JP5057349B2 - フラボン及びマルビジンを含むバラ及びその生産方法 - Google Patents
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Description
上記の課題を解決するため、本発明者は、種々検討の結果、バラに人為的にフラボン及びマルビジンを含有せしめることにより目的とする色調発現が達成されることを見出し、本発明を完成した。
1.遺伝子組換え手法によりフラボン及びマルビジンを含むことを特徴とするバラ(a rose)。
2.フラボンを含み、且つパンジー(Viola x wittrockiana)由来のフラボノイド3',5'−水酸化酵素及びアントシアニンのメチル基転移酵素の発現によりマルビジンを含む、前記1に記載のバラ。
3.アントシアニンのメチル基転移酵素遺伝子、フラボン合成酵素遺伝子及びパンジー由来の3',5'−水酸化酵素遺伝子の発現により、マルビジン、フラボン及びデルフィニジンを有する、前記1又は2に記載のバラ。
4.前記フラボン合成酵素遺伝子が、ゴマノハグサ科由来のフラボン合成酵素遺伝子である、前記1〜3のいずれかに記載のバラ。
5.前記ゴマノハグサ科由来のフラボン合成酵素遺伝子が、ゴマノハグサ科キンギョソウ(Scrophulariaceae, Antirrhinum majus)由来のフラボン合成酵素遺伝子である、前記4に記載のバラ。
6.前記ゴマノハグサ科由来のフラボン合成酵素遺伝子が、ゴマノハグサ科トレニア(Scrophulariaceae, Torenia hybrida)由来のフラボン合成酵素遺伝子である、前記4に記載のバラ。
(1)配列番号2に記載のアミノ酸配列を有するフラボン合成酵素、
(2)配列番号2に記載のアミノ酸配列において、1個〜数個のアミノ酸の付加、欠失及び/又は他のアミノ酸による置換により修飾されたアミノ酸配列を有するフラボン合成酵素、
(3)配列番号2に記載のアミノ酸配列に対して90%以上の配列同一性を有するアミノ酸配列を有するフラボン合成酵素、又は
(4)配列番号1に示す塩基配列を有する核酸と高ストリンジェント条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされたフラボン合成酵素、
のいずれかをコードする遺伝子である、前記5に記載のバラ。
(1)配列番号4に記載のアミノ酸配列を有するフラボン合成酵素、
(2)配列番号4に記載のアミノ酸配列において、1個〜数個のアミノ酸の付加、欠失及び/又は他のアミノ酸による置換により修飾されたアミノ酸配列を有するフラボン合成酵素、
(3)配列番号4に記載のアミノ酸配列に対して90%以上の配列同一性を有するアミノ酸配列を有するフラボン合成酵素、又は
(4)配列番号3に示す塩基配列を有する核酸と高ストリンジェント条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされたフラボン合成酵素、
のいずれかをコードする遺伝子である、前記6に記載のバラ。
(1)配列番号8に記載のアミノ酸配列を有するフラボノイド3',5'−水酸化酵素、
(2)配列番号8に記載のアミノ酸配列において、1個〜数個のアミノ酸の付加、欠失及び/又は他のアミノ酸による置換により修飾されたアミノ酸配列を有するフラボノイド3',5'−水酸化酵素、
(3)配列番号8に記載のアミノ酸配列に対して90%以上の配列同一性を有するアミノ酸配列を有するフラボノイド3',5'−水酸化酵素、又は
(4)配列番号7に示す塩基配列を有する核酸と高ストリンジェント条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされたフラボノイド3',5'−水酸化酵素、
のいずれかをコードする遺伝子である、前記2〜8のいずれかに記載のバラ。
(1)配列番号10に記載のアミノ酸配列を有するメチル基転移酵素、
