JP5120852B2 - 新規タンパク質複合体、該タンパク質複合体を用いたコバルト型低分子量ニトリルヒドラターゼ成熟化方法、成熟化コバルト型低分子量ニトリルヒドラターゼ、及び該ニトリルヒドラターゼを用いた方法 - Google Patents
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Description
(2)該遺伝子がコードするタンパク質は、単独では精製できず、コバルト型低分子量ニトリルヒドラターゼのαサブユニットと複合体を形成した状態で精製すること。
(3)前記タンパク質と前記αサブユニットからなるタンパク質複合体が、コバルト型低分子量ニトリルヒドラターゼ成熟化に関与していること。
本発明に係る新規タンパク質複合体について、図1を用いて、以下説明する。
続いて、本発明に係るプラスミドの例などについて、以下、図2などを用いて説明する。
本発明に係るタンパク質複合体αe2を用いて、L−NHaseを成熟化する方法を、図3を用いて説明する。
ここで、本願発明者らが新たに見出した、L−NHase成熟化のメカニズムを、図4を用いて説明する。
成熟化L−NHase生産方法の一例を、図5を用いて説明する。図5中STEP1は、in vivo(宿主内)、STEP2は、in vitroでの様子を示す。
前記産生方法で得られた成熟化L−NHaseは、反応性が高いため、あらゆるアミド化合物の工業的生産に用いることができる。
(I)nhlA遺伝子(配列番号3に示す塩基配列のうち第745番目から第1368番目、図6中「nhlA」参照、以下同じ)、nhlB遺伝子(配列番号3に示す塩基配列のうち第1番目から第681番目、図6中「nhlB」参照、以下同じ)、及びnhlE遺伝子(配列番号3に示す塩基配列のうち第1370番目から第1816番目、図6中「nhlE」参照、以下同じ)の3つのORFを持つプラスミドpREIT-nhlBAE。
(II)nhlA遺伝子,及びnhlB遺伝子の2つのORFを持つプラスミドpREIT-nhlBA。
(III)nhlA遺伝子,及びnhlE遺伝子の2つのORFを持つプラスミドpREIT-nhlAE。
(IV)nhlE遺伝子のみのORFを持つプラスミドpREIT-nhlE。
(V)L−NHaseのαサブユニットのN末端24アミノ酸を欠損させ25番目のMetから始まるORFと、nhlE遺伝子の2つのORFを持つプラスミドpREIT-nhlΔAE。
(a)pREIT-nhlBAE(I)を導入して精製した4量体(α2β2)酵素。
(b)pREIT-nhlBA(II)を導入して精製した4量体(α2β2)酵素。
(c)pREIT-nhlBA(II)を導入して精製した2量体(αβ)酵素。
(d)(b)の4量体酵素をin vitroにおいて、タンパク質複合体αe2で処理した後の4量体(α2β2)酵素。
(e)(c)の2量体酵素をin vitroにおいて、タンパク質複合体αe2で処理した後に生成した4量体(α2β2)酵素。
α αサブユニット
1 nhlE遺伝子
2 nhlA遺伝子
3 nhlB遺伝子
12 nhlE遺伝子、及びnhlA遺伝子の2つのORFを持つプラスミド
123 nhlE遺伝子、nhlA遺伝子、及びnhlB遺伝子の3つのORFを持つプラスミド
41 4量体の未成熟L−NHase
42 2量体の未成熟L−NHase
5 タンパク質複合体αe2
6 成熟L−NHase
23 nhlA遺伝子、及びnhlB遺伝子の2つのORFを持つプラスミド
Claims (6)
- 配列番号1に示すアミノ酸配列を有するタンパク質と、
配列番号2に示すアミノ酸配列をそれぞれ有する2つのタンパク質と、
から形成された3量体のタンパク質複合体。 - 請求の範囲第1項記載のタンパク質複合体を用いて、未成熟コバルト型低分子量ニトリルヒドラターゼを成熟化させる手順を少なくとも含むコバルト型低分子量ニトリルヒドラターゼ成熟化方法。
- 請求の範囲第1項記載のタンパク質複合体を用いて、未成熟コバルト型低分子量ニトリルヒドラターゼを成熟化させる工程を少なくとも含む成熟化コバルト型低分子量ニトリルヒドラターゼ作製方法。
- 請求の範囲第1項記載のタンパク質複合体を用いて、未成熟コバルト型低分子量ニトリルヒドラターゼを成熟化させる工程と、
該成熟化させる工程において成熟化されたコバルト型低分子量ニトリルヒドラターゼを、アクリルニトリルからアクリルアミドへの変換酵素として用いる工程を少なくとも含むアクリルアミド生産方法。 - 請求の範囲第1項記載のタンパク質複合体を用いて、未成熟コバルト型低分子量ニトリルヒドラターゼを成熟化させる工程と、
該成熟化させる工程において成熟化されたコバルト型低分子量ニトリルヒドラターゼを、3−シアノピリジンからニコチンアミドへの変換酵素として用いる工程を少なくとも含むニコチンアミド生産方法。 - 配列番号3に示す塩基配列のうち第1370番目から第1816番目の配列と、
配列番号3に示す塩基配列のうち第745番目から第1368番目の配列と、
を少なくとも含むプラスミド。
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