JP4722595B2 - 抗炎症剤、抗酸化剤及び美白剤、並びに皮膚化粧料 - Google Patents
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Description
前記血小板凝集は、血小板中のサイクリックAMPの濃度と関係があり、該サイクリックAMPの分解酵素であるサイクリックAMPホスホジエステラーゼによって、該サイクリックAMPが分解され、その濃度が低下すると、血小板は凝集しやすくなる。このため、サイクリックAMPホスホジエステラーゼの作用を抑制し、サイクリックAMPの低下を防止することにより、血小板凝集を防止できると考えられる。このようなサイクリックAMPホスホジエステラーゼ阻害作用を有する抗炎症剤としては、例えば、有色素米若しくはその糠の抽出物(特許文献1参照)独脚金の抽出物、小良姜の抽出物、サイコの抽出物(特許文献2参照)等が報告されている。
前記活性酸素は、生体細胞内のエネルギー代謝過程で生じるものであり、スーパーオキサイド〔即ち、酸素分子の一電子還元で生じるスーパーオキシドアニオン(・O2−)〕、過酸化水素(H2O2)、ヒドロキシラジカル(・OH)、一重項酸素(1O2)等がある。これら活性酸素は食細胞の殺菌機構にとって必須であり、ウイルスや癌細胞の除去に重要な働きを果たしているが、活性酸素の過剰な生成は生体内の膜や組織を構成する生体内分子を攻撃し、コラーゲン等の生体組織を分解、変性又は架橋したり、油脂類を酸化して細胞に障害を与える過酸化脂質を生成したりして、皮膚のシワ形成や皮膚の弾力低下等の老化の原因になると考えられている。このため、活性酸素の生成を阻害及び抑制することにより、シワ形成や弾力低下等の皮膚の老化を予防及び治療できると考えられる。このような活性酸素消去作用を有する抗酸化剤としては、例えば、オスベッキア属に属する植物の抽出物(特許文献3参照)、プルメリア属に属する植物の抽出物(特許文献4参照)、カナリウム属に属する植物の抽出物(特許文献5参照)、ランタナの抽出物(特許文献6参照)等が報告されている。
一般に、前記メラニンは色素細胞の中で生合成される酵素チロシナーゼの働きによって、チロシンからドーパ、ドーパからドーパキノンンに変化し、ついで5’6−ジヒドロキシインドフェノール等の中間体を経て形成される。このため、皮膚の色黒(皮膚色素沈着症)を予防及び治療するには、メラニン産生過程を阻害すること、あるいは既に産生したメラニンを淡色漂白することが考えられる。
このようなメラニン産生を抑制する美白剤として、例えば、トウゴマ根部の抽出物(特許文献7参照)、Saussurea属に属する植物の抽出物(特許文献8参照)等が報告されている。
また、本発明は、第2に、優れたスーパーオキサイド消去作用、ラジカル消去作用及び過酸化水素消去作用の少なくともいずれかを有し、安全性が高く、原料の入手が容易な天然由来の抗酸化剤を提供することを目的とする。
また、本発明は、第3に、優れたメラニン産生抑制作用を有し、安全性が高く、原料の入手が容易な天然由来の美白剤を提供することを目的とする。
また、本発明は、第4に、前記抗炎症剤、前記抗酸化剤及び前記美白剤の少なくともいずれかを配合した皮膚化粧料及び飲食物を提供することを目的とする。
<1> スイオウの抽出物を含有することを特徴とする抗炎症剤である。
<2> サイクリックAMPホスホジエステラーゼ阻害作用を有する前記<1>に記載の抗炎症剤である。
<3> スイオウの抽出物を含有することを特徴とする抗酸化剤である。
<4> スーパーオキサイド消去作用、ラジカル消去作用及び過酸化水素消去作用の少なくともいずれかを有する前記<3>に記載の抗酸化剤である。
<5> スイオウの抽出物を含有することを特徴とする美白剤である。
<6> メラニン産生抑制作用を有する前記<5>に記載の美白剤である。
<7> 前記<1>から<2>のいずれかに記載の抗炎症剤、前記<3>から<4>に記載の抗酸化剤、及び前記<5>から<6>のいずれかに記載の美白剤の少なくともいずれかを有効成分として含有することを特徴とする皮膚化粧料である。
<8> 前記<1>から<2>のいずれかに記載の抗炎症剤、前記<3>から<4>に記載の抗酸化剤、及び前記<5>から<6>のいずれかに記載の美白剤の少なくともいずれかを有効成分として含有することを特徴とする飲食物である。
本発明の抗炎症剤、抗酸化剤及び美白剤は、スイオウの抽出物を含有してなり、更に必要に応じてその他の成分を含有してなる。
しかし、前記スイオウの抽出物が、優れたサイクリックAMPホスホジエステラーゼ阻害作用、スーパーオキサイド消去作用、ラジカル消去作用、過酸化水素消去作用及びメラニン産生抑制作用の少なくともいずれかを有し、抗炎症剤、抗酸化剤又は美白剤として有用であることは全く知られておらず、これらのことは、本発明者らによる新知見である。
前記抽出原料であるスイオウは、天日又は通常使用される乾燥機を用いて予め乾燥しておいてもよい。
前記抽出溶媒として使用し得る水としては、例えば、純水、水道水、井戸水、鉱泉水、鉱水、温泉水、湧水、淡水等の他、これらに各種処理を施したものが含まれる。水に施す処理としては、例えば、精製、加熱、殺菌、濾過、イオン交換、浸透圧の調整、緩衝化等が含まれる。従って、本発明において抽出溶媒として使用し得る水には、精製水、熱水、イオン交換水、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等も含まれる。
なお、前記抽出溶媒としては、2種以上の極性溶媒の混合液を極性溶媒として使用してもよく、その場合の混合比は特に制限はなく、例えば、水と低級脂肪族アルコールとの混合溶媒を使用する場合には、水と低級脂肪族アルコールとの混合比を9:1〜1:9(質量比)とすることができる。
得られるスイオウの抽出液は、該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、該抽出物の乾燥物、又はこれらの粗精製物若しくは精製物を得るために、常法に従って希釈、濃縮、乾燥、精製等の処理を施してもよい。
ここで、スイオウの抽出物の抗炎症作用はサイクリックAMPホスホジエステラーゼ阻害作用に基づいて発揮される。また、抗酸化作用はスーパーオキサイド消去作用、ラジカル消去作用及び過酸化水素消去作用に基づいて発揮される。また、美白作用はメラニン産生抑制作用に基づいて発揮される。
また、本発明のスイオウの抽出物は、消化管で消化されるようなものではないことが確認されているので、任意の飲食品や栄養補助食品に配合するのに好適である。
本発明の皮膚化粧料は、本発明の前記抗炎症剤、前記抗酸化剤及び前記美白剤の少なくともいずれかを含有してなり、更に必要に応じて適宜選択したその他の成分を含有してなる。
前記その他の成分としては、前記抗炎症作用、前記抗酸化作用又は前記美白作用の妨げにならない限り、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択した成分が挙げられ、例えば、収斂剤、殺菌・抗菌剤、紫外線吸収剤、保湿剤、細胞賦活剤、油脂類、ロウ類、炭化水素類、脂肪酸類、アルコール類、エステル類、界面活性剤、香料等が挙げられる。これらの成分は、前記スイオウの抽出物と共に併用した場合、相乗的に作用して、通常期待される以上の優れた使用効果をもたらすことがある。
本発明の飲食物は、本発明の前記抗炎症剤、前記抗酸化剤及び前記美白剤を含有してなり、更に必要に応じて適宜選択したその他の成分を含有してなる。
ここで、前記飲食物とは、人の健康に危害を加える恐れが少なく、通常の社会生活において、経口又は消化管投与により摂取されるものをいい、行政区分上の食品、医薬品、医薬部外品等の区分に制限されるものではなく、例えば、経口的に摂取される一般食品、健康食品、保健機能食品、医薬部外品、医薬品等を幅広く含むものを意味する。
―スイオウの水抽出物の製造―
スイオウの花(蕾)部の粗粉砕物100gに抽出溶媒である水1,000mlを加え、還流抽出器を付けて、穏やかに撹拌しながら80℃で2時間加熱抽出し、熱時濾過した。得られた抽出物を40℃で減圧下にて濃縮し、更に減圧乾燥機で乾燥させ、スイオウの水抽出物を得た。抽出物の収率は表1のとおりであった。
―スイオウの50%エタノール抽出物の製造―
スイオウの花(蕾)部の粗粉砕物100gに抽出溶媒である50%エタノール(水とエタノールとの質量比1:1)1,000mlを加え、還流抽出器を付けて、穏やかに撹拌しながら80℃で2時間加熱抽出し、熱時濾過した。得られた抽出物を40℃で減圧下にて濃縮し、更に減圧乾燥機で乾燥させ、スイオウの50%エタノール抽出物を得た。抽出物の収率は表1のとおりであった。
―スイオウの80%エタノール抽出物の製造―
スイオウの花(蕾)部の粗粉砕物100gに抽出溶媒である80%エタノール(水とエタノールとの質量比1:4)1,000mlを加え、還流抽出器を付けて、穏やかに撹拌しながら80℃で2時間加熱抽出し、熱時濾過した。得られた抽出物を40℃で減圧下にて濃縮し、更に減圧乾燥機で乾燥させ、スイオウの80%エタノール抽出物を得た。抽出物の収率は表1のとおりであった。
−サイクリックAMPホスホジエステラーゼ阻害作用試験−
製造例1〜3で得られた抽出物について、以下のようにしてサイクリックAMPホスホジエステラーゼ阻害作用を試験した。
5mlの塩化マグネシウムを含有するトリス塩酸緩衝液(pH7.5)0.2mlに胎児血清アルブミン溶液0.1ml及びサイクリックAMPホスホジエステラーゼ溶液0.1mlを加え、更に、製造例1〜3の各試料溶液0.05mlを加え、37℃にて5分間プレインキュベーションした。
次いで、サイクリックAMPホスホジエステラーゼ溶液0.05mLを加え、37℃で60分間インキュベーションした。沸騰浴中で3分間煮沸して反応を停止させ、4℃、3500rpmで遠心分離し、上清中の反応基質である5’―AMPを高速液体クロマトグラフィーにより定量した。
また、試料溶液を添加せずに同様の酵素反応と反応基質の分析を行い、試料無添加時の反応基質量に対する試料添加時の反応基質量の比率により、試料のサイクリックAMPホスホジエステラーゼ阻害率(%)を求めた。
次に、試料溶液の試料濃度を段階的に減少させて上記サイクリックAMPホスホジエステラーゼ阻害率(%)の測定を繰り返し、サイクリックAMPホスホジエステラーゼの活性を50%阻害する試料濃度IC50(μg/ml)を内挿法により求めた。結果を表2に示す。
―スーパーオキサイド消去作用試験―
製造例1〜3で得られた各抽出物について、下記の試験法によりスーパーオキサイド消去作用を試験した。
3mMキサンチン、0.05M Na2CO3緩衝液(pH10.2)、3mM EDTA、ウシ血清アルブミン溶液、及び0.75mM NBT(nitroblue tetrazolium)を、各々0.1ml試験管にとり、これに製造例1〜3の各試料溶液0.1mlを添加し、25℃で10分間放置した。次いで、酵素溶液としてのキサンチンオキシダーゼ溶液を加えて素早く攪拌し、25℃で20分間静置した。その後、6mM 塩化銅0.1mlを加えて反応を停止させて、波長560nmにおける吸光度を測定した。
同様の操作と吸光度の測定を、酵素溶液を添加せずに行った。更に、試料溶液を添加せずに蒸留水を添加した場合についても同様の測定を行った。得られた結果から、下記数式1によりスーパーオキサイド消去率(%)を求めた。
消去率(%)={1−(A−B)/(C−D)}×100
但し、前記数式1中、Aは、酵素溶液添加、試料溶液添加時の吸光度を表し、Bは酵素溶液無添加、試料溶液添加時の吸光度を表し、Cは酵素溶液添加、試料溶液無添加時の吸光度を表し、Dは酵素溶液無添加、試料溶液無添加時の吸光度を表す。
―ラジカル消去作用試験―
製造例1〜3で得られた各抽出物について、下記の試験法によりDPPHに対するラジカル消去作用を試験した。
1.5×10−4M DPPH(diphenyl−p−picrylhydrazyl)エタノール溶液3mlに、製造例1〜3の各試料溶液3mlを加え、直ちに容器を密栓して振り混ぜ、30分間静置した後、波長520nmの吸光度を測定した。
同様の操作と吸光度測定を、コントロールとして、試料溶液の代わりに試料溶液を溶解した溶媒を用いて行った。更に、ブランクとして、試料溶液を加えた後、直ちに吸光度の測定を行い、得られた結果から、下記数式2によりラジカル消去率(%)を算出した。
消去率(%)={1−(B−C)/A}×100
但し、前記数式2中、Aはコントロールの吸光度を表し、Bは試料溶液添加時の吸光度
を表し、Cはブランクの吸光度を表す。
―過酸化水素消去作用試験―
製造例1〜3で得られた各抽出物について、下記の試験法により過酸化水素消去作用を試験した。
過酸化水素の標準溶液(濃度1.5mM)10μlに、製造例1〜3の各試料溶液10μlを加え、37℃で20分間インキュベーションした後、発色試薬〔DA−64(和光純薬社製)を10mM、トライトンX-100を0.5質量%含む0.1M PIPES緩衝液(pH7.0)にペルオキシダーゼ溶液(100unit/ml,和光純薬社製)1mlを加え、全量を100mlに調整したもの〕2.98mlを添加し、37℃で5分間インキュベーションした後、波長727nmにおける吸光度を測定した。
同様の操作と吸光度測定を、過酸化水素の標準溶液を添加せずに行った。更に、試料溶液を添加せずに蒸留水を添加した場合についても同様の測定を行い、得られた結果から、下記数式3により過酸化水素の消去率(%)を求めた。
消去率(%)={1−(A−B)/(C−D)}×100
但し、前記数式3において、Aは過酸化水素標準溶液添加,試料溶液添加時の吸光度を表し、Bは過酸化水素標準溶液無添加,試料溶液添加時の吸光度を表し、Cは過酸化水素標準溶液添加,試料溶液無添加時の吸光度を表し、Dは過酸化水素標準溶液無添加,試料溶液無添加時の吸光度を表す。
−メラニン産生抑制作用試験−
製造例1〜3で得られた各抽出物について、下記の試験法によりメラニン産生抑制作用を試験した。
まず、25cm2の培養フラスコに入れた10質量%FBS含有ダルベッコMEMB培地(以下培地と略記する)にB−16メラノーマ細胞1×106個を播種し、37℃、5質量%CO2−95質量%空気下で4日間培養した。次いでトリプシン処理し、1,000rpmで3分間遠心分離して細胞を回収した。回収した細胞4×105個を、培地5mlを入れた直径60mmのシャーレに播種し、24時間培養した。次に、培養したメラノーマ細胞を、製造例1〜3の各試料を12.5μg/mlになるように溶解した0.5mmol/lテオフィリン添加培地5mlで3日間培養した。培養後、トリプシン処理し、更に遠心分離して細胞を集め、培地4mlを加えて細胞浮遊液を得た。得られた細胞浮遊液中の細胞数を測定した後、細胞浮遊液を遠心分離し、沈殿として得られた細胞に10質量%DMSO含有2mol/lの水酸化ナトリウム溶液2mlを添加して超音波破砕器により細胞を破壊した。これをろ紙でろ過し、得られたろ液の波長475nmにおける吸光度を分光光度計を用いて測定した。
同様の操作と吸光度測定を、試料溶液を添加せずに行い、下記数式4によりメラニン産生抑制率(%)を算出した。結果を表6に示す。
メラニン産生抑制率(%)=(A−B)/A×(C/D)×100
ただし、前記数式4中、Aは、被験試料無添加での475nmにおける吸光度を表し、Bは、被験試料添加での475nmにおける吸光度を表し、Cは、被験試料添加での細胞数を表し、Dは、被験試料無添加での細胞数を表す。
下記組成の乳液を常法により製造した。
スイオウ水抽出物(製造例1) 0.10g
ホホバオイル 4.00g
1,3−ブチレングリコール 3.00g
ポリオキシエチレンセチルエーテル(20E.O.) 2.50g
オリーブオイル 2.00g
スクワラン 2.00g
セタノール 2.00g
モノステアリン酸グリセリル 2.00g
オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン(20E.O.) 2.00g
パラオキシ安息香酸メチル 0.15g
黄杞エキス 0.10g
グリチルリチン酸ジカリウム 0.10g
イチョウ葉エキス 0.10g
コンキオリン 0.10g
オウバクエキス 0.10g
カツミレエキス 0.10g
香料 0.05g
精製水 残部
合計 100.00g
下記組成の化粧水を常法により製造した。
スイオウ水抽出物(製造例1) 0.10g
グリセリン 3.00g
1,3−ブチレングリコール 3.00g
オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン(20E.O.) 2.00g
パラオキシ安息香酸メチル 0.15g
クエン酸 0.10g
クエン酸ソーダ 0.10g
油溶性甘草エキス 0.10g
海藻エキス 0.10g
クジンエキス 0.10g
キシロビオースミクスチャー 0.05g
香料 0.05g
精製水 残部
合計 100.00g
下記組成のクリームを常法により製造した。
スイオウ50%エタノール抽出物(製造例2) 0.10g
スクワラン 10.00g
1,3−ブチレングリコール 6.00g
流動パラフィン 5.00g
サラシミツロウ 4.00g
セタノール 3.00g
モノステアリン酸グリセリル 3.00g
ラノリン 2.00g
オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン(20E.O.) 1.50g
パラオキシ安息香酸メチル 1.50g
ステアリン酸 1.00g
酵母抽出液 0.10g
シソ抽出液 0.10g
シナノキ抽出液 0.10g
ジユ抽出液 0.10g
香料 0.10g
精製水 残部
合計 100.00g
下記組成のパックを常法により製造した。
スイオウ80%エタノール抽出物(製造例3) 0.20g
ポリビニルアルコール 15.00g
エタノール 10.00g
プロピレングリコール 7.00g
ポリエチレングリコール 3.00g
セージ抽出液 0.10g
トウキ抽出液 0.10g
ニンジン抽出液 0.10g
パラオキシ安息香酸エチル 0.05g
香料 0.05g
精製水 残部
合計 100.00g
下記組成の錠剤状栄養補助食品を常法により製造した。
スイオウ50%エタノール抽出物(製造例2) 30g
粉糖(ショ糖) 178g
ソルビット 10g
グリセリン脂肪酸エステル 12g
下記組成の顆粒状栄養補助食品を常法により製造した。
スイオウ水抽出物(製造例1) 20g
ビートオリゴ糖 1000g
ビタミンC 167g
ステビア抽出物 10g
Claims (7)
- スイオウの抽出物を含有することを特徴とする抗炎症剤。
- サイクリックAMPホスホジエステラーゼ阻害作用を有する請求項1に記載の抗炎症剤。
- スイオウの抽出物を含有することを特徴とする抗酸化剤。
- スーパーオキサイド消去作用、ラジカル消去作用及び過酸化水素消去作用の少なくともいずれかを有する請求項3に記載の抗酸化剤。
- スイオウの抽出物を含有することを特徴とする美白剤。
- メラニン産生抑制作用を有する請求項5に記載の美白剤。
- 請求項1から2のいずれかに記載の抗炎症剤、請求項3から4のいずれかに記載の抗酸化剤、及び請求項5から6のいずれかに記載の美白剤の少なくともいずれかを有効成分として含有することを特徴とする皮膚化粧料。
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