(2)配列番号10に記載のアミノ酸配列において、1個〜数個のアミノ酸の付加、欠失及び/又は他のアミノ酸による置換により修飾されたアミノ酸配列を有するメチル基転移酵素、
(3)配列番号10に記載のアミノ酸配列に対して90%以上の配列同一性を有するアミノ酸配列を有するメチル基転移酵素、又は
(4)配列番号9に示す塩基配列を有する核酸と高ストリンジェント条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされたメチル基転移酵素、
のいずれかをコードする遺伝子である、前記2〜9のいずれかに記載のバラ。
12.前記花色の変化が、青に向けての変化である、前記11に記載のバラ。
13.前記花色の変化が、L*a*b表色系色度図における色相角度(θ)が青方向軸である270°に近づく変化である、前記11又は12に記載のバラ。
14.前記花色の変化が、花弁の反射スペクトルの極小値が長波長側にシフトする変化である、前記11に記載のバラ。
15.前記1〜14のいずれか1項に記載のバラと同じ性質を有する、その部分、子孫、組織、栄養増殖体又は細胞。
16.遺伝子組換え手法によりフラボン及びマルビジンを含めることにより生ずるコピグメンテーション効果によりバラの花色を改変する方法。
17.前記コピグメンテーション効果が、花色を青色方向に変化させる効果である、前記16に記載の方法。
用語「バラ(a rose)」とは、本明細書中で使用するとき、バラ目バラ科バラ属(Order, Rosales, Family, Rosaceae, Genus Rosa)の落葉低木である鑑賞用植物の総称をいい、特定の品種に限定されることを意図されず、また、植物の全体又は通常花を含む部分を意味する。
フラボン合成遺伝子、フラボノイド3',5'−水酸化酵素遺伝子、及びアントシアニンのメチル基転移酵素遺伝子の導入
これらのことから、本来花弁でフラボンを蓄積していない、又はマルビジンなどメチル化されたアントシアニンを蓄積していない植物において、これらの化合物を同時に蓄積させることにより、花弁の色彩をより青くすることが可能となる。この際、バラなどのように、元々フラボンとマルビジンのいずれも蓄積していない植物を宿主として用いることが望ましい。
(A)キンギョソウ(Antirrhinum majus)由来のフラボン合成酵素遺伝子
(1)配列番号2に記載のアミノ酸配列を有するフラボン合成酵素、
(2)配列番号2に記載のアミノ酸配列において、1個〜数個のアミノ酸の付加、欠失及び/又は他のアミノ酸による置換により修飾されたアミノ酸配列を有するフラボン合成酵素、
(3)配列番号2に記載のアミノ酸配列に対して90%以上の配列同一性を有するアミノ酸配列を有するフラボン合成酵素、又は
(4)配列番号1に示す塩基配列を有する核酸と高ストリンジェント条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされたフラボン合成酵素、
のいずれかをコードする遺伝子。
(1)配列番号4に記載のアミノ酸配列を有するフラボン合成酵素、
(2)配列番号4に記載のアミノ酸配列において、1個〜数個のアミノ酸の付加、欠失及び/又は他のアミノ酸による置換により修飾されたアミノ酸配列を有するフラボン合成酵素、
(3)配列番号4に記載のアミノ酸配列に対して90%以上の配列同一性を有するアミノ酸配列を有するフラボン合成酵素、又は
(4)配列番号3に示す塩基配列を有する核酸と高ストリンジェント条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされたフラボン合成酵素、
のいずれかをコードする遺伝子。
(1)配列番号6に記載のアミノ酸配列を有するフラボン合成酵素、
(2)配列番号6に記載のアミノ酸配列において、1個〜数個のアミノ酸の付加、欠失及び/又は他のアミノ酸による置換により修飾されたアミノ酸配列を有するフラボン合成酵素、
(3)配列番号6に記載のアミノ酸配列に対して90%以上の配列同一性を有するアミノ酸配列を有するフラボン合成酵素、又は
