JP4641945B2 - フラボノイド合成系の制御による黄色の花の作製方法 - Google Patents
フラボノイド合成系の制御による黄色の花の作製方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP4641945B2 JP4641945B2 JP2005516394A JP2005516394A JP4641945B2 JP 4641945 B2 JP4641945 B2 JP 4641945B2 JP 2005516394 A JP2005516394 A JP 2005516394A JP 2005516394 A JP2005516394 A JP 2005516394A JP 4641945 B2 JP4641945 B2 JP 4641945B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- gene
- plant
- seq
- cgt
- expression
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 title claims abstract description 20
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 title claims abstract description 16
- 229930003935 flavonoid Natural products 0.000 title claims description 19
- 150000002215 flavonoids Chemical class 0.000 title claims description 19
- 235000017173 flavonoids Nutrition 0.000 title claims description 19
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 133
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims abstract description 56
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims abstract description 10
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract 4
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims description 104
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 45
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 42
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 40
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 33
- DQFBYFPFKXHELB-UHFFFAOYSA-N Chalcone Natural products C=1C=CC=CC=1C(=O)C=CC1=CC=CC=C1 DQFBYFPFKXHELB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 31
- 235000005513 chalcones Nutrition 0.000 claims description 31
- 241000207875 Antirrhinum Species 0.000 claims description 30
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 25
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 claims description 19
- 241000167853 Linaria Species 0.000 claims description 17
- 150000001789 chalcones Chemical group 0.000 claims description 16
- DQFBYFPFKXHELB-VAWYXSNFSA-N trans-chalcone Chemical group C=1C=CC=CC=1C(=O)\C=C\C1=CC=CC=C1 DQFBYFPFKXHELB-VAWYXSNFSA-N 0.000 claims description 12
- 230000008859 change Effects 0.000 claims description 9
- 238000012546 transfer Methods 0.000 claims description 9
- 108010054947 Aureusidin synthase Proteins 0.000 claims description 8
- 238000012217 deletion Methods 0.000 claims description 4
- 230000037430 deletion Effects 0.000 claims description 4
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 claims description 4
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 claims description 4
- YEDFEBOUHSBQBT-UHFFFAOYSA-N 2,3-dihydroflavon-3-ol Chemical compound O1C2=CC=CC=C2C(=O)C(O)C1C1=CC=CC=C1 YEDFEBOUHSBQBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 108010018087 Flavanone 3-dioxygenase Proteins 0.000 claims description 3
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 claims description 3
- 241000222350 Pleurotus Species 0.000 claims description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 claims 1
- 101000744241 Antirrhinum majus Chalcone 4'-O-glucosyltransferase Proteins 0.000 abstract description 89
- 229930015036 aurone Natural products 0.000 abstract description 24
- OMUOMODZGKSORV-UVTDQMKNSA-N aurone Chemical compound O1C2=CC=CC=C2C(=O)\C1=C\C1=CC=CC=C1 OMUOMODZGKSORV-UVTDQMKNSA-N 0.000 abstract description 12
- 150000001530 aurones Chemical class 0.000 abstract description 12
- 101150055806 AS gene Proteins 0.000 abstract description 10
- 230000004186 co-expression Effects 0.000 abstract description 8
- 230000037361 pathway Effects 0.000 abstract description 4
- 229930002879 flavonoid pigment Natural products 0.000 abstract description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 77
- 229930182470 glycoside Natural products 0.000 description 56
- 150000002338 glycosides Chemical class 0.000 description 47
- 241000960400 Torenia Species 0.000 description 45
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 44
- 108700023372 Glycosyltransferases Proteins 0.000 description 44
- 102000051366 Glycosyltransferases Human genes 0.000 description 38
- 108700014210 glycosyltransferase activity proteins Proteins 0.000 description 37
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 30
- 239000013615 primer Substances 0.000 description 30
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 29
- WBEFUVAYFSOUEA-PQMHYQBVSA-N aureusidin Chemical compound O=C1C=2C(O)=CC(O)=CC=2O\C1=C/C1=CC=C(O)C(O)=C1 WBEFUVAYFSOUEA-PQMHYQBVSA-N 0.000 description 28
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 28
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 26
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 24
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 22
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 22
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 22
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 19
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 19
- 239000000047 product Substances 0.000 description 19
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 229930014669 anthocyanidin Natural products 0.000 description 17
- 235000008758 anthocyanidins Nutrition 0.000 description 17
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 17
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 16
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 15
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 14
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 13
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 13
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 12
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 240000007377 Petunia x hybrida Species 0.000 description 12
- HSCJRCZFDFQWRP-JZMIEXBBSA-N UDP-alpha-D-glucose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OP(O)(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](N2C(NC(=O)C=C2)=O)O1 HSCJRCZFDFQWRP-JZMIEXBBSA-N 0.000 description 12
- HSCJRCZFDFQWRP-UHFFFAOYSA-N Uridindiphosphoglukose Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OP(O)(=O)OP(O)(=O)OCC1C(O)C(O)C(N2C(NC(=O)C=C2)=O)O1 HSCJRCZFDFQWRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 238000000862 absorption spectrum Methods 0.000 description 12
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 12
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 12
- 229930002877 anthocyanin Natural products 0.000 description 11
- 235000010208 anthocyanin Nutrition 0.000 description 11
- 239000004410 anthocyanin Substances 0.000 description 11
- 150000004636 anthocyanins Chemical class 0.000 description 11
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 11
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 11
- -1 chalcone glycosides Chemical class 0.000 description 10
- NWKFECICNXDNOQ-UHFFFAOYSA-N flavylium Chemical group C1=CC=CC=C1C1=CC=C(C=CC=C2)C2=[O+]1 NWKFECICNXDNOQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 9
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 9
- 210000003934 vacuole Anatomy 0.000 description 9
- FTVWIRXFELQLPI-ZDUSSCGKSA-N (S)-naringenin Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1[C@H]1OC2=CC(O)=CC(O)=C2C(=O)C1 FTVWIRXFELQLPI-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 8
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 8
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 8
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 8
- WGEYAGZBLYNDFV-UHFFFAOYSA-N naringenin Natural products C1(=O)C2=C(O)C=C(O)C=C2OC(C1)C1=CC=C(CC1)O WGEYAGZBLYNDFV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 235000007625 naringenin Nutrition 0.000 description 8
- 229940117954 naringenin Drugs 0.000 description 8
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 8
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 8
- 241000894007 species Species 0.000 description 8
- KCTNGNPVURILGU-KRXBUXKQSA-N (e)-1-(4-chlorophenyl)-3-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)prop-2-en-1-one Chemical compound C1=C(O)C(OC)=CC(\C=C\C(=O)C=2C=CC(Cl)=CC=2)=C1 KCTNGNPVURILGU-KRXBUXKQSA-N 0.000 description 7
- 240000006497 Dianthus caryophyllus Species 0.000 description 7
- 235000009355 Dianthus caryophyllus Nutrition 0.000 description 7
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 7
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 7
- 150000001452 anthocyanidin derivatives Chemical group 0.000 description 7
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 7
- 102000006602 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Human genes 0.000 description 7
- 108020004445 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Proteins 0.000 description 7
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 7
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 7
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 7
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 7
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 7
- 240000001436 Antirrhinum majus Species 0.000 description 6
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 6
- 235000004347 Perilla Nutrition 0.000 description 6
- 244000124853 Perilla frutescens Species 0.000 description 6
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 6
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 6
- KZMACGJDUUWFCH-UHFFFAOYSA-O malvidin Chemical compound COC1=C(O)C(OC)=CC(C=2C(=CC=3C(O)=CC(O)=CC=3[O+]=2)O)=C1 KZMACGJDUUWFCH-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 6
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 6
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 6
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 6
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 5
- 101150010772 F3H gene Proteins 0.000 description 5
- 101150099983 GT gene Proteins 0.000 description 5
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 5
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 5
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 5
- 108010060641 flavanone synthetase Proteins 0.000 description 5
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 5
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 5
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 description 5
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 5
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 5
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 5
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 5
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 4
- 108010004539 Chalcone isomerase Proteins 0.000 description 4
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 4
- 101150002919 DFR gene Proteins 0.000 description 4
- 241000510032 Ellipsaria lineolata Species 0.000 description 4
- 241001071795 Gentiana Species 0.000 description 4
- 240000001549 Ipomoea eriocarpa Species 0.000 description 4
- 235000005146 Ipomoea eriocarpa Nutrition 0.000 description 4
- 108091030071 RNAI Proteins 0.000 description 4
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 4
- AYMYWHCQALZEGT-ORCRQEGFSA-N butein Chemical compound OC1=CC(O)=CC=C1C(=O)\C=C\C1=CC=C(O)C(O)=C1 AYMYWHCQALZEGT-ORCRQEGFSA-N 0.000 description 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 4
- 108010011897 chalcone reductase Proteins 0.000 description 4
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 4
- 230000006870 function Effects 0.000 description 4
- 230000009368 gene silencing by RNA Effects 0.000 description 4
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 4
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 4
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 4
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 4
- YQHMWTPYORBCMF-ZZXKWVIFSA-N 2',4,4',6'-tetrahydroxychalcone Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1\C=C\C(=O)C1=C(O)C=C(O)C=C1O YQHMWTPYORBCMF-ZZXKWVIFSA-N 0.000 description 3
- 241000219194 Arabidopsis Species 0.000 description 3
- 101150096010 CGT gene Proteins 0.000 description 3
- 241000612153 Cyclamen Species 0.000 description 3
- 241000252233 Cyprinus carpio Species 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 3
- YQHMWTPYORBCMF-UHFFFAOYSA-N Naringenin chalcone Natural products C1=CC(O)=CC=C1C=CC(=O)C1=C(O)C=C(O)C=C1O YQHMWTPYORBCMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 3
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 3
- VGEREEWJJVICBM-UHFFFAOYSA-N Phloretin Natural products C1=CC(O)=CC=C1CCC(=O)C1=C(O)C=C(O)C=C1O VGEREEWJJVICBM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000002105 Southern blotting Methods 0.000 description 3
- 235000007212 Verbena X moechina Moldenke Nutrition 0.000 description 3
- 240000001519 Verbena officinalis Species 0.000 description 3
- 235000001594 Verbena polystachya Kunth Nutrition 0.000 description 3
- 235000007200 Verbena x perriana Moldenke Nutrition 0.000 description 3
- 235000002270 Verbena x stuprosa Moldenke Nutrition 0.000 description 3
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000037429 base substitution Effects 0.000 description 3
- 230000006696 biosynthetic metabolic pathway Effects 0.000 description 3
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 3
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 3
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 239000000287 crude extract Substances 0.000 description 3
- 229930186364 cyclamen Natural products 0.000 description 3
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 3
- 238000010195 expression analysis Methods 0.000 description 3
- 101150054900 gus gene Proteins 0.000 description 3
- 235000009584 malvidin Nutrition 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 3
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 3
- 230000017260 vegetative to reproductive phase transition of meristem Effects 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- LPLLVINFLBSFRP-UHFFFAOYSA-N 2-methylamino-1-phenylpropan-1-one Chemical compound CNC(C)C(=O)C1=CC=CC=C1 LPLLVINFLBSFRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101150030573 5GT gene Proteins 0.000 description 2
- 241000589158 Agrobacterium Species 0.000 description 2
- 102100034280 Ankyrin repeat domain-containing protein 26 Human genes 0.000 description 2
- 101100226484 Arabidopsis thaliana CYP75B1 gene Proteins 0.000 description 2
- 241000228245 Aspergillus niger Species 0.000 description 2
- 241000218993 Begonia Species 0.000 description 2
- 241000255789 Bombyx mori Species 0.000 description 2
- 101150023103 CHI gene Proteins 0.000 description 2
- 235000007516 Chrysanthemum Nutrition 0.000 description 2
- 244000189548 Chrysanthemum x morifolium Species 0.000 description 2
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 2
- 240000003023 Cosmos bipinnatus Species 0.000 description 2
- 235000005956 Cosmos caudatus Nutrition 0.000 description 2
- 235000012040 Dahlia pinnata Nutrition 0.000 description 2
- 244000033273 Dahlia variabilis Species 0.000 description 2
- ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N Formamide Chemical compound NC=O ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000208152 Geranium Species 0.000 description 2
- 101000780116 Homo sapiens Ankyrin repeat domain-containing protein 26 Proteins 0.000 description 2
- 101001036145 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase greatwall Proteins 0.000 description 2
- 240000004658 Medicago sativa Species 0.000 description 2
- 235000017587 Medicago sativa ssp. sativa Nutrition 0.000 description 2
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 description 2
- 101100494423 Oryza sativa subsp. japonica CYP75B3 gene Proteins 0.000 description 2
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 2
- 241000220317 Rosa Species 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 108091081024 Start codon Proteins 0.000 description 2
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 2
- 244000098338 Triticum aestivum Species 0.000 description 2
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 2
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 2
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 2
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 2
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 2
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 2
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 2
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- DXDRHHKMWQZJHT-FPYGCLRLSA-N isoliquiritigenin Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1\C=C\C(=O)C1=CC=C(O)C=C1O DXDRHHKMWQZJHT-FPYGCLRLSA-N 0.000 description 2
- BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N isopropyl beta-D-thiogalactopyranoside Chemical compound CC(C)S[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 description 2
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 2
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 2
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 2
- 238000000527 sonication Methods 0.000 description 2
- 238000011426 transformation method Methods 0.000 description 2
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 2
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- HKQJXIALKSCCKD-AATRIKPKSA-N (e)-3-(2-hydroxyphenyl)-1-(2,4,6-trihydroxyphenyl)prop-2-en-1-one Chemical compound OC1=CC(O)=CC(O)=C1C(=O)\C=C\C1=CC=CC=C1O HKQJXIALKSCCKD-AATRIKPKSA-N 0.000 description 1
- 101150072531 10 gene Proteins 0.000 description 1
- CRBYNQCDRNZCNX-UHFFFAOYSA-N 2',3,4,4',6'-Pentahydroxychalcone Natural products OC1=CC(O)=CC(O)=C1C(=O)C=CC1=CC=C(O)C(O)=C1 CRBYNQCDRNZCNX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LDXJRKWFNNFDSA-UHFFFAOYSA-N 2-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)-1-[4-[2-[[3-(trifluoromethoxy)phenyl]methylamino]pyrimidin-5-yl]piperazin-1-yl]ethanone Chemical compound C1CN(CC2=NNN=C21)CC(=O)N3CCN(CC3)C4=CN=C(N=C4)NCC5=CC(=CC=C5)OC(F)(F)F LDXJRKWFNNFDSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JQMFQLVAJGZSQS-UHFFFAOYSA-N 2-[4-[2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)pyrimidin-5-yl]piperazin-1-yl]-N-(2-oxo-3H-1,3-benzoxazol-6-yl)acetamide Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)N1CCN(CC1)CC(=O)NC1=CC2=C(NC(O2)=O)C=C1 JQMFQLVAJGZSQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZRPAUEVGEGEPFQ-UHFFFAOYSA-N 2-[4-[2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)pyrimidin-5-yl]pyrazol-1-yl]-1-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)ethanone Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)C=1C=NN(C=1)CC(=O)N1CC2=C(CC1)NN=N2 ZRPAUEVGEGEPFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JVKRKMWZYMKVTQ-UHFFFAOYSA-N 2-[4-[2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)pyrimidin-5-yl]pyrazol-1-yl]-N-(2-oxo-3H-1,3-benzoxazol-6-yl)acetamide Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)C=1C=NN(C=1)CC(=O)NC1=CC2=C(NC(O2)=O)C=C1 JVKRKMWZYMKVTQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SNBCLPGEMZEWLU-QXFUBDJGSA-N 2-chloro-n-[[(2r,3s,5r)-3-hydroxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl]acetamide Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CNC(=O)CCl)[C@@H](O)C1 SNBCLPGEMZEWLU-QXFUBDJGSA-N 0.000 description 1
- CONKBQPVFMXDOV-QHCPKHFHSA-N 6-[(5S)-5-[[4-[2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)pyrimidin-5-yl]piperazin-1-yl]methyl]-2-oxo-1,3-oxazolidin-3-yl]-3H-1,3-benzoxazol-2-one Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)N1CCN(CC1)C[C@H]1CN(C(O1)=O)C1=CC2=C(NC(O2)=O)C=C1 CONKBQPVFMXDOV-QHCPKHFHSA-N 0.000 description 1
- CNNSWSHYGANWBM-UHFFFAOYSA-N 6-chloro-2,3-dimethylquinoxaline Chemical compound C1=C(Cl)C=C2N=C(C)C(C)=NC2=C1 CNNSWSHYGANWBM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TWCMVXMQHSVIOJ-UHFFFAOYSA-N Aglycone of yadanzioside D Natural products COC(=O)C12OCC34C(CC5C(=CC(O)C(O)C5(C)C3C(O)C1O)C)OC(=O)C(OC(=O)C)C24 TWCMVXMQHSVIOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004382 Amylase Substances 0.000 description 1
- 102000013142 Amylases Human genes 0.000 description 1
- 108010065511 Amylases Proteins 0.000 description 1
- 240000006439 Aspergillus oryzae Species 0.000 description 1
- 235000002247 Aspergillus oryzae Nutrition 0.000 description 1
- PLMKQQMDOMTZGG-UHFFFAOYSA-N Astrantiagenin E-methylester Natural products CC12CCC(O)C(C)(CO)C1CCC1(C)C2CC=C2C3CC(C)(C)CCC3(C(=O)OC)CCC21C PLMKQQMDOMTZGG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 1
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 1
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 1
- 240000002791 Brassica napus Species 0.000 description 1
- 235000011299 Brassica oleracea var botrytis Nutrition 0.000 description 1
- 240000003259 Brassica oleracea var. botrytis Species 0.000 description 1
- 235000004977 Brassica sinapistrum Nutrition 0.000 description 1
- 101100275473 Caenorhabditis elegans ctc-3 gene Proteins 0.000 description 1
- 244000025254 Cannabis sativa Species 0.000 description 1
- 241000252229 Carassius auratus Species 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 241000270281 Coluber constrictor Species 0.000 description 1
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 1
- 230000004544 DNA amplification Effects 0.000 description 1
- 238000007400 DNA extraction Methods 0.000 description 1
- 239000003155 DNA primer Substances 0.000 description 1
- 108010044229 Dihydroflavanol 4-reductase Proteins 0.000 description 1
- 241000588722 Escherichia Species 0.000 description 1
- 244000166124 Eucalyptus globulus Species 0.000 description 1
- 241000490229 Eucephalus Species 0.000 description 1
- 241000206602 Eukaryota Species 0.000 description 1
- 241000511010 Eustoma Species 0.000 description 1
- 101710130467 Flavone synthase Proteins 0.000 description 1
- 108010062650 Flavonoid 3',5'-hydroxylase Proteins 0.000 description 1
- 108010076511 Flavonol synthase Proteins 0.000 description 1
- 241000555712 Forsythia Species 0.000 description 1
- 241000597000 Freesia Species 0.000 description 1
- 241000735332 Gerbera Species 0.000 description 1
- 241000245654 Gladiolus Species 0.000 description 1
- 108010055629 Glucosyltransferases Proteins 0.000 description 1
- 102000000340 Glucosyltransferases Human genes 0.000 description 1
- 101100175482 Glycine max CG-3 gene Proteins 0.000 description 1
- 241001316290 Gypsophila Species 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 240000005979 Hordeum vulgare Species 0.000 description 1
- 235000007340 Hordeum vulgare Nutrition 0.000 description 1
- 241001495448 Impatiens <genus> Species 0.000 description 1
- 244000017020 Ipomoea batatas Species 0.000 description 1
- 235000002678 Ipomoea batatas Nutrition 0.000 description 1
- 241000191398 Kalanchoe blossfeldiana Species 0.000 description 1
- 102000003960 Ligases Human genes 0.000 description 1
- 108090000364 Ligases Proteins 0.000 description 1
- 241000234435 Lilium Species 0.000 description 1
- 241000714600 Linaria incarnata Species 0.000 description 1
- 241001490312 Lithops pseudotruncatella Species 0.000 description 1
- 241000219745 Lupinus Species 0.000 description 1
- 235000007688 Lycopersicon esculentum Nutrition 0.000 description 1
- LTYOQGRJFJAKNA-KKIMTKSISA-N Malonyl CoA Natural products S(C(=O)CC(=O)O)CCNC(=O)CCNC(=O)[C@@H](O)C(CO[P@](=O)(O[P@](=O)(OC[C@H]1[C@@H](OP(=O)(O)O)[C@@H](O)[C@@H](n2c3ncnc(N)c3nc2)O1)O)O)(C)C LTYOQGRJFJAKNA-KKIMTKSISA-N 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 240000005561 Musa balbisiana Species 0.000 description 1
- 235000018290 Musa x paradisiaca Nutrition 0.000 description 1
- AMQJEAYHLZJPGS-UHFFFAOYSA-N N-Pentanol Chemical compound CCCCCO AMQJEAYHLZJPGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 241000233855 Orchidaceae Species 0.000 description 1
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 description 1
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 1
- 241000208181 Pelargonium Species 0.000 description 1
- 241000228143 Penicillium Species 0.000 description 1
- 241000219000 Populus Species 0.000 description 1
- 108020005091 Replication Origin Proteins 0.000 description 1
- ZONYXWQDUYMKFB-UHFFFAOYSA-N SJ000286395 Natural products O1C2=CC=CC=C2C(=O)CC1C1=CC=CC=C1 ZONYXWQDUYMKFB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 1
- 240000003768 Solanum lycopersicum Species 0.000 description 1
- 244000061456 Solanum tuberosum Species 0.000 description 1
- 235000002595 Solanum tuberosum Nutrition 0.000 description 1
- 241000736285 Sphagnum Species 0.000 description 1
- 241000519999 Stachys Species 0.000 description 1
- 101100370749 Streptomyces coelicolor (strain ATCC BAA-471 / A3(2) / M145) trpC1 gene Proteins 0.000 description 1
- 108020005038 Terminator Codon Proteins 0.000 description 1
- 241000863480 Vinca Species 0.000 description 1
- 241000219094 Vitaceae Species 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 235000019418 amylase Nutrition 0.000 description 1
- 108010031387 anthocyanidin synthase Proteins 0.000 description 1
- 150000001453 anthocyanidins Chemical group 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 1
- 235000016614 betalains Nutrition 0.000 description 1
- 108010017639 betanidin 5-O-glucosyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 108010043534 betanidin 6-O-glucosyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 210000000081 body of the sternum Anatomy 0.000 description 1
- 230000005200 bud stage Effects 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 239000001273 butane Substances 0.000 description 1
- 238000010804 cDNA synthesis Methods 0.000 description 1
- 235000021466 carotenoid Nutrition 0.000 description 1
- 150000001747 carotenoids Chemical class 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 238000009402 cross-breeding Methods 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 210000002472 endoplasmic reticulum Anatomy 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000001400 expression cloning Methods 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 229930003949 flavanone Natural products 0.000 description 1
- 150000002208 flavanones Chemical class 0.000 description 1
- 235000011981 flavanones Nutrition 0.000 description 1
- 108010015706 flavonoid 3'-hydroxylase Proteins 0.000 description 1
- OQZCSNDVOWYALR-UHFFFAOYSA-N flurochloridone Chemical compound FC(F)(F)C1=CC=CC(N2C(C(Cl)C(CCl)C2)=O)=C1 OQZCSNDVOWYALR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010230 functional analysis Methods 0.000 description 1
- 238000001641 gel filtration chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000004034 genetic regulation Effects 0.000 description 1
- 229930182478 glucoside Natural products 0.000 description 1
- 230000001279 glycosylating effect Effects 0.000 description 1
- 235000021021 grapes Nutrition 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- PFOARMALXZGCHY-UHFFFAOYSA-N homoegonol Natural products C1=C(OC)C(OC)=CC=C1C1=CC2=CC(CCCO)=CC(OC)=C2O1 PFOARMALXZGCHY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005805 hydroxylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000014726 immortalization of host cell Effects 0.000 description 1
- 229930190166 impatien Natural products 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 235000021374 legumes Nutrition 0.000 description 1
- LTYOQGRJFJAKNA-DVVLENMVSA-N malonyl-CoA Chemical compound O[C@@H]1[C@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OCC(C)(C)[C@@H](O)C(=O)NCCC(=O)NCCSC(=O)CC(O)=O)O[C@H]1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 LTYOQGRJFJAKNA-DVVLENMVSA-N 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 238000000691 measurement method Methods 0.000 description 1
- 230000037353 metabolic pathway Effects 0.000 description 1
- 230000011987 methylation Effects 0.000 description 1
- 238000007069 methylation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- IJDNQMDRQITEOD-UHFFFAOYSA-N n-butane Chemical compound CCCC IJDNQMDRQITEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OFBQJSOFQDEBGM-UHFFFAOYSA-N n-pentane Natural products CCCCC OFBQJSOFQDEBGM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 239000003375 plant hormone Substances 0.000 description 1
- 230000037039 plant physiology Effects 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 230000032361 posttranscriptional gene silencing Effects 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 238000006798 ring closing metathesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000010902 straw Substances 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- CRBYNQCDRNZCNX-DUXPYHPUSA-N trans-2',3,4,4',6'-pentahydroxychalcone Chemical compound OC1=CC(O)=CC(O)=C1C(=O)\C=C\C1=CC=C(O)C(O)=C1 CRBYNQCDRNZCNX-DUXPYHPUSA-N 0.000 description 1
- DMZOKBALNZWDKI-MATMFAIHSA-N trans-4-coumaroyl-CoA Chemical compound O=C([C@H](O)C(C)(COP(O)(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]1[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O1)N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1)OP(O)(O)=O)C)NCCC(=O)NCCSC(=O)\C=C\C1=CC=C(O)C=C1 DMZOKBALNZWDKI-MATMFAIHSA-N 0.000 description 1
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 1
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 101150016309 trpC gene Proteins 0.000 description 1
- 230000009105 vegetative growth Effects 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
- C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
- C12N15/8242—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with non-agronomic quality (output) traits, e.g. for industrial processing; Value added, non-agronomic traits
- C12N15/8243—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with non-agronomic quality (output) traits, e.g. for industrial processing; Value added, non-agronomic traits involving biosynthetic or metabolic pathways, i.e. metabolic engineering, e.g. nicotine, caffeine
- C12N15/825—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with non-agronomic quality (output) traits, e.g. for industrial processing; Value added, non-agronomic traits involving biosynthetic or metabolic pathways, i.e. metabolic engineering, e.g. nicotine, caffeine involving pigment biosynthesis
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
本発明はまた、(2)配列番号2に記載のアミノ酸配列を有する前記(1)記載の遺伝子を提供する。
本発明はまた、(3)配列番号1に記載する塩基配列の一部または全部に対して、5 x SSC、50℃の条件下でハイブリダイズし、かつカルコン類の4'位に糖を転移する活性を有する蛋白質をコードする前記(1)記載の遺伝子を提供する。
本発明はまた、(4)配列番号2に記載のアミノ酸配列に対して1個又は複数個のアミノ酸の付加、欠失及び/又は他のアミノ酸による置換によって修飾されているアミノ酸配列を有し、カルコン類の4'位に糖を転移する活性を有するタンパク質をコードする前記(1)に記載の遺伝子を提供する。
本発明はまた、(6)ゴマノハグサ科由来である前記(1)〜(5)のいずれか1項に記載の遺伝子を提供する。
本発明はまた、(7)前記(1)〜(6)のいずれか1項に記載の遺伝子を含んでなるベクターを提供する。
本発明はまた、(8)前記(7)に記載のベクターにより形質転換された宿主細胞を提供する。
本発明はまた、(9)前記(1)〜(6)のいずれか1項に記載の遺伝子によってコードされるタンパク質を提供する。
本発明はまた、(11)前記(1)〜(6)のいずれか1項に記載の遺伝子が導入された植物体もしくは当該植物体と同一の性質を有する該植物体の子孫となる植物体、またはそれら植物体の組織を提供する。
本発明はまた、(12)前記(11)に記載の植物体の切り花を提供する。
本発明はまた、(13)前記(1)〜(6)のいずれか1項に記載の遺伝子を用いてカルコン類の4'位に糖を転移する方法を提供する。
本発明はまた、(15)花色が黄色味を帯びていることを特徴とする前記(14)に記載の植物体を提供する。
本発明はまた、(16)前記(1)〜(6)のいずれか1項に記載の遺伝子と共にオーレウシジン合成酵素をコードする遺伝子を植物体に導入、発現させ、花色を黄色く改変させる方法を提供する。
本発明はまた、(18)前記(1)〜(6)のいずれか1項に記載の遺伝子と共にオーレウシジン合成酵素をコードする遺伝子を植物体に導入、発現させ、さらに宿主のジヒドロフラボノール還元酵素遺伝子の発現を抑制することによって花色を黄色く改変させる方法を提供する。
また、ハイブリダイゼーションによって選択される遺伝子はcDNAであってもよく、ゲノムDNAであってもよい。
さらに、得られた4'CGT遺伝子を適切な宿主細胞で発現させることにより、当該遺伝子の産物である4'CGTタンパク質を得ることができる。あるいはまた、配列番号2に記載のアミノ酸配列の全部又は一部を有するタンパク質又はペプチドに対する抗体を用いて他の生物の4'CGT遺伝子を発現クローニングによって得ることもできる。
黄色のキンギョソウである品種バタフライイエローの新鮮な花弁5gから論文(Science 290, 1163 (2000))に記載のようにしてcDNAライブラリーを構築した。得られたライブラリーは、1.6 x 105 plaque forming unitからなっていた。
すでに開示されているGTのアミノ酸配列を比較し、これらのアミノ酸配列の保存領域に相当する塩基配列を増幅し、これをプローブとして実施例1で述べたキンギョソウcDNA ライブラリーをスクリーニングした。
配列番号3 : 5’-GAA ATG GTC GGA TTG GCT GGG-3’
配列番号4 : 5’-ACC TCC ACC CCA ACT TTC AGG-3’
ペチュニア3GT
配列番号5 : 5’-GAT GCA TAA TTT GGC TAG AAA AGC-3’
配列番号6 : 5’-CCA ATT TGC CAA ACA CTT TCC-3’
バーベナ5GT
配列番号7 : 5’-TGC CTC GAA TGG TTG AGC ACG-3’
配列番号8 : 5’-CTC TCA CTC TCA CAC CCG-3’
配列番号9 : 5’-CAC GAA TGC TTA GCA TGG CTC-3’
配列番号10 : 5’-CTT ATT GCC CAC TGA AAC CCC-3’
リンドウ3’GT
配列番号11 :5’-TGT CTG AAT TGG CTT GAT TCC-3’
配列番号12 :5’-AAC CCA CAG AAA CCC CTG TTC-3’
3-1 大腸菌発現ベクターの構築と大腸菌におけるGTの発現
実施例2で得られた10種類のcDNAにコードされるGT活性を大腸菌発現系を用いて解析した。まず、各cDNAの大腸菌発現コンストラクトを作製した。PCR法によって各cDNAの開始コドンと考えられる塩基配列ATGに重なる様にNcoIサイトを導入し、開始メチオニンから終止コドンに至る領域を大腸菌発現ベクターpQE61(QIAGEN)の NcoIおよびKpnI、またはNcoIおよびEcoRVサイトに連結した。
配列番号24: 5’-ggg gga tcc atg gct agt gag agc caa ata-3’
1617XhoIKpnI-RW
配列番号25: 5’-ccc ctc gag ggt acc tca caa aac att att cac gac-3’
H2Oで平衡化済みの逆相樹脂、TOYOPEARL HW-40F(TOSOH) 1mlにTHC(500μg/mlエタノール溶液)をH2Oで希釈しながら負荷した後、水洗することにより、樹脂に固定された基質THCを得た。この樹脂固定されたTHC 100μlに3-1で得られた粗酵素液200μlおよび5mM UDP-glucose 10μlを加え、30℃で1時間反応させた。遠心して上清を除去後、沈殿した樹脂を水洗し、0.1% TFA (Trifluoroacetic acid)を含む50%アセトニトリル300μlに懸濁し、超音波処理によりフラボノイドを樹脂より遊離した。15,000 rpm、5分、4℃で遠心分離し、得られた上清をフィルター(ポアサイズ0.45mm、4mm Millex-LH、ミリポア)を用いて不溶物を除去して、上清を液体高速クロマトグラフィー(以下HPLC)で分析した。カルコンおよびその配糖体の分析条件は以下の通りである。
黄色キンギョソウ花弁のcDNAライブラリー約30万クローンをpSPB1617cDNA全長をプローブとして再度スクリーニングした。PCRによるプローブラベリングには、1617-F(配列番号:26)ならびに1617-R(配列番号:27)プライマ-を用い、実施例2記載の方法と同様に行った。スクリーニングと塩基配列の解析方法も実施例2と同様である。
配列番号26 : 5'-ATG GGA GAA GAA TAC AAG AAA ACA-3’
1617-R
配列番号27 : 5'-TAA AAT TTG GTA GTT AAA CCG ATG TA-3’
その結果、新規GT遺伝子を5種、pSPB1721、1724、1723、1719、1725を得た。それぞれの配列を配列表に示した(配列番号:28〜31及び1)。
5-1.発現ベクターの構築
実施例4で得られた5種類のcDNAについて、大腸菌発現系を用い各cDNAにコードされるタンパク質の酵素活性の測定を調べた。発現ベクターの構築ならびに発現方法、活性測定方法は実施例3と同様である。例えばpSPB1725については、開始コドンの5’側にNcoI 認識配列を導入するために、以下に示すプライマー2種1725-NcoI(配列番号:32)、1725-KpnI (配列番号:33)を用いてPCR反応を行った。
配列番号32 : 5'-CCC ATG GGA GAA GAA TAC AAG AAA-3’
1725-KpnI
配列番号33 : 5'-GGT ACC TAT AAA ATT TGG TAG TTA AA-3’
PCR液(25μl)は、pSP1725 DNA 10ng, 1x ExTaq buffer (Takara), 0.2mM dNTPs, 1725-NcoI、1725-KpnIプライマー各0.2 pmol/μl, ExTaq polymerase 1.25 Uからなる 。
実施例5-1で得られた大腸菌形質転換株を、実施例3と同様の条件で培養し、それぞれのcDNAにコードされるタンパク質の活性測定を行った。その結果、pSPB1768を含む大腸菌の粗酵素液とTHCの反応物中に、THC配糖体と思われるピークを検出した。このTHC配糖体をさらに詳しく同定するために、以下に記載のTHC2’位配糖体とTHC4’位配糖体を分離する条件にて再度HPLC分析を行った。
RT-PCR法によってpSPB1725にコードされる4'CGT遺伝子の黄色キンギョソウ花弁における発現様式を解析した。オーロン類を蓄積する黄色キンギョソウ(バタフライイエロー品種)の花弁を成長段階に沿って5ステージに分離した。若い順に、ステージ1(蕾花弁長1cm以下),2(蕾か弁長1.0−1.5cm),3(蕾花弁長1.5−2.0cm),4(花弁長2.0−2.5cm、開花直前)および5(花弁長2.5cm以上、開花後の花弁)の5段階とし、ステージ5は成熟した花弁に対応する。
AmGAPDH-F
AmGAPDH-R
配列番号36:5'-agc tct tcc acc tct cca-3’
AmAS-F
配列番号37:5'-atg ttc aaa aat cct aat atc cgc-3’
AmAS-R
配列番号38:5'-tta gcc atc aag ctc aat ctt gac a-3’
以上の結果からpSPB1725にコードされる4'CGT遺伝子は、キンギョソウ花弁内においてAS遺伝子と同一の発現制御支配下に存在することが考えられ、両者は同一の生合成経路、すなわちオーロン類の生合成経路に関わっていると考えられる。
7-1 4'CGT発現カセットの構築
pBE2113-GUS(Plant Cell Physiol. 37, 49 (1996))をSnaBIで消化し、再連結することによりomega配列を除き、得られたプラスミドをpUE6とした。一方、pUCAP (van Engelen et al. Transgenic Research 4, 288-290, 1995)をAscIで消化し、平滑末端化後、PacIリンカーを挿入したプラスミドをpUCPPとした。pUE6のEl235SプロモーターからNOSターミネーターまでを有する断片を、pUCPPのHindIIIとEcoRIサイトに挿入しpSPB540を得た。pSPB540のGUS遺伝子部分をpSPB1725から切り出される4'CGT cDNA断片に置換し得られたプラスミドをpSFL203とした。すなわち、pSFL203はpUCPPをベクターとし、El235SプロモーターとNOSターミネーターで制御される4'CGT発現カセットを有するものである。
キンギョソウ由来のAS cDNA (Science 290, 1163, (2000))がpBluescript II SK-ベクター(Stratagene)のEcoRIとXhoIサイトに挿入したプラスミドをpSPB251とした。pBINPLUS (van Engelen et al. Transgenic Research 4, 288-290, 1995)にMacIプロモーター、pSPB251から切り出したAS cDNA断片、MASターミネーターを連結したAS発現コンストラクトをpSPB1624とした。
7-3 4’CGTとASの共発現コンストラクトの作製
7-1に記載のpSFL203をPacIで切断し、カルコン配糖化酵素遺伝子発現カセットを切り出し、これを7-2記載のpSPB1624のPacIサイトに挿入した。得られたコンストラクトをpSFL201とした。よってpSFL201は植物細胞に導入された場合、4'CGT遺伝子とAS遺伝子が構成的に発現するように設計されている。
8-1トレニア由来のDFR遺伝子発現抑制カセットの構築
トレニアのジヒドロフラボノール還元酵素(DFR)cDNAについては論文(Plant Science 153, 33,2000)に記載のようにして取得した。トレニアDFR cDNAがベクターpBluescriptII SK−と連結したプラスミドをpTDF10とした。これを鋳型とし、ベクター配列に由来するM13リバースプライマ−(配列番号39)とトレニアDFRcDNA配列に塩基置換でNcoI認識部位を導入したプライマ−ThDFR-NcoI(配列番号40)を用いて、実施例3に記載のようにしてPCRを行った。得られた約0.75kbのフラグメントをpCR2.1-TOPO(インビトロジェン)にクローニングし、塩基配列を確認したのち、SacIとNcoIで0.75kbのトレニアDFR cDNA配列を切り出した。
配列番号39:5'-AACAGCTATGACCATG-3’
ThDFR-NcoI
配列番号40:5'-GCTTTACCATGGAGTAATGAGCTT-3’
7-1記載のpUE6のNOSターミネータ−上流にXhoIリンカーを挿入した。このプラスミドをBamHIとXhoIで消化して得られるEl235Sプロモーター〜ベクター〜NOSターミネーターからなる断片と7-2記載のpSPB215からBamHIとXhoIで切り出したAS cDNA断片を連結しpSPB211を得た。pSPB211からHindIIIとEcoRIでAS発現カセットを切り出し、これをpBINPLUSのHindIIIとEcoRIサイトに挿入した。このようにして得られたプラスミドのPacIサイトに、7-1記載のpSFL203をPacI切断して得られる4’CGT発現カセットを挿入し、4'CGTとASの発現カセットがタンデムに連結したpSFL304を得た。さらに8-1記載のトレニアDFR 二本鎖RNA転写カセットをpSFL304のAscIサイトに挿入し、pSFL307を得た。つまりpSFL307は4'CGTとASの発現ならびにトレニアのDFR遺伝子発現抑制のための3つのカセットを有する。
9-1トレニア由来のF3HcDNAのクローニングと同遺伝子発現抑制カセットの構築
シソから得られたF3H cDNA(Plant Mol Biol., 35, 915 (1997))をプローブとして、トレニアの同酵素をコードするcDNAを取得した。すなわち、実施例2同様にして、トレニアcDNAライブラリー(Molecular Breeding, 6, 239, 2000)約20万のファージをスクリーニングした結果、配列番号41に示すトレニアF3H cDNAを得た。トレニアF3HcDNAがベクターpBluescriptII SK−と連結したプラスミドをpSPB266とした。これを鋳型とし、ベクター配列に由来するM13リバースプライマ−(配列番号39)とトレニアF3HcDNA配列に塩基置換でSalI認識部位を挿入したプライマ−ThF3H-SalI-1(配列番号42)を用いて、実施例3同様にしてPCRを行った。
配列番号42: 5'-ttctctgtcgacgcccattgcc-3’
ThF3H-SalI-2
配列番号43: 5'-cgccgtgtcgactcgcttgaag-3’
9-1記載のpSFL313からAscI切断によりトレニアF3H RNAiカセットを切り出し、実施例8-2記載のpSFL304のAscIサイトに挿入し、pSFL308を得た。つまりpSFL308は4’CGTとASの発現ならびにトレニアのF3H遺伝子発現抑制のための3つのカセットを有する。
実施例7-9で述べたpSFL201、pSFL307およびpSFL308を公知の方法でトレニア(品種サマーウェーブブルー(サントリーフラワーズ株式会社))に導入した。形質転換の方法はMol. Breeding. 6, 239, (2000)に記載の方法にしたがった。選択マーカー耐性を示した個体を選抜し、それぞれの花色を観察した。pSFL201導入株では、得られた35系統の形質転換体のうち、22系統において宿主と比べて花色変化が見られ、黄色味を帯びた青、もしくは黄色味を帯びたグレーを示した。
花色変化が比較的顕著であったものについて色素分析を行った。
実施例10で得られた形質転換体のうち、花弁の色素分析結果からTHC 4'位配糖体ならびにAU 6位配糖体の蓄積量が比較的多かった系統を、各コンストラクト導入株から3系統ずつ選抜し、ゲノミックハイブリダイゼーションをおこなった。形質転換体の葉、約1gからPhytopure Plant DNA Extraction kit(Amersham)を用い、製造業者推奨の方法によってゲノムDNAを抽出した。得られたゲノムDNA各20μgを制限酵素KpnIで切断し、0.7% アガロースゲル電気泳動にて分離後、常法にしたがってHybond-N+ナイロンメンブレンに転写後、ノンラジオアイソトープDIG-核酸検出システムを用い、ハイブリダイゼーションを行った。
RNeasy Plant Mini Kit(QIAGEN)を用いて元株および形質転換体各系統のつぼみからtotal RNA を抽出し、得られたtotal RNA 1μgよりSuper ScriptTM First-Strand Synthesis System for RT-PCR(Invitrogen)を用いてcDNAを合成した。得られたcDNAのうち1μlをテンプレートとし、ABI PRISM 7000 Sequence Detection System (Applied Biosystems)にてトレニアDFRとF3Hおよび外来性遺伝子であるASと4’CGTの転写産物の発現定量を行った。
SWB DFR-1158F
5'-AAT GGG ATG CTT CCG ACT TCT-3'(配列番号:54)
SWB DFR-1223R
5'-CAG TGG TTT CTG CCA TTG CTT-3'(配列番号:55)
SWB DFR-1180T
5'-AGG AAA AAA CAG GCT GAA AA-3'(配列番号:56)
Torenia F3H-1035F
5'-CAT CGA GCG GTG GTG AAT T-3'(配列番号:57)
Torenia F3H-1101R
5'-CTG GCG ATG GGT TTT GAA A-3'(配列番号:58)
Torenia F3H-1055T
5'-AAA CAC GAA TAG AAT GTC G-3'(配列番号:59)
AmAS-1545F
5'-GAA GAT GAC CTT GCG GTG ATT T-3'(配列番号:60)
AmAS-1638R
5'-TTG TCC TCT TCC CCT TTA TAG GTT T-3'(配列番号:61)
AmAS-1582T
5'-AGT TCG CCG GGA GTT TCG TGA GTC TG-3'(配列番号:62)
AmGTcg12-908F
5'-GGT TGG CCC GCA TTT CA-3'(配列番号:63)
AmGTcg12-966R
5'-TAG AAA ACC CTC CGG CAG AA-3'(配列番号:64)
AmGTcg12-929T
5'-AGA TGG ACT TAA ATG CG-3'(配列番号:65)
黄色キンギョソウ花弁内においてPHC4'位配糖体が確認されており(Sato, T., et al. Plant Sci. 160, 229-236 (2001))、ASがこれらPHCおよびPHC4'位配糖体を基質としてブラクテアチンおよびブラクテアチン6位配糖体を生成できることが知られている。4'CGTがPHCの4'位の配糖化反応を触媒できるかどうかを明らかにするために、4'CGTのPHCに対する配糖化活性を測定した。実施例5-2にしたがって、大腸菌で発現した組換え4'CGTを用いて実施例3-2と同様の方法で樹脂に固定したPHCを基質として、酵素反応を行った。HPLC分析条件は以下の通りである。
14-1 コンストラクトの構築
実施例7に記載のpSFL203からPacIで2.4kbの4'CGTの発現カセット部分を切り出し、これをpBINPLUSのPacIサイトに導入したものをpSFL209とした。pSFL209は植物体内において4'CGTを単独で発現させるものである。
一方、ASについては、特許出願(P2003-293121)にあるpSPB120'のBamHIとXhoIサイトに、実施例7に記載のpSPB251からBamHIとXhoIで切り出したAS cDNA断片を挿入することによって、植物体内でASを発現するベクターpSPB211を得た。
実施例14-1で述べたpSFL209、pSFL210およびpSPB211を実施例10に記載の方法でトレニア(品種サマーウェーブブルー(サントリーフラワーズ株式会社))に導入した。形質転換の方法はMol. Breeding. 6, 239, 2000に記載の方法にしたがった。選択マーカー耐性を示した個体を選抜した。得られた形質転換体および元株サマーウェブブルー各系統のつぼみからRNeasy Plant Mini Kit(QIAGEN)を用いてtotal RNA を抽出し、得られたtotal RNA 1μgよりSuper ScriptTM First-Strand Synthesis System for RT-PCR(Invitrogen)を用いて逆転写反応を行い、cDNAを合成した。さらにEx Taq(TaKaRa)を用いて製造者の推奨する方法によりRT-PCR反応を実施した。
pSFL210導入系統ではアントシアニジン量は、宿主花弁に含アントシアニジン量の約1%程度に減少していることがわかった。
したがって、F3Hの発現抑制ならびにASの過剰発現だけではカルコン配糖体あるいはオーロンは植物体内で合成されないこと、4'CGTとASの共発現によりオーロンが合成されることが示された。4'CGT単独の過剰発現により、カルコン4'位配糖体を蓄積させることができ、花色の変化に役立つことがわかった。
実施例1と同様にして、リナリア(Linaria bipartita)の蕾及び開花した花の花びらから抽出したRNAを用い、cDNAライブラリーを作製した。蕾由来のRNAから8.0x105 pfu/mlのライブラリーが得られ、一方、開花花弁のcDNAを用いたものからは1.0x106 pfu/mlのcDNAライブラリーが得られた。
大腸菌発現ベクターpQE61のNcoIサイトとKpnIサイトへ完全長のリナリアcDNAを導入し、大腸菌発現系によって本リナリアcDNAにコードされるタンパク質の活性について解析した。まず、大腸菌発現コンストラクト作製のため、pSFL417を鋳型とし、417-NcoIプライマー(CCCATATATAGCCATGGAAGATACCATCG)(配列番号52)と409-EcoRI(TAGTGTTGTGGAGTCGGGGGATTTCG)(配列番号53)を用いPCRを行った。これにより、pSFL417の開始メチオニンの位置にNcoIサイトが挿入され、3’側にEcoRIサイトが挿入された。これをNcoI/EcoRIで切断したものとpSFL409cDNAをEcoRI/KpnIで切断したものを、大腸菌発現ベクターpQE61のNcoI/KpnIサイトにクローニングし、完全長リナリアcDNAを有する大腸菌発現用コンストラクト(pSFL418)が得られた。
Claims (17)
- 配列番号2又は70に記載のアミノ酸配列を有し、かつ、カルコン類の4’位に糖を転移する活性を有するタンパク質をコードする遺伝子。
- 配列番号2又は70に記載のアミノ酸配列に対して1個又は複数個のアミノ酸の付加、欠失及び/又は他のアミノ酸による置換によって修飾されているアミノ酸配列を有し、カルコン類の4’位に糖を転移する活性を有するタンパク質をコードする遺伝子。
- ゴマノハグサ科由来である請求項1又は2に記載の遺伝子。
- キンギョソウ又はリナリア由来である、請求項3に記載の遺伝子。
- 請求項1〜4のいずれか1項に記載の遺伝子を含んでなるベクター。
- 請求項5に記載のベクターにより形質転換された宿主細胞。
- 請求項1〜4のいずれか1項に記載の遺伝子によってコードされるタンパク質。
- 請求項6に記載の宿主細胞を培養し又は生育させ、当該宿主細胞からカルコン類の4’位に糖を転移する活性を有するタンパク質を採取することを特徴とする該タンパク質の製造方法。
- 請求項1〜4のいずれか1項に記載の遺伝子が導入された植物体もしくは当該植物体と同一の性質を有する該植物体の子孫となる植物体、栄養増殖した植物、またはそれら植物体の組織。
- 請求項9に記載の植物体の切り花。
- 請求項1〜4のいずれか1項に記載の遺伝子を用いてカルコン類の4’位に糖を転移する方法。
- 請求項1〜4のいずれか1項に記載の遺伝子を植物体に導入・発現して得られる、花色が改変された当該植物体もしくは当該植物体と同一の性質を有する該植物体の子孫となる植物体。
- 花色が黄色味を帯びていることを特徴とする、請求項12に記載の植物体。
- 請求項1〜4のいずれか1項に記載の遺伝子と共にオーレウシジン合成酵素をコードする遺伝子を植物体に導入、発現させ、花色を黄色く改変させる方法。
- 請求項1〜4のいずれか1項に記載の遺伝子と共にオーレウシジン合成酵素をコードする遺伝子を植物体に導入、発現させ、さらに宿主のフラボノイド合成系遺伝子の発現を抑制することによって花色を黄色く改変させる方法。
- 請求項1〜4のいずれか1項に記載の遺伝子と共にオーレウシジン合成酵素をコードする遺伝子を植物体に導入、発現させ、さらに宿主のジヒドロフラボノール還元酵素遺伝子の発現を抑制することによって花色を黄色く改変させる方法。
- 請求項1〜4のいずれか1項に記載の遺伝子と共にオーレウシジン合成酵素をコードする遺伝子を植物体に導入、発現させ、さらに宿主のフラバノン3−水酸化酵素遺伝子の発現を抑制することによって花色を黄色く改変させる方法。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2003420046 | 2003-12-17 | ||
JP2003420046 | 2003-12-17 | ||
PCT/JP2004/019461 WO2005059141A1 (ja) | 2003-12-17 | 2004-12-17 | フラボノイド合成系の制御による黄色の花の作製方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPWO2005059141A1 JPWO2005059141A1 (ja) | 2007-07-12 |
JP4641945B2 true JP4641945B2 (ja) | 2011-03-02 |
Family
ID=34697203
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2005516394A Expired - Fee Related JP4641945B2 (ja) | 2003-12-17 | 2004-12-17 | フラボノイド合成系の制御による黄色の花の作製方法 |
Country Status (8)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US7750209B2 (ja) |
EP (1) | EP1702987B1 (ja) |
JP (1) | JP4641945B2 (ja) |
AT (1) | ATE498015T1 (ja) |
AU (1) | AU2004299755B2 (ja) |
CA (1) | CA2550507C (ja) |
DE (1) | DE602004031375D1 (ja) |
WO (1) | WO2005059141A1 (ja) |
Families Citing this family (15)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2007094521A1 (ja) | 2006-02-17 | 2007-08-23 | International Flower Developments Proprietary Limited | フラボノイド糖転移酵素及びその利用 |
