JP4463460B2 - Ｘａ因子阻害剤の活性をモニターするためラッセルクサリヘビ蛇毒誘導血漿Ｘａ因子活性の使用 - Google Patents
Ｘａ因子阻害剤の活性をモニターするためラッセルクサリヘビ蛇毒誘導血漿Ｘａ因子活性の使用 Download PDFInfo
- Publication number
- JP4463460B2 JP4463460B2 JP2001535051A JP2001535051A JP4463460B2 JP 4463460 B2 JP4463460 B2 JP 4463460B2 JP 2001535051 A JP2001535051 A JP 2001535051A JP 2001535051 A JP2001535051 A JP 2001535051A JP 4463460 B2 JP4463460 B2 JP 4463460B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- fxa
- plasma
- activity
- fxa inhibitor
- factor
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- 230000000694 effects Effects 0.000 title claims abstract description 35
- 241000271032 Daboia russelii Species 0.000 title claims abstract description 14
- 229940123583 Factor Xa inhibitor Drugs 0.000 title abstract description 14
- 239000003998 snake venom Substances 0.000 title description 12
- 108010074860 Factor Xa Proteins 0.000 title description 5
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 31
- 206010053567 Coagulopathies Diseases 0.000 claims abstract description 30
- 230000035602 clotting Effects 0.000 claims abstract description 30
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 claims abstract description 8
- 239000002821 viper venom Substances 0.000 claims abstract 3
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 claims description 33
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims description 8
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 claims description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 7
- 238000011002 quantification Methods 0.000 claims description 6
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 claims description 6
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 claims description 5
- 108090000040 Russellysin Proteins 0.000 claims 2
- MEVIZVSRUIKHJK-UHFFFAOYSA-N methyl 3-(3-carbamimidoylphenyl)-2-methylpropanoate Chemical compound COC(=O)C(C)CC1=CC=CC(C(N)=N)=C1 MEVIZVSRUIKHJK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 18
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 17
- 229920002594 Polyethylene Glycol 8000 Polymers 0.000 description 9
- 239000004353 Polyethylene glycol 8000 Substances 0.000 description 9
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 9
- 229940085678 polyethylene glycol 8000 Drugs 0.000 description 9
- 235000019446 polyethylene glycol 8000 Nutrition 0.000 description 9
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 9
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical group OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 8
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 6
- 108010014173 Factor X Proteins 0.000 description 5
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 5
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 4
- 108010054964 H-hexahydrotyrosyl-alanyl-arginine-4-nitroanilide Proteins 0.000 description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 4
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 4
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 4
- CFWRDBDJAOHXSH-SECBINFHSA-N 2-azaniumylethyl [(2r)-2,3-diacetyloxypropyl] phosphate Chemical compound CC(=O)OC[C@@H](OC(C)=O)COP(O)(=O)OCCN CFWRDBDJAOHXSH-SECBINFHSA-N 0.000 description 3
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 3
- 230000023555 blood coagulation Effects 0.000 description 3
- 239000003593 chromogenic compound Substances 0.000 description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 3
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 239000012224 working solution Substances 0.000 description 3
- IKHGUXGNUITLKF-UHFFFAOYSA-N Acetaldehyde Chemical compound CC=O IKHGUXGNUITLKF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 description 2
- 239000005457 ice water Substances 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102400000515 Factor X light chain Human genes 0.000 description 1
- 101800000969 Factor X light chain Proteins 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 229940122388 Thrombin inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 1
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-M Trifluoroacetate Chemical compound [O-]C(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 229960004676 antithrombotic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 1
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 230000023597 hemostasis Effects 0.000 description 1
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 229940127215 low-molecular weight heparin Drugs 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 230000003331 prothrombotic effect Effects 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000003868 thrombin inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/56—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving blood clotting factors, e.g. involving thrombin, thromboplastin, fibrinogen
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
- G01N2333/46—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans from vertebrates
- G01N2333/4609—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans from vertebrates from reptiles
- G01N2333/4613—Snake venom
- G01N2333/4616—Snake venom from Russell's viper
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
- G01N2333/914—Hydrolases (3)
- G01N2333/948—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- G01N2333/95—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99)
- G01N2333/964—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99) derived from animal tissue
- G01N2333/96425—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99) derived from animal tissue from mammals
- G01N2333/96427—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99) derived from animal tissue from mammals in general
- G01N2333/9643—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99) derived from animal tissue from mammals in general with EC number
- G01N2333/96433—Serine endopeptidases (3.4.21)
- G01N2333/96441—Serine endopeptidases (3.4.21) with definite EC number
- G01N2333/96444—Factor X (3.4.21.6)
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
- Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10T436/14—Heterocyclic carbon compound [i.e., O, S, N, Se, Te, as only ring hetero atom]
- Y10T436/142222—Hetero-O [e.g., ascorbic acid, etc.]
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
- Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10T436/14—Heterocyclic carbon compound [i.e., O, S, N, Se, Te, as only ring hetero atom]
- Y10T436/142222—Hetero-O [e.g., ascorbic acid, etc.]
- Y10T436/143333—Saccharide [e.g., DNA, etc.]
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
- Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10T436/20—Oxygen containing
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
- Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10T436/20—Oxygen containing
- Y10T436/200833—Carbonyl, ether, aldehyde or ketone containing
- Y10T436/201666—Carboxylic acid
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Hematology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
Description
【０００１】
本発明はＸａ因子活性の測定に関する。そのような活性は血液凝固時間又は色素産生性基質を使用して測定することができる。本発明はＦＸａ阻害剤の活性を測定するための定量方法に関する。より詳しくは、本発明は個体の内在ＦＸａ活性を誘発しそしてＦＸａ阻害剤の効果を測定するためラッセルクサリヘビ蛇毒（以後“ＲＶＶ−Ｘ”で表す）の使用に関する。血漿中のＦＸａ活性を測定する方法は凝血時間及び色素産生方法による。
【０００２】
刊行物（Clinical Chemistry, 26巻／7号、885-890ページ、1980年）はＸ因子がラッセルクサリヘビ蛇毒により直接活性化されるＸ因子の定量法を開示しており、アルコール中で（13巻、6号、539-545ページ、1996年）Ｘ因子及びＸａ因子に与えるアセトアルデヒドの影響を記述している。症例報告においてＩｇＧが無傷のＸ因子の軽鎖に結合しそしてこれによりＸ因子の活性化を阻害すると報告している（Thrombosis & Haemostasis 72巻（3号）、363-371ページ、1994年）。
【０００３】
ＡＰＴＴ及びＰＴのような定量法が血液凝固時間を測定するため以前から使用されてきた。しかしながら、そのような定量法は直接Ｘａ因子（以後“ＦＸａ”で表す）阻害剤の投与における投薬量の差異を検出するに十分な感度を持たない。本発明は直接ＦＸａ阻害剤の安全性及び効力をモニターする問題に関する。本発明の方法はすべての種において静脈内又は経口投与により活性のＦＸａ阻害剤の安全性及び効力をモニターするために使用することができる。本発明の方法はトロンビン阻害剤及び間接ＦＸａ阻害剤例えば凝血カスケードの上流の因子に対する抗凝血剤及びヘパリン、より特定すると低分子ヘパリンの安全性及び効力を測定するために使用することもできると考えられている。本方法は患者の前血栓症状態を予測するために使用することができる。ＦＸａ阻害剤の活性を測定するための改良された定量方法を開発するための研究の中で、今回これがＦＸａ阻害剤の活性により生ずる凝血時間の延長を測定するためラッセルクサリヘビ蛇毒（以後“ＲＶＶ−Ｘ”で表す）の使用により達成できることを発見した。
【０００４】
特許請求の範囲に説明されているように、本発明はＸａ因子阻害剤の効果をモニターする方法により目的を達成し、前記方法は
ａ）ＦＸａ阻害剤、抗凝血薬、抗血栓症薬、又はそれらのいずれかの組合せの投与を受けた患者から血漿試料を集め、
ｂ）ラッセルクサリヘビ蛇毒の溶液を血漿試料に添加し、そして
ｃ）凝血時間又は色素産生変化を測定する
各段階からなる。
【０００５】
本発明の別の目的はＸａ因子阻害剤の効果をモニターする方法であり、前記方法は
ａ）哺乳動物から血漿試料を集め、
ｂ）正常血漿試料を連続希釈するために使用するため同じ種のＸ因子欠如血漿試料を準備し、
ｃ）ａ）及びｂ）で定義した血漿試料にラッセルクサリヘビ蛇毒の溶液を添加し、
ｄ）哺乳動物からの血漿試料について測定した凝血時間をＸ因子欠如血漿で希釈した血漿試料について測定した凝血時間と比較し、
ｅ）ＦＸａ活性％（正常な血漿含量に比例する）の標準曲線を作りそして凝血時間延長を測定し、
ｆ）ＦＸａ阻害剤処置を受けた個体の凝血時間を知り、そして残存ＦＸａ活性％又はＦＸａ阻害％を標準曲線から求める
各段階からなる。
【０００６】
本発明の別の目的はＸａ因子阻害剤の効果をモニターする方法であり、前記方法は
ａ）哺乳動物から血漿試料を集め、
ｂ）前記血漿試料を小部分に分け、一つの部分を対照正常血漿として保持しそして他の部分にＸａ因子阻害剤の連続希釈液を添加し、
ｃ）ラッセルクサリヘビ蛇毒の溶液をｂ）で定義した血漿試料に添加し、
ｄ）Ｘａ因子阻害剤のない血漿試料について測定した凝血時間をＸａ因子阻害剤を添加した血漿試料について測定した凝血時間と比較し、
ｅ）用量依存凝血時間延長曲線を作りそして対照血漿凝血時間より２倍長い凝血時間に延長するために必要なＦＸａ阻害剤の濃度を求める
各段階からなる。
【０００７】
哺乳動物はヒト又はウシ、ヒツジ、ウサギ、マウス又はラットのような動物である。Ｘａ因子阻害剤は血液凝固酵素、特にＸａ因子の阻害剤である化合物である。用語「患者」はヒト又は哺乳動物である。
【０００８】
本発明の別の目的は残存ＦＸａ活性を色素生産により測定することによるＸａ因子阻害剤の効果をモニターする方法であり、前記方法は
ａ）哺乳動物から血漿試料を集め、
ｂ）前記血漿試料を小部分に分け、一つの部分を対照正常血漿として保持しそして他の部分にＸａ因子阻害剤の連続希釈液を添加し、
ｃ）ラッセルクサリヘビ蛇毒（ＲＶＶ−Ｘ）の溶液をｂ）で定義した血漿試料に添加し、
ｄ）Ｘａ因子阻害剤のない血漿試料について測定したＦＸａ活性をＸａ因子阻害剤を添加した血漿試料について測定した残存ＦＸａ活性と比較し、
ｅ）ＦＸａ阻害剤により誘導されるＲＶＶ−Ｘの用量依存阻害の標準曲線を作り、
ｆ）標準曲線を使用することによりＦＸａ阻害剤治療の間の種々の時点の患者におけるＦＸａ阻害剤の濃度を評価することができる
各段階からなる。
【０００９】
本発明の別の目的は血漿試料の取り扱いによる凝血時間の測定における変動を減らすか又は最小にすることである。これは血漿試料にセファリンを添加することにより達成される。好ましいセファリン源はウサギ脳に由来する。ＦＸａ活性の定量に好ましい色素産生性化合物はSpectrozyme FXa(R) である。他のＦＸａ色素産生性基質も使用することができる。本発明の方法は好ましくは７ないし８のｐＨの緩衝剤中で実行する。好ましい緩衝剤は塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）及びポリエチレン グリコール−８０００（ＰＥＧ−８０００）を含むトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン緩衝剤（Ｔｒｉｓ）である。好ましい濃度はＴｒｉｓ、ＮａＣｌ及びＰＥＧ−８０００につきそれぞれ１０mMないし２００mM、２０mMないし６００mMそして０.０２％ないし１％である。
【００１０】
本発明の別の目的はＦＸａ阻害剤測定のための診断検査のため本発明の方法を使用するためのキットを提供することである。
本発明の別の目的はＸａ因子阻害剤の活性を測定するため本発明の方法の使用である。特に好ましいＦＸａ阻害剤は３−（４′−Ｎ−オキソピリジルフェノイル）−３−メチル−２−（ｍ−アミジノベンジル）−プロピオン酸メチルである。
【００１１】
実施例においてはＲＶＶＴプロトコルが凝血時間により血漿中のＲＶＶ−Ｘ誘導ＦＸａ活性を測定するために有用であることを示している。第二のプロトコル、ＲＶＶＣプロトコルは色素生産関連方法により血漿中のＲＶＶ−Ｘ誘導ＦＸａ活性を測定するために有用である。ＲＶＶＴはＦＸａ阻害剤による凝血時間の用量依存延長を示す。ＲＶＶＣはＦＸａ阻害剤による用量依存ＦＸａ阻害を示す。二つの方法はヒト患者から採取したエックス ビボ血漿試料におけるＦＸａ阻害剤の濃度の変動を識別するために成功裏に使用される。
【００１２】
本発明の方法を以下の実施例において詳しく説明する。
実施例１
ラッセルクサリヘビ蛇毒誘発凝血時間（ＲＶＶＴ）プロトコル
試薬：
ＦＸａ緩衝液：
０.０５Ｍ Tris、０.１５Ｍ ＮａＣｌ、０.１％ ＰＥＧ−8000、ｐＨ７.５
Tris ６.０６ｇ、ＮａＣｌ ８.７７ｇ、ＰＥＧ−8000 １.０ｇを８００mlの水に添加し、ｐＨを濃塩酸を使用してｐＨ７.５に調節する。水で１Ｌにする。
ＲＶＶ−Ｘ：
Enzyme Research Lab.
ＦＸａ緩衝液で１mg／mlとし、次いで同じ緩衝液で１／400に希釈する。
ＲＶＶ−Ｘ使用溶液（ＲＶＶ−Ｃａ）：
２mlの１／400 ＲＶＶ−Ｘ＋１８mlの０.００３５Ｍ ＣａＣｌ2
ＲＶＶ−Ｘの濃度はこの段階で０.２５μg／mlである。
ＦＸ欠如血漿：
American Diagnostica Inc．
【００１３】
手順：
すべての試薬は使用するまで４℃（氷−水混合物使用）に保たれなければならない。
標準
１．正常なプールした血漿又は患者血漿をＦＸ欠如血漿で１〜１／256の２倍連続希釈を行う。
２．ＦＸａ緩衝液 ０.２ml、血漿希釈物０.１mlをキュベットに、次いで０.１mlのＲＶＶ−Ｃａ（ＭＬＡ−800クロッターをこの試薬に自動的に添加する）を添加する。
３．凝血時間を測定する。
４．標準曲線を作成する。
【００１４】
化合物３−（４′−Ｎ−オキソピリジルフェノイル）−３−メチル−２−（ｍ−アミジノベンジル）−プロピオン酸メチル（以後“ＲＰＲ”で表す）又はＲＰＲのトリフルオロ酢酸塩による用量依存凝血時間延長曲線：
１．ＦＸａ緩衝液０.１ml、ＲＰＲの連続希釈液０.１ml正常合プールした漿又は患者血漿０.１mlをキュベットに、次いで０.１mlのＲＶＶ−Ｃａ（ＭＬＡ−800クロッターをこの試薬に自動的に添加する）を添加する。
２．凝血時間を測定する。
３．用量依存凝血時間延長曲線を作成する。
４．２×ＲＶＶＴにつき濃度を計算する。
【００１５】
実施例２
色素産生により測定する血漿中のラッセルクサリヘビ蛇毒誘導ＦＸａ（ＲＶＶＣ）プロトコル
ＲＶＶＣ定量方法
色素産生により測定する血漿中のＲＶＶ誘導ＦＸａ活性
Ａ）試薬
ＰＥＧ−Ｃａ++緩衝液：
０.０５Ｍ Tris、０.１５Ｍ ＮａＣｌ、０.０１Ｍ ＣａＣｌ2、０.１％ ＰＥＧ−8000、ｐＨ７.５０
Tris ６.０６ｇ、ＮａＣｌ ８.７７ｇ、ＰＥＧ−8000 １ｇ、ＣａＣｌ2・２Ｈ2Ｏ １.４７ｇを８００mlの水に添加し、濃塩酸を使用してｐＨ７.５に調節し、水で１Ｌにする。
ＲＶＶ−Ｘ（ラッセルクサリヘビ蛇毒）：
４４μlのＰＥＧ−Ｃａ++緩衝液を５０μlのＲＶＶ−Ｘストック（Enzyme Research Labs、１.８８mg／ml）に添加して１mg／mlの溶液を作り、常に氷上に保存する。
１mg／mlのストックを１／１０→１／１０→１／４（＝１／400）に希釈する。希釈はＰＥＧ−ＣＡＥ緩衝液で行う。
【００１６】
基質 Spectrozyme FXa(R)：
５０μ moleのSpectrozyme FXa、 American Diagno sticを５mlの無菌水に溶解して１０mMのストック溶液を作る。
Spectrozyme FXa(R)１.６mM使用溶液：
０.８mlの１０mM ストック溶液を４.２mlのＰＥＧ−Ｃａ緩衝液に添加する。
【００１７】
Ｂ）手順：
１．試薬を次の順序でマイクロタイタープレート又は試験管に添加する：
【表１】
２．次いで５分間動力学的に反応させる。
【００１８】
Ｃ）計算：
初速度を測定し、しかしながら、遅れ期間を無視する。一般に時間経過の直線部分の初速度を測定する。
異なる時点における臨床試料の初速度を使用しそして次に投与前対照と比較して阻害％を計算する。
血漿中に加えられた種々濃度の化合物ＲＰＲをＰＴ、ＡＰＴＴ及びＰＶＶＴ延長につき分析した。表１の結果はＦＸａ阻害剤としての化合物ＲＰＲの効果に関してＲＶＶＴが３つの凝血時間定量法の中で最も感度の高い指標であることを示唆している。
ＲＶＶ−Ｘ誘導凝血時間（ＲＶＶＴ）定量法は患者の内在血漿ＦＸａに対するＲＰＲの効果をモニターするのに都合よく使用することができる。
【００１９】
【表２】
【００２０】
実施例３
ラッセルクサリヘビ蛇毒誘導凝血時間（ＲＶＶＴ）プロトコル（II）
試薬：
ＦＸａ緩衝液：
０.０５Ｍ Tris、０.１５Ｍ ＮａＣｌ、０.１％ ＰＥＧ−8000、ｐＨ７.５
Tris ６.０６ｇ、ＮａＣｌ ８.７７ｇ、ＰＥＧ−8000 １.０ｇを８００mlの水に添加し、〜２mlの濃塩酸を使用してｐＨ７.５に調節する。水で１Ｌにする。
ＲＶＶ−Ｘ：
Enzyme Research Lab. ＦＸａ緩衝液で１mg／mlとし、次いで同じ緩衝液で１２００に希釈する。
２mlの１／２００ ＲＶＶ−Ｘ＋１８mlの０.００３５Ｍ ＣａＣｌ2、ＲＶＶ−Ｘの最終濃度はこの段階で０.５μg／mlである。
【００２１】
ウサギ脳
Centerchem
セファリン
ＦＸａ緩衝液中０.０３５Ｍ ＣａＣｌ2の３.１２５mlを加えて元に戻し、１.６mg／mlの最終濃度にする。
ＲＶＶ−Ｘ ＲＢ セファリン使用溶液（ＲＶＶ−Ｃａ−セファリン）：
等量の０.５μg／ml ＲＶＶ−Ｘを等量の１.６mg／mlのウサギ脳セファリンと混合する。
この段階で試薬貯蔵液中のＲＶＶ−Ｘ及びセファリンの最終濃度はそれぞれ、０.２５μg／ml及び０.８mg／mlである。
【００２２】
手順：
すべての試薬は使用するまで４℃（氷−水混合物使用）に保たれなければならない。
投与前血漿 正常ＲＶＶＴ
１．ＦＸａ緩衝液 ０.２ml、投与前血漿０.１mlをキュベットに、次いで０.１mlのＲＶＶ−Ｃａ−セファリンを添加する（ＲＶＶ−Ｘ及びセファリンの最終濃度はそれぞれ、０.０６２５μg／ml及び０.２mg／mlである）。
２．凝血時間を測定する。
結果：ＲＶＶＴのフォールド変化を計算する。
【００２３】
ＲＶＶＴに与えるウサギ脳セファリンの効果
セファリンの希釈液を添加したＲＶＶ誘導血漿（プールしたＧＫ血漿及びドナーＤＮ、ＲＢ、ＴＤ）凝血時間（ｎ＝２）
【表３】
【００２４】
結論：
試料取り扱いによるＲＶＶＴの変動は反応混合物に〜０.２mg／mlのウサギ脳セファリンの添加により少なくすることができる。
本発明はＸａ因子活性の測定に関する。そのような活性は血液凝固時間又は色素産生性基質を使用して測定することができる。本発明はＦＸａ阻害剤の活性を測定するための定量方法に関する。より詳しくは、本発明は個体の内在ＦＸａ活性を誘発しそしてＦＸａ阻害剤の効果を測定するためラッセルクサリヘビ蛇毒（以後“ＲＶＶ−Ｘ”で表す）の使用に関する。血漿中のＦＸａ活性を測定する方法は凝血時間及び色素産生方法による。
【０００２】
刊行物（Clinical Chemistry, 26巻／7号、885-890ページ、1980年）はＸ因子がラッセルクサリヘビ蛇毒により直接活性化されるＸ因子の定量法を開示しており、アルコール中で（13巻、6号、539-545ページ、1996年）Ｘ因子及びＸａ因子に与えるアセトアルデヒドの影響を記述している。症例報告においてＩｇＧが無傷のＸ因子の軽鎖に結合しそしてこれによりＸ因子の活性化を阻害すると報告している（Thrombosis & Haemostasis 72巻（3号）、363-371ページ、1994年）。
【０００３】
ＡＰＴＴ及びＰＴのような定量法が血液凝固時間を測定するため以前から使用されてきた。しかしながら、そのような定量法は直接Ｘａ因子（以後“ＦＸａ”で表す）阻害剤の投与における投薬量の差異を検出するに十分な感度を持たない。本発明は直接ＦＸａ阻害剤の安全性及び効力をモニターする問題に関する。本発明の方法はすべての種において静脈内又は経口投与により活性のＦＸａ阻害剤の安全性及び効力をモニターするために使用することができる。本発明の方法はトロンビン阻害剤及び間接ＦＸａ阻害剤例えば凝血カスケードの上流の因子に対する抗凝血剤及びヘパリン、より特定すると低分子ヘパリンの安全性及び効力を測定するために使用することもできると考えられている。本方法は患者の前血栓症状態を予測するために使用することができる。ＦＸａ阻害剤の活性を測定するための改良された定量方法を開発するための研究の中で、今回これがＦＸａ阻害剤の活性により生ずる凝血時間の延長を測定するためラッセルクサリヘビ蛇毒（以後“ＲＶＶ−Ｘ”で表す）の使用により達成できることを発見した。
【０００４】
特許請求の範囲に説明されているように、本発明はＸａ因子阻害剤の効果をモニターする方法により目的を達成し、前記方法は
ａ）ＦＸａ阻害剤、抗凝血薬、抗血栓症薬、又はそれらのいずれかの組合せの投与を受けた患者から血漿試料を集め、
ｂ）ラッセルクサリヘビ蛇毒の溶液を血漿試料に添加し、そして
ｃ）凝血時間又は色素産生変化を測定する
各段階からなる。
【０００５】
本発明の別の目的はＸａ因子阻害剤の効果をモニターする方法であり、前記方法は
ａ）哺乳動物から血漿試料を集め、
ｂ）正常血漿試料を連続希釈するために使用するため同じ種のＸ因子欠如血漿試料を準備し、
ｃ）ａ）及びｂ）で定義した血漿試料にラッセルクサリヘビ蛇毒の溶液を添加し、
ｄ）哺乳動物からの血漿試料について測定した凝血時間をＸ因子欠如血漿で希釈した血漿試料について測定した凝血時間と比較し、
ｅ）ＦＸａ活性％（正常な血漿含量に比例する）の標準曲線を作りそして凝血時間延長を測定し、
ｆ）ＦＸａ阻害剤処置を受けた個体の凝血時間を知り、そして残存ＦＸａ活性％又はＦＸａ阻害％を標準曲線から求める
各段階からなる。
【０００６】
本発明の別の目的はＸａ因子阻害剤の効果をモニターする方法であり、前記方法は
ａ）哺乳動物から血漿試料を集め、
ｂ）前記血漿試料を小部分に分け、一つの部分を対照正常血漿として保持しそして他の部分にＸａ因子阻害剤の連続希釈液を添加し、
ｃ）ラッセルクサリヘビ蛇毒の溶液をｂ）で定義した血漿試料に添加し、
ｄ）Ｘａ因子阻害剤のない血漿試料について測定した凝血時間をＸａ因子阻害剤を添加した血漿試料について測定した凝血時間と比較し、
ｅ）用量依存凝血時間延長曲線を作りそして対照血漿凝血時間より２倍長い凝血時間に延長するために必要なＦＸａ阻害剤の濃度を求める
各段階からなる。
【０００７】
哺乳動物はヒト又はウシ、ヒツジ、ウサギ、マウス又はラットのような動物である。Ｘａ因子阻害剤は血液凝固酵素、特にＸａ因子の阻害剤である化合物である。用語「患者」はヒト又は哺乳動物である。
【０００８】
本発明の別の目的は残存ＦＸａ活性を色素生産により測定することによるＸａ因子阻害剤の効果をモニターする方法であり、前記方法は
ａ）哺乳動物から血漿試料を集め、
ｂ）前記血漿試料を小部分に分け、一つの部分を対照正常血漿として保持しそして他の部分にＸａ因子阻害剤の連続希釈液を添加し、
ｃ）ラッセルクサリヘビ蛇毒（ＲＶＶ−Ｘ）の溶液をｂ）で定義した血漿試料に添加し、
ｄ）Ｘａ因子阻害剤のない血漿試料について測定したＦＸａ活性をＸａ因子阻害剤を添加した血漿試料について測定した残存ＦＸａ活性と比較し、
ｅ）ＦＸａ阻害剤により誘導されるＲＶＶ−Ｘの用量依存阻害の標準曲線を作り、
ｆ）標準曲線を使用することによりＦＸａ阻害剤治療の間の種々の時点の患者におけるＦＸａ阻害剤の濃度を評価することができる
各段階からなる。
【０００９】
本発明の別の目的は血漿試料の取り扱いによる凝血時間の測定における変動を減らすか又は最小にすることである。これは血漿試料にセファリンを添加することにより達成される。好ましいセファリン源はウサギ脳に由来する。ＦＸａ活性の定量に好ましい色素産生性化合物はSpectrozyme FXa(R) である。他のＦＸａ色素産生性基質も使用することができる。本発明の方法は好ましくは７ないし８のｐＨの緩衝剤中で実行する。好ましい緩衝剤は塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）及びポリエチレン グリコール−８０００（ＰＥＧ−８０００）を含むトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン緩衝剤（Ｔｒｉｓ）である。好ましい濃度はＴｒｉｓ、ＮａＣｌ及びＰＥＧ−８０００につきそれぞれ１０mMないし２００mM、２０mMないし６００mMそして０.０２％ないし１％である。
【００１０】
本発明の別の目的はＦＸａ阻害剤測定のための診断検査のため本発明の方法を使用するためのキットを提供することである。
本発明の別の目的はＸａ因子阻害剤の活性を測定するため本発明の方法の使用である。特に好ましいＦＸａ阻害剤は３−（４′−Ｎ−オキソピリジルフェノイル）−３−メチル−２−（ｍ−アミジノベンジル）−プロピオン酸メチルである。
【００１１】
実施例においてはＲＶＶＴプロトコルが凝血時間により血漿中のＲＶＶ−Ｘ誘導ＦＸａ活性を測定するために有用であることを示している。第二のプロトコル、ＲＶＶＣプロトコルは色素生産関連方法により血漿中のＲＶＶ−Ｘ誘導ＦＸａ活性を測定するために有用である。ＲＶＶＴはＦＸａ阻害剤による凝血時間の用量依存延長を示す。ＲＶＶＣはＦＸａ阻害剤による用量依存ＦＸａ阻害を示す。二つの方法はヒト患者から採取したエックス ビボ血漿試料におけるＦＸａ阻害剤の濃度の変動を識別するために成功裏に使用される。
【００１２】
本発明の方法を以下の実施例において詳しく説明する。
実施例１
ラッセルクサリヘビ蛇毒誘発凝血時間（ＲＶＶＴ）プロトコル
試薬：
ＦＸａ緩衝液：
０.０５Ｍ Tris、０.１５Ｍ ＮａＣｌ、０.１％ ＰＥＧ−8000、ｐＨ７.５
Tris ６.０６ｇ、ＮａＣｌ ８.７７ｇ、ＰＥＧ−8000 １.０ｇを８００mlの水に添加し、ｐＨを濃塩酸を使用してｐＨ７.５に調節する。水で１Ｌにする。
ＲＶＶ−Ｘ：
Enzyme Research Lab.
ＦＸａ緩衝液で１mg／mlとし、次いで同じ緩衝液で１／400に希釈する。
ＲＶＶ−Ｘ使用溶液（ＲＶＶ−Ｃａ）：
２mlの１／400 ＲＶＶ−Ｘ＋１８mlの０.００３５Ｍ ＣａＣｌ2
ＲＶＶ−Ｘの濃度はこの段階で０.２５μg／mlである。
ＦＸ欠如血漿：
American Diagnostica Inc．
【００１３】
手順：
すべての試薬は使用するまで４℃（氷−水混合物使用）に保たれなければならない。
標準
１．正常なプールした血漿又は患者血漿をＦＸ欠如血漿で１〜１／256の２倍連続希釈を行う。
２．ＦＸａ緩衝液 ０.２ml、血漿希釈物０.１mlをキュベットに、次いで０.１mlのＲＶＶ−Ｃａ（ＭＬＡ−800クロッターをこの試薬に自動的に添加する）を添加する。
３．凝血時間を測定する。
４．標準曲線を作成する。
【００１４】
化合物３−（４′−Ｎ−オキソピリジルフェノイル）−３−メチル−２−（ｍ−アミジノベンジル）−プロピオン酸メチル（以後“ＲＰＲ”で表す）又はＲＰＲのトリフルオロ酢酸塩による用量依存凝血時間延長曲線：
１．ＦＸａ緩衝液０.１ml、ＲＰＲの連続希釈液０.１ml正常合プールした漿又は患者血漿０.１mlをキュベットに、次いで０.１mlのＲＶＶ−Ｃａ（ＭＬＡ−800クロッターをこの試薬に自動的に添加する）を添加する。
２．凝血時間を測定する。
３．用量依存凝血時間延長曲線を作成する。
４．２×ＲＶＶＴにつき濃度を計算する。
【００１５】
実施例２
色素産生により測定する血漿中のラッセルクサリヘビ蛇毒誘導ＦＸａ（ＲＶＶＣ）プロトコル
ＲＶＶＣ定量方法
色素産生により測定する血漿中のＲＶＶ誘導ＦＸａ活性
Ａ）試薬
ＰＥＧ−Ｃａ++緩衝液：
０.０５Ｍ Tris、０.１５Ｍ ＮａＣｌ、０.０１Ｍ ＣａＣｌ2、０.１％ ＰＥＧ−8000、ｐＨ７.５０
Tris ６.０６ｇ、ＮａＣｌ ８.７７ｇ、ＰＥＧ−8000 １ｇ、ＣａＣｌ2・２Ｈ2Ｏ １.４７ｇを８００mlの水に添加し、濃塩酸を使用してｐＨ７.５に調節し、水で１Ｌにする。
ＲＶＶ−Ｘ（ラッセルクサリヘビ蛇毒）：
４４μlのＰＥＧ−Ｃａ++緩衝液を５０μlのＲＶＶ−Ｘストック（Enzyme Research Labs、１.８８mg／ml）に添加して１mg／mlの溶液を作り、常に氷上に保存する。
１mg／mlのストックを１／１０→１／１０→１／４（＝１／400）に希釈する。希釈はＰＥＧ−ＣＡＥ緩衝液で行う。
【００１６】
基質 Spectrozyme FXa(R)：
５０μ moleのSpectrozyme FXa、 American Diagno sticを５mlの無菌水に溶解して１０mMのストック溶液を作る。
Spectrozyme FXa(R)１.６mM使用溶液：
０.８mlの１０mM ストック溶液を４.２mlのＰＥＧ−Ｃａ緩衝液に添加する。
【００１７】
Ｂ）手順：
１．試薬を次の順序でマイクロタイタープレート又は試験管に添加する：
【表１】
【００１８】
Ｃ）計算：
初速度を測定し、しかしながら、遅れ期間を無視する。一般に時間経過の直線部分の初速度を測定する。
異なる時点における臨床試料の初速度を使用しそして次に投与前対照と比較して阻害％を計算する。
血漿中に加えられた種々濃度の化合物ＲＰＲをＰＴ、ＡＰＴＴ及びＰＶＶＴ延長につき分析した。表１の結果はＦＸａ阻害剤としての化合物ＲＰＲの効果に関してＲＶＶＴが３つの凝血時間定量法の中で最も感度の高い指標であることを示唆している。
ＲＶＶ−Ｘ誘導凝血時間（ＲＶＶＴ）定量法は患者の内在血漿ＦＸａに対するＲＰＲの効果をモニターするのに都合よく使用することができる。
【００１９】
【表２】
実施例３
ラッセルクサリヘビ蛇毒誘導凝血時間（ＲＶＶＴ）プロトコル（II）
試薬：
ＦＸａ緩衝液：
０.０５Ｍ Tris、０.１５Ｍ ＮａＣｌ、０.１％ ＰＥＧ−8000、ｐＨ７.５
Tris ６.０６ｇ、ＮａＣｌ ８.７７ｇ、ＰＥＧ−8000 １.０ｇを８００mlの水に添加し、〜２mlの濃塩酸を使用してｐＨ７.５に調節する。水で１Ｌにする。
ＲＶＶ−Ｘ：
Enzyme Research Lab. ＦＸａ緩衝液で１mg／mlとし、次いで同じ緩衝液で１２００に希釈する。
２mlの１／２００ ＲＶＶ−Ｘ＋１８mlの０.００３５Ｍ ＣａＣｌ2、ＲＶＶ−Ｘの最終濃度はこの段階で０.５μg／mlである。
【００２１】
ウサギ脳
Centerchem
セファリン
ＦＸａ緩衝液中０.０３５Ｍ ＣａＣｌ2の３.１２５mlを加えて元に戻し、１.６mg／mlの最終濃度にする。
ＲＶＶ−Ｘ ＲＢ セファリン使用溶液（ＲＶＶ−Ｃａ−セファリン）：
等量の０.５μg／ml ＲＶＶ−Ｘを等量の１.６mg／mlのウサギ脳セファリンと混合する。
この段階で試薬貯蔵液中のＲＶＶ−Ｘ及びセファリンの最終濃度はそれぞれ、０.２５μg／ml及び０.８mg／mlである。
【００２２】
手順：
すべての試薬は使用するまで４℃（氷−水混合物使用）に保たれなければならない。
投与前血漿 正常ＲＶＶＴ
１．ＦＸａ緩衝液 ０.２ml、投与前血漿０.１mlをキュベットに、次いで０.１mlのＲＶＶ−Ｃａ−セファリンを添加する（ＲＶＶ−Ｘ及びセファリンの最終濃度はそれぞれ、０.０６２５μg／ml及び０.２mg／mlである）。
２．凝血時間を測定する。
結果：ＲＶＶＴのフォールド変化を計算する。
【００２３】
ＲＶＶＴに与えるウサギ脳セファリンの効果
セファリンの希釈液を添加したＲＶＶ誘導血漿（プールしたＧＫ血漿及びドナーＤＮ、ＲＢ、ＴＤ）凝血時間（ｎ＝２）
【表３】
結論：
試料取り扱いによるＲＶＶＴの変動は反応混合物に〜０.２mg／mlのウサギ脳セファリンの添加により少なくすることができる。
Claims (3)
- ａ）哺乳動物からの血漿試料において、
ｂ）前記血漿試料を小部分に分け、一つの部分を対照血漿として保持しそして他の部分にＦＸａ阻害剤の連続希釈液を添加し、
ｃ）ラッセルクサリヘビ蛇毒（ＲＶＶ−Ｘ）の溶液をｂ）で定義した血漿試料のそれぞれに添加し、
ｄ）対照血漿について測定したＦＸａ活性をＦＸａ阻害剤を添加した他の血漿試料について測定した残存ＦＸａ活性と比較し、
ｅ）ＦＸａ阻害剤により誘導されるＲＶＶ−Ｘの用量依存阻害の標準曲線を作り、
ｆ）ＦＸａ阻害剤の濃度を標準曲線を使用することにより評価する、
各段階からなる、ＦＸａ阻害剤の効果をモニターする方法。 - ａ）哺乳動物からの血漿試料において、
ｂ）前記血漿試料を小部分に分け、一つの部分を対照正常血漿として保持しそして他の部分にＦＸａ阻害剤の連続希釈液を添加し、
ｃ）ラッセルクサリヘビ蛇毒の溶液をｂ）で定義した血漿試料のそれぞれに添加し、
ｄ）ＦＸａ阻害剤のない対照血漿試料について測定した凝血時間をＦＸａ阻害剤を添加した血漿試料についてのそれと比較し、
ｅ）用量依存凝血時間延長曲線を作りそして対照血漿凝血時間より２倍長く凝血時間を延長するために必要なＦＸａ阻害剤の濃度を求める、
各段階からなる、ＦＸａ阻害剤の効果をモニターする方法。 - 直接又は間接のＦＸａ阻害剤の活性の定量のための請求項１又は２に記載の方法の使用であって、ＦＸａ阻害剤が３−（４′−Ｎ−オキソピリジルフェノイル）−３−メチル−２−（ｍ−アミジノベンジル）−プロピオン酸メチルである上記の使用。
Applications Claiming Priority (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US16316199P | 1999-11-02 | 1999-11-02 | |
| US60/163,161 | 1999-11-02 | ||
| GBGB9930535.1A GB9930535D0 (en) | 1999-12-23 | 1999-12-23 | Method |
| GB9930535.1 | 1999-12-23 | ||
| PCT/EP2000/010646 WO2001033217A2 (en) | 1999-11-02 | 2000-10-28 | Monitoring the activity of factor xa inhibitors |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2003513280A JP2003513280A (ja) | 2003-04-08 |
| JP2003513280A5 JP2003513280A5 (ja) | 2007-12-06 |
| JP4463460B2 true JP4463460B2 (ja) | 2010-05-19 |
Family
ID=26316147
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2001535051A Expired - Fee Related JP4463460B2 (ja) | 1999-11-02 | 2000-10-28 | Ｘａ因子阻害剤の活性をモニターするためラッセルクサリヘビ蛇毒誘導血漿Ｘａ因子活性の使用 |
Country Status (11)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US7220553B2 (ja) |
| EP (1) | EP1230382B1 (ja) |
| JP (1) | JP4463460B2 (ja) |
| AT (1) | ATE267876T1 (ja) |
| AU (1) | AU1515701A (ja) |
| CA (1) | CA2389747C (ja) |
| DE (1) | DE60011128T2 (ja) |
| ES (1) | ES2222250T3 (ja) |
| IL (1) | IL149398A0 (ja) |
| MX (1) | MXPA02003693A (ja) |
| WO (1) | WO2001033217A2 (ja) |
Families Citing this family (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| BRPI0705049B1 (pt) * | 2007-12-28 | 2019-02-26 | Embraco Indústria De Compressores E Soluções Em Refrigeração Ltda | Compressor de gás movido por um motor linear, tendo um detector de impacto entre um cilindro e um pistão, método de detecção e sistema de controle |
| ES2620421T3 (es) * | 2009-10-30 | 2017-06-28 | Senova Gesellschaft für Biowissenschaft und Technik mbH | Peptidasas acopladas a polímero |
| US20110136779A1 (en) * | 2009-11-23 | 2011-06-09 | Milner Peter G | Methods for stroke reduction in atrial fibrillation patients |
| US20110144199A1 (en) * | 2009-11-23 | 2011-06-16 | Milner Peter G | Methods for treating atrial fibrillation |
| US9549912B2 (en) | 2009-11-23 | 2017-01-24 | Armetheon, Inc. | Methods for treating atrial fibrillation |
| EP2484775A1 (de) * | 2011-02-07 | 2012-08-08 | Siemens Healthcare Diagnostics Products GmbH | Heparin-insensitives Verfahren zur Bestimmung von direkten Gerinnungsfaktorinhibitoren |
| EP3175245B1 (en) * | 2014-07-31 | 2019-05-29 | Haemonetics Corporation | Detection and classification of an anticoagulant using a clotting assay |
| CN108982865B (zh) * | 2018-08-16 | 2021-05-11 | 上海原科实业发展有限公司 | 一种血栓弹力图法肝素定量检测试剂盒及其制备方法 |
| US12073926B2 (en) | 2020-09-21 | 2024-08-27 | Instrumentation Laboratory Company | Detecting and monitoring oral anticoagulants or intravenous direct thrombin inhibitors in a blood sample |
| CN114681597A (zh) * | 2022-03-11 | 2022-07-01 | 兆科药业（合肥）有限公司 | 蝰蛇蛇毒血凝酶在制备用于逆转凝血因子Xa抑制剂的抗凝作用的药物中的应用 |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS58189646A (ja) * | 1982-04-01 | 1983-11-05 | Canon Inc | 磁性トナ− |
| US4946775A (en) | 1985-09-05 | 1990-08-07 | Yin E Thye | Composition, kit and method for assaying heparin and a method for making the composition |
| US5120537A (en) * | 1989-06-14 | 1992-06-09 | Oklahoma Medical Research Foundation | Factor xa based anticoagulant compositions |
| US5187155A (en) * | 1989-06-23 | 1993-02-16 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Anticoagulant peptides |
| US6103888A (en) * | 1992-07-17 | 2000-08-15 | Panorama Research, Inc. | Mammalian cationic proteins having lipopolysaccharide binding and anti-coagulant activity |
| SI0906094T1 (en) | 1996-01-02 | 2003-12-31 | Aventis Pharmaceuticals Inc. | Substituted n- (aminoiminomethyl or aminomethyl)phenyl)propyl amides |
| US5886191A (en) * | 1997-08-18 | 1999-03-23 | Dupont Pharmaceuticals Company | Amidinoindoles, amidinoazoles, and analogs thereof |
-
2000
- 2000-10-28 JP JP2001535051A patent/JP4463460B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2000-10-28 CA CA2389747A patent/CA2389747C/en not_active Expired - Fee Related
- 2000-10-28 MX MXPA02003693A patent/MXPA02003693A/es active IP Right Grant
- 2000-10-28 IL IL14939800A patent/IL149398A0/xx unknown
- 2000-10-28 AT AT00977438T patent/ATE267876T1/de not_active IP Right Cessation
- 2000-10-28 ES ES00977438T patent/ES2222250T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2000-10-28 AU AU15157/01A patent/AU1515701A/en not_active Abandoned
- 2000-10-28 WO PCT/EP2000/010646 patent/WO2001033217A2/en active IP Right Grant
- 2000-10-28 DE DE60011128T patent/DE60011128T2/de not_active Expired - Lifetime
- 2000-10-28 EP EP00977438A patent/EP1230382B1/en not_active Expired - Lifetime
-
2002
- 2002-04-18 US US10/125,627 patent/US7220553B2/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE60011128T2 (de) | 2005-07-07 |
| ATE267876T1 (de) | 2004-06-15 |
| CA2389747A1 (en) | 2001-05-10 |
| DE60011128D1 (de) | 2004-07-01 |
| US7220553B2 (en) | 2007-05-22 |
| EP1230382B1 (en) | 2004-05-26 |
| JP2003513280A (ja) | 2003-04-08 |
| EP1230382A2 (en) | 2002-08-14 |
| CA2389747C (en) | 2011-05-03 |
| US20030049704A1 (en) | 2003-03-13 |
| AU1515701A (en) | 2001-05-14 |
| IL149398A0 (en) | 2002-11-10 |
| WO2001033217A3 (en) | 2001-11-29 |
| MXPA02003693A (es) | 2003-10-14 |
| WO2001033217A2 (en) | 2001-05-10 |
| ES2222250T3 (es) | 2005-02-01 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP5613414B2 (ja) | 可溶性フィブリン及びｄ−ダイマーの測定による静脈血栓塞栓症の検出 | |
| Moore et al. | Viscoelastic measurements of platelet function, not fibrinogen function, predicts sensitivity to tissue‐type plasminogen activator in trauma patients | |
| US6403381B1 (en) | Inhibition of coagulation in blood and blood products | |
| JP3047120B2 (ja) | 活性化因子ｖｉｉに関する定量的凝血検定 | |
| Bonithon-Kopp et al. | Relationship between sex hormones and haemostatic factors in healthy middle-aged men | |
| Samama et al. | In vitro study of the anticoagulant effects of edoxaban and its effect on thrombin generation in comparison to fondaparinux | |
| De Maat et al. | Tracking down contact activation–from coagulation in vitro to inflammation in vivo | |
| JP4463460B2 (ja) | Ｘａ因子阻害剤の活性をモニターするためラッセルクサリヘビ蛇毒誘導血漿Ｘａ因子活性の使用 | |
| JPH11225796A (ja) | サンプルの潜在的抗血液凝固能の測定法 | |
| JPH07501217A (ja) | 血液凝固疾患の診断方法 | |
| JP5118321B2 (ja) | ヘパリン修飾成分を用いた第Ｘａ因子に基づくヘパリンアッセイ | |
| JP2011527897A (ja) | 循環組織因子のインビトロアッセイ方法及び凝固疾患の検出における使用 | |
| Cellai et al. | Assessment of fibrinolytic activity by measuring the lysis time of a tissue factor-induced clot: a feasibility evaluation | |
| Shu et al. | Decrease in protein C inhibitor activity and acquired APC resistance during normal pregnancy | |
| US8574849B2 (en) | Methods of detection of factor XIa and tissue factor | |
| Ungerstedt et al. | Nicotinamide inhibits endotoxin-induced monocyte tissue factor expression | |
| CA2039173C (en) | Factor ix chromogenic assay | |
| Koestenberger et al. | Thrombin generation determined by calibrated automated thrombography (CAT) in pediatric patients with congenital heart disease | |
| Kirchhof et al. | Control of anticoagulant therapy with a chromogenic substrate | |
| US5200322A (en) | Method for assaying protein C and measuring kit for the same | |
| US5114845A (en) | Assays for plasminogen activator inhibitor and soluble fibrin | |
| Folkeringa et al. | Thrombin activatable fibrinolysis inhibitor (TAFI) is not associated with fetal loss, a retrospective study | |
| JPH1084995A (ja) | 血液凝固第ｘｉｉ因子活性化法 | |
| Petäjä et al. | Circulating Activated Protein C inSubjects with Heterozygous Gln506-Factor V | |
| JPH06324048A (ja) | 血液凝固能検査用試薬及び血液凝固能の検査方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20071016 |
|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20071016 |
|
| RD04 | Notification of resignation of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7424 Effective date: 20090929 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20091208 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20100114 |
|
| RD02 | Notification of acceptance of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7422 Effective date: 20100114 |
|
| TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20100209 |
|
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20100217 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20130226 Year of fee payment: 3 |
|
| R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |