JP2002000258A - 血清肝炎ウィルス吸着材および血清肝炎ウィルスの分離方法 - Google Patents
血清肝炎ウィルス吸着材および血清肝炎ウィルスの分離方法Info
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 試料中の血清肝炎ウィルスを効率よく吸着
することのできる吸着材および該吸着材を用いた血清肝
炎ウィルスの分離方法を得る。 【解決手段】 ポリアミン化合物を少なくとも１部に
有することを特徴とする血清肝炎ウィルス吸着材。
することのできる吸着材および該吸着材を用いた血清肝
炎ウィルスの分離方法を得る。 【解決手段】 ポリアミン化合物を少なくとも１部に
有することを特徴とする血清肝炎ウィルス吸着材。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、試料中の血清肝炎
ウィルスを効率よく吸着することのできる吸着材および
該吸着材を用いた血清肝炎ウィルスの分離方法に関す
る。
ウィルスを効率よく吸着することのできる吸着材および
該吸着材を用いた血清肝炎ウィルスの分離方法に関す
る。
【０００２】
【従来の技術】肝炎はそのキャリアを含めて非常に多数
の感染者がある疾病であり、その検査、診断、治療のた
めには原因ウイルスの分離、検出が非常に重要である。
従来のウイルス検査・診断法としては、ウイルス抗原あ
るいは抗ウイルス抗体の免疫学的測定が一般的である。
しかしながら、ウイルス感染から数週間〜数ヶ月は、ウ
イルス量あるいは抗ウイルス抗体量が少ないため、これ
らの免疫学的測定法では検出できない場合がある。この
検出不可能な期間はウインドウ・ピリオド（空白期間）
と呼ばれており、このような患者が献血を行った場合、
その献血液は十分な感染性を持つことが多く、不特定多
数の輸血患者・血液製剤利用患者に危険をおよぼす可能
性がある。したがって、ウインドウ・ピリオドをできる
限り短縮するため、免疫学的測定限界下のウイルスを高
感度に検出できる技術の開発が急務とされている。ま
た、ウィルス感染者の治療方法として、患者の血液中か
らウィルスを除去する方法が提案されているが、血清肝
炎ウィルス、特にＢ型血清肝炎ウィルスを効率よく吸着
するための吸着材が見いだされていなかった。
の感染者がある疾病であり、その検査、診断、治療のた
めには原因ウイルスの分離、検出が非常に重要である。
従来のウイルス検査・診断法としては、ウイルス抗原あ
るいは抗ウイルス抗体の免疫学的測定が一般的である。
しかしながら、ウイルス感染から数週間〜数ヶ月は、ウ
イルス量あるいは抗ウイルス抗体量が少ないため、これ
らの免疫学的測定法では検出できない場合がある。この
検出不可能な期間はウインドウ・ピリオド（空白期間）
と呼ばれており、このような患者が献血を行った場合、
その献血液は十分な感染性を持つことが多く、不特定多
数の輸血患者・血液製剤利用患者に危険をおよぼす可能
性がある。したがって、ウインドウ・ピリオドをできる
限り短縮するため、免疫学的測定限界下のウイルスを高
感度に検出できる技術の開発が急務とされている。ま
た、ウィルス感染者の治療方法として、患者の血液中か
らウィルスを除去する方法が提案されているが、血清肝
炎ウィルス、特にＢ型血清肝炎ウィルスを効率よく吸着
するための吸着材が見いだされていなかった。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】本発明の課題は、上記
の血清肝炎ウィルスを効率よく吸着し、高感度の検出や
治療を可能とすることのできる血清肝炎ウィルス吸着材
を提供するものである。
の血清肝炎ウィルスを効率よく吸着し、高感度の検出や
治療を可能とすることのできる血清肝炎ウィルス吸着材
を提供するものである。
【０００４】
【発明を解決するための手段】本発明はポリアミン化合
物を少なくとも１部に有することを特徴とする血清肝炎
ウィルス吸着材および該吸着材を用いた血清肝炎ウィル
スの分離方法を提供するものである。
物を少なくとも１部に有することを特徴とする血清肝炎
ウィルス吸着材および該吸着材を用いた血清肝炎ウィル
スの分離方法を提供するものである。
【０００５】
【発明の実施の形態】以下、本発明を詳細に説明する。
本発明において、ポリアミン化合物としてはポリエチレ
ンイミン、ポリアルキルアミン、ポリリジン、ポリアル
ギニン、ポリヒスチジンなどを挙げることができる。こ
れらの中でも、特にポリエチレンイミンが好ましい。
本発明において、ポリアミン化合物としてはポリエチレ
ンイミン、ポリアルキルアミン、ポリリジン、ポリアル
ギニン、ポリヒスチジンなどを挙げることができる。こ
れらの中でも、特にポリエチレンイミンが好ましい。
【０００６】本発明の血清肝炎ウィルス吸着材は、ポリ
アミン化合物のみからなっていてもよいし、ポリアミン
化合物を担体に担持したものでもよい。本発明において
は、吸着した血清肝炎ウィルスを試料から分離すること
が容易なため、ポリアミン化合物は担体に担持されてい
ることが好ましい。ポリアミン化合物を担持することが
できる担体は、粒子状、ビーズ状、フィルター状、繊維
状、シート状、チューブ状などがあり、用途に適した形
状を選択することができる。担体の材質は有機ポリマ
ー、無機ポリマー、無機化合物などを挙げることができ
る。例えば、担体が粒子状の場合には芳香族ビニル化合
物、不飽和カルボン酸エステル、不飽和カルボン酸など
のラジカル重合性モノマーの（共）重合体などを挙げる
ことができる。また、担体が粒子状の場合、粒子内部に
例えば四三酸化鉄（Ｆｅ3Ｏ4）、γ−重三二酸化鉄（γ
−Ｆｅ2Ｏ3）等の各種フェライト、鉄、マンガン、コバ
ルト、クロムなどの金属またはこれら金属の合金などの
磁性体を含有することにより、試料からの分離を磁気的
に行うことができる。また、担体がフィルターの場合に
は、セルロースなどの天然高分子、ニトロセルロース、
ポリオレフィン、ポリアミド、ポリイミド、ポリウレタ
ン、ポリエステル、ポリサルホン、ポリアクリロニトリ
ル、ガラス繊維などを挙げることができる。さらに、担
体がチューブ状の場合には、ポリオレフィン、ポリエス
テルなどを挙げることができる。いずれの担体も、ポリ
アミン化合物を固定化するために、担体の表面に官能基
を導入しておくことが好ましい。
アミン化合物のみからなっていてもよいし、ポリアミン
化合物を担体に担持したものでもよい。本発明において
は、吸着した血清肝炎ウィルスを試料から分離すること
が容易なため、ポリアミン化合物は担体に担持されてい
ることが好ましい。ポリアミン化合物を担持することが
できる担体は、粒子状、ビーズ状、フィルター状、繊維
状、シート状、チューブ状などがあり、用途に適した形
状を選択することができる。担体の材質は有機ポリマ
ー、無機ポリマー、無機化合物などを挙げることができ
る。例えば、担体が粒子状の場合には芳香族ビニル化合
物、不飽和カルボン酸エステル、不飽和カルボン酸など
のラジカル重合性モノマーの（共）重合体などを挙げる
ことができる。また、担体が粒子状の場合、粒子内部に
例えば四三酸化鉄（Ｆｅ3Ｏ4）、γ−重三二酸化鉄（γ
−Ｆｅ2Ｏ3）等の各種フェライト、鉄、マンガン、コバ
ルト、クロムなどの金属またはこれら金属の合金などの
磁性体を含有することにより、試料からの分離を磁気的
に行うことができる。また、担体がフィルターの場合に
は、セルロースなどの天然高分子、ニトロセルロース、
ポリオレフィン、ポリアミド、ポリイミド、ポリウレタ
ン、ポリエステル、ポリサルホン、ポリアクリロニトリ
ル、ガラス繊維などを挙げることができる。さらに、担
体がチューブ状の場合には、ポリオレフィン、ポリエス
テルなどを挙げることができる。いずれの担体も、ポリ
アミン化合物を固定化するために、担体の表面に官能基
を導入しておくことが好ましい。
【０００７】本発明の血清肝炎ウィルス吸着材で吸着す
ることのできる血清肝炎ウィルスはＢ型血清肝炎ウィル
ス、Ｃ型血清肝炎ウィルス、ＴＴＶなどであり、特に従
来のウィルス吸着材では充分吸着することのできなかっ
たＢ型血清肝炎ウィルスも良好に吸着することができ
る。
ることのできる血清肝炎ウィルスはＢ型血清肝炎ウィル
ス、Ｃ型血清肝炎ウィルス、ＴＴＶなどであり、特に従
来のウィルス吸着材では充分吸着することのできなかっ
たＢ型血清肝炎ウィルスも良好に吸着することができ
る。
【０００８】本発明の血清肝炎ウィルス吸着材を使用で
きる検体としては、血漿、血清、細胞破砕液、尿、唾液
等の各種体液、培養細胞破砕液等を挙げることができ
る。このような検体はそのまま試料として使用されても
よいし、何らかの目的で希釈などされた状態で試料とし
て使用されてもよい。本発明の血清肝炎ウィルス吸着材
は、担体が粒子状のものは試料中に分散して、ビーズ状
のものはカラムに充填して試料をカラムに通過させる、
フィルター状、繊維状のものはバッチ方式の浸漬法、カ
ラムを利用したフロー方式、濾過方式などにより試料と
接触させる。本発明の血清肝炎ウィルス吸着材は試料と
接触させた後、試料と分離する。吸着材の担体として水
不溶性の材質を選択すること、磁性体を含有させること
などにより、ここでの血清肝炎ウィルス吸着材と試料と
の分離は容易に行うことができる。
きる検体としては、血漿、血清、細胞破砕液、尿、唾液
等の各種体液、培養細胞破砕液等を挙げることができ
る。このような検体はそのまま試料として使用されても
よいし、何らかの目的で希釈などされた状態で試料とし
て使用されてもよい。本発明の血清肝炎ウィルス吸着材
は、担体が粒子状のものは試料中に分散して、ビーズ状
のものはカラムに充填して試料をカラムに通過させる、
フィルター状、繊維状のものはバッチ方式の浸漬法、カ
ラムを利用したフロー方式、濾過方式などにより試料と
接触させる。本発明の血清肝炎ウィルス吸着材は試料と
接触させた後、試料と分離する。吸着材の担体として水
不溶性の材質を選択すること、磁性体を含有させること
などにより、ここでの血清肝炎ウィルス吸着材と試料と
の分離は容易に行うことができる。
【０００９】分離された血清肝炎ウィルス吸着材は必要
に応じて、緩衝液で洗浄した後、ウイルスを吸着材から
の分離して核酸の抽出および検出、ワクチンの製造など
に使用することができる。血清肝炎ウィルスを本発明の
吸着材から分離する方法としては、ポリイソプレンスル
ホン酸、ポリスチレンスルホン酸、ポリリン酸等の強ア
ニオン性物質、ドデシル硫酸ナトリウム等のアニオン性
界面活性剤、高濃度塩溶液を作用させて血清肝炎ウィル
スと吸着材とを解離させる方法がある。塩溶液としては
高濃度の臭化カリウム、臭化ナトリウム、塩化ナトリウ
ム、リンタングステン酸等を用いることができる。得ら
れたウィルスの検出方法としては、ウイルスの表面抗原
に反応する抗体を利用した酵素免疫反応、化学発光免疫
測定法、蛍光免疫測定法等の免疫学的な検出法の他、ロ
シュ社のＰＣＲ(Polymerization chain reaction)
法、ジェン・プローブ社のＴＭＡ(Transcription Medi
ated amplification-hybridizationprotection assa
y)法、アボット社のＬＣＲ(Ligase chain reaction)
法等の核酸増幅検査（ＮＡＴ; nucleic acid amplif
ication test）の方法等を利用することができる。ま
た、本発明の血清肝炎ウィルス吸着材は試料中の血清肝
炎ウィルス外皮蛋白の検出にも使用することができる。
に応じて、緩衝液で洗浄した後、ウイルスを吸着材から
の分離して核酸の抽出および検出、ワクチンの製造など
に使用することができる。血清肝炎ウィルスを本発明の
吸着材から分離する方法としては、ポリイソプレンスル
ホン酸、ポリスチレンスルホン酸、ポリリン酸等の強ア
ニオン性物質、ドデシル硫酸ナトリウム等のアニオン性
界面活性剤、高濃度塩溶液を作用させて血清肝炎ウィル
スと吸着材とを解離させる方法がある。塩溶液としては
高濃度の臭化カリウム、臭化ナトリウム、塩化ナトリウ
ム、リンタングステン酸等を用いることができる。得ら
れたウィルスの検出方法としては、ウイルスの表面抗原
に反応する抗体を利用した酵素免疫反応、化学発光免疫
測定法、蛍光免疫測定法等の免疫学的な検出法の他、ロ
シュ社のＰＣＲ(Polymerization chain reaction)
法、ジェン・プローブ社のＴＭＡ(Transcription Medi
ated amplification-hybridizationprotection assa
y)法、アボット社のＬＣＲ(Ligase chain reaction)
法等の核酸増幅検査（ＮＡＴ; nucleic acid amplif
ication test）の方法等を利用することができる。ま
た、本発明の血清肝炎ウィルス吸着材は試料中の血清肝
炎ウィルス外皮蛋白の検出にも使用することができる。
【００１０】また、本発明の血清肝炎ウィルス吸着材に
よって血清肝炎ウィルスを除去し、試料中の血清肝炎ウ
ィルス含有量を低減させることができるので、試料を有
効に利用することが可能である。
よって血清肝炎ウィルスを除去し、試料中の血清肝炎ウ
ィルス含有量を低減させることができるので、試料を有
効に利用することが可能である。
【００１１】
【実施例】以下、本発明の実施例について説明するが、
本発明はこれら実施例に限定されるものではない。本実
施例において得られる血清肝炎ウィルス吸着材の粒径は
下記の方法で定量した。粒径の測定：光学顕微鏡、走査
型電子顕微鏡または透過型電子顕微鏡により写真撮影を
行い２００個の粒子の粒径を測定し、その平均値を求め
た。
本発明はこれら実施例に限定されるものではない。本実
施例において得られる血清肝炎ウィルス吸着材の粒径は
下記の方法で定量した。粒径の測定：光学顕微鏡、走査
型電子顕微鏡または透過型電子顕微鏡により写真撮影を
行い２００個の粒子の粒径を測定し、その平均値を求め
た。
【００１２】実施例１ （１）油性磁性流体「フェリコロイドHC50」［タイホー
工業（株）製］にアセトンを加えて粒子を析出沈殿させ
た後、これを乾燥することにより、親油化処理された表
面を有するフェライト系の超常磁性体（粒子径：０．０
１μｍ）を得た。ついで、超常磁性体４０部にシクロヘ
キシルメタクリレート９５部、メタクリル酸５部および
ベンゾイルペルオキシド（重合開始剤）３部を添加し、
この系を混合攪拌することにより超常磁性体を均一に分
散させてモノマー組成物を調整した。一方、ポリビニル
アルコール１０部、ラウリル酸ナトリルム０．０５部お
よびポリエチレンオキシドノニルフェニルエーテル０．
１部を水１０００部に溶解してモノマー組成物を調整し
た。得られた水性媒体（水相）中に上記のモノマー組成
物を添加し、ホモジナイザーで予備攪拌した後、超音波
分散機で分散処理することにより平均粒子径が１μｍの
油滴（油相）が水性媒体に分散されてなる懸濁液（油滴
分散体）を調整した。次に、得られた懸濁液を容量２リ
ットルの攪拌機付き三つ口フラスコに仕込み、この系を
７５℃に昇温し、窒素雰囲気下において攪拌しながら５
時間にわたり油滴中のモノマーを重合（懸濁重合）させ
磁性ポリマー粒子を製造した。 （２）上記（１）で得られた磁性ポリマー粒子を５ｍM
水酸化ナトリウム水溶液に分散し、８０℃、１２時間処
理してカルボキシ変性磁性ポリマー粒子とした。 （３）得られたカルボキシ変性磁性ポリマー粒子１ｇ
（乾燥重量）を２０ｍｌの１０ｍＭ ＭＥＳ緩衝溶液
（ｐＨ６）に添加し、ポリエチレンイミン（数平均分子
量７万）の３０％水溶性０．５μｌおよびカルボジイミ
ド試薬であるＥＤＣ・塩酸塩（１−エチル−３（３−ジ
メチルアミノプロピル）カルボジイミドヒドロクロライ
ド）０．２ｇを添加し、２０℃、２時間反応させ、本発
明の血清肝炎ウィルス吸着材を得た。
工業（株）製］にアセトンを加えて粒子を析出沈殿させ
た後、これを乾燥することにより、親油化処理された表
面を有するフェライト系の超常磁性体（粒子径：０．０
１μｍ）を得た。ついで、超常磁性体４０部にシクロヘ
キシルメタクリレート９５部、メタクリル酸５部および
ベンゾイルペルオキシド（重合開始剤）３部を添加し、
この系を混合攪拌することにより超常磁性体を均一に分
散させてモノマー組成物を調整した。一方、ポリビニル
アルコール１０部、ラウリル酸ナトリルム０．０５部お
よびポリエチレンオキシドノニルフェニルエーテル０．
１部を水１０００部に溶解してモノマー組成物を調整し
た。得られた水性媒体（水相）中に上記のモノマー組成
物を添加し、ホモジナイザーで予備攪拌した後、超音波
分散機で分散処理することにより平均粒子径が１μｍの
油滴（油相）が水性媒体に分散されてなる懸濁液（油滴
分散体）を調整した。次に、得られた懸濁液を容量２リ
ットルの攪拌機付き三つ口フラスコに仕込み、この系を
７５℃に昇温し、窒素雰囲気下において攪拌しながら５
時間にわたり油滴中のモノマーを重合（懸濁重合）させ
磁性ポリマー粒子を製造した。 （２）上記（１）で得られた磁性ポリマー粒子を５ｍM
水酸化ナトリウム水溶液に分散し、８０℃、１２時間処
理してカルボキシ変性磁性ポリマー粒子とした。 （３）得られたカルボキシ変性磁性ポリマー粒子１ｇ
（乾燥重量）を２０ｍｌの１０ｍＭ ＭＥＳ緩衝溶液
（ｐＨ６）に添加し、ポリエチレンイミン（数平均分子
量７万）の３０％水溶性０．５μｌおよびカルボジイミ
ド試薬であるＥＤＣ・塩酸塩（１−エチル−３（３−ジ
メチルアミノプロピル）カルボジイミドヒドロクロライ
ド）０．２ｇを添加し、２０℃、２時間反応させ、本発
明の血清肝炎ウィルス吸着材を得た。
【００１３】実施例２ （１）実施例１で得られた血清肝炎ウィルス吸着材の水
分散体を精製後、生理食塩水で固形分濃度５重量％に調
整した。 （２）１００copies/mlのＨＢＶ陽性血１００μＬおよ
びＨＢＶ陰性血４．９ｍＬを混合し、合計量５ｍＬの試
料Ａを調整した。 （３）上記試料Ａに上記（１）で調整した粒子懸濁液
（５重量％）100μＬを加え、室温で１０分間回転撹拌
を行った。 反応終了後、磁気分離スタンドにセットし、粒子と上清
を分離し、上清を捨て、Tris-HCl緩衝液(pH７．４)を加
えた後、DNA Extractor Kit（和光純薬工業株式会社
製）を用い核酸を抽出した。得られた抽出物（核酸）を
試料Ｂという。得られた抽出物をPCR法により３５回増
幅過程によりＤＮＡを増幅した。PCRのプライマー配列
は、Hiroaki Okamoto , Igakuno ayumi, (1992),1
62(9),544-549に従った。得られたPCRの増幅産物を３％
アガロースを用いて電気泳動を行い、エチジウムプロマ
イド染色によりＤＮＡを可視化しポラロイド写真に撮影
した。得られた目的ＤＮＡの量をバンドの蛍光強度か
ら、−、＋、＋＋、＋＋＋の４段階で判定した。また、
上記（２）で混合したものと同様のＨＢＶ陽性血１００
μＬ（試料Ｃ）およびＨＢＶ陰性血１００μＬ（試料
Ｄ）から上記ＤＮＡ Extractor Kitにより核酸を抽出
し、同様にＰＣＲ反応を行い、電気泳動により判定し
た。結果を表１に示す。
分散体を精製後、生理食塩水で固形分濃度５重量％に調
整した。 （２）１００copies/mlのＨＢＶ陽性血１００μＬおよ
びＨＢＶ陰性血４．９ｍＬを混合し、合計量５ｍＬの試
料Ａを調整した。 （３）上記試料Ａに上記（１）で調整した粒子懸濁液
（５重量％）100μＬを加え、室温で１０分間回転撹拌
を行った。 反応終了後、磁気分離スタンドにセットし、粒子と上清
を分離し、上清を捨て、Tris-HCl緩衝液(pH７．４)を加
えた後、DNA Extractor Kit（和光純薬工業株式会社
製）を用い核酸を抽出した。得られた抽出物（核酸）を
試料Ｂという。得られた抽出物をPCR法により３５回増
幅過程によりＤＮＡを増幅した。PCRのプライマー配列
は、Hiroaki Okamoto , Igakuno ayumi, (1992),1
62(9),544-549に従った。得られたPCRの増幅産物を３％
アガロースを用いて電気泳動を行い、エチジウムプロマ
イド染色によりＤＮＡを可視化しポラロイド写真に撮影
した。得られた目的ＤＮＡの量をバンドの蛍光強度か
ら、−、＋、＋＋、＋＋＋の４段階で判定した。また、
上記（２）で混合したものと同様のＨＢＶ陽性血１００
μＬ（試料Ｃ）およびＨＢＶ陰性血１００μＬ（試料
Ｄ）から上記ＤＮＡ Extractor Kitにより核酸を抽出
し、同様にＰＣＲ反応を行い、電気泳動により判定し
た。結果を表１に示す。
【００１４】
【表１】
【００１５】実施例３ メルトフローインデックスが３０及び０．３のポリプロ
ピレン混合物（混合重量比１００：４０）１００重量部
当り、３２０重量部の流動パラフィン（数平均分子量３
２４）及び０．３重量部の結晶核形成剤としての１，
３、２，４ービス（ｐ−エチルベンジリデン）ソルビト
ールを二軸型押出機により溶融混練しペレット化した。
このペレットを上記押出機を用いて１５０〜２００℃で
溶融し、スリット幅０．６ｍｍのＴダイスより空気中に
押し出して、Ｔダイス直下に置かれた冷却液相のガイド
ローラーの回転によってポリエチレングリコ−ルよりな
る冷却固化液中に導き冷却固化した後、１，１，２−ト
リクロロ−１，２，２−トリフルオロエタンに浸漬して
流動パラフィンの抽出を行なった。続いて、１３５℃の
空気中で２分間熱処理し、最大孔径０．５μ、空孔率５
８％、膜厚８０μのポリプロピレンフィルタ−を得た。
このようにして得られたポリプロピレンフィルタ−に、
アルゴンプラズマ（１００Ｗ、０．１Ｔｏｒｒ、１５秒
間）を照射した後、２−メトキシエチルアクリレ−トガ
ス（１．０ Ｔｏｒｒ）に３分間、グリシジルアクリレ
−トガス（０．７Ｔｏｒｒ)に３分間接触させて表面グ
ラフト重合を行い、表面に反応性官能基を有する親水性
多孔質膜を得た。続いて、１ｗｔ％のポリエチレンイミ
ン（分子量１８００）と１．０ｗｔ％のピリジンを含む
水溶液に、６０℃、１８時間浸漬することにより膜表面
にポリエチレンイミンを固定化した。得られた膜は、水
及び塩化メチレン／メタノ−ル共沸溶媒で良く洗浄した
後、試料とした。ポリプロピレン膜の表面に導入された
ポリ（２−メトキシエチルアクリレ−ト）とグリシジル
基に結合したポリエチレンイミンは、ＩＲ（ＡＴＲ法）
により確認した。ＥＳＣＡで求めた窒素／炭素比は０．
０６であった。また、過塩素酸滴定により求めたアミン
の量は、３．３×１０-4 eq／ｇであった。該膜の空孔
率は５５％、透水量３９０ml/min/m2/mmHg、最大孔径
０．５２μであった。この膜を、ニュ−クリポア製スウ
インロックフィルタ−ホルダ−（φ２５ｍｍ）にセット
し、ＨＢＶ陽性血を約１０4PFU/mlとなるように添加し
たＰＢＳバッファ−（ＰＨ７．３５〜ＰＨ７．６）、及
び人新鮮血より採取した血漿を、各々１０ｍｌ濾過して
ウイルス捕捉率を化学発光免疫測定法で測定したとこ
ろ、ＰＢＳバッファ−中で９９．９％以上、人血漿中で
９８％であった。
ピレン混合物（混合重量比１００：４０）１００重量部
当り、３２０重量部の流動パラフィン（数平均分子量３
２４）及び０．３重量部の結晶核形成剤としての１，
３、２，４ービス（ｐ−エチルベンジリデン）ソルビト
ールを二軸型押出機により溶融混練しペレット化した。
このペレットを上記押出機を用いて１５０〜２００℃で
溶融し、スリット幅０．６ｍｍのＴダイスより空気中に
押し出して、Ｔダイス直下に置かれた冷却液相のガイド
ローラーの回転によってポリエチレングリコ−ルよりな
る冷却固化液中に導き冷却固化した後、１，１，２−ト
リクロロ−１，２，２−トリフルオロエタンに浸漬して
流動パラフィンの抽出を行なった。続いて、１３５℃の
空気中で２分間熱処理し、最大孔径０．５μ、空孔率５
８％、膜厚８０μのポリプロピレンフィルタ−を得た。
このようにして得られたポリプロピレンフィルタ−に、
アルゴンプラズマ（１００Ｗ、０．１Ｔｏｒｒ、１５秒
間）を照射した後、２−メトキシエチルアクリレ−トガ
ス（１．０ Ｔｏｒｒ）に３分間、グリシジルアクリレ
−トガス（０．７Ｔｏｒｒ)に３分間接触させて表面グ
ラフト重合を行い、表面に反応性官能基を有する親水性
多孔質膜を得た。続いて、１ｗｔ％のポリエチレンイミ
ン（分子量１８００）と１．０ｗｔ％のピリジンを含む
水溶液に、６０℃、１８時間浸漬することにより膜表面
にポリエチレンイミンを固定化した。得られた膜は、水
及び塩化メチレン／メタノ−ル共沸溶媒で良く洗浄した
後、試料とした。ポリプロピレン膜の表面に導入された
ポリ（２−メトキシエチルアクリレ−ト）とグリシジル
基に結合したポリエチレンイミンは、ＩＲ（ＡＴＲ法）
により確認した。ＥＳＣＡで求めた窒素／炭素比は０．
０６であった。また、過塩素酸滴定により求めたアミン
の量は、３．３×１０-4 eq／ｇであった。該膜の空孔
率は５５％、透水量３９０ml/min/m2/mmHg、最大孔径
０．５２μであった。この膜を、ニュ−クリポア製スウ
インロックフィルタ−ホルダ−（φ２５ｍｍ）にセット
し、ＨＢＶ陽性血を約１０4PFU/mlとなるように添加し
たＰＢＳバッファ−（ＰＨ７．３５〜ＰＨ７．６）、及
び人新鮮血より採取した血漿を、各々１０ｍｌ濾過して
ウイルス捕捉率を化学発光免疫測定法で測定したとこ
ろ、ＰＢＳバッファ−中で９９．９％以上、人血漿中で
９８％であった。
【００１６】
【発明の効果】本発明の血清肝炎ウィルス吸着材は、血
清肝炎ウィルスを効率良く吸着する事が出来るので、ウ
ィルスの除去、濃縮、精製など数々の用途に利用するこ
とができる。
清肝炎ウィルスを効率良く吸着する事が出来るので、ウ
ィルスの除去、濃縮、精製など数々の用途に利用するこ
とができる。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｃ１２Ｑ 1/70 Ｃ１２Ｑ 1/70 (Ｃ１２Ｍ 1/40 (Ｃ１２Ｍ 1/40 Ｃ１２Ｒ 1:93） Ｃ１２Ｒ 1:93） (Ｃ１２Ｎ 7/02 (Ｃ１２Ｎ 7/02 Ｃ１２Ｒ 1:93） Ｃ１２Ｒ 1:93） Ｆターム(参考） 4B029 AA21 BB13 CC04 CC10 CC13 4B033 NA11 NB03 NB15 NB37 NB62 NB63 NB64 NB65 NC04 NC12 ND05 NF01 NF07 4B063 QA01 QA18 QQ10 QR54 QS10 QS15 QS33 QS39 QX02 4B065 AA96X BD14 BD32 BD40 CA46
Claims (5)
- 【請求項１】 ポリアミン化合物を少なくとも１部に有
することを特徴とする血清肝炎ウィルス吸着材。 - 【請求項２】 ポリアミン化合物がポリエチレンイミ
ン、ポリアルキルアミン、ポリリジン、ポリアルギニン
およびポリヒスチジンから選ばれることを特徴とする請
求項１記載の血清肝炎ウィルス吸着材。 - 【請求項３】 ポリアミン化合物が担体に担持されてい
ることを特徴とする請求項１記載の血清肝炎ウィルス吸
着材。 - 【請求項４】 担体が粒子状、ビーズ状、フィルター
状、繊維状、シート状またはチューブ状であることを特
徴とする請求項１記載の血清肝炎ウィルス吸着材。 - 【請求項５】 血清肝炎ウィルスを含有する可能性のあ
る試料に請求項１記載の血清肝炎ウィルス吸着材を添加
し、血清肝炎ウィルスを前記吸着材に吸着する段階、次
にこうして血清肝炎ウィルスが結合した前記吸着材と試
料とを分離する段階を含むことを特徴とする血清肝炎ウ
ィルスの分離方法。
Priority Applications (1)
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|---|---|---|---|
| JP2001101185A JP2002000258A (ja) | 2000-04-17 | 2001-03-30 | 血清肝炎ウィルス吸着材および血清肝炎ウィルスの分離方法 |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2000115140 | 2000-04-17 | ||
| JP2000-115140 | 2000-04-17 | ||
| JP2001101185A JP2002000258A (ja) | 2000-04-17 | 2001-03-30 | 血清肝炎ウィルス吸着材および血清肝炎ウィルスの分離方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2002000258A true JP2002000258A (ja) | 2002-01-08 |
Family
ID=26590222
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2001101185A Pending JP2002000258A (ja) | 2000-04-17 | 2001-03-30 | 血清肝炎ウィルス吸着材および血清肝炎ウィルスの分離方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2002000258A (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2006325592A (ja) * | 2005-05-24 | 2006-12-07 | Samsung Electronics Co Ltd | 細胞またはウイルスの分離方法および該方法に用いられるキット |
| CN103450476A (zh) * | 2013-07-24 | 2013-12-18 | 广东省石油化工研究院 | 一种改性聚胺偶联剂及其制备方法 |
| WO2014135593A1 (fr) * | 2013-03-06 | 2014-09-12 | Colcom | Procede de capture de virus |
-
2001
- 2001-03-30 JP JP2001101185A patent/JP2002000258A/ja active Pending
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2006325592A (ja) * | 2005-05-24 | 2006-12-07 | Samsung Electronics Co Ltd | 細胞またはウイルスの分離方法および該方法に用いられるキット |
| JP4567629B2 (ja) * | 2005-05-24 | 2010-10-20 | 三星電子株式会社 | 細胞またはウイルスの分離方法および該方法に用いられるキット |
| WO2014135593A1 (fr) * | 2013-03-06 | 2014-09-12 | Colcom | Procede de capture de virus |
| FR3002948A1 (fr) * | 2013-03-06 | 2014-09-12 | Colcom | Procede de capture de virus. |
| CN103450476A (zh) * | 2013-07-24 | 2013-12-18 | 广东省石油化工研究院 | 一种改性聚胺偶联剂及其制备方法 |
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