JP5160428B2 - 増殖培地を含むカセット - Google Patents

Description

本発明は、細胞培養および検出の分野に関する。

発明の背景
多くの産業、特に、食品、飲料、ヘルスケア、電子、および製薬産業においては、細菌、酵母、またはカビのような微生物による汚染の程度について試料を迅速に解析することが必須である。

微生物計数またはコロニーカウンティングと呼ばれる一つの微生物培養技術は、試料における微生物細胞の数を定量化する。インサイチュー微生物複製に基づく微生物計数法は、一般に、試料における各微生物細胞について一つの視覚的に検出可能な「コロニー」を生じる。従って、見えるコロニーを計数することによって、微生物学者は、試料における微生物細胞の数を正確に測定することができる。微生物計数を行うために、細菌細胞はペトリ皿中の栄養寒天（「寒天プレート」）の表面に散布され得、インサイチュー細菌複製を許容する条件の下でインキュベーションされ得る。微生物計数は、単純であり、感度が極端に高く、安価であり、かつ定量的であるが、また時間もかかる。長い時間が必要であることによって、ヘルスケアおよび製造におけるコストが増大する。より迅速な計数法が開発されてきたが、それらは、必要な時間を短縮する一方で、微生物培養の一つまたは複数の重大な利点を犠牲にしてきた。

微生物計数について、追加的な培養装置および方法が必要である。

発明の概要
本発明は、微生物のための増殖培地を含有するハウジングを含む細胞培養装置―カセットと称される―であって、該ハウジングの少なくとも一部が実質的に無放射である細胞培養装置を提供する。本装置は、増殖培地の画像化を可能にするように配置された光学的に透明な窓を有する、脱着可能でシール可能な蓋をさらに含んでもよい。この蓋は、実質的にハウジングの無放射部分であってもよい。好ましくは、窓およびハウジングは、実質的に無放射であるか、実質的に無反射であるか、またはその両方である。ハウジングはまた、例えば、ハウジングが15mm²より小さいガス交換断面積を有するように、増殖培地から周囲環境へのガスの蛇行性通過を提供する開口部を含んでもよい。装置は、増殖培地と等角に接触する除去可能な蓋をさらに含んでもよい。例えば微生物との接触のために、蓋を除去することによって、増殖培地を露出させる。

本発明のカセットはまた、膜上に沈着した微生物が増殖培地から栄養を摂取するように培地上に配置されるよう適合された膜とともに、微生物を検出するためのキットにおいて提供されてもよい。キットは、膜が、膜を通過した試料から微生物を回収することを可能にする濾過容器をさらに含んでもよい。一つの態様において、培地上に配置されるのに先立って、それによって微生物が膜上に沈着するような膜を通した試料の通過の間、膜は実質的に平面のままである。好ましくは、膜は、実質的に無放射であるか黒色であり、またはその両方である。

本発明のカセットおよびキットは、計数、検出、診断、または治療応答を含む、微生物の増殖、アッセイ、または維持のための任意の方法において使用されてもよい。

「無放射」物体とは、例えば蛍光、燐光、または発光によって光を放出しない物体を意味する。

「無反射」物体とは、物体を画像化するのに使用される光の25％、10％、5％、1％、または0.1％未満を反射する物体を意味する。

他の特徴および利点は、以下の説明および添付の特許請求の範囲から明らかになるであろう。

発明の詳細な説明
本発明は、細胞（例えば、微生物、微生物を含む細胞、または真核細胞培養物由来の細胞）を捕捉して培養するための装置、およびこれらの装置を用いる方法を特徴付ける。一つの装置は、例えば、参照により本明細書に組み入れられる米国特許出願公開第2003/0082516号に記述されている、Growth Direct（商標）システムのような自動迅速計数システムにおいて使用され得る、増殖培地（栄養培地とも称される）を含有するカセットである。もう一つの装置は、試料における細胞を膜上に濃縮するために使用され得る濾過漏斗である。例示的なカセットおよび濾過漏斗アセンブリは、図1A〜1Bに示されている。

Growth Cassette（商標)は、例えば、表面の平面度、光学的画像化、半固体栄養培地の脱水制御、空気および粒子の交換制御、および自動操縦を制御するための特徴で高度化された、進歩した装置である。これらの属性は、例えば、微生物増殖の自動画像化を可能にする。任意の固体または半固体増殖培地が、本カセットにおいて使用され得る。例は、サブローデキストロース寒天（Sabouraud dextrose agar（SDA））、R2A寒天、トリプティックソイ寒天（tryptic soy agar（TSA））、プレートカウント寒天（plate count agar（PCA））を含む。

種々の態様において、カセットは、500より少ない細胞を含有する自己蛍光微生物ミクロコロニーの自動画像化を、例えば、そのような検出に相応する蛍光特性を有する材料を使用することによって促進する。例示的な材料は、黒色のK-Resin（登録商標）（スチレン‐ブタジエン‐コポリマー；Chevron Phillips）である。カセットはまた、自己蛍光微生物ミクロコロニーの検出に相応する蛍光特性を有する透明な蓋を使用してもよい。蓋についての例示的な材料は、Zeonor（登録商標）1060R（ポリシクロオレフィン樹脂；Zeon Chemicals LP）である。ガラスを使用してもよい。自己蛍光微生物ミクロコロニーの検出に相応する蛍光特性を有する多孔性膜を使用してもよい。膜は、セルロース、セルロースアセテート、ポリスチレン、ポリエチレン、ポリカルボネート、ポリエチレンテレフタラート、ポリオレフィン、エチレンビニルアセテート、ポリプロピレン、ポリスルホン、ポリテトラフルオロエチレン、ナイロン、およびシリコーンコポリマーを含む材料から製造されてもよい。膜の選択は、部分的に、培養される細胞のタイプ（例えば、表面に付着して増殖する微生物（付着依存性）、浮遊状態で増殖する微生物（付着非依存性）、または、表面に付着して、もしくは浮遊状態で増殖する微生物）、透過性の程度、ならびに、流体およびガスの移動の速度に依存する。例示的な膜は、黒色の混合セルロースエステル膜（Sartorius AG）である。画像化されないと考えられるカセットの部分は、任意の適当な材料、例えば、アクリロニトリル‐ブタジエン‐スチレンまたはスチレン‐アクリロニトリルから作製されてもよい。

好ましくは、カセットは、培地の脱水を最小にするために、周囲環境と最小の空気交換（例えば、15mm²より小さい空気交換断面積、または、匹敵する面積のペトリ皿の半分未満）を有する。空気管理システムはまた、カセット内部への微生物の侵入を排除するために、強化された蛇行性空気経路を含んでもよい。

カセットはまた、増殖表面の近位かつ平行である面以外の面を通って、すなわち側面から、栄養培地を導入するために設計されてもよい。そのようなカセットは、カセットの端に穴を含んでもよい。脱水を最小にするために、カセットにおける培地を使用前にシールしてもよい。そのようなカセットは、上部、下部、および側面に封入された培地を有する。平面画像化に望ましい平面培地表面は、例えば、プラスチックの弛緩および栄養培地からの脱離を防ぐためのガラスビーズを含むことによって、除去可能な注入蓋（pouring lid）の設計および滅菌後の注入蓋保持のための方法を通して達成されてもよい。好ましくは、培地は、カセットの材料に対して盛り上がっている。この構成により、使用の間に培地が乾燥する場合に平面度の保持が可能になる。典型的には、培地は高度に蛍光性であり、本発明は、培地を覆ってバックラウンドの発光を減少させるための多孔性膜の使用を可能にする。カセットはまた、マスク、すなわち、使用の間に膜の端、および任意の露出される培地を覆うリムを特徴付けてもよい。

好ましくは、カセットを、例えば、カセットの群を自動画像化器械に移動させて導入するように設計されたキャリア内に積み重ねることが可能である。そのようなカセットの自動操縦は、輸送、カセットとキャリアとの間の接続、自動操縦のための位置決め、および、ロボット移動のための能力を含んでもよい。カセットはまた、再現可能な機械的位置決め、すなわち、自動画像化のために同一のカセットを同一の位置に繰り返し戻すことを可能にするように設計されてもよい。

カセットはまた、多数の画像のアラインメントを促進する設計特性を含んでもよい。画像化基準マークは、蛍光プラスチックまたは培地上の貫通穴開口を含む。画像化基準マークはまた、カセット上の印刷されたか浮出しされた蛍光材料を含む。他の基準マークは当技術分野において公知である。

本発明の漏斗は、例えば、サイズベースの濾過によって、液体または空気であってもよい試料中に存在する微生物を膜上に捕捉するために使用されてもよい。捕捉は、媒質、例えば液体またはガス試料を漏斗内で濾過されるように導入して、媒質が膜を通って流れるような圧力差を生じさせることによって達成される。膜はその後、例えば、漏斗アセンブリからの手動移動によって、カセット中の増殖培地と接触させてもよい。膜上の微生物をその後増殖させてコロニーとし、例えば、米国特許出願公開第2003/0082516号の方法に従って画像化してもよい。膜を移動するため、または別の方法でカセットに試料を配置するための他の方法は、当技術分野において公知である。好ましくは、フィルターは、濾過の間、膜を支持して膜上のマークを減少させるまたは防ぐために、平面表面、例えばPorex製の焼結プラスチックビーズを含む。この特徴と相伴って、フィルターは、画像化される領域への損傷なく膜の操作を可能にするアクセス領域を含んでもよい。フィルターはまた、例えば、上述されたマスクによって覆われてもよい膜の端上に微生物が沈着するのを防ぐために、媒質が膜の端を通過することを防いでもよい。

検出、計数、診断、および治療応答を含む、微生物の増殖が望ましい任意の方法において、漏斗を有するまたは有さないカセットが使用されてもよい。使用の例示的な分野は、微生物生物汚染度について液体、空気、または表面試料を試験する分野；微生物生物汚染度について産業試料、滅菌薬学製品試料、非滅菌薬学製品試料を試験する分野；嫌気性微生物生物汚染度について試料を試験する分野を含む。カセットは、嫌気性条件下で自己蛍光ミクロコロニーを画像化するのに互換性があり、かつ、能動的に分子酸素を除去するための構成要素（例えば、ガスパックまたは同等物)を含んでもよい。細菌、シアノバクテリア、原生動物、真菌、哺乳動物細胞、植物細胞、または他の真核細胞を含む任意の微生物が、本明細書において説明されるカセットおよび漏斗と併せて使用されてもよい。

本発明は、次に、特定の好ましい態様に関してさらに説明される。

自己蛍光微生物ミクロコロニーのカセット設備自動画像化
図2は、自己蛍光微生物ミクロコロニーの自動画像化を可能にする、例えば、500より少ない細胞を含有する自己蛍光微生物ミクロコロニーの自動画像化を促進する、カセット材料の要素を示す。図に示されるように、上面は、低い自己蛍光および反射を有する材料から製造される（またはそれで被覆される）。カセットは、増殖培地の上に配置された膜上の微生物の画像化を可能にする光学窓を含む。膜もまた蛍光性でない。

制御された乾燥プロファイル、空気管理の栄養培地
何日にも渡る画像化のための平面栄養培地表面を得るため、本発明者らは、微生物には増殖促進に十分な酸素が送達されるが、標準的なペトリ皿と比較して空気交換が非常に限定される、最小空気交換通過システムを発明した。空気の流れおよび培地表面への衝突が、栄養培地の均質な乾燥を提供するように管理される。図3A〜3Cは、空気管理システムの要素を示す。図3Aは、カセットの二つの部分が蛇行性空気経路を生じるように結合し得る方法を示す。図3B〜3Cは、空気穴および培地への空間的関係の詳細図を示す。

カセットの端上の穴を介して充填され得るシール可能な栄養培地カセット
円周側面壁、および背面または下面、ならびに除去可能な注入蓋によって形成される第三の面と接触するように、栄養培地をカセット内に保持および封入するために、本発明者らは、充填後完全にシールされる側面充填（side fill）カセットを発明した。側面充填されたカセットは、培地が表面面積（上部、下部、および側面）の100％を超えて封入されることを可能にする。シールされたカセットは、より長い保存期間を提供し、保管の間の培地乾燥を防ぐ。捕捉された空気の泡が培地に蓄積することを防ぐために、本発明者らは分離した過剰充填チャンバー（split overfill chamber）を利用してもよい。図4A〜4Cは、側面充填されたシール可能なカセットの要素を示す。

除去可能な注入蓋の設計、および滅菌後の注入蓋保持のための設計法を通して達成される、画像化のための平面培地表面
画像化用の平面培地表面を達成するため、本発明者らは、カセットをシールするための放射状口縁を有する除去可能な注入蓋を設計した。蓋の下側表面の外形は、平面であるか、または、放射状の保持荷重が中和して平面表面を作製するような輪郭であってもよい。特別に設計された上面、ゲート、およびプロセス制御は、蓋の下側への任意の外乱または明らかなブラッシング（blush）を防ぐために材料が鋳型に流し込まれることを可能にする、すなわち、蓋の表面は滑らかである。荷重下のプラスチックのクリープ（creep）効果、およびγ線照射のような一般的な滅菌方法を通して誘導されるクリープ効果を中和するために、ガラスビーズが樹脂に埋め込まれてもよい。これらの属性の組み合わされた効果が、充填の間、置換されたり、または曲がったり、または反ったりすることなく、溶解した液体培地の急速な衝突を可能にする注入蓋である。

図5A〜5Bは、除去可能な注入蓋の設計、および滅菌後の注入蓋保持のための設計法を通して達成される、画像化のための平面培地表面の要素を示す。

盛り上がった栄養培地により何日にも渡る画像化のために平面培地表面を維持する設計法
乾燥の際に、制御された平面様式で培地が縮む機会を与えるために、本発明者らは、カセットの側面壁と比較して盛り上がった培地部分を有する特徴を設計した。この特徴は、接触して動きに対する抵抗を受けた場合におこりうる、培地の端との任意の相互作用および制限を防ぐ。

図6は、盛り上がった栄養培地により何日にも渡る画像化のために平面培地表面を維持する設計法の要素を示す。

栄養培地からの蛍光を遮るための設計
カセットは、具体的には、蛍光性の高い栄養培地寒天を覆うために、蛍光性の低い、例えば平面黒色の膜を使用する。膜、例えば混合セルロースエステルが完全に培地を覆い得ない所、または吸収および乾燥により膜に明るい蛍光性の端が作製される所で端の効果を覆うために、本発明者らは、この領域を覆うためのマスクを設計した。マスクが画像装置へ光を後方反射するのを防ぐために、マスクの成形表面は、蒸気で磨かれた（vapor honed）無反射表面を形成するように処理されている。マスクは、カセットの蓋の一体化した構成要素であってもよい。

微生物がこのマスクされた区域に沈着するのを防ぐために、本発明者らは、形成された増殖領域が、培地がへこみながらも試験の継続期間に渡って画像化される領域内に保持されるように、濾過の間、膜をシールしてもよい。制御された増殖区域および制御されたマスキング区域のこの設計アプローチはまた、使用者の膜配置エラーを打ち消すために使用されてもよい。

図7は、栄養培地からの蛍光を遮るためのマスクの要素を示す。

強化された蛇行性空気経路
伝統的なペトリ皿およびRodacプレートは、蛇行性空気通過によって、制御された増殖環境を提供する。本発明者らは、自動ロボット操縦およびプレート処理と関連付けられる急速な動きおよび反転（flipping）を可能にするために、これを著しく強化した。本発明者らは、 カセットの蛇行性空気管理システムにおいて多数の回旋および封入（entrapment）区域を設計した。図3A〜3Cは、強化された蛇行性空気経路の要素を示す。

光学窓を保持およびシールするための方法
例えば、ガラスまたはプラスチックで製作された光学窓を保持およびシールするために、本発明者らは、一体化円周シールを設計した。保持要素の屈曲は、開口チャンネルへ偏向させることによって達成される。この開口チャンネル設計はまた、単一部品成形の設計が、成形道具から取り出されることを可能にする。図8は、光学窓を保持およびシールするための設計法の要素を示す。

自動操縦のためのカセット輸送設計、キャリア境界面、および位置決め
カセットの望ましい特性は、Growth Direct（商標）システムまたは他の自動画像化システムにおいて繰り返し配置されることが可能であることである。またキャリアは、望ましくは、カセットを試料部位から画像装置へと輸送するために提供される。この結果を達成するために、本発明者らは、カセットとカセットキャリアとの間の独特の境界面、すなわち二つの半月円錐台を設計した。カセットの各側面上の一つの円錐台は、カセットをキャリア装置に合わせるのに役立つ。カセットは、所定の位置へ回転させてもよいし、または上から配置されてもよい。大きな面取り（chamfer）表面が、カセットの設置ミスを打ち消す。キャリア上の結合ロッド様の特徴が半月の特徴とかみ合い、それによって通常の使用においてカセットが脱落することを防ぐ。キャリアに関連するこれらの特徴は、カセットが自動ロボット処理のためにいつも適当に配置されることを確実にする。

図9A〜9Hは、カセット輸送設計およびカセット‐キャリア境界面の要素を示す。

自動処理機械、Growth Direct（商標）の軸にカセットを整列させるための方法
自動カセットまたはプレート操縦には、システムがロボットグリップに対するカセットの配置エラーをゼロもしくは最小にすること、または、システムがカセットを配置すべき場所を識別しなければならないことが必要でありうる。本発明者らは、ロボットシステムに対してゼロドラフトの先細くさび溝（wedge slot）境界面を設計した。自動ロボットグリップ上の二つの刃様の特徴は、溝への任意の入口点を見出すことのみを必要としており、グリップを外側に拡張する行為において、一つはグリッパーの作用線に対してカセットをカムし（cam）、カセットをまっすぐにする。

図10A〜10Dは、カセットを軸に対して整列させるための方法の要素を示す。

蛍光プラスチックの上の画像化基準貫通穴開口
本発明者らのシステムは、同一のカセットが画像化のために循環するたびに、同一のカセットが画像装置に対して配置される場所を識別する能力を使用してもよい。この結果を達成するために、背後のプラスチック構造、この場合においてはカセットベースよりも天然の蛍光性が低い上部の大部分のプラスチック、すなわち貫通穴を有するマスクを有することによって、マスクにおける貫通穴が、画像において段階的な蛍光マークを作製するために利用されてもよい。より明るい背後のプラスチックを用いると、貫通穴を照らして、正確な画像配置のために再現可能な基準を作製する。

背面の蛍光を提供する代替的手段とは、培地が本質的に高度の蛍光を有するような栄養培地の上に位置する基準穴を有することである。

図11は、蛍光プラスチックの上の画像化基準マーク貫通穴開口の要素を示す。

濾過アセンブリ内部シール設計および焼結多孔性プラスチックの使用
膜と接触する任意のシールまたは非連続的段階的特徴が解放または除去されると、本質的に膜にマークが残る。多くの市販されている漏斗アセンブリは、二つの堅いプラスチック要素の間に直接膜をシールし、その点で円環のくぼみを残す。そのようなマークまたはくぼみが本発明者らの画像区域（微生物が増殖するであろう膜の湿った領域として規定される画像区域）内に出現するのを防ぐために、本発明者らは図12で示されるように問題を解決した。内部のシールは、例えば、Porexから入手可能なもののような焼結プラスチックビーズで作製された多孔性プラスチックパッドに膜を捕捉する。多孔性パッドは、画像化を妨げる可能性がある損傷（marring）、しわ、または膜への他の心配を防ぐために、特異的な特性および滑らかな表面を有する。減圧によって、この多孔性障壁を通過するように生物を含む空気および液体の動きが誘導されるが、微生物は膜表面に捕捉されたままとなる。外側のシールは、減圧が起こり、望ましい領域において流れが起きることを確実にする。

図12は、内部シール設計および焼結多孔性プラスチックの使用の要素を示す。

単一の装置において二重モードのマニホールド境界面を有する濾過アセンブリ
濾過アセンブリは、特異的な装置のために設計される現在の製品とは異なり、マニホールドアダプターと称される成形プラスチックベースを含んでもよい。例えば、それらは伝統的なゴム栓（一般的な生物安全キャビネットマニホールドシステムにおいて使用される）に適合するか、または、Milliporeによって生産されるもののような一般的なポンプヘッドシステムに適合するかのいずれかである。下記に示される濾過アセンブリは、二重の境界面を有する。中心のノズル口は一般的なストッパーに適合し、ベースマニホールドアダプターの蓋は大部分のポンプヘッド（チューリップ）アセンブリに順応する。

図13A〜13Bは、二重モードのマニホールド境界面の要素を示す。

膜の端を把持するための一体化ポケットにより手動の膜除去が容易な濾過アセンブリ
現在の膜濾過アセンブリに伴う共通の問題は、培地への手動移動のために膜を把持することの困難さである。本発明者らは、ピンセットまたは鉗子を用いた容易な把持のために膜の端を配置するための一体化ポケットおよび隆起した城突出部（castle protrusion）の使用を通して、この問題を解決した。この特徴は、手動移動によるグリップのくぼみを画像化区域から遠ざけるように働くので、望ましい膜画像化を可能にする。

図14A〜14Cは、回収を容易にするように鉗子が膜の端にアクセスすることを可能にする一体化ポケットの要素を示す。

他の態様
上記の明細書において言及されたすべての刊行物、特許、および特許出願は、参照により本明細書に組み入れられる。本発明の説明された方法およびシステムの種々の改変および変形は、本発明の範囲および精神から逸脱することなく、当業者に明らかであろう。本発明は具体的な態様と関連して説明されたが、特許請求された本発明は、そのような具体的な態様に不当に限定されるべきではないことが理解されるべきである。実際に、当業者に明白である、本発明を実施するために説明された形態の種々の改変は、本発明の範囲内であることが意図される。

他の態様は添付の特許請求の範囲に含まれる。

図1Aは、本発明のカセットの画像化された側面の模式的描写である。図1Bは、本発明のカセットと併せて使用され得る漏斗の模式的描写である。 カセットの画像化された側面およびカセットの断面の模式的描写である。微生物コロニーからの自己蛍光の検出を可能にするカセットの要素が示されている。 図3Aは、空気管理チャンネルを示すカセットの種々の図の模式的描写である。図3B〜3Cは、空気のための吸気口を示すカセットの断面図である。 図4Aは、カセットに配置された増殖培地の模式的描写である。図4B〜Cは、増殖培地を含むカセットの種々の模式図である。 図5Aは、増殖培地が投じられる除去可能な蓋の模式的描写である。図5Bは、増殖培地に作用する力の模式的描写である。 一段高く盛り上がった増殖培地表面を生じる、カセットからの蓋の除去の模式的描写である。 増殖培地の上部に配置された膜の端を覆うマスキングの特徴を示す、カセットの断面図の模式的描写である。 カセットへの光学窓のシーリングの模式的描写である。 図9A〜Bは、カセットの設計要素が、カセットの自動搭載を援助するために使用され得る方法を示す模式的描写である。図9C〜Dは、多数のカセットの自動操作を可能にする、カセットキャリアおよびキャリアに搭載された多数のカセットの模式的描写である。図9E〜Hは、カセットキャリアおよびキャリアを適所に固定するためのラッチの写真である。 図10A〜Dは、カセットの自動グリッピングおよびリリースの模式的描写である。 蛍光基準マークを提供するカセットのマスクにおける貫通穴の模式的描写である。 漏斗の模式的描写である。 図13A〜Bは、漏斗の種々の図である。 図14Aは、漏斗とともに使用するためのマニホールドアダプターの模式的描写である。図14Bは、漏斗の構成要素の分解図である。図14Cは、膜を除去するためのくぼみを有する漏斗の構成要素の模式図である。

図は、必ずしも一定の縮尺ではない。

Claims (39)

1. 微生物のための固体または半固体増殖培地を含有するハウジング；
   増殖培地を覆うように配置された膜上の微生物の画像化を可能にするように配置された光学的に透明な窓を含む脱着可能でシール可能な蓋；
   無放射、無反射である、膜の端および任意の露出される培地の蛍光をマスクするリム；および
   放射成分を含む画像化基準マーク
   を含む細胞培養装置。
2. 窓が無放射である、請求項1記載の装置。
3. 窓が無反射である、請求項1記載の装置。
4. ハウジングが、増殖培地から周囲環境へのガスの蛇行性通過を提供する開口部を含む、請求項1記載の装置。
5. ハウジングおよび窓がどちらも無放射かつ無反射である、請求項3記載の装置。
6. 増殖培地と等角に接触する除去可能な蓋をさらに含む、請求項1記載の装置。
7. 膜を通過した試料より微生物を回収する膜を含む濾過容器とともに、請求項1記載の装置を含む、微生物を検出するためのキット。
8. 濾過容器が多孔性プラスチックパッドをさらに含む、請求項7記載のキット。
9. 試料中に存在しかつ膜上に沈着した微生物が請求項1記載の装置の増殖培地から栄養を摂取するように、膜が、該培地上に配置されるよう適合された、請求項7記載のキット。
10. 培地上に配置されるのに先立って、それにより微生物が膜上に沈着するような膜を通した試料の通過の間、膜が平面のままである、請求項7記載のキット。
11. 膜が無放射である、請求項7記載のキット。
12. 膜が黒色である、請求項10記載のキット。
13. 膜上に沈着した微生物が増殖培地から栄養を摂取するように該培地上に配置されるよう適合された膜とともに、請求項1記載の装置を含む、微生物を検出するためのキット。
14. 膜が無放射である、請求項13記載のキット。
15. 膜が黒色である、請求項13記載のキット。
16. 増殖培地が盛り上がっている、請求項1記載の装置。
17. 増殖培地が、乾燥の際に平面を維持する、請求項1記載の装置。
18. 基準マークが放射プラスチックまたは増殖培地を含む、請求項1記載の装置。
19. 放射プラスチックまたは増殖培地が、リムにおける貫通穴を通して画像化される、請求項18記載の装置。
20. 基準マークが、印刷されたか浮き出しされた蛍光材料を含む、請求項1記載の装置。
21. 濾過容器が膜の端に微生物が沈着するのを防ぐ、請求項7記載のキット。
22. 濾過容器が、膜の端の操作を可能にするアクセス領域をさらに含む、請求項7記載のキット。
23. 増殖培地が盛り上がっている、請求項7記載のキット。
24. 増殖培地が、乾燥の際に平面を維持する、請求項7記載のキット。
25. 基準マークが放射プラスチックまたは増殖培地を含む、請求項7記載のキット。
26. 放射プラスチックまたは増殖培地が、リムにおける貫通穴を通して画像化される、請求項25記載のキット。
27. 基準マークが、印刷されたか浮き出しされた蛍光材料を含む、請求項7記載のキット。
28. 増殖培地上に配置され、かつ任意の増殖培地が膜によって覆われていない時に、リムが膜の端を覆っている、請求項9記載のキット。
29. 増殖培地が盛り上がっている、請求項13記載のキット。
30. 増殖培地が、乾燥の際に平面を維持する、請求項13記載のキット。
31. 基準マークが放射プラスチックまたは増殖培地を含む、請求項13記載のキット。
32. 放射プラスチックまたは増殖培地が、リムにおける貫通穴を通して画像化される、請求項31記載のキット。
33. 基準マークが、印刷されたか浮き出しされた蛍光材料を含む、請求項13記載のキット。
34. 増殖培地上に配置され、かつ任意の増殖培地が膜によって覆われていない時に、リムが膜の端を覆っている、請求項13記載のキット。
35. 膜上に沈着した微生物が培地から栄養を摂取するように、増殖培地の上に配置された膜をさらに含む、請求項1記載の装置。
36. リムが膜の端を覆っている、請求項35記載の装置。
37. 基準マークが放射性増殖培地を含む、請求項1記載の装置。
38. 基準マークが放射性増殖培地を含む、請求項7記載のキット。
39. 基準マークが放射性増殖培地を含む、請求項13記載のキット。

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