WO2018124003A1 - 胃内菌叢の占有率測定による機能性消化管障害の検出方法及び胃内菌叢改善剤 - Google Patents

胃内菌叢の占有率測定による機能性消化管障害の検出方法及び胃内菌叢改善剤 Download PDF

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浩彦 中江
俊広 大津
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    • C12Q2600/158—Expression markers

Definitions

  • the present invention relates to a method for detecting functional gastrointestinal dysfunction by measuring the occupancy rate of bacteria in the human stomach by gastric flora analysis, and an agent for improving gastric flora found by this detection method It is.
  • the occupancy rate of bacteria in the human stomach is higher than the Proteobacteria occupancy rate, and / or acid bacteria ( It has been found that the absence of acidobacteria) is associated with the development of functional gastrointestinal disorders, particularly the development of functional dyspepsia, and a method for detecting functional gastrointestinal disorders and an agent for improving gastric flora Based on that.
  • FD functional dyspepsia
  • Patent Document 1 and Patent Document 2 describe that functional gastrointestinal disorders were improved by administration of glutamic acid, 5′-nucleotide and the like (each claim 1).
  • Patent Document 3 describes a functional gastrointestinal tract preventive / ameliorating agent containing glutamic acid and arginine as active ingredients.
  • This preventive / ameliorating agent is easy to manufacture, low in cost and high in safety, especially in upper areas such as functional gastroenteropathy (FD) such as abdominal pain, stomach upset, heartburn and gastroesophageal reflux disease (GERD) It is said to be effective for digestive tract disorders (summary).
  • FD functional gastroenteropathy
  • GID gastroesophageal reflux disease
  • Patent Document 4 has a sterilizing action of Helicobacter pylori (hereinafter sometimes referred to as H. pylori).
  • H. pylori Helicobacter pylori
  • Bifidobacterium bifidum hereinafter sometimes referred to as bifidobacteria
  • bifidobacteria Bifidobacterium bifidum
  • Patent Document 5 shows that the Lactobacillus gasseri MCC 1183 strain has a sterilizing action against Helicobacter pylori.
  • foods and drinks suitable for paragraphs 0023, 0052
  • Patent Document 6 describes a Lactobacillus lactic acid bacterium such as Lactobacillus acidophilus (Lactobacillus gasseri), a Streptococcus lactic acid bacterium such as Streptococcus faecalis, and a gastrointestinal function enhancer containing aloe (Claim 1). , 2, paragraph 0012), it is described that the enhancement of gastrointestinal function includes improvement of stomach sag and abdominal bloating (paragraph 0043).
  • a technique for eradicating H. pylori and improving functional gastrointestinal disorders by using a fermented milk beverage containing lactic acid bacteria such as bifidobacteria has already been known.
  • the applicant of the present invention relates to a Helicobacter pylori sterilization and / or infection prevention pharmaceutical agent containing Lactobacillus gasseri OLL2716 strain, which is a lactic acid bacterium having high sterilization ability of H. pylori.
  • the pharmaceutical agent is used as an anti-gastritis agent or an anti-ulcer agent (claims 1 and 3).
  • Lactobacillus gasseri OLL2716 strain is effective in preventing and / or improving functional gastrointestinal disorders.
  • Lactobacillus gasseri OLL2716 strain is specifically effective as a functional gastrointestinal tract disorder preventing and / or ameliorating agent.
  • an object of the present invention is to provide a novel method for detecting the presence or absence of functional gastrointestinal disorders, particularly functional dyspepsia.
  • the present inventors have intensively studied and analyzed the gastric flora analysis that the occupancy rate of bacteria in the human stomach, in particular, the Bacteroidetes occupancy rate in the human stomach is higher than the Proteobacteria occupancy rate. And / or that the absence of acidobacteria in the human stomach is associated with the development of functional gastrointestinal disorders, particularly functional dyspepsia, and completed the present invention. .
  • the Lactobacillus gasseri OLL2716 strain reduces the Bacteroides occupancy ratio against the proteobacterium occupancy ratio in the stomach and the gastric acid bacteria occupancy ratio against H. pylori negative persons. It was found to increase. Also, at this time, as a result of studying the effect of reducing Lactobacillus gasseri OLL2716 strain to reduce the Bacteroides occupancy rate against the proteobacterium occupancy rate in the stomach and increasing the acid bacteria occupancy rate, surprisingly, It was found that the gasseri OLL2716 strain has nothing to do with the effect of eradicating H. pylori.
  • a method for detecting the presence or absence of functional gastrointestinal disorders by measuring the occupancy rate of bacteria in the human stomach 2.
  • 3. 1 or 2 which measures that the Bacteroidetes occupancy is higher than the Proteobacteria occupancy in the human stomach and / or that the Acidbacteria is not occupied in the human stomach Method 4 described.
  • 4. according to any one of 1 to 3, wherein the functional gastrointestinal disorder is functional dyspepsia. 5).
  • a gastric flora-improving agent comprising a lactic acid bacterium as an active ingredient, which reduces the Bacteroidetes occupancy relative to the proteobacteria occupancy in the stomach and / or acid bacteria in the stomach (Acidobacteria The above-mentioned gastric flora-improving agent, wherein the occupancy rate is increased. 7).
  • the daily dose of the lactic acid bacteria culture to a human is 5 to 1000 g, according to any one of 6 to 9 Bacterial flora improving agent.
  • the agent for improving gastric flora according to any one of 6 to 10 which exhibits an effect of improving gastric flora in 4 weeks after ingestion.
  • the method for measuring the occupancy rate of bacteria in the human stomach by gastric flora analysis is preferably based on a next-generation sequencer.
  • Intragastric flora analysis using a next-generation sequencer can be performed by the method described in the Examples.
  • any method capable of identifying and quantifying the gastric flora such as a PCR method and a culture method may be used.
  • the occupancy rate of bacteria in the stomach refers to the proportion of specific bacteria in the total number of bacteria in the stomach.
  • the gastric flora-improving agent according to the embodiment of the present invention is for Helicobacter pylori positive and negative persons, and contains lactic acid bacteria as an active ingredient. Lactobacillus lactic acid bacteria are preferably used as the lactic acid bacteria, and Lactobacillus gasseri OLL2716 (FERM BP-6999) is more preferably used as the lactic acid bacteria of the genus Lactobacillus. Furthermore, the gastric flora-improving agent according to the embodiment of the present invention is preferably for those who are negative for H. pylori.
  • the daily dose of the lactic acid bacteria to humans is 2 ⁇ 10 7 to 5 ⁇ 10 10 .
  • the daily dose of the lactic acid bacteria culture to the human is preferably 5 to 1000 g.
  • the gastric flora improving agent according to the embodiment of the present invention has a rapid effect, and the rapid effect exhibits a functional gastrointestinal tract disorder improving effect 4 weeks after ingestion.
  • the gastric flora-improving agent according to the embodiment of the present invention is specifically an agent for reducing Bacteroides occupancy relative to gastric proteobacterium occupancy, or an agent for increasing acid bacterium occupancy in the stomach. .
  • the Bacteroides occupancy is higher than the proteobacteria occupancy in the human stomach and / or the acid bacteria occupy in the human stomach. It is possible to detect the presence or absence of functional gastrointestinal dysfunction, particularly functional dyspepsia, by measuring the absence.
  • the gastric flora improving agent of the present invention the effect of reducing the Bacteroides occupancy relative to the proteobacterium occupancy in the human stomach for both positive and negative for H. pylori, and / or It is possible to provide an effect of increasing the occupancy rate of acid bacteria in the human stomach.
  • the method for detecting the presence or absence of a functional gastrointestinal tract disorder is characterized by measuring the occupancy rate of bacteria in the human stomach, and specifically, the bacteroides occupancy rate is greater than the proteobacterium occupancy rate. It is also characterized in that it is determined that it is high and / or is not occupied by acid bacteria.
  • the functional gastrointestinal tract disorder in the embodiment of the present invention does not show organic diseases such as peptic ulcer and cancer symptoms, digestive sensation, stomach sag, abdominal bloating, nausea / vomiting, upper abdominal pain, It refers to the pathological condition followed by upper abdominal indefinite complaints such as loss of appetite or abnormal bowel movements, and is a symptom in which reproducible gastrointestinal symptoms that reduce the patient's QOL are observed even if no organic diseases of the digestive tract are observed.
