JP5010920B2 - 治療に使用するためのヒト血漿由来のインターα阻害タンパク質の調製方法及びその組成物 - Google Patents
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Description
本出願は、仮特許出願第60/ 「2003年11月8日出願;発明の名称:治療に使用するのためのヒト血漿由来のインターα阻害タンパク質製剤及び組成物」に開示された主題に関連し、その開示を参照してその全てを本明細書に取り込む。
本発明の一部は、米国立衛生研究所のグラント第R01 GM053008号、同第R01 GM057468号及び同第R43 GM065667号に基づく助成を受けてなされたものである。
関連した態様では、IαIpの組成物は、インターα阻害タンパク質(IαI)及びプレα阻害タンパク質(PαI)の混合物を含み、ここに於いて、IαI及びPαIが生理学的割合で前記混合物に存在し、かつ、トリプシン阻害の高い比活性を有している。
別の関連した態様では、IαIpの組成物は、1時間を超える半減期を有するIαI及びPαIを含む。
さらに別の関連した態様では、IαIpの組成物は、IαI及びPαIを含み、ここに於いて、IαI及びPαIが、3つの重鎖(H1、H2及びH3)のうちの少なくとも1つと会合したインターα阻害タンパク質の軽鎖から構成される。
なおさらに別の関連した態様では、IαIpの組成物は、IαI及びPαIが生理学的割合で存在するところの、IαI及びPαIを含有する血漿分画物を血漿から単離すること;及び、血漿分画物を精製して、IαIpの純度が約85%〜約100%の範囲にあるIαIp組成物を得ること、を含む方法に従って作製される。
関連した態様では、IαIpによる治療に対する応答を予測するための方法が記載される。この方法は、患者から得られたサンプルをアッセイして、IαI、PαI、IαIp、H3、H4、H1、H2及びLCのうちの1つ又はそれ以上のレベルを検出することを含み、この場合、検出されたレベルにより、IαIpによる治療に対する好ましい応答をもたらし得る患者が特定される。
関連した態様では、IαIpを含む容器、及びIαIpを患者に投与するための指示を伴うラベル又は包装添付文書を含む組成物が記載される。
さらなる関連した態様では、上記に記載されるような組成物、及び治療に使用するための説明書を含むキットが記載される。
本発明の他の実施形態が下記に開示される。
IαIpを血漿から精製するための新規な方法が本明細書中に開示される。さらに、急性炎症性疾患、敗血症、重篤なショック、敗血症性ショック、リウマチ様関節炎、ガン、ガン転移、感染性疾患及び早期陣痛を治療するために患者に投与するための、精製されたIαIpの治療用組成物が、本明細書中に開示される。
血漿分画物は、本発明によれば、ヒト、霊長類、ウシ、ブタ、ネコ又はイヌの供給源から得られる。
本明細書中に記載される単離工程又は精製工程はいずれも、所望されるならば、より高い純度を得るために繰り返すことができる。クロマトグラフィー工程は回分式又はカラム形式であり得る。
本発明によるプロセスではまた、例えば、ヘパリンアフィニティカラムに通し、素通り(非結合)画分を集めることによって血漿分画物をさらに精製することを含むことができる。
例えば、本発明による医薬組成物は、インターα阻害タンパク質(IαI)及びプレαタンパク質(PαI)の混合物であり、この混合物にIαI及びPαIが生理学的割合で存在し、かつ、純度が約85%〜約100%の範囲にあるところの、治療有効量のIαIp組成物であり得る。医薬組成物はまた、インターα阻害タンパク質(IαI)及びプレαタンパク質(PαI)の混合物であり、この混合物にIαI及びPαIが生理学的割合で存在し、かつ、3つの重鎖(H1、H2及びH3)のうちの少なくとも1つと、又はH1、H2、H3及びH4のうちの少なくとも1つと会合したインターα阻害タンパク質の軽鎖を含むところの、治療有効量のIαIp組成物であり得る。医薬組成物はまた、インターα阻害タンパク質(IαI)及びプレαタンパク質(PαI)の混合物であり、この混合物にIαI及びPαIが生理学的割合で存在し、かつ、トリプシン阻害の高い比活性を有するところの、治療有効量のIαIp組成物であり得る。医薬組成物はまた、インターα阻害タンパク質(IαI)及びプレαタンパク質(PαI)の混合物であり、この混合物にIαI及びPαIが生理学的割合で存在し、かつ、1時間、5時間又は10時間よりも大きい半減期を有するところの、治療有効量のIαIp組成物であり得る。
