JP4567629B2 - 細胞またはウイルスの分離方法および該方法に用いられるキット - Google Patents
細胞またはウイルスの分離方法および該方法に用いられるキット Download PDFInfo
- Publication number
- JP4567629B2 JP4567629B2 JP2006144587A JP2006144587A JP4567629B2 JP 4567629 B2 JP4567629 B2 JP 4567629B2 JP 2006144587 A JP2006144587 A JP 2006144587A JP 2006144587 A JP2006144587 A JP 2006144587A JP 4567629 B2 JP4567629 B2 JP 4567629B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- cells
- solid substrate
- viruses
- cell
- polyamine
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/02—Separating microorganisms from their culture media
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
- C12N7/02—Recovery or purification
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2795/00—Bacteriophages
- C12N2795/00011—Details
- C12N2795/00051—Methods of production or purification of viral material
Description
コスモトロピック塩が相分離を引き起こすか否かを調べるために、4種類のコスモトロピック塩が試験された。用いられたコスモトロピック塩溶液は、それぞれ濃度が0.1Mであり、pHが4であるリン酸ナトリウム溶液、クエン酸ナトリウム溶液、酢酸ナトリウム溶液、および硫酸ナトリウム溶液である。カチオン性ポリマーとして、2.5mg/mlの濃度で脱イオン水に溶解している分枝型のポリエチレンイミン(PEI)(Mw:約750,000)が用いられた。上記の4種類のコスモトロピック塩溶液150μlを、PEI溶液150μlとエッペンドルフチューブで混合した後、相分離を観察した。図2は、これらの混合物のそれぞれの相分離を示す写真である。図2に示したように、硫酸塩の混合物および酢酸塩の混合物は、透明である一方、クエン酸塩の混合物およびリン酸塩の混合物は濁っているということが分かる。したがって、すべてのコスモトロピック塩が相分離を引き起こすのではなく、クエン酸塩およびリン酸塩でのみ相分離が起こるということが分かる。
大腸菌細胞を含むコスモトロピック塩溶液で相分離が起こるかどうかを調べる実験を行った。用いられたコスモトロピック塩は、それぞれ濃度が0.1M、pHが4であるリン酸ナトリウム溶液、クエン酸ナトリウム溶液、酢酸ナトリウム溶液、および硫酸ナトリウム溶液である。大腸菌細胞は、BL21(2×107細胞/ml)が用いられた。大腸菌細胞は、上記のそれぞれのコスモトロピック塩溶液に懸濁された。カチオン性ポリマーとして、2.5mg/mlの濃度で脱イオン水に溶解している分枝型のポリエチレンイミン(PEI)(Mw:約750,000)が用いられた。上記の4種類のそれぞれのコスモトロピック塩溶液150μlとPEI溶液150μlとを混合した。固体基板として、カルボン酸でコーティングされた基板が用いられた。60μlのパッチを、前記のカルボン酸でコーティングされた固体基板上に付着させた後、上記の細胞懸濁液およびPEI溶液の混合物60μlが塗布された。次いで、混合物が塗布された固体基板を、室温で5分間インキュベーションした後、上記の懸濁液(pH4)35mlで、1分間1回洗浄した。固体基板に付着した大腸菌細胞を染色するために、当業界に公知である大腸菌細胞用のグラム染色液を用いて固体基板を染色した。詳細には、大腸菌細胞が付着した固体基板の部分が、クリスタルバイオレット溶液で十分に浸されるように、固体基板にクリスタルバイオレット溶液を塗布し、1分後、流水で固体基板を洗浄した。次いで、固体基板に付着した大腸菌細胞がグラム染色されるように、グラムヨウ素溶液、グラム脱色剤、またはグラムサフラニン溶液で固体基板を処理した。グラム染色後、固体基板を常温で自然乾燥させた。その後、光学顕微鏡を用いて、450倍または3000倍の倍率で固体基板を写真撮影した。
相分離に対するpHの効果を調べるために、pHが3ないし8のリン酸ナトリウム溶液を用いた。本実施例では、pHが3、4、5、7、および8のリン酸ナトリウム溶液をコスモトロピック塩溶液として用いたことを除いては、実施例1と同様に実験を行った。
細胞付着に対するpHの影響を調べるために、pH3ないし7のリン酸ナトリウム溶液(pH3ないし7)を用いた。本実施例では、pH3、4、5、および7のリン酸ナトリウム溶液を用いたことを除いては、前記実施例2と同様に実験を行った。
相分離に対するPEIの濃度の影響を調べるために、0.1ないし25mg/mlの脱イオン水中の濃度を有するPEIの脱イオン水溶液を用いた。本実施例では、0.1Mのリン酸ナトリウム溶液(pH4)を用いたことを除いては、前記実施例3と同様に実験を行った。
細胞付着に対するPEIの濃度の影響を調べるために、0.1ないし25mg/mlの脱イオン水中の濃度を有するPEI溶液を用いた。本実施例では、0.1Mのリン酸ナトリウム溶液(pH4)を用いたことを除いては、前記実施例4と同様に実験を行った。
細胞付着に対する固体基板の種類の影響を調べるために、ガンマ アミノプロピルトリエトキシシラン(GAPS)を用いて正電荷コーティングされた、アミンコーティングされた固体基板、および負電荷コーティングされたカルボン酸コーティングされた固体基板を用いた。本実施例では、0、0.5および2.5mg/mlの脱イオン水中の濃度を有するPEI溶液を用いたことを除いては、前記実施例6と同様に実験を行った。