  • Such functional gastrointestinal dysfunction is a disease that has been diagnosed as chronic gastritis or gastritis, and is characterized by symptoms such as abdominal pain, stomach upset, heartburn.
  • Such functional gastrointestinal tract disorders do not show organic diseases of the gastrointestinal tract. As a cause, abnormal transmission of the nervous system due to stress, microscopic inflammation that cannot be detected by endoscopes, etc. There are various theories, such as the existence and decline of the motor function of the digestive tract, but it is not clear.
  • the digestive tract refers to a luminal organ involved in a series of digestion from the oral cavity to the anus, and includes, for example, the pharynx, esophagus, stomach, small intestine (duodenum, jejunum, ileum), and large intestine.
  • detecting the presence or absence of a functional gastrointestinal disorder refers to detecting whether or not there is a functional gastrointestinal disorder.
  • Functional dyspepsia in the embodiments of the present invention refers to gastric ulcer, duodenal ulcer, etc. even if endoscopic examination is performed even though various symptoms such as stomach pain and stomach stagnation continue chronically. It is a disease where organic abnormalities such as stomach cancer are not found, and the main symptoms are "feeling painful after meals", “feeling that the stomach is full with food immediately after starting meals, and eating more Feelings that can't be achieved (early satiety), “pain in the groove (foveal pain)”, “burning feeling in the groove (burning feeling in the epigastric region)”.
  • Bacteria in the embodiment of the present invention are phylogenically classified into phylum, class, order, family, genus, and species.
  • Examples of the bacterial phylum in the embodiment of the present invention include, for example, Firmicutes, Bacteroidetes, Proteobacteria, Fusobacteria, and Acidobacteria Can be given.
  • the total number of bacteria in the stomach and the occupancy rate of bacteria in the stomach are measured by PCR amplification products of 16S ribosomal RNA (16SrRNA) gene and next-generation sequencing.
  • PCR amplification of the 16S ribosomal RNA (16SrRNA) gene was taken from the subject to ensure that the 16S rRNA gene base sequence data of the flora reflect the flora structure of the flora in the subject's stomach.
  • bacterial genomic DNA contained in the flora is extracted so that there is no variation in the extraction efficiency depending on the bacterial species, and used as a sample for determining the base sequence.
  • various well-known methods are known as used in the examples described later.
  • the total number of bacteria in the stomach and the occupancy rate of bacteria in the stomach are measured by PCR amplification products of 16S ribosomal RNA (16SrRNA) gene and next-generation sequencing.
  • Next-generation sequencing can be performed using or in conformity with various known methods using a next-generation sequencer, as used in the examples described later.
  • Next-generation sequencing allows accurate identification and quantification of bacteria, compared to the difficulty of accurate identification and quantification of bacteria due to overlapping peaks in electrophoresis by the T-RFLP method.
  • Next-generation sequencing can measure the total number of bacteria in the stomach by genome-analyzing all 16S rRNA using a next-generation sequencer.
  • the fact that the bacteroides occupancy is “higher” than the proteobacteria occupancy means that the quotient obtained by dividing “bacteroides occupancy” by “proteobacteria occupancy” exceeds 1.
  • the quotient obtained by dividing “Bacteroides occupancy” by “Proteobacteria occupancy” is, for example, 1.01 or more, preferably 1.1 or more, more preferably 1.3 or more, and still more preferably 1.6 or more. .
  • not occupied by an acid bacterium means that the occupancy rate of the acid bacterium is less than 0.1% or below the detection limit.
  • the gastric flora-improving agent according to an embodiment of the present invention is for H. pylori positive and negative persons, and contains lactic acid bacteria as an active ingredient.
  • an intragastric flora-improving agent can be provided even for those who are negative for H. pylori.
  • Lactic acid bacteria are generally used in fermented foods such as yogurt, cheese, butter, and pickles, and some have a familiar flavor and are easy to take. As long as lactic acid bacteria in the embodiment of the present invention produce lactic acid by assimilating saccharides, the genus, species and origin thereof are arbitrary. Of these, lactic acid bacteria belonging to the genus Lactobacillus, particularly Lactobacillus gasseri, are preferred, and Lactobacillus gasli OLL 2716 (FERM BP-6999) can be suitably used.
  • the effective amount (intake amount) per day for humans is preferably the number of lactic acid bacteria as an active ingredient in the gastric flora improving agent, preferably 2 ⁇ 10 7 to 5.
  • ⁇ 10 10 more preferably 5 ⁇ 10 7 to 5 ⁇ 10 10 , still more preferably 1 ⁇ 10 8 to 5 ⁇ 10 10 , still more preferably 5 ⁇ 10 8 to 5 ⁇ 10 10 , even more preferable It is desirable to contain so that 5 ⁇ 10 8 to 2 ⁇ 10 10 can be ingested.
  • the gastrointestinal flora-improving agent is incorporated so that the number of lactic acid bacteria is less than 2 ⁇ 10 7 , it becomes difficult to prevent and / or improve human functional gastrointestinal disorders. This is because even if the bacterial flora improving agent is incorporated so that the number of lactic acid bacteria is ingested more than 5 ⁇ 10 10 , the effect is not greatly changed.
  • lactic acid bacteria when 10 7 or more lactic acid bacteria are included per 1 g of lactic acid bacteria culture as an effective amount (intake amount) per day for humans,
  • the culture of lactic acid bacteria is preferably ingested at 5 to 1000 g, more preferably 10 to 1000 g, still more preferably 50 to 500 g, even more preferably 70 to 300 g, still more preferably 70 to 250 g, and particularly preferably 80 to 200 g. It is desirable to make it contain.
  • the effective amount (intake amount) per day may be taken for a human in one time, or may be taken in two or more times.
  • the number of lactic acid bacteria included per 1 g of the lactic acid bacteria culture may be 10 7 or more, and may be 10 7 , 10 8 , 10 9, or the like. If the number of lactic acid bacteria included per gram of lactic acid bacteria culture is increased, the effective amount of the lactic acid bacteria culture can be reduced while including the effective number of lactic acid bacteria in the gastrointestinal flora improving agent. By taking a smaller amount of the culture of lactic acid bacteria, it is possible to obtain the same effect of improving human gastric flora.
  • the culture of lactic acid bacteria in the embodiment of the present invention can be obtained by culturing (growing) lactic acid bacteria with known medium components. Moreover, the number of lactic acid bacteria per unit weight of a culture solution can be raised by centrifuging the obtained culture solution of lactic acid bacteria.
  • the lactic acid bacterium in the embodiment of the present invention may be in a state of just being cultured (proliferated), may be mixed with a cryoprotectant or the like, may be frozen, or may be lyophilized.
  • the lactic acid bacteria in the embodiment of the present invention may be live or dead, and preferably live.
  • the commercial item containing the lactic acid bacteria in embodiment of this invention for convenience.
  • the commercial item may be ingested as it is and may be processed further.
  • the other ingestible components are not limited, but for example, dairy components are preferably used.
  • the dairy component means a composition containing milk itself or a milk component obtained by processing milk, for example, raw milk (such as milk), reduced milk (milk powder, cream, butter), fermented milk (yogurt, cheese), milk Including all ingredients including milk components such as preparations (whey, casein, lactose, whey minerals, permeates), the origin and form are not particularly limited.
  • the gastric flora-improving agent according to the embodiment of the present invention has a rapid action, and is particularly characterized in that the gastric flora-improving effect is exhibited in 4 weeks.
  • this does not limit the continuous ingestion of the gastric flora-improving agent according to the embodiment of the present invention for longer than 4 weeks, and it is preferable to continuously ingest for more than 4 weeks. More preferably for 8 weeks or longer, more preferably for 12 weeks or longer, even more preferably for 16 weeks or longer, more preferably for 20 weeks or longer Is more preferable.
  • the gastrointestinal flora-improving agent according to the embodiment of the present invention is not particularly limited in its intake method and intake frequency.
  • the gastric flora-improving agent is ingested daily as an example, and in the above embodiment, the preferred number of lactic acid bacteria per day is shown.
  • the effect of improving the intragastric flora according to the embodiment is not necessarily absent.
  • the intake frequency is changed to, for example, once every two days, once every three days, once every four days, once every five days, once every seven days (one week), and every ten days. Times, once a month, etc.
  • the gastric flora improving agent according to the embodiment of the present invention can be composed of a unit packaging form per serving, and can also be a form including the number of effective lactic acid bacteria per unit packaging. .
  • lactic acid bacteria as an active ingredient per unit package so that 2 ⁇ 10 7 to 5 ⁇ 10 10 can be ingested, and 5 ⁇ 10 7 to 5 ⁇ 10 10 ingested. More preferably, it is contained so that it is ingested at 1 ⁇ 10 8 to 5 ⁇ 10 10 pieces, and more preferably, it is contained so that it is ingested at 5 ⁇ 10 8 to 5 ⁇ 10 10 pieces. It is even more preferable that it is contained so as to be ingested at 5 ⁇ 10 8 to 2 ⁇ 10 10 pieces.
  • the lactic acid bacteria culture as an active ingredient is contained per unit package so as to be ingested at 5 to 1000 g. More preferably, it is contained so that it can be ingested at ⁇ 1000 g, more preferably, it is contained so that it can be ingested at 50-500 g, and even more preferably, it is contained so that it can be ingested at 70-300 g. More preferably, it is contained so as to be ingested at ⁇ 250 g, and particularly preferably contained so as to be ingested at 80-200 g.
  • the stomach flora improving agent according to the embodiment of the present invention is packaged per unit package
  • a known package can be used.
  • paper, plastic, glass, nylon, stainless steel, aluminum, iron, copper, silver, bamboo, etc. are not particularly limited.
  • lactic acid bacteria are facultative anaerobic bacteria
  • the method for ingesting the gastric flora-improving agent is not particularly limited, and all of the known ingestion forms such as oral, tube, enteral, vascular injection, coating, and suppository can be applied.
  • oral intake can be preferably used.
  • the temperature of the gastric flora-improving agent when taking the gastric flora-improving agent is preferably ⁇ 30 to 50 ° C., more preferably ⁇ 20 to 45 ° C.
  • the temperature is more preferably 0 to 45 ° C, still more preferably 0 to 30 ° C, still more preferably 0 to 20 ° C, and particularly preferably 0 to 10 ° C.
  • the intestinal flora improving agent may contain other ingestible components, various additives, food and drink, raw materials for pharmaceuticals, and the like as components other than lactic acid bacteria.
  • the functional food is a food having a physical condition adjusting function which is a tertiary function among the functions of the food.
  • Health supplements are health foods certified by the Japan Health and Nutrition Foods Association (JHFA), and health functional foods are foods for specified health and nutritional functional foods under the jurisdiction of the Consumer Affairs Agency.
  • food / beverage products also include food / beverage products which do not correspond to functional food.
  • the gastrointestinal flora improving agent in order to be able to continuously take the gastrointestinal flora improving agent according to the embodiment of the present invention without getting tired, it is made into a beverage, yogurt, cheese, dessert, etc., and its flavor and / or physical properties. It is also possible to process a material suitable for the form.
  • the reduction of the bacteroides occupancy relative to the proteobacterium occupancy in the stomach refers to the quotient obtained by dividing the “bacteroides occupancy” by the “proteobacteria occupancy” (bacteroides occupancy / proteobacterium occupancy). Is to reduce.
  • the quotient obtained by dividing "Bacteroides occupancy” by "Proteobacteria occupancy” is 1 or more, this quotient is preferably reduced by 0.1 or more, more preferably 0.5 or more, and further preferably Is preferably reduced by 1 or more, and most preferably, the quotient obtained by dividing “Bacteroides occupancy” by “Proteobacteria occupancy” is preferably 1 or less.
  • the occupancy rate of the acid bacteria preferably 0.1% or more, more preferably 0.5% or more, and further preferably 1% or more.
  • limiting in the upper limit which increases an occupation rate For example, Preferably it is 50% or less, More preferably, it is 45% or less, More preferably, it increases at 40% or less.
  • Example 1 We collected gastric juices from patients with functional dyspepsia and healthy subjects, and analyzed the flora using a next-generation sequencer. Specifically, 24 patients with H. pylori negative (functional dyspepsia patient group, FD group) who did not have an organic disease and had a functional gastrointestinal tract disorder were targeted. In addition, as a control, 21 healthy subjects who were free of H. pylori and negative for H. pylori (healthy subject group, HC group) were targeted.
  • the analysis method using the next-generation sequencer is as follows.
  • PCR amplification product of 16S rRNA gene and next generation sequencing Gastric juice was collected from the stomach of each subject, and bacterial DNA was collected from the gastric juice using a DNA extraction kit "Ultra Clean Soil DNA Isolation Kit” (Mo Bio Laboratories, Carlsbad, CA, USA). And extracted according to the instructions of this kit.
  • the highly variable region V3-V4 of 16S rRNA was amplified by PCR using 341f primer and R806 primer. PCR is the method reported by Takahashi et al.
  • Sequencing was performed by paired-end with a 2 ⁇ 300 base driving cycle using Illumina Miseq sequencing system (Illumina, San Diego, CA, USA) and Miseq Reagent Kit version 3 chemistry.
  • Illumina Miseq sequencing system Illumina, San Diego, CA, USA
  • Miseq Reagent Kit version 3 chemistry For the quality filtering method of sequencing, only the leads in which 99% or more of the sequences satisfy quality value score 20 or more were extracted and used for the next analysis.
  • Hierarchical cluster analysis was performed based on the unweighted combination method (UPGMA) using GeneMaths software (Applied Maths, Brussels, Belgium) to analyze the overall flora structure and genus frequency identified for each sample. .
  • the occupancy rate of acid bacteria in the gastric juice of the FD group was extremely low (not occupied) compared to the HC group.
  • the number of acid bacteria detected was 1, and the number of acid bacteria below the detection limit was 23.
  • the number of acid bacteria detected was 16, and the number of acid bacteria below the detection limit was 5.
  • the p value at this time was such that p was smaller than 0.01 (p ⁇ 0.01).
  • Example 2 A solid gastric flora improving agent containing Lactobacillus gasseri OLL2716 (FERM BP-6999) as an active ingredient was prepared by the following method. Using raw material milk, skim milk powder, and water, adjust the milk fat content to 3.0% by weight and non-fat milk solid content to 9.2% by weight, and homogenize the resulting mixture by the usual method. Then, sterilization and cooling treatment were performed. Then, inoculated with Lactobacillus bulgaricus, Streptococcus thermophilus and Lactobacillus gasseri OLL2716 (FERM BP-6999) isolated from Meiji Co., Ltd.
  • “Meiji Probio Yogurt LG21” The obtained culture was used as a gastric flora improving agent in the test.
  • This gastric flora-improving agent is intended to ingest lactic acid bacteria containing active ingredients as they are for convenience.
  • the number of Lactobacillus gasseri OLL2716 (FERM BP-6999) lactic acid bacteria per gram was approximately 10 7 .
  • Test sample An intervention test was performed using a gastric flora-improving agent (hereinafter sometimes referred to as a test sample). Specifically, 24 patients (functional dyspepsia patient group, FD group) who had functional gastrointestinal disorders negative for H. pylori without any organic disease were targeted. In addition, as a control, 21 healthy subjects who were free of H. pylori and negative for H. pylori (healthy subject group, HC group) were targeted. And 24 persons in the FD group were ingested 118 g of a gastric flora improving agent each day for 12 consecutive weeks.
  • a gastric flora-improving agent hereinafter sometimes referred to as a test sample.
  • the gastric juices of 24 people in the FD group were taken overnight through the naso-gastric tube after ingestion of the intragastral flora improving agent and after 12 consecutive weeks of ingestion. Ingested directly from stomach.
  • the gastric juices of 21 people from the HC group were also taken directly from the stomach through the naso-gastric tube after one night.
  • the identification of the gastric juice flora was analyzed by a next-generation sequencer.
  • the analysis method using the next-generation sequencer is the same as in Example 1.
  • the bacteroides occupancy (bacteroides occupancy / proteobacteria occupancy) relative to the proteobacterium occupancy in gastric juice in the FD group was the test sample (Lactobacillus gasseri OLL 2716 (FERM BP-6999) yogurt with lactic acid bacteria).
  • the test sample Libacillus gasseri OLL 2716 (FERM BP-6999) yogurt with lactic acid bacteria.
  • 18 out of 24 patients decreased.
  • the test sample decreased to 9 after administration for 12 weeks.
  • the number of acid bacteria detected was 1 and the number of acid bacteria below the detection limit was 23 before the test sample was administered for 12 weeks.
  • acid bacteria were detected at an occupation ratio of 0.1% or more from 24 people who were all members of the FD group after the test sample was administered for 12 weeks.

