CN101679972B

CN101679972B - 含有黄酮及二甲花翠素的月季及其生产方法

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Publication number: CN101679972B
Application number: CN2008800209289A
Authority: CN
Inventors: 田中良和; 胜元幸久; 福井祐子; 水谷正子; 中村典子; 户上纯一
Original assignee: Suntory Holdings Ltd
Current assignee: Suntory Holdings Ltd
Priority date: 2007-06-20
Filing date: 2008-06-19
Publication date: 2013-09-04
Anticipated expiration: 2028-06-19
Also published as: IL202818A; BRPI0813127A8; KR20100017986A; WO2008156206A1; TWI440430B; CA2690754A1; US20100281575A1; JP5057349B2; BRPI0813127A2; IL202818A0; CA2690754C; CO6170374A2; AU2008264434A1; ECSP099814A; JPWO2008156206A1; KR101168421B1; RU2463348C2; EP2163619B1; AU2008264434B2; TW200911109A

Abstract

本发明提供以通过基因重组的方法而含有黄酮及二甲花翠素为特征的月季。具体为，该黄酮及二甲花翠素典型的是分别通过导入的黄酮合成酶基因、以及来自三色堇的类黄酮3’，5’-羟化酶基因及花色素苷的甲基转移酶基因的表达而生成。所述黄酮合成酶基因例如为来自玄参科的黄酮合成酶基因，作为具体实例，为来自玄参科金鱼草的黄酮合成酶基因及来自玄参科蝴蝶草的黄酮合成酶基因。此外，类黄酮3’，5’-羟化酶基因例如为来自三色堇的类黄酮3’，5’-羟化酶基因。且花色素苷的甲基转移酶基因例如为来自玄参科蝴蝶草的甲基转移酶基因。

Description

含有黄酮及二甲花翠素的月季及其生产方法

技术领域

本发明涉及人为地含有黄酮(flavone)及二甲花翠素(malvidin)的月季(a rose)。本发明涉及通过用基因操作含有黄酮及二甲花翠素所产生的辅色作用(co-pigmentation effect)来改变月季花色的方法，特别是使花色向蓝色方向变化的方法。

背景技术

花是植物的生殖器官，是为了产生作为下一代的种子所必需的。为了形成种子，花粉必须附着在雌蕊上进行受精。通常花粉的搬运由蜜蜂、蝴蝶等昆虫、蜂鸟、偶尔由蝙蝠来执行。花瓣的作用是引诱这些传播花粉的生物，植物也因此而设法改变花色、形状、图案。

在鉴赏花时，花色是花卉的最重要的性状，所以从古至今各种颜色的花都是通过杂交来育种。但是，很少有一个植物种的花具有所有的颜色，例如通过杂交培育的月季(rose(Rosa hybrida))、康乃馨(carnation(Dianthus caryophyllus))、菊花(chrysanthemum(Chrysanthemum morifolium))、百合(lily(Lilium spp.))等中没有从紫到蓝的品种，花菖蒲(Japanesegarden iris(Iris ensata thumb.))、龙胆(gentian(Gentiana triflora))中没有鲜红色的品种。

在花色中，从淡黄色到红色、蓝色大多来自类黄酮(flavonoid)及花色素苷(anthocyanin)(属于类黄酮中的有色糖苷)。类黄酮是植物的代表性次级代谢产物，如以下所示，具有C6C3C6的基本骨架，由苯丙氨酸和丙二酰CoA合成。根据C环的氧化状态，分为黄酮、黄酮醇(flavonol)等。

山奈黄素芹菜素

槲皮素木犀草素

杨梅黄素五羟黄酮

黄酮醇黄酮

类黄酮或吸收紫外线，或除去自由基，所以认为其原本担负保护植物体免受各种胁迫的功能。并且近年来作为有益健康的成份受到了关注(参照Harborne and Williams 2000Phytochemistry 55，481-504)。

已知有色的花色素苷中有数百种分子，但如下所示，作为其发色团的花色素(anthocyanidin)中通常有以下6种，即(1)从橙黄色到红色的花中较多的花葵素(pelargoni din)、(2)从红色到鲜红色的花中较多的花青素(cyanidin)及甲基花青素(peonidin)、以及(3)从紫色到蓝色的花中较多的花翠素(delphinidin)、甲花翠素(petunidin)及二甲花翠素(malvidin)。

花葵素

花青素甲基花青素

花翠素甲花翠素二甲花翠素

花色素苷的结构对其颜色影响很大。花色素苷的B环的羟基数量增加时蓝色增加。因此，花翠素型花色素苷比花葵素型花色素苷、花青素型花色素苷更蓝。包含花色素苷的类黄酮的生物合成，已超越了植物的种类而得到很好地保留。类黄酮在细胞质中进行生物合成，在附加糖、酰基后，被输送到液胞内积累起来(参照Tanaka et al.2005Plant Cell，Tissue and Organ Culture 80，1-24、及Tanaka and Brugliera 2006Ainsworth编、Flowering and its manipulation、pp.201-239，Blackwell Publishing Ltd.)。

与生物合成相关的酶的结构基因已被全部克隆。如果能够培育出重组植物，通过人为地调整这些基因的表达，则可改变在花中积累的类黄酮的结构和量，可改变花色(参照Tanaka et al.2005Plant Cell，Tissue and Organ Culture 80，1-24、及Tanaka and Brugl iera 2006Ainsworth编、Flowering and its manipulation、pp.201-239，Blackwell Publishing Ltd.)。例如有以下实例，在花瓣中不能产生花翠素的康乃馨、月季中，为了合成花翠素，通过使必需的类黄酮3’，5’-羟化酶(以下略称为“F3’5’H”)基因表达来产生花翠素，从而培育出了自然界中没有的蓝色的花(参照Tanaka 2006Phytochemistry Reviews 5，283-291)。

有时将这样人为地改变植物代谢的方法称为代谢工程学。为了改变代谢，使目的产物积累，虽然可以使产生目的产物的酶基因在重组植物中表达，但由于经常与植物自身携带的内源性酶发生竞争，因此完全或几乎不产生目的物质的积累，大多还不具有产业上有用的性状。

例如矮牵牛(Petunia hybrida)，因为其二氢黄酮醇还原酶(以下略称为“DFR”。)的特异性而不能积累花葵素，因此不存在天然的橙黄色的花色的品种。

虽然已报道了通过导入月季等的DFR基因使花葵素积累的橙黄色的矮牵牛，但为了使花葵素积累，必须使用与DFR发生竞争的类黄酮3’-羟化酶(以下略称“F3’H”)、F3’5’H、黄酮醇合成酶(以下略称“FLS”)的基因缺损的矮牵牛品种，在这些基因未缺损的矮牵牛中即使导入月季的DFR基因，也看不出表达型的变化(参照Tanaka and Brugliera 2006Ainsworth编、Flowering and its manipulation、pp.201-239，Blackwell Publishing Ltd.)。因此，仅仅通过导入目的基因，不能预测目的化合物是否积累，是否出现表达型。

进而，在代谢工程学中也会经常出现预料之外的结果。例如抑制黄酮合成酶基因在蝴蝶草(Torenia hybrida)中的表达时，结果发现黄酮量减少，黄烷酮(flavanone)有积累。如果黄烷酮积累那么花色素苷的量应该增加，但是实际上花色素苷的量也减少了(Ueyama et al.Plant Science，163，253-263，2002)。这样预测代谢物的增减很困难，为了获得目的表达型还必须进行研究。

花色素苷在结合的芳香族酰基的数量增多时，因分子内辅色作用而变蓝。具有2个以上芳香族酰基的花色素苷被称为聚酰基化花色素苷，呈现稳定的蓝色(参照Harborne and Williams 2000phytochemistry 55，481-504)。

除了根据作为必须色素的花色素苷色素本身的结构外，还根据共存的类黄酮(也称为辅色素)、金属离子、液胞的pH等使花的颜色发生变化。例如黄酮、黄酮醇是代表性的辅色素，通过与花色素苷重叠成三明治的形状，具有使花色素苷变蓝，看起来更深的效果(参照Goto(1987)Prog.Chem.Org.Natl.Prod.52)。在这一点上，可以说黄酮是无色的辅助色素成分。例如作为黄酮的一种的异牡荆黄素(isovitexin)，在花菖蒲(Japanese gardeniris(Iris ensata Thunb.))中对花色素苷发挥辅色作用，使颜色变蓝。此外还显示，异牡荆黄素通过使花色素苷稳定，从而使花菖蒲的花色稳定(参照Yabuya et al.Euphytica 2000115，1-5)。

此外，与黄酮醇相比，黄酮大多显示强的辅色作用。例如在对基因重组康乃馨的分析中，与黄酮醇相比，黄酮显示的辅色作用强(参照Fukui et al.Phytochemistry，63，15-23，2003)。因此黄酮的积累对于花色变蓝很重要。但是，并不是所有的植物都可产生黄酮，已知月季、矮牵牛等不积累黄酮。并且还知道除了花色之外，黄酮还与紫外线的吸收、各种胁迫、与其他微生物的相互作用等有关，通过合成黄酮，可获得具有新性状的植物(作为与编码黄酮合成酶的基因有关的专利文献，参考日本特开2000-279182)。但是，尚不知在月季中使黄酮表达的例子。

黄酮通过黄酮合成酶发生催化的反应由黄烷酮来合成。也就是说，芹菜素(apigenin)由柚皮素(naringenin)合成、木犀草素(luteolin)由圣草酚(eriodictyol)合成、五羟黄酮(tricetin)由五羟基黄烷酮合成。黄酮合成酶中有黄酮合成酶I和黄酮合成酶II这2种。两者都催化相同的反应，但为不同类型的酶。黄酮合成酶I是2-酮戊二酸依赖性双加氧酶(参照Britsch et al.(1981)Z.Naturforsch 36c pp.742-750、及Britsch(1990)Arch.Biochem.Biophys.282pp.152-160)中的1种，黄酮合成酶II是细胞色素P450型的单加氧酶。黄酮合成酶II的结构基因从蝴蝶草、金鱼草、紫苏(Perilla frutescens)、非洲菊(gerbera(Gerbera hybrida))、龙胆等中获得(参照Tanaka and Brugliera 2006Ainsworth编、Flowering and itsmanipulation、pp.201-239，Blackwell Publishing Ltd.)。

预测如果使黄酮合成酶基因在不产生黄酮的基因重组植物中表达，即可合成黄酮。但是，也有报告指出使蝴蝶草的黄酮合成酶基因在矮牵牛中表达，结果深的蓝紫色的花色变浅了(Tsuda et al.Plant Biotechnology，21，377-386，2004)。此外还有报告指出使来自龙胆的黄酮合成酶基因在烟草中表达，结果虽然合成了黄酮，但花色还是变浅了(Nakatsuka etal.2006，Molecular Breeding 17：91-99)。这样即使合成黄酮，花色也未必变蓝。换言之，作为未显示辅色作用的原因，可以例举为花色素苷和黄酮的量、比例不适当，糖、酰基对花色素苷和黄酮的修饰不适当等。这些结果表明，仅仅使黄酮合成酶基因表达并使黄酮积累，并不能使花色变得更蓝。

月季是最受欢迎的花卉植物，有从公元前就开始栽培的记录。而且经历数百年进行了人为的品种改良，其结果获得了含有花葵素、花青素、黄酮醇等类黄酮的月季。此外，近年来采用基因重组的方法，还培育出了产生自然月季中所没有的花翠素的月季。但是，积累黄酮的月季，不论是通过杂交还是通过基因重组，均未获得。通过杂交、通过基因重组还均未能得到积累黄酮和二甲花翠素的两者的月季。

发明内容

在植物的品种改良中使用基因重组的方法的最大优点是，与通过杂交的品种改良不同，可利用不能杂交的植物、其他生物的基因来改良植物。也就是说，如使用基因重组的方法时，可将其它种的生物的任意基因导入任意的植物如月季中，从而赋予该植物新的能力。但是，已知月季与拟南芥(Arabidopsis thaliana)、烟草(tobacco(Nicotiana tabacum L.))等模型植物不同，导入的基因是否发挥功能，大大依赖于该基因的起源、使用的启动子等。

根据WO2005/017147，将类黄酮3’，5’-羟化酶基因(F3’5’H)导入月季中时，在基因重组月季中来自矮牵牛、龙胆的相同基因不表达，也未检测出花翠素，但是，有趣的是来自三色堇的相同基因进行表达，可赋予月季产生花翠素这样的新能力。该结果表明，不能简单类推在月季中导入来自何种植物的基因发挥功能。

此外，即使在菊花中可以导入某种基因，但是也难于预测该基因在菊花中是否发挥功能，并且已知随着重组菊花的增龄，导入的基因也会逐渐失去功能。还有报告指出，在重组植物中异种基因转录时经常使用的花椰菜花叶病毒的35S启动子，在龙胆中不发挥功能(参照Mishiba et al.PlantJournal 2005，44：541-556)。

