JP4381824B2 - Helicobacterpylori除菌性チーズ - Google Patents
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Description
(1)Helicobacter pylori除菌能を有するLactobacillus gasseriに属する乳酸菌を含有すること、を特徴とするナチュラルチーズ。
(2)乳酸菌が低pH環境に耐性を有する(1)記載のナチュラルチーズ。
(3)乳酸菌がLactobacillus gasseri OLL 2716株(FERM BP-6999)もしくはその変異体である(1)又は(2)に記載のナチュラルチーズ。
(4)乳酸菌が10℃以下、6ヶ月の保存で107cfu/g以上生残する(1)〜(3)のいずれか1項に記載のナチュラルチーズ。
(5)(1)〜(4)のいずれか1項に記載のナチュラルチーズを含有すること、を特徴とする食品。
(6)カード形成前の乳成分に酵母エキスを添加することを特徴とする(1)〜(4)のいずれか1項に記載のナチュラルチーズの製造方法。
(7) 型詰・圧搾後のカードを冷蔵しないで保温する(6)に記載の方法。
(8)カードを20℃〜35℃で16〜26時間保温する(6)または(7)記載の方法。
(9)Helicobacter pylori除菌能を有するLactobacillus gasseriに属する乳酸菌が原乳にスターターとして添加される(6)〜(8)のいずれか1項に記載の方法。
(10)乳酸菌がLactobacillus gasseri OLL 2716株(FERM BP-6999)もしくはその変異体である(6)〜(9)のいずれか1項に記載の方法。
本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意研究を重ねた結果、H. pyloriの除菌能およびH. pyloriに対して感染防御能のあるL. gasseri OLL 2716株生菌をナチュラルチーズの形態で保持するという新規な構成を採用することで、ナチュラルチーズ中でL. gasseriが十分量生育し、長期間にわたって高濃度に生残することを見出した。しかも、通常用いるチーズの製造工程に、酵母エキスを添加する工程及び/又は、型詰・圧搾後にチーズカードを保温する工程を加えることで、意外にも、チーズ中のL. gasseriがチーズ用乳酸菌より優位に生育し、生残することを初めて発見した。よって、本発明はかかる知見に基づいて完成されたものである。
本発明におけるナチュラルチーズは、チェダーチーズ、ゴーダチ−ズ、エダムチーズ、ストリングチーズ、モザレラチーズ等の固形状のハードタイプもしくはセミハードタイプのナチュラルチーズが好適である。
代表的なチェダーチーズの製造法として、次の方法が知られている。(1)原乳を標準化し、殺菌後、冷却する、(2)乳酸菌スターターを(1)で得られた原乳に添加し、混合する、(3)塩化カルシウム、レンネットを(2)で得られた混合物に添加し、乳を凝固させ、カードを形成させる、(4)(3)で得られたカードをカッティングしホエイを排除する、(5)カードをチェダーリング・ミリングし乾塩を添加し撹拌する、(6)カードを成型し真空包装し熟成する。
実施例1
L. gasseri 入りチェダーチーズの調製法
L. gasseri OLL 2716株(FERM BP-6999)及び市販チーズ用混合乳酸菌(Hansen社O-180)をそれぞれ10%脱脂粉乳培地に1%ずつ接種し、L. gasseriは37℃で17時間、O-180は25℃で17時間培養してバルクスターターを調製した。次に73℃15秒殺菌した牛乳100kgを30℃に調整し、上記L. gasseriおよびO-180バルクスターターを各々1%接種し、以下常法により縦、横約30cm、高さ約10cmのチェダーチーズ10kgを製造した。このチェダーチーズをエバールコート・ナイロンポリエチレンフィルム(三菱樹脂社製)で真空包装して5℃、および10℃で保存した。各工程におけるL. gasseri菌数とその他の菌数、及び製造翌日から1ヵ月後との6ヶ月間における菌数を下記細菌検査法に基づいて測定した(表1、表2)以下、実施する細菌検査は、何れも同様の方法で行った。なお、チェダーチーズの菌数測定部位は、中心部と表面部(表面から5mmまでの厚さの部分)とした。
・培地:BL寒天培地(栄研化学)6gを水100mlに溶解し、オートクレーブにて121℃15分滅菌後、約50℃に冷却し、これに馬脱繊維血液(日本バイオテスト)を5%濃度になるよう無菌的に添加し、混合後シャーレに分注して平板を作成し、菌数測定に使用した。
・希釈方法:チーズ試料は10倍量の2%第2リン酸ナトリウム溶液でカードを溶解した後生理食塩水で希釈し、チーズ以外の試料は直接生理食塩水で希釈して必要な濃度とし、上記の馬脱繊維血液入りBL平板培地に0.1ml塗布して、35℃3日間好気条件下で培養してL. gasseri生菌数およびその他の菌数を測定した。
・計測:
(1)L. gasseri:正円〜やや不規則形、茶褐色、ラフ型の大型コロニーをL. gasseriとして分別計測した。
(2)その他の菌:その他の菌は概ねやや隆起した茶褐色、スムース型の小型コロニーであった。その他の菌はL. gasseri以外の菌数の合計で表示した。
L. gasseri入りゴーダチーズの調製法1
L. gasseri OLL 2716株及び市販チーズ用混合乳酸菌(Hansen社CHN-01)をそれぞれ10%脱脂粉乳培地に1%ずつ接種し、L. gasseriは37℃で、CHN-01は25℃でそれぞれ17時間培養してバルクスターターを調製した。次に73℃15秒殺菌した部分脱脂乳(SNF8.5%、FAT3%)100kgを32℃に調整し、L. gasseriおよびCHN-01バルクスターターを各々1%接種し、以下常法により縦、横約30cm、高さ約10cmのゴーダチーズ10kgを製造した。各工程における菌数量は表4の通りであり、得られたゴーダチーズの成分は水分43%、脂肪24%、たんぱく質25%、食塩1.7%であった。このゴーダチーズをエバールコート・ナイロンポリエチレンフィルムで真空包装して5℃、および10℃で保存し、包装翌日から1ヶ月ごとに6ヶ月間L. gasseri菌数とその他の菌数を測定した。ゴーダチーズの場合もL.gasseriは最大6×108cfu/g(8.8log cfu/g)まで増加し、チーズの中心部では108cfu /g(8.0 log cfu/g)以上の菌数を3ヶ月(10℃保存の場合)あるいは6ヶ月(5℃保存の場合)、維持した。10℃、6ヶ月保存後で107cfu/g(7.0 log cfu/g)以上の菌数を維持した。表面部(表面から厚さ5mmまで)では菌数が減少するのが早く、1ヶ月で107 cfu/g(7.0 log cfu/g)に低下し、6ヶ月後には106 cfu/g以下(6.0log cfu/g)となった(表5、図2)。ゴーダチーズとしての風味は特に問題なかった(表6)。
L. gasseriが増強されたゴーダチーズの調製法2
L. gasseri OLL 2716株を0.1%酵母エキス(Difco)入り10%脱脂粉乳培地に、市販チーズ用乳酸菌Lactococcus lactis subsp. lactis(Hansen社CHN-01から単離)を10%脱脂粉乳培地に1%になるよう接種し、L. gasseriは37℃で24時間、L. lactisは25℃で17時間培養してそれぞれバルクスターターを調製した。次に73℃15秒殺菌した部分脱脂乳(SNF8.5%、FAT3%)20kgを32℃に調整し、L. gasseriおよびL. lactisバルクスターターを各々1%接種し、さらに酵母エキス20gを添加した。以下常法によりチーズカードを製造し、プレス後、型枠に入れたまま室温25℃の部屋で24時間保温後、型枠からチーズを取り出して10℃の20%食塩水に24時間浸漬し、直径約20cm、高さ約8cmの車輪状のゴーダチーズ2kgを製造した。各工程におけるL. gasseri菌数とその他の菌数は表7の通りである。このゴーダチーズをエバールコート・ナイロンポリエチレンフィルムで真空包装して5℃、および10℃で保存し、包装翌日から1ヶ月ごとに6ヶ月間L. gasseri菌数とその他の菌数を測定した。
L. gasseri入りストリングチーズの調製法
実施例3で得た食塩水浸漬前のチーズカード2kgを、製造翌日に1辺2cmの立方体に刻み、金属製の目の細かい網籠に入れ、60℃の湯水10kgに5分間浸漬した。チーズを湯水から取り出し、手でもみ込んでカードを結着させ、円柱状に整形した後、左右に引っ張り、直径3cmの円柱状のカードを得た。これを直ちに2℃の20%食塩水に1時間浸漬して組織を固定し、繊維性のあるチーズ(ストリングチーズ)を製造した。この繊維性のあるチーズをエバールコート・ナイロンポリエチレンフィルムで真空包装し、包装の翌日から1ヶ月ごとに3ヶ月間L. gasseri菌数とその他の菌数を測定した。L. gasseriは製造翌日から3ヶ月間108cfu/g(8.0 log cfu/g)以上の菌数を維持することが確認された(図4)。風味、繊維性共に良好であった(表10)。
L. gasseri入りチーズの抗H. pylori効果
実施例3で調製し、エバールコート・ナイロンポリエチレンフィルムで真空包装後、5℃で5ヶ月保存したL. gasseri入りチーズ5gに生理食塩水45gを添加して、ブレンダー(商品名:ラボ・ブレンダー400、A.J. Seward社製)でよく混合した。当該混合液5mlをpH6に調整したBrucella broth 50ml, FCS(ウシ胎児血清)2.5mlおよび別途培養したH. pylori培養液5mlを添加し、37℃で微好気条件下で培養した。対照として、L. gasseriを添加せずに作製し、同様に保管したゴーダチーズを用いた実験も行った。培養開始0, 24, 48時間後のH. pyloriおよびL. gasseriの菌数を測定した。その結果、L. gasseri入りチーズを添加して培養した場合、48時間後にはH. pyloriは検出限界以下に減少した(図5)。
L. gasseriの耐塩性試験
試験管に食塩濃度2〜10%になるように調製した10%脱脂粉乳培地(オートクレーブ後に食塩と混合)を入れ、L. gasseri OLL 2716株を2×107cfu/gになるように植菌し、35℃24時間静置培養後、菌数を測定した。食塩2%では問題なく増殖し、3〜4%では僅かに増菌する。5%ではほぼ静菌状態であり、6%以上で菌数が減少した。これをチーズ中の食塩/水分(S/M)で換算するとチーズの塩分0.5%では問題なく増菌、1%ではやや増菌、1.25%では静菌、1.5%以上では減少ということになる。したがって、ブライン加塩するゴーダチーズは食塩含量が2%を越えない範囲となるよう調整することが好ましいことが確認された(図6)。
酸性条件下での各種菌株の生育
37℃で18時間、MRS培地を用いて2度賦活培養した各種の乳酸菌10μlを、0.2%塩化ナトリウムおよび0.35%ペプシン(1:5000、東京化成工業株式会社)を溶かしてpH4.0に調整した変法MRS培地に植菌し、37℃で好気培養した。各培地の濁度(OD650)を、培養開始直後、及び、培養開始9時間後に測定し、濁度の増加量(ΔOD650)を求めた。
この方法で、低pH領域における人工的に合成された胃液に対する耐性の高い株の生育性について試験した。その結果、L. gasseri OLL2716株とL. gasseri No.6株の生育性が高く、最も生育したのはL. gasseri OLL2716株であった。
結果を図7に示す。
H. pylori感染マウスにおける乳酸菌の効果
無菌マウス(BALB/c)にH. pylori NCTC 11637株を1×109 cfu/mouse、一日一回、三日間にわたり、経口投与した。H. pylori投与4週間後に、H. pylori感染マウスに、L. gasseri OLL2716株、L. gasseri No.6株およびL. salivarius WB1004株をそれぞれ1×109 cfu/mouse1週目から7週目まで、一週間に一度経口投与した。乳酸菌投与から8週間後、胃内のH. pylori量を測定し、血清における抗H. pylori抗体価を測定した。
結果は図8および図9に示される。
Claims (10)
- Helicobacter pylori除菌能を有するLactobacillus gasseriに属する乳酸菌が10 7 cfu/g以上で生残し、10℃以下、6ヶ月間の保存の間、Helicobacter pylori除菌能を有するLactobacillus gasseriに属する乳酸菌が107cfu/g以上で生残することを特徴とするナチュラルチーズ。
- 前記乳酸菌が低pH環境に耐性を有する請求項1に記載のナチュラルチーズ。
- 前記乳酸菌がLactobacillus gasseri OLL 2716株(FERM BP-6999)もしくはその変異体である請求項1または2に記載のナチュラルチーズ。
- 請求項1〜3のいずれか1項に記載のナチュラルチーズを含有すること、を特徴とする食品。
- Helicobacter pylori除菌能を有するLactobacillus gasseriに属する乳酸菌、及び当該乳酸菌以外のチーズ用乳酸菌が原乳及び/又は乳成分に各々スターターとして添加され、カードが形成されることを特徴とする請求項1〜3のいずれか1項に記載のナチュラルチーズを製造する方法。
- カード形成前の原乳及び/又は乳成分に酵母エキスを添加することを特徴とする請求項5に記載の方法。
- 型詰・圧搾後のカードを冷蔵しないで保温することを特徴とする請求項5又は6に記載の方法。
- カード形成前の原乳及び/又は乳成分に酵母エキスを添加すること、及び型詰・圧搾後のカードを20℃〜35℃、16〜26時間で保温することを特徴とする請求項5〜7のいずれか1項に記載の方法。
- Helicobacter pylori除菌能を有するLactobacillus gasseriに属する乳酸菌がLactobacillus gasseri OLL 2716株(FERM BP-6999)もしくはその変異体である請求項5〜8のいずれか1項に記載の方法。
- 前記チーズ用乳酸菌は、チーズ用混合乳酸菌、又はラクトコッカス ラクティス サブスピーシーズ ラクティス(Lactococcus lactis subsp. lactis)菌である請求項5〜9のいずれか1項に記載の方法。
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