JP4865544B2 - 立体規則性の高いリボヌクレオチド類縁体及びデオキシリボヌクレオチド類縁体の製造法 - Google Patents

Description

本発明は、立体規則性の高いリボヌクレオチド類縁体及びオリゴデオキシリボヌクレオチド類縁体の製造法に関するものである。

リン酸部位修飾ジヌクレオチドは、近年、重要なアンチセンス薬（アンチセンス法）として注目されており、更に多くの病気についても臨床試験が行われている。アンチセンス法とは、標的となるｍＲＮＡと相補的な塩基配列をもつ核酸を用いて、ｍＲＮＡと選択的に結合させ、タンパク質の翻訳を阻害する手法である。アンチセンス分子として必要な性質として、主に、（１）標的となるｍＲＮＡの塩基配列を認識し、特異的に結合できること、（２）安定な二重鎖を形成できること、（３）ヌクレアーゼ耐性が高いこと、（４）細胞膜透過性が高いことなどが挙げられる。
リン酸部位修飾ジヌクレオチドは、リン原子上に不斉中心を有しており、その絶対立体配置の相違によりアンチセンス効果が異なる。また、近年のｉｎ ｖｉｔｒｏ研究では、リン酸部位修飾ジヌクレオチドの性質として、例えばＤＮＡ、ＲＮＡとの二重鎖形成能やヌクレアーゼ耐性、ＲＮａｓｅＨ活性などはリン原子上のキラリティーに影響されることが報告されており（Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．２０００，８，２７５−２８４）、リン原子上の立体を制御したリン酸部位修飾オリゴヌクレオチドの効率的な製造法が求められている。
しかし、従来、リン酸部位修飾ジヌクレオチドは、ホスホロアミダイト法等により製造されており（Ｂｅａｕｃａｇｅ，Ｓ．Ｌ．；ｌｙｅｒ，Ｒ．Ｐ．Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，１９９２，４８，２２２３−２３１１）、これらの製造法では、リン原子上の立体制御を行うことは困難であったため、製造されたリン酸部位修飾オリゴヌクレオチドは、Ｒ体とＳ体のジアステレオマーの混合物であった。
また、アンチセンス分子として天然型ＤＮＡを用いた場合、ヌクレアーゼにより加水分解されやすく、また細胞膜透過性が低いというアンチセンス分子としては致命的な問題がある。そこで、天然型ＤＮＡに種々の修飾を施すことにより、これらの問題を克服する試みが行われてきた。その中で、天然型ＤＮＡのインターヌクレオチドの、リン原子上の２つの非架橋酸素原子を様々に置換したＤＮＡ類縁体、即ちインターヌクレオチド修飾型類縁体は、ヌクレアーゼ耐性、及び細胞膜透過性がともに高まることが知られている（Ｌｅｖｉｎ，Ａ．Ａ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ．，１９９９，１４８９（１），６９−８４．）。
しかしながら、導入された置換基がそれぞれ異なる場合、そのＤＮＡ類縁体はリン原子上にキラリティを有することになる。これらのＤＮＡ類縁体はそのキラリティにより、物性や機能が異なることが知られている（Ｙｕ，Ｄ．；Ｋａｎｄｕｍａｌｌａ，Ｅ．Ｒ．；Ｒｏｓｋｙ，Ａ．；Ｚｈａｏ，Ｑ．；Ｃｈｅｎ，Ｊ．；Ａｇｒａｗａｌ，Ｓ．Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，２０００，８，２７５−２８４．）。例えば、２つの非架橋酸素原子のうち１つを硫黄原子に置換したインターヌクレオチド修飾型ＤＮＡ類縁体であるホスホロチオエートＤＮＡは、それと相補的なＲＮＡと形成する二重鎖の構造、ヌクレアーゼ加水分解に対する耐性などがＳｐ体のオリゴマーとＲｐ体のオリゴマーとの間で異なることが知られている（前記文献参照）。このことから、薬としても効能を高めるうえで、リン原子の立体を制御したインターヌクレオチド修飾型ＤＮＡ類縁体を得ることは極めて重要である。
Ｈ−ホスホネートＤＮＡは、天然型ＤＮＡのインターヌクレオチドのリン原子上の２つの非架橋酸素原子のうち、１つの酸素原子を水素原子に置換したＤＮＡ類縁体であり、リン原子上にキラリティを有する。また、立体特異的な変換反応により、種々のインターヌクレオチド修飾型ＤＮＡ類縁体へと変換可能である。よって、立体化学的に純粋なＨ−ホスホネートＤＮＡが得られれば、それを用いてそのまま立体が制御されたインターヌクレオチド修飾型ＤＮＡ類縁体を得ることが可能となる。このように、Ｈ−ホスホネートＤＮＡは、様々な立体の制御されたインターヌクレオチド修飾型ＤＮＡ類縁体へと変換可能な有用な合成中間体である。
現在までのところ、立体化学的に純粋なＨ−ホスホネートＤＮＡを得る方法は、そのジアステレオマーをシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより光学分割する方法以外にない。したがって、立体化学的に純粋なＨ−ホスホネートＤＮＡは、二量体レベルで得た例の報告があるのみである（（ａ）Ｓｅｅｌａ，Ｆ．；Ｋｒｅｔｓｃｈｎｅｒ，Ｕ．Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．１９９１，５６，３８６１−３８６９．（ｂ）Ｌｏｓｈｍｅｒ，Ｔ．；Ｅｎｇｅｌｓ，Ｊ．Ｗ．Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１９９０，１８，５１４３）。しかも、Ｈ−ホスホネートＤＮＡの二量体を光学分割する場合であっても、Ｈ−ホスホネートＤＮＡはシリカゲルカラムクロマトグラフィー上で不安定であり、かつその２つのジアステレオマー間に極性の大きな違いはないため、その光学分割は極めて非効率的なものである。立体化学的に純粋なＨ−ホスホネートＤＮＡを核酸医薬への応用が可能な合成中間体として考えた場合、オリゴマーレベルで立体の制御されたＨ−ホスホネートＤＮＡが必要となる。その場合、ジアステレオマーの数は指数関数的に増大するため、Ｈ−ホスホネートＤＮＡオリゴマーの光学分割は事実上不可能なものとなる。そこで、Ｈ−ホスホネートＤＮＡの立体選択的合成反応を開発できれば、オリゴマーレベルで立体の制御されたＨ−ホスホネートＤＮＡを得ることが可能となる。
ＲＮＡｉは１９９８年、ＦｉｒｅとＭｅｌｌｏらにより線虫を用いた研究で初めて報告された（Ｆｉｒｅ，Ａ．；Ｘｕ，Ｓ．；Ｍｏｎｔｇｏｍｅｒｙ，Ｍ．Ｋ．；Ｋｏｓｔａｓ，Ｓ．Ａ．；Ｄｒｉｖｅｒ，Ｓ．Ｅ．；Ｍｅｌｌｏ，Ｃ．Ｃ．Ｎａｔｕｒｅ．１９９８，３９１，８０６−８１１．）のをきっかけに、昆虫、植物、菌類などの様々な生物種間に従来備わった遺伝子抑制システムであることが明らかにされている。また、２００１年ＴｕｓｃｈｌらによってＲＮＡｉは哺乳動物細胞においても適用可能であることが示された（Ｅｌｂａｓｈｉｒ，Ｓ．Ｍ．；Ｈａｒｂｏｒｔｈ，Ｊ．；Ｌｅｎｄｅｃｋｅｌ，Ｗ．；Ｙａｌｃｉｎ，Ａ．；Ｗｅｂｅｒ，Ｋ．；Ｔｕｓｃｈｌ，Ｔ．Ｎａｔｕｒｅ．２００１，４１１，４９４−４９８．）。これにより、ＲＮＡｉは遺伝子抑制効果の高い優れた遺伝子抑制法として、遺伝子治療や遺伝子機能解析などを行なうための有力な手段として注目されるようになった。ＲＮＡｉの特徴は、正確に目的の遺伝子をノックアウトできる配列特異性と元来生体に備わった遺伝子抑制機構を用いていることである。このことによって、ＲＮＡｉは副作用の少ない新しい遺伝子治療法として期待されている。しかしながら、ｓｉＲＮＡのような２１塩基程度のＲＮＡ鎖は生体内のヌクレアーゼによって徐々に分解されてしまうため、今のところＲＮＡｉの効果は長時間持続させることができない。

本発明の課題は、アンチセンス法やＲＮＡ干渉に使用することができ、リン原子上の立体を制御した、立体規則性の高いリボヌクレオチド類縁体及びデオキシリボヌクレオチド類縁体の製造法を提供することにある。
本発明は、課題の解決手段として、一般式（Ｉ）

［式中、Ｒ^１及びＲ’は、同一又は異なっていてもよい、水素原子、炭素数１〜３のアルキル基又は炭素数６〜１４のアリール基を示し、
Ｒ^２及びＲ”は、同一又は異なっていてもよい、水素原子、炭素数１〜３のアルキル基又は炭素数６〜１４のアリール基を示し、
Ｒ^３は炭素数１〜３のアルキル基を示し、
Ｒ^４は水酸基の保護基、Ｄ_１は−ＯＲ^５（ここでＲ^５は水酸基の保護基）、水酸基又は水素原子を示し、
Ｂｓは、次式

で表されるウラシル、アデニン、シトシン、グアニン、チミンあるいはそれらの誘導体から誘導される基を示す。但し、Ｒ^２及びＲ^３は、窒素原子と共にモノシクロ構造又はビシクロ構造を形成していてもよい。］
で表される光学活性なヌクレオシド３’−ホスホロアミダイトと、
一般式（ＩＩ）

［式中、Ｒ^６、Ｅ_１及びＢｓは前記と同じ意味を示す。］
で表されるヌクレオシドとを、
一般式（ＩＩＩ）

［式中、Ｘ⁻はＢＦ_４ ⁻、ＰＦ_６ ⁻、ＴｆＯ⁻（ＴｆはＣＦ_３ＳＯ_２−を示す。以下同じ）、Ｔｆ_２Ｎ⁻、ＡｓＦ_６ ⁻又はＳｂＦ_６ ⁻を示す。また、環状構造Ａは窒素原子と共に形成する炭素数３〜１６のモノシクロ又はビシクロ構造を示す。］
で表される活性化剤を用いて縮合した後、求電子試薬との反応及び脱保護を行うことを特徴とする、式（ＩＶ）又は（Ｖ）で表される立体規則性の高いリボヌクレオチド類縁体の製造法、及び立体規則性の高いオリゴリボヌクレオチド類縁体及びオリゴデオキシリボヌクレオチド類縁体の製造法を提供する。

［各式中、Ｙは炭素数１〜１０の直鎖又は分岐鎖のアルキル基、炭素数１〜１０の直鎖又は分岐鎖のアルコキシ基、炭素数１〜１０の直鎖又は分岐鎖のヒドロキシアルキル基、炭素数６〜１４のアリール基、炭素数１〜１０のアルキルチオ基、炭素数１〜１０のアシル基、アミノ基、炭素数１〜１０のアルキルアミノ基、炭素数１〜１０のジアルキルアミノ基、又はＹ＝Ｙ’Ｚ^＋を示す（Ｙ’はＳ⁻、Ｓｅ⁻、ＢＨ_３ ⁻を、Ｚ^＋はアンモニウムイオン、第１級〜第４級の低級アルキルアンモニウムイオン又は１価の金属イオンを示す）。Ｂｓは、前記と同じ意味を示し、各式中の２個のＢｓは、同一でも異なっていてもよい。Ｄ_２及びＥ_２は水酸基又は水素原子を示す。］
発明の詳細な説明
以下、本発明の製造法を、縮合反応（第１反応工程）と、求電子試薬との反応及び脱保護反応（第２反応工程）に分けて説明する。第１及び第２の分け方は説明の便宜のためだけのものであり、これに限定されるものではなく、また必要に応じて精製処理等の公知の処理工程を付加することもできる。
〔第１反応工程〕
一般式（Ｉ）で表される光学活性なヌクレオシド３’−ホスホロアミダイト〔以下「ホスホロアミダイト（Ｉ）」という〕と、一般式（ＩＩ）で表されるヌクレオシド〔以下「ヌクレオシド（ＩＩ）」という〕とを、一般式（ＩＩＩ）で表される活性化剤〔以下「活性化剤（ＩＩＩ）」という〕の存在下で縮合反応させる。
ホスホロアミダイト（Ｉ）は、下記のとおり、適当な１，２−アミノアルコールから公知の方法で製造することができる（例えばＴｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ：Ａｓｙｍｍｅｔｒｙ，１９９５，６，１０５１−１０５４参照）。
即ち、一般式（ＶＩ）で表される光学活性な１，２−アミノアルコール〔以下「アミノアルコール（ＶＩ）」という〕と、三塩化リンを反応させて得られる一般式（ＶＩＩ）で表される光学活性なホスフィチル化剤〔以下「ホスフィチル化剤（ＶＩＩ）」という〕と、一般式（ＶＩＩＩ）で表されるヌクレオシドを反応させて得ることができる。

〔式中、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｄ_１及びＢｓは、一般式（１）と同じ意味を示す。〕
アミノアルコール（ＶＩ）としては、（Ｓ）−及び（Ｒ）−２−メチルアミノ−１−フェニルエタノール、（１Ｒ，２Ｓ）−エフェドリン、（１Ｒ，２Ｓ）−２−メチルアミノ−１，２−ジフェニルエタノール等が挙げられる。
その他にも、プロリノール誘導体、例えば、（αＲ，２Ｓ）−α−（ピロリジン−２−イル）ベンジルアルコール、（αＳ，２Ｒ）−α−（ピロリジン−２−イル）ベンジルアルコールが挙げられ、Ｈ−ホスホネートに誘導可能なアミノアルコール類、例えば、（２Ｓ）−α，α−ジフェニル（ピロリジン−２−イル）メタノール、（２Ｓ）−α−メチル（ピロリジン−２−イル）エタノール、（２Ｒ）−α−メチル（ピロリジン−２−イル）エタノール、（αＲ，２Ｓ）−α−メチル（ピロリジン−２−イル）ベンジルアルコール、（αＳ，２Ｒ）−α−メチル（ピロリジン−２−イル）ベンジルアルコールが挙げられる。
ヌクレオシド（ＶＩＩＩ）において、Ｂｓはウラシル、アデニン、シトシン、グアニン又はチミンあるいはそれらの誘導体から誘導される基を示すが、誘導体としては、アデニン、シトシン及びグアニンのアミノ基を保護基で保護したもの等が挙げられ、具体的には、下記式で表される化合物が挙げられる。

〔式中、Ｒ^７は上記と同じ意味を示し、Ｒ^８は炭素数１〜１５のアルキル基、アリール基、アラルキル基、アリールオキシアルキル基を示し、中でもメチル基、イソプロピル基、フェニル基、ベンジル基、フェノキシメチル基が好ましく、特にフェニル基が好ましい。また、Ｒ^９及びＲ^１０は、それぞれ炭素数１〜４のアルキル基を示し、特にメチル基が好ましい。Ｒ^１１は、グアニン０６位の保護基を示し、２−シアノエチル基、ｐ−ニトロフェニルエチル基、フェニルスルホニルエチル基、ベンジル基、２−トリメチルシリルエチル基等が好ましい。
ヌクレオシド（ＶＩＩＩ）は、ウラシル、アデノシン、シチジン、グアノシン、チミン又はそれらの誘導体の５’位の水酸基を保護したもので、保護基（Ｒ^４）としては、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル基（ＴＢＤＰＳ）、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル基（ＴＢＤＭＳ）等のアルキルシリル基、４，４’−ジメトキシトリチル基（ＤＭＴｒ）、４−メトキシトリチル基（ＭＭＴｒ）等のトリチル基、次式で表される保護基等が挙げられる。

ヌクレオシド（ＶＩＩＩ）のＤ_１が水素原子のとき、Ｂｓはチミン又はその誘導体が好ましい。チミン又はその誘導体以外のヌクレオシドを用いる場合、塩基部への副反応が危惧されるため、塩基部に保護基を導入することが望ましく、アデニンとグアニンにはフェノキシアセチル（Ｐａｃ）基、シトシンにはイソブチル（ｉＢｕ）基を用いることができる。
ホスホロアミダイト（Ｉ）において、Ｒ^１、Ｒ’、Ｒ^２、Ｒ”の意味は上記したとおりである。
Ｒ^１及びＲ^２としては、Ｒ^１及びＲ^２のいずれか一方が水素原子で他方がフェニル基、Ｒ^１及びＲ^２のいずれか一方がメチル基で他方がフェニル基、あるいはＲ^１及びＲ^２が共にフェニル基の組み合わせが好ましく、Ｒ^１がフェニル基、Ｒ^２が水素原子の組み合わせが更に好ましい。Ｒ^３はメチル基が好ましい。また、Ｒ^１がフェニル基、Ｒ^２及びＲ^３が窒素原子と共にピロリジン骨格を形成していることが好ましい。Ｒ^４及びＤ_１が−ＯＲ^５のときのＲ^５はＴＢＤＰＳ、ＴＢＤＭＳが好ましく、ＴＢＤＰＳが更に好ましい。
Ｒ^１及びＲ^２が上記の組み合わせであるとき、Ｒ’及びＲ”は、水素原子、炭素数１〜３のアルキル基又は炭素数６〜１４のアリール基から選択できる。
本発明の一般式（Ｉ）で表される光学活性なヌクレオシド３’−ホスホロアミダイトにおいては、Ｒ^１とＲ’は、同一又は異なっていてもよい、炭素数１〜３のアルキル基又は炭素数６〜１４のアリール基である化合物が好ましい。
また、Ｈ−ホスホネート（一般式（ＸＩＩ）においてＹ＝Ｈ）を得る場合は、Ｒ^１とＲ’の両方が水素原子ではなく（即ち、Ｒ^１とＲ’が結合する炭素原子が第３級炭素であり）、かつ前記第３級炭素の置換基がアリール基を含まない組み合わせにする。
ヌクレオシド（ＩＩ）は、ウリジン、アデノシン、シチジン、グアノシン又はそれらの誘導体の２位と３位の水酸基を保護したものであり、Ｂｓで示されるウラシル、アデニン、シトシン、グアニン、チミン又はそれらの誘導体から誘導される基は、ヌクレオシド（ＶＩＩＩ）で例示したものが挙げられる。
ヌクレオシド（ＩＩ）とヌクレオシド（ＶＩＩＩ）のＢｓは、同一でも異なっていても良い。
Ｒ^６は上記と同じものであり、Ｅ_１が−ＯＲ^７のときのＲ^７で示される水酸基の保護基としては、ＴＢＤＰＳ、ＴＢＤＭＳ、アセチル基（Ａｃ）、フェノキシアセチル基（ＰＡｃ）、ベンジル基（Ｂｚ）、ＤＭＴｒ、ＭＭＴｒ等が挙げられ、Ｒ^６、Ｒ^７はＰＡｃが好ましい。
活性化剤（ＩＩＩ）は、ホスホロアミダイト（Ｉ）の窒素原子に対するプロトン供給能力を有し、求核試薬としては働かないものである。
活性化剤（ＩＩＩ）中、Ｘ⁻としては、ＢＦ_４ ⁻、ＰＦ_６ ⁻、ＴｆＯ⁻、Ｔｆ_２Ｎ⁻が好ましい。また、環状構造Ａは、窒素原子と共に形成する炭素数３〜１６のモノシクロ又はビシクロ構造を示し、特に式（ＩＩＩ−１）で表されるモノシクロ構造を有するものが好ましい。

（式中、Ｘ⁻は前記と同じ意味を示す。ｎは３〜７の数を示し、４又は５が好ましい。）
活性化剤（ＩＩＩ）は、式（ＩＸ）

（式中、環状構造Ａは前記と同じ意味を示す。）
で表されるアミンと、次式（Ｘ）：
ＨＸ （Ｘ）（式中、Ｘは前記の意味を示す。）
で表される化合物とを反応させることにより容易に得ることができる。
活性化剤（ＩＩＩ）は、特にアセトニトリルに良い溶解性を示すので、ホスホロアミダイト（Ｉ）とヌクレオシド（ＩＩ）の反応は、アセトニトリル等の溶媒中で行うことが好ましい。
ホスホロアミダイト（Ｉ）とヌクレオシド（ＩＩ）とは、ホスホロアミダイト（Ｉ）に対し、ヌクレオシド（ＩＩ）を０．５〜１．０当量倍の割合で反応させることが好ましい。活性化剤（ＩＩＩ）は、ホスホロアミダイト（Ｉ）に対し、１〜５当量倍の割合で用いることが好ましい。反応温度は０〜４０℃が好ましく、反応圧力は１気圧が好ましい。
以上の第１反応工程により、下記一般式（ＸＩ）

［式中、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^６、Ｄ_１、Ｅ_１及びＢｓは前記と同じ意味を示す。］
で表されるホスファイト〔以下「ホスファイト（ＸＩ）」という〕を得る。
〔第２反応工程〕
まず、第１反応工程で得られたホスファイト（ＸＩ）を、無水酢酸、無水トリフルオロ酢酸等でアシル化した後、硫化剤、セレノ化剤、ボラノ化剤等の求電子試薬と反応させ、その後、一般式（ＸＩＩ）の化合物の不斉補助基を１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン（ＤＢＵ）等で処理して除き、一般式（ＸＩＩ）

