸球体はボーマン嚢への硬化領域の癒着を含む糸球体房の部分的硬化症を示す（左下）。また壁側上皮の細管の化生が約９から３時にある。これらの硬化性および化生性病変は、糖尿病の腎臓疾患で観察される病状の記憶（ｒｅｍｉｎｉｓｃｅｎｔ）である。図８Ｂは対照食物で８カ月間のラットからの像であり、組織学的に正常な糸球体と比較する。ＦＬ給餌後の腎臓に由来する糸球体および細管画分中の３ＤＧおよび３ＤＦレベルのグラフ的比較である。ヒトアマドラーゼ（フルクトサミン−３−キナーゼ）の核酸配列（配列番号１）、ＮＣＢＩ寄託番号ＮＭ０２２１５８を表す像である。染色体１７上のヒト遺伝子に関する寄託番号は、ＮＴ０１０６６３である。ヒトアマドラーゼ（フルクトサミン−３−キナーゼ）のアミノ酸配列（配列番号２）、ＮＣＢＩ寄託番号ＮＰ０７１４４１を表す像である。３ＤＧのコラーゲンの架橋化に及ぼす効果、およびアルギニンによる３ＤＧが誘導する架橋の阻害を表すポリアクリルアミドゲルの像である。Ｉ型コラーゲンを、アルギニンの存在または不存在下で３ＤＧにより処理した。サンプルを臭化シアン（ＣＮＢｒ）消化に供し、１６．５％のＳＤＳＴｒｉｓ−トリシンゲルで電気泳動を行い、次いでゲルを銀染色技術を使用して処理してタンパク質を視覚化した。レーン１は分子量マーカー標準を含む。レーン２および５はＣＮＢｒ消化後の１０および２０μｌのコラーゲン混合物を含む。レーン３および６は３ＤＧで処理し、そしてＣＮＢｒで消化し、それぞれ１０および２０μｌをのせたコラーゲン混合物を含む。レーン４および７は、それぞれ５ｍＭ３ＤＧおよび１０ｍＭアルギニンとインキュベーションし、次いでＣＮＢｒで消化し、そして１０および２０μｌをのせたコラーゲンの混合物を含む。アマドラーゼ／フルクトサミンキナーゼのｍＲＮＡがヒトの皮膚に存在することを示すアガロースゲルの像である。ＲＴ−ＰＣＲを利用し、そして公開されたアマドラーゼ配列をＰＣＲ用の鋳型を調製するための基礎として使用した。ＰＣＲ反応に使用したプライマー（実施例を参照にされたい）に基づき、ゲル中に５１９ｂｐ断片の存在はアマドラーゼｍＲＮＡを存在を示す。５１９ｂｐ断片により示されるアマドラーゼｍＲＮＡの存在に基づくように、アマドラーゼの発現が腎臓（レーン１）および皮膚（レーン３）で見いだされた。５１９ｂｐ断片は、プライマーを含むが鋳型は含まない対照レーン（レーン２および４）で見いだされなかった。レーン５はＤＮＡ分子量マーカーを含んだ。ＤＹＮ１２（３−Ｏ−メチルソルビトールリシン）処置が皮膚の弾力に及ぼす効果のグラフによる具体的説明である。糖尿病または正常ラットをＤＹＮ１２（５０ｍｇ／ｋｇ毎日）または塩水で８週間処置し、次いで皮膚の弾力試験にかけた。使用した４群には、糖尿病対照（塩水注射；黒色棒）、ＤＹＮ１２で処置した糖尿病（白抜き棒）、正常動物対照（塩水注射；点描棒）およびＤＹＮ１２で処置した正常動物（斜線棒）を含んだ。データはキロパスカル（ｋＰＡ）で表す。ＤＹＮ１２（３−Ｏ−メチルソルビトールリシン）処置が皮膚の弾力に及ぼす効果のグラフによる具体的説明である。糖尿病または正常ラットをＤＹＮ１２（５０ｍｇ／ｋｇ毎日）または塩水で８週間処置し、次いで皮膚の弾力試験にかけた。使用した４群には、糖尿病対照（塩水注射；黒色棒）、ＤＹＮ１２で処置した糖尿病（白抜き棒）、正常動物対照（塩水注射；点描棒）およびＤＹＮ１２で処置した正常動物（斜線棒）を含んだ。データはキロパスカル（ｋＰＡ）で表し、そして各特定群の被検体で得られた結果の平均として表す。測定は被検体の後脚で取り、そして技師により抑えられた覚醒している動物から取った。腎臓の新規代謝経路の図解による具体的説明である。腎臓中の３ＤＧの形成は内因性の糖化タンパク質または食物起源の糖化タンパク質のいずれかを使用して起こる。内因的経路を通って、グルコースおよびリシンの化学的組み合わせが糖化タンパク質を導く。あるいは糖化タンパク質は食物起源からも得ることができる。糖化タンパク質の異化はフルクトースリシンの生産をもたらし、これが続いてアマドラーゼにより作用する。アマドラーゼ、フルクトサミン−３−キナーゼは、両経路の一部である。アマドラーゼはフルクースリシンをリン酸化してフルクトースリシン−３−ホスフェートを形成し、これが次いで３−デオキシグルコソン（３ＤＧ）に転換され、リシンおよび無機ホスフェートの副産物を生成する（大変少量のフルクトースリシン（＜５％全フルクトースリシン）が非酵素的経路により３ＤＧに転換され得る）。次いで３ＤＧは３−デオキシフルクトース（３ＤＦ）への転換により解毒されるか、あるいは活性酸素種（ＲＯＳ）および後期糖化反応生成物（ＡＧＥｓ）の生成に進む。図１６に示すように、ＤＹＮ１２（３−Ｏ−メチルソルビトールリシン）は、フルクトースリシンに対するアマドラーゼの作用を阻害し、そしてＤＹＮ１００（アルギニン）は３ＤＧが媒介するＲＯＳおよびＡＧＥｓの生産を阻害する。活性酸素種（ＲＯＳ）により影響を受ける疾患状態の図解による具体的説明である。３ＤＧはＲＯＳを直接生成することができ、またはＲＯＳを形成するように進行する後期糖化反応生成物を生成することができる。ＲＯＳは次いで図に示すような種々の疾患状態を進行させる原因となる。本発明の態様に従い、付加物形成および付加物形成の阻害の両方の図解による具体的説明である。３ＤＧはタンパク質上に１級アミノ基と付加物を形成することができる。タンパク質−３ＤＧ付加物形成はシッフ塩基を生成し、この平衡は図１８に示される。タンパク質−３ＤＧシッフ塩基付加物は、上記の第１タンパク質−３ＤＧシッフ塩基付加物に関与した３ＤＧ分子による第２のタンパク質−３ＤＧ付加物の形成により架橋化タンパク質の形成に進むことができ、これにより「３ＤＧブリッジ」が１つのタンパク質の２つの１級アミノ基間に形成する（経路“Ａ”）。あるいはそのような架橋は２つの離れたタンパク質の２つの１級アミノ基の間で起こり、２つの離れたタンパク質の２つの１級アミノ基の間に「３ＤＧブリッジ」を形成し、タンパク質分子の架橋対を形成することができる。第１のタンパク質−３ＤＧシッフ塩基付加物が、経路“Ａ”により示されるような架橋化タンパク質を形成するように進むことを防ぐことができる。例えばそのようなタンパク質の架橋化は、図１８の経路“Ｂ”で具体的に説明するようにグルタチオンまたはペニシラミンのような求核試薬により阻害することができる。そのような求核試薬は、第２シッフ塩基を形成する原因となる３ＤＧ炭素原子と反応し、その炭素原子がシッフ塩基タンパク質−３ＤＧ付加物を形成することを防止し、そしてこれによりタンパク質の架橋化を防止する。

Claims

哺乳動物における皮膚の老化または皮膚の皺を処置するための製薬学的製剤であって、メグルミンまたはその塩を有効成分として含んでなり、かつ、局所経路を介して投与されるためのものであり、かつ、ローション、クリーム、ゲル、塗布剤、軟膏、ペースト、溶液、粉末および懸濁液よりなる群から選ばれる、上記製薬学的製剤。
請求項１に記載の製薬学的製剤であって、保湿剤、湿潤剤、粘滑剤、油、水、乳化剤、増粘剤、希釈剤、表面活性剤、香料、保存剤、抗酸化物質、水分屈性剤、錯化剤、ビタミン、ミネラル、浸透強化剤、化粧用補助剤、漂白剤、脱色素剤、発泡剤、コンディショナー、粘度調整剤、緩衝剤およびサンスクリーンをさらに含んでなる、上記製薬学的製剤。
請求項１に記載の製薬学的製剤であって、メグルミンまたはその塩が、１日１回、１日２回、１日３回、１日４回、１週間に１回、１週間に２回、１カ月に１回および１カ月に２回からなる群から選択される頻度で投与される、上記製薬学的製剤。
請求項１に記載の製薬学的製剤であって、メグルミンまたはその塩が１ｎｇ／ｋｇ／使用〜１００ｇ／ｋｇ／使用の投薬用量範囲で投与される、上記製薬学的製剤。
請求項１に記載の製薬学的製剤であって、メグルミンまたはその塩が１ｎｇ／ｋｇ／使用〜１００ｍｇ／ｋｇ／使用の投薬用量範囲で投与される、上記製薬学的製剤。
請求項１に記載の製薬学的製剤であって、メグルミンまたはその塩が放出制御製剤として投与される、上記製薬学的製剤。
請求項１に記載の製薬学的製剤であって、メグルミンまたはその塩が製剤の０．０００１重量％〜１５重量％を構成する、上記製薬学的製剤。