(4)配列番号5に示す塩基配列を有する核酸と高ストリンジェント条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされたフラボン合成酵素、
のいずれかをコードする遺伝子。
(1)配列番号8に記載のアミノ酸配列を有する3',5'−水酸化酵素、
(2)配列番号8に記載のアミノ酸配列において、1個〜数個のアミノ酸の付加、欠失及び/又は他のアミノ酸による置換により修飾されたアミノ酸配列を有する3',5'−水酸化酵素、
(3)配列番号8に記載のアミノ酸配列に対して90%以上の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する3',5'−水酸化酵素、又は
(4)配列番号7に示す塩基配列を有する核酸と高ストリンジェント条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされた3',5'−水酸化酵素、
のいずれかをコードする遺伝子。
(1)配列番号10に記載のアミノ酸配列を有するメチル基転移酵素、
(2)配列番号10に記載のアミノ酸配列において、1個〜数個のアミノ酸の付加、欠失及び/又は他のアミノ酸による置換により修飾されたアミノ酸配列を有するメチル基転移酵素、
(3)配列番号10に記載のアミノ酸配列に対して90%以上の配列同一性を有するアミノ酸配列を有するメチル基転移酵素、又は
(4)配列番号9示す塩基配列を有する核酸と高ストリンジェント条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされたメチル基転移酵素、
のいずれかをコードする遺伝子。
実施例1:アントシアニンに対するフラボンのコピグメント効果のシミュレーション
アントシアニンに対するフラボンのコピグメント効果のシミユレーションを行うため、まずアントシアニン類を調製した。Cyaninはバラ品種“Rote Rose”(rose cv.“Rote Rose”)の花弁より抽出、精製した。Delphinはバーベナ品種“タピアンバイオレット”(vberbena cv.“Tapien Violet”or vberbena variety Sunmaref TP-V(“Tapien Violet”)(“Tapien is a Trade Mark registered in Japan”))の花弁より抽出した色素を、アルカリ加水分解した後精製した。Malvin、及びLuteolin 7- O-glucosideはフナコシ株式会社より購入した。
特開2000-279182に記載のシソ由来フラボン合成酵素遺伝子を含むプラスミド、pYFS3をXbaIで消化した後、平滑末端化し、さらにBamHIで消化して、約1.8kbのシソ フラボン合成酵素遺伝子断片を得た。一方、WO2005/017147に記載のpSPB906をXhoIで消化後、平滑末端化し、さらにBamHIで消化した。この平滑末端とBamHI切断部位の間に、前述のシソのフラボン合成酵素遺伝子断片を挿入し906-pYFS3を得た。906-pYES3はEl235SプロモーターとD8ターミネーター(いずれもWO2005/017147に記載)の間にシソ由来のフラボン合成酵素遺伝子を有するものである。
代表的な形質転換体の分析値を以下の表3に示す。
Akashiらの報告(Plant Cell Physiol 40, 1182-1186, 1999)に記載のトレニア由来フラボン合成酵素遺伝子が、プラスミドpBluescript II SK(-)のEcoRIとXhoI部位に挿入されたプラスミドをpSPB426とした。これをKpnIで消化した後、平滑末端化し、さらにBamHIで消化し、約1.7kbのトレニア由来フラボン合成酵素遺伝子断片を得た。一方、WO2005/017147に記載のpSPB906をXhoIで消化後、平滑末端化し、さらにBamHIで消化した。この平滑末端とBamHI切断部位の間に、前述のトレニアのフラボン合成酵素遺伝子断片を挿入し906-426を得た。