BRPI0720219A2 (pt) * | 2006-12-08 | 2013-12-24 | Univ Iowa State Res Found Inc | Genes de planta envolvidos em absorção e metabolismo de nitrato |
JP4927774B2 (ja) | 2007-10-12 | 2012-05-09 | サントリーホールディングス株式会社 | Udp−グルクロン酸転移酵素およびそれをコードするポリヌクレオチド |
JP5279304B2 (ja) * | 2008-03-11 | 2013-09-04 | 岩手県 | 3−デオキシアントシアニジン配糖化酵素遺伝子とその利用 |
BRPI0823018A2 (pt) * | 2008-09-04 | 2019-02-26 | Suntory Holdings Ltd | polinucleotídeo, proteína codificada pelo polinucleotídeo, vetor, transformante, métodos para produzir a proteína e para produzir um conjugado glicuronídeo. |
USPP21595P3 (en) * | 2008-12-19 | 2010-12-28 | International Flower Developments Pty Ltd. | Dianthus plant named ‘Floriagate’ |
JPWO2011001777A1 (ja) | 2009-06-30 | 2012-12-13 | サントリーホールディングス株式会社 | 花の色を薄く又は濃くする方法 |
EP2463366B1 (en) | 2009-08-07 | 2015-08-12 | National University Corporation Tokyo University Of Agriculture and Technology | Novel glycosyltransferase, novel glycosyltransferase gene, and novel glycosyl donor compound |
AT508554B1 (de) * | 2009-08-26 | 2011-02-15 | Univ Wien Tech | Chalkon-hydroxylase |
US20130305408A1 (en) * | 2012-05-11 | 2013-11-14 | J.R. Simplot Company | Aureusidin-producing transgenic plants |
US20140201865A1 (en) * | 2012-07-20 | 2014-07-17 | University Of Dubuque | Methods for Expanding Color Palette in Dendrobium Orchids |
US20160201070A1 (en) * | 2012-07-20 | 2016-07-14 | University Of Dubuque | Method for Expanding Color Palette in Dendrobium Orchids |
EP3895525A1 (en) * | 2014-12-23 | 2021-10-20 | Danziger Dan Flower Farm | Gypsophila plants having elevated amount of beta-carotene and methods for obtaining the same |
CN112708627A (zh) * | 2021-02-01 | 2021-04-27 | 中国农业科学院作物科学研究所 | 一种通过花色识别转基因大豆植株的方法 |
CN114032220A (zh) * | 2021-12-13 | 2022-02-11 | 河北省农林科学院经济作物研究所 | 与紫苏花青素生物合成相关蛋白及其编码基因与应用 |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2000049155A1 (fr) * | 1999-02-16 | 2000-08-24 | Suntory Limited | Genes codant des proteines ayant une activite de transfert de sucre sur l'aurone |
Family Cites Families (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH0970290A (ja) | 1995-02-17 | 1997-03-18 | Suntory Ltd | アシル基転移活性を有する蛋白質をコードする遺伝子 |
IL133469A (en) * | 1998-04-17 | 2006-09-05 | Suntory Ltd | Gene encoding a protein having aurone synthesis activity |
JP4259886B2 (ja) | 2002-01-31 | 2009-04-30 | サントリー株式会社 | 新規糖転移活性を有する蛋白質をコードする遺伝子 |
JP4392483B2 (ja) * | 2002-08-20 | 2010-01-06 | サントリーホールディングス株式会社 | 新規糖転移酵素遺伝子 |
ATE527348T1 (de) | 2003-08-13 | 2011-10-15 | Suntory Holdings Ltd | Verfahren zur erzeugung einer rose mit veränderter farbe |
-
2004
- 2004-12-17 DE DE602004031375T patent/DE602004031375D1/de active Active
- 2004-12-17 AU AU2004299755A patent/AU2004299755B2/en not_active Ceased
- 2004-12-17 AT AT04807816T patent/ATE498015T1/de not_active IP Right Cessation
- 2004-12-17 EP EP04807816A patent/EP1702987B1/en not_active Not-in-force
- 2004-12-17 US US10/583,110 patent/US7750209B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2004-12-17 WO PCT/JP2004/019461 patent/WO2005059141A1/ja active Application Filing
- 2004-12-17 CA CA2550507A patent/CA2550507C/en not_active Expired - Fee Related
- 2004-12-17 JP JP2005516394A patent/JP4641945B2/ja not_active Expired - Fee Related
-
2010
- 2010-02-24 US US12/711,701 patent/US8350125B2/en not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2000049155A1 (fr) * | 1999-02-16 | 2000-08-24 | Suntory Limited | Genes codant des proteines ayant une activite de transfert de sucre sur l'aurone |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
US20080009032A1 (en) | 2008-01-10 |
ATE498015T1 (de) | 2011-02-15 |
EP1702987B1 (en) | 2011-02-09 |
US8350125B2 (en) | 2013-01-08 |
US7750209B2 (en) | 2010-07-06 |
DE602004031375D1 (de) | 2011-03-24 |
CA2550507A1 (en) | 2005-06-30 |
AU2004299755A1 (en) | 2005-06-30 |
EP1702987A1 (en) | 2006-09-20 |
US20100199384A1 (en) | 2010-08-05 |
EP1702987A4 (en) | 2007-02-07 |
AU2004299755B2 (en) | 2009-12-03 |
JPWO2005059141A1 (ja) | 2007-07-12 |
WO2005059141A1 (ja) | 2005-06-30 |
CA2550507C (en) | 2013-01-15 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US8350125B2 (en) | Method for producing yellow flower by controlling flavonoid synthetic pathway | |
JP4392483B2 (ja) | 新規糖転移酵素遺伝子 | |
JP4690197B2 (ja) | 花色が変更されたバラの製造方法 | |
EP0632128A1 (en) | Novel plant gene | |
AU701065B2 (en) | A gene encoding a protein having acyl group transfer activity | |
JP4368005B2 (ja) | フラボン合成酵素をコードする遺伝子 | |
KR20110056518A (ko) | 글루쿠론산 전이효소 및 그것을 코딩하는 폴리뉴클레오티드 | |
JPWO2007094521A1 (ja) | フラボノイド糖転移酵素及びその利用 | |
JP4667007B2 (ja) | リグナン配糖化酵素およびその利用 | |
JP4259886B2 (ja) | 新規糖転移活性を有する蛋白質をコードする遺伝子 | |
JP4691720B2 (ja) | 新規アントシアニジングルコシル基転移酵素遺伝子 | |
AU776161B2 (en) | Genetic manipulation of isoflavonoids | |
US7098011B1 (en) | Nucleic acid sequences encoding isoflavone synthase | |
JP5638807B2 (ja) | リグナン水酸化酵素 | |
AU667392B2 (en) | Genetic sequences encoding flavonol synthase enzymes and uses therefor |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20071031 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20071031 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20100824 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20100915 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20101102 |
|
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20101130 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20131210 Year of fee payment: 3 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20131210 Year of fee payment: 3 |
|
R360 | Written notification for declining of transfer of rights |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R360 |
|
R371 | Transfer withdrawn |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R371 |
|
S111 | Request for change of ownership or part of ownership |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313113 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20131210 Year of fee payment: 3 |
|
R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |