JP4542906B2

JP4542906B2 - キノリニル−ピロロピラゾール類

Info

Publication number: JP4542906B2
Application number: JP2004555329A
Authority: JP
Inventors: ダグラス・ウェイド・ベイト; ジェイソン・スコット・ソーヤー; ジョナサン・マイケル・イングリング
Original assignee: イーライリリーアンドカンパニー
Priority date: 2002-11-22
Filing date: 2003-11-10
Publication date: 2010-09-15
Anticipated expiration: 2023-11-10
Also published as: CR7830A; HK1081948A1; WO2004048382A1; ZA200503121B; ES2273046T3; NZ538942A; KR20050083945A; PL376797A1; EP1565471A1; DK1565471T3; NO331403B1; NO20053045L; US20060040983A1; US7265225B2; AU2003291643A1; CY1106283T1; KR101057282B1; UA80571C2; HRP20050436A2; CN1714090A

Description

本発明は、新規キノリニル−ピラゾール化合物およびその医薬としての使用、具体的にはＴＧＦ−ベータシグナル伝達阻害剤としての使用に関する。

（発明の背景）
形質転換成長因子−ベータ（ＴＧＦ−ベータ）（「ＴＧＦ−β」）ポリペプチドは、多くの細胞型における成長、分化および遺伝子発現に影響する。このファミリーの最初に特徴付けられたポリペプチド、ＴＧＦ−β１は、共有結合している二つの同一の１１２アミノ酸サブユニットを有する。ＴＧＦ−β１は、単一のアミノ酸の違いでのみヒトとマウスを区別する高度に保存されたタンパク質である。哺乳動物にて発現するＴＧＦ−β遺伝子ファミリーの他の二つのメンバーがある。ＴＧＦ−β２は、ＴＧＦ−β１と７１％相同である（de Martinら (1987) EMBO J. 6:3673-3677）一方で、ＴＧＦ−β３は、ＴＧＦ−β１と８０％相同である（Derynckら (1988) EMBO J 7:3737-3743）。核磁気共鳴により決定されるＴＧＦ−β１の構造的特徴（Archerら (1993) Biochemistry 32:1164-1171）は、ＴＧＦ−β２の結晶構造（Daopinら (1992) Science 257:369-374; SchluneggerおよびGrutter (1992) Nature 358:430-434）と一致する。

ＴＧＦ−β１、−β２および−β３の生物学的機能を含む、少なくとも３つの異なる細胞外ＴＧＦ−β受容体、Ｉ型、ＩＩ型およびＩＩＩ型がある（講評のためにDerynck (1994) TIBS 19:548-553およびMassague (1990) Ann. Rev. Cell Biol. 6:597-641を参照のこと）。Ｉ型およびＩＩ型受容体は膜貫通型セリン／スレオニンキナーゼであり、ＴＧＦ−βの存在下、ヘテロメリックシグナリング複合体を形成する（Wranaら (1992) Cell 71: 1003-1014）。

細胞表面におけるヘテロメリックシグナリング複合体の活性化の機序が解明されている（Wranaら (1994) Nature 370: 341-347）。ＴＧＦ−βはまず、本質的に活性な膜貫通型セリン／スレオニンキナーゼであるＩＩ型受容体を結合させる。次いでＩ型受容体は複合体に補充され、ＧＳドメインにてリン酸化されて活性化し、下流のシグナリング成分（例えばＳｍａｄタンパク質）をリン酸化し、細胞内シグナル伝達系を開始する。本質的に活性なＩ型受容体（Ｔ２０４Ｄ変種）は、ＴＧＦ−β応答を有効に変換し、従ってＴＧＦ−βおよびＩＩ型受容体についての必要性をバイパスすることが示されている（Wieserら (1995) EMBO J 14: 2199-2208）。シグナリング機能はＩＩＩ型受容体について発見されていないが、該機能は、ＴＧＦ−β２をＴＧＦ−β１およびＴＧＦ−β３と本質的に等効力にさせるＩＩ型受容体に対するＴＧＦ−β２の親和性を増大する（Lopez-Casillasら (1993) Cell 73:1435-1444）。

血管内皮細胞にはＩＩＩ型受容体が欠如している。代わりに内皮細胞は、構造的に関連するタンパク質いわゆるエンドグリンを発現し（Cheifetzら (1992) J. Biol. Chem. 267:19027-19030）、これは高親和性を有するＴＧＦ−β１およびＴＧＦ−β３を結合させるだけである。従って、ＴＧＦ−βの相対力は、細胞および器官系に発現される受容体の型を反映する。ＴＧＦ−βポリペプチドの合成の分布はまた、多因子性シグナリング経路における成分の調節に加え、生理的機能に作用する。ＴＧＦ−β２およびＴＧＦ−β３の分布は、ＴＧＦ−β１よりも制限されており（Derynckら (1988) EMBO J 7:3737-3743）、例えばＴＧＦ−β３は間葉に由来する組織に限定される一方、ＴＧＦ−β１は間葉および内皮の両方に由来する組織に存在する。

ＴＧＦ−β１は、組織修正に重大な多機能サイトカインである。高濃度のＴＧＦ−β１は、血小板顆粒により損傷の部位に送達される（Assoian and Sporn (1986) J. Cell Biol. 102:1217-1223）。ＴＧＦ−β１は、白血球、単球および線維芽細胞のような細胞の化学走性などの治癒促進、ならびに組織修正および炎症応答に伴う血管形成、細胞分裂を含む成長因子およびサイトカインの調節促進などの一連の事象を開始する。ＴＧＦ−β１はまた、細胞外マトリックス成分の合成を刺激し（Robertsら (1986) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 83:4167-4171; Spornら (1983) Science 219:1329-1330; Massague (1987) Cell 49:437-438）、ＴＧＦ−β１の病態生理学を理解するためにもっとも重要なことに、ＴＧＦ−β１はそれ自体の合成を自動調節する（Kimら (1989) J. Biol. Chem. 264:7041-7045）。

本明細書に開示の化合物はまた、他のキナーゼ活性、例えばｐ３８キナーゼ阻害および／またはＫＤＲ（ＶＥＧＦＲ２）キナーゼ阻害を示すことができる。そのようなキナーゼ活性を決定するアッセイは当業者に知られ、当業者はそのような活性について開示されている化合物を試験することができよう。

（発明の要約）
開示されている発明はまた、式ＩＩ：

2-(6-メチル-ピリジン-2-イル)-3-[6-アミド-キノリン-4-イル)-5,6-ジヒドロ-4H-ピロロ[1,2-b]ピラゾール
で示される化合物およびその製薬的に許容される塩の選択に関する。

上記化合物は、２００１年５月２４日付の米国特許出願U.S.S.N. 60/293,464に優先権を主張して２００２年５月１３日付で出願されたPCT特許出願PCT/US02/11884に一般的に開示され、特許請求されており、該出願は本明細書に引用される。上記化合物は、上記引用される出願に具体的に開示されている化合物よりも顕著に優れた毒物学プロファイルを有するものとして選択されている。

（発明の詳細な記載）
「有効な量の式Ｉの化合物」にて使用する用語「有効な量」は例えば、ＴＧＦ−ベータを阻害することができる本発明化合物の量を意味する。
用語μＭはマイクロモルを意味する。
本明細書にて使用する一般的な化学用語は、それらの通常の意味を有する。

次の略語は、合成反応式および実施例を通して使用される。
ＤＭＦはジメチルホルムアミドを意味する。
ＴＨＦはテトラヒドロフランを意味する。
Ｍｓはメチルスルホニルであるメシルを意味する。
ＴＨＰはテトラヒドロピランを意味する。

本明細書に開示される化合物は、次の反応式および実施例のように製造することができる。本実施例は、化合物をどのように製造することができるかという方法を何ら限定するものと理解されるべきものではない。

次の反応式は、式Ｉの化合物の製造を説明する。
反応式Ｉ

次の反応式は、式ＩＩの化合物の製造を説明する。
反応式ＩＩ

次の実施例はさらに、反応式ＩおよびＩＩに概略的に示されている本発明化合物の製造を説明する。

実施例１
７−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−４−（２−ピリジン−２−イル−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−ピロロ［１，２−ｂ］ピラゾール−３−イル）キノリンの製造
Ａ．４−（２−ピリジン−２−イル−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−ピロロ［１，２−ｂ］ピラゾール−３−イル）−７−［２−（テトラヒドロピラン−２−イルオキシ）エトキシ］キノリンの製造
４−（２−ピリジン−２−イル−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−ピロロ［１，２−ｂ］ピラゾール−３−イル）キノリン−７−オール３７６ｍｇ（１．１４６ｍｍｏｌ）、炭酸セシウム８２６ｍｇ（２．５４ｍｍｏｌ）および２−（２−ブロモエトキシ）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン３８０μＬ（２．５２ｍｍｏｌ）をＤＭＦ５ｍＬ中１２０℃にて４時間加熱した。飽和塩化ナトリウムで反応を停止した後、クロロホルムで抽出した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧濃縮した。反応混合物をジクロロメタン〜１０％メタノール／ジクロロメタンで溶出したシリカゲルカラムにより精製し、所望の標記中間体を黄色油状物４２４ｍｇ（８１％）として得た。
MS ES⁺ m/e 457.0 (M+1).

Ｂ．２−［４−（２−ピリジン−２−イル−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−ピロロ［１，２−ｂ］ピラゾール−３−イル）キノリン−７−イルオキシ］エタノールの製造
４−（２−ピリジン−２−イル−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−ピロロ［１，２−ｂ］ピラゾール−３−イル）−７−［２−（テトラヒドロピラン−２−イルオキシ）エトキシ］キノリン４２１ｍｇ（０．９２ｍｍｏｌ）の酢酸：テトラヒドロフラン：水（４：２：１）２０ｍＬ溶液を加熱した。溶媒を減圧留去し、残渣をクロロホルム：イソプロピル（３：１）で回収した。有機層を飽和炭酸水素ナトリウムで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥した。減圧濃縮した。その残渣は反応式の次の工程で使用するのに十分な純度を有する（４２５ｍｇ、１００％）。
MS ES⁺ m/e 373.1 (M+1).

Ｃ．メタンスルホン酸２−［４−（２−ピリジン−２−イル−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−ピロロ［１，２−ｂ］ピラゾール−３−イル）キノリン−７−イルオキシ］エチルエステルの製造
２−［４−（２−ピリジン−２−イル−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−ピロロ［１，２−ｂ］ピラゾール−３−イル）キノリン−７−イルオキシ］エタノール２９３ｍｇ（０．７８ｍｍｏｌ）および塩化メタンスルホニル６８μＬ（０．８１ｍｌ）の乾燥ピリジン５ｍＬ溶液を２時間撹拌した。ピリジンを減圧留去し、残渣をクロロホルムで回収した。有機層を飽和炭酸水素ナトリウムで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、所望の標記中間体を白色泡状物４２５ｍｇ（１００％）として得た。
MS ES⁺ m/e 451.1 (M+1).

Ｄ．７−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−４−（２−ピリジン−２−イル−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−ピロロ［１，２−ｂ］ピラゾール−３−イル）キノリンの製造

メタンスルホン酸２−［４−（２−ピリジン−２−イル−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−ピロロ［１，２−ｂ］ピラゾール−３−イル）キノリン−７−イルオキシ］エチルエステル８７ｍｇ（０．１９ｍｍｏｌ）をモルホリン１ｍＬと５０℃にて４時間加熱した。モルホリンを減圧留去した後、生成物をイソプロピルアルコール：クロロホルム（１：３）で抽出した。有機層を塩化ナトリウムで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥した。減圧濃縮し、所望の標記生成物をわずかに黄色の固体８３ｍｇ（１００％）として得た。
MS ES⁺ m/e 442.0 (M+1).

実施例２
２−（６−メチル−ピリジン−２−イル）−３−［６−アミド−キノリン−４−イル）−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−ピロロ［１，２−ｂ］ピラゾールの製造
Ａ．６−ブロモ−４−メチル−キノリンの製造
４−ブロモ−フェニルアミン１当量の１，４−ジオキサン溶液を撹拌し、約１２℃まで冷却した。硫酸２当量をゆっくり加え、加熱還流した。メチルビニルケトン１．５当量を還流溶液に滴加した。添加完了後、溶液を１時間加熱した。反応溶液を留去し、乾燥し、ジクロロメタンに溶解した。溶液を１Ｍ炭酸ナトリウムでｐＨ８に調節し、水で３回抽出した。残渣をＳｉＯ_２（７０／３０ヘキサン／酢酸エチル）でクロマトグラフィーし、所望の標記中間体を得た。
MS ES⁺ m/e = 158.2 (M+1).

Ｂ．６−メチル−ピリジン−２−カルボン酸メチルエステルの製造
６−メチル−ピリジン−２−カルボン酸１０ｇ（７２．９ｍｍｏｌ）をジクロロメタン２００ｍＬ中にて懸濁させた。０℃まで冷却した。メタノール１０ｍＬ、４−ジメチルアミノピリジン１１．６ｇ（９４．８ｍｍｏｌ）および１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）１８．２ｇ（９４．８ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温にて６時間撹拌し、水およびブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥した。混合物をろ過し、減圧濃縮した。残渣をＳｉＯ_２（５０％酢酸エチル／ヘキサン）でクロマトグラフィーし、所望の標記中間体９．６６ｇ（９２％）を無色液体として得た。
¹H NMR (CDCl₃) δ 7.93-7.88 (m, 1H), 7.75-7.7 (m, 1H), 7.35-7.3 (m, 1H), 4.00 (s, 3H), 2.60 (s, 3H).

Ｃ．２−（６−ブロモ−キノリン−４−イル）−１−（６−メチル−ピリジン−２−イル）エタノンの製造
６−ブロモ−４−メチル−キノリン３８．５ｇ（１５３ｍｍｏｌ）を乾燥ＴＨＦ６００ｍＬに溶解した。−７０℃まで冷却し、温度を−６５℃以下に維持しながら、０．５Ｍカリウムヘキサメチルジシラザン（ＫＮ（ＳｉＭｅ_３）_２）４００ｍＬ（２００ｍｍｏｌ）で２時間にわたり滴加処理した。得られた溶液を−７０℃にて１時間撹拌し、６−メチルピリジン−２−カルボン酸メチルエステル２７．２（１８０ｍｍｏｌ）の乾燥ＴＨＦ１００ｍＬ溶液を１５分にわたって滴加した。添加の間、混合物は暗赤色から黄緑色に変化し、沈殿物を形成するだろう。混合物を−７０℃にて２時間にわたり撹拌した後、撹拌しながら常温まで５時間昇温させた。混合物を冷却した後、１２Ｎ塩酸でｐＨ＝１として反応を停止した。固体炭酸カリウムでｐＨを９まで上げた。溶液を固体からデカンテーションし、酢酸エチル２００ｍＬで２回抽出した。有機抽出物を集め、水で洗浄し、炭酸カリウムで乾燥した。先のデカンテーションした固体を水２００ｍＬおよび酢酸エチル２００ｍＬ中にて撹拌し、さらに炭酸カリウムで処理した。有機部分を分離し、先の酢酸エチル抽出物とともに乾燥した。溶液を減圧濃縮し、暗色油状物を得た。油状物をジクロロメタン、次いで酢酸エチルにより３００ｍＬシリカプラグに通した。適切なフラクションを集め、減圧濃縮し、コハク色油状物を得た。油状物をジクロロメタンでフラスコの側面からすすぎ落とした後、フラスコを回転させながらヘキサンで希釈し、所望の標記中間体３８．５ｇ（７３．８％）を黄色固体として得た。
MS ES⁺ = 341 (M+1).

Ｄ．１−［２−（６−ブロモ−キノリン−４−イル）−１−（６−メチル−ピリジン−２−イル）エチリデンアミノ］ピロリジン−２−オンの製造
２−（６−ブロモ−キノリン−４−イル）−１−（６−メチル−ピリジン−２−イル）エタノン３８．５ｇ（１１３ｍｍｏｌ）および１−アミノピロリジノン塩酸塩２０ｇ（１４７ｍｍｏｌ）の混合物をピリジン１１５ｍＬ中、常温にて１０時間撹拌した。４Å不活性化シーブス約５０ｇを加えた。さらに１３時間撹拌し続け、シリカ１０〜１５ｇを加え、混合物を５０ｇシリカプラグに通してろ過した。シリカプラグを酢酸エチル３Ｌで溶出した。ろ液を集め、減圧濃縮した。ヒドラゾン沈殿物をろ過により集め、真空乾燥し、所望の標記中間体３３．３ｇ（６９．７％）を灰白色固体として得た。
MS ES⁺ = 423 (M+1).

Ｅ．６−ブロモ−４−［２−（６−メチル−ピリジン−２−イル）−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−ピロロ［１，２−ｂ］ピラゾール−３−イル］キノリンの製造
炭酸セシウム１．２当量および１−［２−（６−ブロモ−キノリン−４−イル）−１−（６−メチル−ピリジン−２−イル）エチリデンアミノ］ピロリジン−２−オン３３．３ｇ（７８．７ｍｍｏｌ）の混合物に、乾燥Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド３００ｍＬを加えた。混合物を１００℃にて２０時間撹拌した。反応の間、混合物は暗色に変化することがある。Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドを減圧留去した。残渣を水およびジクロロメタンで分液した。水性部分をさらにジクロロメタンで抽出した。有機溶液をジクロロメタン１．５Ｌ、酢酸エチル１．５Ｌおよびアセトン１．５Ｌで溶出した３００ｍＬシリカプラグに通してろ過した。適切なフラクションを集め、減圧濃縮した。得られた沈殿物をろ過により集め、所望の標記中間体２２．７ｇ（７１．２％）を灰白色固体として得た。
MS ES⁺ = 405 (M+1).

Ｆ．４−［２−（６−メチル−ピリジン−２−イル）−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−ピロロ［１，２−ｂ］ピラゾール−３−イル］キノリン−６−カルボン酸メチルエステルの製造
６−ブロモ−４−［２−（６−メチル−ピリジン−２−イル）−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−ピロロ［１，２−ｂ］ピラゾール−３−イル］キノリン２２．７ｇ（４５ｍｍｏｌ）を酢酸ナトリウム１９ｇ（２３０ｍｍｏｌ）およびパラジウム触媒［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム（ＩＩ）のジクロロメタンとの錯体（１：１）８５０ｍｇ（１．０４ｍｍｏｌ）の混合物にメタノール１３０ｍＬ中にて加えた。混合物を５０ｐｓｉ一酸化炭素雰囲気下に置き、９０℃まで昇温しながらさらに一酸化炭素を一定量充填し、１時間にわたって撹拌した。混合物を８時間にわたって冷却し、再び一酸化炭素で再充填し、９０℃まで加熱した。圧力は約７５ｐｓｉまで上昇させることができる。圧力が安定で、ＴＬＣ（１：１トルエン／アセトン）により臭化物の消失が示された約１時間で反応は完了した。混合物をジクロロメタン６００ｍＬおよび水１Ｌで分液した。水性部分をジクロロメタン４００ｍＬでさらに抽出した。有機溶液を３００ｍＬシリカプラグに通してろ過し、ジクロロメタン５００ｍＬ、酢酸エチル１２００ｍＬおよびアセトン１５００ｍＬで洗浄した。アセトン部分を廃棄した。適切なフラクションを集め、濃縮し、所望の標記中間体１８．８ｇ（８７．４％）を桃色粉状物として得た。
MS ES⁺ = 385 (M+1).

Ｇ．２−（６−メチル−ピリジン−２−イル）−３−［６−アミド−キノリン−４−イル）−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−ピロロ［１，２−ｂ］ピラゾールの製造

４−［２−（６−メチル−ピリジン−２−イル）−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−ピロロ［１，２−ｂ］ピラゾール−３−イル］キノリン−６−カルボン酸メチルエステルの７Ｎアンモニア／メタノール６０ｍＬ混合物をステンレス鋼圧力容器中にて９０℃まで６６時間昇温させた。圧力を約８０ｐｓｉまで上昇させた。反応中、圧力を維持した。容器を冷却し、茶色混合物を減圧濃縮した。得られた固体を、連続して連結させた２つの１２ｇRedi-Pakカートリッジによりアセトンで溶出して精製した。適切なフラクションを集め、減圧濃縮した。得られた白色がかった固体をジクロロメタン中にて懸濁させ、ヘキサンで希釈し、ろ過した。集めた灰白色固体より、所望の標記生成物１．１０４ｇ（６３．８％）を得た。
MS ES⁺ = 370 (M+1).

本明細書に開示の化合物を、ＴＧＦ−β阻害についての次のプロトコルにより、以下のプロトコルの記述に記載のように試験した。

ＴＧＦ−β受容体Ｉの精製およびインビトロキナーゼ反応
ＴＧＦ−βＩ型（ＲＩＴ２０４Ｄ）受容体について：
各受容体の６Ｘ−ＨＩＳのタグを付した細胞質キナーゼドメインを発現し、以下に簡単に記載したように、Ｓｆ９昆虫細胞溶解物から精製した。
感染の４８〜７２時間後の細胞ペレットを溶解緩衝液（ＬＢ: 50 mM Tris pH 7.5, 150 mM NaCl, 50 mM NaF, 20 mM β−メルカプトエタノールを加えたばかりの0.5% NP40, 10 mM イミダゾール, 1 mM PMSF, 1X EDTA不含コンプリートプロテアーゼ阻害剤（Boehringer Mannheim））に溶解した。
細胞溶解物は、遠心分離により分離し、０．４５μＭろ過した後、Ni/NTAアフィニティークロマトグラフィー（Qiagen）により精製した。

クロマトグラフィープロトコル：
１０ＣＶのＬＢ、充填サンプルを平衡化し、ＲＩＰＡ緩衝液１０ＣＶ（新たに20 mM β−メルカプトエタノール, 1 mM PMSFを加えた、50 mM Tris pH 7.5, 150 mM NaCl, 1% NP40, 1mM EDTA, 0.25% デオキシコール酸ナトリウム）で洗浄し、ＬＢ１０ＣＶで洗浄し、１０ＣＶ１ＸＫＢ（50 mM Tris pH 7.5, 150 mM NaCl, 4 mM MgCl₂, 1 mM NaF, 2 mM β−メルカプトエタノール）で洗浄し、２００ｍＭイミダゾールを含む１ＸＫＢの直線勾配で溶出した。
両酵素は約９０％純度であり、自己リン酸化活性を有した。

反応： 1X KB中170-200 nM酵素, 1X KB/16% DMSO中化合物の連続希釈物／（最終濃度4%のDMSOを用いて20 μM〜1 nMの最終濃度に希釈したもの）に、1X KB中ATP混合物（4 μM ATP/1 μCi ³³P-γ-ATP最終濃度）を加えることにより、反応を開始した。

反応物を３０℃にて１時間インキュベートした。反応を停止し、Millipore FBグラスファイバーフィルタープレート上にて標準ＴＣＡ／ＢＳＡ沈殿を用い、MicroBeta JETでカウントした液体シンチレーションにより定量した。

本明細書に開示の化合物は、ＴＧＦ−βＩ型（ＲＩＴ２０４Ｄ）受容体キナーゼドメインをＩＣ_５０値＜２０μＭで阻害する一方、上記PCT特許出願PCT/US02/11884に開示されている構造的に関連する化合物よりもインビボにて低い毒性を示す。

「増強されたＴＧＦ−β活性により特徴付けられる」状態としては、ＴＧＦ−β合成が増大されたレベルにてＴＧＦ−βが存在するように刺激される状態、またはＴＧＦ−β潜伏タンパク質（latent protein）が望ましくなく活性化され、もしくは活性なＴＧＦ−βタンパク質に変換される状態、またはＴＧＦ−β受容体が上方調節される状態、またはＴＧＦ−βタンパク質が疾患の位置における細胞もしくは細胞外マトリックスへの増強された結合を示す状態が挙げられる。従っていずれの場合においても、「増強された活性」は、その原因にかかわらず、ＴＧＦ−βの生物学的活性が望ましくなく高いいずれかの状態を意味する。

多くの疾患がＴＧＦ−β１の生産過剰と関連している。ＴＧＦ−β細胞内シグナリング経路の阻害剤が線維増殖性疾患（fibroproliferative disease）の治療に有用である。具体的に線維増殖性疾患としては、糸球体腎炎（ＧＮ）、例えばメサンギウム増殖性ＧＮ、免疫性ＧＮおよび半月体形成性ＧＮなどの非調節ＴＧＦ−β活性および過剰線維形成と関連する腎障害が挙げられる。他の腎臓状態としては、糖尿病性ネフロパシー、腎間質線維症、サイクロスポリンを受けた移植患者における腎線維症およびＨＩＶ関連ネフロパシーが挙げられる。膠原病としては、全身性進行性硬化症、多発性筋炎、強皮症、皮膚筋炎、好酸球性筋膜炎、限局性強皮症またはレイノー症候群の発生と関連する状態が挙げられる。過剰ＴＧＦ−β活性に起因する肺線維症としては、全身性エリテマトーデスおよび強皮症のような自動免疫疾患、化学的接触またはアレルギーと関連することが多い成人呼吸窮迫症候群、特発性肺線維症および間質性肺線維症が挙げられる。線維増殖性特質と関連する別の自動免疫疾患は、関節リウマチである。

線維増殖性状態を伴う眼疾患としては、網膜復位術に伴う増殖性硝子体網膜症、眼内レンズ移植を伴う水晶体摘出が挙げられ、緑内障排水手術後はＴＧＦ−β１過剰生産を伴う。

ＴＧＦ−β１過剰生産と関連する線維疾患は、腎臓、肺および肝臓の線維症のような慢性的状態ならびに真皮の瘢痕および再狭窄のようなより急性の状態に分けることができる（Chamberlain, J. Cardiovascular Drug Reviews, 19(4):329-344）。ＴＧＦ−β１の腫瘍細胞による合成および分泌はまた、悪性の脳または乳房の腫瘍をもつ患者に見られるように、免疫抑制を引き起こし得る（Arteagaら (1993) J. Clin. Invest. 92:2569-2576）。マウスにおけるリーシュマニア感染症のコースは、ＴＧＦ−β１により大々的に修正される（Barral-Nettoら (1992) Science 257:545-547）。ＴＧＦ−β１は疾患を悪化させたが、ＴＧＦ−β１抗体は遺伝的に感受性の強いマウスにおいて疾患の進行を停止した。遺伝的に抵抗力のあるマウスは、ＴＧＦ−β１の投与においてリーシュマニア感染症に感染しやすくなった。

ＴＧＦ−β１の細胞外マトリックス堆積への意味深い効果が講評され（Rocco and Ziyadeh (1991) in Contemporary Issues in Nephrology v.23, Hormones, autocoids and the kidney. ed. Jay Stein, Churchill Livingston, New York pp.391-410; Robertsら (1988) Rec. Prog. Hormone Res. 44:157-197）、細胞外マトリックス成分の合成の刺激および減成の阻害を含む。糸球体の構造およびろ過の性質は、メサンギウム細胞膜および糸球体細胞膜の細胞外マトリックス構成により大部分決定されるため、ＴＧＦ−β１が腎臓において意味深い効果を有することは驚くべきことではない。増殖性糸球体腎炎（Borderら (1990) Kidney Int. 37:689-695）および糖尿病性ネフロパシー（Mauerら (1984) J. Clin. Invest. 74:1143-1155）におけるメサンギウムマトリックスの蓄積は疾患の明白の、そして優性の病理学的特徴である。ＴＧＦ−β１レベルは、ヒト糖尿病性糸球体硬化症（進行性神経障害）において上昇する（Yamamotoら (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. 90:1814-1818）。ＴＧＦ−β１は多くの動物モデルにおける腎線維症の発生の重要な仲介物質である（Phanら (1990) Kidney Int. 37:426; Okudaら (1990) J. Clin. Invest. 86:453）。ラットにおいて実験的に誘発された糸球体腎炎の抑制は、ＴＧＦ−β１に対する抗血清（Borderら (1990) Nature 346:371）および細胞外マトリックスタンパク質、デコリン（decorin）により実証されており、デコリンはＴＧＦ−β１を結合させることができる（Borderら (1992) Nature 360:361-363）。

あまりに多いＴＧＦ−β１は、真皮瘢痕組織形成を引き起こす。ラットにおける回復期創傷縁に注入されたＴＧＦ−β１抗体の中性化は、創傷治癒の速度または傷の伸張力に干渉しないで傷を抑制することが示されている（Shahら (1992) Lancet 339:213-214）。同時に、血管形成の減少、傷中のマクロファージおよび単球の数の減少、ならびに瘢痕組織中のでたらめなコラーゲン繊維堆積量の減少があった。

ＴＧＦ−β１は、バルーン血管形成術後の動脈における平滑筋細胞の増殖および細胞外マトリックスの堆積により生じる動脈壁の進行性肥厚における因子であることができる。再狭窄した動脈の直径は、この肥厚により９０％減少することがあり、直径の減少の大半は平滑筋細胞体よりもむしろ細胞外マトリックスに起因するため、広範囲の細胞外マトリックス堆積をただ減少させることにより５０％までこれらの管を開かせることが可能であり得る。インビボにてＴＧＦ−β１遺伝子とトランスフェクトさせた無傷のブタ動脈において、ＴＧＦ−β１遺伝子発現は、細胞外マトリックス合成および肥厚化の両方と関連した（Nabelら (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:10759-10763）。ＴＧＦ−β１誘発型肥厚化は、ＰＤＧＦ−ＢＢにより誘発されたものほど広範囲ではないが、細胞外マトリックスはＴＧＦ−β１トランスフェクタント（transfectant）を伴い、より広範囲であった。細胞外マトリックス堆積は、この遺伝子トランスファーブタモデルにおいてＦＧＦ−１（ＦＧＦの分泌された形態）誘発型肥厚化を伴わなかった（Nabel (1993) Nature 362:844-846）。

腫瘍により生成されたＴＧＦ−β１が有害であることがある癌のいくつかの型がある。ＭＡＴＬｙＬｕラット前立腺癌細胞（Steiner and Barrack (1992) Mol. Endocrinol 6:15-25）およびＭＣＦ−７ヒト乳癌細胞（Arteagaら (1993) Cell Growth and Differ. 4:193-201）は、マウスＴＧＦ−β１を発現する媒介動物によるトランスフェクション後、より発癌性および転移性となった。ＴＧＦ−β１は、ヒト前立腺および進行性胃癌における血管形成、転移および不良な予後と関連している（Wikstrom, P.ら (1998) Prostate 37: 19-29; Saito, H.ら (1999) Cancer 86: 1455-1462）。乳癌において、不良な予後は、高められたＴＧＦ−βと関連し（Dicksonら (1987) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84:837-841; Kasidら (1987) Cancer Res. 47:5733-5738; Dalyら (1990) J. Cell Biochem. 43:199-211; Barrett-Leeら (1990) Br. J Cancer 61:612-617; Kingら (1989) J. Steroid Biochem. 34:133-138; Welchら (1990) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:7678-7682; Walkerら (1992) Eur. J. Cancer 238:641-644）、タモキシフェン治療によるＴＧＦ−β１の誘発（Buttaら (1992) Cancer Res. 52:4261- 4264）は乳癌のタモキシフェン治療の失敗と関連している（Thompsonら (1991) Br. J. Cancer 63:609-614）。抗ＴＧＦ−β１抗体は、胸腺欠損マウスにおけるＭＤＡ−２３１ヒト乳癌細胞の成長を阻害し（Arteagaら (1993) J. Clin. Invest. 92:2569-2576）、これは脾臓ナチュラルキラー細胞活性の増大に相互に関連がある治療である。潜伏ＴＧＦ−β１によりトランスフェクトされたＣＨＯ細胞はまた、ヌードマウスにおいて軽減されたＮＫ活性および増大された腫瘍成長を示した（Wallickら (1990) J. Exp. Med. 172:1777-1784）。従って、乳房の腫瘍により分泌されたＴＧＦ−βは、エンドクリン免疫抑制の原因となることがある。高血漿濃度のＴＧＦ−β１は、進行性乳癌患者について不良な予後を示すことが示されている（Anscherら (1993) N. Engl. J. Med. 328:1592-1598）。高用量の化学療法および自家骨髄移植前に高循環のＴＧＦ−βを有する患者は、肝内性肝静脈閉塞症（５０％までの死亡率を有するすべての患者の１５〜５０％）および特発性間質性肺炎（すべての患者の４０〜６０％）の危険性が高い。これらの研究結果から推測されることは、１）ＴＧＦ−β１の高められた血漿レベルは、危険な状態にある患者を認識するために使用することができ、そして２）ＴＧＦ−β１の減少は、乳癌患者に対するこれらの一般的治療の死亡症例を軽減することができることである。

多くの悪性細胞は、形質転換成長因子−β（ＴＧＦ−β）、潜在的免疫抑制剤を分泌し、これはＴＧＦ−βの生成が、ホスト免疫学的監視からの有意の腫瘍回避機序を示すことができることを示唆する。腫瘍を有するホストにおいて分裂したＴＧＦ−βシグナリングを有する白血球亜母集団の構築は、癌の免疫療法について潜在的意義を提供する。Ｔ細胞において分裂したＴＧＦ−βシグナリングを有するトランスジェニック動物モデルは、リンパ腫腫瘍、ＥＬ４を過剰発現する、通常は致命的なＴＧＦ−βを全滅させることができる（Gorelik and Flavell, (2001) Nature Medicine 7(10): 1118-1122）。腫瘍細胞におけるＴＧＦ−β分泌のダウン・レギュレーションは、ホストにおける免疫原性の復元を生じる一方、ＴＧＦ−βに対するＴ細胞の無感覚は、増進された分化および自己免疫を生じ、これらの要素は寛容化されたホストにおいて自己抗原発現腫瘍に有効であるために必要であることがある。ＴＧＦ−βの免疫抑制効果はまた、ＨＩＶ患者のＣＤ４／ＣＤ８Ｔ細胞数に基づいて予測された免疫応答よりも低い免疫応答を有する患者の亜母集団に関わっている（Garbaら J. Immunology (2002) 168: 2247-2254）。ＴＧＦ−β中性化抗体は、培養の効果を逆転させることができ、これはＴＧＦ−βシグナリング阻害剤が、このＨＩＶ患者の小集団に存在する免疫抑制を逆転する有用性を有することができることを示唆する。

ＴＧＦ−β１は、発癌の初期段階の間、潜在的腫瘍抑制剤として作用することができ、いくつかの化学抗癌剤の作用を仲介することがある。しかし、悪性新生物の進行および発達の間のいくつかの点にて、腫瘍細胞は、微環境における生物活性のＴＧＦ−βの出現と同時に、ＴＧＦ−β依存成長阻害を回避するようである。ＴＧＦ−βの腫瘍抑制／腫瘍促進の二つの役割は、ケラチノサイトにおいてＴＧＦ−βを過剰発現するトランスジェニック系においてほとんど明瞭に解明されている。トランスジェニックは良性の皮膚損傷の形成に、より抵抗力がある一方、トランスジェニックにおける転移変換の速度は劇的に増大した（Cuiら (1996) Cell 86(4):531-42）。原発腫瘍における悪性細胞によるＴＧＦ−β１の生成は、腫瘍発達の進展段階を伴って増大するようである。多くの主要な上皮癌における研究は、ヒト癌により増大したＴＧＦ−βの生成が腫瘍発達の間の比較的末期の事象として起こることを示唆する。さらにこの腫瘍関連性ＴＧＦ−βは、選択的利点を有する腫瘍細胞を提供し、腫瘍発達を促進する。細胞／細胞および細胞／ストロマ相互作用へのＴＧＦ−βの効果は、侵入および転移についてのより大きな傾向を生じる。腫瘍関連性ＴＧＦ−βは、活性化されたリンパ球のクローン性増殖の潜在的阻害剤であるため、腫瘍細胞を免疫監視から回避させることができる。ＴＧＦ−βはまた、アンギオスタチンの生成を阻害することが示されている。放射性治療および化学療法のような癌治療様式は、腫瘍において活性化されるＴＧＦ−βの生成を誘発し、その結果、ＴＧＦ−β成長阻害効果に抵抗力のある悪性細胞の副産物（outgrowth）が選択される。従ってこれらの抗癌治療は、危険性を増大し、促進された成長および侵襲性を有する腫瘍の発展を早める。この状況において、ＴＧＦ−β仲介シグナル伝達を標的とする物質が、非常に有効な治療方針であることができる。ＴＧＦ−βに対する腫瘍細胞の抵抗性は、放射性療法および化学療法の細胞毒性効果のほとんどをなくすことが示されており、ストロマにおけるＴＧＦ−βの治療依存性活性化は、腫瘍発達をより導く微環境を作ることができるように有害であり得、線維症を引き起こす組織損傷の原因となる。ＴＧＦ−βシグナル伝達阻害剤の発展は、進行した癌の治療のみおよび他の治療との併用に有益であるようである。

本化合物は、治療を必要とする患者への該化合物の投与により、そのような患者におけるＴＧＦ−βを阻害することによる、ＴＧＦ−βに影響される癌および他の疾患状態の治療に有用である。ＴＧＦ−βはまた、アテローム性動脈硬化症（T.A. McCaffrey: TGF-βs and TGF-β Receptors in Atherosclerosis: Cytokine and Growth Factor Reviews 2000, 11, 103-114）およびアルツハイマー病（Masliah, E.; Ho, G.; Wyss-Coray, T.: Functional Role of TGF-β in Alzheimer's Disease Microvascular Injury: Lessons from Transgenic Mice: Neurochemistry International 2001, 39, 393-400）に対して有用であろう。

医薬組成物
本発明の組成物は、治療的に有効な量の上記ＴＧＦ−βアンタゴニストである。組成物は、一般的な賦形剤、希釈剤もしくは担体とともに製剤化され、そして錠剤中に圧縮され、または便利な経口投与もしくは筋肉内静脈内経路による投与のためのエリキシル剤もしくは溶液剤に製剤化することができる。本化合物は、経皮投与することができ、持続放出投与形態などとして製剤化することがある。

本発明によりヒト患者を治療する方法としては、ＴＧＦ−βアンタゴニストの投与が挙げられる。ＴＧＦ−βアンタゴニストは、経口および直腸経路により、局所的、非経口的、例えば注入によりおよび連続的または非連続的動脈内注入により、例えば錠剤、ロゼンジ、舌下錠、サシェ、カシェ、エリキシル剤、ゲル、懸濁剤、エアロゾル、例えば適切な基剤中１〜１０重量％の活性化合物を含む軟膏、軟および硬ゼラチンカプセル、坐剤、生理的に許容される媒体中の注射用溶液剤および懸濁剤、ならびに注射用溶液を製造するための担持物質上に吸着された無菌パックされた散剤の形態にて、投与することができる製剤に製剤化される。この目的のために有利に、組成物は単位投与形態、好ましくは約５〜約５００ｍｇ（非経口または吸入投与の場合には約５〜５０ｍｇ、および経口または直腸投与の場合には約２５〜５００ｍｇ）の化合物を含む各単位用量にて提供することができる。もちろん実際に投与される化合物の量が、治療される状態、投与される化合物の選択および投与経路の選択などのすべての関連する環境に鑑みて、医師により決定されるだろうことは容易に理解されるが、約０．５〜約３００ｍｇ／ｋｇ／日、好ましくは０．５〜２０ｍｇ／ｋｇの用量の活性成分を投与することができ、それゆえ上記好ましい投与範囲は、本発明の範囲を何ら限定するものではない。

ＴＧＦ−βアンタゴニストの別々の投与に有用な製剤は通常、担体と混合され、あるいは担体により希釈され、あるいはカプセル、サシェ、カシェ、ペーパーもしくは他の容器の形態にて摂取用担体により、またはアンプルのような使い捨て容器により、封入または被包された、本明細書に具体的に記載されている化合物から選択される少なくとも一つの化合物を含むであろう。担体または希釈剤は、活性な治療物質のためのビヒクル、賦形剤または媒体として機能しうる固体、半固体または液体物質であることができる。本発明の医薬組成物に用いることができる希釈剤または担体のいくつかの例は、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、プロピレングリコール、流動パラフィン、白色軟パラフィン、カオリン、ヒュームド二酸化ケイ素、微結晶性セルロース、ケイ酸カルシウム、シリカ、ポリビニルピロリドン、セトステアリルアルコール、デンプン、加工デンプン、アラビアゴム、リン酸カルシウム、ココアバター、エトキシル化エステル、カカオ脂、ラッカセイ油、アルギン酸塩、トラガカント、ゼラチン、シロップ、メチルセルロース、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート、乳酸エチル、ヒドロキシ安息香酸メチルおよびプロピル、三オレイン酸ソルビタン、セスキオレイン酸ソルビタンおよびオレイルアルコール、ならびにトリクロロモノフルオロメタン、ジクロロジフルオロメタンおよびジクロロテトラフルオロエタンのようなプロペラントである。錠剤の場合、錠剤成形機の金型および杵上の粉末化された成分の固着および結合を阻止するために、滑沢剤を組み込むことができる。そのような目的のために、例えばステアリン酸アルミニウム、ステアリン酸マグネシウムもしくはステアリン酸カルシウム、タルクまたは鉱油を用いることができる。

本発明の好ましい医薬形態は、カプセル、錠剤、坐剤、注射用溶液剤、クリームおよび軟膏である。特に好ましくは、エアロゾルのような吸入用、注射用および経口用の製剤である。

Claims

式ＩＩ：

式ＩＩ
で示される化合物またはその製薬的に許容される塩。