JPH0383598A - 微生物の迅速検査法 - Google Patents
微生物の迅速検査法Info
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- JPH0383598A JPH0383598A JP22044089A JP22044089A JPH0383598A JP H0383598 A JPH0383598 A JP H0383598A JP 22044089 A JP22044089 A JP 22044089A JP 22044089 A JP22044089 A JP 22044089A JP H0383598 A JPH0383598 A JP H0383598A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野］
本発明は微生物の迅速検査法に関し、詳しくは培地中の
蛍光色素を増殖中の微生物菌体に取り込ませ、蛍光顕微
鏡の紫外線により目視不可能なミクロコロニーを発光さ
せて判定し、微生物を迅速に検査する方法に関する。
蛍光色素を増殖中の微生物菌体に取り込ませ、蛍光顕微
鏡の紫外線により目視不可能なミクロコロニーを発光さ
せて判定し、微生物を迅速に検査する方法に関する。
〔従来の技術および発明が解決使用とする課題３食品工
業等においては、被検試料中の微生物を迅速、かつ正確
に判定することが望まれている。
業等においては、被検試料中の微生物を迅速、かつ正確
に判定することが望まれている。
ところが、従来の培養法による微生物の判定方法は、出
現するコロニーを目視により検査しているため、判定に
４８〜７２時間を必要としていた。
現するコロニーを目視により検査しているため、判定に
４８〜７２時間を必要としていた。
微生物検査を短時間で判定するためには、出現するコロ
ニーが小さいため、顕微鏡が必要であるが、微生物と夾
雑物等のコントラストがなく、正確な判定は不可能であ
った。
ニーが小さいため、顕微鏡が必要であるが、微生物と夾
雑物等のコントラストがなく、正確な判定は不可能であ
った。
そこで、被検試料中の微生物を短時間で、しかも正確に
判定できる微生物検査法の開発が要望されている。
判定できる微生物検査法の開発が要望されている。
本発明者らは、培養法による微生物の判定方法において
、培地に蛍光色素を加え、該蛍光色素を増殖中の微生物
菌体に取り込ませ、蛍光顕微鏡を用いて検査することに
より、目視不可能なミクロコロニーでも正確に判定でき
ることを見出し、本発明を完成した。
、培地に蛍光色素を加え、該蛍光色素を増殖中の微生物
菌体に取り込ませ、蛍光顕微鏡を用いて検査することに
より、目視不可能なミクロコロニーでも正確に判定でき
ることを見出し、本発明を完成した。
すなわち、本発明は蛍光色素を含有せしめた固体培地に
試料を載置して培養し、出現するコロニーを蛍光顕微鏡
で観察することを特徴とする微生物の迅速検査法に関す
る。
試料を載置して培養し、出現するコロニーを蛍光顕微鏡
で観察することを特徴とする微生物の迅速検査法に関す
る。
本発明の方法によれば、原理的には単一細胞でも蛍光を
発するため、判定が可能であるが、通常は培養時間が従
来法の半分乃至それ以下の時間で出現する目視不可能な
ミクロコロニーを対象にして判定する。具体的には、蛍
光色素を含有する固体培地、好ましくは蛍光色素を１％
以下の割合で含有する固体培地に試料を載置して培養す
る。ここで固体培地としては、対象とする微生物が良好
に増殖しうる成分を含有するものであれば良い。
発するため、判定が可能であるが、通常は培養時間が従
来法の半分乃至それ以下の時間で出現する目視不可能な
ミクロコロニーを対象にして判定する。具体的には、蛍
光色素を含有する固体培地、好ましくは蛍光色素を１％
以下の割合で含有する固体培地に試料を載置して培養す
る。ここで固体培地としては、対象とする微生物が良好
に増殖しうる成分を含有するものであれば良い。
試料は、検査の対象である液状物をそのまま用いても良
いが、好ましくはフィルターに被検液状物を塗布したも
の、該フィルターにて被検液状物を濾過した後のフィル
ターを使用する。ここでフィルターとしては種々の材質
のものを使用できるが、望ましくは培地の蛍光を遮るた
め、黒色、緑色等の濃色のメンブランフィルタ−を使用
する。
いが、好ましくはフィルターに被検液状物を塗布したも
の、該フィルターにて被検液状物を濾過した後のフィル
ターを使用する。ここでフィルターとしては種々の材質
のものを使用できるが、望ましくは培地の蛍光を遮るた
め、黒色、緑色等の濃色のメンブランフィルタ−を使用
する。
なお、被検試料が固体である場合は、無菌水などで洗い
出して試料とする。また、蛍光色素としては任意のもの
を使用できるが、通常はチオフラビン、ウラニンなどが
用いられる。
出して試料とする。また、蛍光色素としては任意のもの
を使用できるが、通常はチオフラビン、ウラニンなどが
用いられる。
上記試料を培地に載置して培養すると、微生物の種類に
もよるが、通常は１２〜２４時間程度の培養により、各
種微生物のくクロコロニー（目視不可能な小さいコロニ
ー）が出現する。ここで培養温度などの条件は微生物の
性質等を考慮して適宜決定すればよい。ミクロコロニー
の出現が予測される時期に、そのまま固体培地を入れた
シャーレごと蛍光顕微鏡で観察する。すなわち、発光す
るミクロコロニーを正確に判定して微生物の存在を迅速
に検査することができる。さらに、ミクロスキャナー（
顕微鏡ステージの自動移動装置）を使用することにより
、フィルター全面を自動的に検査してコロニーの見逃し
を回避することができる。
もよるが、通常は１２〜２４時間程度の培養により、各
種微生物のくクロコロニー（目視不可能な小さいコロニ
ー）が出現する。ここで培養温度などの条件は微生物の
性質等を考慮して適宜決定すればよい。ミクロコロニー
の出現が予測される時期に、そのまま固体培地を入れた
シャーレごと蛍光顕微鏡で観察する。すなわち、発光す
るミクロコロニーを正確に判定して微生物の存在を迅速
に検査することができる。さらに、ミクロスキャナー（
顕微鏡ステージの自動移動装置）を使用することにより
、フィルター全面を自動的に検査してコロニーの見逃し
を回避することができる。
次に、本発明を実施例により詳しく説明する。
実施例１
ビール工場の無菌ビールに所定量の酵母〔サツカロミセ
ス・セレビシェ（鉦吐（２）コ吹二並皿ｖｉｓｉａｅ）
〕および細菌〔ラクトバチルス・プレビス（Ｌａｃｔ
ｏｂａｃ目１ｕｓ ｂｒｅｖｉｓ）＋ペデイオコッカス
・セレビシェ（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ｃｅｒｅｖｉ
ｓｔａｅ）バチルスメガテリウム（Ｂａｃｉｌｌｕｓ
ｍｅ ａ−ｔｈｅｒｉｕｍ） ）を添加したちの１０
０ ｍｌをブラックメンブランフィルタ−ＨＡＲＰ （
ミリボア社製、４７ｍｍφ）で濾過し、そのフィルター
をシャーレに入ったチオフラビン０．１％入り固体培地
の上にのせ、２８’Ｃ，１８時間培養した後にもクロス
キャナー付の蛍光顕微鏡（Ｂ励起フィルター使用）５０
倍で全面精査（約４分）した。
ス・セレビシェ（鉦吐（２）コ吹二並皿ｖｉｓｉａｅ）
〕および細菌〔ラクトバチルス・プレビス（Ｌａｃｔ
ｏｂａｃ目１ｕｓ ｂｒｅｖｉｓ）＋ペデイオコッカス
・セレビシェ（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ｃｅｒｅｖｉ
ｓｔａｅ）バチルスメガテリウム（Ｂａｃｉｌｌｕｓ
ｍｅ ａ−ｔｈｅｒｉｕｍ） ）を添加したちの１０
０ ｍｌをブラックメンブランフィルタ−ＨＡＲＰ （
ミリボア社製、４７ｍｍφ）で濾過し、そのフィルター
をシャーレに入ったチオフラビン０．１％入り固体培地
の上にのせ、２８’Ｃ，１８時間培養した後にもクロス
キャナー付の蛍光顕微鏡（Ｂ励起フィルター使用）５０
倍で全面精査（約４分）した。
これを従来法（蛍光色素が入っていない培地で同様にし
て４８時間培養し目視判定する方法）と比較した。結果
は従来法ではコロニーの判別までに４８時間の培養を必
要としたのに対し、末法では１８時間で判定が可能であ
り、第１表に示すごとく、酵母、細菌のコロニー検出数
に両者間の差が認められなかった。
て４８時間培養し目視判定する方法）と比較した。結果
は従来法ではコロニーの判別までに４８時間の培養を必
要としたのに対し、末法では１８時間で判定が可能であ
り、第１表に示すごとく、酵母、細菌のコロニー検出数
に両者間の差が認められなかった。
第１表
酵母と細菌の出現コロニー数
実施例２
ビール工場の濾過前ビ・−ルを無菌水で希釈した液１０
０−をメンブランフィルタ−Ａ０４５ＮＯ４７＾（アト
バンチツク東洋社製、４７問φブラック）で濾過後、実
施例１と同様に従来法との比較を行った。
０−をメンブランフィルタ−Ａ０４５ＮＯ４７＾（アト
バンチツク東洋社製、４７問φブラック）で濾過後、実
施例１と同様に従来法との比較を行った。
結果は第２２１！に示すごとく、従来法の４８時間培養
後のビール酵母のコロニー数と末法の１８時間培養後の
酵母のコロニー数に殆んど差が認められなかった。
後のビール酵母のコロニー数と末法の１８時間培養後の
酵母のコロニー数に殆んど差が認められなかった。
第２表
酵母の出現コロニー数
〔発明の効果］
本発明によれば、液体試料などの被検試料中の微生物を
迅速、かつ正確に判定することができる。
迅速、かつ正確に判定することができる。
そのため、検査終了後の製品を早期に出荷することが可
能となり、実用上の利益は大きい。
能となり、実用上の利益は大きい。
Claims (2)
- （１）蛍光色素を含有せしめた固体培地に試料を載置し
て培養し、出現するコロニーを蛍光顕微鏡で観察するこ
とを特徴とする微生物の迅速検査法。 - （２）試料が、被検液状物を塗布または濾過したフィル
ターである請求項１記載の検査法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP22044089A JPH0383598A (ja) | 1989-08-29 | 1989-08-29 | 微生物の迅速検査法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP22044089A JPH0383598A (ja) | 1989-08-29 | 1989-08-29 | 微生物の迅速検査法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0383598A true JPH0383598A (ja) | 1991-04-09 |
Family
ID=16751144
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP22044089A Pending JPH0383598A (ja) | 1989-08-29 | 1989-08-29 | 微生物の迅速検査法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0383598A (ja) |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2008523820A (ja) * | 2004-12-16 | 2008-07-10 | アクセラー８ テクノロジー コーポレイション | 高速の微生物検出および抗菌剤感受性試験 |
| WO2007038478A3 (en) * | 2005-09-26 | 2009-04-30 | Rapid Micro Biosystems Inc | Cassette containing growth medium |
| US9290382B2 (en) | 2001-09-06 | 2016-03-22 | Rapid Micro Biosystems | Rapid detection of replicating cells |
| US9643180B2 (en) | 2008-09-24 | 2017-05-09 | First Light Biosciences, Inc. | Method for detecting analytes |
| US9745546B2 (en) | 2011-11-07 | 2017-08-29 | Rapid Micro Biosystems, Inc. | Cassette for sterility testing |
| US10407707B2 (en) | 2012-04-16 | 2019-09-10 | Rapid Micro Biosystems, Inc. | Cell culturing device |
-
1989
- 1989-08-29 JP JP22044089A patent/JPH0383598A/ja active Pending
Cited By (16)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US10000788B2 (en) | 2001-09-06 | 2018-06-19 | First Light Biosciences, Inc. | Rapid and sensitive detection of molecules |
| US9290382B2 (en) | 2001-09-06 | 2016-03-22 | Rapid Micro Biosystems | Rapid detection of replicating cells |
| US11499176B2 (en) | 2001-09-06 | 2022-11-15 | Rapid Micro Biosystems, Inc. | Rapid detection of replicating cells |
| EP3252139A1 (en) * | 2001-09-06 | 2017-12-06 | Rapid Micro Biosystems, Inc. | Rapid detection of replicating cells |
| JP2008523820A (ja) * | 2004-12-16 | 2008-07-10 | アクセラー８ テクノロジー コーポレイション | 高速の微生物検出および抗菌剤感受性試験 |
| WO2007038478A3 (en) * | 2005-09-26 | 2009-04-30 | Rapid Micro Biosystems Inc | Cassette containing growth medium |
| US9057046B2 (en) * | 2005-09-26 | 2015-06-16 | Rapid Micro Biosystems, Inc. | Cassette containing growth medium |
| US10384203B2 (en) | 2008-09-24 | 2019-08-20 | First Light Biosciences, Inc. | Kits and devices for detecting analytes |
| US9643180B2 (en) | 2008-09-24 | 2017-05-09 | First Light Biosciences, Inc. | Method for detecting analytes |
| US11583853B2 (en) | 2008-09-24 | 2023-02-21 | First Light Diagnostics, Inc. | Kits and devices for detecting analytes |
| US11865534B2 (en) | 2008-09-24 | 2024-01-09 | First Light Diagnostics, Inc. | Imaging analyzer for testing analytes |
| US9745546B2 (en) | 2011-11-07 | 2017-08-29 | Rapid Micro Biosystems, Inc. | Cassette for sterility testing |
| US10801004B2 (en) | 2011-11-07 | 2020-10-13 | Rapid Micro Biosystems, Inc. | Cassette for sterility testing |
| US11788046B2 (en) | 2011-11-07 | 2023-10-17 | Rapid Micro Biosystems, Inc. | Cassette for sterility testing |
| US10407707B2 (en) | 2012-04-16 | 2019-09-10 | Rapid Micro Biosystems, Inc. | Cell culturing device |
| US11643677B2 (en) | 2012-04-16 | 2023-05-09 | Rapid Micro Biosystems, Inc. | Cell culturing device |
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