［式中、Ｒ^４、Ｒ^６、Ｄ_１、Ｅ_１、Ｂｓ及びＹは前記と同じ意味を示す。］
で表される保護されたジリン酸部位修飾ジヌクレオチドを得る。なお、使用する求電子試薬の種類により（例えば、硫化剤として１，２，４−ジチアゾリジン−３，５−ジオン、３−エトキシ−１，２，４−ジチアゾリン−５−オン、３−メチル−１，２，４−ジチアゾリン−５−オン等を用いた場合）、前段のアシル化工程を省略してもよい。
最後に、水酸基の保護基を、（ＣＨ_３ＣＨ_２）_３Ｎ・３ＨＦ等で除き、一般式（ＩＶ）又は（Ｖ）で表される立体規則性の高いリボヌクレオチド類縁体を得ることができる。
また、本発明においては、上記した第１反応工程と第２反応工程を繰り返すことにより、一般式（ＸＩＩＩ）で表されるオリゴマー〔以下「オリゴマー（ＸＩＩＩ）」という〕を製造することができる。
一般式（Ｉ）で表されるモノマーのＲ^１が結合する炭素が第３級炭素であり（Ｒ^１とＲ’の両方が水素原子ではない）、かつ前記第３級炭素の置換基がアリール基を含まない場合、第１反応工程で得られたホスファイト（ＸＩ）を、無水酢酸、無水トリフルオロ酢酸等でアシル化した後、１％トリフルオロ酢酸ジクロロメタン溶液等の酸で処理すると、不斉補助基が脱離して、対応するＨ−ホスホネート（ＸＩＩ、Ｙ＝Ｈ）が得られる。前記第３級炭素の置換基のうち、１つ以上がアリール基の場合は、第２反応工程においてアシル化の工程を省略することができるが、生成するカルボカチオンを還元するために、トリエチルシランやボラン・ピリジン錯体などの還元剤を添加する必要がある。
この方法で２量体を合成する場合、得られたＨ−ホスホネート（ＸＩＩ、Ｙ＝Ｈ）に硫化剤を反応させれば、ホスホロチオエート（ＸＩＩ、Ｙ＝Ｓ⁻）が得られ、アミンの四塩化炭素溶液を反応させれば、ホスホロアミデート（ＸＩＩ、Ｙ＝ＮＲ_２）が得られる。
この方法でオリゴマーを合成する場合、５’水酸基の保護基としてＤＭＴｒ基を有するモノマーを用い、上記の方法によって得られたホスファイト中間体を酸処理することで不斉補助基と５’水酸基の保護基であるＤＭＴｒ基を同時に除去し、得られた５’位に水酸基を有する２量体に対してモノマーを縮合し、上記工程を繰り返すことにより、Ｈ−ホスホネート結合を有するオリゴマーを合成できる。
次に、Ｈ−ホスホネート結合を有するオリゴマーを２量体の場合と同様に変換反応を行い、望みのリン原子修飾ＤＮＡに導いた後に脱保護を行うことで、目的とする核酸類縁体を得ることができる。

一般式（ＸＩＩＩ）中、ｎは１〜１５０の整数を示し、好ましい範囲は５〜５０であり、より好ましい範囲は１０〜３０、更に好ましい範囲は１５〜２２である。Ｄ_２及びＥ_２は水酸基又は水素原子を示す。
オリゴマー（ＸＩＩＩ）は、固相法によるオリゴマー合成法を適用して製造することができ、具体的には市販の自動合成機（Ｅｘｐｅｄｉｔｅ，ＡＢＩ社製，又はＡＢＩ Ｍｏｄｅｌ ３９４，ＤＮＡ／ＲＮＡ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒ ＡＢＩ社製）などを用いて合成するか、グラスフィルターのついた固相合成容器を用いた手動法で合成することができる。
固相法で用いる固相担体としては、アミノアルキル化され、孔径が制御された多孔性ガラス（ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ ｐｏｒｅ ｇｌａｓｓ：ＣＰＧ）、アミノアルキル化された高架橋ポリスチレン（ｈｉｇｈｌｙ ｃｒｏｓｓ−ｌｉｎｋｅｄ ｐｏｌｙｓｔｙｒｅｎｅ：ＨＣＰ）といった公知の高分子担体であって，できるだけ膨潤性がなく，過剰に用いた試薬を洗浄によって簡単に除去できるものが好ましい。
固相担体とリボヌクレオシドの３’又は２’水酸基のいずれかは、コハク酸エステル、シュウ酸エステル、フタル酸エステル等のリンカーを介して結合しても良い。固相担体が結合していない２’又は３’水酸基の保護基としては、アセチル基、ベンゾイル基、２−（シアノエトキシ）エチル基、ｔ−ブチルジメチルシリル基等のＲＮＡ合成及びＤＮＡ合成で一般的に用いられる保護基を挙げることができる。
本発明の製造法により得られる立体規則性の高いリボヌクレオチド類縁体及びデオキシリボヌクレオチド誘導体は、遺伝子治療の分野で注目されている手法の一つであるアンチセンス法やＲＮＡ干渉に使用することができる。
本発明によれば、アンチセンス分子として有効な立体規則性の高いリボヌクレオチド類縁体及びデオキシリボヌクレオチド類縁体を高い収率で得ることができる。

例中の％は特記しない限り質量％である。
式および表中、ｄｒ，ｄ．ｒ．はジアステレオマー比を、ｒｔは室温を、ｅｑｕｉｖ，ｅｑは当量を、ＴＦＡはトリフルオロ酢酸を、Ｐｙはピリジンを示す。
＜活性化剤（ＩＩＩ）の製造例＞
製造例１−１：Ｎ−シアノメチルピロリジニウムテトラフルオロボレイトの製造
アルゴン雰囲気下、Ｎ−シアノメチルピロリジン０．５５１ｇ（５．００ｍｍｏｌ）のエチルエーテル（５．００ｍｌ）溶液を−７８℃に冷却し、攪拌しつつ５４％四フッ化硼素酸エチルエーテル溶液０．６８９ｍｌ（５．００ｍｍｏｌ）を滴下した。溶液を室温に戻した後、減圧下濃縮、乾燥し、残渣にエチルエーテル（５ｍｌ）を加えて激しく攪拌し、シリンジを用いて溶媒を除去した。この洗浄操作を５回繰り返した後、真空乾燥し、目的物〔一般式（ＩＩＩ）において、ｎ＝４、Ｘ⁻＝ＢＦ_４ ⁻の活性化剤〕０．９９０ｇ（５．００ｍｍｏｌ）を得た。収率定量的。白色粉末。潮解性大。
・融点：１１３．０〜１１４．０℃
・ＩＲ（ＫＢｒ）ν_ｍａｘ：２９８８，２９５０，２８２５，２５２７，２４４５，１４５１，１４０７，１３７４，１２９８，１１１９，９２９ｃｍ^−１
・^１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＣＮ）δ：７．１７（ｂｒ，１Ｈ），４．３０（ｓ，２Ｈ），３．５１（ｂｒ，４Ｈ），２．１３〜２．０８（ｍ，４Ｈ）
・^１３Ｃ−ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＣＤ_３ＣＮ）δ：１１２．０，５５．９，４１．８，２３．２。
製造例１−２：Ｎ−シアノメチルピロリジニウムヘキサフルオロホスフェートの製造
６１％ヘキサフルオロリン酸水溶液１．２０ｇ（５．００ｍｍｏｌ）に水５．００ｍｌを加え、攪拌しつつＮ−シアノメチルピロリジン０．５５１ｇ（５．００ｍｍｏｌ）を滴下した後、溶液を凍結乾燥した。残渣にエチルエーテル（１０ｍｌ）を加え、激しく攪拌し、シリンジを用いて溶媒を除去した。この洗浄操作を３回繰り返した後、真空乾燥し、目的物〔一般式（ＩＩＩ）において、ｎ＝４、Ｘ⁻＝ＰＦ_６ ⁻の活性化剤〕１．２８ｇ（５．００ｍｍｏｌ）を得た。収率定量的。白色粉末。潮解性大。
・融点：５６．０〜５７．０℃
・ＩＲ（ＫＢｒ）ν_ｍａｘ：２９８８，２８２８，２５３２，２４４８，１６２６，１４５７，１２９６，１０８２，９８７，８３４ｃｍ^−１
・^１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＣＮ）δ：８．２７（ｂｒ，１Ｈ），４．２４（ｓ，２Ｈ），３．４８（ｂｒ，４Ｈ），２．１２〜２．０８（ｍ，４Ｈ）
・^１３Ｃ−ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＣＤ_３ＣＮ）δ：１１２．１，５６．０，４２．１，２３．５
・^３１Ｐ−ＮＭＲ（１２１ＭＨｚ，ＣＤ_３ＣＮ）δ：−１４６．０（ｓｅｐｔｅｔ，^１Ｊ_ＰＦ＝７０７Ｈｚ）。
製造例１−３：Ｎ−シアノメチルピロリジニウムトリフルオロメタンスルホネートの製造
Ｎ−シアノメチルピロリジン０．５５１ｇ（５．００ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（５．００ｍｌ）溶液を０℃に冷却し、攪拌しつつトリフルオロメタンスルホン酸０．４４２ｍｌ（５．００ｍｍｏｌ）を滴下した後、エチルエーテル（１０ｍｌ）を加えた。生じた固体を吸引ろ過によって集め、エチルエーテル（１ｍｌ×３）で洗浄した後、減圧下乾燥して、目的物〔一般式（ＩＩＩ）において、ｎ＝４、Ｘ⁻＝ＴｆＯ⁻の活性化剤〕１．１１ｇ（４．２７ｍｍｏｌ）を得た。収率８５％。白色粉末。潮解性小。
・融点：６７．０〜６７．５℃
・ＩＲ（ＫＢｒ）ν_ｍａｘ：２９９６，２８４１，２６５１，２４７７，２３４７，２２８２，１６３７，１４６２，１４３７，１２６９，１２２８，１１６８，１０３３，９８５，９１１，８４９，７６１，６４１ｃｍ^−１
・^１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＣＮ）δ：８．１６（ｂｒ，１Ｈ），４．３０（ｓ，２Ｈ），３．５０（ｂｒ，４Ｈ），２．１４〜２．０９（ｍ，４Ｈ）
・^１３Ｃ−ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＣＤ_３ＣＮ）δ：１２１．２（ｑ，^１Ｊ_ＣＦ＝３２０Ｈｚ），５５．９，４２．０，２３．５。
製造例１−４：Ｎ−シアノメチルピペリジニウムテトラフルオロボレートの製造
Ｎ−シアノメチルピペリジン１．２４ｇ（１０．０ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（１０．０ｍｌ）溶液に対し、攪拌しつつ５４％四フッ化硼素酸エチルエーテル溶液１．３８ｍｌ（１０．０ｍｍｏｌ）を滴下した。溶液をエチルエーテル（２０ｍｌ）で希釈し、生じた固体を吸引ろ過によって集め、エチルエーテル（１０ｍｌ×２）で洗浄した後、減圧下乾燥して、目的物〔一般式（ＩＩＩ）において、ｎ＝５、Ｘ⁻＝ＢＦ_４ ⁻の活性化剤〕２．０１ｇ（９．４８ｍｍｏｌ）を得た。収率９５％。白色粉末。潮解性なし。
・融点：１０３．０〜１０３．５℃
・ＩＲ（ＫＢｒ）ν_ｍａｘ：３１４９，２９９７，２９５２，２８７６，２５９１，２５７０，２４９１，２３７２，１４５７，１４２２，１２９６，１０７４，９８０，９３５，８５０，６４１ｃｍ^−１
・^１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＣＮ）δ：６．７４（ｂｒ，１Ｈ），４．２２（ｓ，２Ｈ），３．５８（ｂｒ，２Ｈ），３．１５（ｂｒ，２Ｈ），１．９７〜１．５１（ｍ，６Ｈ）
・^１３Ｃ−ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＣＤ_３ＣＮ）δ：１１１．２，５４．６，４４．０，２３．０，２０．５。
製造例１−５：Ｎ−シアノメチルピペリジニウムヘキサフルオロホスフェートの製造
６１％ヘキサフルオロリン酸水溶液１．２０ｇ（５．００ｍｍｏｌ）に水５．００ｍｌを加え、攪拌しつつＮ−シアノメチルピペリジン０．６２１ｇ（５．００ｍｍｏｌ）を滴下した後、溶液を凍結乾燥した。残渣にジクロロメタン（５ｍｌ）、エチルエーテル（１０ｍｌ）を加え、−７８℃に冷却し、激しく攪拌すると固体が生じたので、室温に昇温した後、シリンジを用いて溶媒を除去した。残渣にエチルエーテル（５ｍｌ）を加え、激しく攪拌した後、シリンジを用いて溶媒を除去した。この洗浄操作を３回繰り返した後、真空乾燥し、目的物〔一般式（ＩＩＩ）において、ｎ＝５、Ｘ⁻＝ＰＦ_６ ⁻の活性化剤〕１．３１ｇ（４．８５ｍｍｏｌ）を得た。収率９７％。白色粉末。潮解性大。
・融点：５４．０〜５５．０℃
・ＩＲ（ＫＢｒ）ν_ｍａｘ：２９９７，２９５３，２８７６，２５８９，２５７０，２４９０，２３７２，１６５５，１４５５，１４２２，１２９７，１１９２，１１４２，１０８４，１０３７，９８１，９５３，８３７，７４６ｃｍ^−１
・^１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＣＮ）δ：７．９４（ｂｒ，１Ｈ），４．１５（ｓ，２Ｈ），３．３１（ｂｒ，４Ｈ），１．９２〜１．８３（ｍ，４Ｈ），１．６３（ｂｒ，２Ｈ）
・^１３Ｃ−ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＣＤ_３ＣＮ）δ：１１１．５，５４．５，４４．２，２３．１，２０．８
・^３１Ｐ−ＮＭＲ（１２１ＭＨｚ，ＣＤ_３ＣＮ）δ：−１４５．９（ｓｅｐｔｅｔ，^１Ｊ_ＰＦ＝７０７Ｈｚ）。
製造例１−６：Ｎ−シアノメチルピペリジニウムトリフルオロメタンスルホネートの製造
Ｎ−シアノメチルピペリジン０．６２１ｇ（５．００ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（５．００ｍｌ）溶液を０℃に冷却し、攪拌しつつトリフルオロメタンスルホン酸０．４４２ｍｌ（５．００ｍｍｏｌ）を滴下した。溶液を室温に昇温し、エチルエーテル（１０ｍｌ）を加えた後、固体を吸引ろ過によって集め、エチルエーテル（１ｍｌ×３）で洗浄した後、減圧下乾燥して、目的物〔一般式（ＩＩＩ）において、ｎ＝５、Ｘ⁻＝ＴｆＯ⁻の活性化剤〕１．３７ｇ（５．００ｍｍｏｌ）を得た。収率定量的。白色粉末。潮解性小。
・融点：１１０．０〜１１０．５℃
・ＩＲ（ＫＢｒ）ν_ｍａｘ：２９９９，２７２３，１４６０，１２８９，１２２６，１１６８，１０８３，１０２７，９７８，９３６，７６２，６４１ｃｍ^−１
・^１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＣＮ）δ：８．１２（ｂｒ，１Ｈ），４．１９（ｓ，２Ｈ），３．５８（ｂｒ，２Ｈ），３．０９（ｂｒ，２Ｈ），２．２１（ｂｒ，４Ｈ），１．５０（ｂｒ，１Ｈ）
・^１３Ｃ−ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＣＤ_３ＣＮ）δ：１２０．９（ｑ，^１Ｊ_ＣＦ＝３１９Ｈｚ），１１１．４，５４．５，４４．２，２３．０，２０．７。
＜ホスフィチル化剤（ＶＩＩ）の製造＞
製造例２−１：（５Ｓ）−２−クロロ−３−メチル−５−フェニル−１，３，２−オキサアザホスホリジンの製造
（Ｓ）−２−メチルアミノ−１−フェニルエタノール３．０２ｇ（１５．０ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン５．５８ｍｌ（４０．０ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）（２０．０ｍｌ）溶液を０℃に冷却した三塩化リン１．７５ｍｌ（２０．０ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２０．０ｍｌ）溶液に対して、攪拌しつつ滴下し、温度を室温にして３０分間攪拌した。生じた塩を、グラスフィルターでアルゴン雰囲気下ろ過し、塩をＴＨＦ（１０ｍｌ×３）で洗浄した。
ろ液を濃縮し、残渣を減圧下蒸留することにより、目的物〔一般式（ＶＩＩ）において、Ｒ^１＝フェニル基、Ｒ^２＝Ｈ、Ｒ^３＝メチル基である化合物の５Ｓ体〕２．５９ｇ（１２．０ｍｍｏｌ）を得た。収率６０％。８９〜９０℃／０．２ｍｍＨｇ。無色透明液体。
・^１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ：７．５４〜７．３４（ｍ，５Ｈ），５．８３，５．４４（ｂｒ，ｂｒ，１Ｈ），３．６０〜３．４２（ｍ，１Ｈ），３．２２〜３．１２（ｍ，１Ｈ），２．７７（ｄ，^３Ｊ_ＨＰ＝１５．６Ｈｚ，３Ｈ）
・^３１Ｐ−ＮＭＲ（１２１ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ：１７２．４（ｂｒ），１７１．３（ｂｒ）。
製造例２−２：（５Ｒ）−２−クロロ−３−メチル−５−フェニル−１，３，２−オキサアザホスホリジンの製造
（Ｒ）−２−メチルアミノ−１−フェニルエタノール２．２７ｇ（１５．０ｍｍｏｌ）を用い、製造例２−１と同様の手法により目的物〔一般式（ＶＩＩ）において、Ｒ^１＝フェニル基、Ｒ^２＝Ｈ、Ｒ^３＝メチル基である化合物の５Ｒ体〕を製造した。収率６５％。８１〜８２℃／０．２ｍｍＨｇ。無色透明液体。
・^１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ：７．５５〜７．３５（ｍ，５Ｈ），５．８４，５．４６（ｂｒ，ｂｒ，１Ｈ），３．５８〜３．４３（ｍ，１Ｈ），３．２２〜３．１３（ｍ，１Ｈ），２．７８（ｄ，^３Ｊ_ＨＰ＝１６．５Ｈｚ，３Ｈ）
・^３１Ｐ−ＮＭＲ（１２１ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ：１７２．４（ｂｒ），１７１．４（ｂｒ）
製造例２−３：（２Ｒ，４Ｓ，５Ｒ）−２−クロロ−３−メチル−４，５−ジフェニル−１，３，２−オキサアザホスホリジンの製造
（１Ｒ，２Ｓ）−２−メチルアミノ−１，２−ジフェニルエタノール２．２７ｇ（１０．０ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン２．７９ｍｌ（２０．０ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１０．０ｍｌ）溶液を、０℃に冷却した三塩化リン０．８７２ｍｌ（１０．０ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１０．０ｍｌ）溶液に対して、攪拌しつつ滴下した後、１時間加熱環流した。
溶液を室温まで放冷し、生じた塩を、グラスフィルターでアルゴン雰囲気下ろ過し、塩をＴＨＦ（１０ｍｌ×２）で洗浄した後、ろ液を減圧下濃縮して、目的物〔一般式（ＶＩＩ）において、Ｒ^１＝フェニル基、Ｒ^２＝フェニル基、Ｒ^３＝メチル基である化合物の２Ｒ，４Ｓ，５Ｒ体〕３．１７ｇ（１０．０ｍｍｏｌ）を得た。収率定量的（純度９２％）。乳白色固体。
・^１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ：７．０８〜７．０５（ｍ，６Ｈ），６．９１〜６．８１（ｍ，４Ｈ），６．１５（ｄ，^３Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ），４．６４（ｄｄ，^３Ｊ_ＨＨ＝８．３Ｈｚ，^３Ｊ_ＨＰ＝４．２Ｈｚ，１Ｈ），２．６４（ｄ，^３Ｊ_ＨＰ＝１５．３Ｈｚ，３Ｈ）
・^３１Ｐ−ＮＭＲ（１２１ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ：１７１．７。
＜ホスホロアミダイト（Ｉ）の製造＞
製造例３−１
５’−Ｏ−〔ビス（４−メトキシフェニル）フェニルメチル〕−３’−Ｏ−〔（２Ｓ，５Ｓ）−３−メチル−５−フェニル−１，３，２−オキサザホスホリジン−２−イル〕−２’−Ｏ−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）ウリジン［（Ｓｐ）−１９ｂ］の製造
５’−Ｏ−〔ビス（４−メトキシフェニル）フェニルメチル〕−２’−Ｏ−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）ウリジン（４）（０．８２０ｇ，１．５ｍｍｏｌ）を、ピリジン、トルエンと繰り返し共沸することによって乾燥し、ＴＨＦ（７．５０ｍｌ）溶液とした。
これにトリエチルアミン（１．０５ｍｌ，７．５ｍｍｏｌ）を加え、−７８°Ｃに冷却した後、アルゴン雰囲気下、下記式及び表１に示す（５Ｓ）−１８ｂの０．２２Ｍ ＴＨＦ溶液を滴下した。反応混合物を室温で３０分間撹拌した後、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（７５ｍｌ）及びクロロホルム（７５ｍｌ）を加えた。有機相を分離後、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄（７５ｍｌ×２）し、集めた洗液をクロロホルム（７５ｍｌ×２）で抽出した。
集めた有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、ろ過し、減圧下濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー〔２．５×１４ｃｍ，シリカゲル４０ｇ，トルエン−酢酸エチル−トリエチルアミン（１０：１：０．２，ｖ／ｖ／ｖ）〕で分離精製した。
目的物を含むフラクションを集め、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（１００ｍｌ）で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥、ろ過し、減圧下濃縮乾燥して、下記式及び表１に示す（Ｓｐ）−１９ｂを収率７０％で得た。無色非晶質。
^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ ８．８０（ｂｒ，１Ｈ），８．２０（ｄ，^３Ｊ_ＨＨ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），７．４２−７．１８（ｍ，１３Ｈ），６．８４（ｍ，４Ｈ），５．８０（ｓ，１Ｈ），５．５８（ｔ，^３Ｊ_ＨＨ＝６．６Ｈｚ １Ｈ），４．６０（ｍ，１Ｈ），４．１８（ｂｒ，２Ｈ），３．８０（ｓ，６Ｈ），３．４０（ｍ，２Ｈ），１．４０−１．００（ｍ，６Ｈ），０．９１（ｔ，^３Ｊ_ＨＨ＝１３．５Ｈｚ ９Ｈ），２．２２（ｄ，^３Ｊ_ＨＨ＝１３．５Ｈｚ ６Ｈ）．
製造例４−２
５’−Ｏ−〔ビス（４−メチルフェニル）フェニルメチル〕−３’−Ｏ−〔（２Ｒ，４Ｓ，５Ｒ）−５−フェニル−テトラヒドロ−１Ｈ，３Ｈ−ピロロ〔１，２−ｃ〕−１，３，２−オキサザホスホリジン−２−イル〕−２’−Ｏ−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）ウリジン［（Ｓｐ）−１９ｄ］の製造
５’−Ｏ−〔ビス（４−メトキシフェニル）フェニルメチル〕−２’−Ｏ−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）ウリジン（４）（０．８２０ｇ，１．５ｍｍｏｌ）を、ピリジン、トルエンと繰り返し共沸することによって乾燥し、ＴＨＦ（７．５０ｍｌ）溶液とした。
これにトリエチルアミン（１．０５ｍｌ，７．５ｍｍｏｌ）を加え、−７８°Ｃに冷却した後、アルゴン雰囲気下、下記式及び表１に示す（５Ｓ）−１８ｄの０．２２Ｍ ＴＨＦ溶液を滴下した。反応混合物を室温で３０分間撹拌した後、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（７５ｍｌ）及びクロロホルム（７５ｍｌ）を加えた。
有機相を分離後、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄（７５ｍｌ×２）し、集めた洗液をクロロホルム（７５ｍｌ×２）で抽出した。集めた有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、ろ過し、減圧下濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー〔２．５×１４ｃｍ，シリカゲル４０ｇ，トルエン−酢酸エチル−トリエチルアミン（１０：１：０．２，ｖ／ｖ／ｖ）〕で分離精製した。
目的物を含むフラクションを集め、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（１００ｍｌ）で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥、ろ過し、減圧下濃縮乾燥して、下記式及び表１に示す（Ｓｐ）−１９ｄを収率４６％で得た。無色非晶質。
^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ ９．８２（ｂｒ，１Ｈ），８．１７（ｄ，^３Ｊ_ＨＨ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），７．４２−７．１８（ｍ，１４Ｈ），６．８１（ｍ，４Ｈ），５．８８（ｓ，１Ｈ），５．７１（ｄ，^３Ｊ_ＨＨ＝６．６Ｈｚ，１Ｈ），５．１８（ｄ，^３Ｊ_ＨＨ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），２．６２（ｂｒ，１Ｈ），４．４０（ｓ，１Ｈ），４．２８（ｄ，１Ｈ），３．８３（ｂｒ，１Ｈ），３．７８（ｓ，６Ｈ），３．６０（ｍ，３Ｈ），３．２０（ｂｒ，１Ｈ），２．３９（ｓ，１Ｈ），２．６４（ｂｒ，２Ｈ），１．２１（ｂｒ，１Ｈ），０．９７（ｓ，９Ｈ），０．２４（ｓ，６Ｈ）．

実施例１
下記反応式により、ホスホロアミダイト（Ｉ）と、ヌクレオシド（ＩＩ）とを、活性化剤（ＩＩＩ）を用いて縮合した後、硫化反応を行った。

その後、下記反応式により、脱保護を行い、目的とするリボヌクレオチド類縁体を得た。

上記反応における詳細な反応操作は、以下のとおりである。なお、縮合反応の反応追跡ならびに生成物のジアステレオマー比の測定は全て以下の要領で行った。ＮＭＲサンプルチューブ中、ｔｒａｎｓ−１９ｂ（５０μｍｏｌ）と２’，３’−Ｏ−フェノキシアセチルウリジン（５０μｍｏｌ）を、Ｐ_２Ｏ_５上で１２時間真空乾燥し、ＭＳ ３Ａで８時間乾燥したＮ−（シアノメチル）ピロロリジニウム トリフルオロロンメタンスルホネート（２７ａ）（４００μｌ，１００μｍｏｌ）の０．２５Ｍアセトニトリル溶液とＣＤ_３ＣＮ（１００μｌ）をアルゴン雰囲気下加えた。その３分後、ＮＭＲによる積算を開始し、反応のジアステレオマー比はＮＭＲシグナルの積分比によって決定した。
（化合物３→６）
ＮＭＲサンプルチューブ中、ｔｒａｎｓ−１９ｂ（０．０５２０ｇ，５０μｍｏｌ）と２’，３’−Ｏ−フェノキシアセチルウリジン（０．０２５６ｇ，５０μｍｏｌ）をＰ_２Ｏ_５上で１２時間真空乾燥し、ＭＳ ３Ａで８時間乾燥したＮ−（シアノメチル）ピロロリジニウム トリフロロロメタンスルホネート（２７ａ）（４００μｌ，１００μｍｏｌ）の０．２５Ｍアセトニトリル溶液とＣＤ_３ＣＮ（１００μｌ）をアルゴン雰囲気下加えた。
（化合物６→７）
これを１５分間良くかき混ぜた後に、ピリジン（４３μｌ，０．５ｍｍｏｌ）と無水酢酸（１０μｌ，０．１ｍｍｏｌ）をマイクロシリンジで加えて、化合物６を７へと変換した。
（化合物７→８）
更にこの溶液中にＢｅａｕｃａｇｅ ｒｅａｇｅｎｔ（０．０１２０ｇ，０．０６ｍｍｏｌ）を加え、化合物７の硫化を行った。
（化合物８→９）
ここで、ＮＭＲサンプル管から５０ｍｌ細口のナスフラスコに反応溶液を移し変え、３ｍｌのピリジンで洗いこみを行った後、これにアンモニア水−エタノール（３：１，ｖ／ｖ）混合溶液２０ｍｌを加え、密栓をして６０℃で４時間加熱処理を行った。
加熱後に、溶媒を減圧下留去し、０．１Ｍ ＴＥＡＡバッファー５ｍｌとジクロロメタン５ｍｌを加え、化合物９を有機相へ回収し、無水硫酸ナトリウムで乾燥、ろ過し、減圧下濃縮乾燥を行った。
（化合物９→１０）
十分乾燥させた化合物９に対し、３ＨＦ−Ｅｔ_３Ｎ１．５ｍｌをｎｅａｔで加え、２時間撹拌した後に、０．１Ｍ ＡＡバッファー３ｍｌとメタノール３ｍｌを加え、エーテル３ｍｌを用いて洗浄したのち、水相を回収し減圧下濃縮乾燥を行い、更に凍結乾燥を繰り返すことにより、脱塩を行った。
（化合物１０→１１）
凍結乾燥を行った後の化合物１０に８０％酢酸水溶液２０ｍｌを加え、３０分間室温で撹拌した後、減圧下濃縮乾燥を行った。８０％酢酸を留去した後、ジエチルエーテル３ｍｌを用いて洗浄した後、蒸留水を用いて抽出を行った。回収した水相を減圧下濃縮乾燥し、更に凍結乾燥を繰り返し、脱塩を行った後、逆相ＨＰＬＣ及びＵＶによる分析を行った。その結果、（Ｓｐ）−１１を、縮合からのトータル収率３７％で得た。
実施例２
下記の各反応工程（１）〜（４）及び（５）の反応（下記反応式）により、オリゴマー（ＸＩＩＩ）を製造した。
（１）縮合反応
固相担体〔ｈｉｇｈｌｙ ｃｒｏｓｓ−ｌｉｎｋｅｄ ｐｏｌｙｓｔｙｒｅｎｅ（ＨＣＰ）〕に結合したリボヌクレオシド〔一般式（Ｉ）〕１ｍｍｏｌに対して２０当量のモノマーユニット〔一般式（ＩＩ）、（ＩＩＩ）のユニット〕（０．２Ｍ）、５０当量の活性化剤（Ｎ−シアノメチルアンモニウム塩，０．５Ｍ）をアセトニトリル中で９０秒間反応させた。反応終了後、アセトニトリルで洗浄した。
（２）キャップ化反応（アセチル化反応）
固相担体に結合したリボヌクレオチドを無水酢酸：Ｎ−メチルイミダゾール：ＴＨＦ＝１：２：７の混合溶液で６０秒間処理し，未反応の５’水酸基及び遊離した不斉補助基のアミノ基をアセチル化した。反応終了後，アセトニトリルで洗浄した。
（３）硫化反応
固相担体に結合したリボヌクレオチドを５０当量のＢｅａｕｃａｇｅ試薬（０．５Ｍ）のアセトニトリル溶液で６０秒間処理し，ホスファイト中間体を硫化した。反応終了後，アセトニトリルで洗浄した。
（４）脱トリチル化反応
固相担体に結合したリボヌクレオチドを３％トリクロロ酢酸のジクロロメタン溶液で６０秒間処理し、５’末端のＤＭＴｒ基を除去した。反応終了後、ジクロロメタン、次にアセトニトリルで洗浄した。
（５）鎖延長反応と、脱保護反応及び精製
上記の（１）から（４）の反応操作を繰り返し、オリゴリボヌクレオチド鎖を固相担体上で延長した。
目的とする鎖長のオリゴリボヌクレオチド誘導体が固相担体上に合成できたら、固相担体を２５％アンモニア水：エタノール（３：１，ｖ／ｖ）で６０°Ｃで１５時間反応させて，塩基部及びリン酸部位の保護基を除去した。このとき，３’末端の水酸基の保護基と固相担体からのオリゴマーの切り出しも同時に進行した。
固相担体を濾過して除き、濾液を減圧下濃縮乾燥後、Ｅｔ_３Ｎ・３ＨＦ（１００当量）を加え、室温で２時間反応させて２’水酸基の保護基であるＴＢＤＭＳ基を除去した。反応終了後、減圧下Ｅｔ_３Ｎ・３ＨＦを留去して乾燥後、水（１ｍｌ）に溶解して、エーテル（１ｍｌ×３回）で洗浄した。水層を減圧下で濃縮乾燥した後に、水（１ｍｌ）に溶解し、逆相ＨＰＬＣによって精製して、収率２０−７０％の範囲で目的物を得た。

実施例３
〔スキーム１：キラル不斉補助基としての１，２−アミノアルコールの合成〕

（Ｓ）−プロリン−Ｎ−エチルカルバメート（１）の合成
１０規定のＮａＯＨ水溶液（５０ｍｌ）にＳ−ｐｒｏｌｉｎｅ（５．７５ｇ，４９．９ｍｍｏｌ）を加え、０℃に冷却し、攪拌しつつ４０分間かけてｃｈｌｏｒｏｆｏｒｍｉｃ ａｃｉｄ ｅｔｈｙｌ ｅｓｔｈｅｒ（５．７５ｍｌ，６０．４ｍｍｏｌ）を、ｐＨ９−１０に保ちつつ、滴下した。室温で３．５時間攪拌した後、ジクロロメタン（３０ｍｌ）を加え、１規定のＨＣｌ水溶液（３６０ｍｌ）を加えてｐＨ１にしたのち、ジクロロメタン（３００ｍｌ×１０）で抽出し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、減圧下濃縮して１（９．１９ｇ，９８％）を得た。無色透明液体。
^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ １０．８５−１０．４２（ｂｒ，１Ｈ），４．４１−４．３０（ｍ，１Ｈ），４．２２−４．１５（ｍ，２Ｈ），３．６０−３．３７（ｍ，２Ｈ），２．３２−２．２０（ｍ，１Ｈ），２．１７−２．０５（ｍ，１Ｈ），１．９８−１．９０（ｍ，２Ｈ），１．３１−１．１９（ｍ，３Ｈ）；ＩＲ（ＮａＣｌ，ｃｍ^−１）３４５９（−ＣＯＯＨ），１７２４（−ＣＯＯＨ），１６８２（Ｎ−Ｃ＝Ｏ）。
（Ｓ）−プロリン−Ｎ−エチルカルバメートメチルエステル（２）の合成
Ａｒ雰囲気下、Ｓ−ｐｒｏｌｉｎｅ−Ｎ−ｅｔｈｙｌ ｃａｒｂａｍａｔｅ １（９．１９ｇ，４９．１ｍｍｏｌ）にメタノール（１５０ｍｌ）を加え、０℃に冷却し、攪拌しつつｔｈｉｏｎｙｌ ｃｈｌｏｒｉｄｅ（５．４０ｍｌ，７４．３ｍｍｏｌ）を加えた。室温で５時間攪拌したのち、減圧下、メタノールを留去し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（１００ｍｌ）を加え、クロロホルム（１００ｍｌ×３）で抽出し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、減圧下濃縮して２（９．８０ｇ，９９％）を得た。無色透明液体。
^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ ４．２９−４．２０（ｍ，１Ｈ），４．０８−３．９８（ｍ，２Ｈ），３．６５（ｓ，３Ｈ），３．５６−３．３５（ｍ，２Ｈ），２．２１−２．０９（ｍ，１Ｈ），１．９４−１．８２（ｍ，３Ｈ），１．２１−１．１０（ｍ，３Ｈ）；ＩＲ（ＮａＣｌ，ｃｍ^−１）１７５１（ＣＯＯＭｅ），１７０２（Ｎ−Ｃ＝Ｏ）。
Ｎ−エチルカルバメート−（２Ｓ）−α，α−ジフェニル（ピロリジン−２−イル）メタノール（３ａ）の合成
（Ｓ）−Ｐｒｏｌｉｎｅ−Ｎ−ｅｔｈｙｌ ｃａｒｂａｍａｔｅ ｍｅｔｈｙｌ ｅｓｔｈｅｒ ２（５．０３ｇ，２５．０ｍｍｏｌ）をトルエンで繰り返し共沸を行い、ＴＨＦ（５０ｍｌ）に溶かし、０℃に冷却した。攪拌しつつ、ＴＨＦ（９６．２ｍｌ）に溶かしたＰｈＭｇＢｒ（１８．０ｍｌ，１００．０ｍｍｏｌ）を加え、０℃で３時間攪拌した。飽和塩化アンモニウム水溶液（５０ｍｌ）、飽和塩化ナトリウム水溶液（５０ｍｌ）を加え、クロロホルム（５０ｍｌ×３）で抽出し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、減圧下濃縮したのち、ヘキサン３０ｍｌを加え、激しく攪拌し、吸引濾過し、真空乾燥して３ａ（７．２２ｇ，８８％）を得た。無色非晶質。
^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ ７．４０−７．１２（ｍ，１０Ｈ），４．９４−４．８７（ｍ，１Ｈ），４．１９−３．９８（ｍ，２Ｈ），３．４５−３．３５（ｍ，２Ｈ），２．１７−２．０２（ｍ，１Ｈ），１．９９−１．８８（ｍ，１Ｈ），１．５５−１．４２（ｍ，１Ｈ），１．２５−１．２２（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）；ＩＲ（ＮａＣｌ，ｃｍ^−１）３３７５（−ＯＨ），１６８０（Ｎ−Ｃ＝Ｏ）。
Ｎ−エチルカルバメート−（２Ｓ）−α−メチル（ピロリジン−２−イル）エタノール（３ｂ）の合成
Ａｒ雰囲気下、マグネシウム（４．８０ｇ，１９７．３ｍｍｏｌ）にエーテル（１００ｍｌ）を加え、０℃に冷却し、攪拌しつつ、ｍｅｔｈｙｌ ｉｏｄｉｄｅ（１２．５ｍｌ，２００．７ｍｍｏｌ）を溶かしたエーテル（５０ｍｌ）を加えた。室温で４５分攪拌したのち、０℃に冷却し、攪拌しつつ、（Ｓ）−Ｐｒｏｌｉｎｅ−Ｎ−ｅｔｈｙｌ ｃａｒｂａｍａｔｅ ｍｅｔｈｙｌ ｅｓｔｈｅｒ ２（９．８０ｇ，４８．７ｍｍｏｌ）を溶かしたエーテル（５０ｍｌ）を加えた。０℃で１．５時間攪拌したのち、飽和塩化アンモニウム水溶液（７５ｍｌ）、飽和塩化ナトリウム水溶液（７５ｍｌ）を加え、ジクロロメタン（１５０ｍｌ×３）で抽出し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、減圧下濃縮して３ｂ（９．６０ｇ，９８％）を得た。黄色透明液体。
^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ ５．７２−５．６６（ｂｒ，１Ｈ），４．０９（ｑ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ），３．８４（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），３．７２−３．６２（ｍ，１Ｈ），３．２０−３．１１（ｍ，１Ｈ），２．０３−１．９４（ｍ，１Ｈ），１．８４−１．７６（ｍ，１Ｈ），１．６９−１．５１（ｍ，２Ｈ），１．２４−１．２０（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，３Ｈ），１．１１（ｓ，３Ｈ），１．０３（ｓ，３Ｈ）；ＩＲ（ＮａＣｌ，ｃｍ^−１）３３９１（−ＯＨ），１６７０（Ｎ−Ｃ＝Ｏ）。
（２Ｓ）−α，α−ジフェニル（ピロリジン−２−イル）メタノール（４ａ）の合成
Ｎ−ｅｔｈｙｌ ｃａｒｂａｍａｔｅ−（２Ｓ）−α，α−ｄｉｐｈｅｎｙｌ（ｐｙｒｒｏｌｉｄｉｎ−２−ｙｌ）ｍｅｔｈａｎｏｌ ３ａ（６．５１ｇ，２０．０ｍｍｏｌ）にメタノール（４０ｍｌ）を加え、攪拌しつつ、水酸化カリウム（１１．２ｇ，２００．０ｍｍｏｌ）を加えた。昇温し、攪拌しつつ４時間加熱還流したのち、減圧下、メタノールを留去し、水５０ｍｌを加え、ジクロロメタン（５０ｍｌ×２）で抽出し、飽和食塩水（１００ｍｌ×２）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、減圧下濃縮した。得られた結晶にヘキサン（５０ｍｌ）を加え、激しく攪拌したのち、吸引濾過を行い、白色粉末を得た。得られた白色粉末を、^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）で測定したところ、ケミカルシフトが文献記載のものと異なること、^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）で測定したところ、炭素数が１４であること、さらに得られた白色粉末（５ｍｇ）をマンデル酸（３ｍｇ）との塩を形成させ、^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）で測定したところ、シグナルがシフトしなかったことから、得られた白色粉末は目的物４ａではなく、オキサゾリジノン環を形成していると判断した。そこで、全て回収し、同様の条件で６時間反応をおこなった。精製も同様に行い、４ａ（２．９９ｇ，６０％）を得た。無色非晶質。
^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ ７．５７−７．１１（ｍ，１０Ｈ），４．２６−４．２１（ｍ，１Ｈ），３．０６−２．８９（ｍ，２Ｈ），１．７８−１．５２（ｍ，４Ｈ）；ＩＲ（ＫＢｒ，ｃｍ^−１）３３５０（−ＯＨ，ＮＨ）。
（２Ｓ）−α−メチル（ピロリジン−２−イル）エタノール（４ｂ）の合成
Ｎ−ｅｔｈｙｌ ｃａｒｂａｍａｔｅ−（２Ｓ）−α−ｍｅｔｈｙｌ（ｐｙｒｒｏｌｉｄｉｎ−２−ｙｌ）ｅｔｈａｎｏｌ ３ｂ（９．６０ｇ，４８．７ｍｍｏｌ）にメタノール（５０ｍｌ）を加え、０℃に冷却し、攪拌しつつ、水酸化カリウム（２７．０ｇ，４８１．１ｍｍｏｌ）を加えた。昇温し、攪拌しつつ４時間加熱還流したのち、減圧下、メタノールを留去し、水５０ｍｌを加え、ｐＨ１になるまで濃塩酸を加え、エーテル（１００ｍｌ×２）で洗浄し、生じた沈殿物もともに水相を回収した。ｐＨ１２になるまで水酸化カリウムを加え、沈殿物を吸引濾過により取り除いたのち、ジクロロメタン（２００ｍｌ×６）で抽出し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、減圧下濃縮して４ｂ（５．５４ｇ，８８％）を得た。黄色針状結晶。
^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ ３．０３−２．８７（ｍ，３Ｈ），２．６６−２．４８（ｂｒ，２Ｈ），１．８０−１．５８（ｍ，４Ｈ），１．１６（ｓ，３Ｈ），１．１３（ｓ，３Ｈ）；ＩＲ（ＫＢｒ，ｃｍ^−１）３３７６（−ＯＨ，ＮＨ）。
〔スキーム２：ホスフィチル化剤の合成〕

（４Ｓ）−２−クロロテトラヒドロ−１Ｈ，３Ｈ−ピロロ［１，２−ｃ］−５，５−ジフェニル−１，３，２−オキサアザホスホリジン（５ａ）の合成
（２Ｓ）−α，α−ｄｉｐｈｅｎｙｌ（ｐｙｒｒｏｌｉｄｉｎ−２−ｙｌ）ｍｅｔｈａｎｏｌ ４ａ（１．２７ｇ，５ｍｍｏｌ）をトルエンを用いて共沸乾燥し、トルエン２．５ｍｌに溶かした。溶液にＮ−ｍｅｔｈｙｌｍｏｒｐｈｏｌｉｎｅ（１．１ｍｌ，１０．０ｍｍｏｌ）を加え、この混合溶液をＡｒ雰囲気下、ｐｈｏｓｐｈｏｒｕｓ ｔｒｉｃｈｌｏｒｉｄｅ（０．４４ｍｌ，５．０ｍｍｏｌ）のトルエン溶液に対し、攪拌しつつ０℃で滴下した。反応混合物を室温で３０分攪拌したのち、生じた塩をＡｒ雰囲気下、−７８℃で濾別し、Ａｒ雰囲気下、濾液を減圧濃縮し、５ａ（１．７９ｇ，ｃｒｕｄｅ）を得た。
^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ ７．５７−７．０１（ｍ，１０Ｈ），４．６８−４．５１（ｍ，１Ｈ），３．４４−３．３５（ｍ，１Ｈ），３．１７−３．０７（ｍ，１Ｈ），２．０６−１．８９（ｍ，２Ｈ），１．６７−１．２４（ｍ，２Ｈ）；^３１Ｐ ＮＭＲ（１２１ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ １５８．２（７１％），１７３．６（２９％）。
（４Ｓ）−２−クロロテトラヒドロ−１Ｈ，３Ｈ−ピロロ［１，２，−ｃ］−５，５−ジメチル−１，３，２−２−オキサアザホスホリジン（５ｂ）の合成
（２Ｓ）−α−ｍｅｔｈｙｌ（ｐｙｒｒｏｌｉｄｉｎ−２−ｙｌ）ｅｔｈａｎｏｌ ４ｂ（１．９５ｇ，１５．１ｍｍｏｌ）をトルエンを用いて共沸乾燥し、トルエン５．０ｍｌに溶かした。溶液にＮ−ｍｅｔｈｙｌｍｏｒｐｈｏｌｉｎｅ（３．３ｍｌ，２９．８ｍｍｏｌ）を加え、この混合溶液をＡｒ雰囲気下、ｐｈｏｓｐｈｏｒｕｓ ｔｒｉｃｈｌｏｒｉｄｅ（１．４ｍｌ，１６．０ｍｍｏｌ）のトルエン溶液に対し、攪拌しつつ０℃で滴下した。反応混合物を室温で３０分攪拌したのち、生じた塩をＡｒ雰囲気下、−７８℃で濾別し、Ａｒ雰囲気下、濾液を減圧濃縮した。減圧蒸留（ｂｐ．５５℃／０．２ｍｍＨｇ）により精製を試みたが単離にはいたらず、５ｂ（０．８５ｇ，ｃｒｕｄｅ）を得た。無色透明液体。
^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ ３．７０−３．６１（ｍ，１Ｈ），３．５３−３．４０（ｍ，１Ｈ），３．１９−３．０５（ｍ，１Ｈ），２．２１−２．０４（ｍ，２Ｈ），１．８４−１．７１（ｍ，２Ｈ），１．５３（ｓ，３Ｈ），１．３７（ｓ，３Ｈ）；^３１Ｐ ＮＭＲ（１２１ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ １７１．０（３５％），１６４．５（２６％），１６１．６（３９％）。
〔スキーム３：オキサアザホスホリジン誘導体の合成〕

５’−Ｏ−（ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル）−３’−Ｏ−［（２Ｓ，５Ｒ）−５，５−ジフェニル−テトラヒドロ−１Ｈ，３Ｈ−ピロロ［１，２−ｃ］−１，３，２−２−オキサアザホスホリジン−２−イル］チミジン（７ａ）の合成
５’−Ｏ−（ｔｅｒｔ−Ｂｕｔｙｌｄｉｐｈｅｎｙｌｓｉｌｙｌ）ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ ６（７２２．３ｍｇ，１．５ｍｍｏｌ）をピリジン、トルエンと繰り返し共沸することによって乾燥し、ＴＨＦ溶液とした。これにＥｔ_３Ｎ（１．１ｍｌ，７．９ｍｍｏｌ）を加え、−７８℃に冷却したのち、Ａｒ雰囲気下（４Ｓ）−２−ｃｈｌｏｒｏｔｅｔｒａｈｙｄｒｏ−１Ｈ，３Ｈ−Ｐｙｒｒｏ［１，２−ｃ］−５，５−ｄｉｐｈｅｎｙｌ−１，３，２−ｏｘａｚａｐｈｏｓｐｈｏｌｉｄｉｎｅ ５ａの０．２２Ｍ ＴＨＦ溶液２２．５ｍｌ（５．０ｍｍｏｌ）を滴下した。反応混合物を室温で３時間攪拌したところ、反応が完了していなかったので、終夜で加熱還流を行った。反応混合物に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（７５ｍｌ）及びクロロホルム（７５ｍｌ）を加えた。有機相を分離後、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄（７５ｍｌ×２）し、集めた洗液をクロロホルム（７５ｍｌ×２）で抽出した。集めた有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、減圧下濃縮した。残渣を酢酸エチルに溶かし、ヘキサンに滴下して目的化合物を再沈殿させた。吸引濾過で固体を回収し、ヘキサンで洗浄して７ａ（８０１．６ｍｇ，ｃｒｕｄｅ）を得た。無色非晶質。
^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ ７．６５−７．１２（ｍ，１１Ｈ），６．１３（ｄｄ，^３Ｊ_ＨＨ＝７．８，７．８Ｈｚ，１Ｈ），４．６５−４．５７（ｍ，１Ｈ），４．５５−４．４９（ｍ，１Ｈ），３．７９（ｄｄ，^２Ｊ_ＨＨ＝１１．３Ｈｚ，^３Ｊ_ＨＨ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ），３．８４（ｄｄ，^２Ｊ_ＨＨ＝１１．７Ｈｚ，^３Ｊ_ＨＨ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ），３．５７−３．４８（ｍ，１Ｈ），３．４５−３．４４（ｍ，１Ｈ），３．１７−３．０７（ｍ，１Ｈ），２．３３−２．２５（ｍ，１Ｈ），１．９２−１．８２（ｍ，１Ｈ），１．８１−１．５０（ｍ，４Ｈ），１．４９（ｓ，３Ｈ），１．０６（ｓ，９Ｈ）；ＩＲ（ＫＢｒ，ｃｍ^−１）３４２３，２９３０，１６８８，１４６６，１４４８，１２７８，１１１３，１０６６，９５８。
５’−Ｏ−（ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル）−３’−Ｏ−［（２Ｓ，５Ｒ）−５，５−ジメチル−テトラヒドロ−１Ｈ，３Ｈ−ピロロ［１，２−ｃ］−１，３，２−２−オキサアザホスホリジン−２−イル］チミジン（７ｂ）の合成
５’−Ｏ−（ｔｅｒｔ−Ｂｕｔｙｌｄｉｐｈｅｎｙｌｓｉｌｙｌ）ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ ６（１．３１ｇ，２．７２ｍｍｏｌ）をピリジン、トルエンと繰り返し共沸することによって乾燥し、ＴＨＦ溶液（７．５０ｍｌ）とした。これにＥｔ_３Ｎ（１．９ｍｌ，１３．６ｍｍｏｌ）を加え、−７８℃に冷却したのち、Ａｒ雰囲気下（４Ｓ）−２−ｃｈｌｏｒｏ ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏ−１Ｈ，３Ｈ−Ｐｙｒｒｏ［１，２−ｃ］−５，５−ｄｉｍｅｔｈｙｌ−１，３，２−ｏｘａｚａｐｈｏｓｐｈｏｌｉｄｉｎｅ ５ｂの０．３８Ｍ ＴＨＦ溶液（１０．０ｍｌ，３．８１ｍｍｏｌ）を滴下した。反応混合物を室温で３０分攪拌したのち、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（１００ｍｌ）及びクロロホルム（１００ｍｌ）を加えた。有機相を分離後、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄（１００ｍｌ×２）し、集めた洗液をクロロホルム（２００ｍｌ×１）で抽出した。集めた有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、減圧下濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィ［４×１６ｃｍ，１００ｇ ｏｆ ｓｉｌｉｃａ ｇｅｌ，ｈｅｘａｎ−ｅｔｈｙｌ ａｃｅｔａｔｅ−ｔｒｉｅｔｈｙｌａｍｉｎｅ（５０：５０：５，ｖ／ｖ／ｖ）→ｈｅｘａｎ−ｅｔｈｙｌ ａｃｅｔａｔｅ−ｔｒｉｅｔｈｙｌａｍｉｎｅ（５０：５０：２，ｖ／ｖ／ｖ）］で分離精製した。７ｂを含むフラクションを集め、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（１００ｍｌ×１）で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、減圧下濃縮して７ｂ（６１４．８ｍｇ，３６％）を得た。無色非晶質。
^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ ９．８３−９．６３（ｂｒ，１Ｈ），７．６８−７．３４（ｍ，１１Ｈ），６．４２（ｄｄ，^３Ｊ_ＨＨ＝８．１，８．１Ｈｚ，１Ｈ），４．９０−４．８５（ｍ，１Ｈ），４．０９−４．０８（ｍ，１Ｈ），３．９９（ｄｄ，^２Ｊ_ＨＨ＝１１．７Ｈｚ，^３Ｊ_ＨＨ＝２．１Ｈｚ，１Ｈ），３．８４（ｄｄ，^２Ｊ_ＨＨ＝１１．１Ｈｚ，^３Ｊ_ＨＨ＝２．１Ｈｚ，１Ｈ），３．５３−３．４７（ｍ，２Ｈ），３．０９−２．０９（ｍ，１Ｈ），２．５３−２．４６（ｍ，１Ｈ），２．２４−２．１５（ｍ，１Ｈ），１．８５−１．６５（ｍ，４Ｈ），１．５８（ｓ，３Ｈ），１．４７（ｓ，３Ｈ），１．２０（ｓ，３Ｈ），１．１１（ｓ，９Ｈ）；^３１Ｐ ＮＭＲ（１２１ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ １５２．２（９８％），１４２．９（２％）；ＩＲ（ＫＢｒ，ｃｍ^−１）３４２３，２９６３，１６８９，１４６７，１４２８，１２７３，１１１３，１０７４，９５６。
〔スキーム４：７と９の縮合〕

^３１Ｐ ＮＭＲ分光分析法による８の存在下における７と９の縮合のモニタリング。８の存在下における７ａ−ｂと９の縮合の代表的モニタリング
ＮＭＲサンプルチューブ中、７ａ（４１．９ｍｇ，５５μｍｏｌ）と９（１７．８ｍｇ，５０μｍｏｌ）をＰ_２Ｏ_５上で１２時間真空乾燥し、ＭＳ ３Ａで８時間乾燥した８（４００μｌ，１００μｍｏｌ）の０．２５Ｍアセトニトリル溶液とＣＤ_３ＣＮ（１００μｌ）をＡｒ雰囲気下加えた。その３分後、ＮＭＲによる積算を開始し、反応のジアステレオマー比をＮＭＲシグナルの積分比によって決定した。
ＮＭＲサンプルチューブ中、７ｂ（３５．１ｍｇ，５５μｍｏｌ）と９（１７．８ｍｇ，５０μｍｏｌ）をＰ_２Ｏ_５上で１２時間真空乾燥し、ＭＳ ３Ａで８時間乾燥した８（４００μｌ，１００μｍｏｌ）の０．２５Ｍアセトニトリル溶液とＣＤ_３ＣＮ（１００μｌ）をＡｒ雰囲気下加えた。
スキーム５

５’−Ｏ−（ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル）チミジン−３’−ｙｌ ３’−Ｏ−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）チミジン−５’−イル Ｎ−アセチル−（２Ｓ）−α−メチル（ピロリジン−２−イル）エタノイル フォスファイト（１２ｂ）の合成
ＮＭＲサンプルチューブ中、７ｂ（３５．１ｍｇ，５５μｍｏｌ）と９（１７．８ｍｇ，５０μｍｏｌ）をＰ_２Ｏ_５上で１２時間真空乾燥し、ＭＳ ３Ａで８時間乾燥した８（４００μｌ，１００μｍｏｌ）の０．２５Ｍアセトニトリル溶液とＣＤ_３ＣＮ（１００μｌ）をＡｒ雰囲気下加えた。５分後、ピリジン（４０．１μｌ，５００μｍｏｌ）と無水酢酸（９．５μｌ，１００μｍｏｌ）を加えた。３分後、クロロホルム（３０ｍｌ）を加え、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（１５ｍｌ×２）で洗浄し、集めた洗液をクロロホルム（３０ｍｌ×１）で抽出した。集めた有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、減圧下濃縮し、トルエンと共沸することで１２ｂ（８６．９ｍｇ，ｃｒｕｄｅ）を得た。
^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ ９．７３（ｂｒ，２Ｈ），７．６３−７．６１（ｍ，４Ｈ），７．４６−７．３６（ｍ，７Ｈ），６．３９（ｄｄ，^３Ｊ_ＨＨ＝６．６，３Ｈｚ，１Ｈ），６．２３（ｔ，６．０Ｈｚ），４．８９（ｍ，１Ｈ），４．３０（ｍ，２Ｈ），４．０８−３．８０（ｍ，６Ｈ），３．５８−３．３８（ｍ，２Ｈ），２．４５（ｍ，１Ｈ），２．３４−２．２３（ｍ，３Ｈ），２．２３−１．９８（ｍ，４Ｈ），１．８９（ｓ，３Ｈ），１．６０（ｓ，３Ｈ），１．４６（ｓ，３Ｈ），１．４１（ｓ，３Ｈ），１．１０（ｓ，９Ｈ），０．８７（ｓ，９Ｈ），０．０５（６Ｈ）；^３１Ｐ ＮＭＲ（１２１ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ １３７．２（７９％），１３７．０（７％），１３６．７（８％），１３５．７（１％），１３５．２（５％）；ＩＲ（ＫＢｒ，ｃｍ^−１）３４３０，２９３０，１７４２，１６９４，１４７１，１２７４，１１１２，１０３４，９６６，８３５。
（Ｒｐ）−５’−Ｏ−（ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル）チミジン−３’−イル ３’−Ｏ−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）チミジン−５’−ｙｌ Ｈ−ホスフォネート［（Ｒｐ）−１１］の合成
フォーム状にして５時間真空乾燥させた１２ｂ（８６．９ｍｇ，ｃｒｕｄｅ）に、Ａｒ雰囲気下、蒸留したＴＦＡ（２ｍｌ）を溶かしたＣＨ_２Ｃｌ_２（２０ｍｌ）を加えた。０℃で２分攪拌したのち、ジクロロメタン（１００ｍｌ）を加え、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（５０ｍｌ×２）で洗浄し、集めた洗液をジクロロメタン（１００ｍｌ×１）で抽出した。集めた有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、減圧下濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィ［４×１６ｃｍ，１００ｇ ｏｆ ｓｉｌｉｃａｇｅｌ，ｈｅｘａｎ−ｅｔｈｙｌ ａｃｅｔａｔｅ（１：１，ｖ／ｖ）→ｈｅｘａｎ−ｅｔｈｙｌ ａｃｅｔａｔｅ（１：２，ｖ／ｖ）→ｈｅｘａｎ−ｅｔｈｙｌ ａｃｅｔａｔｅ（１：３，ｖ／ｖ）→ｈｅｘａｎ−ｅｔｈｙｌ ａｃｅｔａｔｅ（１：４，ｖ／ｖ）］で分離精製した。（Ｒｐ）−１１を含むフラクションを集め、減圧下濃縮し、クロロホルム（５０ｍｌ）を加え、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（５０ｍｌ×１）で洗浄後、洗液をクロロホルム（５０ｍｌ×１）で抽出し、集めた有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、減圧下濃縮して１１ｂ（４３．４ｍｇ，８４％（ｐｕｒｉｔｙ ９３％））を得た。無色非晶質。
^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ９．４５−９．３３（ｂｒ，２Ｈ），７．６４−７．６０（ｍ，４Ｈ），７．４７−７．３７（ｍ，８Ｈ），６．９０（ｄ，Ｊ_ＰＨ＝７１５．０Ｈｚ，１Ｈ）６．３９（ｄｄ，^３Ｊ_ＨＨ＝６．０，６．０Ｈｚ，１Ｈ），６．１４（ｔ，^３Ｊ_ＨＨ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），５．２３−５．２２（ｍ，１Ｈ），４．４６−４．４０（ｍ，１Ｈ），４．３５−４．１９（ｍ，２Ｈ），４．１８（ｓ，１Ｈ），３．９９−３．７８（ｍ，３Ｈ），２．６５−２．５５（ｍ，１Ｈ），２．３３−２．２８（ｍ，３Ｈ），１．９１（ｓ，３Ｈ），１．５７（ｓ，３Ｈ），１．０６（ｓ，９Ｈ），０．８９（ｓ，９Ｈ），０．１０（ｓ，６Ｈ）；^３１Ｐ ＮＭＲ（１２１ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ ９．３（３％ ｆｏｒ（Ｓｐ）−１１），７．８（９７％ ｆｏｒ（Ｒｐ）−１１）；ＩＲ（ＫＢｒ，ｃｍ^−１）３４４８，２９３０，１６９５，１４７１，１２７６，１１１４，１０３５，９７１，８３７。
〔スキーム６〕

手動固相合成の代表的手順
（１）３％ ＤＣＡ ｉｎ ＣＨ_２Ｃｌ_２；１５−２０ｓ×４
（２）洗浄（ＣＨ_２Ｃｌ_２ ｆｏｌｌｏｗｅｄ ｂｙ ＣＨ_３ＣＮ）
（３）カップリング（０．２Ｍモノマー１３ ａｎｄ １．０Ｍ ８ ｉｎ ＣＨ_３ＣＮ；３ｍｉｎ）
（４）保護［Ａｃ_２Ｏ−Ｎ−ｍｅｔｈｙｌｉｍｉｄａｚｏｌｅ−ＴＨＦ（１：２：７，ｖ／ｖ／ｖ）；３０ｓ］
（５）１％ ＴＦＡ ｉｎ ＣＨ_２Ｃｌ_２；１５−２０ｓ×４
（６）硫化［１０％ Ｓ_８ ｉｎ ＣＳ_２−Ｐｙ−Ｅｔ_３Ｎ（３５：３５：１，ｖ／ｖ／ｖ）；３ｈ］
（７）洗浄［ＣＳ_２−Ｐｙ−Ｅｔ_３Ｎ（３５：３５：１，ｖ／ｖ／ｖ）ｆｏｌｌｏｗｅｄ ｂｙ Ｐｙ］
（８）２５％ ＮＨ_３ ａｑ．（５．０ｍｌ；１ｈ）
（９）吸引濾過，洗浄（Ｈ_２Ｏ；１．０ｍｌ×５）
（１０）溶媒の減圧留去
（１１）希釈（Ｈ_２Ｏ；５．０ｍｌ）
（１２）洗浄（Ｅｔ_２Ｏ；５．０ｍｌ×３）
（１３）溶媒の減圧留去
（１４）凍結乾燥
集めた残渣を水（０．２ｍｌ）に溶かして逆相ＨＰＬＣにより分析した。
〔スキーム７〕

手動固相合成の代表的手順
（１）１％ ＴＦＡ ｉｎ ＣＨ_２Ｃｌ_２；１５−２０ｓ×４
（２）洗浄（ＣＨ_２Ｃｌ_２ ｆｏｌｌｏｗｅｄ ｂｙ ＣＨ_３ＣＮ）
（３）カップリング（０．２Ｍモノマー１３ ａｎｄ １．０Ｍ ８ ｉｎ ＣＨ_３ＣＮ；３ｍｉｎ）
（４）保護［Ａｃ_２Ｏ−Ｎ−ｍｅｔｈｙｌｉｍｉｄａｚｏｌｅ−ＴＨＦ（１：２：７，ｖ／ｖ／ｖ）；３０ｓ］
（５）１％ ＴＦＡ ｉｎ ＣＨ_２Ｃｌ_２；１５−２０ｓ×４
（６）酸化的アミノ化（飽和ＮＨ_３ ｉｎ ＣＣｌ_４−ｄｉｏｘａｎｅ（４：１，ｖ／ｖ）；０℃，３０ｍｉｎ）
（７）吸引濾過，洗浄（ｄｉｏｘａｎｅ；１．０ｍｌ×２）
（８）溶媒の減圧留去
（９）希釈（Ｈ_２Ｏ；５．０ｍｌ）
（１０）溶媒の減圧留去
（１１）凍結乾燥
集めた残渣を水（０．２ｍｌ）に溶かして逆相ＨＰＬＣにより分析した。

Claims (5)

1. 一般式（Ｉ）
   

   

   ［式中、Ｒ¹及びＲ'は、同一又は異なっていてもよい、水素原子、炭素数１〜３のアルキル基又は炭素数６〜１４のアリール基を示し、ただし同時に水素原子となることはなく、
   Ｒ"は、水素原子を示し、
   Ｒ ² 及びＲ ³ は、互いに結合してプロピレン基を示し、Ｒ ² が結合する炭素原子及びＲ ³ が結合する窒素原子とともに５員環を形成し、
   Ｒ⁴は水酸基の保護基、Ｄ₁は−ＯＲ⁵（ここでＲ⁵は水酸基の保護基）、水酸基又は水素原子を示し、
   Ｂｓは、次式
   

   

   で表されるウラシル、アデニン、シトシン、グアニン、チミンあるいはそれらの誘導体から誘導される基を示す。］
   で表される光学活性なヌクレオシド３'−ホスホロアミダイトと、一般式（ＩＩ）
   

   

   ［式中、Ｒ⁶は水酸基の保護基及びＥ₁は−ＯＲ⁷（ここでＲ⁵は水酸基の保護基）、水酸基又は水素原子、Ｂｓは前記と同じ意味を示す。］
   で表されるヌクレオシドとを、
   一般式（ＩＩＩ）
   

   

   ［式中、Ｘ^-はＢＦ₄ ^-、ＰＦ₆ ^-、ＴｆＯ^-（ＴｆはＣＦ₃ＳＯ₂−を示す。以下同じ）、Ｔｆ₂Ｎ^-、ＡｓＦ₆ ^-又はＳｂＦ₆ ^-を示す。また、環状構造Ａは窒素原子と共に形成する炭素数３〜１６のモノシクロ又はビシクロ構造を示す。］
   で表される活性化剤を用いて縮合した後、求電子試薬との反応及び脱保護を行うことを特徴とする、式（ＩＶ）又は（Ｖ）で表される立体規則性の高いリボヌクレオチド類縁体及びデオキシリボヌクレオチド類縁体の製造法。
   

   

   

   ［各式中、Ｙは炭素数１〜１０の直鎖又は分岐鎖のアルキル基、炭素数１〜１０の直鎖又は分岐鎖のアルコキシ基、炭素数１〜１０の直鎖又は分岐鎖のヒドロキシアルキル基、炭素数６〜１４のアリール基、炭素数１〜１０のアルキルチオ基、炭素数１〜１０のアシル基、アミノ基、炭素数１〜１０のアルキルアミノ基、炭素数１〜１０のジアルキルアミノ基、又はＹ＝Ｙ'Ｚ⁺を示す（Ｙ'はＳ^-、Ｓｅ^-、ＢＨ₃ ^-を、Ｚ⁺はアンモニウムイオン、第１級〜第４級の低級アルキルアンモニウムイオン又は１価の金属イオンを示す）。Ｂｓは、前記と同じ意味を示し、各式中の２個のＢｓは、同一でも異なっていてもよい。Ｄ₂及びＥ₂は水酸基又は水素原子を示す。］
2. 一般式（Ｉ）で表される光学活性なヌクレオシド３'−ホスホロアミダイトが、一般式（ＶＩ）で表される光学活性な１，２−アミノアルコールと三塩化リンを反応させて得られる一般式（ＶＩＩ）で表される光学活性なホスフィチル化剤と、一般式（ＶＩＩＩ）で表されるヌクレオシドを反応させて得られるものである請求項１記載の製造法。
   

   

   

   〔式中、Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ³、Ｒ⁴、Ｄ₁及びＢｓは、前記と同じ意味を示す。〕
3. 一般式（Ｉ）において、Ｒ¹とＲ'は、同一又は異なっていてもよい、メチル基又はフェニル基である、請求項１又は２記載の製造法。
4. 請求項１〜３のいずれかに記載の製造法における反応を繰り返すことを特徴とする、一般式（ＸＩＩＩ）で表される立体規則性の高いオリゴリボヌクレオチド類縁体及びオリゴデオキシリボヌクレオチド類縁体の製造法。
   

   

   ［式中、Ｙ、Ｂ、Ｄ₂及びＥ₂は一般式（Ｉ）、（ＩＶ）、（Ｖ）と同じ意味を示し、ｎは１〜１５０の整数を示す。］
5. 一般式（Ｉ）
   

   

   ［式中、Ｒ ¹ 及びＲ'は、同一又は異なっていてもよい、水素原子、炭素数１〜３のアルキル基又は炭素数６〜１４のアリール基を示し、ただし同時に水素原子となることはなく、
   Ｒ"は、水素原子を示し、
   Ｒ ² 及びＲ ³ は、互いに結合してプロピレン基を示し、Ｒ ² が結合する炭素原子及びＲ ³ が結合する窒素原子とともに５員環を形成し、
   Ｒ ⁴ は水酸基の保護基、Ｄ ₁ は−ＯＲ ⁵ （ここでＲ ⁵ は水酸基の保護基）、水酸基又は水素原子を示し、
   Ｂｓは、次式
   

   

   で表されるウラシル、アデニン、シトシン、グアニン、チミンあるいはそれらの誘導体から誘導される基を示す。］
   で表される光学活性なヌクレオシド３'−ホスホロアミダイト。