流動制御システムで細胞付着が起こるかを調べるために実験を行った。本実施例では、GAPSを用いて正電荷コーティングされたアミンコーティングされた固体基板、負電荷コーティングされたカルボン酸コーティングされた固体基板、およびオクタデシルジメチル(3−トリメトキシシリルプロピル)アンモニウムクロライド(OTC)を用いて疎水性コーティングされた固体基板を用いた。その他、2.5mg/mlの脱イオン水中の濃度を有するPEI溶液を用いたことを除いては、前記実施例7と同様に実験を行った。
オン・チップで分離された大腸菌細胞が効率的に溶解されるかを調べるために実験を行った。本実験では、GAPSを用いて正電荷コーティングされたアミンコーティングされた固体基板を用いた。その他、2.5mg/mlの脱イオン水中の濃度を有するPEI溶液を用いたことを除いては、前記実施例7と同様に実験を行った。
Claims (7)
- 細胞またはウイルスを含む試料を、pHが3ないし6であるクエン酸塩またはリン酸塩溶液中に懸濁させるステップと、
前記懸濁させるステップで得られた懸濁液に、ポリアミンを添加することで、相分離された前記ポリアミンと細胞またはウイルスとが凝集して、ポリアミン−細胞またはウイルス複合体を形成させるステップと、
前記ポリアミン−細胞またはウイルス複合体を、固体基板に付着させるステップと、
前記固体基板に付着させるステップで得られた細胞またはウイルスが付着した固体基板を、前記懸濁液から分離するステップと、
を含むことを特徴とする、細胞またはウイルスの分離方法。 - 前記ポリアミンは、ポリアリルアミン、ポリアミノ酸、ポリエチレンイミン、ポリエチルイミン、およびポリグルコースイミンからなる群より選択されることを特徴とする、請求項1に記載の方法。
- 前記固体基板に付着させるステップは、静止状態または流動状態で行われることを特徴とする、請求項1または2に記載の方法。
- 前記ポリアミンは、前記固体基板と連結されるかまたは混合されて、細胞またはウイルスの分離に用いられることを特徴とする、請求項1〜3のいずれか1項に記載の方法。
- 前記ポリアミンは、初期には可溶性であり、クエン酸塩またはリン酸塩溶液に添加される時に細胞と共に凝集して、それにより相が分離されることを特徴とする、請求項1〜4のいずれか1項に記載の方法。
- ポリアミンと、
pHが3ないし6であるクエン酸塩またはリン酸塩溶液と、
相分離されたポリアミンと細胞またはウイルスとが凝集して形成される、ポリアミン−細胞またはウイルス複合体を付着できる固体基板と、
を備えることを特徴とする、細胞またはウイルスの分離用キット。 - 前記ポリアミンは、ポリアリルアミン、ポリアミノ酸、ポリエチレンイミン、およびポリエチルイミンでからなる群より選択されることを特徴とする、請求項6に記載のキット。
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
KR1020050043749A KR100682945B1 (ko) | 2005-05-24 | 2005-05-24 | 상 분리를 이용한 세포 분리 방법 및 키트 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2006325592A JP2006325592A (ja) | 2006-12-07 |
JP4567629B2 true JP4567629B2 (ja) | 2010-10-20 |
Family
ID=36579307
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2006144587A Expired - Fee Related JP4567629B2 (ja) | 2005-05-24 | 2006-05-24 | 細胞またはウイルスの分離方法および該方法に用いられるキット |
Country Status (5)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20060270031A1 (ja) |
EP (1) | EP1726641B1 (ja) |
JP (1) | JP4567629B2 (ja) |
KR (1) | KR100682945B1 (ja) |
DE (1) | DE602006003682D1 (ja) |
Families Citing this family (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR100785016B1 (ko) * | 2006-05-22 | 2007-12-12 | 삼성전자주식회사 | 단일 마이크로 챔버에서 핵산의 농축 및 증폭을 수행하는방법 및 장치 |
US20080044884A1 (en) * | 2006-08-21 | 2008-02-21 | Samsung Electronics Co., Ltd. | Method and device for separating cells from a sample using a nonplanar solid substrate |
US8158411B2 (en) | 2006-08-21 | 2012-04-17 | Samsung Electronics Co., Ltd. | Method of separating microorganism using nonplanar solid substrate and device for separating microorganism using the same |
KR101443218B1 (ko) * | 2007-08-16 | 2014-09-24 | 삼성전자주식회사 | 코스모트로픽 염을 이용한 고체 지지체에서의 rna 정제방법 |
KR101432034B1 (ko) * | 2007-11-16 | 2014-08-21 | 삼성전자주식회사 | 코스모트로픽 염을 이용한 고체 지지체에서의 작은 rna분리 방법 |
KR101160125B1 (ko) * | 2010-07-22 | 2012-06-26 | 가천대학교 산학협력단 | 개선된 박테리아의 농축 및 진단 방법 |
JP6583635B2 (ja) * | 2014-03-24 | 2019-10-02 | 日東紡績株式会社 | 新規カチオン性グラフト重合体を用いた標的物分離濃縮方法 |
EP3149022A4 (en) * | 2014-05-28 | 2018-01-10 | Agency for Science, Technology and Research | Virus reduction method |
Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH0615167A (ja) * | 1992-07-06 | 1994-01-25 | Terumo Corp | 多孔性分離膜 |
JP2002000258A (ja) * | 2000-04-17 | 2002-01-08 | Jsr Corp | 血清肝炎ウィルス吸着材および血清肝炎ウィルスの分離方法 |
JP2003507032A (ja) * | 1999-08-14 | 2003-02-25 | チバ スペシャルティ ケミカルズ ウォーター トリートメント リミテッド | 細胞材料の凝集 |
WO2003102184A1 (en) * | 2002-05-31 | 2003-12-11 | Dna Research Innovations Limited | Methods, compositions and kits for cell separation |
JP2004508038A (ja) * | 2000-09-06 | 2004-03-18 | ユニバーシティー オブ マサチューセッツ | 高効率のタンパク質抽出法 |
JP2005505300A (ja) * | 2001-10-09 | 2005-02-24 | プロフォス・アクチエンゲゼルシャフト | 細菌細胞の非特異的濃縮のための方法 |
Family Cites Families (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5523231A (en) * | 1990-02-13 | 1996-06-04 | Amersham International Plc | Method to isolate macromolecules using magnetically attractable beads which do not specifically bind the macromolecules |
GB9709728D0 (en) * | 1997-05-13 | 1997-07-02 | Dynal As | Single step method |
FI102906B1 (fi) * | 1998-02-23 | 1999-03-15 | Bio Nobile Oy | Menetelmä ja väline aineen siirtämiseksi |
-
2005
- 2005-05-24 KR KR1020050043749A patent/KR100682945B1/ko not_active IP Right Cessation
-
2006
- 2006-05-15 EP EP06009989A patent/EP1726641B1/en not_active Expired - Fee Related
- 2006-05-15 DE DE602006003682T patent/DE602006003682D1/de active Active
- 2006-05-24 JP JP2006144587A patent/JP4567629B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2006-05-24 US US11/439,916 patent/US20060270031A1/en not_active Abandoned
Patent Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH0615167A (ja) * | 1992-07-06 | 1994-01-25 | Terumo Corp | 多孔性分離膜 |
JP2003507032A (ja) * | 1999-08-14 | 2003-02-25 | チバ スペシャルティ ケミカルズ ウォーター トリートメント リミテッド | 細胞材料の凝集 |
JP2002000258A (ja) * | 2000-04-17 | 2002-01-08 | Jsr Corp | 血清肝炎ウィルス吸着材および血清肝炎ウィルスの分離方法 |
JP2004508038A (ja) * | 2000-09-06 | 2004-03-18 | ユニバーシティー オブ マサチューセッツ | 高効率のタンパク質抽出法 |
JP2005505300A (ja) * | 2001-10-09 | 2005-02-24 | プロフォス・アクチエンゲゼルシャフト | 細菌細胞の非特異的濃縮のための方法 |
WO2003102184A1 (en) * | 2002-05-31 | 2003-12-11 | Dna Research Innovations Limited | Methods, compositions and kits for cell separation |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
KR20060121519A (ko) | 2006-11-29 |
DE602006003682D1 (de) | 2009-01-02 |
US20060270031A1 (en) | 2006-11-30 |
EP1726641B1 (en) | 2008-11-19 |
KR100682945B1 (ko) | 2007-02-15 |
EP1726641A1 (en) | 2006-11-29 |
JP2006325592A (ja) | 2006-12-07 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP4567629B2 (ja) | 細胞またはウイルスの分離方法および該方法に用いられるキット | |
Tang et al. | Preparation of chitosan nanoparticles as carrier for immobilized enzyme | |
US5154829A (en) | Polyamide membrane with controlled surface properties | |
US6562573B2 (en) | Materials and methods for the purification of polyelectrolytes, particularly nucleic acids | |
CA2732398C (en) | Graft copolymers for ion exchange chromatography | |
JP5203960B2 (ja) | 短鎖核酸の濃縮方法 | |
Rahman et al. | Temperature and magnetic dual responsive microparticles for DNA separation | |
Behra et al. | Magnetic porous sugar-functionalized PEG microgels for efficient isolation and removal of bacteria from solution | |
JP6958353B2 (ja) | 核酸の回収方法 | |
US20110151543A1 (en) | Cell separation method using hydrophobic solid supports | |
CN103702736A (zh) | 包含粘土矿物的过滤装置 | |
Quong | Stability of chitosan and poly-L-lysine membranes coating DNA-alginate beads when exposed to hydrolytic enzymes | |
US4582799A (en) | Process for recovering nonsecreted substances produced by cells | |
FR2933989A1 (fr) | Procede de purification de microorganismes presents dans des echantillons liquides | |
JP2010178750A (ja) | 疎水性固体支持体を利用した細胞分離方法 | |
EP1118676A2 (en) | Cell isolation method | |
Liu et al. | Functionalized polystyrene microspheres as Cryptosporidium surrogates | |
JP2009065849A (ja) | 核酸の抽出方法 | |
JP2002125695A (ja) | 微生物および生体由来物質の検出方法 | |
WO2014118237A1 (en) | Extraction separation using magnetic beads | |
JP5637049B2 (ja) | 糖鎖測定方法および糖鎖固定化基材 | |
Petrak | Polyelectrolyte complexes | |
Govender et al. | Affinity chromatography using biocompatible and reusable biotinylated membranes | |
US20070207460A1 (en) | Method For Enriching And Stabilising Components Which Contain Dna And Which Are Made Of Biological Materials | |
JP2017104828A (ja) | 分離材用の多孔質ポリマ粒子の製造方法、分離材用の多孔質ポリマ粒子、及びカラム |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20090526 |
|
A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20090826 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20100216 |
|
A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20100614 |
|
A911 | Transfer to examiner for re-examination before appeal (zenchi) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A911 Effective date: 20100625 |
|
A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20100616 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20100713 |
|
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20100805 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20130813 Year of fee payment: 3 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |