JP4847799B2 - 新規微生物、および新規カロテノイドの製造方法 - Google Patents
新規微生物、および新規カロテノイドの製造方法 Download PDFInfo
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Description
このような状況下、カロテノイドの微生物による生産方法の開発も活発に行われてきた。例えば、緑藻であるHaematococcus pluvialisの大量培養による、アスタキサンチンの生産が行われている。生産法については、多くの研究が実施されている。その例の一つとして、Rioらの論文を挙げることができる(非特許文献1)。
なお特許文献3において、坪倉章らは、カロテノイドを生産する菌を分離しているが、この特許文献における菌は運動性を持つものであり、本発明の運動性を持たないパラコッカス属のNBRC 100637株とは異なる。
〔1〕 アドニキサンチン・ジグルコシドを生産するパラコッカス属であることを特徴とする細菌、
〔2〕 独立行政法人製品評価技術基盤機構生物遺伝資源部門(NBRC)に、保存番号NBRC100637として寄託されたパラコッカス属細菌、
〔3〕 パラコッカス属細菌であって、以下の(a)および/または(b)の特徴を有する細菌、
(a)〔2〕に記載の細菌のゲノムDNAと、70%以上の相同性のゲノムDNAを有する
(b)〔2〕に記載の細菌の16S rRNA遺伝子と97%以上の相同性の16S rRNA遺伝子を有する
〔4〕 アドニキサンチン・ジグルコシドを生産することを特徴とする、〔3〕に記載の細菌、
〔5〕 下記の式(I)で示されるアドニキサンチン・ジグルコシド、
〔7〕 〔5〕に記載のアドニキサンチン・ジグルコシドの誘導体、
〔8〕 以下の工程(a)および(b)によって取得される、菌体抽出物、
(a)〔1〕〜〔4〕のいずれかに記載のパラコッカス属細菌を培養する工程、
(b)培養された菌体から溶媒抽出処理を行う工程
〔9〕 〔1〕〜〔4〕のいずれかに記載のパラコッカス属細菌を培養する工程を含む、カロテノイドの製造方法、
〔10〕 〔1〕〜〔4〕のいずれかに記載のパラコッカス属細菌を培養する工程を含む、〔5〕に記載のアドニキサンチン・ジグルコシドの製造方法、
〔11〕 〔1〕〜〔4〕のいずれかに記載されたパラコッカス属細菌を培養する工程を含む、〔6〕に記載の組成物の製造方法、
を、提供するものである。
(a)NBRC100637株のゲノムDNAと、70%以上の相同性のゲノムDNAを有する
(b)NBRC100637株の16S rRNA遺伝子と97%以上の相同性の16S rRNA遺伝子を有する
上記(b)の相同性は、通常、97%以上、好ましくは98%以上、より好ましくは99%以上である。
(a)アスタキサンチン・ジグルコシド、(b)ゼアキサンチン・ジグルコシド(zeaxanthin diglucoside)、(c)カンタキサンチン(canthaxanthin)、(d)エキネノン(echinenone)、(e)ゼアキサンチン(zeaxanthin)、(f)ベータ・クリプトキサンチン(β-cryptoxanthin)、(g)ベータ・カロテン(β-carotene)
(a)本発明のパラコッカス属細菌を培養する工程、
(b)培養された菌体から溶媒抽出処理を行う工程
パラコッカス属の微生物(NBRC 100637)を、マリンブロース(Difco社製品)を用いて、20℃で3日間、振とう培養を行った。培養液を遠心分離して、微生物体を沈殿物として分離した。次に、微生物体の持つ色素を、メタノールで数回にわたって抽出した。この抽出物を、クロロホルムと水の混合液に加え、クロロホルム層を回収、真空下でクロロホルムを蒸発させ、抽出物を乾固させた。この抽出物を、逆相 (C18: Waters μBondapak) のカラムを装着した高速液体クロマトグラフィーによって分離した。溶出には、メタノール/水(9:1)あるいは100%メタノールを使用した。抽出物の90%以上を占める主要なピークと、それ以外の量の少ない複数のピークが検出された。主要なピークは、高速液体クロマトグラフィーの保持時間(retention time)及び紫外・可視吸収スペクトルより、新規なカロテノイドであると予想された。一方、それ以外のピークは、保持時間および紫外・可視吸収スペクトルより、アスタキサンチン・ジグルコシド、ゼアキサンチン・ジグルコシド(zeaxanthin diglucoside)、カンタキサンチン(canthaxanthin)、エキネノン(echinenone)、ゼアキサンチン(zeaxanthin)、ベータ・クリプトキサンチン(β-cryptoxanthin)およびベータ・カロテン(β-carotene)であると判断された。
東京湾の海水を、濾過滅菌(ポァサイズ0.2μmのフィルターを使用)した海水で希釈し20℃で一週間培養した。濾過滅菌した海水には僅かに栄養が含まれており、その中で微生物は僅かに増殖し、その増殖を顕微鏡で確認できる。この培養物を、Difco社のマリン・アガー2216培地を、通常濃度の1/5に希釈し、1.5%寒天で固化したプレートに塗布し、多くの細菌のコロニーを得た。そのようにして得られた株の一つが、NBRC 100637株である。この株は、上述の16S rRNA遺伝子配列およびDNA相同性試験の結果から、パラコッカス属に分類される新種の細菌であると判断された。
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