为了在月季中合成黄酮，可简单地类推为只要使黄酮合成酶基因进行表达即可，但是使双加氧酶型或细胞色素P450型中的何种黄酮合成酶表达更好，使来自何种植物的黄酮合成酶基因表达更好，并不能简单地类推，需要进行反复试验。此外，辅色作用是在液胞中只要花色素苷和黄酮、黄酮醇以一定的浓度并存就可产生的现象，但也证明，对于作为发色源的花色素苷的糖苷化等的修饰状态，需要对作为辅色素的黄酮、黄酮醇进行更加适当的糖苷化等的修饰(参照Nature.2005Aug 11；436(7052)：791、及Nature，358，515-518(1992))。

总之，为了使必需的色调表达，需要使花色素苷和黄酮·黄酮醇成为最适当的结构上的组合，而且，使进行何种修饰的花色素苷和黄酮·黄酮醇并存更好，对于这一点也需要进行反复试验。进而，即使黄酮合成酶在月季中发挥功能，因为在天然月季中柚皮素等黄烷酮被黄烷酮3-羟化酶(以下略称“F3H”)快速羟基化，由黄烷酮不只限于合成黄酮。

因此，本发明要提供为了使月季中的目的色调表达而含有适当色素的月季。

为了解决上述课题，本发明者进行各种研究，结果发现通过人为地使月季中含有黄酮及二甲花翠素，实现了目的色调的表达，完成了本发明。

具体地说，本发明如下：

1.月季(a rose)，其特征在于，通过基因重组方法含有黄酮及二甲花翠素。

2.根据所述1中所述的月季，其中，含有黄酮、且通过来自三色堇(Violax wittrockiana)的类黄酮3’，5’-羟化酶及花色素苷的甲基转移酶的表达而含有二甲花翠素。

3.根据所述1或2中所述的月季，其中，通过花色素苷的甲基转移酶基因、黄酮合成酶基因及来自三色堇的3’，5’-羟化酶基因的表达而具有二甲花翠素、黄酮及花翠素。

4.根据所述1～3中任一项所述的月季，其中，所述黄酮合成酶基因为来自玄参科的黄酮合成酶基因。

5.根据所述4中所述的月季，其中，所述来自玄参科的黄酮合成酶基因为来自玄参科金鱼草(Scrophulariaceae，Antirrhinum majus)的黄酮合成酶基因。

6.根据所述4中所述的月季，其中，所述来自玄参科的黄酮合成酶基因为来自玄参科蝴蝶草(Scrophulariaceae，Torenia hybrida)的黄酮合成酶基因。

7.根据所述5中所述的月季，其中，所述来自玄参科金鱼草的黄酮合成酶基因为编码(1)～(4)中任一项的基因：

(1)具有序列号2记载的氨基酸序列的黄酮合成酶，

(2)具有在序列号2记载的氨基酸序列中通过1个～多个氨基酸的附加、缺失及/或由其他氨基酸的取代而进行修饰的氨基酸序列的黄酮合成酶，

(3)具有与序列号2记载的氨基酸序列有90％以上序列同一性的氨基酸序列的黄酮合成酶，或

(4)由与具有序列号1所示的碱基序列的核酸在高严谨条件下杂交的核酸编码的黄酮合成酶。

8.根据所述6中所述的月季，其中，所述来自玄参科蝴蝶草的黄酮合成酶基因为编码(1)～(4)中任一项的基因：

(1)具有序列号4记载的氨基酸序列的黄酮合成酶，

(2)具有在序列号4记载的氨基酸序列中通过1个～多个氨基酸的附加、缺失及/或由其他氨基酸的取代而进行修饰的氨基酸序列的黄酮合成酶，

(3)具有与序列号4记载的氨基酸序列有90％以上序列同一性的氨基酸序列的黄酮合成酶，或

(4)由与具有序列号3所示的碱基序列的核酸在高严谨条件下杂交的核酸编码的黄酮合成酶。

9.根据所述2～8中任一项所述的月季，其中，所述来自三色堇的类黄酮3’，5’-羟化酶基因为编码(1)～(4)中任一项的基因：

(1)具有序列号8记载的氨基酸序列的类黄酮3’，5’-羟化酶，

(2)具有在序列号8记载的氨基酸序列中通过1个～多个氨基酸的附加、缺失及/或由其他氨基酸的取代而进行修饰的氨基酸序列的类黄酮3’，5’-羟化酶，

(3)具有与序列号8记载的氨基酸序列有90％以上序列同一性的氨基酸序列的类黄酮3’，5’-羟化酶，或

(4)由与具有序列号7所示的碱基序列的核酸在高严谨条件下杂交的核酸编码的类黄酮3’，5’-羟化酶。

10.根据所述2～9中任一项所述的月季，其中，所述花色素苷的甲基转移酶基因为编码(1)～(4)中任一项的基因：

(1)具有序列号10记载的氨基酸序列的甲基转移酶，

(2)具有在序列号10记载的氨基酸序列中通过1个～多个氨基酸的附加、缺失及/或由其他氨基酸的取代而进行修饰的氨基酸序列的甲基转移酶，

(3)具有与序列号10记载的氨基酸序列有90％以上序列同一性的氨基酸序列的甲基转移酶，或

(4)由与具有序列号9所示的碱基序列的核酸在高严谨条件下杂交的核酸编码的甲基转移酶。

11.根据所述2～10中任一项所述的月季，其中，与导入花色素苷的甲基转移酶基因、黄酮合成酶基因及来自三色堇的3’，5’-羟化酶基因前的宿主相比花色发生了变化。

12.根据所述11中所述的月季，其中，所述花色的变化为向蓝色的变化。

13.根据所述11或12中所述的月季，其中，所述花色的变化为L*a*b表色系统色度图中的色相角度(θ)向蓝色方向轴270°接近的变化。

14.根据所述11中所述的月季，其中，所述花色的变化为花瓣的反射光谱的最小吸收波长值向长波长侧移动的变化。。

15.月季的部分、后代、组织、营养增殖体或细胞，其与所述1～14中任一项所述的月季具有相同的性质。

16.方法，其中，通过用基因重组方法含有黄酮及二甲花翠素而产生的辅色作用来改变月季的花色。

17.根据所述16中所述的方法，其中，所述辅色作用为使花色向蓝色方向变化的作用。

具体实施方式

用语的定义

在本说明书中使用时，用语“月季(a rose)”是指作为蔷薇目蔷薇科蔷薇属(Order，Rosales，Family，Rosaceae，Genus Rosa)的落叶灌木的鉴赏用植物的总称，并不限定于特定的品种，还指植物的整体或通常包括花的部分。

在本说明书中使用时，用语“月季”的“部分、后代、组织、营养增殖体或细胞”，只要保持有本发明涉及的“月季”所期望的遗传性状，是指来自该“月季”的一切，并没有特别限定。

在本说明书中使用时，用语“高严谨条件”是指在例如包含6×SSC(1×SSC的组成：0.15M NaCl、0.015M柠檬酸钠、pH7.0)、0.5％SDS、5×Denhardt、100μg/ml经变性并断裂成片段的鲑精子DNA和50％甲酰胺的溶液中，将反义链和对象核酸在55℃时保温一夜，进行在0.1×SSC等条件及/或60℃以上等的条件下的洗涤的条件，特别是指非特异性背景信号实质上不存在的条件。

在本说明书中使用时，用语“L*a*b表色系统色度图中的色相角度(θ)”是指1976年国际照明委员会(CIE)规定的、在日本国也作为JIS8729而采用的色相色度(θ)，0°为红色方向，90°为黄色方向，180°为绿色方向，以及270°为蓝色方向。此外，花色可并用相关的色相角度和RHS(英国皇家园艺协会)的色谱标准的数据来表示。

黄酮合成基因、类黄酮3’，5’-羟化酶基因及花色素苷的甲基转移酶基因的导入

利用公知的方法，将来自紫苏的黄酮合成酶II的基因和来自三色堇的F3’5’H基因等同时导入月季中，其结果在导入来自紫苏的黄酮合成酶II的基因的月季中未检测出黄酮，表明该基因在月季中不发挥功能。另一方面，在导入了来自蝴蝶草或金鱼草的黄酮合成酶II的基因的月季中，检测出了黄酮，可知黄酮合成基因在月季中发挥功能。

这样就可以培育出以往不存在的积累了黄酮的月季。黄酮在总类黄酮中的含量(％)为1％以上、优选5％以上、更优选10％以上、并且最优选30％以上即可。同时积累了花色素苷和黄酮的月季，与仅含有相同的花色素苷的月季相比，颜色相对地呈现蓝色，可知黄酮的积累对赋予蓝色化这一新的性状发挥了作用。

而且还发现，B环被甲基化的花色素苷(含有二甲花翠素的花色素苷)和黄酮共存时比含有花翠素的花色素苷和黄酮共存时可发挥更高的辅色作用，通过在导入上述的黄酮合成酶II的基因和三色堇的F3’5’H基因的基础上，再导入B环的甲基转移酶基因，可使被甲基化的花翠素型花色素苷和黄酮在月季花瓣中积累，使月季花瓣更蓝。

此外还可知，通过杂交试验，积累花翠素型花色素苷和黄酮两者的性状还可传递给后代。

由此，通过在原本花瓣中不积累黄酮、或不积累二甲花翠素等被甲基化的花色素苷的植物中使这些化合物同时积累，可使花瓣的色彩变得更蓝。此时，期望将如月季等的原本黄酮和二甲花翠素均不积累的植物作为宿主使用。

与本发明相关的酶，典型地为具有序列表中记载的特定氨基酸序列的酶。但是我们熟知，在酶中，不仅是特定的、例如原有的氨基酸序列，即使在与酶活性相关的区域以外的区域的氨基酸序列被修饰，也可维持所期望的酶活性。因此，本发明的酶类包括：具有在序列号所示的特定的氨基酸序列通过1个～多个氨基酸的附加、缺失及/或被其他氨基酸取代而被修饰的氨基酸序列，维持原来酶活性的蛋白质；以及具有与序列号所示的特定的氨基酸序列有90％以上序列同一性的氨基酸序列，维持原来酶活性的蛋白质。

而且，还可知如果能够获得编码某种酶的基因，则在高严谨条件下与该基因杂交的核酸，编码与该酶具有同样活性的酶的可能性高。因此，由在高严谨条件下与具有特定序列号所示的碱基序列的核酸杂交的核酸编码并且具有目的酶活性的酶，也包含在本发明的酶中。

因此，作为与本发明相关的酶基因，可列举下述基因：

(A)来自金鱼草(Antirrhinum majus)的黄酮合成酶基因

其为编码下述(1)～(4)中任一项的基因，

(1)具有序列号2记载的氨基酸序列的黄酮合成酶，

(2)具有在序列号2记载的氨基酸序列中通过1个～多个氨基酸的附加、缺失及/或被其他氨基酸取代而被修饰的氨基酸序列的黄酮合成酶，

(3)具有与序列号2记载的氨基酸序列有90％以上的序列同一性的氨基酸序列的黄酮合成酶，或

(4)由在高严谨条件下与具有序列号1所示的碱基序列的核酸杂交的核酸所编码的黄酮合成酶。

(B)来自蝴蝶草(Torenia hybrida)的黄酮合成酶基因

其为编码下述(1)～(4)中任一项的基因，

(1)具有序列号4记载的氨基酸序列的黄酮合成酶，

(2)具有在序列号4记载的氨基酸序列中通过1个～多个氨基酸的附加、缺失及/或被其他氨基酸取代而被修饰的氨基酸序列的黄酮合成酶，

(3)具有与序列号4记载的氨基酸序列有90％以上的序列同一性的氨基酸序列的黄酮合成酶，或

(4)由在高严谨条件下与具有序列号3所示的碱基序列的核酸杂交的核酸所编码的黄酮合成酶。

(C)来自紫苏(Perilla frutescens)的黄酮合成酶基因

其为编码下述(1)～(4)中任一项的基因，

(1)具有序列号6记载的氨基酸序列的黄酮合成酶，

(2)具有在序列号6记载的氨基酸序列中通过1个～多个氨基酸的附加、缺失及/或被其他氨基酸取代而被修饰的氨基酸序列的黄酮合成酶，

(3)具有与序列号6记载的氨基酸序列有90％以上的序列同一性的氨基酸序列的黄酮合成酶，或

(4)由在高严谨条件下与具有序列号5所示的碱基序列的核酸杂交的核酸所编码的黄酮合成酶。

(D)来自三色堇(pansy(Violax wittrockiana))的3’，5’-羟化酶基因

其为编码下述(1)～(4)中任一项的基因，

(1)具有序列号8记载的氨基酸序列的3’，5’-羟化酶，

(2)具有在序列号8记载的氨基酸序列中通过1个～多个氨基酸的附加、缺失及/或被其他氨基酸取代而被修饰的氨基酸序列的3’，5’-羟化酶，

(3)具有与序列号8记载的氨基酸序列有90％以上的序列同一性的氨基酸序列的3’，5’-羟化酶，或

(4)由在高严谨条件下与具有序列号7所示的碱基序列的核酸杂交的核酸所编码的3’，5’-羟化酶。

(E)来自蝴蝶草(Torenia hybrida)的甲基转移酶基因

其为编码下述(1)～(4)中任一项的基因，

(1)具有序列号10记载的氨基酸序列的甲基转移酶，

(2)具有在序列号10记载的氨基酸序列中通过1个～多个氨基酸的附加、缺失及/或被其他氨基酸取代而被修饰的氨基酸序列的甲基转移酶。

(3)具有与序列号10记载的氨基酸序列有90％以上的序列同一性的氨基酸序列的甲基转移酶，或

(4)由在高严谨条件下与具有序列号9所示的碱基序列的核酸杂交的核酸所编码的甲基转移酶。

实施例

根据以下实施例对本发明更加具体地说明。本实施例的目的仅仅是举例说明本发明，并不限定本发明的范围。

实施例1：黄酮对花色素苷的辅色作用的模拟

为了进行黄酮对花色素苷的辅色作用的模拟，首先制备了花色素苷类。花青苷(Cyanin)是从月季品种“Rote Rose”(rose cv.“Rote Rose”)的花瓣中提取、纯化而成。花翠素二葡糖苷(Delphin)是将从马鞭草品种“Tapien Violet”(vberbena cv.“Tapien Violet”or vberbena variety Sunmaref TP-V(“Tapien Violet”)(“Tapien”is a Trade Mark registered in Japan))的花瓣中提取的色素进行碱水解后纯化而成。二甲花翠苷(Malvin)、及木犀草素-7-O-葡萄糖苷(Luteolin 7-O-glucoside)从日本funakoshi株式会社购入。

在这样制备的各种花色素苷中，将黄酮(Luteolin 7-O-glucoside)以在pH5.0的缓冲液中为0、1、2、4当量的摩尔浓度比添加，测定吸收光谱。作为花色素苷，使用花青苷(Cyanin)(矢车菊素-3，5-二葡萄糖苷(Cyanidin 3，5-diglucoside))、花翠素二葡糖苷(Delphin)(花翠素3，5-二葡萄糖苷(Delphinidin 3，5-diglucoside))、二甲花翠苷(Malvin)(二甲花翠素3，5-二葡萄糖苷(Malvidin 3，5-diglucoside)。花色素苷的浓度，花青苷(Cyanin)、花翠素二葡糖苷(Delphin)及二甲花翠苷(Malvin)为1mM。

如以下表1和2所示，通过添加黄酮，花色素苷水溶液的吸光度增大，其变化的比例(吸光度比)为二甲花翠苷(Malvin)为最大。且最大吸收波长(λmax)也随着黄酮的添加同时向长波长侧移动。其变化的比例二甲花翠苷(Malvin)为最大，其次为花翠素二葡糖苷(Delphin)。而且，通过L*a*b*表色系统进行色彩值的评价时，发现通过添加黄酮，观察到色彩趋向蓝色的变化，彩度也上升了。其效果二甲花翠苷(Malvin)最为显著。即证明，木犀草素-7-O-葡萄糖苷(Luteolin 7-O-glucoside)对二甲花翠苷(Malvin)的辅色作用最大。

表1

添加黄酮时花色素苷水溶液的最大吸收波长

(λmax；单位nm)

表2

λmax处相对于不添加黄酮时的吸光度比

实施例2(参考例)：向月季品种“Lavande”中导入来自三色堇的F3’5’ H#40基因和来自紫苏的黄酮合成酶基因

将含有日本特开2000-279182中记载的来自紫苏的黄酮合成酶基因的质粒、pYFS3用XbaI酶切后，进行末端平滑化，进一步用BamHI酶切，得到约1.8kb的紫苏黄酮合成酶基因片段。另一方面，将WO2005/017147中记载的pSPB906用XhoI酶切后，进行末端平滑化，进一步用BamHI酶切。在该平滑末端和BamHI切割位点之间，插入上述紫苏的黄酮合成酶基因片段，得到906-pYFS3。906-pYES3在El₂35S启动子和D8终止子(均记载于WO2005/017147中)之间具有来自紫苏的黄酮合成酶基因。

在Ueyama等的报告(Ueyama et al.Plant Science，163，253-263，2002)中记载的pSPB176的BamHI和SalI位点，插入从WO2005/017147记载的pCGP1961中用BamHI和XhoI的部分酶切而切出的三色堇F3’5’H#40基因的片段，将得到的质粒作为pSPB575。在该AscI位点，插入用AscI酶切上述906-pYFS3得到的约3.4kb的紫苏的黄酮合成酶基因表达盒。在所得到的质粒中，F 3’5’H#40基因的表达盒与紫苏的黄酮合成酶的表达盒以相同方向连接形成的载体为pSPB1310。本质粒在植物中组成型表达三色堇的F3’5’H#40基因和紫苏的黄酮合成酶基因。

将这样制备的pSPB1310导入紫藤色系月季品种“Lavande”(mauve rosevariety“Lavande”)中，得到55个转化体。在进行色素分析的50个个体中，可确认49个个体中有花翠素的积累，花翠素含有率最高为70％(平均26％)。但是完全未检测出黄酮，推测来自紫苏的黄酮合成酶基因在月季细胞内未发挥功能。

代表性的转化体的分析值如下表3所示。

表3

对照：Lavande对照

Del：花翠素、Cya：花青素、Pel：花葵素、M：杨梅黄素、Q：槲皮素、K：山奈黄素、Tri：五羟黄酮、Lut：木犀草素、Api：芹菜素

Del(％)：总花色素中的花翠素的比例

实施例3：向月季品种“Lavande”中导入来自三色堇的F3’5’H#40基因和来自蝴蝶草的黄酮合成酶基因

将Akashi等的报告(Plant Cell Physiol 40，1182-1186，1999)中记载的来自蝴蝶草的黄酮合成酶基因插入质粒pBluescript IISK(-)的EcoRI和XhoI位点，将得到的质粒作为pSPB426。用KpnI将其酶切后，进行末端平滑化，进一步用BamHI酶切，得到约1.7kb来自蝴蝶草的黄酮合成酶基因片段。另一方面，将WO2005/017147中记载的pSPB906用XhoI酶切后，进行末端平滑化，进一步用BamHI酶切。在该平滑末端和BamHI切割位点之间，插入上述蝴蝶草的黄酮合成酶基因片段，得到906-426。

在Ueyama等的报告(Ueyama et al.Plant Science，163，253-263，2002)中记载的pSPB176的BamHI和SalI位点，插入从WO2005/017147记载的pCGP1961中用BamHI和XhoI的部分酶切而切出的三色堇-F3’5’H#40基因的片段，将得到的质粒作为pSPB575。在该AscI位点，插入用AscI酶切上述906-426得到的约3.3kb蝴蝶草的黄酮合成酶基因表达盒。在得到的质粒中，F3’5’H#40基因的表达盒和蝴蝶草的黄酮合成酶的表达盒以相同方向连接形成的载体为pSPB1309。本质粒在植物中组成型表达三色堇F3’5’H#40基因和蝴蝶草的黄酮合成酶基因。

将这样制备的pSPB1309导入紫藤色系月季品种“Lavande”中，得到50个转化体。在进行色素分析的38个个体中，可确认36个个体中有花翠素的积累，花翠素含有率最高为45％(平均12％)。另一方面，由于来自蝴蝶草的黄酮合成酶基因的作用，可确认在35个个体中也有新的黄酮(木犀草素、芹菜素)的积累。黄酮总量最高在每1g新鲜花瓣重量中为1.68mg的高含量。

代表性转化体的分析值如下表4所示。

表4

对照：Lavande对照

Del(％)：总花色素中的花翠素的比例

实施例4：向月季品种“WKS124”中导入来自三色堇的F3’5’H#40基因和来自蝴蝶草的黄酮合成酶基因

在橙红色系的月季品种“WKS124”(salmon-pink rose variety“WKS124”)中导入实施例3中记载的pSPB1309，得到40个转化体。在进行色素分析的27个个体中，可确认在26个个体中有花翠素的积累，花翠素含有率最高为96％(平均81％)。另一方面，由于来自蝴蝶草的黄酮合成酶基因的作用，可确认在26个个体中还有新的黄酮(五羟黄酮、木犀草素、芹菜素)的积累。黄酮总量最高在每1g新鲜花瓣重量中为4.41mg的高含量。

代表性转化体的分析值如下表5所示。

表5

对照：WKS124对照

Del(％)：总花色素中的花翠素的比例

实施例5：向月季品种“WKS124”中导入来自三色堇的F3’5’H#40基因和来自蝴蝶草的黄酮合成酶基因以及来自蝴蝶草的花色素苷甲基转移酶基因

对实施例3中记载的pSPB1309进行PacI处理，通过切割存在于来自蝴蝶草的黄酮合成酶表达盒和来自三色堇的F3’5’H#40基因表达盒的连接位点附近(更加严密地说，存在于黄酮合成酶表达盒的D8终止子3’末端附近)的PacI位点和载体的多克隆位点内的PacI位点，切出三色堇F3’5’H#40基因表达盒。

另一方面，将具有WO2003-062428中记载的蝴蝶草的甲基转移酶基因表达盒的双元载体pSPB1530用PacI切割，在其中将上述三色堇F3’5’H#40表达盒、甲基转移酶基因表达盒以相同方向插入。将本质粒作为TMT-BP40。

另一方面，将pSPB1309用AscI切割，切出蝴蝶草的黄酮合成酶表达盒。将其在TMT-BP40的AscI位点与上述表达盒以相同方向插入，将得到的质粒作为pSFL535。本质粒在植物中组成型表达三色堇F3’5’H#40基因和蝴蝶草的甲基转移酶基因、以及蝴蝶草的黄酮合成酶基因。

将这样得到的pSFL535导入橙红色系月季品种“WKS124”中，得到173个转化体。在进行花色素分析的98个转化体中，可确认88个个体中有二甲花翠素(花翠素的3’位和5’位被甲基化的花色素)的积累。根据生成物表明，在月季的花瓣中来自三色堇的F3’5’H#40基因和来自蝴蝶草的花色素苷甲基转移酶基因发挥功能。此外，二甲花翠素含有率最高为84％(平均50％)。

另一方面，由于来自蝴蝶草的黄酮合成酶基因的作用，可确认77个个体中有新的黄酮(五羟黄酮、木犀草素、芹菜素)的积累。黄酮总量最高在每1g新鲜花瓣重量中为4.58mg的高含量。此外，在51个个体中检测出了甲基化五羟黄酮。

代表性的转化体的分析值如下表6所示。

实施例6：向月季品种“Lavande”中导入来自三色堇的F3’5’H#40基因和来自蝴蝶草的黄酮合成酶基因以及来自蝴蝶草的花色素苷甲基转移酶基因

将实施例5中记载的pSFL535导入紫藤色系月季品种“Lavande”中，得到130个转化体。在进行花色素分析的118个转化体中，可确认37个个体中有二甲花翠素(在花翠素的3’位和5’位被甲基化的花色素)的积累，根据生成物表明，在月季的花瓣中来自三色堇的F3’5’H#40基因和来自蝴蝶草的花色素苷甲基转移酶基因发挥了功能。此外，二甲花翠素含有率最高为55.6％(平均20.5％)。

另一方面，由于来自蝴蝶草的黄酮合成酶基因的作用，可确认在78个个体中有新的黄酮(五羟黄酮、木犀草素、芹菜素)的积累。黄酮总量最高在每1g新鲜花瓣重量中为5.11mg的高含量。此外，在产生黄酮的转化体中，在20个个体中检测出了被甲基化的五羟黄酮或木犀草素。

代表性的转化体的分析值如下表7所示。

实施例7：向月季品种“WKS82”中导入来自三色堇的F3’5’H#40基因和来自蝴蝶草的黄酮合成酶基因以及来自蝴蝶草的花色素苷甲基转移酶基因

将实施例5中记载的pSFL535导入紫藤色系月季品种“WKS82”(mauve rose variety“WKS82”)中，得到250个转化体。在进行花色素分析的232个转化体中，可确认110个个体中有二甲花翠素(花翠素的3’位和5’位被甲基化的花色素)的积累，根据生成物表明，在月季的花瓣中来自三色堇的F3’5’H#40基因和来自蝴蝶草的花色素苷甲基转移酶基因发挥了功能。此外，二甲花翠素含有率最高为65.2％(平均19.7％)。

另一方面，由于来自蝴蝶草的黄酮合成酶基因的作用，可确认125个个体中有新的黄酮(五羟黄酮、木犀草素、芹菜素)的积累。黄酮总量最高在每1g新鲜花瓣重量中为4.71mg的高含量。此外，在产生了黄酮的转化体中，在80个个体中检出了被甲基化的五羟黄酮或木犀草素。

代表性的转化体的分析值如下表8所示。

实施例8：向月季品种“WKS140”中导入来自三色堇的F3’5’H#40基因和来自蝴蝶草的黄酮合成酶基因以及来自蝴蝶草的花色素苷甲基转移酶基因

将实施例5中记载的pSFL535导入紫藤色系月季品种“WKS140”(mauverose variety“WKS140”)中，得到74个转化体。在进行花色素分析的74个转化体中，可确认20个个体中有二甲花翠素(花翠素的3’位和5’位被甲基化的花色素)的积累，根据生成物表明，在月季的花瓣中来自三色堇的F3’5’H#40基因和来自蝴蝶草的花色素苷甲基转移酶基因发挥了功能。此外，二甲花翠素含有率最高为51.3％(平均33.5％)。

另一方面，由于来自蝴蝶草的黄酮合成酶基因的作用，可确认在29个个体中有新的黄酮(五羟黄酮、木犀草素、芹菜素)的积累。黄酮总量最高在每1g新鲜花瓣重量中为3.04mg的高含量。此外，在产生黄酮的转化体中，在20个个体中检测出了被甲基化的五羟黄酮或木犀草素。

代表性的转化体的分析值如下表9所示。

实施例9：黄酮及二甲花翠素合成能力向后代的传递-导入来自三色堇的F3 ’5’H#40基因和来自蝴蝶草的黄酮合成酶基因和来自蝴蝶草的花色素苷甲基转移酶基因的基因重组月季与栽培月季之间的杂交

为了考察赋予月季的黄酮合成能力向后代遗传的模式，使用实施例5培育的产生二甲花翠素及黄酮的月季(表6中、植物No.6)作为花粉亲本进行杂交。种子亲本使用中轮系栽培月季“Medeo”(floribunda rose variety“Medeo”)。

对获得的转化体F1杂种后代中的10个个体进行色素分析，结果确认在7个个体中有二甲花翠素的积累，根据生成物表明，在月季的花瓣中来自三色堇的F3’5’H#40基因和来自蝴蝶草的花色素苷甲基转移酶基因发挥了功能。此外，二甲花翠素含有率最高为68.2％(平均46.6％)。

另一方面，由于来自蝴蝶草的黄酮合成酶基因的作用，可确认在8个转化体后代中也有黄酮(五羟黄酮、木犀草素、芹菜素)的积累。黄酮总量最高在每1g新鲜的花瓣重量中为7.35mg的极高含量。此外，在产生黄酮的转化体后代中，在6个个体中检出了被甲基化的五羟黄酮。

代表性的转化体的分析值如下表10所示。

实施例10：黄酮合成能力向后代的传递

导入来自三色堇的F3’5’H#40基因及来自蝴蝶草的花色素苷甲基转移酶基因的月季品种“WKS124”与导入来自三色堇的F3’5’H#40基因和来自蝴蝶草的黄酮合成酶基因的月季品种“Lavande”的杂交

为了考察赋予月季的黄酮合成能力向后代遗传的模式，使用实施例3培育的黄酮生产株(表4中、植物No.4)作为花粉亲本进行杂交。种子亲本使用在月季品种WKS124中导入pSPB1532的在来自三色堇的F3’5’H #40基因及来自蝴蝶草的花色素苷甲基转移酶基因的作用下，花瓣中大量积累了二甲花翠素的转化体WKS124/1532-12-1(记载于WO2003/062428中)。

对得到的转化体后代中的149个体进行色素分析，结果可确认在88个个体中有黄酮(五羟黄酮、木犀草素、芹菜素)的积累。黄酮总量最高在每1g新鲜花瓣重量中为4.09mg的高含量。此外，在42个个体中检测出了被甲基化的五羟黄酮，在11个个体中检测出了被甲基化的木犀草素(Chrysoeriol(3’Met-Lut))。此外，在进行色素分析的149个个体中，可确认在129个个体中有二甲花翠素的积累。二甲花翠素含有率最高为79％(平均36％)。

代表性的转化体的分析值如下表11所示。

实施例11：对含有黄酮的月季花色的评价

对于实施例4及7中培育出的转化体(以月季品种“WKS124”为宿主)，分成下述3组，(1)积累的主要色素为花翠素，不含黄酮，(2)积累的主要色素为花翠素，含有黄酮，(3)大量积累的主要色素为二甲花翠素，不含黄酮，及(4)大量积累的主要色素为二甲花翠素，含有黄酮，及(5)宿主(积累的主要色素为花葵素)对各个花瓣的色彩使用分光测色计进行评价(n＝10)。

在主色素为花翠素型的月季、二甲花翠素型的月季的任一种中，在黄酮共存时花瓣的色相角度均向蓝色方向移动。此外，在主要色素为二甲花翠素型的月季中，其种趋势更加显著，反射光谱的最小吸收波长(λMin)也向长波长侧大幅移动。由以上的结果可确认，黄酮共存使花瓣的色彩变蓝。结果如以下表12中所示。

表12

色相角度(hue)：L*a*b*表色系统中，将a*(红色方向)的轴作为0°，用由此向逆时针方向的色相移动的角度，设计为便于清楚颜色位置的方式。90°为黄色方向，180°为绿色方向，270°为蓝色方向，0°(＝360°)为红色方向。即数值越接近270°时色相越蓝。

根据本发明，在作为鉴赏用植物深受人们喜爱的花卉植物月季中，通过基因重组方法使其含有黄酮及二甲花翠素，可利用辅色作用使月季的花色向蓝色方向变化。推测具有蓝色花色的月季作为鉴赏植物有商品需求。

在此，将本说明书中所引用的所有专利文献、非专利技术文献，个别或整体地引用于本说明中。

以上对本发明进行了说明，但本发明在不脱离本质的情况下可进行修改、变更，本发明的范围，并不是根据实施例的记载、而是根据权利要求书来界定的。

序列表

(SEQUENCE LISTING)

<110>国际花卉开发有限公司

(International Flower Developments Proprietary Limited)

<120>含有黄酮及二甲花翠素的月季及其生产方法

(Rose comprising flavone and malvidin，and process for the preparation thereof)

<130>IFD(STY)-V635-PCT，TW

<140>PCT/JP2008/

<141>2008-06-19

<150>JP2007-162959

<151>2007-06-20

<160>10

<210>1

<211>1706

<212>DNA

<213>金鱼草(Antirrhinum majus)

<220>

<221>CDS

<222>(41)...(1557)

<223>编码黄酮合成酶的核苷酸序列(Nucleotide sequence encoding flavone synthase)

<400>1

gctttacaca cacacacaca cacacacaca caaacaaaa atg tct aca ctt gtc tac 57

Met Ser Thr Leu Val Tyr

1 5

agc aca ctc ttc atc ctc tca acc ctc ctc ctc acc ctc cta acc cgc 105

Ser Thr Leu Phe Ile Leu Ser Thr Leu Leu Leu Thr Leu Leu Thr Arg

10 15 20

acc cgc cgc aag acc cgc ccg ccc ggc cca tta gcc ctc ccc tta ata 153

Thr Arg Arg Lys Thr Arg Pro Pro Gly Pro Leu Ala Leu Pro Leu Ile

25 30 35

ggc cac tta cac ctc ctc ggc cca aag ctc cac cac acc ttc cac caa 201

Gly His Leu His Leu Leu Gly Pro Lys Leu His His Thr Phe His Gln

40 45 50

ttc tcc caa cgc tac ggc ccg ctc atc cag ctc tac ctc ggc tcc gtc 249

Phe Ser Gln Arg Tyr Gly Pro Leu Ile Gln Leu Tyr Leu Gly Ser Val

55 60 65 70

cca tgc gtc gtc gct tcc acg ccc gaa ctc gcc cgc gaa ttc ctc aag 297

Pro Cys Val Val Ala Ser Thr Pro Glu Leu Ala Arg Glu Phe Leu Lys

75 80 85

acg cac gaa ctc gac ttc tcg tcc cgc aag cac tcc acc gcc atc gac 345

Thr His Glu Leu Asp Phe Ser Ser Arg Lys His Ser Thr Ala Ile Asp

90 95 100

atc gtc acg tac gac tcc tcg ttc gcc ttc gcg ccg tac ggg ccg tac 393

Ile Val Thr Tyr Asp Ser Ser Phe Ala Phe Ala Pro Tyr Gly Pro Tyr

105 110 115

tgg aaa ttc atc aag aaa tta tgt act tac gag cta ctg ggt gcc cgg 441

Trp Lys Phe Ile Lys Lys Leu Cys Thr Tyr Glu Leu Leu Gly Ala Arg

120 125 130

aac ttg agc cat ttc cag ccc att aga gct ttg gag gtc aac agt ttc 489

Asn Leu Ser His Phe Gln Pro Ile Arg Ala Leu Glu Val Asn Ser Phe

135 140 145 150

ttg aga att ttg tac gag aaa aca gag cag aaa cag agt gtt aat gtg 537

Leu Arg Ile Leu Tyr Glu Lys Thr Glu Gln Lys Gln Ser Val Asn Val

155 160 165

act gag gag ctt gtg aag ctg acg agt aat gtg atc agt aac atg atg 585

Thr Glu Glu Leu Val Lys Leu Thr Ser Asn Val Ile Ser Asn Met Met

170 175 180

ttg ggg atc agg tgt tcg ggg acg gaa ggg gag gcg gag gtg gcg agg 633

Leu Gly Ile Arg Cys Ser Gly Thr Glu Gly Glu Ala Glu Val Ala Arg

185 190 195

acg gtg ata agg gag gtg acg cag ata ttt ggg gag ttt gat gtg tcg 681

Thr Val Ile Arg Glu Val Thr Gln Ile Phe Gly Glu Phe Asp Val Ser

200 205 210

gag att gtt tgg ttt tgt aag aat ttg gat ctg cag ggg att agg aag 729

Glu Ile Val Trp Phe Cys Lys Asn Leu Asp Leu Gln Gly Ile Arg Lys

215 220 225 230

agg tcg gag gat att agg agg agg tat gat gct ttg ttg gag aag att 777

Arg Ser Glu Asp Ile Arg Arg Arg Tyr Asp Ala Leu Leu Glu Lys Ile

235 240 245

att agt gat agg gag agg ttg agg ttg agg ggg ggt ggt ggt gga ggg 825

Ile Ser Asp Arg Glu Arg Leu Arg Leu Arg Gly Gly Gly Gly Gly Gly

250 255 260

ggt gga gag gtg aag gat ttt ttg gat atg ttg ttg gat gtg atg gag 873

Gly Gly Glu Val Lys Asp Phe Leu Asp Met Leu Leu Asp Val Met Glu

265 270 275

agt gag aaa tcg gag gtg gag ttt acg agg gag cat ctc aaa gct ttg 921

Ser Glu Lys Ser Glu Val Glu Phe Thr Arg Glu His Leu Lys Ala Leu

280 285 290

att ctg gat ttc ttc act gcc ggt aca gac aca aca gca atc aca aca 969

Ile Leu Asp Phe Phe Thr Ala Gly Thr Asp Thr Thr Ala Ile Thr Thr

295 300 305 310

gaa tgg gca ata gca gaa ctc att agc aat cca aat gta ctc aaa aaa 1017

Glu Trp Ala Ile Ala Glu Leu Ile Ser Asn Pro Asn Val Leu Lys Lys

315 320 325

gct caa gaa gag atg gac aaa gtc ata gga tca caa agg ttg ttg caa 1065

Ala Gln Glu Glu Met Asp Lys Val Ile Gly Ser Gln Arg Leu Leu Gln

330 335 340

gaa tcc gac gcc cct aac ttg cct tac ctc aac gcg atc ata aaa gaa 1113

Glu Ser Asp Ala Pro Asn Leu Pro Tyr Leu Asn Ala Ile Ile Lys Glu

345 350 355

acg ttc cgt ctc cac cct cca atc ccc atg ctc act aga aaa tca att 1161

Thr Phe Arg Leu His Pro Pro Ile Pro Met Leu Thr Arg Lys Ser Ile

360 365 370

tct gac gtt gtg gtc aac ggg tac acg atc cct gcc aaa acg cta ttg 1209

Ser Asp Val Val Val Asn Gly Tyr Thr Ile Pro Ala Lys Thr Leu Leu

375 380 385 390

ttt gtc aac ctt tgg tcc atg gga agg aat cct aac tac tgg gaa aat 1257

Phe Val Asn Leu Trp Ser Met Gly Arg Asn Pro Asn Tyr Trp Glu Asn

395 400 405

ccg atg gag ttc cga ccc gag agg ttt ctc gag aaa ggg acc ggg tcg 1305

Pro Met Glu Phe Arg Pro Glu Arg Phe Leu Glu Lys Gly Thr Gly Ser

410 415 420

ata gac gtt aaa ggg cag cat ttc gag ttg ctg ccg ttt ggc acg ggc 1353

Ile Asp Val Lys Gly Gln His Phe Glu Leu Leu Pro Phe Gly Thr Gly

425 430 435

agg cgg ggc tgc ccg ggg atg ttg tta ggc atg cag gag ttg ttt agt 1401

Arg Arg Gly Cys Pro Gly Met Leu Leu Gly Met Gln Glu Leu Phe Ser

440 445 450

att atc ggg gct atg gtg cag tgc ttc gat tgg aaa ctg ccc gat ggt 1449

Ile Ile Gly Ala Met Val Gln Cys Phe Asp Trp Lys Leu Pro Asp Gly

455 460 465 470

gtg aag tcg gtc gac atg acc gag cgg ccc ggg ttg acg gct cca cgt 1497

Val Lys Ser Val Asp Met Thr Glu Arg Pro Gly Leu Thr Ala Pro Arg

475 480 485

gcc aat gat ttg gtg tgc caa ttg gtg cca cgg att gac ccg gtc gtt 1545

Ala Asn Asp Leu Val Cys Gln Leu Val Pro Arg Ile Asp Pro Val Val

490 495 500

gtc tcc gga ccg tgaaccttaa ggtagtatcg ataatctgtt taattaaatt 1597

Val Ser Gly Pro

505

gttatttgtt gtgaggattt gatttttgtt atgtatgatt atgcgtggat taagataagc 1657

ctgcaaggac aaattccctt tctttgattg atgtcaatga gtttgtgtc 1706

<210>2

<211>506

<212>PRT

<213>金鱼草(Antirrhinum majus)