IαIpを含む容器、及びIαIpを患者に投与するための指示を伴うラベル又は包装添付文書もまた意図される。説明書は、投薬量、投与形態及び貯蔵条件のための指示を提供することができる。
本発明は、以下に記載される実施例に限定されると解釈されるものではなく、むしろ、本明細書中に提供される如何なる適用、及び当業者の技術に含まれるすべての均等な変形をも含むものと解釈されたい。
SELDI−TOF質量分析法による分析では、重鎖4(H4)もまた125kDaのバンド(PαI)及び250kDaのバンド(IαI)の両方に存在することが示された(データは示されず)。250kDaのバンドにおけるH4の存在が、より顕著である。このことは、IαI(H1+H2+LC)及びPαI(H3+LC)とは異なる別の複合体タンパク質が本発明のいくつかの組成物では存在し得ることを示唆している。これまでのところ、H4は複合体化形態では記載されていない。遊離状態のH4は125kDa又は250kDaよりも小さい。質量分析法の結果により、本発明者らは、H4がビクニン(軽鎖)又は他の何かとの複合体で存在しているのではないかと考える。
オスのスプラーグドーリー(Sprague-Dawley)ラット(275g〜325g)を温度制御の部屋において12時間の明暗周期で飼育し、ラットには標準的なPurinaラット規定食を与えた。敗血症を誘導する前に、ラットを水を自由に摂取させる以外は一晩絶食させた。ラットをイソフルラン吸入により麻酔し、腹側頸部、腹部及び鼠径部の毛を剃り、その部分を10%のポビドンヨウ素により洗浄した。2cmの中線腹部切開を行った。盲腸を露出させ、腸閉塞を避けるために回盲弁の丁度末端で結紮し、18ゲージのニードルにより2回穿刺し、少量の糞便が穴から流れることを可能にするようにわずかに圧迫し、その後、腹腔に戻した。その後、腹部切開を層状に閉じた。偽手術の動物(すなわち、対照動物)は、同じ手順を受けたが、盲腸の結紮又は穿刺のいずれも行われなかった。動物を、手術後直ちに皮下への3ml/100gBWの規定食塩水により蘇生させた。その後、動物を、組織サンプルの採取のために、盲腸結紮・穿刺(CLP)又は偽手術の後の様々な間隔で麻酔した。すべての実験は、実験動物の使用に関する国立衛生研究所の指針に従って行われた。この計画は、North Shore−Long Island Jewish Research Instituteの施設内動物管理使用委員会によって承認された。
ヒトIαIp(IαI及びPαIの両方)を、凝固因子VIIIをヒト血漿から精製するために設計された手法の副産物として単離した。この手法は低温沈降物のイオン交換クロマトグラフィー及びサイズ排除クロマトグラフィーを伴う。約70%の純度がクロマトグラフィー分離後に達成された。このIαIp含有調製物は、毒性、血栓形成性又は低血圧に関して副作用をほとんど有していない。敗血症発症後の1、5、10時間又は10及び20時間で、左大腿静脈に、イソフルラン麻酔下、ポリエチレン−50チューブをカニューレ挿入した。30mg/kgBWの用量でのヒトIαIp濃縮物、又は等体積の媒体(規定食塩水、1.5ml/ラット)を、一定の注入速度で30分かけて、大腿カテーテルを介して静脈内投与した。ヒトIαIpの投与は、以前の実験では、注入期間中又はその後において平均動脈圧又は心拍数を変化させなかった(データは示されず)。
肝臓は、ビクニンの主要な供給源と考えられる。従って、本発明者らは肝臓におけるビクニンのmRNA発現を測定した。総RNAをTri−Reagent(Molecular Research Center, Cincinnati, OH)によって肝臓から抽出した。100mgの肝臓組織を1.5mlのTri−Reagentにおいてホモジナイズし、クロロホルムの添加によって水相及び有機相に分離し、遠心分離した。RNAをイソプロパノールの添加によって水相から沈殿させ、エタノールにより洗浄した。ペレットを0.1%のDEPCで処理した脱イオン化蒸留水に溶解した。RNAの濃度及び純度を、260及び280nmにおいて吸光度を測定することによって決定した。各組織に由来する5μgのRNAを、50mMのKCl、10mMのTris−HCl、5mMのMgCl2、1mMのdNTP、20UのRNase阻害剤、2.5mMのオリゴd(T)16プライマー、及び50Uの逆転写酵素を含有する20μlの反応体積に逆転写した。逆転写反応液を42℃にて1時間インキュベーションし、その後95℃で5分間加熱した。1μlのcDNAを、50mMのKCl、10mMのTris−HCl、2mMのMgCl2、0.2mMのdNTP、及び0.7UのAmpliTaq DNAポリメラーゼを含有する、25μlのPCR混合物において、ラットのビクニン(633bp)(5’TGACGAATATGCCATTTTCC3’、5’CCACAGTACTCCTTGCACTCC3’)(受入番号S87544)、ラットのグリセルアルデヒド−3−リン酸デヒドロゲナーゼ7(G3PDH)(24)(983bp)(5’TGAAGGTCGGTGTCAACGGATTTGGC3’、5’CATGTAGGCCATGAGGTCCACCAC3’)に対して特異的な、3’及び5’プライマーのそれぞれ0.15μMを用いて、増幅した。PCRをBio−Radサーマルサイクラーで行った。RT−PCR後、5μlの反応混合物を、0.22μg/mlの臭化エチジウムを含有する、1.2%のTBEアガロースゲルで電気泳動した。その後、ゲルを展開させ、バンドの強度を、Bio−Rad画像システム(Hercules、CA)を使用してG3PDHによって正規化した。
精製されたIαIpを、1,3,4,6−テトラクロロ−3a−6a−ジフェニルグリコルリル(IODO−GENヨウ素化試薬;Pierce, Rockford, IL)を使用してNa125I(Amersham, Arlington Heights, IL)により放射性ヨウ素化した。取り込まれなかった125Iを、反応混合物をExcellulose GF−5脱塩カラム(Pierce)に加えることによって除いた。放射能をガンマカウンタ(Pharmacia-LKB, Piscataway, NJ)で測定した。CLP又は偽手術の後12時間で、動物をイソフルリン吸入により麻酔した。鎮静の定常状態をナトリウムペントバルビタール(約30mg/kgBW)のその後の静脈内注射により維持した。ポリエチレン−50カテーテルを右頸静脈及び左大腿動脈に設置し、125I標識のIαIpのボーラス注射(約500,000cpm/ラット)を、頸静脈カニューレを介して施した。シリンジにおける残留放射能をガンマカウンタにより測定し、その放射能カウントを最初の注射前のカウントから引いて、正味の注射された放射能を求めた。血液サンプルを、循環における125I−IαIpの半減期(t1/2)を求めるために、注射後直ちに、そしてその後、8時間の間に2時間毎に採取した。各サンプルにおける放射能(cpm)をガンマカウンタにより測定した。t1/2を、Wu R、Zhou M、Cui Xら(Ghrelinクリアランスは多菌性敗血症の後期段階では低下する、Int J Mol Med. 2003, 12: 777-782)に従って計算した。
CLPを上記のように行った。CLP後1、5、10時間又は10及び20時間で、ヒトIαIp濃縮物(30mg/kgBW)又は媒体(規定食塩水、1.5ml/ラット、CLP後1時間にて、又はCLP後10時間及び20時間にて)を静脈内注入した、CLP後20時間にて、壊死した盲腸を切除し、腹腔を40mlの暖かい滅菌された規定食塩水溶液を使用することによって2回洗浄した。その後、腹部切開を層状に閉じた。CLP動物における盲腸切除の手法は、敗血症病巣を可能ならいつでも除去しなければならない臨床的状況を模倣するために行った。その後、動物には食物及び水を自由に取らせ、そして、動物を、生存を記録するために10日間モニターした。
結果は平均値±SEとして表される。一元配置分散分析(ANOVA)及びチューキー検定を使用して、異なる実験動物群を比較した。生存率をカプラン・マイヤー法によって推定し、ログランク検定によって比較した。値における違いは、P<0.05ならば、有意であると見なした。
ビクニンはIαIpの活性な部分である。肝臓はビクニンの主要な供給源である。従って、本発明者らは、IαIpの産生を示すために、肝臓におけるビクニンのmRNA発現を選んでいる。図3に示されるように、肝臓におけるビクニンのmRNA発現はCLP後5時間では変化しない、しかしながら、CLP後20時間で32%の減少が、偽手術の動物と比較して見出された(P<0.05)。
IαIpの半減期を、敗血症発症後12時間で注射された放射能標識IαIpの血中レベルの変化を測定することによって評価した。図4に示されるように、125I−IαIpのt1/2が、CLP後、5.6±0.3時間〜11.8±2.7時間に著しく増大した(P<0.05)。
CLP及び盲腸切除の後における生存率は、(CLP後1時間での)1回の媒体投与の場合、2日目で75%であり、5〜10日目では50%に低下した(図5)。しかしながら、CLP後1時間でのヒトIαIpの投与は、10日間の観察期間中を通して、生存率を92%に改善させた(P<0.05;図5)。CLP後5時間又は10時間でのヒトIαIpの投与は、生存率を64%及び73%にそれぞれ改善させたが、これらの改善は統計学的には有意ではなかった(図6)。CLP及び盲腸切除の後における生存率は、(CLP後10時間及び20時間での)2回の媒体投与の場合、2日目で56%であり、5〜10日目では44%に低下した(図7)。これは、1回の媒体投与(図5)と比較して、著しく異なっていなかった。しかしながら、CLP後10時間及び20時間でのヒトIαIpの投与は、10日間の観察期間中を通して、生存率を81%に改善させ、これは、媒体群と比較して、著しく異なっていた(P<0.05;図7)。
DEAEセファデックスA50を用いた固相抽出の後の、透析又は限外ろ過/透析ろ過された溶出物を加えた後、弱く結合した成分が、0.28Mの塩化ナトリウムを含有する0.005Mのクエン酸ナトリウム/0.0055Mのリン酸ナトリウム緩衝液(pH6.0)を用いてDEAE−セファロースFFカラムから溶出させる(これは、Hofferら(Journal of Chromatography B 669 (1995) 187-196)に記載される)。前の工程において、カラムを、0.20Mの塩化ナトリウムを含有する0.005Mのクエン酸ナトリウム/0.0055Mのリン酸ナトリウム緩衝液(pH6.0)により洗浄した。
0.005Mのリン酸ナトリウム緩衝液(pH7.0)に対する透析又は限外ろ過/透析ろ過(UF/DF)の後、溶出液をヒドロキシルアパタイトカラムに加えた。IαIpタンパク質はカラムに結合せず、IαIpタンパク質を素通り画分として集めた。混入しているタンパク質(主に、FII、FVII及びFX)を、リン酸ナトリウム緩衝液の増大する濃度によるグラジエントを使用して溶出させることができる。IαI/PαI分画物は、90%を超える標的タンパク質(主に、IαI及びPαI)を含有する。
ヘパリンセファロースアフィニティクロマトグラフィー(L.Hofferらの「J. of Chromatography B」)からの非結合タンパク質を、DEAE−セファロースFFアニオン交換カラムに加える。カラムを少なくとも3カラム体積の0.005Mのリン酸塩緩衝液(pH7.0)により洗浄した後、IαI/PαI含有画分を、0.55Mの塩化ナトリウムを含有する0.005Mのリン酸塩緩衝液(pH7.0)(溶出緩衝液)により溶出した。溶出液は約30〜40%のIαI/PαIを含有する。0.005Mのリン酸ナトリウム緩衝液(pH7.0)に対する透析又は限外ろ過/透析ろ過(UF/DF)の後、DEAEセファロースFFからの溶出液をヒドロキシルアパタイトカラムに加えた。IαI/PαIはカラムに結合せず、IαI/PαIを素通り画分として集める。混入しているタンパク質(主に、FII及びFX)を、リン酸ナトリウム緩衝液の増大する濃度によるグラジエントを使用して溶出させることができる。精製されたIαI/PαI画分は、90%を超える標的タンパク質を含有する。
図8a及び図8bは、実施例3〜5によって表されるように、IαIpの例示的な精製スキームを流れ図で記述する。
多菌性の敗血症を、オスのスプラーグドーリーラットにおいて盲腸の結紮・穿刺(CLP)によって誘導した。動物を、CLPを行う前に水を自由に摂取させる以外は一晩絶食させた。実験のとき、ラットをメチルフルラン吸入によって麻酔し、2cmの腹部中線切開を行った。盲腸を露出させ、腸閉塞を避けるために回盲弁の丁度末端で結紮し、18ゲージのニードルにより2回穿刺し、少量の糞便が押し出されるように穏やかに圧迫し、その後、腹腔に戻した。腹部切開を層状に閉じ、動物に30mL/kg体重の規定食塩水溶液を蘇生液としてCLP後直ちに皮下に与えた。2群のラット(n=12/群)をこの実験に使用した。治療群には、高度に精製されたIαIpを、30mg/kg体重で、CLP後の10時間及び20時間にて与えた。対照群には、生理的食塩水を与えた。CLP後20時間で、壊死した盲腸を切除し、腹腔を、40mlの暖かい滅菌された規定食塩水溶液を使用することによって2回洗浄した。その後、腹部切開を層状に閉じた。CLP動物における盲腸切除の手法は、敗血症病巣が除去される臨床的状況を模倣するために行った。実験動物には食物を自由に取らせ、そして、動物を、非生存体について死亡時間を記録するために10日間モニターした。対数順位検定(log-rank test)を、異なる動物群の間での死亡率の比較のために用い、p値をカプラン・マイヤー法によって求めた。生存における著しい増大が、生理的食塩水のコントロール群と比較して、治療群で観測された(対照群の44%に対して、治療群において動物の81.3%が生存した(p値=0.0293))。このことは、高度に精製されたIαIpが生物学的に活性(有効)であり、かつ、敗血症動物において敗血症関連死を減少させることにおいて効果的であることを示唆している。結果を図9に示す。
DEAE−セファロースFFでの凝固因子FIXのクロマトグラフィー精製からの「洗浄画分」(Josic et al, Journal of Chromatography、上記にて引用)。この画分は、0.25Mの塩化ナトリウムを含有する0.01〜0.1Mのクエン酸ナトリウム/0.005〜0.1Mのリン酸ナトリウム緩衝液(pH6.0)を用いて溶出させることができる。IαI及びPαIがこの画分における主成分である。FIX含有画分は、次の工程において、0.3〜0.6Mの塩化ナトリウムを含有する0.01〜0.1Mのクエン酸ナトリウム/0.005〜0.1Mのリン酸ナトリウム緩衝液(pH6.0)を用いて、DEAEセファロースFFカラムから溶出させることができる。この分画物もまた、残存量のIαIpと一緒に、凝固因子II(FII)、凝固因子X(FX)、より少ない量の凝固因子VII(FVII)のような他のビタミンK依存性凝固因子を含有する。モル浸透圧濃度及び塩濃度を低下させるために透析を行った後、FIX画分における残留IαIpを、固定化ヘパリンでのアフィニティクロマトグラフィー、そして、塩濃度及びモル浸透圧濃度が増大する緩衝液での段階的溶出によって回収することができる。洗浄緩衝液での初期の溶出段階から得られる画分は、80%を超えるIαIpを含有し、FIXの混入が非常に低い。後の工程の塩濃度及びモル浸透圧濃度が高い緩衝液では、FIXの溶出が生じる。ヘパリンに結合しない素通り画分もまた存在し、これはFIXを含まず、IαIp(30〜40%)、ビタミンK依存性凝固因子、及びウイルス不活性化のために使用された溶媒/界面活性剤(S/D)の混合物、を含有する。S/Dは、DEAE−セファロースFFの追加のロマトグラフィー工程で除くことができる。
弱アニオン交換体DEAEセファデックスA50による固相抽出後の溶出液の代わりに、強アニオン交換体QセファデックスA50による固相抽出後の溶出液を使用することができる。溶出条件がドイツ国特許DE4342132C1号に記載される。IαI及びPαIの混合物は、このモノリシックアニオン交換支持体DEAE−CIMに結合しないか、又は弱く結合するだけである。凝固因子のFII、FVII、FIX及びFX、凝固阻害剤のPC、PS及びPZ、接着タンパク質のビトロネクチン、並びにプロテアーゼFSAPのような、他のタンパク質は別個の画分に溶出される。残留する混入物のさらなる分離を、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィーを使用して次の工程で達成することができる。
DEAE CIMモノリス(膜)を、DEAEセファロースFF又は他の粒子型アニオン交換体の代わりに、FIX精製におけるクロマトグラフィー分離のために使用することができる(ドイツ国特許DE4342132C1号を参照のこと)。驚くべきことに、IαI及びPαIは、このモノリシック支持体に結合しないか、又は弱く結合しただけであった。FIX、ビトロネクチン、並びにFII、FVII(少量)及びFXのような、他のタンパク質、が別個の画分として溶出した。第VII因子活性化プロテアーゼ(FSAP)(J. Roemisch, Biological Chemistry, 383 (2002) 1119-1124)に主に由来するタンパク質分解活性もまた、この精製工程で完全に分離された。IαI/PαI含有画分からの残留する混入物、すなわち、微量のビタミンK依存性凝固因子FII、FVII及びFXのさらなる分離が、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィーを使用して次の工程で達成された。
本出願明細書全体を通して引用されるすべての参考文献(文献、発行された特許、公開された特許出願、及び同時係属中の特許出願を含む)の内容は、参照して特にその全てを本明細書に取り込む。
当業者であれば、本明細書中に記載される本発明の特定の実施形態の多くの均等物を認識するか、又は通常の実験により確認することができるものである。そのような均等物は、上記の特許請求の範囲に含まれるものとする。
Claims (51)
- (a)インターα阻害タンパク質(IαI)及びプレαタンパク質(PαI)が生理学的割合で存在する、IαI及びPαIを含有する血漿分画物を、血漿から単離すること、ここで、単離が血漿の固相抽出又はクロマトグラフィー処理を含む、及び
(b)血漿分画物を精製して、IαIpの純度が85%〜100%の範囲にあるIαIp組成物を得ること、ここで、精製がアニオン交換クロマトグラフィー、及びヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィーの素通り画分を得ることを含む、
からなるIαI及びPαIを生理学的割合で含む、血漿由来のIαIp組成物を製造する方法。 - 単離が、固相抽出及びクロマトグラフィー処理を含むものである、請求項1に記載の方法。
- 固相抽出が、DEAEセファデックスによるものである、請求項2に記載の方法。
- クロマトグラフィー処理が、アニオン交換クロマトグラフィーによるものである、請求項1〜3のいずれか一項に記載の方法。
- アニオン交換クロマトグラフィーが、粒子に基づいたものである、請求項4に記載の方法。
- 粒子が、DEAEセファロース、DEAEセファデックスA50、トヨパールDEAE、TMAEフラクトゲル、DEAEフラクトゲル又はQセファロースのような固定化アニオン交換基を含有する、請求項5に記載の方法。
- クロマトグラフィー処理が、モノリシック支持体によって行われる、請求項1〜4のいずれか一項に記載の方法。
- モノリシック支持体が、DEAE−CIM又はQ−CIMのような固定化されたアニオン交換リガンドを有するCIMである、請求項7に記載の方法。
- 血漿分画物が、凝固因子IXの精製から得られる副分画物、プロトロンビン複合体濃縮物の精製からの副分画物、血漿の低温沈降反応から生じる低温沈降上清、又はクリオプア血漿を含むものである、請求項1〜8のいずれか一項に記載の方法。
- 血漿分画物が、ヒト、霊長類、ウシ、ブタ、ネコ又はイヌに由来する、請求項1〜9のいずれか一項に記載の方法。
- 凝固因子IXの精製から得られる副分画物を得る工程、プロトロンビン複合体濃縮物の精製からの副分画物を得る工程、血漿の低温沈降反応から生じる低温沈降上清を得る工程、又はクリオプア血漿を得る工程をさらに含む、請求項1〜10のいずれか一項に記載の方法。
- 精製が、アフィニティクロマトグラフィーを含む、請求項1〜11のいずれかに記載の方法。
- アフィニティクロマトグラフィーがヘパリンを用いるものである請求項12に記載の方法。
- 血漿分画物に存在するIαI及びPαIが、60,000〜280,000kDaの見かけの分子量を有するものである請求項1〜13のいずれか一項に記載の方法。
- 精製が、ヘパリンアフィニティカラムに通すこと、及び素通り(非結合)画分を集めることによるものである請求項1〜14のいずれかに記載の方法。
- 血漿分画物及び/又は精製されたIαIpを、ウイルス不活性化する工程をさらに含む、請求項1〜15のいずれか一項に記載の方法。
- ウイルス不活性化することが、溶媒/界面活性剤処理又は熱不活性化によって実施される、請求項16に記載の方法。
- 熱不活性化が、55℃〜65℃の温度、又は70℃〜120℃における乾熱処理で行われる、請求項17に記載の方法。
- 安定化剤の添加をさらに含む、請求項16〜18のいずれかに記載の方法。
- 精製されたIαIpを、さらにアニオン交換クロマトグラフィー処理する工程を含む、請求項1〜19のいずれか一項に記載の方法。
- アニオン交換クロマトグラフィーが、DEAEセファロースによるものである、請求項20に記載の方法。
- IαIp組成物が、1時間又は5時間を超える半減期を有するものである、請求項1〜21のいずれか一項に記載の方法。
- IαIp組成物が、トリプシン阻害の高い比活性を有するものである、請求項1〜22のいずれか一項に記載の方法。
- トリプシン阻害の比活性が、1000〜2000IU/mgである、請求項23に記載の方法。
- インターα阻害タンパク質(IαI)及びプレαタンパク質(PαI)の混合物を含有してなるIαIp含有組成物であって、IαI及びPαIが該混合物中に生理学的割合で存在しており、1000〜2000IU/mgのトリプシン阻害の高い比活性を有し、1時間を超える半減期を有し、H1、H2及びH3の3つの重鎖のうち少なくとも1つと会合したインターα阻害タンパク質の軽鎖又はH1、H2、H3及びH4の4つの重鎖のうち少なくとも1つと会合したインターα阻害タンパク質の軽鎖を含む、IαIp含有組成物。
- インターα阻害タンパク質(IαI)及びプレαタンパク質(PαI)が生理学的割合で存在し、その純度が85%〜100%であるIαI及びPαIの混合物を含有してなる請求項25に記載のIαIp含有組成物。
- IαIp含有組成物が、請求項1〜24のいずれかに従って製造されるものである請求項25又は26に記載のIαIp含有組成物。
- IαIpが、60%〜80%のIαI及び40%〜20%のPαIを含む、請求項25〜27のいずれかに記載のIαIp含有組成物。
- 生理学的割合が、ヒト血漿において自然の状態で現れるIαI対PαIの比率である、請求項25〜28のいずれかに記載のIαIp含有組成物。
- IαIp含有組成物が、ヒト疾患を治療するための医薬組成物である請求項25〜29のいずれかに記載のIαIp含有組成物。
- 医薬組成物が、急性炎症性疾患、敗血症、重篤なショック、敗血症性ショック、リウマチ様関節炎、ガン、ガン転移、外傷/傷害、感染性疾患及び早期陣痛の治療のためのものである、請求項30に記載のIαIp含有組成物。
- 安定化剤をさらに含む、請求項25〜31のいずれかに記載のIαIp含有組成物。
- 安定化剤が、アルブミン、ポリエチレングリコール、α,α−トレハロース、アミノ酸、塩、グリセロール、ω−アミノ酸、糖、又はそれらの組合せである、請求項32に記載のIαIp含有組成物。
- IαIp含有組成物が、少なくとも5時間又は10時間の半減期を有する、請求項25〜33のいずれかに記載のIαIp含有組成物。
- 医薬組成物が、追加の治療剤をさらに含む、請求項30〜34のいずれかに記載のIαIp含有組成物。
- 追加の治療剤が、抗ガン剤、抗炎症剤、抗凝固剤又は免疫調節剤である、請求項35に記載の組成物。
- 医薬組成物が、炎症関連障害、ガン又は感染性疾患を治療するためのものである請求項30〜36のいずれかに記載のIαIp含有組成物。
- IαIpが、患者から単離されたものである請求項30〜37のいずれかに記載のIαIp含有組成物。
- 患者が、ヒト、ウシ、ブタ、ヤギ又は霊長類である、請求項38に記載のIαIp含有組成物。
- IαIpが、錠剤、カプセル又は注射剤として投与されるものである、請求項30〜39のいずれかに記載のIαIp含有組成物。
- IαIpが、少なくとも85%の純度である、請求項25〜40のいずれかに記載のIαIp含有組成物。
- IαIpが、85%〜100%の純度である、請求項41に記載のIαIp含有組成物。
- IαIpが、60%〜80%のIαI及び40%〜20%のPαIを含む、請求項41又は42に記載のIαIp含有組成物。
- 医薬組成物が、
(a)患者において、下記:
(i) IαIのレベル;
(ii) PαIのレベル;
(iii) IαIpのレベル;
(iv) H3のレベル;
(v) H4のレベル;
(vi) H1のレベル;
(vii) H2のレベル;及び
(viii)LCのレベル
の1つ又はそれ以上の処置前レベルを決定した後に投与されるものである請求項30〜43のいずれかに記載のIαIp含有組成物。 - 医薬組成物が、その投与後に、
(c)IαIpによる初期処置の後の、処置後のレベルの1つ又はそれ以上を決定することをさらに含み、IαIpのレベルの調節が、治療が好ましい臨床的応答を生じさせている指標により投与されるものである請求項30〜44のいずれかに記載のIαIp含有組成物。 - 調節が、IαIpのレベルに於いて増大することである、請求項45に記載のIαIp含有組成物。
- IαI、PαI、IαIp、H3、H4、H1、H2及びLCのレベルが免疫学的方法によって決定されるものである請求項44〜46のいずれかに記載のIαIp含有組成物。
- 処置前レベルを決定処置の期間が、定常状態の血漿中IαIp濃度に到達するのに要する時間である、請求項44〜47のいずれかに記載のIαIp含有組成物。
- IαIp療法に対して好ましい応答をする患者を特定することを含む、IαIp療法に対する応答を予測するために、患者から取得したサンプルをアッセイして、
下記:
(i) IαI;
(ii) PαI;
(iii) IαIp;
(iv) H3;
(v) H4;
(vi) H1;
(vii) H2;及び
(viii)LC
の1つ又はそれ以上のレベルを検出する方法に使用するための請求項25〜48のいずれかに記載のIαIp含有組成物、及び説明書を含むキット。 - 検出されたレベルが、IαI及びPαIのレベルに於いて減少しているものである、請求項49に記載のキット。
- IαIpによる処置後の患者に於けるレベルが増大することが、患者がIαIpによる治療に対して好ましい臨床的応答を有しそうであるということを示すものである、IαIp療法を受けている患者の進行をモニターするために、患者から取得したサンプルをアッセイして、
(a)下記:
(i) IαIのレベル;
(ii) PαIのレベル;
(iii) IαIpのレベル;
(iv) H3のレベル;
(v) H4のレベル;
(vi) H1のレベル;
(vii) H2のレベル;及び
(viii)LCのレベル;
の1つ又はそれ以上のレベルを検出する方法に使用するための請求項25〜48のいずれかに記載のIαIp含有組成物、及び説明書を含むキット。
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