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Abstract

ヒト胃内の細菌の占有率を測定することにより、機能性消化管障害の有無を検出する方法。

Description

胃内菌叢の占有率測定による機能性消化管障害の検出方法及び胃内菌叢改善剤
　本発明は、胃内菌叢解析により、ヒト胃内の細菌の占有率を測定することで機能性消化管障害を検出する方法、及び、この検出方法により見出した胃内菌叢改善剤に関するものである。
　具体的には、ヒト胃内の細菌の占有率、特に、ヒト胃内においてバクテロイデス（Bacteroidetes）占有率がプロテオバクテリア（Proteobacteria）占有率よりも高いこと、及び／又は、ヒト胃内においてアシドバクテリア（Acidobacteria）が占有していないことが、機能性消化管障害、特に、機能性ディスペプシアの発症と関連していることを見出し、機能性消化管障害を検出する方法及び胃内菌叢改善剤を見出したことに基づく。
　従来、内視鏡診断の進歩にも拘わらず、上腹部痛や不快感、食後の胃もたれ感、上腹部膨満感、悪心・嘔吐、心窩部痛、心窩部灼熱感等の上部消化器症状の訴えに対して、症状を説明できない所見の症例が多く見られる。このような消化器症状の訴えがありながら、内視鏡を含む一般検査により器質的疾患は見られず、症状を解明する所見が得られない状態をＦＤ（機能性ディスペプシア（Functional　Dyspepsia）、上腹部不定愁訴、食後愁訴、心窩部痛あるいは機能性胃腸症）と称している。
　日本では、２０１３年から保険診療名として機能性ディスペプシア（ＦＤ）が承認された。ＦＤは、日本消化器病学会により編集された機能性消化管疾患診療ガイドライン２０１４（２０１４年４月、南江堂、非特許文献１）に従って、病名が判断される。
　また、これらＦＤの症状は、器質的疾患に現れないことから、その症状を見過ごされたり、誤診されたりする課題があった。即ち、このような不快感を伴いながらも明確な病名の診断がなされないまま、機能性消化管障害を持っている人のＱＯＬが低下したり、治療が滞ったりする弊害があった。
　一方で、これらの症状を改善する方法として、セロトニンや一酸化窒素を遊離するための薬物投与を行うことが知られている。しかし、これらの薬物投与は副作用を伴うため、副作用の伴わない方法で機能性消化管障害の予防や改善を行うことが期待されていた。
　副作用の伴わない方法で機能性消化管障害の予防や改善を行うために、これまで種々の提案がなされている。
　例えば、特許文献１及び特許文献２には、グルタミン酸、５’－ヌクレオチド等を投与することで機能性消化管障害が改善したことが記載されている（各請求項１）。
　特許文献３には、グルタミン酸とアルギニン等を有効成分として含有する機能性消化管障害予防・改善剤が記載されている。この予防・改善剤は、簡便に製造でき、低コストで安全性が高く、特に腹部痛、胃もたれ、胸やけ等の機能性胃腸症（ＦＤ）や、胃食道逆流症（ＧＥＲＤ）などの上部消化管障害に有効であるとされている（要約）。
　また、乳酸菌を用いて機能性消化管障害の予防や改善を行う技術として、例えば、特許文献４には、ヘリコバクター・ピロリ（以下、ピロリ菌と称する場合がある。）の除菌作用を有し、発酵乳飲料中のような好気条件下でも高い生残性のあるビフィドバクテリウム・ビフィダム（以下、ビフィズス菌と称する場合がある。）についての記載があり、このビフィズス菌を含有する発酵乳飲料を摂取することで、胃不定愁訴症候群を改善したことが示されている（段落００１１，００９６）。
　特許文献５には、ラクトバチルス・ガセリＭＣＣ１１８３株にピロリ菌の除菌作用があることが示され、この知見を応用した胃炎の予防又は治療に用いられる抗炎症剤、抗潰瘍剤、及び胃もたれに適した飲食品についての記載がある（段落００２３，００５２）
　特許文献６には、ラクトバチルス・アシドフィルス（ラクトバチルス・ガセリ）などのラクトバチルス属乳酸菌と、ストレプトコッカス・フェーカリスなどのストレプトコッカス属乳酸菌、及びアロエを含む胃腸機能亢進剤が記載されており（請求項１，２，段落００１２）、胃腸機能亢進には胃もたれや腹部膨満感の改善も含まれていることが記載されている（段落００４３）。
　すなわち、ビフィズス菌などの乳酸菌を含有する発酵乳飲料により、ピロリ菌を除菌して機能性消化管障害を改善する技術は、既に知られていた。また、ラクトバチルス・ガセリＭＣＣ１１８３株を用いてピロリ菌を除菌し、胃もたれを改善することも、既に提案されていた。さらに、ラクトバチルス属乳酸菌とストレプトコッカス属乳酸菌、及びアロエを含有する胃腸機能亢進剤により、胃もたれや腹部膨満感を改善することも、既に提案されていた。
国際公開第２００６／０３０９８０号 特許第５０６７１４５号公報 国際公開第２００９／１１３５９４号 特許第４８８１３０４号公報 特許第５３００７７２号公報 特開２０１２－１２６７００号公報 特許第４５０９２５０号公報 国際公開２０１５／１２９２８１号
日本消化器学会編、機能性消化管疾患診療ガイドライン２０１４（南江堂、２０１４年４月）
　機能性消化管障害、特に、機能性ディスペプシアにおいて、これらの症状が、器質的疾患に現れないことから、その症状を見過ごされたり、誤診されたりする課題があった。
　一方、本出願人は、特許文献７に記載の通り、ピロリ菌の除菌能の高い乳酸菌であるラクトバチルス・ガセリＯＬＬ２７１６株を有効成分とするピロリ菌の除菌及び／又は感染防御医薬剤について特許権を有している。本文献には、当該医薬剤が、抗胃炎剤又は抗潰瘍剤として用いられることが記載されている（請求項１，３）。
　また、本出願人は、特許文献８に記載の通り、ラクトバチルス・ガセリＯＬＬ２７１６株が機能性消化管障害の予防及び／又は改善に有効であることを見出した。
　しかしながら、ラクトバチルス・ガセリＯＬＬ２７１６株が、機能性消化管障害予防及び／又は改善剤として、具体的にどのような機構で有効であるか否かは明らかではなかった。
　そこで、本発明は、機能性消化管障害、特に、機能性ディスペプシアの有無を検出するための新規な方法を提供することを目的とする。
　本発明者らは、鋭意研究し、胃内菌叢解析により、ヒト胃内の細菌の占有率、特に、ヒト胃内においてバクテロイデス（Bacteroidetes）占有率がプロテオバクテリア（Proteobacteria）占有率よりも高いこと、及び／又は、ヒト胃内においてアシドバクテリア（Acidobacteria）が占有していないことが、機能性消化管障害、特に、機能性ディスペプシアの発症と関連していることを見出し、本発明を完成させた。
　本発明者らの研究により、ラクトバチルス・ガセリＯＬＬ２７１６株は、ピロリ菌陰性者に対して、胃内のプロテオバクテリア占有率に対するバクテロイデス占有率を低減させることと、胃内のアシドバクテリアの占有率を増加させることが見出された。
　また、このとき、ラクトバチルス・ガセリＯＬＬ２７１６株による胃内のプロテオバクテリア占有率に対するバクテロイデス占有率を低減させる効果とアシドバクテリアの占有率を増加させる効果について研究した結果、驚くべきことに、ラクトバチルス・ガセリＯＬＬ２７１６株がピロリ菌を除菌する効果とは関係ないことが見出された。
　本発明によれば、以下の発明が提供される。
１．ヒト胃内の細菌の占有率を測定することにより、機能性消化管障害の有無を検出する方法。
２．前記ヒト胃内の細菌の占有率の測定を、ヒト胃内から採取した胃液について行う、１記載の方法。
３．ヒト胃内においてバクテロイデス（Bacteroidetes）占有率がプロテオバクテリア（Proteobacteria）占有率よりも高いこと、及び／又は、ヒト胃内においてアシドバクテリア（Acidobacteria）が占有していないことを測定する、１又は２に記載の方法
４．前記機能性消化管障害が機能性ディスペプシアである、１～３のいずれかに記載の方法。
５．前記細菌の占有率の測定を、次世代シーケンサーを用いて行う、１～４のいずれかに記載の方法。
６．乳酸菌を有効成分として含有する胃内菌叢改善剤であって、胃内のプロテオバクテリア（Proteobacteria）占有率に対するバクテロイデス（Bacteroidetes）占有率を低減させること、及び／又は、胃内のアシドバクテリア（Acidobacteria）の占有率を増加させることを特徴とする、前記胃内菌叢改善剤。
７．前記乳酸菌が、ラクトバチルス属乳酸菌である、６に記載の胃内菌叢改善剤。
８．前記乳酸菌が、ラクトバチルス・ガセリ（Lactobacillus　gasseri）ＯＬＬ２７１６（ＦＥＲＭ　ＢＰ－６９９９）である、６又は７に記載の胃内菌叢改善剤。
９．前記乳酸菌の菌数のヒトに対する１日当たりの投与量が、２×１０７～５×１０１０個である、６～８のいずれかに記載の胃内菌叢改善剤。
１０．前記乳酸菌の培養物１ｇ当たりに１０７個以上の乳酸菌を含める場合、前記乳酸菌の培養物のヒトに対する１日当たりの投与量が、５～１０００ｇである、６～９のいずれかに記載の胃内菌叢改善剤。
１１．摂取後４週間で胃内菌叢改善効果を奏する、６～１０のいずれかに記載の胃内菌叢改善剤。
１２．ヘリコバクター・ピロリの陰性者及び陽性者用である、６～１１のいずれかに記載の胃内菌叢改善剤。
１３．ヘリコバクター・ピロリの陰性者用である、６～１２のいずれかに記載の胃内菌叢改善剤。
１４．前記胃内菌叢改善が、次世代シーケンサーにより測定される、６～１３のいずれかに記載の胃内菌叢改善剤。
　本発明によれば、機能性消化管障害、特に、機能性ディスペプシアの有無を検出するための新規な方法を提供することができる。
　本発明の実施形態に係る胃内菌叢解析によるヒト胃内の細菌の占有率測定方法は、次世代シークエンサーによることが好ましい。次世代シークエンサーによる胃内菌叢解析は、実施例に記載した方法により実施することができる。その他、ＰＣＲ法、培養法など、胃内菌叢を同定及び定量できるいかなる方法であってもよい。
　本発明において、胃内の細菌の占有率とは、胃内の総細菌数に占める特定の細菌の割合をいう。
　本発明の実施形態に係る胃内菌叢改善剤は、ヘリコバクター・ピロリの陽性者及び陰性者用であり、乳酸菌を有効成分として含有する構成となっている。
　乳酸菌としては、ラクトバチルス属乳酸菌を用いることが好ましく、ラクトバチルス属乳酸菌として、ラクトバチルス・ガセリ（Lactobacillus　gasseri）ＯＬＬ２７１６（ＦＥＲＭ　ＢＰ－６９９９）を用いることがより好ましい。
　さらに、本発明の実施形態に係る胃内菌叢改善剤は、ピロリ菌の陰性者用とすることが好ましい。
　さらに、本発明の実施形態に係る胃内菌叢改善剤については、前記乳酸菌の菌数のヒトに対する１日当たりの投与量を、２×１０７～５×１０１０個とすることが好ましく、前記乳酸菌の培養物１ｇ当たりに１０７個以上の乳酸菌を含める場合、前記乳酸菌の培養物のヒトに対する１日当たりの投与量を、５～１０００ｇとすることが好ましい。
　また、本発明の実施形態に係る胃内菌叢改善剤は速効性を有し、その速効性は、摂取後４週間で機能性消化管障害改善効果を奏するものとなっている。
　さらに、本発明の実施形態に係る胃内菌叢改善剤は、具体的には、胃内のプロテオバクテリア占有率に対するバクテロイデス占有率の低減剤、又は胃内のアシドバクテリア占有率の増加剤である。
　また、これら本発明の実施形態に係る胃内菌叢改善剤を、飲食品、健康補助食品、保健機能食品、サプリメント等の機能性食品として供される構成とすることも好ましい。
　本発明によれば、胃内菌叢解析により、さらに、本発明によれば、ヒト胃内においてバクテロイデス占有率がプロテオバクテリア占有率よりも高いこと、及び／又は、ヒト胃内においてアシドバクテリアが占有していないことを測定することにより、機能性消化管障害、特に、機能性ディスペプシアの有無を検出できる。
　また、本発明の胃内菌叢改善剤によれば、ピロリ菌の陽性者及び陰性者用の両方に対して、ヒト胃内においてプロテオバクテリア占有率に対するバクテロイデス占有率を低減させる効果、及び／又は、ヒト胃内においてアシドバクテリアの占有率を増加させる効果を提供できる。
　以下、本発明の好ましい実施形態について詳細に説明する。
　本発明の実施形態に係る機能性消化管障害の有無を検出する方法は、ヒト胃内の細菌の占有率を測定することを特徴とし、具体的には、バクテロイデス占有率がプロテオバクテリア占有率よりも高いこと、及び／又は、アシドバクテリアが占有していないことを測定することを特徴とする。
　本発明の実施形態における機能性消化管障害とは、消化性潰瘍やガン症状のような器質的疾患が認められず、消化感、胃もたれ感、腹部膨満感、悪心・嘔吐、上腹部痛、食欲不振あるいは便通異常等の上腹部不定愁訴の続く病態を言い、消化管の器質的疾患が見られなくても、患者のＱＯＬを低下させる再現性のある消化器症状が認められる症状をいう。このような機能性消化管障害は、これまで慢性胃炎や胃炎として診断されてきた疾患であり、腹部痛、胃もたれ、胸やけ等の症状を呈することを特徴とする。また、このような機能性消化管障害は、消化管の器質的疾患が見られないため、その原因として、ストレスなどによる神経系の異常伝達、内視鏡などでは検出できない程度の微小な炎症の存在、消化管の運動機能の低下などの諸説があるが、明確にはなっていない。
　なお、消化管とは、口腔から肛門までの一連の消化に携わる管腔臓器をいい、例えば、咽頭、食道、胃、小腸（十二指腸、空腸、回腸）、大腸が挙げられる。
　また、本発明の実施形態における、機能性消化管障害の有無を検出するとは、機能性消化管障害が有る状態か又は機能性消化管障害が無い状態かを検出することをいう。
　本発明の実施形態における機能性ディスペプシアとは、胃の痛みや胃もたれなどのさまざまな症状が慢性的に続いているにもかかわらず、内視鏡検査などを行っても、胃潰瘍・十二指腸潰瘍や胃がんなどのような器質的な異常がみつからない疾患で、主な症状として、「つらいと感じる食後のもたれ感」「食事開始後すぐに食べ物で胃が一杯になるように感じて、それ以上食べられなくなる感じ（早期飽満感）」「みぞおちの痛み（心窩部痛）」「みぞおちの焼ける感じ（心窩部灼熱感）」があげられる。
　本発明の実施形態における細菌とは、門（Phylum）、綱（Class）、目（Order）、科（Family）、属（Genus）、菌種（Species）に学術的に系統分類される。
　本発明の実施形態における細菌の門（Phylum）には、一例として、フィルミクテス門（Firmicutes）、バクテロイデス門（Bacteroidetes）、プロテオバクテリア門（Proteobacteria）、フソバクテリア門（Fusobacteria）、アシドバクテリア門（Acidobacteria）があげられる。
　本発明の実施形態における胃内の総細菌数及び胃内の細菌の占有率は、１６ＳリボゾームＲＮＡ（１６ＳｒＲＮＡ）遺伝子のＰＣＲ増幅産物及び次世代シークエンシングにより測定する。１６ＳリボゾームＲＮＡ（１６ＳｒＲＮＡ）遺伝子のＰＣＲ増幅は、菌叢の１６ＳｒＲＮＡ遺伝子の塩基配列のデータ群が、被験者の胃内の菌叢の菌叢構造を反映するようにするためには、被験者から採取した検体から細菌のゲノムＤＮＡを効率的に抽出することも重要であるが、それは当業者に周知の手法により適宜実施し得る。具体的には、菌叢に含まれる細菌のゲノムＤＮＡを、菌種によって抽出の効率にバラツキがないように抽出し、塩基配列決定のためのサンプルとする。そのような手法は、後述の実施例でも用いたように、従来周知の手法が種々知られているので、それらを利用し又はそれらに準じて行なうことができる。
　本発明の実施形態における胃内の総細菌数及び胃内の細菌の占有率は、１６ＳリボゾームＲＮＡ（１６ＳｒＲＮＡ）遺伝子のＰＣＲ増幅産物及び次世代シークエンシングにより測定する。次世代シークエンシングは、次世代シークエンサーを用いて、後述の実施例でも用いたように、従来周知の手法が種々知られているので、それらを利用し又はそれらに準じて行なうことができる。次世代シークエンシングは、Ｔ－ＲＦＬＰ法が電気泳動でのピークが重なることにより細菌の正確な同定や定量が難しいのに比較して、細菌の正確な同定と定量が可能である。次世代シークエンシングは、次世代シークエンサーにより全ての１６ＳｒＲＮＡをゲノム解析することで、胃内の細菌の総細菌数を測定できる。
　本発明の実施形態において、バクテロイデス占有率がプロテオバクテリア占有率よりも「高い」とは、「バクテロイデス占有率」を「プロテオバクテリア占有率」で割った商が、１を超えることを意味する。「バクテロイデス占有率」を「プロテオバクテリア占有率」で割った商は、例えば、１．０１以上、好ましくは、１．１以上、より好ましくは１．３以上、さらに好ましくは１．６以上である。
　本発明の実施形態において、アシドバクテリアが「占有していない」とは、アシドバクテリアの占有率が０．１％未満又は検出限界以下であることを意味する。
　本発明の実施形態に係る胃内菌叢改善剤は、ピロリ菌の陽性者及び陰性者用であり、乳酸菌を有効成分として含有することを特徴とする。
　本発明の実施形態によって、一般的に食習慣があり、副作用の殆どない乳酸菌を有効成分とする胃内菌叢改善を提供することが可能となる。例えば、本発明の実施形態によれば、ピロリ菌の陰性者に対しても、胃内菌叢改善剤を提供することができる。
　乳酸菌は、ヨーグルト、チーズ、バター、漬物などの発酵食品に使用されているのが一般的であり、慣れ親しんだ風味を有しているものもあり、摂取しやすい。
　本発明の実施形態における乳酸菌は、糖類を資化して乳酸を生成するものであれば、その属や種や由来などは任意である。中でも、ラクトバチルス属の乳酸菌、特にラクトバチルス・ガセリ（Lactobacillus　gasseri）が好ましく、ラクトバチルス・ガセリＯＬＬ　２７１６（ＦＥＲＭ　ＢＰ－６９９９）を好適に用いることができる。
　また、本発明の実施形態では、ヒトに対して１日あたり、その有効量（摂取量）として、胃内菌叢改善剤に有効成分の乳酸菌の菌数を、好ましくは２×１０７～５×１０１０個、より好ましくは５×１０７～５×１０１０個、さらに好ましくは１×１０８～５×１０１０個、さらにより好ましくは５×１０８～５×１０１０個、一層好ましくは５×１０８～２×１０１０個で摂取されるように含有させることが望ましい。
　胃内菌叢改善剤に乳酸菌の菌数を２×１０７よりも少なく摂取されるように含有させると、ヒトの機能性消化管障害の予防及び／又は改善効果が得られ難くなり、胃内菌叢改善剤に乳酸菌の菌数を５×１０１０個よりも多く摂取されるように含有させても、その効果に大きな変化が見られないためである。
　また、本発明の実施形態では、ヒトに対して１日あたり、その有効量（摂取量）として、乳酸菌の培養物１ｇ当たりに１０７個以上の乳酸菌を含める場合、胃内菌叢改善剤に乳酸菌の培養物を、好ましくは５～１０００ｇ、より好ましくは１０～１０００ｇ、さらに好ましくは５０～５００ｇ、さらにより好ましくは７０～３００ｇ、一層好ましくは７０～２５０ｇ、特に好ましくは８０～２００ｇで摂取されるように含有させることが望ましい。ここで、本発明の実施形態において、ヒトに対して１日あたり、その有効量（摂取量）を１回で摂取してもよく、２回以上の複数回で摂取してもよい。
　乳酸菌の培養物１ｇ当たりに含める乳酸菌の菌数は１０７個以上であればよく、１０７や１０８個、１０９個等であってもよい。乳酸菌の培養物１ｇ当たりに含める乳酸菌の菌数を増加させれば、胃管内菌叢改善剤に有効量の乳酸菌の菌数を含めつつ、乳酸菌の培養物の有効量を低減させることができ、乳酸菌の培養物をより少量摂取することで、同等のヒトの胃内菌叢改善効果を得ることが可能となる。
　本発明の実施形態における乳酸菌の培養物は、公知の培地成分で乳酸菌を培養（増殖）させて得ることができる。また、得られた乳酸菌の培養液を遠心分離することなどにより、培養液の単位重量あたりの乳酸菌の数を高めることができる。本発明の実施形態における乳酸菌は、培養（増殖）させたばかりの状態でもよく、凍結保護剤などと混合して凍結させた状態でもよく、凍結乾燥させた状態でもよい。また、本発明の実施形態における乳酸菌は、生菌でも死菌であってもよく、好ましくは生菌である。
　また、本発明の実施形態における乳酸菌が含有されている市販商品を便宜的に使用してもよい。例えば、ラクトバチルス・ガセリ（Lactobacillus　gasseri）ＯＬＬ　２７１６（ＦＥＲＭ　ＢＰ－６９９９）の場合、株式会社明治が販売している「明治プロビオヨーグルトＬＧ２１」を便宜的に用いることができる。当該市販品は、そのまま摂取してもよく、さらに加工してもよい。本発明の実施形態における乳酸菌と、その他の摂取可能な成分を一緒に摂取する場合、その他の摂取可能な成分に制限はないが、例えば乳性成分が好適に用いられる。乳性成分とは、乳そのもの又は乳を加工した乳成分を含む組成物を意味し、例えば、生乳（牛乳など）、還元乳（粉乳、クリーム、バター）、発酵乳（ヨーグルト、チーズ）、乳調製品（ホエイ、カゼイン、乳糖、乳清ミネラル、パーミエイト）などの乳成分を含んでいる全ての成分を含み、その由来や形態は特に限定されない。
　また、本発明の実施形態に係る胃内菌叢改善剤は、速効性を有し、特に４週間で胃内菌叢改善効果を奏することを特徴とする。もちろん、これは、本発明の実施形態に係る胃内菌叢改善剤を、４週間より長く継続して摂取することを制限しているわけではなく、４週間以上継続して摂取することが好ましく、８週間以上継続して摂取することがより好ましく、１２週間以上継続して摂取することがさらに好ましく、１６週間以上継続して摂取することがさらにより好ましく、２０週間以上継続して摂取することが一層好ましい。
　さらに、本発明の実施形態に係る胃管内菌叢改善剤は、その摂取方法及び摂取頻度に特段の制限はない。後述する実施例では、一例として胃内菌叢改善剤を毎日摂取しており、また上記実施形態において１日あたりの乳酸菌の好ましい菌数を示しているが、必ず毎日摂取しなければ本発明の実施形態による胃内菌叢改善効果が認められないわけではない。その効果が認められる限り、摂取頻度を、例えば２日に１回、３日に１回、４日に１回、５日に１回、７日（１週間）に１回、１０日に１回、１月に１回等、適宜調整することができる。
　本発明の実施形態に係る胃内菌叢改善剤は、１食当たりの単位包装形態からなるものとすることができ、該単位包装あたりに有効な乳酸菌の個数を含めた形態とすることもできる。
　例えば、該単位包装あたりに有効成分である乳酸菌を、２×１０７～５×１０１０個で摂取されるように含有させることが好ましく、５×１０７～５×１０１０個で摂取されるように含有させることがより好ましく、１×１０８～５×１０１０個で摂取されるように含有させることがさらに好ましく、５×１０８～５×１０１０個で摂取されるように含有させることがさらにより好ましく、５×１０８～２×１０１０個で摂取されるように含有させることが一層好ましい。
　また、例えば、乳酸菌の培養物１ｇ当たりに１０７個以上の乳酸菌を含める場合、単位包装あたりに有効成分である乳酸菌の培養物を５～１０００ｇで摂取されるように含有させることが好ましく、１０～１０００ｇで摂取されるように含有させることがよりに好ましく、５０～５００ｇで摂取されるように含有させることがさらに好ましく、７０～３００ｇで摂取されるように含有させることがさらにより好ましく、７０～２５０ｇで摂取されるように含有させることが一層好ましく、８０～２００ｇで摂取されるように含有させることが特に好ましい。
　本発明の実施形態に係る胃内菌叢改善剤は、単位包装あたりで包装する場合に、公知の包装を使用することができる。例えば、紙、プラスチック、ガラス、ナイロン、ステンレス、アルミニウム、鉄、銅、銀、竹、など特に制限はない。ただし、乳酸菌は通性嫌気性菌であることも鑑み、空気や酸素に触れない形態とすることが好ましい。例えば、本発明の実施形態に係る胃内菌叢改善剤の製造工程や包装工程において、酸素に触れる可能性を除去する工程を設けることが好ましく、また包装後の保存において包装内部に酸素が透過しない包装材を選択することが好ましい。
　本発明の実施形態では、胃内菌叢改善剤を摂取する方法は特に限定されず、経口、経管、経腸、血管注射、塗薬、座薬等の公知の摂取する形態の全部が適用でき、特に経口摂取を好適に用いることができる。
　本発明の実施形態において、胃内菌叢改善剤を摂取するときの胃内菌叢改善剤の温度を、－３０～５０℃とすることが好ましく、－２０～４５℃とすることがより好ましく、０～４５℃とすることがさらに好ましく、０～３０℃とすることがさらにより好ましく、０～２０℃とすることが一層好ましく、０～１０℃とすることが特に好ましい。
　本発明の実施形態では、胃内菌叢改善剤に乳酸菌以外の成分として、その他の摂取可能な成分、各種の添加物、飲食品、医薬品の原材料等を含有させてもよい。
　また、本発明の実施形態に係る胃内菌叢改善剤を、飲食品、健康補助食品、保健機能食品、サプリメント等の機能性食品として供される構成とすることも好ましい。ここで、機能性食品とは、食品の機能のうちの第三次機能である体調調節機能を有する食品である。
　そして、健康補助食品とは、財団法人 日本健康・栄養食品協会（ＪＨＦＡ）が認定した健康食品であり、保健機能食品とは、消費者庁の所管の特定保健用食品及び栄養機能食品である。そして、飲食品は、機能性食品に該当しない飲食品も含む。
　さらに、本発明の実施形態に係る胃管内菌叢改善剤を、飽きることなく継続して摂取できるようにするために、飲料、ヨーグルト、チーズ、デザートなどにすると共に、その風味及び／又は物性をその形態に適したものに加工することなども可能である。
　本発明の実施形態における、胃内のプロテオバクテリア占有率に対するバクテロイデス占有率を低減させるとは、「バクテロイデス占有率」を「プロテオバクテリア占有率」で割った商（バクテロイデス占有率／プロテオバクテリア占有率）を低減させることである。「バクテロイデス占有率」を「プロテオバクテリア占有率」で割った商が１以上の場合に、この商を好ましくは、０．１以上低減すること、より好ましくは０．５以上低減すること、さらに好ましくは１以上低減することが好ましく、最も好ましくは、「バクテロイデス占有率」を「プロテオバクテリア占有率」で割った商が１以下になるまで低減することが好ましい。
　本発明の実施形態において、アシドバクテリアの占有率を、好ましくは、０．１％以上、より好ましくは０．５％以上、さらに好ましくは１％以上増加することが好ましい。また、占有率を増やす上限に制限はないが、例えば、好ましくは５０％以下、より好ましくは４５％以下、さらに好ましくは４０％以下で増加することが好ましい。
　以下、本発明の実施形態の効果を確認するために実施した試験について詳細に説明するが、本発明は、以下の構成に限定されるものではない。
（実施例１）
　機能性ディスペプシア患者と健常者の胃液を採取し、次世代シーケンサーにより菌叢を解析した。
　具体的には、器質的疾患がなく、機能性消化管障害を有する、ピロリ菌陰性の患者２４名（機能性ディスペプシア患者群、ＦＤ群）を対象とした。また、コントロールとして、器質的疾患がなく、ピロリ菌陰性の健常者２１名（健康対象群、ＨＣ群）を対象とした。
　次世代シーケンサーによる解析方法は、下記の通りである。
１６ＳｒＲＮＡ遺伝子のＰＣＲ増幅産物及び次世代シークエンシング
　各被験者の胃から胃液を採取し、胃液から細菌のＤＮＡを、ＤＮＡ抽出キット「Ultra　Clean　Soil　DNA　Isolation　Kit」（Mo　Bio　Laboratories、Carlsbad，CA，USA）を用い、本キットの説明書に従って抽出した。１６ＳｒＲＮＡの高度可変領域Ｖ３－Ｖ４を、３４１ｆプライマー及びＲ８０６プライマーを用いたＰＣＲにより増幅させた。ＰＣＲは、Takahashiらにより報告された方法（Takahashi　S，et　al.，“Development　of　a　prokaryotic　universal　primer　for　simultaneous　analysis　of　Bacteria　and　Archaea　using　next-generation　sequencing.”，PLoS　 ONE（9）8（2014）：e105592.）に従って実施した。具体的には、ＤＮＡ遺伝子１０ｎｇにMightyAmp　for　Real　Time（SYBR　Plus）（Takara，Kyoto，Japan）ならびに各プライマー０．２５μＭを加えた反応混合物２５μＬをＰＣＲに供した。ＰＣＲは、最初の変性を９８℃で２分間行ってから、６５℃で開始し５５℃で終了する１５秒間のアニーリングを３５サイクル行い、６８℃で３０秒間伸張反応を行った。アニーリング温度は、保持サイクルとして設定した５５℃に達するまで１サイクル毎に１℃ずつ低下させた。MultiScreen　PCR　μ96　Filter　Plate（Merck　Millipoa，USA）によりＰＣＲ産物を精製した。
　シークエンシングは、Illumina　Miseq　sequencing　system（Illumina，San　Diego，CA，USA）及び Miseq　Reagent　Kit　version3　chemistryを使用し、２×３００塩基の運転サイクルでペアエンド（paired-end）により行った。シークエンシングの品質フィルタリングの方法は、シークエンスの９９％以上が、quality　value　score　２０以上を満たすリードのみを抽出して次の分析に用いた。
１６ＳｒＤＮＡに基づくＯＴＵ（操作的分類単位） 分析
　品質フィルターをパスしたリードから、サンプルあたり約３０，０００の高品質リードを任意に選択し、それからMetagenome＠KIN　analysis　software（World　Fusion，Tokyo，Japan）及びTechnoSuruga　Laboratory　Microbial　Identification　Database　DB-BA　9.0（TechnoSuruga　Laboratory，Shizuoka-city，Japan）を使用して、Hisadaらの方法（Hisada　T，et　al．，“Inter-　and　intra-individual　variations　in　seasonal　and　daily　stabilities　of　the　human　gut　microbiota　in　Japanese．”，Arch　Microbiol，197，p.919-34（2015））に従ってsequence　identity閾値を９７％としてＯＴＵに分類した。
　菌組成の分析は、総胃液細菌の０．１％を超える属に絞ったが、本実施例ではおよそ８５％に達した。階層クラスター解析は、GeneMaths　software（Applied　Maths，Brussels，Belgium）を用いて、非加重結合法（ＵＰＧＭＡ）に基づいて実施し、サンプル毎の全体の菌叢構造及び属に同定される頻度を分析した。
　その結果、ＦＤ群及びＨＣ群について、胃液中の主な細菌の占有率（細菌の構成割合、％）の平均は表１の通りであった。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000001
　ＦＤ群で、プロテオバクテリア占有率よりもバクテロイデス占有率が高い人数は１９名、プロテオバクテリア占有率よりもバクテロイデス占有率が低い人数は５名であった。また、ＨＣ群で、プロテオバクテリア占有率よりもバクテロイデス占有率が高い人数は２名、プロテオバクテリア占有率よりもバクテロイデス占有率が低い人数は１９名であった。ＦＤ群とＨＣ群を比較したところ統計的な有意差が認められた。この際のｐ値は、ｐが０．０１より小さかった（ｐ＜０．０１）。
　さらに、被験者の胃液中細菌の占有率（％）について、プロテオバクテリア占有率よりもバクテロイデス占有率が高いこととＦＤの関連を検討したところ、感度は７９．２％、特異度は９０．４％であった。つまり、プロテオバクテリア占有率よりもバクテロイデス占有率が高いこととＦＤの関連が示された。
　また、ＨＣ群と比較してＦＤ群の胃液中のアシドバクテリアの占有率が極めて低い（占有していない）という結果が得られた。ＦＤ群で、アシドバクテリアが検出された人数は１名、アシドバクテリアが検出限界以下だった人数は２３名であった。ＨＣ群で、アシドバクテリアが検出された人数は１６名、アシドバクテリアが検出限界以下だった人数は５名であった。ＦＤ群とＨＣ群を比較したところ統計的な有意差が認められた。この際のｐ値は、ｐが０．０１よりも小さかった（ｐ＜０．０１）。
　被験者の胃液中にアシドバクテリアが検出されないことと、ＦＤの関連を検討したところ、感度は９５．８％、特異度は７６．２％であった。つまり、アシドバクテリアが検出されないこととＦＤの関連が示された。
（実施例２）
　ラクトバチルス・ガセリ（Lactobacillus　gasseri）ＯＬＬ２７１６（ＦＥＲＭ　ＢＰ－６９９９）を有効成分として含有する固形状の胃内菌叢改善剤を、以下の方法で調製した。原料乳、脱脂粉乳、及び水を用いて、乳脂肪分３．０重量％、無脂乳固形分９．２重量％となるように適宜調製し、得られた混合物を通常の方法により均質化して、殺菌、冷却処理を行った。その後、株式会社明治「明治プロビオヨーグルトＬＧ２１」から分離したラクトバチルス・ブルガリカスとストレプトコッカス・サーモフィラスとラクトバチルス・ガセリ（Lactobacillus　gasseri）ＯＬＬ２７１６（ＦＥＲＭ　ＢＰ－６９９９）を接種して、通常の方法で培養し、得られた培養物を胃内菌叢改善剤として試験に用いた。なお、この胃内菌叢改善剤は、便宜的に有効成分を含む乳酸菌をそのまま摂取するものとしてある。
　この胃内菌叢改善剤において、１ｇ当たりのラクトバチルス・ガセリＯＬＬ２７１６（ＦＥＲＭ　ＢＰ－６９９９）乳酸菌の菌数は、およそ１０７個であった。
（試験方法）
　胃内菌叢改善剤（以下、これを試験試料と称する場合がある。）を使用し、介入試験を実施した。
　具体的には、器質的疾患がないピロリ菌陰性の機能性消化管障害を有する患者２４名（機能性ディスペプシア患者群、ＦＤ群）を対象とした。また、コントロールとして、器質的疾患がなく、ピロリ菌陰性の健常者２１名（健康対象群、ＨＣ群）を対象とした。
　そして、ＦＤ群の２４名には胃内菌叢改善剤をそれぞれ１日１１８ｇずつ１２週間連続で摂取させた。
　さらに、ＦＤ群の２４名の胃液を、胃内菌叢改善剤の摂取前、および１２週間連続で摂取させた後に、ナソ－ガストリックチューブ（naso-gastric　tube）を通じて、一晩経過した状態で胃から直接に摂取した。同様に、ＨＣ群の２１名の胃液も、ナソ－ガストリックチューブ（naso-gastric　tube）を通じて、一晩経過した状態で胃から直接に摂取した。
　胃液内菌叢の特定は、次世代シーケンサーにより解析した。次世代シーケンサーによる解析方法は、実施例１と同様である。
　その結果、ＦＤ群における胃液中のプロテオバクテリア占有率に対するバクテロイデス占有率（バクテロイデス占有率／プロテオバクテリア占有率）は、試験試料（ラクトバチルス・ガセリＯＬＬ　２７１６（ＦＥＲＭ　ＢＰ－６９９９）乳酸菌入りのヨーグルト）を１２週間投与後において、２４名中１８名が低減した。また、ＦＤ群における胃液中のバクテロイデス占有率をプロテオバクテリア占有率で割った商（バクテロイデス占有率／プロテオバクテリア）が１を超えた患者は、試験試料を１２週間投与前において１８名であったが、試験試料を１２週間投与後には９名に減少した。
　以上より、機能性消化管障害を有する患者に対し、試験試料を１２週間継続的に摂取することで、プロテオバクテリア占有率に対する胃内のバクテロイデス占有率が低減し、すなわち、バクテロイデス占有率をプロテオバクテリア占有率で割った商（バクテロイデス占有率／プロテオバクテリア）が低減し、機能性消化管障害を改善できることが明らかとなった。
　また、ＦＤ群で、試験試料を１２週間投与前において、アシドバクテリアが検出された人数は１名、アシドバクテリアが検出限界以下だった人数は２３名であった。ＦＤ群で、試験試料を１２週間投与後において、ＦＤ群の全員である２４名からアシドバクテリアが占有率０．１％以上で検出された。
　以上より、機能性消化管障害を有する患者に対し、試験試料を１２週間継続的に摂取することで、胃内のアシドバクテリアの占有率が上昇し、機能性消化管障害を改善できることが明らかとなった。

Claims (14)

  1. 　ヒト胃内の細菌の占有率を測定することにより、機能性消化管障害の有無を検出する方法。
  2. 　前記ヒト胃内の細菌の占有率の測定を、ヒト胃内から採取した胃液について行う、請求項１記載の方法。
  3. 　ヒト胃内においてバクテロイデス（Bacteroidetes）占有率がプロテオバクテリア（Proteobacteria）占有率よりも高いこと、及び／又は、ヒト胃内においてアシドバクテリア（Acidobacteria）が占有していないことを測定する、請求項１又は２に記載の方法
  4. 　前記機能性消化管障害が機能性ディスペプシアである、請求項１～３のいずれかに記載の方法。
  5. 　前記細菌の占有率の測定を、次世代シーケンサーを用いて行う、請求項１～４のいずれかに記載の方法。
  6. 　乳酸菌を有効成分として含有する胃内菌叢改善剤であって、胃内のプロテオバクテリア（Proteobacteria）占有率に対するバクテロイデス（Bacteroidetes）占有率を低減させること、及び／又は、胃内のアシドバクテリア（Acidobacteria）の占有率を増加させることを特徴とする、前記胃内菌叢改善剤。
  7. 　前記乳酸菌が、ラクトバチルス属乳酸菌である、請求項６に記載の胃内菌叢改善剤。
  8. 　前記乳酸菌が、ラクトバチルス・ガセリ（Lactobacillus　gasseri）ＯＬＬ２７１６（ＦＥＲＭ　ＢＰ－６９９９）である、請求項６又は７に記載の胃内菌叢改善剤。
  9. 　前記乳酸菌の菌数のヒトに対する１日当たりの投与量が、２×１０７～５×１０１０個である、請求項６～８のいずれかに記載の胃内菌叢改善剤。
  10. 　前記乳酸菌の培養物１ｇ当たりに１０７個以上の乳酸菌を含める場合、前記乳酸菌の培養物のヒトに対する１日当たりの投与量が、５～１０００ｇである、請求項６～９のいずれかに記載の胃内菌叢改善剤。
  11. 　摂取後４週間で胃内菌叢改善効果を奏する、請求項６～１０のいずれかに記載の胃内菌叢改善剤。
  12. 　ヘリコバクター・ピロリの陰性者及び陽性者用である、請求項６～１１のいずれかに記載の胃内菌叢改善剤。
  13. 　ヘリコバクター・ピロリの陰性者用である、請求項６～１２のいずれかに記載の胃内菌叢改善剤。
  14. 　前記胃内菌叢改善が、次世代シーケンサーにより測定される、請求項６～１３のいずれかに記載の胃内菌叢改善剤。
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Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2015129281A1 (ja) * 2014-02-28 2015-09-03 株式会社明治 機能性消化管障害予防及び／又は改善剤
WO2017221799A1 (ja) * 2016-06-20 2017-12-28 株式会社明治 上部消化管内菌叢改善剤

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ATE451840T1 (de) * 2002-04-12 2010-01-15 Meiji Dairies Corp Zur desinfektion von helicobacter pylori befähigter käse

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2015129281A1 (ja) * 2014-02-28 2015-09-03 株式会社明治 機能性消化管障害予防及び／又は改善剤
WO2017221799A1 (ja) * 2016-06-20 2017-12-28 株式会社明治 上部消化管内菌叢改善剤

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
HELICOBACTER RESEARCH, vol. 14, no. 1, 2010, pages 39 - 43 *
NAKAE, H. ET AL.: "Gastric microbiota in the functional dyspepsia patients treated with probiotic yogurt", BMJ OPEN GASTRO, vol. 3, no. 1, 16 September 2016 (2016-09-16), pages 1 - 8, XP055446014, Retrieved from the Internet <URL:Doi:10.1136/bmjgast-2016-000109> *

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