<220>

<221>

<222>

<223>黄酮合成酶的氨基酸序列(Amino acid sequence of flavone synthase)

<400>2

Met Ser Thr Leu Val Tyr Ser Thr Leu Phe Ile Leu Ser Thr Leu Leu

1 5 10 15

Leu Thr Leu Leu Thr Arg Thr Arg Arg Lys Thr Arg Pro Pro Gly Pro

20 25 30

Leu Ala Leu Pro Leu Ile Gly His Leu His Leu Leu Gly Pro Lys Leu

35 40 45

His His Thr Phe His Gln Phe Ser Gln Arg Tyr Gly Pro Leu Ile Gln

50 55 60

Leu Tyr Leu Gly Ser Val Pro Cys Val Val Ala Ser Thr Pro Glu Leu

65 70 75 80

Ala Arg Glu Phe Leu Lys Thr His Glu Leu Asp Phe Ser Ser Arg Lys

85 90 95

His Ser Thr Ala Ile Asp Ile Val Thr Tyr Asp Ser Ser Phe Ala Phe

100 105 110

Ala Pro Tyr Gly Pro Tyr Trp Lys Phe Ile Lys Lys Leu Cys Thr Tyr

115 120 125

Glu Leu Leu Gly Ala Arg Asn Leu Ser His Phe Gln Pro Ile Arg Ala

130 135 140

Leu Glu Val Asn Ser Phe Leu Arg Ile Leu Tyr Glu Lys Thr Glu Gln

145 150 155 160

Lys Gln Ser Val Asn Val Thr Glu Glu Leu Val Lys Leu Thr Ser Asn

165 170 175

Val Ile Ser Asn Met Met Leu Gly Ile Arg Cys Ser Gly Thr Glu Gly

180 185 190

Glu Ala Glu Val Ala Arg Thr Val Ile Arg Glu Val Thr Gln Ile Phe

195 200 205

Gly Glu Phe Asp Val Ser Glu Ile Val Trp Phe Cys Lys Asn Leu Asp

210 215 220

Leu Gln Gly Ile Arg Lys Arg Ser Glu Asp Ile Arg Arg Arg Tyr Asp

225 230 235 240

Ala Leu Leu Glu Lys Ile Ile Ser Asp Arg Glu Arg Leu Arg Leu Arg

245 250 255

Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Glu Val Lys Asp Phe Leu Asp Met

260 265 270

Leu Leu Asp Val Met Glu Ser Glu Lys Ser Glu Val Glu Phe Thr Arg

275 280 285

Glu His Leu Lys Ala Leu Ile Leu Asp Phe Phe Thr Ala Gly Thr Asp

290 295 300

Thr Thr Ala Ile Thr Thr Glu Trp Ala Ile Ala Glu Leu Ile Ser Asn

305 310 315 320

Pro Asn Val Leu Lys Lys Ala Gln Glu Glu Met Asp Lys Val Ile Gly

325 330 335

Ser Gln Arg Leu Leu Gln Glu Ser Asp Ala Pro Asn Leu Pro Tyr Leu

340 345 350

Asn Ala Ile Ile Lys Glu Thr Phe Arg Leu His Pro Pro Ile Pro Met

355 360 365

Leu Thr Arg Lys Ser Ile Ser Asp Val Val Val Asn Gly Tyr Thr Ile

370 375 380

Pro Ala Lys Thr Leu Leu Phe Val Asn Leu Trp Ser Met Gly Arg Asn

385 390 395 400

Pro Asn Tyr Trp Glu Asn Pro Met Glu Phe Arg Pro Glu Arg Phe Leu

405 410 415

Glu Lys Gly Thr Gly Ser Ile Asp Val Lys Gly Gln His Phe Glu Leu

420 425 430

Leu Pro Phe Gly Thr Gly Arg Arg Gly Cys Pro Gly Met Leu Leu Gly

435 440 445

Met Gln Glu Leu Phe Ser Ile Ile Gly Ala Met Val Gln Cys Phe Asp

450 455 460

Trp Lys Leu Pro Asp Gly Val Lys Ser Val Asp Met Thr Glu Arg Pro

465 470 475 480

Gly Leu Thr Ala Pro Arg Ala Asn Asp Leu Val Cys Gln Leu Val Pro

485 490 495

Arg Ile Asp Pro Val Val Val Ser Gly Pro

500 505

<210>3

<211>1685

<212>DNA

<213>蝴蝶草(Torenia hybrida)

<220>

<221>CDS

<222>(57)...(1592)

<400>3

atcgaaaccg ctatatcatt acatttacaa cagcgctaaa aaaatatata taaagc atg 59

Met

1

gac aca gtc tta atc aca ctc tac acc gcc ctg ttc gtc atc acc acc 107

Asp Thr Val Leu Ile Thr Leu Tyr Thr Ala Leu Phe Val Ile Thr Thr

5 10 15

acc ttc ctc ctc ctc ctc cgc cga agg gga cca ccg tct ccg ccc ggt 155

Thr Phe Leu Leu Leu Leu Arg Arg Arg Gly Pro Pro Ser Pro Pro Gly

20 25 30

cct ctc tcc cta ccc ata att ggc cac ctc cac ctc ctc ggc cca aga 203

Pro Leu Ser Leu Pro Ile Ile Gly His Leu His Leu Leu Gly Pro Arg

35 40 45

ctc cac cac acg ttc cat gaa ttc tca ctc aaa tac ggc cca ttg atc 251

Leu His His Thr Phe His Glu Phe Ser Leu Lys Tyr Gly Pro Leu Ile

50 55 60 65

cag ctc aag ctc ggc tcg atc ccg tgc gtc gtg gcc tcg acg ccc gag 299

Gln Leu Lys Leu Gly SerIle Pro Cys Val Val Ala Ser Thr Pro Glu

70 75 80

ctc gcg aga gag ttt ctt aag acg aac gag ctc gcg ttc tcc tct cgc 347

Leu Ala Arg Glu Phe Leu Lys Thr Asn Glu Leu Ala Phe Ser Ser Arg

85 90 95

aag cac tct acg gcc ata gac atc gtc acc tac gac tcg tcc ttt gct 395

Lys His Ser Thr Ala Ile Asp Ile Val Thr Tyr Asp Ser Ser Phe Ala

100 105 110

ttc tct ccg tac gga ccc tac tgg aag tac atc aag aaa ctg tgt acc 443

Phe Ser Pro Tyr Gly Pro Tyr Trp Lys Tyr Ile Lys Lys Leu Cys Thr

115 120 125

tac gag ctg ctc gga gcg agg aac ctc gga cac ttt cag ccc att agg 491

Tyr Glu Leu Leu Gly Ala Arg Asn Leu Gly His Phe Gln Pro Ile Arg

130 135 140 145

aat ctc gag gtc agg tcc ttt ctg cag ctt ctg atg cac aag agc ttt 539

Asn Leu Glu Val Arg Ser Phe Leu Gln Leu Leu Met His Lys Ser Phe

150 155 160

aag ggc gag agt gtg aat gtg aca gac gag ctg gtg agg ctg acg agc 587

Lys Gly Glu Ser Val Asn Val Thr Asp Glu Leu Val Arg Leu Thr Ser

165 170 175

aat gtg ata tcc cac atg atg ctg agc ata agg tgc tcg gaa gat gaa 635

Asn Val Ile Ser His Met Met Leu Ser Ile Arg Cys Ser Glu Asp Glu

180 185 190

ggc gat gct gag gcg gcg aga aca gtg ata cgc gag gtg acg cag ata 683

Gly Asp Ala Glu Ala Ala Arg Thr Val Ile Arg Glu Val Thr Gln Ile

195 200 205

ttt ggg gaa ttc gat gtt acg gac ata ata tgg ttt tgc aag aaa ttc 731

Phe Gly Glu Phe Asp Val Thr Asp Ile Ile Trp Phe Cys Lys Lys Phe

210 215 220 225

gat ctg cag ggg ata aag aag agg tca gag gat att cag agg agg tat 779

Asp Leu Gln Gly Ile Lys Lys Arg Ser Glu Asp Ile Gln Arg Arg Tyr

230 235 240

gat gct ttg ctc gag aag att att agt gat aga gag aga tcg agg agg 827

Asp Ala Leu Leu Glu Lys Ile Ile Ser Asp Arg Glu Arg Ser Arg Arg

245 250 255

caa aat cgt gat aag cat ggt ggc ggt aac aat gag gag gcc aag gat 875

Gln Asn Arg Asp Lys His Gly Gly Gly Asn Asn Glu Glu Ala Lys Asp

260 265 270

ttt ctt gat atg ttg ctt gat gtg atg gag agt ggg gac acg gag gtc 923

Phe Leu Asp Met Leu Leu Asp Val Met Glu Ser Gly Asp Thr Glu Val

275 280 285

aaa ttc act aga gag cat ctc aag gct ttg att ctg gat ttc ttc acg 971

Lys Phe Thr Arg Glu His Leu Lys Ala Leu Ile Leu Asp Phe Phe Thr

290 29 5300 305

gcc ggt acg gac aca aca gcc ata gcc acc gag tgg gcc atc gcc gag 1019

Ala Gly Thr Asp Thr Thr Ala Ile Ala Thr Glu Trp Ala Ile Ala Glu

310 315 320

ctc atc aac aac ccg aac gtc ttg aag aag gcc caa gaa gaa ata tcc 1067

Leu Ile Asn Asn Pro Asn Val Leu Lys Lys Ala Gln Glu Glu Ile Ser

325 330 335

cgg atc atc gga acc aag cgg atc gta caa gaa tcc gac gcc cca gac 1115

Arg Ile Ile Gly Thr Lys Arg Ile Val Gln Glu Ser Asp Ala Pro Asp

340 345 350

cta ccc tac ctc cag gcc atc atc aag gag acg ttc cgg ctc cac cca 1163

Leu Pro Tyr Leu Gln Ala Ile Ile Lys Glu Thr Phe Arg Leu His Pro

355 360 365

ccg atc ccg atg ctc tcg cgt aag tcc acc tcc gat tgc acg gtc aac 1211

Pro Ile Pro Met Leu Ser Arg Lys Ser Thr Ser Asp Cys Thr Val Asn

370 375 380 385

ggc tac aaa atc caa gcc aag agc ctc ttg ttc gtg aac ata tgg tcc 1259

Gly Tyr Lys Ile Gln Ala Lys Ser Leu Leu Phe Val Asn Ile Trp Ser

390 395 400

atc ggt cga aac cct aat tac tgg gaa agc cct atg gag ttc agg ccc 1307

Ile Gly Arg Asn Pro Asn Tyr Trp Glu Ser Pro Met Glu Phe Arg Pro

405 410 415

gag cgg ttc ttg gag aag gga cgc gag tcc atc gac gtc aag ggc cag 1355

Glu Arg Phe Leu Glu Lys Gly Arg Glu Ser Ile Asp Val Lys Gly Gln

420 425 430

cac ttt gag ctc ttg cct ttt ggg acg ggc cgc agg ggc tgt ccc ggt 1403

His Phe Glu Leu Leu Pro Phe Gly Thr Gly Arg Arg Gly Cys Pro Gly

435 440 445

atg ttg ctg gct ata caa gag gtg gtc agc atc att ggg acc atg gtt 1451

Met Leu Leu Ala Ile Gln Glu Val Val Ser Ile Ile Gly Thr Met Val

450 455 460 465

cag tgc ttc gac tgg aaa ttg gca gat ggt tcg ggc aat aat gtg gac 1499

Gln Cys Phe Asp Trp Lys Leu Ala Asp Gly Ser Gly Asn Asn Val Asp

470 475 480

atg acc gaa cgg tct gga ttg acc gct ccg aga gcg ttc gat ctg gtt 1547

Met Thr Glu Arg Ser Gly Leu Thr Ala Pro Arg Ala Phe Asp Leu Val

485 490 495

tgc cgg ttg tat cca cgg gtt gac ccg gcc aca ata tcg ggt gct 1592

Cys Arg Leu Tyr Pro Arg Val Asp Pro Ala Thr Ile Ser Gly Ala

500 505 510

tgatgtagta gggtgaggcg cgtgttggtg ttttatcttt cggttttgtt ctgttagtat 1652

tattatggtc tgtgttgaag cctcaaggat ttt 1685

<210>4

<211>512

<212>PRT

<213>蝴蝶草(Torenia hybrida)

<220>

<221>

<222>

<223>黄酮合成酶的氨基酸序列(Amino acid sequence of flavone synthase)

<400>4

Met Asp Thr Val Leu Ile Thr Leu Tyr Thr Ala Leu Phe Val Ile Thr

1 5 10 15

Thr Thr Phe Leu Leu Leu Leu Arg Arg Arg Gly Pro Pro Ser Pro Pro

20 25 30

Gly Pro Leu Ser Leu Pro Ile Ile Gly His Leu His Leu Leu Gly Pro

35 40 45

Arg Leu His His Thr Phe His Glu Phe Ser Leu Lys Tyr Gly Pro Leu

50 55 60

Ile Gln Leu Lys Leu Gly Ser Ile Pro Cys Val Val Ala Ser Thr Pro

65 70 75 80

Glu Leu Ala Arg Glu Phe Leu Lys Thr Asn Glu Leu Ala Phe Ser Ser

85 90 95

Arg Lys His Ser Thr Ala Ile Asp Ile Val Thr Tyr Asp Ser Ser Phe

100 105 110

Ala Phe Ser Pro Tyr Gly Pro Tyr Trp Lys Tyr Ile Lys Lys Leu Cys

115 120 125

Thr Tyr Glu Leu Leu Gly Ala Arg Asn Leu Gly His Phe Gln Pro Ile

130 135 140

Arg Asn Leu Glu Val Arg Ser Phe Leu Gln Leu Leu Met His Lys Ser

145 150 155 160

Phe Lys Gly Glu Ser Val Asn Val Thr Asp Glu Leu Val Arg Leu Thr

165 170 175

Ser Asn Val Ile Ser His Met Met Leu Ser Ile Arg Cys Ser Glu Asp

180 185 190

Glu Gly Asp Ala Glu Ala Ala Arg Thr Val Ile Arg Glu Val Thr Gln

195 200 205

Ile Phe Gly Glu Phe Asp Val Thr Asp Ile Ile Trp Phe Cys Lys Lys

210 215 220

Phe Asp Leu Gln Gly Ile Lys Lys Arg Ser Glu Asp Ile Gln Arg Arg

225 230 235 240

Tyr Asp Ala Leu Leu Glu Lys Ile Ile Ser Asp Arg Glu Arg Ser Arg

245 250 255

Arg Gln Asn Arg Asp Lys His Gly Gly Gly Asn Asn Glu Glu Ala Lys

260 265 270

Asp Phe Leu Asp Met Leu Leu Asp Val Met Glu Ser Gly Asp Thr Glu

275 280 285

Val Lys Phe Thr Arg Glu His Leu Lys Ala Leu Ile Leu Asp Phe Phe

290 295 300

Thr Ala Gly Thr Asp Thr Thr Ala Ile Ala Thr Glu Trp Ala Ile Ala

305 310 315 320

Glu Leu Ile Asn Asn Pro Asn Val Leu Lys Lys Ala Gln Glu Glu Ile

325 330 335

Ser Arg Ile Ile Gly Thr Lys Arg Ile Val Gln Glu Ser Asp Ala Pro

340 345 350

Asp Leu Pro Tyr Leu Gln Ala Ile Ile Lys Glu Thr Phe Arg Leu His

355 360 365

Pro Pro Ile Pro Met Leu Ser Arg Lys Ser Thr Ser Asp Cys Thr Val

370 375 380

Asn Gly Tyr Lys Ile Gln Ala Lys Ser Leu Leu Phe Val Asn Ile Trp

385 390 395 400

Ser Ile Gly Arg Asn Pro Asn Tyr Trp Glu Ser Pro Met Glu Phe Arg

405 410 415

Pro Glu Arg Phe Leu Glu Lys Gly Arg Glu Ser Ile Asp Val Lys Gly

420 425 430

Gln His Phe Glu Leu Leu Pro Phe Gly Thr Gly Arg Arg Gly Cys Pro

435 440 445

Gly Met Leu Leu Ala Ile Gln Glu Val Val Ser Ile Ile Gly Thr Met

450 455 460

Val Gln Cys Phe Asp Trp Lys Leu Ala Asp Gly Ser Gly Asn Asn Val

465 470 475 480

Asp Met Thr Glu Arg Ser Gly Leu Thr Ala Pro Arg Ala Phe Asp Leu

485 490 495

Val Cys Arg Leu Tyr Pro Arg Val Asp Pro Ala Thr Ile Ser Gly Ala

500 505 510

<210>5

<211>1770

<212>DNA

<213>紫苏(Perilla frutescens)

<220>

<221>CDS

<222>(21)...(1538)

<400>5

tgtcgacgga gcaagtggaa atg gca ctg tac gcc gcc ctc ttc ctc ctg 50

Met Ala Leu Tyr Ala Ala Leu Phe Leu Leu

1 5 10

tcc gcc gcc gtg gtc cgc tcc gtt ctg gat cga aaa cgc ggg cgg ccg 98

Ser Ala Ala Val Val Arg Ser Val Leu Asp Arg Lys Arg Gly Arg Pro

15 20 25

ccc tac cct ccc ggg ccg ttc cct ctt ccc atc atc ggc cac tta cac 146

Pro Tyr Pro Pro Gly Pro Phe Pro Leu Pro Ile Ile Gly His Leu His

30 35 40

ctc ctc ggg ccg aga ctc cac caa acc ttc cac gat ctg tcc caa cgg 194

Leu Leu Gly Pro Arg Leu His Gln Thr Phe His Asp Leu Ser Gln Arg

45 50 55

tac ggg ccc tta atg cag ctc cgc ctc ggg tcc atc cgc tgc gtc att 242

Tyr Gly Pro Leu Met Gln Leu Arg Leu Gly Ser Ile Arg Cys Val Ile

60 65 70

gct gcc tcg ccg gag ctc gcc aag gaa tgc ctc aag aca cac gag ctc 290

Ala Ala Ser Pro Glu Leu Ala Lys Glu Cys Leu Lys Thr His Glu Leu

75 80 85 90

gtc ttc tcc tcc cgc aaa cac tcc acc gcc att gat atc gtc acc tac 338

Val Phe Ser Ser Arg Lys His Ser Thr Ala Ile Asp Ile Val Thr Tyr

95 100 105

gat tca tcc ttc gct ttc tct ccc tac ggg cct tac tgg aaa ttc atc 386

Asp Ser Ser Phe Ala Phe Ser Pro Tyr Gly Pro Tyr Trp Lys Phe Ile

110 115 120

aag aaa tta tgc acc tac gag ctg ctc ggg gcc cga aat ctc gcc cac 434

Lys Lys Leu Cys Thr Tyr Glu Leu Leu Gly Ala Arg Asn Leu Ala His

125 130 135

ttt cag ccc atc agg act ctc gaa gtc aag tct ttc ctc caa att ctt 482

Phe Gln Pro Ile Arg Thr Leu Glu Val Lys Ser Phe Leu Gln Ile Leu

140 145 150

atg cgc aag ggt gaa tcg ggg gag agc ttc aac gtg act gag gag ctc 530

Met Arg Lys Gly Glu Ser Gly Glu Ser Phe Asn Val Thr Glu Glu Leu

155 160 165 170

gtg aag ctg acg agc aac gtc ata tcg cat atg atg ctg agc ata cgg 578

Val Lys Leu Thr Ser Asn Val Ile Ser His Met Met Leu Ser Ile Arg

175 180 185

tgt tca gag acg gag tcg gag gcg gag gcg gcg agg acg gtg att cgg 626

Cys Ser Glu Thr Glu Ser Glu Ala Glu Ala Ala Arg Thr Val Ile Arg

190 195 200

gag gtc acg cag ata ttt ggg gag ttc gac gtc tcc gac atc ata tgg 674

Glu Val Thr Gln Ile Phe Gly Glu Phe Asp Val Ser Asp Ile Ile Trp

205 210 215

ctt tgt aag aac ttc gat ttc caa ggt ata agg aag cgg tcc gag gat 722

Leu Cys Lys Asn Phe Asp Phe Gln Gly Ile Arg Lys Arg Ser Glu Asp

220 225 230

atc cag agg aga tat gat gct ctg ctg gag aag atc atc acc gac aga 770

Ile Gln Arg Arg Tyr Asp Ala Leu Leu Glu Lys Ile Ile Thr Asp Arg

235 240 245 250

gag aag cag agg cgg acc cac ggc ggc ggt ggc ggc ggc ggg gaa gcc 818

Glu Lys Gln Arg Arg Thr His Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Glu Ala

255 260 265

aag gat ttt ctt gac atg ttc ctc gac ata atg gag agc ggg aaa gcc 866

Lys Asp Phe Leu Asp Met Phe Leu Asp Ile Met Glu Ser Gly Lys Ala

270 275 280

gaa gtt aaa ttc acg agg gag cat ctc aaa gct ttg att ctg gat ttc 914

Glu Val Lys Phe Thr Arg Glu His Leu Lys Ala Leu Ile Leu Asp Phe

285 290 295

ttc acc gcc ggc acc gac acg acg gcg atc gtg tgt gaa tgg gcg ata 962

Phe Thr Ala Gly Thr Asp Thr Thr Ala Ile Val Cys Glu Trp Ala Ile

300 305 310

gca gaa gtg atc aac aat cca aat gtg ttg aag aaa gct caa gaa gag 1010

Ala Glu Val Ile Asn Asn Pro Asn Val Leu Lys Lys Ala Gln Glu Glu

315 320 325 330

att gcc aac atc gtc gga ttc gac aga att ctg caa gaa tcc gac gcc 1058

Ile Ala Asn Ile Val Gly Phe Asp Arg Ile Leu Gln Glu Ser Asp Ala

335 340 345

cca aat ctg ccc tac ctt caa gcc ctc atc aaa gaa aca ttc cgg ctc 1106

Pro Asn Leu Pro Tyr Leu Gln Ala Leu Ile Lys Glu Thr Phe Arg Leu

350 355 360

cac cct cca atc cca atg ctg gcg agg aaa tcg atc tcc gac tgc gtc 1154

His Pro Pro Ile Pro Met Leu Ala Arg Lys Ser Ile Ser Asp Cys Val

365 370 375

atc gac ggc tac atg att ccg gcc aac acg ctg ctc ttc gtc aac ctc 1202

Ile Asp Gly Tyr Met Ile Pro Ala Asn Thr Leu Leu Phe Val Asn Leu

380 385 390

tgg tcc atg ggg cgg aac cct aaa atc tgg gac tac ccg acg gcg ttc 1250

Trp Ser Met Gly Arg Asn Pro Lys Ile Trp Asp Tyr Pro Thr Ala Phe

395 400 405 410

cag ccg gag agg ttt ctg gag aag gaa aag gcc gcc atc gat gtt aaa 1298

Gln Pro Glu Arg Phe Leu Glu Lys Glu Lys Ala Ala Ile Asp Val Lys

415 420 425

ggg cag cat ttt gag ctg cta ccg ttc gga acg ggc agg aga ggc tgc 1346

Gly Gln His Phe Glu Leu Leu Pro Phe Gly Thr Gly Arg Arg Gly Cys

430 435 440

cca ggg atg ctt tta gcc att cag gag gtg gtc atc ata att ggg acg 1394

Pro Gly Met Leu Leu Ala Ile Gln Glu Val Val Ile Ile Ile Gly Thr

445 450 455

atg att caa tgc ttc gat tgg aag ctg ccc gac ggc tcc ggc cat gtt 1442

Met Ile Gln Cys Phe Asp Trp Lys Leu Pro Asp Gly Ser Gly His Val

460 465 470

gat atg gca gaa cgg cca ggg ctc acg gca ccg cga gag acc gat ttg 1490

Asp Met Ala Glu Arg Pro Gly Leu Thr Ala Pro Arg Glu Thr Asp Leu

475 480 485 490

ttt tgc cgt gtg gtg ccg cga gtt gat ccg ttg gtt gtt tcc acc cag 1538

Phe Cys Arg Val Val Pro Arg Val Asp Pro Leu Val Val Ser Thr Gln

495 500 505

tgatcacccc ctttaaattt attaatgata tatttttatt ttgagaaaaa ataaaaatgc 1598

taattgtttt gtttcatgat gtaattgtta attagtttct attgtgcgct gtcgcgtgtc 1658

gcgtggctta agataagatt gtatcattgg tacctaggat gtattttcat tttcaataaa 1718

ttattttgtg ctgtgtatat taaaaaaaaa aaagaaaaaa aaaaaaaaaa aa 1770

<210>6

<211>506

<212>PRT

<213>紫苏(Perilla frutescens)