代表的な形質転換体の分析値を以下の表4に示す。
サーモンピンク系バラ品種“WKS124”(salman-pink rose variety “WKS124”)へ実施例3に記載のpSPB1309を導入し、40個体の形質転換体を得た。色素分析を行った27個体のうち26個体でデルフィニジンの蓄積を確認でき、デルフィニジン含有率は最高96%(平均81%)であった。一方、トレニア由来フラボン合成酵素遺伝子の働きにより、26個体で新たにフラボン(トリセチン、ルテオリン、アピゲニン)の蓄積も確認できた。フラボン総量は最高で新鮮花弁重量1gあたり4.41mgという高い含有量であった。
代表的な形質転換体の分析値を以下の表5に示す。
実施例3に記載のpSPB1309をPacI処理し、トレニア由来のフラボン合成酵素発現カセットとパンジー由来F3'5'H #40遺伝子発現カセットの連結部位付近に存在する(より厳密には、フラボン合成酵素発現カセットのD8ターミネーター3'末端付近に存在する)PacI部位とベクターのマルチクローニングサイト内のPacI部位を切断することにより、パンジーF3'5'H #40遺伝子発現カセットを切り出した。
一方、pSPB1309をAscIで切断し、トレニアのフラボン合成酵素発現カセットを切り出した。これをTMT-BP40のAscI部位に、これらの発現カセットと同じ方向に挿入し、得られたプラスミドをpSFL535とした。本プラスミドは植物において、パンジーF3'5'H #40遺伝子とトレニアのメチル基転移酵素遺伝子、及びトレニアのフラボン合成酵素遺伝子を構成的に発現する。
代表的な形質転換体の分析値を以下の表6に示す。
実施例5に記載のpSFL535を藤色系バラ品種“Lavande”へ導入し、130個体の形質転換体を得た。アントシアニジン分析を行った118個体の形質転換体のうち37個体でマルビジン(デルフィニジンの3'位と5'位がメチル化されたアントシアニジン)の蓄積を確認でき、バラの花弁においてパンジー由来F3'5'H #40遺伝子とトレニア由来アントシアニンメチル基転移酵素遺伝子が機能していることが生成物により示された。なお、マルビジン含有率は最高55.6%(平均20.5%)であった。
代表的な形質転換体の分析値を以下の表7に示す。
実施例5に記載のpSFL535を藤色系バラ品種“WKS82”(mauve rose variety “WKS82”)へ導入し、250個体の形質転換体を得た。アントシアニジン分析を行った232個体の形質転換体のうち110個体でマルビジン(デルフィニジンの3'位と5'位がメチル化されたアントシアニジン)の蓄積を確認でき、バラの花弁においてパンジー由来F3'5'H #40遺伝子とトレニア由来アントシアニンメチル基転移酵素遺伝子が機能していることが生成物により示された。なお、マルビジン含有率は最高65.2%(平均19.7%)であった。
代表的な形質転換体の分析値を以下の表8に示す。
実施例5に記載のpSFL535を藤色系バラ品種“WKS140”(mauve rose variety “WKS140”)へ導入し、74個体の形質転換体を得た。アントシアニジン分析を行った74個体の形質転換体のうち20個体でマルビジン(デルフィニジンの3'位と5'位がメチル化されたアントシアニジン)の蓄積を確認でき、バラの花弁においてパンジー由来F3'5'H #40遺伝子とトレニア由来アントシアニンメチル基転移酵素遺伝子が機能していることが生成物により示された。なお、マルビジン含有率は最高51.3%(平均33.5%)であった。
代表的な形質転換体の分析値を以下の表9に示す。
バラに付与したフラボン合成能の後代への遺伝様式を調査するため、実施例5で作出したマルビジン及びフラボンを生産するバラ(表6中、植物No.6)を花粉親として用いた交配を行った。種子親には、中輪系栽培バラ“Medeo(メデオ)”(floribunda rose variety “Medeo”)を用いた。
代表的な形質転換体後代の分析値を以下の表10に示す。
パンジー由来F3'5'H #40遺伝子及びトレニア由来アントシアニンメチル基転移酵素遺伝子を導入したバラ品種“WKS124”と、パンジー由来F3'5'H #40遺伝子とトレニア由来フラボン合成酵素遺伝子を導入したバラ品種“Lavande”の交配
バラに付与したフラボン合成能の後代への遺伝様式を調査するため、実施例3で作出したフラボン生産株(表4中、植物No.4)を花粉親として用いた交配を行った。種子親には、バラ品種WKS124へpSPB1532を導入し、パンジー由来F3'5'H #40遺伝子およびトレニア由来アントシアニンメチル基転移酵素遺伝子の働きにより花弁でマルビジンを高蓄積した形質転換体WKS124/1532-12-1(WO2003/062428に記載)を用いた。
代表的な形質転換体後代の分析値を以下の表11に示す。
実施例4及び5において作出された形質転換体(バラ品種“WKS124”を宿主とする)について、(1)主な色素としてデルフィニジンを蓄積し、フラボンを含まないもの、(2)主な色素としてデルフィニジンを蓄積し、フラボンを含むもの、(3)主な色素としてマルビジンを高蓄積し、フラボンを含まないもの、及び(4)主な色素としてマルビジンを高蓄積し、フラボンを含むもの、及び(5)宿主(主な色素としてペラルゴニジンを蓄積)というグループに分類し、それぞれの花弁の色彩について分光測色計を用いて評価を行った(n=10)。
これまで、本発明を説明してきたが、本発明は、その本質から逸脱せずに、修正又は変更されうると解されるべきであり、本発明の範囲は、実施例の記載に基づくのではなく、添付の請求の範囲により画されるべきことはいうまでもない。
Claims (4)
- ゴマノハグサ科由来のフラボン合成酵素遺伝子、パンジー(Viola x wittrockiana)由来のフラボノイド3',5'−水酸化酵素遺伝子、及びアントシアニンのメチル基転移酵素遺伝子を含むバラであって、
前記フラボン合成酵素遺伝子は、以下の:
(1)キンギョソウ由来のフラボン合成酵素遺伝子であって、以下の:
(a)配列番号2に記載のアミノ酸配列を有するフラボン合成酵素、
(b)配列番号2に記載のアミノ酸配列において、1個〜数個のアミノ酸の付加、欠失及び/又は1個〜数個の他のアミノ酸による置換により修飾されたアミノ酸配列を有するフラボン合成酵素であって(a)に記載したフラボン合成酵素と同じ機能を有するもの、
(c)配列番号2に記載のアミノ酸配列に対して90%以上の配列同一性を有するアミノ酸配列を有するフラボン合成酵素であって(a)に記載したフラボン合成酵素と同じ機能を有するもの、又は
(d)配列番号1に示す塩基配列を有する核酸の相補鎖と高ストリンジェント条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされたフラボン合成酵素であって(a)に記載したフラボン合成酵素と同じ機能を有するもの、
のいずれかをコードする遺伝子、並びに
(2)トレニア由来のフラボン合成酵素遺伝子であって、以下の:
(a)配列番号4に記載のアミノ酸配列を有するフラボン合成酵素、
(b)配列番号4に記載のアミノ酸配列において、1個〜数個のアミノ酸の付加、欠失及び/又は1個〜数個の他のアミノ酸による置換により修飾されたアミノ酸配列を有するフラボン合成酵素あって(a)に記載したフラボン合成酵素と同じ機能を有するもの、
(c)配列番号4に記載のアミノ酸配列に対して90%以上の配列同一性を有するアミノ酸配列を有するフラボン合成酵素であって(a)に記載したフラボン合成酵素と同じ機能を有するもの、又は
(d)配列番号3に示す塩基配列を有する核酸の相補鎖と高ストリンジェント条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされたフラボン合成酵素であって(a)に記載したフラボン合成酵素と同じ機能を有するもの、
