JP3869461B2 - 皮膚老化防止剤 - Google Patents

Description

本発明は、線維芽細胞によるコラーゲンの産生を活発化する作用を有するコラーゲン産生促進剤、線維芽細胞によるヒアルロン酸の産生を活発化する作用を有するヒアルロン酸産生促進剤、コラーゲンの減少・変性に関与するコラゲナーゼ活性を阻害するコラゲナーゼ阻害剤、及び皮膚の老化予防・改善作用を有する抗老化剤に関するものである。また、本発明は、皮膚の老化予防・改善作用を付与した皮膚外用剤及び美容作用を付与した飲食品に関するものである。

皮膚の真皮及び表皮は、表皮細胞、線維芽細胞及びこれらの細胞の外にあって皮膚構造を支持するコラーゲン、ヒアルロン酸等の細胞外マトリックスによって構成されている。若い皮膚においては、これらの皮膚組織の相互作用が恒常性を保つことにより水分保持、柔軟性、弾力性等が確保され、肌は外見的にも張りや艶があってみずみずしい状態に維持される。

ところが、紫外線、空気の著しい乾燥、過度の皮膚洗浄等、ある種の外的因子の影響があったり加齢が進んだりすると、細胞外マトリックスの主要構成成分であるコラーゲンは産生量が減少すると共に架橋による弾性低下を起こす。外的因子の影響や加齢に伴う線維芽細胞の増殖率低下もコラーゲンの産生量の減少、天然保湿因子であるヒアルロン酸の産生量の低下を引き起こす。その結果、皮膚は保湿機能や弾力性が低下し、角質は異常剥離を始めるから、肌は張りや艶を失い、荒れ、シワ、くすみ等の老化症状を呈するようになる。

このように、皮膚の老化に伴う変化、即ち、シワ、くすみ、きめの消失、弾力性の低下等には、コラーゲン、ヒアルロン酸等の真皮マトリックス成分の減少・変性と、線維芽細胞の増殖率の低下とが関与している。

近年、上記変化を誘導する因子として、特にマトリックス系プロテアーゼの関与が指摘されている。マトリックス系プロテアーゼの中でも、コラゲナーゼ、即ちＭＭＰ−１（マトリックスメタロプロテアーゼ）は、皮膚の真皮マトリックスの主な構成成分であるタイプI，IIIコラーゲンを分解する酵素として知られるが、その発現は紫外線の照射により大きく増加し、紫外線によるコラーゲンの減少・変性の一因となり、皮膚のシワ形成等の大きな要因となることが考えられる。

そこで、本発明の第一の目的は、線維芽細胞によるコラーゲンの産生を促進して皮膚の老化を防止及び／又は改善し得る物質を見出し、それを有効成分として含有するコラーゲン産生促進剤を提供することにある。

また、本発明の第二の目的は、ヒアルロン酸の産生を促進して皮膚の老化を防止及び／又は改善し得る物質を見出し、それを有効成分として含有するヒアルロン酸産生促進剤を提供することにある。

さらに、本発明の第三の目的は、コラゲナーゼ阻害作用を通じてコラーゲンの減少・変性を抑制し、皮膚の老化を防止及び／又は改善し得る物質を見出し、それを有効成分として含有するコラゲナーゼ阻害剤を提供することにある。

さらに、本発明の第四の目的は、コラーゲン産生促進作用、ヒアルロン酸産生促進作用又はコラゲナーゼ阻害作用を有する物質を有効成分として含有する抗老化剤を提供することにある。

さらに、本発明の第五の目的は、コラーゲン産生促進作用、ヒアルロン酸産生促進作用又はコラゲナーゼ阻害作用を有し、皮膚の老化を防止及び／又は改善する上で有用な皮膚外用剤を提供することにある。

さらに、本発明の第六の目的は、コラーゲン産生促進作用、ヒアルロン酸産生促進作用又はコラゲナーゼ阻害作用を有し、皮膚の老化を防止及び／又は改善する上で有用な飲食品を提供することにある。

上記目的を解決するため、本発明のコラーゲン産生促進剤、ヒアルロン酸産生促進剤、コラゲナーゼ阻害剤及び抗老化剤は、ニクタンテス・アルボートリスティス（Nyctanthes albor-tristis）、パイパー・チャバ（Piper chaba）、アントセファラス・インディカス（Anthocephalus indicus）及びクロタラリア・サイチソイデス（Crotalaria cytisoides）からなる群より選ばれる１種又は２種以上の植物からの抽出物を有効成分として含有することを特徴とし、本発明の皮膚外用剤及び飲食品は、ニクタンテス・アルボートリスティス（Nyctanthes albor-tristis）、パイパー・チャバ（Piper chaba）、アントセファラス・インディカス（Anthocephalus indicus）及びクロタラリア・サイチソイデス（Crotalaria cytisoides）からなる群より選ばれる１種又は２種以上の植物からの抽出物を配合したことを特徴とする。

本発明により、コラーゲン産生促進剤、ヒアルロン酸産生促進剤、コラゲナーゼ阻害剤及び抗老化剤が提供される。本発明のコラーゲン産生促進剤、ヒアルロン酸産生促進剤、コラゲナーゼ阻害剤及び抗老化剤は、皮膚の老化を防止及び／又は改善するのに有用である。また、本発明により、コラーゲン産生促進作用、ヒアルロン酸産生促進作用又はコラゲナーゼ阻害作用が付与された皮膚外用剤が提供される。本発明の皮膚外用剤は、皮膚の適用した場合の使用感と安全性に優れているとともに、皮膚の老化を防止及び／又は改善するのに有用である。さらに、本発明により、コラーゲン産生促進作用、ヒアルロン酸産生促進作用又はコラゲナーゼ阻害作用が付与された飲食品が提供される。本発明の飲食品は、皮膚の老化を防止及び／又は改善するのに有用である。

以下、本発明について詳細に説明する。
本発明において、「抽出物」には、ニクタンテス・アルボートリスティス、パイパー・チャバ、アントセファラス・インディカス及びクロタラリア・サイチソイデスからなる群より選ばれる１種又は２種以上の植物を抽出原料として得られる抽出液、該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、該抽出液を乾燥して得られる乾燥物、又はこれらの粗精製物もしくは精製物のいずれもが含まれる。

抽出原料として用いる植物は、ニクタンテス・アルボートリスティス、パイパー・チャバ、アントセファラス・インディカス及びクロタラリア・サイチソイデスからなる群より選ばれる１種又は２種以上の植物である。２種以上の植物を抽出原料として用いる場合、上記植物を任意に組み合わせることができる。

ニクタンテス・アルボートリスティス（学名：Nyctanthes albor-tristis）（別名：ヨルソケイ）は、クマツヅラ科に属する低木又は小高木であり、インド等に分布しており、これらの地域から容易に入手可能である。また、パイパー・チャバ（学名：Piper chaba）は、コショウ科（Piperaceae）に属する低木であり、ネパール等に分布しており、これらの地域から容易に入手可能である。また、アントセファラス・インディカス（学名：Anthocephalus indicus）は、アカネ科に属する高木であって、マレーシア等に分布しており、これらの地域から容易に入手可能である。また、クロタラリア・サイチソイデス（Crotalaria cytisoides）は、マメ科に属する植物である。

抽出原料として用いる植物の構成部位は特に限定されるものではなく、ニクタンテス・アルボートリスティスについては、例えば根部、葉部、枝部、花部、種子、果実等の構成部位を、パイパー・チャバについては、例えば根部、葉部、枝部、花部、種子、果実等の構成部位を、アントセファラス・インディカスについては、例えば根部、葉部、枝部、樹皮、花部、種子、果実等の構成部位を、クロタラリア・サイチソイデスについては、例えば根部、葉部、枝部、花部、種子、果実、全草等の構成部位を抽出原料として用いることができる。これらの構成部位のうち、ニクタンテス・アルボートリスティスについては、特に種子を、パイパー・チャバについては、特に根部を、アントセファラス・インディカスについては、特に樹皮を、クロタラリア・サイチソイデスについては、特に全草を抽出原料として用いることが好ましい。

上記植物からの抽出物に含有されるコラーゲン産生促進作用、ヒアルロン酸産生促進作用又はコラゲナーゼ阻害作用を有する物質の詳細は不明であるが、植物の抽出に一般に用いられている抽出方法によって、上記植物からこれらの作用を有する抽出物を得ることができる。例えば、抽出原料を乾燥した後、そのまま、又は粗砕機を用いて粉砕し、抽出溶媒による抽出に供することにより得ることができる。この際、抽出原料の乾燥は天日で行ってもよいし、通常使用される乾燥機を用いて行ってもよい。また、上記植物は、ヘキサン、ベンゼン等の非極性溶媒によって脱脂等の前処理を施してから抽出原料として使用してもよい。脱脂等の前処理を行うことにより、極性溶媒による抽出処理を効率よく行うことができる。

抽出溶媒としては、水若しくは親水性有機溶媒又はこれらの混合液を室温又は溶媒の沸点以下の温度で用いることが好ましい。
抽出溶媒として使用し得る水としては、純水、水道水、井戸水、鉱泉水、鉱水、温泉水、湧水、淡水等の他、これらに各種処理を施したものが含まれる。水に施す処理としては、例えば、精製、加熱、殺菌、ろ過、イオン交換、浸透圧の調整、緩衝化等が含まれる。従って、本発明において抽出溶媒として使用し得る水には、精製水、熱水、イオン交換水、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等も含まれる。

抽出溶媒として使用し得る親水性有機溶媒としては、例えば、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール等の炭素数１〜５の低級アルコール；アセトン、メチルエチルケトン等の低級脂肪族ケトン；１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等の炭素数２〜５の多価アルコールなどが挙げられる。

２種以上の極性溶媒の混合液を抽出溶媒として使用する場合、その混合比は適宜調整することができる。例えば、水と低級脂肪族アルコールとの混合液を使用する場合には、水と低級脂肪族アルコールとの混合比を７：３〜２：８（重量比）とすることができる。

抽出処理は、上記植物に含有される可溶性成分を抽出溶媒に溶出させ得る限り特に限定されるものではなく、常法に従って行うことができる。抽出処理の際には特殊な抽出方法を採用する必要はなく、室温又は還流加熱下において任意の装置を用いることができる。

具体的には、抽出溶媒を満たした処理槽に抽出原料を投入し、必要に応じて時々攪拌しながら、通常１〜３時間静置して可溶性成分を溶出した後、ろ過して固形物を除去し、得られた抽出液から抽出溶媒を留去し、乾燥することにより抽出物が得られる。抽出溶媒量は抽出原料の通常５〜１５倍量（重量比）であり、抽出温度は、通常、常温〜９５℃である。

得られた抽出液は、該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、該抽出液の乾燥物、又はこれらの粗精製物若しくは精製物を得るために、常法に従って希釈、濃縮、乾燥、精製等の処理を施してもよい。

得られた抽出液はそのままでもコラーゲン産生促進剤、ヒアルロン酸産生促進剤、コラゲナーゼ阻害剤又は抗老化剤として使用することができるが、濃縮液又は乾燥物としたものの方が利用しやすい。上記植物からの抽出物の製剤化は常法に従って行うことができる。製剤化する場合、保存や取扱いを容易にするために、デキストリン、シクロデキストリン等の薬学的に許容され得るキャリアーその他任意の助剤を添加することができ、上記植物からの抽出物を粉末状、果粒状、錠剤状等、任意の剤形に製剤化することができる。

上記植物からの抽出物は特有の匂いを有しているため、その生理活性の低下を招かない範囲で脱色、脱臭等を目的とする精製を行うことも可能であるが、皮膚外用剤や飲食品などに添加する場合には大量に使用するものではないから、未精製のままでも実用上支障はない。精製は具体的には、活性炭処理、吸着樹脂処理、イオン交換樹脂処理等によって行うことができる。

本発明のコラーゲン産生促進剤は、線維芽細胞によるコラーゲンの産生を活発化して真皮層に十分なコラーゲンを補給することによって、皮膚の老化を防止及び／又は改善することができる。

本発明のヒアルロン酸産生促進剤は、線維芽細胞によるヒアルロン酸の産生を活発化させ、ヒアルロン酸の減少、変性等によって生じる皮膚の老化を防止及び／又は改善することができる。

本発明のコラゲナーゼ阻害剤は、コラーゲンの減少、変性等に関与するコラゲナーゼ活性を阻害して、コラーゲンの減少、変性等によって生じる皮膚の老化を防止及び／又は改善することができる。

本発明の抗老化剤は、コラーゲン産生促進作用、ヒアルロン酸産生促進作用及びコラゲナーゼ阻害作用からなる群より選ばれる１種又は２種以上の作用を通じて、皮膚の老化を防止及び／又は改善することができる。本発明の抗老化剤は、皮膚の老化防止と改善に多面的に作用して皮膚の老化を防止及び／又は改善することができる。

〔皮膚外用剤〕
上記植物からの抽出物は、皮膚の老化を防止及び／又は改善する作用を有するとともに、皮膚に適用した場合の使用感と安全性に優れているので、皮膚外用剤に配合するのに好適である。皮膚外用剤には、本発明のコラーゲン産生促進剤、ヒアルロン酸産生促進剤、コラゲナーゼ阻害剤又は抗老化剤のいずれか１種を配合してもよいし、２種以上を組み合わせて配合してもよい。

「皮膚外用剤」とは、皮膚に適用される各種薬剤を意味し、例えば、化粧料、医薬部外品、医薬品、浴用剤等が含まれる。上記植物からの抽出物を配合し得る皮膚外用剤の種類は特に限定されず、その具体例としては、肌に対するものとして、軟膏、パップ、クリーム、乳液、ローション、パック、ゼリー等が挙げられ、頭皮に対するものとして、トニック、リンス、シャンプー、アストリンゼント等が挙げられる。

本発明の皮膚外用剤における上記植物からの抽出物の配合量は、皮膚外用剤の種類や抽出物の生理活性等によって適宜調整することができるが、上記植物からの抽出物の総配合量が、標準的な抽出物に換算して約０．０００１〜１０重量％となるように配合することが好ましい。

本発明の皮膚外用剤には、上記植物からの抽出物のコラーゲン産生促進作用、ヒアルロン酸産生促進作用、コラゲナーゼ阻害作用の妨げにならない限り、皮膚外用剤の製造に通常使用される各種主剤及び助剤、その他任意の助剤を使用することができる。本発明の皮膚外用剤は、皮膚の老化防止・改善に関し、上記植物からの抽出物のみが主剤となるものに限られるわけではない。

本発明の皮膚外用剤において、上記植物からの抽出物と共に皮膚外用剤構成成分として利用可能なものとしては、以下のものを例示できる。なお、上記植物からの抽出物とともに以下の構成成分を併用した場合、上記植物からの抽出物と併用された構成成分との間の相乗作用が、通常期待される以上の優れた使用効果をもたらすことがある。

収斂剤：クエン酸又はその塩類、酒石酸又はその塩類、乳酸又はその塩類、塩化アルミニウム、硫酸アルミニウム・カリウム、アラントインクロルヒドロキシアルミニウム、アラントインジヒドロキシアルミニウム、パラフェノールスルホン酸亜鉛、硫酸亜鉛、ジユエキス、エイジツエキス、ハマメリスエキス、ゲンノショウコエキス、茶カテキン類、オドリコソウエキス、オトギリソウエキス、ダイオウエキス、ヤグルマソウエキス、キズタエキス、キューカンバーエキス、マロニエエキス、サルビアエキス、メリッサエキス等。

殺菌・抗菌剤：安息香酸、安息香酸ナトリウム、パラオキシ安息香酸エステル、塩化ジステアリルメチルアンモニウム、塩化ベンゼトニウム、塩酸クロルヘキシジン、感光素１０１号、感光素２０１号、サリチル酸、サリチル酸ナトリウム、ソルビン酸、ハロカルバン、レゾルシン、パラクロロフェノール、フェノキシエタノール、ビサボロール、ヒノキチオール、メントール、キトサン、キトサン分解物、ジユエキス、クジンエキス、エンメイソウエキス、ビワエキス、ユッカエキス、アロエエキス、ケイヒエキス、ガジュツエキス等。

美白剤：アスコルビン酸又はその誘導体、イオウ、胎盤加水分解物、エラグ酸又はその誘導体、コウジ酸又はその誘導体、グルコサミン又はその誘導体、アルブチン又はその誘導体、ヒドロキシケイヒ酸又はその誘導体、グルタチオン、アルニカエキス、オウゴンエキス、ソウハクヒエキス、サイコエキス、ボウフウエキス、マンネンタケ菌糸体培養物又はその抽出物、シナノキエキス、モモ葉エキス、エイジツエキス、クジンエキス、ジユエキス、トウキエキス、ヨクイニンエキス、カキ葉エキス、ダイオウエキス、ボタンピエキス、ハマメリスエキス、マロニエエキス、オトギリソウエキス、油溶性カンゾウエキス（カンゾウ疎水性フラボン、グラブリジン、グラブレン、リコカルコンA）等。

紫外線吸収剤：β―イソプロピルフラノン誘導体、ウロカニン酸、ウロカニン酸エチル、オキシベンゾン、オキシベンゾンスルホン酸、テトラヒドロキシベンゾフェノン、ジヒドロキシベンゾフェノン、ジヒドロキシジメトキシベンゾフェノン、ジヒドロキシベンゾフェノン、シノキサート、ジイソプロピルケイヒ酸メチル、メトキシケイヒ酸メチル、メトキシケイヒ酸オクチル、パラアミノ安息香酸グリセリル、パラジメチルアミノ安息香酸アミル、パラジメチル安息香酸オクチル、パラアミノ安息香酸、パラアミノ安息香酸エチル、酸化チタン、β―カロチン、γ―オリザノール、コメヌカエキス、アロエエキス、カバノキエキス、シラカンバエキス、カミツレエキス、ヘンナエキス、チョウチグルミエキス、イチョウ葉エキス、セイヨウサンザシエキス、油溶性カンゾウエキス等。

保湿剤：セリン、グリシン、スレオニン、アラニン、コラーゲン、加水分解コラーゲン、ヒドロネクチン、フィブロネクチン、ケラチン、エラスチン、ローヤルゼリー、コンドロイチン硫酸ヘパリン、グリセロリン脂質、グリセロ糖脂質、スフィンゴリン脂質、スフィンゴ糖脂質、リノール酸又はそのエステル類、エイコサペンタエン酸又はそのエステル類、ペクチン、ビフィズス菌発酵物、乳酸発酵物、酵母抽出物、レイシ菌糸体培養物又はその抽出物、小麦胚芽油、アボガド油、米胚芽油、ホホバ油、ダイズリン脂質、γ―オリザノール、ビロウドアオイエキス、ヨクイニンエキス、ジオウエキス、タイソウエキス、カイソウエキス、キダチアロエエキス、ゴボウエキス、マンネンロウエキス、アルニカエキス、小麦フスマ、コメヌカエキス等。

細胞賦活剤：リボフラビン又はその誘導体、ピリドキシン又はその誘導体、ニコチン酸又はその誘導体、パントテン酸又はその誘導体、α―トコフェロール又はその誘導体、アルニカエキス、ニンジンエキス、ナタネニンジンエキス、ヘチマエキス（サポニン）、シコンエキス、オウバクエキス、ボタンピエキス、シャクヤクエキス、ムクロジエキス、ベニバナエキス、アシタバエキス、ビワ葉エキス、ヒキオコシエキス、ユキノシタエキス、黄杞エキス、サルビアエキス、ニンニクエキス、マンネンロウエキス等。

消炎・抗アレルギー剤：アズレン、アラントイン、アミノカプロン酸、インドメタシン、塩化リゾチーム、イプシロンアミノカプロン酸、オキシベンゼン、グリチルリチン酸又はその誘導体、グリチルレチン酸又はその誘導体、感光素３０１号、感光素４０１号、塩酸ジフェンヒドラミン、トラネキサム酸又はその誘導体、アデノシンリン酸、エストラジオール、エスロン、エチニルエストラジオール、コルチゾン、ヒドロコルチゾン、プレドニゾロン、プロゲステロン、コルチコステロン、アルニカエキス、インチンコウエキス、サンシシエキス、ジュウヤクエキス、カンゾウエキス、トウキエキス、ヨモギエキス、ワレモコウエキス、リンドウエキス、サイコエキス、センキュウエキス、セイヨウノコギリソウエキス、オウレンエキス、シソエキス等。

抗酸化・活性酸素消去剤：ジブチルヒドロキシトルエン、ブチルヒドロキシアニソール、没子食酸プロピル、バイカリン、バイカレイン、スーパーオキサイドディスムターゼ、カタラーゼ、ローズマリーエキス、メリッサエキス、オウゴンエキス、エイジツエキス、ビワ葉エキス、ホップエキス、ハマメリスエキス、シャクヤクエキス、セージエキス、キナエキス、カミツレエキス、ユーカリエキス、シソエキス、イチョウ葉エキス、タイムエキス、カルダモンエキス、キャラウェイエキス、ナツメグエキス、メースエキス、ローレルエキス、クローブエキス、ターメリックエキス、ヤナギタデエキス等。

上記植物からの抽出物を配合した皮膚外用剤を製造する場合、他の製造原料の選択が制限されることはほとんどなく、以下に例示するような一般的な基材や助剤はいずれも使用可能である。

油脂類：大豆油、アマニ油、キリ油、ゴマ油、ヌカ油、綿実油、菜種油、サフラワー油、トウモロコシ油、オリーブ油、椿油、アーモンド油、ヒマシ油、落花生油、カカオ油、モクロウ、ヤシ油、パーム核油、牛脂、ミンク油、卵黄油、ホホバ油、月見草油、馬油。

ロウ類：カルナウバロウ、キャンデリラロウ、蜜ロウ、サラシ蜜ロウ、鯨ロウ、セラックス、ラノリン類。

炭化水素類：流動パラフィン、ワセリン、マイクロクリスタリンワックス、セレシン、スクワレン、ポリスチレン末。

脂肪酸類：ステアリン酸、リノール酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ヘベリン酸、ラノリン酸、オレイン酸、ウンデシレン酸、イソルテアリン酸。

アルコール類：ラウリルアルコール、セチルアルコール、ステアリルアルコール、ラノリンアルコール、水添ラノリンアルコール、オレイルアルコール、ヘキサデシルアルコール、２−オクチルドデカノール、グリセリン、ソルビトール、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、エチレングリコール及びその重合体、ブドウ糖、白糖、コレステロール、フィトステロール、セトステアリルアルコール。

エステル類：オレイン酸デシル、ステアリル酸ブチル、ミリスチン酸イソプロピル、ミリスチン酸オクチルドデシル、ジメチルオクタン酸ヘキシルデシル、ジオレイン酸プロピレングリコール、モノステアリン酸エチレングリコール、モノステアリン酸グリセリン、トリステアリン酸グリセリン、酢酸ラノリン、乳酸セチル。

界面活性剤：陰イオン性界面活性剤、陽イオン性界面活性剤、両イオン性界面活性剤、非イオン性界面活性剤。

香料：メントール、カルボン、オイゲノール、アネトール、ハッカ油、スペアミント油、ペパーミント油、ユーカリ油、アニス油。

〔飲食品〕
上記植物からの抽出物は、皮膚の老化を防止及び／又は改善する作用を有するとともに、消化管で消化されるようなものではないことが確認されているので、任意の飲食品や栄養補助食品に配合するのに好適である。飲食品や栄養補助食品には、本発明のコラーゲン産生促進剤、ヒアルロン酸産生促進剤、コラゲナーゼ阻害剤又は抗老化剤のいずれか１種を配合してもよいし、２種以上を組み合わせて配合してもよい。

上記植物からの抽出物を配合した飲食品には、皮膚の老化を防止及び／又は改善する作用が付与され、これを美容用飲食品として使用することができる。ここで、「美容用飲食品」とは、美肌又は皮膚の老化の防止及び／又は改善を図ることを目的とした飲食品を意味する。

本発明の飲食品は、上記植物からの抽出物をその活性を妨げないような任意の飲食品に配合したものであってもよいし、上記植物からの抽出物を主成分とする栄養補助食品であってもよい。

本発明の飲食品を製造する際には、例えば、デキストリン、デンプン等の糖類；ゼラチン、大豆タンパク、トウモロコシタンパク等のタンパク質；アラニン、グルタミン、イソロイシン等のアミノ酸類；セルロース、アラビアゴム等の多糖類；大豆油、中鎖脂肪酸トリグリセリド等の油脂類等の任意の助剤を添加して任意の剤形に製剤化することができる。

本発明の飲食品における上記植物からの抽出物の配合量は、添加対象飲食品の一般的な摂取量を考慮して成人１日当たりの抽出物総摂取量が約０．１〜１０００ｍｇ程度になるようにするのが適当である。

上記植物からの抽出物を配合し得る飲食品の種類は特に限定されないが、その具体例としては、清涼飲料、炭酸飲料、栄養飲料、果実飲料、乳酸飲料等の飲料（これらの飲料の濃縮原液及び調整用粉末を含む）；アイスクリーム、アイスシャーベット、かき氷等の冷菓；そば、うどん、はるさめ、ぎょうざの皮、しゅうまいの皮、中華麺、即席麺等の麺類；飴、チューインガム、キャンディー、ガム、チョコレート、錠菓、スナック菓子、ビスケット、ゼリー、ジャム、クリーム、焼き菓子等の菓子類；かまぼこ、ハム、ソーセージ等の水産・畜産加工食品；加工乳、発酵乳等の乳製品；サラダ油、てんぷら油、マーガリン、マヨネーズ、ショートニング、ホイップクリーム、ドレッシング等の油脂及び油脂加工食品；ソース、たれ等の調味料；スープ、シチュー、サラダ、惣菜、漬物などが挙げられる。

以上説明した本発明のコラーゲン産生促進剤、ヒアルロン酸産生促進剤、コラゲナーゼ阻害剤、抗老化剤、皮膚外用剤及び飲食品は、ヒトに対して好適に適用されるものであるが、それぞれの作用効果が奏される限り、ヒト以外の動物に対して適用することもできる。

以下、製造例、試験例及び配合例を示して本発明を具体的に説明するが、本発明は、下記の各例に何ら限定されるものではない。

〔製造例１〕
ニクタンテス・アルボートリスティス（Nyctanthes albor-tristis）の種子の粗粉砕物３００ｇを抽出溶媒３０００ｍＬに投入し、穏やかに攪拌しながら２時間、８０℃に保った。水、５０％エタノール又はエタノールの３種類の抽出溶媒を用いて上記抽出処理を行った後、ろ過し、ろ液を４０℃で減圧下にて濃縮し、さらに減圧乾燥機で乾燥させた。また、５０％ 1,3-ブチレングリコールを用いて上記抽出処理を行った後、１５００ｍＬまで濃縮させた。抽出溶媒として水、５０％エタノール、エタノールを用いたときの抽出率、並びに抽出溶媒として５０％ 1,3-ブチレングリコールを用いたときの固形分濃度を表１に示す。なお、表１において抽出溶媒が混合物の場合、その混合比は重量基準によるものである。

［表１］
試料NO. 抽 出 溶 媒 抽出率／固形分濃度(重量％)
１ 水 １５．９
２ エタノール/水(1/1) １２．７
３ エタノール １０．９
４ 1,3-ブチレングリコール/水(1/1) ２．４

〔製造例２〜４〕
製造例１と同様の処理を、抽出原料としてパイパー・チャバ（Piper chaba）の根部（製造例２；試料５〜８）、アントセファラス・インディカス（Anthocephalus indicus）の樹皮（製造例３；試料９〜１２）及びクロタラリア・サイチソイデス（Crotalaria cytisoides）の全草（製造例４；試料１３〜１６）を用いて行った。各抽出原料を用いたときの抽出率又は固形分濃度はそれぞれ表２、３及び４のとおりであった。

［表２］
試料NO. 抽 出 溶 媒 抽出率／固形分濃度(重量％)
５ 水 １２．８
６ エタノール/水(1/1) ９．２
７ エタノール ８．８
８ 1,3-ブチレングリコール/水(1/1) １．８

［表３］
試料NO. 抽 出 溶 媒 抽出率／固形分濃度(重量％)
９ 水 １５．４
10 エタノール/水(1/1) １３．１
11 エタノール １１．４
12 1,3-ブチレングリコール/水(1/1) ２．４

［表４］
試料NO. 抽 出 溶 媒 抽出率／固形分濃度(重量％)
13 水 １２．１
14 エタノール/水(1/1) ９．８
15 エタノール ８．１
16 1,3-ブチレングリコール/水(1/1) １．９

〔試験例１〕コラーゲン産生促進作用試験
製造例１〜４で得られた試料１〜１６について、下記の試験法によりコラーゲン産生促進作用を試験した。

ヒトの線維芽細胞を９６ｗｅｌｌプレートに播種し、３７℃、５％ＣＯ_２−９５％ａｉｒの下にて、試料添加培地（試料濃度：１００ｐｐｍ）（ｐｐｍ＝μｇ/ｍＬ）で数日間培養した後、上清９０μＬをＥＬＩＳＡプレートに移し換え、４℃、一晩でプレートに吸着させた後、溶液を捨て、０．０５％ Ｔｗｅｅｎ−２０を含むリン酸生理緩衝液（ＰＢＳ−Ｔ）にて、洗浄を行った。その後、１％ウシ血清アルブミンを含むリン酸生理緩衝液で、ブロッキング操作を行った。溶液を捨て、０．０５％ Ｔｗｅｅｎ−２０を含むリン酸生理緩衝液（ＰＢＳ−Ｔ）にて、洗浄を行い、抗ヒトコラーゲンタイプＩ抗体（ウサギＩｇＧ；ケミコン社製）を反応させた。溶液を捨て、０．０５％ Ｔｗｅｅｎ−２０を含むリン酸生理緩衝液（ＰＢＳ−Ｔ）にて、洗浄を行い、ＨＲＰ標識抗ウサギＩｇＧ抗体と反応させた後、同様の洗浄操作を行い、発色反応を行った。

コラーゲン産生促進率は、標準品を用いて上記ＥＬＩＳＡを行い、検量線を作成し、試料無添加時のコラーゲン産生量を１００％として算出した。各試料のコラーゲン産生促進率（％）を表５に示す。なお、試料が５０％ 1,3-ブチレングリコールを用いて得られる抽出液の場合、「試料濃度」は固形分換算濃度である。

[表５]
試料NO. 試料濃度１００ｐｐｍ
１ １２５．６％
２ １３８．４％
３ １３４．３％
４ １２１．８％
５ １６５．９％
６ １８３．５％
７ １８７．２％
８ １７９．０％
９ １０８．９％
10 １１０．１％
11 １１２．５％
12 １１２．９％
13 １６５．５％
14 １７６．９％
15 １７９．１％
16 １７０．６％

表５に示される結果より、ニクタンテス・アルボートリスティス抽出物（試料１〜４）、パイパー・チャバ抽出物（試料５〜８）、アントセファラス・インディカス抽出物（試料９〜１２）及びクロタラリア・サイチソイデス抽出物（試料１３〜１６）がいずれも、コラーゲン産生促進作用を有し、特に、パイパー・チャバ抽出物（試料５〜８）及びクロタラリア・サイチソイデス抽出物（試料１３〜１６）のコラーゲン産生促進作用が大きいことが確認された。

〔試験例２〕ヒアルロン酸産生促進作用の試験
製造例１〜４で得られた試料１〜１６について、下記の試験法によりヒアルロン酸産生促進作用を試験した。

ヒト正常新生児線維芽細胞（NB1RGB）１×１０^６個を、７５ｃｍ²フラスコを用いて１０％ＦＢＳを含むα−ＭＥＭ培地（ｐＨ７.２）で３７℃、５％ＣＯ_２−９５％ａｉｒの下にて７日間培養した。トリプシン処理により細胞を集め、１％ＦＢＳを含むα−ＭＥＭ培地を用いて２．２×１０⁴個／ｍＬに調整し９６ウェルプレートに１００μＬづつ播種し、３７℃、５％ＣＯ_２−９５％ａｉｒの下で一晩培養した。翌日、試料（試料１〜８，１３〜１６については試料濃度５０ｐｐｍ、試料９〜１２については試料濃度５０ｐｐｍ又は２００ｐｐｍ）を溶解した１％ＦＢＳを含むα−ＭＥＭ培地を各ｗｅｌｌに１００μＬずつ添加し、３７℃、５％ＣＯ_２−９５％ａｉｒの下で３日間培養した。

培養上清１０μＬを９０μＬのＰＢＳ(−)で１０倍希釈し、その５０μＬを、あらかじめヒアルロン酸でコーティングしておいたＥＬＩＳＡプレートに添加して各種抗体を用いてＥＬＩＳＡを行った。ヒアルロン酸の定量は検量線を用いて行った。ヒアルロン酸産生促進率は、試料無添加時の値を１００％として求めた。その結果を表６に示す。

［表６］
試料NO. 試料濃度５０ｐｐｍ 試料濃度２００ｐｐｍ
１ １１１．５％ −
２ １１２．７％ −
３ １１３．５％ −
４ １１１．２％ −
５ １３５．９％ −
６ １４０．１％ −
７ １４０．１％ −
８ １３９．８％ −
９ １１８．９％ １４７．０％
10 １２２．２％ １５７．３％
11 １２８．２％ １５５．８％
12 １２６．１％ １４７．８％
13 １１０．９％ −
14 １１２．３％ −
15 １１３．０％ −
16 １１０．１％ −

表６に示される結果より、ニクタンテス・アルボートリスティス抽出物（試料１〜４）、パイパー・チャバ抽出物（試料５〜８）、アントセファラス・インディカス抽出物（試料９〜１２）及びクロタラリア・サイチソイデス抽出物（試料１３〜１６）がいずれも、ヒアルロン酸産生促進作用を有し、特に、パイパー・チャバ抽出物（試料５〜８）のヒアルロン酸産生促進作用が大きいことが確認された。

〔試験例３〕コラゲナーゼ阻害作用試験
製造例１〜４で得られた試料１〜１６について、下記の試験法によりコラゲナーゼ阻害作用を試験した。

試料溶液（溶媒：２０ｍｍｏｌ／Ｌ塩化カルシウムを含有する０．１ｍｏｌ／Ｌトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７．１））５０μＬ、コラゲナーゼ溶液５０μＬ及び基質溶液４００μＬを混合し、３７℃で３０分間インキュベーションした。次いで２５ｍｍｏｌ／Ｌクエン酸溶液１ｍＬで反応を停止し、酢酸エチル５ｍＬで抽出した。得られた抽出液について、波長３２０ｎｍの吸光度（対照液：酢酸エチル）を測定した（この吸光度を以下「試料添加，酵素添加時の吸光度」という）。

また、上記と同様の酵素反応と吸光度測定を、試料溶液の代わりに試料溶液と等量の上記トリス塩酸緩衝液を添加して行った（この吸光度を以下「試料無添加，酵素添加時の吸光度」という）。

さらに、上記と同様の酵素反応と吸光度測定を、コラゲナーゼ溶液の代わりに上記トリス塩酸緩衝液を添加して行った（この吸光度を以下「試料添加，酵素無添加時の吸光度」という）。

さらに、上記と同様の酵素反応と吸光度測定を、試料溶液の代わりに試料溶液と等量の上記トリス塩酸緩衝液を添加するとともに、コラゲナーゼ溶液の代わりに上記トリス塩酸緩衝液を添加して行った（この吸光度を以下「試料無添加，酵素無添加時の吸光度」という）。

なお、コラゲナーゼ溶液はシグマ社のコラゲナーゼＴｙｐｅＩＶ ５ｍｇを上記トリス塩酸緩衝液１ｍＬに溶解させ、使用時に５０倍に希釈したものを使用した。基質溶液には、上記トリス塩酸緩衝液にBACHEM Fenichemikalien AG社Pz−ペプチドを濃度が０．５ｍｏｌ／Ｌになるように溶解して使用した。
次式によりコラゲナーゼ阻害率を算出した。

コラゲナーゼ阻害率（％）＝〔１−（Ａ−Ｂ）／（Ｃ−Ｄ）〕×１００
［式中、Ａは試料添加，酵素添加時の吸光度、Ｂは試料添加，酵素無添加時の吸光度、Ｃは試料無添加，酵素添加時の吸光度、Ｄは試料無添加，酵素無添加時の吸光度を表す。］

試料濃度が４００ｐｐｍ(ｐｐｍ＝μｇ／ｍＬ)であるときのコラゲナーゼ阻害率（％）を求めた。その結果を表７に示す。

[表７]
試料NO. 試料濃度４００ｐｐｍ
１ １２．３％
２ １４．１％
３ １６．５％
４ １３．８％
５ ２４．０％
６ ２６．２％
７ ２８．１％
８ ２３．０％
９ ２０．９％
10 ２３．７％
11 ２３．３％
12 ２２．７％
13 １１．６％
14 １２．８％
15 １３．０％
16 ９．６％

表７に示される結果より、ニクタンテス・アルボートリスティス抽出物（試料１〜４）、パイパー・チャバ抽出物（試料５〜８）、アントセファラス・インディカス抽出物（試料９〜１２）及びクロタラリア・サイチソイデス抽出物（試料１３〜１６）がいずれも、コラゲナーゼ阻害作用を有し、特に、パイパー・チャバ抽出物（試料５〜８）及びアントセファラス・インディカス抽出物（試料９〜１２）のコラゲナーゼ阻害作用が大きいことが確認された。

〔配合例１〕
下記の組成の乳液を常法により製造した。
ニクタンテス・アルボートリスティス抽出物（試料２） ０．１ｇ
パイパー・チャバ抽出物（試料６） ０．１ｇ
アントセファラス・インディカス抽出物（試料１０） ０．１ｇ
クロタラリア・サイチソイデス抽出物（試料１４） ０．１ｇ
ホホバオイル ４ｇ
オリーブオイル ２ｇ
スクワラン ２ｇ
セタノール ２ｇ
モノステアリン酸グリセリル ２ｇ
ポリオキシエチレンセチルエーテル（20E.0） ２．５ｇ
オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（20E.0） ２ｇ
１，３−ブチレングリコール ３ｇ
パラオキシ安息香酸メチル ０．１５ｇ
アスコルビン酸リン酸マグネシウム ０．１ｇ
黄杞エキス ０．１ｇ
イチョウ葉エキス ０．１ｇ
コンキオリン ０．１ｇ
オウバクエキス ０．１ｇ
カミツレエキス ０．１ｇ
グリチルリチン酸ジカリウム ０．１ｇ
香料 ０．０５ｇ
精製水 残部（全量を１００ｇとする）

〔配合例２〕
下記組成の化粧水を常法により製造した。
ニクタンテス・アルボートリスティス抽出物（試料３） ０．１ｇ
パイパー・チャバ抽出物（試料７） ０．１ｇ
アントセファラス・インディカス抽出物（試料１１） ０．１ｇ
クロタラリア・サイチソイデス抽出物（試料１５） ０．１ｇ
グリセリン ３ｇ
１，３−ブチレングリコール ３ｇ
オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（20E.0） ０．５ｇ
パラオキシ安息香酸メチル ０．１５ｇ
クエン酸 ０．１ｇ
クエン酸ソーダ ０．１ｇ
油溶性甘草エキス ０．１ｇ
海藻エキス ０．１ｇ
キシロビオースミクスチャー ０．５ｇ
クジンエキス ０．１ｇ
香料 ０．０５ｇ
精製水 残部（全量を１００ｇとする）

〔配合例３〕
下記組成のクリームを常法により製造した。
ニクタンテス・アルボートリスティス抽出物（試料４） ０．２ｇ
パイパー・チャバ抽出物（試料８） ０．１ｇ
アントセファラス・インディカス抽出物（試料１２） ０．１ｇ
クロタラリア・サイチソイデス抽出物（試料１６） ０．１ｇ
流動パラフィン ５ｇ
サラシミツロウ ４ｇ
セタノール ３ｇ
スクワラン １０ｇ
ラノリン ２ｇ
ステアリン酸 １ｇ
オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（20E.0） １．５ｇ
モノステアリン酸グリセリル ３ｇ
１，３−ブチレングリコール ６ｇ
パラオキシ安息香酸メチル １．５ｇ
酵母抽出液 ０．１ｇ
シソ抽出液 ０．１ｇ
シナノキ抽出液 ０．１ｇ
ジユ抽出液 ０．１ｇ
香料 ０．１ｇ
精製水 残部（全量を１００ｇとする）

〔配合例４〕
下記組成のパックを常法により製造した。
ニクタンテス・アルボートリスティス抽出物（試料４） ０．２ｇ
パイパー・チャバ抽出物（試料５） ０．１ｇ
アントセファラス・インディカス抽出物（試料９） ０．２ｇ
クロタラリア・サイチソイデス抽出物（試料１６） ０．２ｇ
ポリビニルアルコール １５ｇ
ポリエチレングリコール ３ｇ
プロピレングリコール ７ｇ
エタノール １０ｇ
パラオキシ安息香酸エチル ０．０５ｇ
酢酸トコフェロール ０．１ｇ
セージ抽出液 ０．１ｇ
トウキ抽出液 ０．１ｇ
ニンジン抽出液 ０．１ｇ
香料 ０．０５ｇ
精製水 残部（全量を１００ｇとする）

〔配合例５〕
下記の混合物を打錠して,錠剤状栄養補助食品を製造した。
ニクタンテス・アルボートリスティス抽出物（試料１） ３０重量部
パイパー・チャバ抽出物（試料５） １０重量部
アントセファラス・インディカス抽出物（試料９） １０重量部
クロタラリア・サイチソイデス抽出物（試料１３） ３０重量部
粉糖（ショ糖） １８８重量部
グリセリン脂肪酸エステル １２重量部

〔配合例６〕
下記の混合物を顆粒状に形成して栄養補助食品を製造した。
ニクタンテス・アルボートリスティス抽出物（試料２） ２０重量部
パイパー・チャバ抽出物（試料５） ５０重量部
アントセファラス・インディカス抽出物（試料１０） １０重量部
クロタラリア・サイチソイデス抽出物（試料１４） １０重量部
ビートオリゴ糖 １０００重量部
ビタミンＣ １６７重量部
ステビア抽出物 １０重量部

Claims (2)

1. ニクタンテス・アルボートリスティス（Nyctanthes albor-tristis）からの抽出物を有効成分として含有することを特徴とするコラーゲン産生促進剤。
2. ニクタンテス・アルボートリスティス（Nyctanthes albor-tristis）からの抽出物を有効成分として含有することを特徴とするコラゲナーゼ阻害剤。