<220>

<221>

<222>

<223>黄酮合成酶的氨基酸序列(Amino acid sequence of flavone synthase)

<400>6

Met Ala Leu Tyr Ala Ala Leu Phe Leu Leu Ser Ala Ala Val Val Arg

1 5 10 15

Ser Val Leu Asp Arg Lys Arg Gly Arg Pro Pro Tyr Pro Pro Gly Pro

20 25 30

Phe Pro Leu Pro Ile Ile Gly His Leu His Leu Leu Gly Pro Arg Leu

35 40 45

His Gln Thr Phe His Asp Leu Ser Gln Arg Tyr Gly Pro Leu Met Gln

50 55 60

Leu Arg Leu Gly Ser Ile Arg Cys Val Ile Ala Ala Ser Pro Glu Leu

65 70 75 80

Ala Lys Glu Cys Leu Lys Thr His Glu Leu Val Phe Ser Ser Arg Lys

85 90 95

His Ser Thr Ala Ile Asp Ile Val Thr Tyr Asp Ser Ser Phe Ala Phe

100 105 110

Ser Pro Tyr Gly Pro Tyr Trp Lys Phe Ile Lys Lys Leu Cys Thr Tyr

115 120 125

Glu Leu Leu Gly Ala Arg Asn Leu Ala His Phe Gln Pro Ile Arg Thr

130 135 140

Leu Glu Val Lys Ser Phe Leu Gln Ile Leu Met Arg Lys Gly Glu Ser

145 150 155 160

Gly Glu Ser Phe Asn Val Thr Glu Glu Leu Val Lys Leu Thr Ser Asn

165 170 175

Val Ile Ser His Met Met Leu Ser Ile Arg Cys Ser Glu Thr Glu Ser

180 185 190

Glu Ala Glu Ala Ala Arg Thr Val Ile Arg Glu Val Thr Gln Ile Phe

195 200 205

Gly Glu Phe Asp Val Ser Asp Ile Ile Trp Leu Cys Lys Asn Phe Asp

210 215 220

Phe Gln Gly Ile Arg Lys Arg Ser Glu Asp Ile Gln Arg Arg Tyr Asp

225 230 235 240

Ala Leu Leu Glu Lys Ile Ile Thr Asp Arg Glu Lys Gln Arg Arg Thr

245 250 255

His Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Glu Ala Lys Asp Phe Leu Asp Met

260 265 270

Phe Leu Asp Ile Met Glu Ser Gly Lys Ala Glu Val Lys Phe Thr Arg

275 280 285

Glu His Leu Lys Ala Leu Ile Leu Asp Phe Phe Thr Ala Gly Thr Asp

290 295 300

Thr Thr Ala Ile Val Cys Glu Trp Ala Ile Ala Glu Val Ile Asn Asn

305 310 315 320

Pro Asn Val Leu Lys Lys Ala Gln Glu Glu Ile Ala Asn Ile Val Gly

325 330 335

Phe Asp Arg Ile Leu Gln Glu Ser Asp Ala Pro Asn Leu Pro Tyr Leu

340 345 350

Gln Ala Leu Ile Lys Glu Thr Phe Arg Leu His Pro Pro Ile Pro Met

355 360 365

Leu Ala Arg Lys Ser Ile Ser Asp Cys Val Ile Asp Gly Tyr Met Ile

370 375 380

Pro Ala Asn Thr Leu Leu Phe Val Asn Leu Trp Ser Met Gly Arg Asn

385 390 395 400

Pro Lys Ile Trp Asp Tyr Pro Thr Ala Phe Gln Pro Glu Arg Phe Leu

405 410 415

Glu Lys Glu Lys Ala Ala Ile Asp Val Lys Gly Gln His Phe Glu Leu

420 425 430

Leu Pro Phe Gly Thr Gly Arg Arg Gly Cys Pro Gly Met Leu Leu Ala

435 440 445

Ile Gln Glu Val Val Ile Ile Ile Gly Thr Met Ile Gln Cys Phe Asp

450 455 460

Trp Lys Leu Pro Asp Gly Ser Gly His Val Asp Met Ala Glu Arg Pro

465 470 475 480

Gly Leu Thr Ala Pro Arg Glu Thr Asp Leu Phe Cys Arg Val Val Pro

485 490 495

Arg Val Asp Pro Leu Val Val Ser Thr Gln

500 505

<210>7

<211>1781

<212>DNA

<213>三色堇(Viola x wittrockiana)

<220>

<221>CDS

<222>(7)...(1524)

<223>编码类黄酮-3’，5’-羟化酶的核苷酸序列(Nucleotide sequence encoding

flavonoid-3’，5’-hydroxylase)

<400>7

gacaac atg gca att cta gtc acc gac ttc gtt gtc gcg gct ata att 48

Met Ala Ile Leu Val Thr Asp Phe Val Val Ala Ala Ile Ile

1 5 10

ttc ttg atc act cgg ttc tta gtt cgt tct ctt ttc aag aaa cca acc 96

Phe Leu Ile Thr Arg Phe Leu Val Arg Ser Leu Phe Lys Lys Pro Thr

15 20 25 30

cga ccg ctc ccc ccg ggt cct ctc ggt tgg ccc ttg gtg ggc gcc ctc 144

Arg Pro Leu Pro Pro Gly Pro Leu Gly Trp Pro Leu Val Gly Ala Leu

35 40 45

cct ctc cta ggc gcc atg cct cac gtc gca cta gcc aaa ctc gct aag 192

Pro Leu Leu Gly Ala Met Pro His Val Ala Leu Ala Lys Leu Ala Lys

50 55 60

aag tat ggt ccg atc atg cac cta aaa atg ggc acg tgc gac atg gtg 240

Lys Tyr Gly Pro Ile Met His Leu Lys Met Gly Thr Cys Asp Met Val

65 70 75

gtc gcg tcc acc ccc gag tcg gct cga gcc ttc ctc aaa acg cta gac 288

Val Ala Ser Thr Pro Glu Ser Ala Arg Ala Phe Leu Lys Thr Leu Asp

80 85 90

ctc aac ttc tcc aac cgc cca ccc aac gcg ggc gca tcc cac cta gcg 336

Leu Asn Phe Ser Asn Arg Pro Pro Asn Ala Gly Ala Ser His Leu Ala

95 100 105 110

tac ggc gcg cag gac tta gtc ttc gcc aag tac ggt ccg agg tgg aag 384

Tyr Gly Ala Gln Asp Leu Val Phe Ala Lys Tyr Gly Pro Arg Trp Lys

115 120 125

act tta aga aaa ttg agc aac ctc cac atg cta ggc ggg aag gcg ttg 432

Thr Leu Arg Lys Leu Ser Asn Leu His Met Leu Gly Gly Lys Ala Leu

130 135 140

gat gat tgg gca aat gtg agg gtc acc gag cta ggc cac atg ctt aaa 480

Asp Asp Trp Ala Asn Val Arg Val Thr Glu Leu Gly His Met Leu Lys

145 150 155

gcc atg tgc gag gcg agc cgg tgc ggg gag ccc gtg gtg ctg gcc gag 528

Ala Met Cys Glu Ala Ser Arg Cys Gly Glu Pro Val Val Leu Ala Glu

160 165 170

atg ctc acg tac gcc atg gcg aac atg atc ggt caa gtg ata ctc agc 576

Met Leu Thr Tyr Ala Met Ala Asn Met Ile Gly Gln Val Ile Leu Ser

175 180 185 190

cgg cgc gtg ttc gtg acc aaa ggg acc gag tct aac gag ttc aaa gac 624

Arg Arg Val Phe Val Thr Lys Gly Thr Glu Ser Asn Glu Phe Lys Asp

195 200 205

atg gtg gtc gag ttg atg acg tcc gcc ggg tac ttc aac atc ggt gac 672

Met Val Val Glu Leu Met Thr Ser Ala Gly Tyr Phe Asn Ile Gly Asp

210 215 220

ttc ata ccc tcg atc gct tgg atg gat ttg caa ggg atc gag cga ggg 720

Phe Ile Pro Ser Ile Ala Trp Met Asp Leu Gln Gly Ile Glu Arg Gly

225 230 235

atg aag aag ctg cac acg aag ttt gat gtg tta ttg acg aag atg gtg 768

Met Lys Lys Leu His Thr Lys Phe Asp Val Leu Leu Thr Lys Met Val

240 245 250

aag gag cat aga gcg acg agt cat gag cgc aaa ggg aag gca gat ttc 816

Lys Glu His Arg Ala Thr Ser His Glu Arg Lys Gly Lys Ala Asp Phe

255 260 265 270

ctc gac gtt ctc ttg gaa gaa tgc gac aat aca aat ggg gag aag ctt 864

Leu Asp Val Leu Leu Glu Glu Cys Asp Asn Thr Asn Gly Glu Lys Leu

275 280 285

agt att acc aat atc aaa gct gtc ctt ttg aat cta ttc acg gcg ggc 912

Ser Ile Thr Asn Ile Lys Ala Val Leu Leu Asn Leu Phe Thr Ala Gly

290 295 300

acg gac aca tct tcg agc ata atc gaa tgg gcg tta acg gag atg atc 960

Thr Asp Thr Ser Ser Ser Ile Ile Glu Trp Ala Leu Thr Glu Met Ile

305 310 315

aag aat ccg acg atc tta aaa aag gcg caa gag gag atg gat cga gtc 1008

Lys Asn Pro Thr Ile Leu Lys Lys Ala Gln Glu Glu Met Asp Arg Val

320 325 330

atc ggt cgt gat cgg agg ctg ctc gaa tcg gac ata tcg agc ctc ccg 1056

Ile Gly Arg Asp Arg Arg Leu Leu Glu Ser Asp Ile Ser Ser Leu Pro

335 340 345 350

tac cta caa gcc att gct aaa gaa acg tat cgc aaa cac ccg tcg acg 1104

Tyr Leu Gln Ala Ile Ala Lys Glu Thr Tyr Arg Lys His Pro Ser Thr

355 360 365

cct ctc aac ttg ccg agg att gcg atc caa gca tgt gaa gtt gat ggc 1152

Pro Leu Asn Leu Pro Arg Ile Ala Ile Gln Ala Cys Glu Val Asp Gly

370 375 380

tac tac atc cct aag gac gcg agg ctt agc gtg aac att tgg gcg atc 1200

Tyr Tyr Ile Pro Lys Asp Ala Arg Leu Ser Val Asn Ile Trp Ala Ile

385 390 395

ggt cgg gac ccg aat gtt tgg gag aat ccg ttg gag ttc ttg ccg gaa 1248

Gly Arg Asp Pro Asn Val Trp Glu Asn Pro Leu Glu Phe Leu Pro Glu

400 405 410

aga ttc ttg tct gaa gag aat ggg aag atc aat ccc ggt ggg aat gat 1296

Arg Phe Leu Ser Glu Glu Asn Gly Lys Ile Asn Pro Gly Gly Asn Asp

415 420 425 430

ttt gag ctg att ccg ttt gga gcc ggg agg aga att tgt gcg ggg aca 1344

Phe Glu Leu Ile Pro Phe Gly Ala Gly Arg Arg Ile Cys Ala Gly Thr

435 440 445

agg atg gga atg gtc ctt gta agt tat att ttg ggc act ttg gtc cat 1392

Arg Met Gly Met Val Leu Val Ser Tyr Ile Leu Gly Thr Leu Val His

450 455 460

tct ttt gat tgg aaa tta cca aat ggt gtc gct gag ctt aat atg gat 1440

Ser Phe Asp Trp Lys Leu Pro Asn Gly Val Ala Glu Leu Asn Met Asp

465 470 475

gaa agt ttt ggg ctt gca ttg caa aag gcc gtg ccg ctc tcg gcc ttg 1488

Glu Ser Phe Gly Leu Ala Leu Gln Lys Ala Val Pro Leu Ser Ala Leu

480 485 490

gtc agc cca cgg ttg gcc tca aac gcg tac gca acc tgagctaatg 1534

Val Ser Pro Arg Leu Ala Ser Asn Ala Tyr Ala Thr

495 500 505

ggctgggcct agttttgtgg gccttaattt agagactttt gtgttttaag gtgtgtactt 1594

tattaattgg gtgcttaaat gtgtgtttta atttgtattt atggttaatt atgactttat 1654

tgtataatta tttatttttc ccttctgggt attttatcca tttaattttt cttcagaatt 1714

atgatcatag ttatcagaat aaaattgaaa ataatgaatc ggaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1774

aaaaaaa 1781

<210>8

<211>506

<212>PRT

<213>三色堇(Viola x wittrockiana)

<220>

<221>

<222>

<223>类黄酮-3’，5’-羟化酶的氨基酸序列(Amino acid sequence of

flavonoid-3’，5’-hydroxylase)

<400>8

Met Ala Ile Leu Val Thr Asp Phe Val Val Ala Ala Ile Ile Phe Leu

1 5 10 15

Ile Thr Arg Phe Leu Val Arg Ser Leu Phe Lys Lys Pro Thr Arg Pro

20 25 30

Leu Pro Pro Gly Pro Leu Gly Trp Pro Leu Val Gly Ala Leu Pro Leu

35 40 45

Leu Gly Ala Met Pro His Val Ala Leu Ala Lys Leu Ala Lys Lys Tyr

50 55 60

Gly Pro Ile Met His Leu Lys Met Gly Thr Cys Asp Met Val Val Ala

65 70 75 80

Ser Thr Pro Glu Ser Ala Arg Ala Phe Leu Lys Thr Leu Asp Leu Asn

85 90 95

Phe Ser Asn Arg Pro Pro Asn Ala Gly Ala Ser His Leu Ala Tyr Gly

100 105 110

Ala Gln Asp Leu Val Phe Ala Lys Tyr Gly Pro Arg Trp Lys Thr Leu

115 120 125

Arg Lys Leu Ser Asn Leu His Met Leu Gly Gly Lys Ala Leu Asp Asp

130 135 140

Trp Ala Asn Val Arg Val Thr Glu Leu Gly His Met Leu Lys Ala Met

145 150 155 160

Cys Glu Ala Ser Arg Cys Gly Glu Pro Val Val Leu Ala Glu Met Leu

165 170 175

Thr Tyr Ala Met Ala Asn Met Ile Gly Gln Val Ile Leu Ser Arg Arg

180 185 190

Val Phe Val Thr Lys Gly Thr Glu Ser Asn Glu Phe Lys Asp Met Val

195 200 205

Val Glu Leu Met Thr Ser Ala Gly Tyr Phe Asn Ile Gly Asp Phe Ile

210 215 220

Pro Ser Ile Ala Trp Met Asp Leu Gln Gly Ile Glu Arg Gly Met Lys

225 230 235 240

Lys Leu His Thr Lys Phe Asp Val Leu Leu Thr Lys Met Val Lys Glu

245 250 255

His Arg Ala Thr Ser His Glu Arg Lys Gly Lys Ala Asp Phe Leu Asp

260 265 270

Val Leu Leu Glu Glu Cys Asp Asn Thr Asn Gly Glu Lys Leu Ser Ile

275 280 285

Thr Asn Ile Lys Ala Val Leu Leu Asn Leu Phe Thr Ala Gly Thr Asp

290 295 300

Thr Ser Ser Ser Ile Ile Glu Trp Ala Leu Thr Glu Met Ile Lys Asn

305 310 315 320

Pro Thr Ile Leu Lys Lys Ala Gln Glu Glu Met Asp Arg Val Ile Gly

325 330 335

Arg Asp Arg Arg Leu Leu Glu Ser Asp Ile Ser Ser Leu Pro Tyr Leu

340 345 350

Gln Ala Ile Ala Lys Glu Thr Tyr Arg Lys His Pro Ser Thr Pro Leu

355 360 365

Asn Leu Pro Arg Ile Ala Ile Gln Ala Cys Glu Val Asp Gly Tyr Tyr

370 375 380

Ile Pro Lys Asp Ala Arg Leu Ser Val Asn Ile Trp Ala Ile Gly Arg

385 390 395 400

Asp Pro Asn Val Trp Glu Asn Pro Leu Glu Phe Leu Pro Glu Arg Phe

405 410 415

Leu Ser Glu Glu Asn Gly Lys Ile Asn Pro Gly Gly Asn Asp Phe Glu

420 425 430

Leu Ile Pro Phe Gly Ala Gly Arg Arg Ile Cys Ala Gly Thr Arg Met

435 440 445

Gly Met Val Leu Val Ser Tyr Ile Leu Gly Thr Leu Val His Ser Phe

450 455 460

Asp Trp Lys Leu Pro Asn Gly Val Ala Glu Leu Asn Met Asp Glu Ser

465 470 475 480

Phe Gly Leu Ala Leu Gln Lys Ala Val Pro Leu Ser Ala Leu Val Ser

485 490 495

Pro Arg Leu Ala Ser Asn Ala Tyr Ala Thr

500 505

<210>9

<211>1014

<212>DNA

<213>蝴蝶草(Torenia hybrida)

<220>

<221>CDS

<222>(69)...(785)

<223>编码甲基转移酶的核苷酸序列(Nucleotide sequence encoding methyltransferase)

<400>9

cggcacgagt tcaattccgc cattttctcc aataataaca ttcataaata caatcagcag 60

cagcaaaa atg aaa gat aag ttc tat ggc acc att ttg cag agc gaa 107

Met Lys Asp Lys Phe Tyr Gly Thr Ile Leu Gln Ser Glu

1 5 10

gcc ctc gca aag tat ctg tta gag aca agt gcc tat cca cga gaa cat 155

Ala Leu Ala Lys Tyr Leu Leu Glu Thr Ser Ala Tyr Pro Arg Glu His

15 20 25

ccg cag ctc aaa gaa cta agg agc gca act gtg gac aag tat caa tat 203

Pro Gln Leu Lys Glu Leu Arg Ser Ala Thr Val Asp Lys Tyr Gln Tyr

30 35 40 45

tgg agc ttg atg aat gtt cca gct gat gag ggg cag ttc att tca atg 251

Trp Ser Leu Met Asn Val Pro Ala Asp Glu Gly Gln Phe Ile Ser Met

50 55 60

tta ctg aaa att atg aac gca aaa aag aca att gaa gtt gga gtt ttc 299

Leu Leu Lys Ile Met Asn Ala Lys Lys Thr Ile Glu Val Gly Val Phe

65 70 75

aca ggc tac tca ctc cta tca act gct ctg gct cta cct gat gat ggc 347

Thr Gly Tyr Ser Leu Leu Ser Thr Ala Leu Ala Leu Pro Asp Asp Gly

80 85 90

aaa atc gtt gcc att gat cct gat aga gaa gct tat gag act ggt ttg 395

Lys Ile Val Ala Ile Asp Pro Asp Arg Glu Ala Tyr Glu Thr Gly Leu

95 100 105

cca ttt atc aag aaa gca aac gtg gct cat aaa atc caa tac ata caa 443

Pro Phe Ile Lys Lys Ala Asn Val Ala His Lys Ile Gln Tyr Ile Gln

110 115 120 125

tct gat gcc atg aaa gtc atg aat gac ctc att gct gcc aag gga gaa 491

Ser Asp Ala Met Lys Val Met Asn Asp Leu Ile Ala Ala Lys Gly Glu

130 135 140

gaa gaa gag ggg agc ttt gac ttt ggg ttc gtg gat gca gac aaa gaa 539

Glu Glu Glu Gly Ser Phe Asp Phe Gly Phe Val Asp Ala Asp Lys Glu

145 150 155

aac tac ata aac tac cac gag aaa ctg ttg aag ctg gtt aag gtt gga 587

Asn Tyr Ile Asn Tyr His Glu Lys Leu Leu Lys Leu Val Lys Val Gly

160 165 170

ggg atc ata gga tac gac aac act ctg tgg tct gga aca gtt gct gca 635

Gly Ile Ile Gly Tyr Asp Asn Thr Leu Trp Ser Gly Thr Val Ala Ala

175 180 185

tct gaa gac gat gag aat aat atg caa gac tac tta aga ggt tgc aga 683

Ser Glu Asp Asp Glu Asn Asn Met Gln Asp Tyr Leu Arg Gly Cys Arg

190 195 200 205

ggg cat atc ctc aaa cta aac tcc ttt ctc gca aac gat gat cgg att 731

Gly His Ile Leu Lys Leu Asn Ser Phe Leu Ala Asn Asp Asp Arg Ile

210 215 220

gaa ttg gct cac ctc tct att gga gat gga ctc acc ttg tgc aaa cgt 779

Glu Leu Ala His Leu Ser Ile Gly Asp Gly Leu Thr Leu Cys Lys Arg

225 230 235

ctc aaa taataatttt caactttatt attattgttt cataaaaagc atttactgct 835

Leu Lys

ggcctggcct ggcctgtttc agcatcttat atttctattg ttctaaatat tttagttatc 895

ttgtttatca acttgtctgt cttatatgtt taaaagaaag atgtcatgta attgtaactc 955

gatcgggctc ttgtaatatt ataatgaatt ttattgattt caaaaaaaaa aaaaaaaaa 1014

<210>10

<211>239

<212>PRT

<213>蝴蝶草(Torenia hybrida)

<220>

<221>

<222>

<223>甲基转移酶的氨基酸序列(Amino acid sequence of methyltransferase)

<400>10

Met Lys Asp Lys Phe Tyr Gly Thr Ile Leu Gln Ser Glu Ala Leu Ala

1 5 10 15

Lys Tyr Leu Leu Glu Thr Ser Ala Tyr Pro Arg Glu His Pro Gln Leu

20 25 30

Lys Glu Leu Arg Ser Ala Thr Val Asp Lys Tyr Gln Tyr Trp Ser Leu

35 40 45

Met Asn Val Pro Ala Asp Glu Gly Gln Phe Ile Ser Met Leu Leu Lys

50 55 60

Ile Met Asn Ala Lys Lys Thr Ile Glu Val Gly Val Phe Thr Gly Tyr

65 70 75 80

Ser Leu Leu Ser Thr Ala Leu Ala Leu Pro Asp Asp Gly Lys Ile Val

85 90 95

Ala Ile Asp Pro Asp Arg Glu Ala Tyr Glu Thr Gly Leu Pro Phe Ile

100 105 110

Lys Lys Ala Asn Val Ala His Lys Ile Gln Tyr Ile Gln Ser Asp Ala

115 120 125

Met Lys Val Met Asn Asp Leu Ile Ala Ala Lys Gly Glu Glu Glu Glu

130 135 140

Gly Ser Phe Asp Phe Gly Phe Val Asp Ala Asp Lys Glu Asn Tyr Ile

145 150 155 160

Asn Tyr His Glu Lys Leu Leu Lys Leu Val Lys Val Gly Gly Ile Ile

165 170 175

Gly Tyr Asp Asn Thr Leu Trp Ser Gly Thr Val Ala Ala Ser Glu Asp

180 185 190

Asp Glu Asn Asn Met Gln Asp Tyr Leu Arg Gly Cys Arg Gly His Ile

195 200 205

Leu Lys Leu Asn Ser Phe Leu Ala Asn Asp Asp Arg Ile Glu Leu Ala

210 215 220

His Leu Ser Ile Gly Asp Gly Leu Thr Leu Cys Lys Arg Leu Lys

225 230 235

Claims

1.通过用基因重组方法含有黄酮及二甲花翠素而产生的辅色作用来改变月季花色的方法，其中，通过来自玄参科蝴蝶草的花色素苷的甲基转移酶基因、来自玄参科蝴蝶草的黄酮合成酶基因及来自三色堇的类黄酮3’,5’－羟化酶基因的表达而含有黄酮及二甲花翠素。

2.根据权利要求1中所述的方法，其中，所述来自玄参科蝴蝶草的黄酮合成酶基因为编码由序列号4记载的氨基酸序列组成的黄酮合成酶的基因。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中，所述来自三色堇的类黄酮3’,5’－羟化酶基因为编码由序列号8记载的氨基酸序列组成的类黄酮3’,5’－羟化酶的基因。

4.根据权利要求1或2所述的方法，其中，所述来自玄参科蝴蝶草的花色素苷的甲基转移酶基因为编码由序列号10记载的氨基酸序列组成的甲基转移酶的基因。

5.根据权利要求3中所述的方法，其中，所述来自玄参科蝴蝶草的花色素苷的甲基转移酶基因为编码由序列号10记载的氨基酸序列组成的甲基转移酶的基因。