のいずれかをコードする遺伝子、
からなる群から選ばれ、
前記フラボノイド3',5'−水酸化酵素遺伝子は、
(a)配列番号8に記載のアミノ酸配列を有するフラボノイド3',5'−水酸化酵素、
(b)配列番号8に記載のアミノ酸配列において、1個〜数個のアミノ酸の付加、欠失及び/又は1個〜数個の他のアミノ酸による置換により修飾されたアミノ酸配列を有するフラボノイド3',5'−水酸化酵素であって(a)に記載したフラボノイド3',5'−水酸化酵素と同じ機能を有するもの、
(c)配列番号8に記載のアミノ酸配列に対して90%以上の配列同一性を有するアミノ酸配列を有するフラボノイド3',5'−水酸化酵素であって(a)に記載したフラボノイド3',5'−水酸化酵素と同じ機能を有するもの、又は
(d)配列番号7に示す塩基配列を有する核酸の相補鎖と高ストリンジェント条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされたフラボノイド3',5'−水酸化酵素であって(a)に記載したフラボノイド3',5'−水酸化酵素と同じ機能を有するもの、
のいずれかをコードし、
前記アントシアニンのメチル基転移酵素遺伝子は、
(a)配列番号10に記載のアミノ酸配列を有するメチル基転移酵素、
(b)配列番号10に記載のアミノ酸配列において、1個〜数個のアミノ酸の付加、欠失及び/又は1個〜数個の他のアミノ酸による置換により修飾されたアミノ酸配列を有するメチル基転移酵素であって(a)に記載したメチル基転移酵素と同じ機能を有するもの、
(c)配列番号10に記載のアミノ酸配列に対して90%以上の配列同一性を有するアミノ酸配列を有するメチル基転移酵素であって(a)に記載したメチル基転移酵素と同じ機能を有するもの、又は
(d)配列番号9に示す塩基配列を有する核酸の相補鎖と高ストリンジェント条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされたメチル基転移酵素であって(a)に記載したメチル基転移酵素と同じ機能を有するもの、
のいずれかをコードし、そして
前記バラは、以下の:
(a)前記フラボン合成酵素遺伝子の発現により生産されたフラボン、
(b)前記フラボノイド3',5'−水酸化酵素遺伝子の発現により生産されたデルフィニジン、及び
(c)前記アントシアニンのメチル基転移酵素遺伝子の発現により生産されたマルビジン、
を含む、前記バラ。 - 請求項1に記載のフラボン合成酵素遺伝子、フラボノイド3',5'−水酸化酵素遺伝子、及びアントシアニンのメチル基転移酵素遺伝子を含む、請求項1に記載のバラの部分、子孫、組織、栄養増殖体又は細胞。
- バラの花色を改変する方法であって、以下のステップ:
ゴマノハグサ科由来のフラボン合成酵素遺伝子、パンジー(Viola x wittrockiana)由来のフラボノイド3',5'−水酸化酵素遺伝子、及びアントシアニンのメチル基転移酵素遺伝子を、バラに導入し、そして
該フラボン合成酵素遺伝子、該フラボノイド3',5'−水酸化酵素遺伝子、及び該アントシアニンのメチル基転移酵素遺伝子を発現させて、該バラの花色を改変する、
を含み、ここで、
前記フラボン合成酵素遺伝子は、以下の:
(1)キンギョソウ由来のフラボン合成酵素遺伝子であって、以下の:
(a)配列番号2に記載のアミノ酸配列を有するフラボン合成酵素、
(b)配列番号2に記載のアミノ酸配列において、1個〜数個のアミノ酸の付加、欠失及び/又は1個〜数個の他のアミノ酸による置換により修飾されたアミノ酸配列を有するフラボン合成酵素であって(a)に記載したフラボン合成酵素と同じ機能を有するもの、
(c)配列番号2に記載のアミノ酸配列に対して90%以上の配列同一性を有するアミノ酸配列を有するフラボン合成酵素であって(a)に記載したフラボン合成酵素と同じ機能を有するもの、又は
(d)配列番号1に示す塩基配列を有する核酸の相補鎖と高ストリンジェント条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされたフラボン合成酵素であって(a)に記載したフラボン合成酵素と同じ機能を有するもの、
のいずれかをコードする遺伝子、並びに
(2)トレニア由来のフラボン合成酵素遺伝子であって、以下の:
(a)配列番号4に記載のアミノ酸配列を有するフラボン合成酵素、
(b)配列番号4に記載のアミノ酸配列において、1個〜数個のアミノ酸の付加、欠失及び/又は1個〜数個の他のアミノ酸による置換により修飾されたアミノ酸配列を有するフラボン合成酵素あって(a)に記載したフラボン合成酵素と同じ機能を有するもの、
(c)配列番号4に記載のアミノ酸配列に対して90%以上の配列同一性を有するアミノ酸配列を有するフラボン合成酵素であって(a)に記載したフラボン合成酵素と同じ機能を有するもの、又は
(d)配列番号3に示す塩基配列を有する核酸の相補鎖と高ストリンジェント条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされたフラボン合成酵素であって(a)に記載したフラボン合成酵素と同じ機能を有するもの、
のいずれかをコードする遺伝子、
からなる群から選ばれ、
前記フラボノイド3',5'−水酸化酵素遺伝子は、
(a)配列番号8に記載のアミノ酸配列を有するフラボノイド3',5'−水酸化酵素、
(b)配列番号8に記載のアミノ酸配列において、1個〜数個のアミノ酸の付加、欠失及び/又は1個〜数個の他のアミノ酸による置換により修飾されたアミノ酸配列を有するフラボノイド3',5'−水酸化酵素であって(a)に記載したフラボノイド3',5'−水酸化酵素と同じ機能を有するもの、
(c)配列番号8に記載のアミノ酸配列に対して90%以上の配列同一性を有するアミノ酸配列を有するフラボノイド3',5'−水酸化酵素であって(a)に記載したフラボノイド3',5'−水酸化酵素と同じ機能を有するもの、又は
(d)配列番号7に示す塩基配列を有する核酸の相補鎖と高ストリンジェント条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされたフラボノイド3',5'−水酸化酵素であって(a)に記載したフラボノイド3',5'−水酸化酵素と同じ機能を有するもの、
のいずれかをコードし、
前記アントシアニンのメチル基転移酵素遺伝子は、
(a)配列番号10に記載のアミノ酸配列を有するメチル基転移酵素、
(b)配列番号10に記載のアミノ酸配列において、1個〜数個のアミノ酸の付加、欠失及び/又は1個〜数個の他のアミノ酸による置換により修飾されたアミノ酸配列を有するメチル基転移酵素であって(a)に記載したメチル基転移酵素と同じ機能を有するもの、
(c)配列番号10に記載のアミノ酸配列に対して90%以上の配列同一性を有するアミノ酸配列を有するメチル基転移酵素であって(a)に記載したメチル基転移酵素と同じ機能を有するもの、又は
(d)配列番号9に示す塩基配列を有する核酸の相補鎖と高ストリンジェント条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされたメチル基転移酵素であって(a)に記載したメチル基転移酵素と同じ機能を有するもの、
のいずれかをコードし、そして
前記バラは、以下の:
(a)前記フラボン合成酵素遺伝子の発現により生産されたフラボン、
(b)前記フラボノイド3',5'−水酸化酵素遺伝子の発現により生産されたデルフィニジン、及び
(c)前記アントシアニンのメチル基転移酵素遺伝子の発現により生産されたマルビジン、
を含む、前記方法。 - 前記バラは、前記フラボン合成酵素遺伝子、前記フラボノイド3',5'−水酸化酵素遺伝子、及び前記アントシアニンのメチル基転移酵素遺伝子を含まないバラよりも、L*a*b表色系色度図における色相角度(θ)が270°により近づく変化を示す、請求項3に記載の方法。
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