WO2021172372A1 - シス型キサントフィル組成物および使用方法 - Google Patents

シス型キサントフィル組成物および使用方法 Download PDF

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WO2021172372A1
WO2021172372A1 PCT/JP2021/006912 JP2021006912W WO2021172372A1 WO 2021172372 A1 WO2021172372 A1 WO 2021172372A1 JP 2021006912 W JP2021006912 W JP 2021006912W WO 2021172372 A1 WO2021172372 A1 WO 2021172372A1
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WO
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xanthophyll
poultry
cis
type
feed
Prior art date
Application number
PCT/JP2021/006912
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English (en)
French (fr)
Inventor
祐貴 川嶋
和明 平澤
林　義明
真己 本田
Original Assignee
Ｅｎｅｏｓ株式会社
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Filing date
Publication date
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    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K20/00—Accessory food factors for animal feeding-stuffs
    • A23K20/10—Organic substances
    • A23K20/158—Fatty acids; Fats; Products containing oils or fats
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K50/00—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals
    • A23K50/70—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals for birds
    • A23K50/75—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals for birds for poultry

Definitions

  • the present invention relates to a poultry feed for improving the color of poultry egg yolk, and specifically to a poultry feed containing a cis-type xanthophyll.
  • Eggs of poultry such as chickens have high nutritional value and are widely used as foods themselves and as ingredients for various confectioneries and foods.
  • Egg yolk is a pigment such as carotenoids contained in feed, especially pigments contained in corn such as lutein and zeaxanthin, which are absorbed by laying chickens and transferred to eggs and become yellowish for accumulation. It is well known that there is.
  • a color enhancer as the main component is added.
  • the color enhancer for example, a pigment derived from paprika, faffia yeast, and astaxanthin at the powder of Paracoccus cells are used.
  • Patent Document 1 discloses that the color of egg yolk is enhanced by using a carotenoid-containing dried bacterial cell powder crushed to a specific volume particle size as a feed.
  • Patent Document 1 when a dry cell powder is obtained by contacting with a heat transfer portion having a temperature exceeding 100 ° C., it is known that carotenoids are decomposed by heat, so that the temperature exceeds 100 ° C. Contact with the heat transfer part is not preferable. Further, Patent Document 1 does not disclose how much the color of egg yolk is actually improved.
  • Patent Document 2 discloses a method for obtaining an egg having an egg yolk color, which is preferred by consumers, by feeding a feed containing a predetermined amount of corn and astaxanthin.
  • the present invention is as follows. [1] An egg yolk tone improving agent containing xanthophyll, wherein 10 to 90% of the xanthophyll is cis type. [2] The egg yolk tone improving agent according to [1], wherein 10 to 70% of the xanthophyll is cis type.
  • the present invention provides an egg yolk tone improving agent containing xanthophyll, characterized in that 10 to 90%, for example, 10 to 70% of the xanthophyll is cis type. Further, in another aspect of the present invention, a poultry feed containing the egg yolk tone improving agent is provided. When a poultry is fed with a feed containing the egg yolk tone improving agent of the present invention in a general feed for spawning poultry or the poultry feed, an egg having an improved egg yolk tone can be produced. Therefore, the present invention can provide a poultry egg having a good yolk and a method for producing the same.
  • a flesh color improving agent or an oxidative stress improving agent, or the flesh color which comprises xanthophyll and is characterized in that 10 to 90%, for example, 10 to 70% of the xanthophyll is cis type.
  • a feed containing an ameliorating agent or an oxidative stress ameliorating agent is provided.
  • poultry or fish and shellfish are fed with a feed containing the meat color improving agent of the present invention in a general feed of poultry or fish and shellfish, meat with improved color tone can be produced.
  • poultry or seafood is fed with a feed containing the oxidative stress improving agent of the present invention in a general feed for poultry or seafood, the oxidative stress of poultry or seafood can be reduced. It is expected to suppress oxidative deterioration during cooking and maintain health.
  • FIG. 1 shows plasma astaxanthin concentration (left) and cis-type ratio (right) 6 hours after administration.
  • the present invention also relates to a flesh color improving agent or an oxidative stress improving agent containing a predetermined amount of cis-type xanthophyll, and a feed containing the flesh color improving agent or the oxidative stress improving agent.
  • the present invention also includes a method for producing meat produced from poultry or fish and shellfish fed with the feed.
  • xanthophyll especially astaxanthin
  • has an antioxidant effect oxidative stress of poultry or seafood can be reduced, so that oxidative deterioration during storage or cooking of poultry or seafood is suppressed, or a health maintenance effect is achieved. Be expected.
  • poultry or poultry egg refers to the poultry or poultry egg.
  • the consumption or distribution of chicken eggs is the highest among poultry eggs, so that the present invention can be preferably carried out on chickens or chicken eggs from the viewpoint of consumption or distribution.
  • “seafood” or “fish and shellfish” is not particularly limited, but examples thereof include prawns, cherry salmon, and salmon.
  • the description using "-" for the numerical range shall include the lower limit value and the upper limit value unless otherwise specified.
  • both the lower limit value “10” and the upper limit value “20” are included. That is, “10 to 20” has the same meaning as “10 or more and 20 or less”.
  • the values of "%” and “ppm” shall mean the weight ratio. In the present specification, “1 mg / kg” is synonymous with “1 ppm”.
  • the improvement of the yolk tone means that the yolk is darker than that of the control.
  • the egg yolk is measured by the color fan value or the a * value, and the larger the value, the darker the egg yolk.
  • Control refers to egg yolk in poultry eggs from poultry not fed the egg yolk tone improver of the invention or the poultry feed of the present invention or poultry before feeding.
  • Egg yolk tone improver and poultry feed feed containing flesh color improver or oxidative stress improver and flesh color improver or oxidative stress improver (cis-type xanthophyll-enriched feed)
  • the present invention contains an egg yolk tone improving agent containing xanthophyll, and 10 to 90%, for example, 10 to 70% of the xanthophyll is cis type (hereinafter, also referred to as "the egg yolk tone improving agent of the present invention").
  • the poultry feed of the present invention also includes a feed containing the egg yolk tone improving agent of the present invention so that the concentration of xanthophyll is 1 to 50 ppm. Feeding poultry with the poultry feed of the present invention provides poultry eggs with a dark yolk.
  • the present invention comprises a xanthophyll, and 10 to 90%, for example, 10 to 70% of the xanthophyll is cis-type.
  • an oxidative stress improving agent hereinafter, also referred to as “the oxidative stress improving agent of the present invention”.
  • a feed containing xanthophyll at a concentration of 1 to 50 ppm and having 10 to 90%, for example, 10 to 70% of the xanthophyll being cis-type (hereinafter, also referred to as “feed of the present invention”) is provided. do.
  • the feed of the present invention also includes a feed containing the meat color improving agent of the present invention or the oxidative stress improving agent of the present invention so that the concentration of xanthophyll is 1 to 50 ppm.
  • Feeding poultry or fish and shellfish with the feed of the present invention provides meat with improved color.
  • the oxidative stress of poultry or fish and shellfish can be reduced, so that oxidative deterioration during storage and cooking of poultry or fish and shellfish is suppressed.
  • a health maintenance effect is expected.
  • xanthophyll refers to astaxanthin, adonylbin, adonixanthin, zeaxanthin, ⁇ -cryptoxanthin, ⁇ -cryptoxanthin, lutein, canthaxanthin, asteroidenone, 3-hydroxyequinenone, ⁇ -apo-.
  • preferred xanthophylls are astaxanthin, adonylvin or adonixanthin, more preferred xanthophylls are astaxanthin or adonixanthin, and particularly preferred xanthophylls are astaxanthin.
  • the egg yolk tone improving agent and poultry feed of the present invention may contain one or a plurality of xanthophylls in appropriate combinations.
  • the meat color improving agent or oxidative stress improving agent of the present invention and the feed of the present invention may contain one or a plurality of xanthophylls in appropriate combinations.
  • the combination is, for example, a combination containing astaxanthin, adonylvin and adonixanthin, preferably a combination containing astaxanthin and adonixanthin.
  • xanthophylls may be in the form of pharmaceutically acceptable salts.
  • Xanthophyll has cis and trans isomers of conjugated double bonds in the central part of the molecule.
  • an isomer in which one or more of the conjugated double bonds in the molecule are cis-type is referred to as a "cis-form" or "cis-type” xanthophyll, and all of the conjugated double bonds in the molecule are cis-type.
  • the trans-type isomer is called a "trans-type", "trans-type” or "all-trans-type” xanthophyll.
  • xanthophyll shall include both cis-type xanthophylls and trans-type xanthophylls.
  • the definitions of cis and trans isomers also apply to xanthophylls such as astaxanthin, adonylvin and adonixanthin.
  • cis-type astaxanthin 9-cis form, 13-cis form, 15-cis form, dicis form or a combination thereof is included in cis-type astaxanthin.
  • the cis-type adonylbin includes a 9-cis form, a 13-cis form, a 15-cis form, a dicis form, or a combination thereof.
  • cis-type adonixanthin includes 9-cis form, 13-cis form, 15-cis form, dicis form or a combination thereof.
  • xanthophyll can be produced by a person skilled in the art by a known method such as a chemical synthesis method or a method using microorganisms such as bacteria and yeast.
  • chemical synthesis it can be produced by the method described in Pure & Appl. Chem., Vol 51 pp535-564 (1979) and the like.
  • bacteria when bacteria are used, the methods described in Japanese Patent Application Laid-Open No. 2010-172293, Japanese Patent Application Laid-Open No. 2005-087097, International Publication No. 2010/087400 Pamphlet, International Publication No. 2010/0444469 Pamphlet, Japanese Patent Application Laid-Open No. 2001-352995, etc. Can be manufactured in.
  • yeast it can be produced by the methods described in JP-A-5-76347, JP-A-6-319531, JP-A-8-214870 and the like.
  • the bacterium used in the present invention is not limited as long as it is a bacterium that produces xanthophile, but a bacterium belonging to the genus Paracoccus, Sp hingomonas, Brevundimonas or Erythrobacter is preferably used, and among them, a bacterium belonging to the genus Paracoccus is preferable. .. Among the bacteria belonging to the genus Paracoccus, Paracoccus carotinifaciens, Paracoccus marcusii, Paracoccus haeundaensis and Paracoccus zeaxanthinifaciens are preferably used, and Paracoccus carotinifaciens is particularly preferably used.
  • Faffia yeast is also known as a natural astaxanthin source.
  • the cis form ratio of astaxanthin produced by Faffia yeast was 3.6% as measured by the method disclosed herein.
  • a bacterium having a DNA base sequence corresponding to 16S ribosomal RNA having high homology (identity) with the base sequence of the above E-396 strain is preferably used.
  • the term "having high homology" as used herein means that the base sequence of the DNA corresponding to the 16S ribosomal RNA of the E-396 strain and the corresponding base sequence of the target bacterium are preferably 95% or more, more preferably 96. % Or more, more preferably 97% or more, particularly preferably 98% or more, and most preferably 99% or more homology.
  • Bacteria having high homology with the base sequence of E-396 strain are used.
  • the base sequence of the DNA corresponding to the 16S ribosomal RNA of the E-396 strain is described in, for example, the sequence listing of International Publication No. 2010/0444469.
  • the base sequence of DNA corresponding to 16S ribosomal RNA means a base sequence in which U (uracil) in the base sequence of 16S ribosomal RNA is replaced with T (thymine).
  • Paracoccus carotinifaciens E-396 strain 16S ribosomal RNA base sequence and other xanthophilus-producing bacteria Paracoccus marcusii DSM 11574 strain, Paracoccus genus N-81106 strain, Paracoccus haeundaensis BC 74171 strain, Paracoccus genus bacterium A-581-1
  • the homology with the 16S ribosomal RNA base sequences of the strain, Paracoccus zeaxanthinifaciens ATCC 21588 strain, and Paracoccus sp. PC-1 strain was 99.7%, 99.7%, and 99. 6%, 99.4%, 95.7%, and 95.4% show that these are taxonomically closely related strains. Therefore, it can be said that these strains form one group as xanthophyll-producing bacteria. Therefore, these strains are preferably used in the present invention and can efficiently produce xanthophylls.
  • a mutant strain having improved xanthophyll productivity can also be used.
  • a known strain such as a strain having a high astaxanthin-producing ability (Japanese Patent Laid-Open No. 2001-95500) can be used.
  • a mutant strain having improved xanthophyll productivity can be obtained by a person skilled in the art by mutation treatment and screening based on a known technique.
  • the method for mutagenesis is not particularly limited as long as it induces mutation.
  • mutant agents such as N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine (NTG) and ethylmethane sulfonate (EMS), physical methods such as UV and X-ray irradiation, gene recombination and A biological method such as transposon can be used.
  • NTG N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine
  • EMS ethylmethane sulfonate
  • physical methods such as UV and X-ray irradiation
  • gene recombination gene recombination
  • a biological method such as transposon
  • the microorganism to be mutated is not particularly limited, but is preferably a xanthophyll-producing bacterium.
  • the mutant strain may be generated by a naturally occurring mutation.
  • xanthophyll-producing bacteria are cultured according to the method of JP-A-2010-172293 to prepare bacterial cells (cultures).
  • the xanthophyll-producing medium used for culturing the bacteria may be any medium as long as the xanthophyll-producing bacteria grow and produce xanthophylls, but a carbon source, a nitrogen source, inorganic salts and, if necessary, vitamins. A medium containing such substances is preferably used.
  • carbon sources include sugars such as glucose, shoe cloth, lactose, fructose, trehalose, mannose, mannitol and maltose, and organic acids such as acetic acid, fumaric acid, citric acid, propionic acid, malic acid, malonic acid and pyruvate. , Ethanol, propanol, butanol, pentanol, hexanol, isobutanol, glycenol and other alcohols, soybean oil, nuka oil, olive oil, corn oil, sesame oil and linseed oil and other fats and oils. From the above, one type or two or more types can be appropriately selected and used. Of these, glucose or sucrose is preferably used.
  • the amount to be added to the medium before culturing varies depending on the type of carbon source and may be appropriately adjusted, but is usually 1 to 100 g, preferably 2 to 50 g per 1 L of the medium. Further, it is preferable that the carbon source is not only added to the starting medium but also sequentially or continuously additionally supplied during the culture.
  • the inorganic nitrogen source examples include ammonium salts such as ammonium nitrate, ammonium sulfate, ammonium chloride and ammonium phosphate, nitrates such as potassium nitrate, ammonia and urea, and one or more of these are appropriately selected. Can be used.
  • the amount to be added varies depending on the type of nitrogen source and may be appropriately adjusted, but is usually 0.1 g to 20 g, preferably 0.2 to 10 g per 1 L of the medium.
  • organic nitrogen source examples include corn steep liquor (including filtered products), pharmacomedia, soybean meal, soybean flour, peanut meal, distillers solvel, dried yeast, monosodium glutamate, and the like.
  • concentration to be added varies depending on the type of nitrogen source and may be appropriately adjusted, but is usually 0 to 80 g / L, preferably 0 to 30 g / L.
  • Inorganic and organic nitrogen sources are usually added to the starting medium, but may be added sequentially or continuously.
  • inorganic salts examples include phosphates such as potassium dihydrogen phosphate, dipotassium hydrogen phosphate and disodium hydrogen phosphate, magnesium salts such as magnesium sulfate and magnesium chloride, and iron salts such as iron sulfate and iron chloride.
  • phosphates such as potassium dihydrogen phosphate, dipotassium hydrogen phosphate and disodium hydrogen phosphate
  • magnesium salts such as magnesium sulfate and magnesium chloride
  • iron salts such as iron sulfate and iron chloride.
  • Calcium salts such as calcium chloride and calcium carbonate, sodium salts such as sodium carbonate and sodium chloride, manganese salts such as manganese sulfate, cobalt salts such as cobalt chloride, copper salts such as copper sulfate, zinc salts such as zinc sulfate, molybdenum acid
  • molybdenum salts such as sodium, nickel salts such as nickel sulfate, selenium salts such as sodium selenate, boric acid and potassium iodide, etc., and one or more of these should be appropriately selected and used. Can be done.
  • the amount to be added varies depending on the type of the inorganic salt and may be appropriately adjusted, but is usually 0.0001 to 15 g per 1 L of the medium.
  • Inorganic salts are usually added to the starting medium, but may be added sequentially or continuously.
  • vitamins examples include cyanocobalamin, riboflavin, pantothenic acid, pyridoxine, thiamine, ascorbic acid, folic acid, niacin, p-aminobenzoic acid, biotin, inositol, choline, and the like, and one or two of these. More than a species can be appropriately selected and used.
  • the addition ratio varies depending on the type of vitamins and may be appropriately adjusted, but is usually 0.001 to 1000 mg, preferably 0.01 to 100 mg per 1 L of the medium. Vitamins are usually added to the starting medium, but may be added sequentially or continuously.
  • the xanthophyll production medium used in the present invention is used for culturing bacteria after being sterilized.
  • a person skilled in the art can appropriately carry out the sterilization treatment.
  • the medium in a suitable container can be heat sterilized in an autoclave.
  • it may be sterilized by filtration through a sterilization filter.
  • the pH of the medium is adjusted to, for example, pH 2 to 12, for example, pH 6 to 9.
  • the xanthophyll-producing bacterium is inoculated into the xanthophyll-producing medium prepared as described above and cultured under predetermined conditions. Inoculation is carried out by appropriately increasing the number of strains by seed culture using a test tube, flask, fermenter or the like, and adding the obtained culture to a medium for xanthophyll production.
  • the medium used for seed culture is not particularly limited as long as it is a medium in which xanthophyll-producing bacteria can grow well.
  • the culture vessel can be appropriately selected depending on the culture capacity, and examples thereof include test tubes, flasks, and fermenters.
  • the culture temperature is 15 to 80 ° C, preferably 20 to 35 ° C, more preferably 25 ° C to 32 ° C, usually 1 to 20 days, preferably 2 to 12 days, more preferably 3 to 9 days, aerobic. Incubate under the conditions. Examples of the aerobic condition include shaking culture, aeration and stirring culture, and the like, and it is preferable to control the dissolved oxygen concentration within a certain range.
  • the dissolved oxygen concentration can be controlled, for example, by changing the stirring rotation speed, the aeration rate, the internal pressure, and the like.
  • the dissolved oxygen concentration is preferably controlled to 0.3 to 10 ppm, more preferably 0.5 to 7 ppm, and even more preferably 1 to 5 ppm.
  • the cells may be dried with a drum dryer.
  • a drying method in addition to a drum dryer, spray drying, granulation type spray drying, freeze drying and the like can be used.
  • the concentrate containing xanthophyll and bacterial cells is separated from the culture obtained by culturing the xanthophyll-producing bacteria as described above by centrifugation, filtration or decantation.
  • the separation step can also be performed under acidic conditions (see JP-A-2010-172293).
  • culture means any of a culture supernatant, cultured mycelium, a precipitate concentrate obtained by culturing (described later), a dried mycelium, or a crushed product of the mycelium. Is.
  • the culture can be separated as it is, but it is also preferable to dilute the culture with water and then separate it in order to enhance the effect of removing unnecessary components. It is also possible to add water during operations such as centrifugation, filtration and decantation. It is also possible to perform heat sterilization to kill the cultured microorganisms after the culture is completed and before the culture is separated.
  • a method for separating based on sedimentation property or a method for separating based on particle size can be used as the method for separating bacterial cells.
  • centrifugation, filtration separation or decantation can be used. May be used alone or in combination of two or more. Further, the same type of separation may be repeated two or more times, such as performing centrifugation once and then subjecting only the supernatant to centrifugation again in order to further recover the xanthophyll remaining in the supernatant. Centrifugation, filtration separation or decantation can be appropriately carried out by those skilled in the art based on known methods.
  • the centrifuge used for centrifugation may be a continuous type or a batch type, but a continuous type is preferably used. Any type of centrifuge may be used.
  • the centrifugal acceleration may be any level as long as it is used for cell separation of general bacteria, but is preferably 500 to 100,000 ⁇ g, more preferably 1,000 to 50,000 ⁇ g.
  • the membrane filtration device used for filtration separation may be a static type or a cross-flow type, but a cross-flow type that easily prevents clogging is preferable.
  • the film material used include filter paper, filter cloth, chemical fiber, and ceramics. Further, diatomaceous earth or the like may be used as a filtration aid.
  • the shape of the membrane include a flat membrane, a hollow fiber membrane, and a tubular membrane.
  • the pore size of the membrane may be any as long as it is usually suitable for separating bacteria, but is preferably 0.001 ⁇ m to 100 ⁇ m, more preferably 0.01 to 10 ⁇ m, and further preferably 0.05 to 1 ⁇ m. Microfiltration membranes and ultrafiltration membranes are preferable, and microfiltration membranes are particularly preferably used.
  • Any container can be used for decantation, but for example, a normal cylindrical tank is used.
  • the time for allowing the culture to stand in decantation is not particularly limited, but is preferably 0.5 h to 48 h, and more preferably 1 h to 24 h.
  • the temperature of the culture to be separated is not particularly limited as long as it is a temperature that is usually carried out, but is preferably 0 ° C. to 90 ° C., more preferably 2 ° C. to 75 ° C., and further preferably 4 ° C. to 60 ° C.
  • Xanthophyll and bacterial cells are concentrated in the precipitate concentrate obtained from the culture by the above separation step, that is, centrifugation, filtration separation or decantation, or a combination thereof. It is also preferable to appropriately adjust the separation rate, separation strength and the like so that the precipitate concentrate has a viscosity and a water content suitable for the next step.
  • the recovery rate of xanthophyll in the concentrate in the separation step may change due to the effects of decomposition / deterioration of xanthophyll, adhesion to the inner surface of the device, leakage to the supernatant, etc., but is preferably 70 to 100%, more preferably. Is 80 to 100%, more preferably 90 to 100%.
  • the obtained precipitate concentrate is extracted and recovered without drying, and if necessary, it is purified ((3) and (4) described later), and this is subjected to a cis-type treatment to obtain an egg yolk tone improving agent.
  • dried cells containing xanthophyll can be obtained by drying the obtained precipitate concentrate.
  • the egg yolk tone improving agent can be produced by subjecting the obtained dried mycelium to a cis-type treatment.
  • an egg yolk tone improving agent can be produced by extracting xanthophyll from dried mycelium, purifying it as necessary ((3), (4) described later), and cis-forming it. ..
  • the flesh color improving agent or the oxidative stress improving agent can be produced in the same manner as the egg yolk tone improving agent.
  • the method for drying the precipitate concentrate is not particularly limited, and examples thereof include spray drying, fluid drying, spray granulation drying, spray granulation fluid drying, rotary drum drying, and freeze drying.
  • spray drying fluid drying, spray granulation drying, spray granulation fluid drying, rotary drum drying, and freeze drying.
  • precipitate concentrate, or dried cells chemical treatment using alkaline reagents or surfactants, biochemical treatment using lytic enzymes, lipid-degrading enzymes, proteolytic enzymes, etc.
  • one or more of the physical treatments such as ultrasonic waves, pulverization, and heating may be performed.
  • the solvent used for extraction and washing is not particularly limited, but lower alcohols such as methanol, ethanol and isopropanol, acetone, tetrahydrofuran, ethyl acetate, methyl ethyl ketone, methyl isobutyl ketone, dichloromethane, chloroform and dimethyl.
  • lower alcohols such as methanol, ethanol and isopropanol, acetone, tetrahydrofuran, ethyl acetate, methyl ethyl ketone, methyl isobutyl ketone, dichloromethane, chloroform and dimethyl.
  • Examples include formamide, dimethylsulfoxide, hexane and the like.
  • xanthophyll species for example, astaxanthin, adonixanthin, adonylbin, etc.
  • the extraction conditions such as the extraction solvent and the extraction temperature, and the washing conditions.
  • the extract thus obtained can be used as it is as a xanthophyll, and can be further purified and used.
  • the method for obtaining the xanthophile precipitate from the extract include a method of precipitating by using cooling, heating, concentration under reduced pressure, addition of a poor solvent, addition of various salts such as an acid / alkaline agent, etc. alone or in combination as appropriate. Be done.
  • the obtained xanthophyll precipitate may be suspended and stirred with a small amount of a solvent such as lower alcohols if necessary for washing.
  • the washing method is not particularly limited, and examples thereof include a method of filtering after suspension stirring, a method of passing a liquid over the precipitate, and the like as practically preferable methods.
  • the precipitate concentrate, dried mycelium, extract or purified product obtained as described above can be used alone as xanthophyll, or can be mixed and used in an arbitrary ratio.
  • the xanthophylls obtained as described above include one or more xanthophylls such as astaxanthin, adonylvin, and adonixanthin.
  • the xanthophyll contained in the egg yolk tone improving agent of the present invention or the poultry feed of the present invention is not particularly limited as described above, but those skilled in the art can use a chemical synthesis method or bacteria. It can be produced by a known method such as a method using a microorganism such as yeast.
  • xanthophylls derived from natural products such as microorganisms generally do not have a sufficient cis-type xanthophyll content (for example, 4% or less).
  • commercially available xanthophylls generally do not have a sufficient cis-type xanthophyll content.
  • the xanthophyll contained in the egg yolk tone improving agent of the present invention or the poultry feed of the present invention is obtained by subjecting a naturally occurring or commercially available xanthophyll to a treatment for adjusting the cis-type xanthophyll content (cis-type treatment). It may be the one that has been done. Further, the xanthophyll contained in the egg yolk tone improving agent of the present invention or the poultry feed of the present invention is obtained by subjecting a natural product-derived or commercially available xanthophyll to a treatment for adjusting the cis-type xanthophyll content (cis-type treatment). Xanthophyll may be added.
  • Panafard-AX PANAFERD-AX, ENEOS Co., Ltd.
  • Panafard-P PANAFERD-P, ENEOS Co., Ltd.
  • the precipitate concentrate, dried mycelium, or extracted or purified xanthophyll obtained in (2) to (4) is treated to adjust the cis-type xanthophyll content, and the xanthophyll in which the ratio of the cis-type xanthophyll is adjusted is obtained.
  • heat treatment can be exemplified as a simple method.
  • the treatment for adjusting the cis-type xanthophyll content is not limited to heat treatment, and may be a light irradiation treatment, a treatment using a predetermined catalyst that promotes the cis isomerization reaction of xanthophyll, or the like.
  • a separation method or the like utilizing the difference in solubility between the trans-type and cis-type xanthophyll can be exemplified.
  • the heat treatment is preferably performed in a dark place in a nitrogen atmosphere.
  • the temperature of the heat treatment is preferably 30 to 300 ° C, 40 to 280 ° C, or 50 to 260 ° C.
  • the heat treatment time is preferably 1 minute to 24 hours, 2 minutes to 12 hours, or 3 minutes to 10 hours.
  • the heat treatment can be performed using, for example, a water bath, an oil bath, an autoclave heating device, or the like. Further, the heat treatment may be carried out in a solvent such as ethyl acetate, ethanol, or acetone.
  • the heat treatment includes, for example, extraction treatment of the precipitated concentrate and dried mycelium obtained in (2) to (4).
  • the solvent for the extraction treatment ethyl acetate, ethanol, acetone or the like can be used.
  • the extraction temperature is preferably 30 to 300 ° C, 40 to 280 ° C, or 50 to 260 ° C.
  • the extraction time is preferably 30 minutes to 24 hours, 1 hour to 12 hours, or 2 hours to 10 hours.
  • the solvent may be removed with an evaporator or the like and suspended in vegetable oil such as soybean oil, rapeseed oil, or olive oil.
  • the cis-type astaxanthin can be produced, for example, by the following method.
  • the dried cells obtained in (2) were subjected to room temperature extraction using acetone, the extract was concentrated with an evaporator, and when the concentrate was separated into two layers, hexane-chloroform (1: 1) was mixed with the concentrate. After adding the liquid and mixing well, an organic solvent layer is obtained by a liquid separation operation. The organic solvent layer is concentrated to dryness with an evaporator. The concentrated dry matter is dissolved in chloroform, and astaxanthin is separated on a silica gel column.
  • an astaxanthin free form containing a large amount of trans form can be obtained as crystals. Then, the astaxanthin free form is dissolved in dichloromethane, heated at 80 ° C. for 3 hours, and then the solvent is removed by an evaporator. In addition, it is redissolved in ethanol, separated by a fielder, and the solvent is removed again by an evaporator. By such a treatment, astaxanthin containing a large amount of cis-type astaxanthin can be obtained.
  • cis-type treatment such as heat treatment as described above, 10 to 90% of xanthophyll, for example, 10 to 70% becomes cis-type.
  • Precipitated concentrates, dried cells, or extracted or purified xanthophylls thus prepared are also included in the present invention.
  • the xanthophyll content and the cis-type xanthophyll content can be measured by an HPLC (high performance liquid chromatography) method using a reverse phase column or a normal phase column. Quantification is based on the peak area of each xanthophyll isomer peak in the chromatogram.
  • the cis-type astaxanthin content when the total amount of astaxanthin is 100% can be calculated by the following formula.
  • the "total value of the peak areas of each cis isomer” is the total value of the peak areas of each cis-type astaxanthin.
  • the trans-type astaxanthin content (%) is obtained by subtracting the cis-type astaxanthin content from 100.
  • the cis-type xanthophyll content when the total amount of xanthophyll is 100% by mass can be calculated by the following formula.
  • the trans-xanthophyll content is determined by subtracting the cis-xanthophyll content from 100.
  • the trans-type content can be obtained by replacing "cis-type xanthophyll” with “trans-type xanthophyll” and "each cis isomer” with “all-trans isomer”.
  • the meat color improving agent of the present invention, the oxidative stress improving agent of the present invention, or the xanthophyll contained in the feed of the present invention can be produced in the same manner as the xanthophyll contained in the egg yolk tone improving agent of the present invention or the feed for poultry of the present invention. can.
  • the egg yolk tone improving agent of the present invention can be produced by cis-forming a composition containing xanthophyll. That is, the egg yolk tone improving agent of the present invention contains xanthophyll in which the content of cis-type xanthophyll is adjusted to 10 to 90%, for example, 10 to 70%.
  • the poultry feed of the present invention is a commonly used spawning poultry feed (basic feed) with a concentration of 1 to 50 ppm of xanthophyll adjusted to 10 to 90%, for example, 10 to 70% of cis-type xanthophyll. It can be manufactured by blending so as to become.
  • the basic feed is not particularly limited, and a feed usually used by those skilled in the art can be used as a feed for poultry.
  • a feed for poultry a mixed feed having various compositions is known, but in most cases, a feed mainly composed of corn is used. Table 2 shows an example of corn-based feed.
  • the flesh color improving agent of the present invention or the oxidative stress improving agent of the present invention contains xanthophyll in which the content of cis-type xanthophyll is adjusted to 10 to 90%, for example, 10 to 70%.
  • the feed of the present invention is a commonly used poultry feed or seafood feed (basic feed) with a concentration of 1 to 50 ppm of xanthophyll adjusted to 10 to 90%, for example, 10 to 70% of cis-type xanthophyll. It can be manufactured by blending so as to be.
  • the egg yolk tone improving agent and poultry feed of the present invention, or the meat color improving agent or oxidative stress improving agent and feed of the present invention contain xanthophyll, and the whole xanthophyll contained therein, that is, cis-type xanthophyll and trans-type xanthophyll.
  • the total weight is 100%, 10 to 90% of the weight, for example, 10 to 70% is cis-type xanthophyll.
  • the egg yolk tone improving agent or poultry feed of the present invention, or the meat color improving agent or oxidative stress improving agent or feed of the present invention contains 10 to 60%, 10 to 50%, 10 to 40%, 10 to 30 of xanthophyll.
  • the egg yolk tone improving agent or poultry feed of the present invention, or the meat color improving agent or oxidative stress improving agent or feed of the present invention contains 10 to 80%, 20 to 90%, 20 to 80%, 30 of xanthophyll.
  • ⁇ 90% is cis-type xanthophyll.
  • the egg yolk tone improving agent or poultry feed of the present invention, or the meat color improving agent or oxidative stress improving agent or feed of the present invention contains 10 to 80%, 15 to 75%, 18 to 70% of xanthophyll, or 18 to 70%. More preferably, 20-60% is cis-type xanthophyll.
  • the xanthophyll contained in the egg yolk tone improving agent and poultry feed of the present invention, or the meat color improving agent or oxidative stress improving agent or feed of the present invention preferably contains one or more selected from astaxanthin, adonylvin and adonixanthin. , More preferably, it comprises one or more selected from astaxanthin and adonixanthin.
  • astaxanthin, adonylbin or adonxanthin is contained in the egg yolk tone improving agent and poultry feed of the present invention, or the meat color improving agent or oxidative stress improving agent or feed of the present invention, 10 to 90% thereof, for example, 10 to 10 to each. 70% are present as cis type.
  • 10 to 90%, for example, 10 to 70% of astaxanthin contained in the egg yolk tone improving agent and poultry feed of the present invention, or the meat color improving agent or oxidative stress improving agent or feed of the present invention exists as a cis type. do.
  • Eggs produced using the poultry feed of the present invention having a cis-type xanthophyll content within the above range have a high xanthophyll content in egg yolk, particularly a trans-type xanthophyll content.
  • the meat produced by using the feed of the present invention having a cis-type xanthophyll content within the above range has a high xanthophyll content, particularly a trans-type xanthophyll content.
  • the amount of xanthophile contained in the poultry feed of the present invention or 1 kg of the feed of the present invention is not particularly limited, but may be 0.1 to 500 mg / kg, and may be 0.5 to 100 mg / kg. It is more preferable to use 1 mg to 50 mg / kg (1 ppm to 50 ppm).
  • the amount of xanthophile contained in the poultry feed of the present invention or 1 kg of the feed of the present invention is 1 to 40 mg / kg, 1 to 30 mg / kg, 1 to 20 mg / kg, 1 to 10 mg / kg, and 2 to 40 mg.
  • the poultry feed of the present invention or the feed of the present invention contains xanthophyll of 50 ppm or less.
  • the poultry egg of the present invention and the method for producing the poultry egg of the present invention The meat of the present invention and the method for producing the meat of the present invention Eggs produced from poultry fed with the poultry feed of the present invention are included in the present invention. .. As used herein, the poultry eggs of the present invention are produced from poultry fed with the poultry feed of the present invention.
  • the poultry egg of the present invention contains xanthophyll in egg yolk, and 50 to 95% is trans-type (that is, 5 to 50% is cis-type) xanthophyll when the total content of xanthophyll is 100% by mass.
  • the color fan value of egg yolk is 13-18.
  • trans-xanthophyll is extremely high in the yolk or plasma of eggs produced from poultry fed with the poultry feed of the present invention.
  • astaxanthin rich in cis form was orally administered in the examples, most of astaxanthin in plasma was present as trans form. Therefore, cis astaxanthin was absorbed from the small intestine and then became trans form in the intracellular cells and liver. It is thought to be isomerized. And the trans type is thought to affect the yolk tone.
  • cis-type astaxanthin had a higher absorption rate into plasma and poultry eggs when orally administered or fed than trans-type astaxanthin. From these facts, it is considered that the egg of the present invention has an improved color tone.
  • Meat produced from poultry or fish and shellfish fed with the feed of the present invention is included in the present invention.
  • the meat of the present invention is produced from poultry or seafood fed with the feed of the present invention or the poultry feed of the present invention.
  • the feed of the invention accumulates a high content of carotenoids in plasma, resulting in an increased redness or yellowness of the flesh color, resulting in a natural and appetizing flesh color. It is possible.
  • the meat of the present invention is characterized in that the meat is improved as compared with the control.
  • An improvement in color tone as compared to a control is defined as a control (poultry or seafood meat) not fed with the feed of the present invention or the meat color improving agent of the present invention, or the feed of the present invention or the meat color improving agent of the present invention.
  • a control not fed with the feed of the present invention or the meat color improving agent of the present invention, or the feed of the present invention or the meat color improving agent of the present invention.
  • Means that the redness or yellowness of the meat color is increased compared to the control (poultry or seafood meat) before feeding in.
  • the flesh color can be quantified in the L * a * b * color system by measuring using a color difference meter or a spectrophotometer.
  • L * indicates lightness
  • a * indicates redness
  • b * indicates yellowness.
  • the meat color of poultry or fish and shellfish produced by the present invention shows higher redness and yellowness compared to controls (eg, meat of poultry or fish and shellfish raised on normal feed), resulting in a more natural appearance. It has a nice flesh color.
  • feeding poultry or seafood with the poultry feed of the present invention or the feed of the present invention causes a high content of carotenoids to be accumulated in the body of the poultry or seafood.
  • an improvement in oxidative stress means a lower oxidative stress or a slower rate of application of oxidative stress as compared to a control.
  • the degree of oxidative stress can be measured, for example, by antioxidant activity.
  • feeding poultry or fish and shellfish with the poultry feed of the present invention or the feed of the present invention causes a high content of carotenoids to be accumulated in the body of the poultry or fish and shellfish, and thus meat. It is possible to suppress oxidative deterioration during storage and cooking.
  • the oxidative stress improving agent of the present invention can also be applied to humans. When applied to humans, it can be made into a health food or supplement by adding an additive or the like to the oxidative stress improving agent of the present invention.
  • the dosage and administration of health foods or supplements can be appropriately set by those skilled in the art.
  • the antioxidant activity increases as the carotenoid content, especially astaxanthin content, increases.
  • Antioxidant activity can be measured by the degree of lipid peroxidation or vitamin E content. The lower the degree of lipid peroxidation, the higher the antioxidant activity. Therefore, in the present invention, the degree of lipid peroxidation is reduced compared to the degree of lipid peroxidation in control poultry or seafood.
  • the higher the vitamin E content the higher the antioxidant activity. Therefore, the vitamin E content is increased compared to the vitamin E content in control poultry.
  • the degree of lipid peroxidation can be determined, for example, by measuring the malondianoledehide (MDA) content in the sample by a colorimetric method (Azada MAK, et al., Molecular and Integrative Physiology 155, 401-406). . 2010.). A person skilled in the art can appropriately measure the degree of lipid peroxidation based on a known method. The amount of Vitamin E can also be quantified by known methods (eg, the method of Faustman et al. (1989)).
  • vitamin E includes ⁇ -tocopherol, ⁇ -tocopherol, ⁇ -tocopherol and ⁇ -tocopherol and ⁇ -tocotrienol, ⁇ -tocotrienol, ⁇ -tocotrienol and ⁇ -tocotrienol, and the vitamin E content is It can also be determined by measuring the content of one or more of these.
  • the feeding period of the poultry feed of the present invention or the feed of the present invention is not particularly limited, but may be 4 days or more, more preferably 10 days or more, and preferably 21 days or more. More preferred. If the feeding period of the poultry feed of the present invention or the feed of the present invention is 4 days or more, a poultry egg having a high content of trans-type xanthophyll of xanthophyll contained in egg yolk (for example, 50 to 95% or more) can be obtained. Can be done. Further, if the feeding period of the poultry feed of the present invention is 4 days or more, a poultry egg having a high color fan value of egg yolk, for example, 13 to 18, can be obtained.
  • the xanthophyll content in the egg yolk gradually increased from 4 days to 21 days during the feeding period of the poultry feed of the present invention or the feed of the present invention. That is, if the feeding period of the poultry feed or feed is 4 days or more, 7 days or more, 14 days or more, preferably 21 days or more, poultry eggs or meat having a high xanthophyll content in the yolk can be obtained.
  • the poultry egg of the present invention is 50-95% trans-type when the total xanthophyll contained in the yolk is 100%.
  • the trans-type xanthophyll content (%) when the entire xanthophyll is 100% is also simply referred to as the trans-type xanthophyll content.
  • the cis-type xanthophyll content (%) when the entire xanthophyll is 100% is also simply referred to as the cis-type xanthophyll content.
  • the total content of astaxanthin, adonylbin and adonixanthin in the poultry egg of the present invention is preferably 3.0 ppm or more, more preferably 3.5 ppm or more. It is more preferably 5.0 ppm or more.
  • the poultry egg of the present invention contains xanthophyll in the yolk, and the trans-type xanthophyll content of the xanthophyll is 50 to 95%, preferably 60 to 95% or 65 to 95%.
  • the trans-astaxanthin content in the egg yolk is preferably 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79 or 80% or more.
  • the trans-adenylbin content in the egg yolk is preferably 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74 or 75% or more.
  • the trans-type adonixanthine content in the egg yolk is preferably 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94 or 95% or more.
  • the xanthophyll content in the yolk and the trans-type xanthophyll content in the yolk are, for example, the cis-type xanthophyll content of the xanthophyll contained in the feed fed to the poultry and the feeding period of the feed. It can be changed and adjusted by appropriately setting the breeding conditions for poultry and poultry. A person skilled in the art can obtain the poultry egg of the present invention by appropriately examining the feed, feeding conditions, breeding conditions, etc. within the scope of the present invention.
  • color fan (CF) value For egg yolks such as chicken eggs, measurement by color fan (CF) value is the most common method for evaluating egg yolks in this field.
  • CF color fan
  • the color fan value is also measured by automatic measurement with a device that electronically determines the color tone (for example, Egg Multitester EMT-7300 (JA Zenno Tamago Co., Ltd.)).
  • the color fan (CF) value means a value measured by an egg multi-tester EMT-7300 (JA Zenno Tamago Co., Ltd.) or the like. Color fan values range from 1 to 18.
  • the poultry egg of the present invention is characterized in that the color fan value of the egg yolk is 13 to 18.
  • the color fan value of the poultry egg of the present invention is preferably in the range of 13 to 17, 13 to 16, 13 to 15, 13 to 14.5, 13.5-14.5.
  • the yolk may also be measured by a spectrophotometer.
  • a spectrophotometer commercially available devices such as Minolta CR-200 and CM-700d can be used.
  • the color fan (CF) value and the measured value of the spectrophotometer do not match, for example, the a * value (red) of the yolk with a CF value of 10 is 13, the a * value of the yolk with a CF value of 12 is 15, and the CF value.
  • the a * value of 14 egg yolks is about 19. This is because the value may change depending on the feed component, the poultry breed, the measurement method of the color difference meter, etc., and a clear correspondence between the measured value by the spectrocolorimeter and the CF value has not yet been made. Therefore, it can be said that the CF value is the most commonly understood objective measurement value for those skilled in the art.
  • the poultry eggs of the present invention may exhibit a * values in the range of 15-21.
  • Lycopene is a type of carotenoid and is not contained in xanthophylls. In the examples, lycopene is used as one of the comparisons. Tomato oleoresin having a lycopene content of 15% by mass (Lyc-O-Mato® 15% manufactured by Lyco Red Co., Ltd.) was obtained (hereinafter referred to as "unadjusted oleoresin"). The lycopene contained in the unadjusted oleoresin had a cis-type lycopene content of 5.5% by mass (Comparative Example 4).
  • Unadjusted oleoresin was heat-treated at a predetermined temperature to obtain oleoresin (hereinafter referred to as "adjusted oleoresin") in which the cis-type lycopene content of lycopene was adjusted.
  • the heat treatment was carried out in a dark place in a nitrogen atmosphere for 1 hour.
  • By heat treatment at 130 ° C. adjusted oleoresin having a cis-lycopene content of 35.1% by mass was obtained (Comparative Example 3).
  • Example 5 adjusted xanthophylls (Examples 1 to 4) were prepared so that astaxanthin, adonylvin and adonixanthin were 8 ⁇ g / g, 1.4 ⁇ g / g and 1.2 to 1.3 ⁇ g / g, respectively. It was added to the feed shown in Table 2. Comparative Example 5 is a feed having the components shown in Table 2 (Comparative Example 2). That is, neither xanthophyll or oleoresin was added.
  • Table 3 shows the cis-type contents of astaxanthin, adonixanthin and lycopene contained in the feeds of Examples 5 to 8 and Comparative Examples 5 to 8.
  • the cis-type contents of adonylbin contained in the feeds of Examples 5, 6, 7 and 8 were 20.5%, 31.0%, 39.8% and 50.2%, respectively.
  • the extract is dissolved in 5 to 10 ml of ethyl acetate in the case of xanthophyll and in 5 to 10 ml of hexane in the case of lycopene, passed through a 0.2 ⁇ m PTFE filter (manufactured by Advantech Toyo Co., Ltd.), and a sample for HPLC is passed. Obtained. The obtained sample was subjected to normal phase HPLC analysis under the following conditions.
  • Equipment High-speed liquid chromatograph Prominence system (manufactured by Shimadzu Corporation) Column: Luna silica gel column (length: 150 mm x 1, inner diameter: 4.6 mm, particle size: 5 ⁇ m, manufactured by Phenomenex Co., Ltd.) Column temperature: 40 ° C Mobile phase: Hexane: Ethyl acetate: Acetone (75: 23: 2, v / v / v) Flow velocity: 1.2 mL / min Detection wavelength: 470 nm
  • Equipment High-speed liquid chromatograph Prominence system (manufactured by Shimadzu Corporation) Column: Nucleosil 300-5 (length: 250 mm x 3, inner diameter: 4.6 mm, particle size: 5 ⁇ m, manufactured by GL Sciences Co., Ltd.) Column temperature: 35 ° C Mobile phase: Hexane (containing 0.075% DIPEA (N, N-diisopropylethylamine)) Flow velocity: 1.0 mL / min Detection wavelength: 460 nm
  • the xanthophyll content and cis-type xanthophyll content were calculated based on the peak area in the chromatogram obtained by normal phase HPLC analysis.
  • the content of lycopene and the content of cis-type lycopene were also calculated and analyzed in the same manner as xanthophyll.
  • Table 4 shows the contents of astaxanthin, adonylvin, adonixanthin and lycopene in egg yolk measured in "5" above.
  • the xanthophyll content in the yolk increased from the 4th day to the 21st day of feeding.
  • the xanthophyll content of egg yolk in the eggs of Examples 9 to 12 (total content of astaxanthin, adonylvin and adonixanthin), although it is about 1/20 of the lycopene content (200 ⁇ g / g). Was 4.01 to 10.05 ⁇ g / g. It was shown that xanthophyll is more likely to be contained in egg yolk than lycopene.
  • Examples 9 to 12 had a trans-type xanthophyll content of 66.7% to 92.4%. On the other hand, in Comparative Examples 7 and 8, the trans-type lycopene content was 16% and 23%. It was shown that cis-type xanthophyll and cis-type lycopene behave differently in the body of spawning chickens, and the ratio of cis-trans isomers contained in chicken eggs is different.
  • the color fan value of the egg yolk was 1.4 to 2.1 higher than that of the chicken egg of Comparative Example 10 produced by feeding the astaxanthin content (4.5%).
  • the feeds of Examples 5 to 8 and Comparative Example 6 had almost the same xanthophyll content, and the cis-type content in them was higher in Examples 5 to 8 than in Comparative Example 6 (Table 3). Considering that, when the content of cis-type xanthophyll contained in the feed is high, the color fan value or a value of the egg yolk in the egg produced from the poultry fed the feed becomes high, and the egg yolk tone is improved. Was shown.
  • Examples 9 to 12 containing xanthophyll were more than the eggs of Comparative Examples 11 and 12 produced from the spawning chickens fed the feeds of Comparative Examples 7 and 8 containing 200 ⁇ g / g of lycopene.
  • the color fan value was high. It was shown that xanthophyll has a higher effect of improving egg yolk tone than lycopene.
  • Astaxanthin isomer absorption evaluation test ⁇ Experimental method> 5 mg of astaxanthin ((all-E) -AST) containing 98.8% trans-type astaxanthin and 1.2% of cis-type astaxanthin, or 17.6% of trans-type astaxanthin to chickens. 5 mg of astaxanthin ((Z) -AST) containing 82.4% of cis-type astaxanthin was orally administered, and the plasma astaxanthin concentration 6 hours after the administration was analyzed.
  • the resulting (all-E) -AST or (Z) -AST was suspended in soybean oil to a concentration of 10 mg / mL and 0.5 mL of suspension was applied to chickens (Lohmann Julia, 5 each). It was administered orally.
  • 0.5 mL of soybean oil was orally administered to chickens (Lohmann Julia, 5 chickens). Blood was collected from chickens 6 hours after administration to obtain a blood sample.
  • 0.2 mL of heparin was added to a blood sample (3-4 mL), centrifuged at 3000 rpm for 5 minutes, and plasma (supernatant) was used for measuring the astaxanthin content.
  • the astaxanthin content in plasma was measured by the same method as the conditions of the xanthophyll normal phase HPLC analysis described in "5" above.
  • the plasma trans-astaxanthin concentration was 1.25 ⁇ g / g (1.86 ⁇ g / g ⁇ 67%) in the (Z) -AST administration group and 0.31 ⁇ g in the (all-E) -AST administration group. It was / g (0.33 ⁇ g / g ⁇ 94%).
  • cis-type astaxanthin is more easily absorbed into plasma when orally administered than trans-type astaxanthin.
  • the cis type content in plasma was 33.0%. That is, about 70% of astaxanthin in plasma was present as a trans form, suggesting that cis astaxanthin is isomerized to a trans form in intestinal cells and in the liver after being absorbed from the small intestine.
  • oral cis-type astaxanthin has a high blood transfer rate and is abundantly present as more stable trans-type astaxanthin in blood, and thus improvement in tissue accumulation of astaxanthin is expected.
  • cis-type astaxanthin can improve the color of meat.
  • astaxanthin has an antioxidant effect, cis-type astaxanthin is used to maintain the color tone of meat or suppress browning, reduce oxidative deterioration during storage and cooking of meat, and reduce oxidative stress in poultry. The effect can be expected.
  • the present invention provides an egg yolk tone improving agent containing xanthophyll, characterized in that 10 to 90%, for example, 10 to 70% of the xanthophyll is cis type. Further, in another aspect of the present invention, a poultry feed containing the egg yolk tone improving agent is provided. When a poultry is fed with a feed containing the egg yolk tone improving agent of the present invention in a general feed for spawning poultry or the poultry feed, an egg having an improved egg yolk tone can be produced. Therefore, the present invention can provide a poultry egg having a good yolk and a method for producing the same.
  • a flesh color improving agent or an oxidative stress improving agent, or the flesh color which comprises xanthophyll and is characterized in that 10 to 90%, for example, 10 to 70% of the xanthophyll is cis type.
  • a feed containing an ameliorating agent or an oxidative stress ameliorating agent is provided.
  • poultry or fish and shellfish are fed with a feed containing the meat color improving agent of the present invention in a general feed of poultry or fish and shellfish, meat with improved color tone can be produced.
  • poultry or seafood is fed with a feed containing the oxidative stress improving agent of the present invention in a general feed for poultry or seafood, the oxidative stress of poultry or seafood can be reduced. It is expected to suppress oxidative deterioration during cooking and maintain health.

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Abstract

本発明は、卵黄色の濃い家禽卵を提供し得る家禽用飼料の提供を目的の一つとするものである。本発明は、キサントフィルを所定の濃度で含み、前記キサントフィルの一定量がシス型であることを特徴とする家禽用飼料に関する。

Description

シス型キサントフィル組成物および使用方法
　本発明は、家禽卵の黄身の色味を向上する家禽用飼料に関し、具体的には、シス型キサントフィルを含む家禽用飼料に関する。
　ニワトリ等の家禽類の卵は栄養価が高く、それ自体が食品として、また種々の菓子および食品の材料として広く利用されている。
　卵の商品価値を決める重要な要素の一つは卵黄色である。卵黄色は飼料に含まれるカロテノイド等の色素、特にトウモロコシに含まれる色素であるルテインおよびゼアキサンチンが産卵鶏に吸収され、卵へと移行し、蓄積するために黄色味を帯びるようになったものであることは良く知られている。
　近年では、卵黄色がより濃い、あるいはより赤身を増した卵が消費者に好まれるようになってきている。産卵鶏に給餌する配合飼料には一般的にトウモロコシが５０～６０％程度配合されているが、トウモロコシ等の穀類だけでは消費者の嗜好に合う色にならないため、現在、ほとんどの飼料にカロテノイドを主成分とする色揚げ剤が添加されている。色揚げ剤としては、例えばパプリカ由来の色素やファフィア酵母、パラコッカス菌体末のアスタキサンチンが利用されている。
　特許文献１には、特定の体積粒子径に粉砕したカロテノイド含有乾燥菌体粉末を飼料として用いることで、卵黄の色味が強化されることが開示されている。しかしながら、特許文献１では、１００℃を超える温度の伝熱部と接触させることで乾燥菌体粉末を得ているところ、カロテノイドは熱により分解されることが知られているため、１００℃を超える伝熱部との接触は好ましくない。また、特許文献１には、実際にどの程度卵黄の色味が向上されたか開示されていない。特許文献２には、トウモロコシおよびアスタキサンチンを所定量含有する飼料を給餌することで、消費者に好まれる卵黄色を呈する卵を得る方法が開示されている。
特開２０１６－１０３８３ 国際公開第２０１６／１９４７８９号パンフレット
　しかしながら、消費者に好まれる卵黄色の濃い家禽卵およびそのような卵を生産するための家禽用飼料の提供が依然として望まれている。
　シス型キサントフィルによる家禽類の卵の色揚げ効果については知られていなかった。
　上記課題に鑑み鋭意研究した結果、本発明者は、シス型キサントフィルに富む飼料で家禽を給餌すると、キサントフィルの家禽卵および血漿への吸収率が高まり、卵黄色調の高い卵および食肉が得られることを見出した。すなわち、本発明は以下のとおりである。
［１］
　キサントフィルを含み、前記キサントフィルの１０～９０％がシス型であることを特徴とする、卵黄色調改善剤。
［２］
　前記キサントフィルの１０～７０％がシス型であることを特徴とする、［１］に記載の卵黄色調改善剤。
［３］
　キサントフィルの濃度が１～５０ｐｐｍとなるように［１］または［２］に記載の卵黄色調改善剤を含み、前記キサントフィルの１０～９０％がシス型であることを特徴とする、家禽用飼料。
［４］
　キサントフィルを１～５０ｐｐｍの濃度で含み、前記キサントフィルの１０～９０％がシス型であることを特徴とする、家禽用飼料。
［５］
　前記キサントフィルの１０～７０％がシス型であることを特徴とする、［３］または［４］に記載の家禽卵飼料。
［６］
　キサントフィルが卵黄に含有され、前記キサントフィルの５０～９５％がトランス型で存在し、卵黄のカラーファン値が１３～１８の卵黄色を呈する、家禽卵。
［７］
　前記キサントフィルがアスタキサンチン、アドニルビン、アドニキサンチンの少なくともいずれか１種であることを特徴とする、［１］または［２］に記載の卵黄色調改善剤。
［８］
　前記キサントフィルがアスタキサンチン、アドニルビン、アドニキサンチンの少なくともいずれか１種であることを特徴とする、［３］～［５］のいずれか１項に記載の家禽用飼料。
［９］
　前記キサントフィルがアスタキサンチン、アドニルビン、アドニキサンチンの少なくともいずれか１種であることを特徴とする、［６］に記載の家禽卵。
［１０］
　家禽が、鶏、ガチョウ、アヒル、またはウズラである、［３］～［５］および［３］のいずれか１項に記載の家禽用飼料または［６］もしくは［９］に記載の家禽卵。
［１１］キサントフィルを含み、前記キサントフィルの１０～９０％がシス型であることを特徴とする、肉色改善剤または酸化ストレス改善剤。
［１２］前記キサントフィルがアスタキサンチン、アドニルビン、アドニキサンチンの少なくともいずれか１種であることを特徴とする、［１１］に記載の剤。
　本発明により、キサントフィルを含み、前記キサントフィルの１０～９０％、例えば１０～７０％がシス型であることを特徴とする、卵黄色調改善剤が提供される。また、本発明の別の態様において、前記卵黄色調改善剤を含む、家禽用飼料が提供される。
　本発明の卵黄色調改善剤を産卵家禽用の一般飼料に含有させた飼料または前記家禽用飼料で家禽を給餌すると、卵黄色調が改善された卵を生産することができる。したがって、本発明は、良好な卵黄色を有する家禽卵およびその生産方法を提供することができる。
　また、本発明の別の態様において、キサントフィルを含み、前記キサントフィルの１０～９０％、例えば１０～７０％がシス型であることを特徴とする、肉色改善剤もしくは酸化ストレス改善剤、または前記肉色改善剤もしくは酸化ストレス改善剤を含む飼料が提供される。
　本発明の肉色改善剤を家禽または魚介類の一般飼料に含有させた飼料で家禽または魚介類を給餌すると、色調が改善された食肉を生産することができる。
　本発明の酸化ストレス改善剤を家禽または魚介類用の一般飼料に含有させた飼料で家禽または魚介類を給餌すると、家禽または魚介類の酸化ストレスが軽減され得るので、家禽または魚介類の保管時や調理時の酸化劣化の抑制や健康維持効果が期待される。
図１は、投与6時間後の血漿中アスタキサンチン濃度（左）およびシス型比率（右）を示す。
　本発明は、所定量のシス型キサントフィルを含む卵黄色調改善剤および当該卵黄色調改善剤を含む家禽用飼料に関する。前記家禽用飼料は、所定量のシス型キサントフィルを含むことにより、それを給餌された家禽においてキサントフィルの家禽卵への吸収率が高まり、消費者に好まれる卵黄色を呈する卵が提供される。したがって、本発明は、当該家禽用飼料で給餌された家禽から生産される家禽卵および当該家禽卵の生産方法も含む。また、家禽体内に取り込まれたシス型キサントフィルは、卵黄中において大部分がトランス型キサントフィルとして蓄積し、卵黄の色味を効率良く改善すると推察される。
　また、本発明は、所定量のシス型キサントフィルを含む肉色改善剤または酸化ストレス改善剤、および当該肉色改善剤または酸化ストレス改善剤を含む飼料に関する。前記飼料は、所定量のシス型キサントフィルを含むことにより、それを給餌された家禽または魚介類においてキサントフィルの血漿中または肉への吸収率が高まり、色調の改善された食肉が提供される。したがって、本発明は、当該飼料で給餌された家禽または魚介類から生産される食肉の生産方法も含む。また、キサントフィル、特にアスタキサンチンは抗酸化作用を有することから、家禽または魚介類の酸化ストレスが軽減され得るため、家禽または魚介類の保管時や調理時の酸化劣化が抑制され、あるいは健康維持効果が期待される。
　本明細書において、「家禽」または「家禽類」は、特に限定されるものではないが、例えば鶏、鶉、七面鳥、ホロホロ鳥、鳩、アヒル、ガチョウ、ダチョウが例示される。本明細書において、「卵」または「家禽卵」は、上記家禽または家禽類の卵をいう。特に日本を含む多くの国では家禽卵の中で鶏卵の消費量または流通量が最も多いため、消費量または流通量の観点から、本発明は鶏または鶏卵において好適に実施することができる。
　本明細書において、「魚介」または「魚介類」は、特に限定されるものではないが、例えばクルマエビ、サクラマス、サケ等が例示される。
　本明細書において、数値範囲について「～」を用いた記載では、特に断りがない限り、下限値および上限値を含むものとする。例えば、「１０～２０」という記載では、下限値である「１０」、上限値である「２０」のいずれも含むものとする。すなわち、「１０～２０」は、「１０以上２０以下」と同じ意味である。
　本明細書において、「％」および「ｐｐｍ」の値は、重量比を意味するものとする。本明細書において、「１ｍｇ／ｋｇ」は「１ｐｐｍ」と同義である。
　本明細書において、卵黄色調の改善とは、対照と比較して卵黄色が濃いことをいう。卵黄色はカラーファン値またはａ＊値で測定され、値が大きいほど卵黄色が濃いことを意味する。対照とは、本発明の卵黄色調改善剤または本発明の家禽用飼料を給餌されていない家禽または給餌前の家禽からの家禽卵における卵黄色をいう。
１．卵黄色調改善剤および家禽用飼料：肉色改善剤または酸化ストレス改善剤および肉色改善剤または酸化ストレス改善剤を含む飼料（シス型キサントフィル富化飼料）
　本発明は、キサントフィルを含み、前記キサントフィルの１０～９０％、例えば１０～７０％がシス型であることを特徴とする卵黄色調改善剤（以下、「本発明の卵黄色調改善剤」ともいう）を提供する。また、キサントフィルを１～５０ｐｐｍの濃度で含み、前記キサントフィルの１０～９０％、例えば１０～７０％がシス型であることを特徴とする、家禽用飼料（以下、「本発明の家禽用飼料」ともいう）を提供する。本発明の家禽用飼料には、キサントフィルの濃度が１～５０ｐｐｍとなるように本発明の卵黄色調改善剤を含む飼料も含まれる。
　本発明の家禽用飼料で家禽類を給餌することにより、卵黄色の濃い家禽卵が提供される。
　本発明は、キサントフィルを含み、前記キサントフィルの１０～９０％、例えば１０～７０％がシス型であることを特徴とする、肉色改善剤（以下、「本発明の肉色改善剤」ともいう）または酸化ストレス改善剤（以下、「本発明の酸化ストレス改善剤」ともいう）を提供する。
　また、キサントフィルを１～５０ｐｐｍの濃度で含み、前記キサントフィルの１０～９０％、例えば１０～７０％がシス型であることを特徴とする飼料（以下、「本発明の飼料」ともいう）を提供する。本発明の飼料には、キサントフィルの濃度が１～５０ｐｐｍとなるように本発明の肉色改善剤または本発明の酸化ストレス改善剤を含む飼料も含まれる。
　本発明の飼料で家禽類または魚介類を給餌することにより、色調の改善された食肉が提供される。または、本発明の飼料で家禽類または魚介類を給餌することにより、家禽類または魚介類の酸化ストレスが軽減され得るので、家禽類または魚介類の保管時や調理時の酸化劣化が抑制され、あるいは健康維持効果が期待される。
　本明細書において、「キサントフィル」は、アスタキサンチン、アドニルビン、アドニキサンチン、ゼアキサンチン、α-クリプトキサンチン、β－クリプトキサンチン、ルテイン、カンタキサンチン、アステロイデノン、３－ヒドロキシエキネノン、β－アポ－８’－カロテナール、フコキサンチン、ラクツカキサンチン、ツナキサンチン、カプサンチン、カプソルビン、ビオラキサンチン、ネオキサンチン、シフォナキサンチン、アンテラキサンチン、シトラナキサンチン、フコキサンチノール、アマロウシアキサンチンＡ、ハロシンチアキサンチン、ジアトキサンチン、ペリジニン、スピリロキサンチン、ルビキサンチン、ロドキサンチン、アロキサンチン等が挙げられる。本発明において、好ましいキサントフィルは、アスタキサンチン、アドニルビンまたはアドニキサンチンであり、より好ましいキサントフィルは、アスタキサンチンまたはアドニキサンチンであり、特に好ましいキサントフィルはアスタキサンチンである。本発明の卵黄色調改善剤および家禽用飼料は、キサントフィルの中から1種または複数種を適宜組み合わせて含み得る。本発明の肉色改善剤または酸化ストレス改善剤および本発明の飼料は、キサントフィルの中から1種または複数種を適宜組み合わせて含み得る。組合せは、例えば、アスタキサンチン、アドニルビンおよびアドニキサンチンを含む組み合わせであり、好ましくは、アスタキサンチンおよびアドニキサンチンを含む組み合わせである。
　本明細書において、キサントフィルは、薬学的に許容される塩の形態であってもよい。
　キサントフィルは分子中央部分の共役二重結合のシス体、トランス体による異性体が存在する。本明細書において、分子中の共役二重結合の１つまたは２つ以上がシス型である異性体を「シス体」または「シス型」キサントフィルといい、分子中の共役二重結合のすべてがトランス型である異性体を「トランス体」、「トランス型」または「オールトランス型」キサントフィルという。単に「キサントフィル」という場合には、シス型キサントフィルとトランス型キサントフィルの双方を含むものとする。シス、トランス異性体の定義は、アスタキサンチン、アドニルビン、アドニキサンチン等の各キサントフィルについても同様にあてはまる。
　例えばアスタキサンチンの場合、９－シス体、１３－シス体、１５－シス体、ジシス体またはそれらの組み合わせがシス型アスタキサンチンに含まれる。シス型アドニルビンには、９－シス体、１３－シス体、１５－シス体、ジシス体またはそれらの組み合わせが含まれる。また、シス型アドニキサンチンには、９－シス体、１３－シス体、１５－シス体、ジシス体またはそれらの組み合わせが含まれる。
　本発明において、キサントフィルは、当業者であれば化学合成法または細菌や酵母等の微生物を用いた方法等の公知の方法で製造することができる。例えば、化学合成を行う場合としては、Pure & Appl. Chem., Vol 51 pp535-564（1979）等に記載の方法で製造することができる。また、細菌を用いる場合は、特開２０１０－１７２２９３号、特開２００５－０８７０９７号、国際公開２０１０／０８７４００号パンフレット、国際公開２０１０／０４４４６９号パンフレット、特開２００１－３５２９９５号パンフレット等に記載の方法で製造することができる。さらに、酵母を用いる場合は、特開平５－７６３４７号、特開平６－３１９５３１号、特開平８－２１４８７０号等に記載の方法で製造することができる。
　本発明に用いる細菌としては、キサントフィルを産生する細菌であれば何ら限定されないが、好ましくはParacoccus属、Sp hingomonas属、Brevundimonas属またはErythrobacter属に属する細菌が用いられ、中でもParacoccus属に属する細菌が好ましい。Paracoccus属に属する細菌の中では、Paracoccus carotinifaciens、Paracoccus marcusii、Paracoccus haeundaensisおよびParacoccus zeaxanthinifaciensが好ましく用いられ、特にParacoccus carotinifaciensが好ましく用いられる。
　Paracoccus属に属する細菌の具体的な菌株の例として、Paracoccus carotinif aciensＥ－３９６株（ＦＥＲＭ ＢＰ－４２８３）およびParacoccus属細菌Ａ－５８１－１株（ＦＥＲＭ ＢＰ－４６７１）が挙げられ、これらの変異株も本発明に好ましく用いられる。
　なお、天然アスタキサンチン源としてファフィア酵母も知られている。ファフィア酵母の産生するアスタキサンチンのシス体比率について、本明細書で開示の方法で測定したところ３．６％であった。
　また、キサントフィル産生細菌として、好ましくは１６ＳリボソームＲＮＡに対応するＤＮＡの塩基配列が上記Ｅ－３９６株の塩基配列と高い相同性（同一性）を有する細菌が用いられる。ここで言う「高い相同性を有する」とは、Ｅ－３９６株の１６ＳリボソームＲＮＡに対応するＤＮＡの塩基配列と目的の細菌の対応する塩基配列とが、好ましくは９５％以上、より好ましくは９６％以上、さらに好ましくは９７％以上、特に好ましくは９８％以上、最も好ましくは９９％以上相同であること意味する。Ｅ－３９６株の塩基配列と高い相同性を有する細菌が用いられる。Ｅ－３９６株の１６ＳリボソームＲＮＡに対応するＤＮＡの塩基配列は、例えば国際公開第２０１０／０４４４６９号の配列表に記載されている。１６ＳリボソームＲＮＡに対応するＤＮＡの塩基配列とは、１６ＳリボソームＲＮＡの塩基配列中のＵ（ウラシル）をＴ（チミン）に置き換えた塩基配列を意味する。
　Paracoccus carotinifaciens Ｅ－３９６株の１６ＳリボソームＲＮＡの塩基配列と、他のキサントフィル産生細菌であるParacoccus marcusii DSM 11574株、Paracoccus属細菌N-81106株、Paracoccus haeundaensis BC 74171株、Paracoccus属細菌A-581-1株、Paracoccus zeaxanthinifaciens ATCC 21588株、およびParacoccus sp. PC-1株の１６ＳリボソームＲＮＡの塩基配列との相同性は、それぞれ９９．７％、９９．７％、９９． ６％、９９．４％、９５．７％、および９５．４％であり、これらは分類学上極めて近縁な菌株であることが分かる。従って、これらの菌株はキサントフィルを産生する細菌として一つのグループを形成しているといえる。よって、これらの菌株は本発明に好ましく用いられ、キサントフィルを効率的に産生することができる。
　本発明において、キサントフィルの生産性が改良された変異株も用いることができる。改良された変異株は、アスタキサンチン生産能の高い菌株（特開２００１－９５５００号）等の公知の菌株を用いることができる。また、キサントフィルの生産性が改良された変異株は、当業者であれば公知技術に基づき、変異処理とスクリーニングにより取得することができる。変異処理する方法は変異を誘発するものであれば特に限定されない。例えば、Ｎ－メチル－Ｎ'－ニトロ－Ｎ－ニトロソグアニジン（ＮＴＧ）およびエチルメタンスルホネート（ＥＭＳ）などの変異剤による化学的方法、紫外線照射およびＸ線照射などの物理的方法、遺伝子組換えおよびトランスポゾンなどによる生物学的方法などを用いることができる。変異処理される微生物は特に限定されないが、キサントフィル産生細菌であることが好ましい。また、変異株は、自然に起こる突然変異により生じたものでもよい。
　本発明において上記細菌を培養し、キサントフィルを製造する方法を以下に説明する。
（１）菌体の生産方法
　例えば、特開２０１０－１７２２９３の方法に従い、キサントフィル産生細菌を培養し、菌体（培養物）を作製する。
　本発明において、細菌の培養に用いるキサントフィル生産用培地は、キサントフィル産生細菌が生育し、キサントフィルを生産するものであるならば何れでもよいが、炭素源、窒素源、無機塩類および必要に応じてビタミン類などを含有する培地が好ましく用いられる。
　炭素源としては、例えば、グルコース、シュークロース、ラクトース、フルクトース、トレハロース、マンノース、マンニトールおよびマルトース等の糖類、酢酸、フマル酸、クエン酸、プロピオン酸、リンゴ酸、マロン酸およびピルビン酸等の有機酸、エタノール、プロパノール、ブタノール、ペンタノール、ヘキサノール、イソブタノールおよびグリセノール等のアルコール類、大豆油、ヌカ油、オリーブ油、トウモロコシ油、ゴマ油およびアマニ油等の油脂類などが挙げられ、これらの炭素源の中から、１種または２種以上を適宜選択して用いることができる。中でも好ましくはグルコースまたはシュークロースが用いられる。培養前の培地（始発培地）に添加する量は炭素源の種類により異なり適宜調整すれば足りるが、通常、培地１Ｌ当たり１～１００ｇ、好ましくは２～５０ｇである。また、炭素源は始発培地に添加するだけでなく、培養途中に逐次的または連続的に追加供給することも好ましく行われる。
　無機窒素源としては、硝酸アンモニウム、硫酸アンモニウム、塩化アンモニウム、リン酸アンモニウムなどのアンモニウム塩類、硝酸カリウムなどの硝酸塩類、アンモニアおよび尿素等が挙げられ、これらの中から、１種または２種以上を適宜選択して用いることができる。添加量は窒素源の種類により異なり適宜調整すれば足りるが、通常、培地１Ｌに対し０．１ｇ～２０ｇ、好ましくは０．２～１０ｇである。
　有機窒素源としては、例えば、コーンスティープリカー（ろ過処理物を含む）、ファーマメディア、大豆粕、大豆粉、ピーナッツミール、ディスティラーズソルブル、乾燥酵母、グルタミン酸ソーダなどが挙げられ、これらの中から、１種または２種以上を適宜選択して用いることができる。添加濃度は窒素源の種類により異なり適宜調整すれば足りるが、通常、０～８０ｇ／Ｌ、好ましくは０～３０ｇ／Ｌである。無機窒素源および有機窒素源は、通常始発培地に添加するが、逐次的または連続的に追加供給してもよい。
　無機塩類としては、例えば、リン酸二水素カリウム、リン酸水素二カリウム、リン酸水素二ナトリウムなどのリン酸塩類、硫酸マグネシウム、塩化マグネシウムなどのマグネシウム塩類、硫酸鉄、塩化鉄などの鉄塩類、塩化カルシウム、炭酸カルシウムなどのカルシウム塩類、炭酸ナトリウム、塩化ナトリウムなどのナトリウム塩類、硫酸マンガンなどのマンガン塩類、塩化コバルトなどのコバルト塩類、硫酸銅などの銅塩類、硫酸亜鉛などの亜鉛塩類、モリブデン酸ナトリウムなどのモリブデン塩類、硫酸ニッケルなどのニッケル塩類、セレン酸ナトリウムなどのセレン塩類、ホウ酸およびヨウ化カリウム等が挙げられ、これらの中から、１種または２種以上を適宜選択して用いることができる。添加量は無機塩の種類により異なり適宜調整すれば足りるが、通常、培地１Ｌに対し０．０００１～１５ｇである。無機塩類は通常始発培地に添加するが、逐次的または連続的に追加供給してもよい。
　ビタミン類としては、例えば、シアノコバラミン、リボフラビン、パントテン酸、ピリドキシン、チアミン、アスコルビン酸、葉酸、ナイアシン、ｐ－アミノ安息香酸、ビオチン、イノシトール、コリンなどが挙げられ、これらの中から、１種または２種以上を適宜選択して用いることができる。添加割合はビタミン類の種類により異なり適宜調整すれば足りるが、通常、培地１Ｌに対し０．００１～１０００ｍｇであり、好ましくは０．０１～１００ｍｇである。ビタミン類は通常始発培地に添加するが、逐次的または連続的に追加供給してもよい。
　本発明において用いるキサントフィル生産用培地は、殺菌処理した後、細菌の培養に用いられる。殺菌処理は、当業者であれば、適宜行うことができる。例えば、適切な容器中の培地をオートクレーブで加熱滅菌することができる。あるいは、滅菌フィルターによりろ過滅菌してもよい。
　培地のｐＨは、例えばｐＨ２～１２、例えばｐＨ６～９に調整する。
　本発明において、キサントフィル生産細菌は、上記のように調製されたキサントフィル生産用培地に植菌され、所定の条件で培養される。植菌は、試験管、フラスコあるいは発酵槽などを用いたシード培養により菌株を適宜増やし、得られた培養物をキサントフィル生産用培地に加えることで行う。シード培養に用いる培地は、キサントフィル生産菌が良好に増殖する培地であれば特に限定されない。
　培養は、適切な培養容器において行われる。培養容器は培養容量により適宜選択することができ、例えば、試験管、フラスコ、発酵槽などをあげることができる。培養温度は１５～８０℃、好ましくは２０～３５℃、より好ましくは２５℃～３２℃であり、通常１日～２０日間、好ましくは２～１２日間、より好ましくは３～９日間、好気条件で培養を行う。好気条件としては、例えば、振とう培養または通気撹拌培養等が挙げられ、溶存酸素濃度を一定の範囲に制御することが好ましい。溶存酸素濃度の制御は、例えば、攪拌回転数、通気量、内圧などを変化させることにより行うことができる。溶存酸素濃度は好ましくは０．３～１０ｐｐｍ、より好ましくは０．５～７ｐｐｍ、さらに好ましくは１～５ｐｐｍに制御する。
（２）菌体の取り出し
　培養が終了した菌体培養液等の培養物から、公知技術に基づき、培地成分のみを取り除く。その後、ドラムドライヤーにて菌体を乾燥させてもよい。乾燥方法としては、ドラムドライヤーの他、スプレードライ、造粒型スプレードライ、凍結乾燥等を用いることができる。
　上記のようにキサントフィル産生細菌を培養して得られる培養物から遠心分離、ろ過分離またはデカンテーションによりキサントフィルおよび菌体を含む濃縮物を分離する。分離工程は酸性条件下で行うこともできる（特開２０１０－１７２２９３号参照）。ここで、本明細書において、「培養物」は、培養上清、培養菌体、培養で得られた沈殿濃縮物（後述）、乾燥菌体または菌体の破砕物のいずれをも意味するものである。
　培養物は、そのまま分離操作を施すこともできるが、不要な成分の除去効果を高めるために水で培養物を希釈してから分離することも好ましく行われる。また、遠心分離、ろ過分離、デカンテーションなどの操作の最中に水を加えることも可能である。また、培養終了後、分離するまでの間に培養微生物を死滅させるために加熱殺菌を行うことも可能である。
　本発明において、菌体の分離の方法は、沈降性に基づいて分離する方法あるいは粒子の大きさに基づいて分離する方法を利用することが、具体的には、遠心分離、ろ過分離またはデカンテーションを、単独または２種以上を組み合わせてもよい。また、１回遠心分離を行い、上澄み液に残ったキサントフィルをさらに回収するためにもう一度上澄み液だけを遠心分離に供するというように同種の分離を２回以上繰り返してもよい。遠心分離、ろ過分離またはデカンテーションは当業者であれば、公知の手法に基づき適宜実施することができる。
　遠心分離に用いる遠心分離機は連続式でもバッチ式でもよいが、好ましくは連続式が用いられる。遠心分離機のタイプはいずれでもよい。遠心加速度は一般的な細菌の菌体分離に用いられるレベルならばいずれでもよいが、好ましくは５００～１００，０００×ｇ、より好ましくは１，０００～５０，０００×ｇである。
　ろ過分離に用いる膜ろ過装置は、スタティック型でも、クロスフロー型でも良いが、目詰まりを防止しやすいクロスフロー型が好ましい。使用される膜の材質は、例えば、ろ紙、ろ布、化学繊維、セラミックなどを例示することができる。また、珪藻土などをろ過助剤として用いてもよい。膜の形状としては、平膜、中空糸膜、筒型膜などが例示される。膜の孔径は、通常細菌を分離するのに適するものならばいずれでも良いが、好ましくは、０．００１μｍ～１００μｍ、より好ましくは０．０１～１０μｍ、さらに好ましくは０．０５～１μｍである。精密ろ過膜、限外ろ過膜が好ましく、精密ろ過膜が特に好ましく用いられる。
　デカンテーションに用いる容器は何でもよいが、例えば、通常の円筒形タンクが用いられる。デカンテーションで培養物を静置する時間に、特に制限はないが、好ましくは、０．５ｈ～４８ｈ、より好ましくは１ｈ～２４ｈである。
　分離に供する培養物の温度は、通常行われる温度であれば特に制限はないが、好ましくは０℃～９０℃、より好ましくは２℃～７５℃、さらに好ましくは４℃～６０℃である。
　上記分離工程、すなわち遠心分離、ろ過分離またはデカンテーション、またはこれらの組み合わせによって培養物から得られた沈殿濃縮物には、キサントフィルと菌体が濃縮される。沈殿濃縮物が次の工程に適した粘度、水分含量になるように、分離速度、分離強度などを適宜調整することも好ましく行うことができる。分離工程におけるキサントフィルの濃縮物中への回収率は、キサントフィルの分解・劣化、装置内面などへの付着、上澄み液への漏洩などの影響により変化しうるが、好ましくは７０～１００％、より好ましくは８０～１００％、さらに好ましくは９０～１００％である。
　得られた沈殿濃縮物を乾燥せずにキサントフィルを抽出回収し、必要に応じて精製し（後述の（３）、（４））、これをシス型化処理することにより、卵黄色調改善剤を製造することができる。
　また、得られた沈殿濃縮物を乾燥することにより、キサントフィルを含む乾燥菌体を得ることができる。そして、得られた乾燥菌体をシス型化処理することにより、卵黄色調改善剤を製造することができる。あるいは、乾燥菌体からキサントフィルを抽出して、必要に応じて精製し（後述の（３）、（４））、これをシス型化処理することにより、卵黄色調改善剤を製造することができる。
　肉色改善剤または酸化ストレス改善剤も、卵黄色調改善剤と同様に製造することができる。
　沈殿濃縮物の乾燥方法は特に限定されないが、たとえば、噴霧乾燥、流動乾燥、噴霧造粒乾燥、噴霧造粒流動乾燥、回転式ドラム乾燥、凍結乾燥などが挙げられる。また、培養物、沈殿濃縮物、または乾燥菌体の段階において、アルカリ試薬や界面活性剤などを用いた化学的処理、溶菌酵素や脂質分解酵素、タンパク質分解酵素などを用いた生化学的処理、あるいは超音波、粉砕、加熱などの物理的処理のうち一つまたは二つ以上の処理を行ってもよい。
（３）菌体からのキサントフィル粗抽出および（４）キサントフィル粗抽出物からの精製
　抽出は、以下に示すように当業者であれば公知技術に基づき実施することができる。例えば、（i）～(iii)の方法が挙げられるが、これに限定されるわけではない。
　（i）特許第４９６９３７０号に記載の方法による高温エタノール抽出。
　（ｉｉ）５０℃のアセトンに菌体を入れ、２時間懸濁（または常温６時間）したのち、ろ過。続いて、溶媒を除去し、乾燥させる（公知技術）。
　(iii)常温クロロホルム溶液に菌体をいれ、３時間懸濁した後、ろ過。続いて、溶媒を除去し、乾燥させる（公知技術）。
　キサントフィルを培養物から抽出する場合、抽出および洗浄に用いる溶媒は特に限定されないが、メタノール、エタノール、イソプロパノールなどの低級アルコール類、アセトン、テトラヒドロフラン、酢酸エチル、メチルエチルケトン、メチルイソブチルケトン、ジクロロメタン、クロロホルム、ジメチルフォルムアミド、ジメチルスルフォキシド、ヘキサンなどが挙げられる。当業者であれば、抽出溶媒、抽出温度などの抽出条件、洗浄条件を調整することにより、目的のキサントフィル種、例えば、アスタキサンチン、アドニキサンチン、アドニルビン等１つまたは組み合わせて抽出することもできる。
　このように得られた抽出物をキサントフィルとしてそのまま用いることが可能であり、さらに精製して使用することもできる。抽出液からキサントフィル沈殿物を得る方法としては、たとえば、冷却、加熱、減圧濃縮、貧溶媒添加、酸・アルカリ薬剤など各種塩類の添加などを単独で、または適宜組み合わせて用いて沈殿させる方法が挙げられる。得られたキサントフィル沈殿物は、洗浄のため必要に応じて少量の低級アルコール類などの溶媒を用いて懸濁攪拌させてもよい。洗浄の手法は特に限定されないが、例えば、懸濁攪拌後に濾取する方法または沈殿物の上から通液する方法等が実用的に好ましい方法として挙げられる。
　培養物、沈殿濃縮物、乾燥菌体、抽出液、精製物および各工程操作におけるキサントフィルの酸化分解を極力防止したい場合には、窒素ガスなどの不活性ガス雰囲気で行うことができる。また、医薬品や食品で用いられている酸化防止剤を選択して加えてもよい。あるいは、これらの処理を組み合わせてもよい。また、光によるキサントフィルの分解を極力防止するために、光を当てない条件下で行ってもよい。
　上記のように得られる沈殿濃縮物、乾燥菌体、抽出物または精製物は、キサントフィルとしてそれぞれ単独で用いることもできるし、これらを任意の割合で混合して用いることもできる。
　上記のように得られるキサントフィルの中には、アスタキサンチン、アドニルビン、アドニキサンチンなどのキサントフィルが1種以上含まれる。
（５）シス型化処理
　本発明の卵黄色調改善剤または本発明の家禽用飼料に含まれるキサントフィルは、前述のとおり、特に限定するものではないが、当業者であれば化学合成法または細菌や酵母等の微生物を用いた方法等の公知の方法で製造することができる。しかし、微生物等の天然物由来のキサントフィルは、一般的に、シス型キサントフィル含有率が十分ではない（例えば、４％以下）。また、市販のキサントフィルも、一般的にシス型キサントフィル含有率が十分ではない。したがって、本発明の卵黄色調改善剤または本発明の家禽用飼料に含まれるキサントフィルは、天然物由来あるいは市販のキサントフィルに、シス型キサントフィル含有率を調整するための処理（シス型化処理）を施したものとしてもよい。また、本発明の卵黄色調改善剤または本発明の家禽用飼料に含まれるキサントフィルは、天然物由来あるいは市販のキサントフィルに、シス型キサントフィル含有率を調整するための処理（シス型化処理）を施したキサントフィルを加えたものとしてもよい。
　本発明において、例えばパナファード-AX（PANAFERD-AX、ENEOS株式会社）パナファード-P（PANAFERD-P、ENEOS株式会社）を市販のアスタキサンチンとして入手することができる。
　例えば、（２）～（４）で得られた沈殿濃縮物、乾燥菌体または抽出若しくは精製したキサントフィルをシス型キサントフィル含有率を調整するための処理し、シス型キサントフィルの割合を調整したキサントフィルを得ることができる。
　シス型化処理は、例えば、簡便な手法として熱処理を例示することができる。なお、シス型キサントフィル含有率を調整するための処理は、熱処理に限られず、光照射処理や、キサントフィルのシス異性化反応を促進する所定の触媒を用いた処理等であってもよい。さらに、シス型キサントフィル含有率を高度に高める手法としては、トランス型とシス型キサントフィルの溶解度の差を利用した分離法等を例示することができる。
　熱処理は、暗所にて、窒素雰囲気化で行うことが好ましい。熱処理の温度は、３０～３００℃、４０～２８０℃、または５０～２６０℃が好ましい。熱処理の時間は、１分～２４時間、２分～１２時間、または３分～１０時間が好ましい。熱処理は、例えば、ウォーターバス、オイルバス、またはオートクレーブの加熱装置等を用いて行うことができる。また、熱処理は、酢酸エチル、エタノール、またはアセトン等の溶媒中で実施してもよい。
　熱処理には、例えば、（２）～（４）で得られた沈殿濃縮物や乾燥菌体を抽出処理することが含まれる。抽出処理の溶媒としては、酢酸エチル、エタノール、またはアセトン等を使用することができる。抽出温度は、３０～３００℃、４０～２８０℃、または５０～２６０℃が好ましい。抽出時間は、３０分～２４時間、１時間～１２時間、または２時間～１０時間が好ましい。抽出後、溶媒をエバポレーター等で除去し、大豆油、菜種油、またはオリーブ油等の植物油に懸濁させてもよい。
　シス型アスタキサンチンは、例えば、以下の方法で製造することができる。（２）で得られた乾燥菌体を、アセトンを使用する室温抽出に供し、抽出液をエバポレーターで濃縮し、濃縮液が二層に分離したところで濃縮物にヘキサン－クロロホルム（１：１）混合液を加えて良く混和した後、分液操作により有機溶媒層を得る。前記有機溶媒層をエバポレーターで濃縮乾固する。濃縮乾固物をクロロホルムに溶解し、シリカゲルカラムにてアスタキサンチンを分離する。例えば、アセトン：ヘキサン（５：５）で溶出する画分を濃縮し、４℃で放置することで、トランス型を多く含むアスタキサンチン遊離体を結晶として得ることができる。そして、前記アスタキサンチン遊離体を、ジクロロメタンに溶解し、８０℃で３時間加熱後、エバポレーターで溶媒を除去する。さらに、エタノールに再溶解し、フィルダーで分離し、再度エバポレーターで溶媒を除去する。このような処理により、シス型アスタキサンチンを多く含むアスタキサンチンを取得することができる。
　上記のような熱処理等のシス型化処理により、キサントフィルの１０～９０％、例えば１０～７０％がシス型となる。このように調整された沈殿濃縮物、乾燥菌体、または抽出もしくは精製キサントフィルも本発明に含まれる。
　本発明において、キサントフィル含有量およびシス型キサントフィル含有率は、逆相カラムや順相カラムを用いたＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラフィー）法により測定できる。定量は、クロマトグラム中における各キサントフィル異性体ピークのピーク面積に基づいてなされる。
　例えば、アスタキサンチンを例に挙げると、アスタキサンチン全体量を１００％とした場合におけるシス型アスタキサンチン含有率は、次の式により求めることができる。
Figure JPOXMLDOC01-appb-M000001
 　ここで「各シス異性体のピーク面積の合算値」は、各シス型アスタキサンチンのピーク面積を合算した値である。トランス型アスタキサンチンの含有率（％）は、１００からシス型アスタキサンチンの含有率を引くことで求められる。
　同様にキサントフィル全体量を１００質量％とした場合におけるシス型キサントフィル含有率は、次の式により求めることができる。トランス型キサントフィルの含有率は、１００からシス型キサントフィルの含有率を引くことで求められる。
Figure JPOXMLDOC01-appb-M000002
　上記式において、「シス型キサントフィル」を「トランス型キサントフィル」に、「各シス異性体」を「オールトランス異性体」に読み替えることで、トランス型含有率を求めることもできる。
　本発明の肉色改善剤、本発明の酸化ストレス改善剤または本発明の飼料に含まれるキサントフィルは、本発明の卵黄色調改善剤または本発明の家禽用飼料に含まれるキサントフィルと同様に製造することができる。
　本発明の卵黄色調改善剤は、キサントフィルを含む組成物をシス型化処理することによって製造することができる。すなわち、本発明の卵黄色調改善剤は、シス型キサントフィルの含有率を１０～９０％、例えば１０～７０％に調整したキサントフィルを含む。
　また、本発明の家禽用飼料は、一般に用いられる産卵家禽用飼料（基本飼料）に、シス型キサントフィルの割合を１０～９０％、例えば１０～７０％に調整したキサントフィルを１～５０ｐｐｍの濃度となるように配合して製造することができる。本発明において、基本飼料は、特に限定されず、家禽類の飼料として当業者が通常使用するものを用いることができる。家禽類の飼料としては、種々の組成の配合飼料が知られているが、ほとんどの場合、トウモロコシを主体とする飼料が用いられる。トウモロコシを主体とする飼料の一例を表２に示す。
　本発明の肉色改善剤または本発明の酸化ストレス改善剤は、シス型キサントフィルの含有率を１０～９０％、例えば１０～７０％に調整したキサントフィルを含む。また、本発明の飼料は、一般に用いられる家禽用飼料または魚介用飼料（基本飼料）に、シス型キサントフィルの割合を１０～９０％、例えば１０～７０％に調整したキサントフィルを１～５０ｐｐｍの濃度となるように配合して製造することができる。
　すなわち、本発明の卵黄色調改善剤および家禽用飼料、あるいは本発明の肉色改善剤または酸化ストレス改善剤および飼料は、キサントフィルを含有し、含有するキサントフィル全体、すなわち、シス型キサントフィルとトランス型キサントフィルの総重量を１００％とした場合にその重量の１０～９０％、例えば１０～７０％がシス型キサントフィルである。本発明の卵黄色調改善剤または家禽用飼料、あるいは本発明の肉色改善剤もしくは酸化ストレス改善剤または飼料は、含有するキサントフィルの１０～６０％、１０～５０％、１０～４０％、１０～３０％、１０～２０％、２０～７０％、２０～６０％、２０～５０％、２０～４０％、２０～３０％、３０～７０％、３０～６０％、３０～５０％、３０～４０％、４０～７０％、４０～６０％、４０～５０％、５０～７０％、５０～６０％、または６０～７０％がシス型キサントフィルであることが好ましい。また、本発明の卵黄色調改善剤または家禽用飼料、あるいは本発明の肉色改善剤もしくは酸化ストレス改善剤または飼料は、含有するキサントフィルの１０～８０％、２０～９０％、２０～８０％、３０～９０％、３０～８０％、４０～９０％、４０～８０％、５０～９０％、５０～８０％、６０～９０％、６０～８０％、７０～９０％、７０～８０％または８０～９０％がシス型キサントフィルであることが好ましい。また、本発明の卵黄色調改善剤または家禽用飼料、あるいは本発明の肉色改善剤もしくは酸化ストレス改善剤または飼料は、含有するキサントフィルの１０～８０％、１５～７５％、１８～７０％、または２０～６０％がシス型キサントフィルであることがより好ましい。
　本発明の卵黄色調改善剤および家禽用飼料、あるいは本発明の肉色改善剤もしくは酸化ストレス改善剤または飼料に含有されるキサントフィルは、好ましくはアスタキサンチン、アドニルビンおよびアドニキサンチンから選択される１以上を含み、より好ましくは、アスタキサンチンおよびアドニキサンチンから選択される１以上を含む。本発明の卵黄色調改善剤および家禽用飼料、あるいは本発明の肉色改善剤もしくは酸化ストレス改善剤または飼料にアスタキサンチン、アドニルビンまたはアドンキサンチンが含有される場合、それぞれ、その１０～９０％、例えば１０～７０％がシス型として存在する。例えば、本発明の卵黄色調改善剤および家禽用飼料、あるいは本発明の肉色改善剤もしくは酸化ストレス改善剤または飼料に含まれるアスタキサンチンは、その１０～９０％、例えば１０～７０％がシス型として存在する。
　シス型キサントフィル含有率が上記範囲内の本発明の家禽用飼料を用いて生産される卵は、卵黄中のキサントフィル含有量、特にトランス型キサントフィルの含有率が高くなる。また、シス型キサントフィル含有率が上記範囲内の本発明の飼料を用いて生産される食肉は、キサントフィル含有量、特にトランス型キサントフィルの含有率が高くなる。
　本発明の家禽用飼料または本発明の飼料１ｋｇ当たりに含まれるキサントフィルの量は、特に限定するものではないが、０．１～５００ｍｇ／ｋｇとすることができ、０．５～１００ｍｇ／ｋｇとすることがより好ましく、１ｍｇ～５０ｍｇ／ｋｇ（１ｐｐｍ～５０ｐｐｍ）とすることがさらに好ましい。また、本発明の家禽用飼料または本発明の飼料１ｋｇ当たりに含まれるキサントフィルの量は、１～４０ｍｇ／ｋｇ、１～３０ｍｇ／ｋｇ、１～２０ｍｇ／ｋｇ、１～１０ｍｇ／ｋｇ、２～４０ｍｇ／ｋｇ、２～３０ｍｇ／ｋｇ、２～２０ｍｇ／ｋｇ、２～１０ｍｇ／ｋｇ、３～４０ｍｇ／ｋｇ、３～３０ｍｇ／ｋｇ、３～２０ｍｇ／ｋｇ、３～１０ｍｇ／ｋｇ、５～４０ｍｇ／ｋｇ、５～３０ｍｇ／ｋｇ、５～２０ｍｇ／ｋｇ、５～１０ｍｇ／ｋｇであってもよい。
　本発明の家禽用飼料または本発明の飼料が、５０ｐｐｍ以下のキサントフィルを含むことは、コストの面で好ましい。
２．本発明の家禽卵および本発明の家禽卵の生産方法：本発明の食肉および本発明の食肉の生産方法
　本発明の家禽用飼料で給餌された家禽から生産された卵は、本発明に含まれる。本明細書において、本発明の家禽卵は、本発明の家禽用飼料で給餌された家禽から生産される。
　本発明の家禽卵は、卵黄中にキサントフィルを含有するとともに、含有するキサントフィル全体を１００質量％とした場合に５０～９５％がトランス型（すなわち、５～５０％がシス型）キサントフィルであって、卵黄のカラーファン値が１３～１８であることを特徴とする。
　本発明の家禽用飼料で給餌された家禽から生産された卵の卵黄または血漿中においてトランス型キサントフィルの含有率が極めて高くなる理由は定かではない。実施例においてシス型に富むアスタキサンチンを経口投与した場合に、血漿中のアスタキサンチンの多くがトランス型として存在したことから、シス型アスタキサンチンは小腸から吸収された後、腸管細胞内や肝臓でトランス型に異性化されると考えられる。そして、トランス型は卵黄色調に影響すると考えられている。また、実施例において、シス型アスタキサンチンは、トランス型アスタキサンチンよりも経口投与または給餌された場合に血漿および家禽卵への吸収率が高かった。これらのことから、本発明の卵は、色調が改善するものと考えられる。
　本発明の飼料で給餌された家禽または魚介類から生産された食肉は、本発明に含まれる。本明細書において、本発明の食肉は、本発明の飼料もしくは本発明の家禽用飼料で給餌された家禽または魚介類から生産される。本発明の別の態様において、本発明の飼料によってカロテノイドが血漿中に高含量で蓄積されるため、肉色の赤色度または黄色度が増大し、その結果、自然かつ食欲を喚起する肉色を実現することが可能である。
　本発明の食肉は、対照と比較して食肉が改善されることを特徴とする。対照と比較して色調が改善されるとは、本発明の飼料または本発明の肉色改善剤で給餌されていない対照（家禽または魚介類の肉）または本発明の飼料または本発明の肉色改善剤で給餌される前の対照（家禽または魚介類の肉）と比較して、肉色の赤色度または黄色度が増大することを意味する。
　本明細書において、肉色は、色彩色差計や分光速度計を用いて測定することにより、L*a*b＊表色系で数値化することができる。ここで、L＊は明度、a＊は赤色度、b＊は黄色度を示す。本発明により生産された家禽または魚介類の肉色は、対照（例えば、通常の飼料で飼育された家禽または魚介類の肉）に比較して高い赤色度および黄色度を示し、その結果、より自然な肉色を呈する。
　また、本発明の別の態様において、本発明の家禽用飼料または本発明の飼料で家禽または魚介類を給餌することにより、家禽または魚介類の体内にカロテノイドが高含量で蓄積されるため、家禽または魚介類の体内の酸化ストレスを改善させることが可能である。本明細書において、酸化ストレスの改善とは、対照と比較して酸化ストレスが低いことまたは酸化ストレスが付加される速度が遅いことを意味する。酸化ストレスの程度は、例えば、抗酸化活性により測定することができる。
　さらに、本発明の別の態様において、本発明の家禽用飼料または本発明の飼料で家禽または魚介類を給餌することにより、家禽または魚介類の体内にカロテノイドが高含量で蓄積されるため、肉の保管時や調理時の酸化劣化を抑制することが可能である。また、酸化ストレスが軽減され得るため、健康維持効果が期待される。そのため、本発明の酸化ストレス改善剤はヒトに適用することもできる。ヒトに適用する場合は、本発明の酸化ストレス改善剤に添加剤等を配合することにより、健康食品またはサプリメントとすることができる。健康食品またはサプリメントの用法および用量は、当業者であれば適宜設定することができる。
　さらに、本発明によりカロテノイド量が増大した家禽または魚介類では、カロテノイド量、特にアスタキサンチンの含有量の増加に伴い抗酸化活性が増大する。抗酸化活性は、脂質過酸化度またはビタミンＥ含量によって測定することができる。脂質過酸化度が低いほど抗酸化活性が高いことを示す。したがって、本発明において、脂質過酸化度は、対照の家禽または魚介類における脂質過酸化度に比べて低減する。また、ビタミンＥ含量が高いほど抗酸化活性が高いことを示す。したがって、ビタミンＥ含量は、対照家禽におけるビタミンＥ含量に比べて増大する。脂質過酸化度は、例えば、比色定量法により試料中のマロンジアノレデヒド（MDA）含量を測定することで求めることができる（Azada MAK, et al., Molecular and Integrative Physiology 155, 401-406. 2010.）。当業者であれば、公知の方法に基づき、適宜脂質過酸化度を測定することができる。ビタミンＥの量も、公知の方法（例えば、Faustmanら（1989）の方法）により定量することができる。本明細書において、ビタミンＥには、α-トコフェロール、β-トコフェロール、γ-トコフェロールおよびδ-トコフェロール並びにα-トコトリエノール、β-トコトリエノール、γ-トコトリエノールおよびδ-トコトリエノールが含まれ、ビタミンＥ含量は、これらの１以上の含量を測定することにより求めることもできる。
　本発明の家禽用飼料または本発明の飼料の給餌期間は、特に限定するものではないが、４日間以上とすることができ、１０日間以上とすることがより好ましく、２１日間以上とすることがさらに好ましい。本発明の家禽用飼料または本発明の飼料の給餌期間が４日間以上であれば、卵黄に含まれるキサントフィルのトランス型キサントフィルの含有率が高い（例えば、５０～９５％以上）家禽卵を得ることができる。また、本発明の家禽用飼料の給餌期間が４日間以上であれば、卵黄のカラーファン値が高い、例えば１３～１８の家禽卵を得ることができる。
　実施例において、卵黄中のキサントフィル含有量は、本発明の家禽用飼料または本発明の飼料の給餌期間が４日から２１日までは漸次高くなった。すなわち、家禽用飼料または飼料の給餌期間が４日以上、７日以上、１４以上、好ましくは、２１日間以上であれば、卵黄中のキサントフィル含有量が高い家禽卵または食肉を得ることができる。
　ある態様において、本発明の家禽卵は、卵黄中に含まれるキサントフィル全体を１００％とした場合に５０～９５％がトランス型である。本明細書において、キサントフィル全体を１００％とした場合のトランス型キサントフィル含有率（％）を、単にトランス型キサントフィル含有率ともいう。同様に、本明細書において、キサントフィル全体を１００％とした場合のシス型キサントフィル含有率（％）を、単にシス型キサントフィル含有率ともいう。
　卵黄中のキサントフィル含有量について、本発明の家禽卵は、アスタキサンチン、アドニルビンおよびアドニキサンチンの含有量の合計は、３．０ｐｐｍ以上であることが好ましく、３．５ｐｐｍ以上であることがより好ましく、５．０ｐｐｍ以上であることがさらに好ましい。
　本発明の家禽卵は、卵黄中にキサントフィルを含み、前記キサントフィルのトランス型キサントフィル含有率が５０～９５％であり、好ましくは６０～９５％または６５～９５％である。また、別の態様において、卵黄中のトランス型アスタキサンチン含有率は、好ましくは７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９または８０％以上である。また、別の態様において、卵黄中のトランス型アドニルビン含有率は、好ましくは、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４または７５％以上である。また、別の態様において、卵黄中のトランス型アドニキサンチン含有率は、好ましくは、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４または９５％以上である。
　なお、本発明の家禽卵において、卵黄中のキサントフィル含有量および卵黄中に含まれるトランス型キサントフィル含有率は、例えば、家禽に給餌する飼料に含まれるキサントフィルのシス型キサントフィル含有率や飼料の給餌期間や家禽の飼育条件を適宜設定することにより変更調整することができる。当業者であれば、本発明の範囲で飼料、給餌条件、飼育条件等を適宜検討することにより、本発明の家禽卵を取得することができる。
　鶏卵等の卵黄色は、カラーファン（ＣＦ）値による測定が、当分野において最も一般的な卵黄色の評価方法である。カラーファン（ＣＦ）値の測定には、JA全農たまご社の全農卵黄カラーチャート（Zen-Noh Yolk Colour Chart:CF）やロッシュ社のヨークカラーファン（Roche Yolk Color Fan: RYCF）が一般に用いられ、電子的に色調を判定する機器（例えばエッグマルチテスターEMT-7300（ＪＡ全農たまご社）等）による自動的測定によってカラーファン値を測定することも行われている。本発明において、カラーファン（ＣＦ）値は、エッグマルチテスターEMT-7300（ＪＡ全農たまご社）等）により測定された値を意味する。カラーファンの値は、１～１８の範囲である。
　本発明の家禽卵は、卵黄のカラーファン値が１３～１８であることを特徴とする。本発明の家禽卵のカラーファン値は、好ましくは１３～１７、１３～１６、１３～１５、１３～１４．５、１３．５～１４．５の範囲である。
　また、卵黄色は分光測色計によって測定されることもある。分光測色計は、ミノルタＣＲ－２００、ＣＭ－７００ｄ等の市販の装置を使用することができる。カラーファン（ＣＦ）値と分光測色計の測定値とは一致せず、例えばＣＦ値１０の卵黄のａ＊値（赤色）は１３、ＣＦ値１２の卵黄のａ＊値は１５、ＣＦ値１４の卵黄のａ＊値は１９程度である。これは飼料成分や家禽の品種、色差計の測定方法等によって値が変わることがあるためであり、分光測色計による測定値とＣＦ値との明確な対応付けは未だなされていない。従って、当業者にとって、ＣＦ値が最も共通に理解される客観的測定値であるといえる。
　本発明の家禽卵は、１５～２１の範囲のａ＊値を示し得る。
　以下、実施例によりさらに具体的に説明する。
１．キサントフィルの製造およびシス型化処理（調整キサントフィルの製造）（実施例１～４）
（１）キサントフィル（アスタキサンチン、アドニルビン、アドニキサンチン）の製造
　特開２０１２－１５８５６９号公報に記載の方法に準じて、パラコッカス属Ｅ－３９６株を培養し、乾燥することで乾燥菌体（乾燥菌体中にアスタキサンチン３％、アドニルビン０．５％、アドニキサンチン０．５％、総カロテノイド４％含有）を得た。
（２）シス型化処理（調整キサントフィルの製造）(実施例１～４、比較例２)
　（１）で得られた乾燥菌体を原料とし、酢酸エチルを用いて表１に記載の条件で抽出を行い、エバポレーターで溶媒除去後、大豆油に懸濁させ、シス型化キサントフィルを得た。各サンプルのシス型化アスタキサンチン含有率は３．９％～５０．６％であった。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000003
２．調整オレオレジンの製造
　リコピンは、カロテノイドの一種であり、キサントフィルには含まれない。実施例においては、リコピンを比較の一つとして用いる。
　リコピン含有率１５質量％のトマトオレオレジン（ライコレッド株式会社製、Ｌｙｃ－Ｏ－Ｍａｔｏ（登録商標）１５％）を入手した（以下、「無調整オレオレジン」という）。無調整オレオレジンに含まれるリコピンは、シス型リコピン含有率が５．５質量％であった（比較例４）。
　無調整オレオレジンを所定の温度で熱処理して、リコピンのシス型リコピン含有率を調整したオレオレジン（以下、「調整オレオレジン」という）を得た。熱処理は、暗所にて、窒素雰囲気下で１時間行った。１３０℃の熱処理により、シス型リコピン含有率が３５．１質量％の調整オレオレジンを得た（比較例３）。
３．家禽用飼料（シス型キサントフィル富化飼料）の製造
　「１」で得られた調整キサントフィル（実施例１～４、比較例２）または「２」で得られた調整オレオレジン（比較例４）もしくは無調整オレオレジン（比較例３）を、以下の表２に示される成分を有する飼料（比較例１）に添加して、表３に示される家禽用飼料を製造した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000004
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000005
　実施例５～８は、アスタキサンチン、アドニルビンおよびアドニキサンチンがそれぞれ８μｇ／ｇ、１．４μｇ／ｇおよび１．２～１．３μｇ／ｇとなるように、調整キサントフィル（実施例１～４）を表２の飼料に添加した。
　比較例５は、表２に示される成分を有する飼料（比較例２）である。すなわち、いずれのキサントフィルまたはオレオレジンを加えていない。
　比較例６は、アスタキサンチン、アドニルビンおよびアドニキサンチンがそれぞれ８μｇ／ｇ、１．３μｇ／ｇおよび１．５μｇ／ｇとなるように、調整キサントフィル（比較例２）を表２の飼料に添加した。
　比較例７は、リコピンが２００μｇ／ｇとなるように、調整オレオレジン（比較例３）を表２の飼料に添加した。
　比較例８は、リコピンが２００μｇ／ｇとなるように、無調整オレオレジン（比較例４）を表２の飼料に添加した。
　実施例５～８および比較例５～８の飼料に含まれるアスタキサンチン、アドニキサンチンおよびリコピンのシス型含有率を表３に示す。実施例５、６、７および８の飼料に含まれるアドニルビンのシス型含有率は、それぞれ２０．５％、３１．０％、３９．８％、５０．２％であった。
４．キサントフィル含有鶏卵の生産
　実施例５～８および比較例５～６の飼料を、９１週齢の産卵鶏（ジュリアライト、各１０羽）にそれぞれ給餌して、鶏卵を生産した。飼料を給餌開始してから４日目、７日目、１４日目、２１日目に採取された鶏卵について、卵黄中のキサントフィル含有量とシス型キサントフィル含有率を、順相ＨＰＬＣ分析によりそれぞれ測定した。比較例７～８についても同様に鶏卵を生産させ、卵黄中のリコピン含有量とシス型リコピン含有率を、順相ＨＰＬＣ分析によりそれぞれ測定した。実施例５～８または比較例５～８の飼料を給餌した産卵鶏から得られた鶏卵をそれぞれ実施例９～１２または比較例９～１２とした。
５．卵黄中のキサントフィルまたはリコピン含有量の測定方法およびシス型キサントフィルまたはシス型リコピン含有率の測定方法
　上記のようにして生産された鶏卵の卵黄１ｇを５０ｍｌのアセトンに懸濁した。アセトンに懸濁した卵黄を、氷温にて、１５分間超音波処理して、卵黄からキサントフィルおよびリコピンを抽出した。抽出物を、キサントフィルの場合は５～１０ｍｌの酢酸エチルに、リコピンの場合は５～１０ｍｌのヘキサンに溶解し、０．２μｍのＰＴＦＥフィルター（アドバンテック東洋株式会社製）に通し、ＨＰＬＣ用のサンプルを得た。得られたサンプルは、以下の条件で順相ＨＰＬＣ分析に供した。
［キサントフィル順相ＨＰＬＣ分析の条件］
　　装置：高速液体クロマトグラフＰｒｏｍｉｎｅｎｃｅ システム（株式会社島津製作所社製）
　　カラム：Ｌｕｎａシリカゲルカラム（長さ：１５０ｍｍ×１本、内径：４．６ｍｍ、粒子径：５μｍ、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ株式会社製）
　　カラム温度：４０℃
　　移動相：ヘキサン：酢酸エチル：アセトン（７５：２３：２、v/v/v）
　　流速：１．２ｍＬ／ｍｉｎ
　　検出波長：４７０ｎｍ
［リコピン順相ＨＰＬＣ分析の条件］
　　装置：高速液体クロマトグラフＰｒｏｍｉｎｅｎｃｅ システム（株式会社島津製作所社製）
　　カラム：Ｎｕｃｌｅｏｓｉｌ ３００‐５（長さ：２５０ｍｍ×３本、内径：４．６ｍｍ、粒子径：５μｍ、ジーエルサイエンス株式会社製）
　　カラム温度：３５℃
　　移動相：ヘキサン（０．０７５％ ＤＩＰＥＡ（Ｎ,Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン）含有）
　　流速：１．０ｍＬ／ｍｉｎ
　　検出波長：４６０ｎｍ
　キサントフィル含有量およびシス型キサントフィル含有率は、順相ＨＰＬＣ分析によって得られたクロマトグラム中のピーク面積に基づいて算出した。リコピンの含有量およびシス型リコピンの含有率も、キサントフィルと同様に算出および解析した。
６．卵黄中のキサントフィルおよびリコピン含有量
　上記「５」で測定した卵黄中のアスタキサンチン、アドニルビン、アドニキサンチンおよびリコピンの含有量を表４に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000006
　実施例９～１２および比較例１０の卵黄では、卵黄中のキサントフィル含有量が、給餌４日目～２１日目にかけて上昇した。
　実施例９～１２および比較例１０の結果を比較すると、比較例１０に比べて実施例９～１２では卵黄中のキサントフィルの含有量が高い（表４）。
　実施例５～８と比較例２の飼料は、キサントフィルの含有量はほぼ同じであるが、シス型キサントフィル含有率は実施例５～８の方が比較例２よりも高い（表３）。
　これらのことから、飼料に含まれるシス型キサントフィルの含有率が高いと、当該飼料を給餌された家禽から生産される卵中の卵黄に含まれるキサントフィルの含有量が高くなることが示された。
　また、実施例５～８の飼料を給餌して取得された実施例９～１２の卵を比較すると、飼料中のシス型キサントフィルの含有率依存的に、当該飼料を給餌された家禽から生産される卵中の卵黄に含まれるキサントフィルの含有量が増加することが示された。
　また、リコピン２００μｇ／ｇを含む比較例７および８の飼料を給餌された鶏から生産される比較例１１および１２の卵について、卵黄中のリコピンの含有量はそれぞれ４．２３μｇ／ｇおよび１．７６μｇ／ｇであった。一方、実施例５～８の飼料中のキサントフィル含有量（アスタキサンチン、アドニルビンおよびアドニキサンチンの含有量の合計）は１０．６～１０．７μｇ／ｇであり、比較例７～８の飼料中のリコピン含有量（２００μｇ／ｇ）に比べ約１／２０量であるにも関わらず、実施例９～１２の卵中の卵黄のキサントフィル含有量（アスタキサンチン、アドニルビンおよびアドニキサンチンの含有量の合計）は４．０１～１０．０５μｇ／ｇであった。キサントフィルは、リコピンに比較して卵黄中に含まれやすいことが示された。
７．卵黄中のトランス型キサントフィル含有率およびシス型キサントフィル含有率
　上記「５」で測定した実施例９～１２および比較例９～１２の卵の卵黄中のアスタキサンチン、アドニルビン、アドニキサンチンおよびリコピンについて、トランス型含有率を表５に示し、シス型含有率を表６に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000007
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000008
　実施例９～１２は、トランス型キサントフィル含有率が６６．７％～９２．４％であった。一方、比較例７および８は、トランス型リコピン含有率が１６％および２３％であった。シス型のキサントフィルとシス型のリコピンは、産卵鶏の体内における挙動が異なり、鶏卵に含まれるシス－トランス異性体の比率が異なることが示された。
８．卵黄色
　実施例５～８または比較例５～６の飼料をそれぞれ給餌開始後２１日目の鶏卵（各１０個）について、エッグマルチテスターEMT-7300（ＪＡ全農たまご社）を用いてカラーファン値を測定した。コントロールは、飼育３５日目の鶏卵（表３に示す飼料による給餌終了後1週間目の鶏卵、すなわち、表３に示す飼料による給餌開始後２９～３５日目は比較例５の飼料で給餌した産卵鶏から得られた鶏卵）の測定結果を用いた。比較例７～８についても、類似の評価を行った。測定結果を表７に示す。なお、表７中の以下の項目は次のものを示す。
　　カラーファン値：エッグマルチテスターEMT-7300(JA全農たまご社)を用いて決定される卵黄色の値
　　ａ＊値：コニカミノルタ社製の分光測色計CM-700dを用いて測定された値
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000009
　実施例９～１２および比較例１０の結果を比較すると、比較例１０に比べて実施例９～１２は卵黄中のカラーファン値およびａ＊値のいずれも高かった（表７）。
　具体的には、実施例５の飼料（シス型アスタキサンチン含有率１３．９％、シス型アドニルビン含有率２０．５％、シス型アドニキサンチン含有率１２．５％）、実施例６の飼料（シス型アスタキサンチン含有率２７％、シス型アドニルビン含有率３１．０％、シス型アドニキサンチン含有率２７．２％）、実施例７の飼料（シス型アスタキサンチン含有率３６．８％、シス型アドニルビン含有率３９．８％、シス型アドニキサンチン含有率３５．６％）、または実施例８の飼料（シス型アスタキサンチン含有率５０．６％、シス型アドニルビン含有率５０．２％、シス型アドニキサンチン含有率４６．６％）を給餌して生産される鶏卵（それぞれ実施例９、１０、１１または１２）は、比較例６の飼料（シス型アスタキサンチン含有率３．９％、シス型アドニキサンチン含有率４．５％）を給餌して生産される比較例１０の鶏卵に比して、卵黄のカラーファン値が１．４～２．１も高かった。
　実施例５～８と比較例６の飼料は、キサントフィルの含有量がほぼ同じであり、その中のシス型の含有率は比較例６に比べて実施例５～８が高いこと（表３）を考慮すると、飼料に含まれるシス型キサントフィルの含有率が高いと、当該飼料を給餌された家禽から生産される卵中の卵黄のカラーファン値またはａ値が高くなり、卵黄色調が改善されることが示された。
　また、実施例５～８の飼料を給餌して取得された実施例９～１２の卵中の卵黄の結果を比較すると、飼料中のシス型キサントフィルの含有率依存的に、当該飼料を給餌された家禽から生産される卵中の卵黄色調が改善されることが示された。
　また、リコピン２００μｇ／ｇを含む比較例７および８の飼料を給餌された産卵鶏から生産される比較例１１および１２の卵に比べて、キサントフィルを含む実施例９～１２の鶏卵の方が、カラーファン値が高かった。キサントフィルは、リコピンに比較して卵黄色調を改善効果が高いことが示された。
９．アスタキサンチン異性体の吸収性評価試験＜実験方法＞
　鶏に対して、トランス型アスタキサンチンを９８．８％含み、かつシス型アスタキサンチンを１．２％含むアスタキサンチン（（all-E)-AST）を５ｍｇ、またはトランス型アスタキサンチンを１７．６％含み、かつシス型アスタキサンチンを８２．４％含むアスタキサンチン（(Z)-AST）を５ｍｇ経口投与し、投与６時間後の血漿中アスタキサンチン濃度を分析した。
（all-E)-ASTの製法
　上記実施例の項目の１．（１）に記載の乾燥菌体を、アセトンを使用する室温抽出に供し、抽出液をエバポレーターで濃縮し、濃縮液が二層に分離したところで濃縮物にヘキサン－クロロホルム（１：１）混合液を加えて良く混和した後、分液操作により有機溶媒層を得た。前記有機溶媒層をエバポレーターで濃縮乾固した。濃縮乾固物をクロロホルムに溶解し、シリカゲルカラムにてアスタキサンチンを分離した。アセトン：ヘキサン（５：５）で溶出する画分を濃縮し、４℃で放置することで、アスタキサンチン遊離体を結晶として得た。
(Z)-ASTの製法
　上記方法で得られた（all-E)-ASTをジクロロメタンに溶解し、８０℃で３時間加熱した。エバポレーターで溶媒を除去した後、さらにエタノールに再溶解し、フィルダーで分離し、再度エバポレーターで溶媒を除去し、大豆油に懸濁させ、(Z)-ASTを得た。
　得られた（all-E)-ASTまたは(Z)-ASTを、１０ｍｇ／ｍＬの濃度になるように大豆油に懸濁し、懸濁液０．５ｍＬを鶏（Lohmann Julia、各５羽）に経口投与した。コントロール区には、０．５ｍＬの大豆油を鶏（Lohmann Julia、５羽）に経口投与した。
　投与６時間後に鶏から血液を採取して血液試料を得た。血液試料（３～４ｍL）にヘパリンを０．２ｍＬ添加し、３０００ｒｐｍで５分間遠心分離し、血漿（上清）をアスタキサンチン含有量の測定に用いた。
　血漿中のアスタキサンチン含有量は、上記「５」のキサントフィル順相ＨＰＬＣ分析の条件と同様の方法で測定した。
＜結果＞
　結果を図１に示す。(Z)-AST投与区では、血漿中アスタキサンチン濃度が（all-E)-AST投与区の約６倍高かった。さらに、血漿中アスタキサンチン中のシス型含有率も、(Z)-AST投与区の方が（all-E)-AST投与区よりも約５倍高く、血漿中のシス型含有率は(Z)-AST投与区（シス型含有率：８２．４％）では３３．０％であった。
　また、血漿中のトランス型アスタキサンチン濃度は、(Z)-AST投与区で１．２５μｇ／ｇ（１．８６μｇ／ｇ×６７％）であり、（all-E)-AST投与区で０．３１μｇ／ｇ（０．３３μｇ／ｇ×９４％）であった。
　この結果から、シス型アスタキサンチンは経口投与された場合に、トランス型アスタキサンチンに比べて、血漿中に吸収されやすいことが示される。
　さらに、(Z)-AST投与区（シス型含有率：８２．４％）では、血漿中のシス型含有率が３３．０％であった。すなわち血漿中のアスタキサンチンは約７０％がトランス型として存在していたことから、シス型アスタキサンチンは小腸から吸収後、腸管細胞中や肝臓でトランス型に異性化されることが示唆される。
　また、経口シス型アスタキサンチンは高い血中移行率を有し、血中において、より安定なトランス型アスタキサンチンとして多く存在することから、アスタキサンチンの組織蓄積性の向上が期待される。
　また、血漿における上記結果から、シス型アスタキサンチンにより肉の色味を改善し得ることが示唆される。また、アスタキサンチンは抗酸化効果を有することから、シス型アスタキサンチンを用いて、肉の色調維持あるいは褐色化の抑制、肉の保管時や調理時の酸化劣化の低減、家禽の酸化ストレスの低減などの効果を期待することができる。
　前述の例は単に説明を目的とするものでしかなく、本発明を限定するものと解釈されるものではない。本発明を典型的な実施形態の例を挙げて説明したが、本発明の記述および図示において使用された文言は、限定的な文言ではなく説明的および例示的なものであると理解される。ここで詳述したように、その形態において本発明の範囲または本質から逸脱することなく、添付の特許請求の範囲内で変更が可能である。ここでは、本発明の詳述に特定の構造、材料および実施例を参照したが、本発明をここにおける開示事項に限定することを意図するものではなく、むしろ、本発明は添付の特許請求の範囲内における、機能的に同等の構造、方法、使用の全てに及ぶものとする。
　本発明は上記で詳述した実施形態に限定されず、本発明の請求項に示した範囲で様々な変形または変更が可能である。
　本発明により、キサントフィルを含み、前記キサントフィルの１０～９０％、例えば１０～７０％がシス型であることを特徴とする、卵黄色調改善剤が提供される。また、本発明の別の態様において、前記卵黄色調改善剤を含む、家禽用飼料が提供される。
　本発明の卵黄色調改善剤を産卵家禽用の一般飼料に含有させた飼料または前記家禽用飼料で家禽を給餌すると、卵黄色調が改善された卵を生産することができる。したがって、本発明は、良好な卵黄色を有する家禽卵およびその生産方法を提供することができる。
　また、本発明の別の態様において、キサントフィルを含み、前記キサントフィルの１０～９０％、例えば１０～７０％がシス型であることを特徴とする、肉色改善剤もしくは酸化ストレス改善剤、または前記肉色改善剤もしくは酸化ストレス改善剤を含む飼料が提供される。
　本発明の肉色改善剤を家禽または魚介類の一般飼料に含有させた飼料で家禽または魚介類を給餌すると、色調が改善された食肉を生産することができる。
　本発明の酸化ストレス改善剤を家禽または魚介類用の一般飼料に含有させた飼料で家禽または魚介類を給餌すると、家禽または魚介類の酸化ストレスが軽減され得るので、家禽または魚介類の保管時や調理時の酸化劣化の抑制や健康維持効果が期待される。
  

Claims (12)

  1. 　キサントフィルを含み、前記キサントフィルの１０～９０％がシス型であることを特徴とする、卵黄色調改善剤。
  2. 　前記キサントフィルの１０～７０％がシス型であることを特徴とする、請求項１に記載の卵黄色調改善剤。
  3. 　キサントフィルの濃度が１～５０ｐｐｍとなるように請求項１または２に記載の卵黄色調改善剤を含み、前記キサントフィルの１０～９０％がシス型であることを特徴とする、家禽用飼料。
  4. 　キサントフィルを１～５０ｐｐｍの濃度で含み、前記キサントフィルの１０～９０％がシス型であることを特徴とする、家禽用飼料。
  5. 　前記キサントフィルの１０～７０％がシス型であることを特徴とする、請求項３または４に記載の家禽用飼料。
  6. 　キサントフィルが卵黄に含有され、前記キサントフィルの５０～９５％がトランス型で存在し、卵黄のカラーファン値が１３～１８の卵黄色を呈する、家禽卵。
  7. 　前記キサントフィルがアスタキサンチン、アドニルビン、アドニキサンチンの少なくともいずれか１種であることを特徴とする、請求項１または２に記載の卵黄色調改善剤。
  8. 　前記キサントフィルがアスタキサンチン、アドニルビン、アドニキサンチンの少なくともいずれか１種であることを特徴とする、請求項３～５のいずれか１項に記載の家禽用飼料。
  9. 　前記キサントフィルがアスタキサンチン、アドニルビン、アドニキサンチンの少なくともいずれか１種であることを特徴とする、請求項６に記載の家禽卵。
  10. 　家禽が、鶏、ガチョウ、アヒル、またはウズラである、請求項３～５および８のいずれか１項に記載の家禽用飼料または請求項６もしくは９に記載の家禽卵。
  11. 　キサントフィルを含み、前記キサントフィルの１０～９０％がシス型であることを特徴とする、肉色改善剤または酸化ストレス改善剤。
  12. 　前記キサントフィルがアスタキサンチン、アドニルビン、アドニキサンチンの少なくともいずれか１種であることを特徴とする、請求項１１に記載の剤。
     
     
     
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