JP4324343B2 - トリヨードフェニル基及びステロイド残基を有する化合物 - Google Patents
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Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、ステロイド残基と２ないし６個のトリヨードフェニル基とを含む化合物に関する。この化合物はリポソームの構成脂質として利用することができ、このリポソームはＸ線造影剤およびシンチグラフィー造影剤として用いることができる。
【０００２】
【従来の技術】
ヨード化合物を用いたＸ線造影、例えばＸ線血管造影の分野では、水溶性のヨード造影剤を投与することにより血液の流れを造影し、その流れが滞っている箇所をみつける技術がある。しかしこの方法は、ヨード造影剤は血流中にあって血管内部の血流の変化を検出する方法であり、ヨード造影剤が病巣細胞にある場合に比べて正常組織との区別がつけにくいために、通常狭窄が５０％以上進んだ病巣しか検出することができず、虚血性疾患の発作が発症する前に病巣を検出することは困難である。
【０００３】
これとは別に、疎水性ヨード造影剤若しくは親水性造影剤を製剤化し、目的とする疾患部位に選択的に集積させる試みが報告されている(国際公開WO95/19186、同WO95/21631、同WO89/00812、英国特許第867650号、国際公開WO96/00089、同WO94/19025、同WO96/40615、同WO95/2295、同 WO98/41239、同WO98/23297、同WO99/02193、同 WO97/06132、米国特許第4192859号明細書、同4567034号明細書、同4925649号明細書、 Pharm. Res., 6(12), 1011 (1989), Pharm. Res., 16(3), 420 (1999), J. Pharm. Sci., 72(8), 898 (1983), Invest. Radiol., 18(3), 275 (1983))。例えばPharm. Res., 6(12), 1011 (1989)には、疎水性化合物であるCholesteryl Iopanoateの油滴分散液を注射することにより、該ヨード化合物が実験動物の動脈硬化部位に集積することが開示されている。また、Pharm. Res., 16(3), 420 (1999)には、Cholesteryl IopanoateをアセチルＬＤＬに取り込ませて投与することによって該ヨード化合物が実験動物の動脈硬化部位に集積することが開示されている。
【０００４】
また、J. Pharm. Sci. 72(8), 898 (1983)には、Cholesteryl Iopanoateの油滴分散液を注射することによる肝臓や脾臓のＸ線造影の例が開示されている。米国特許第4567034号明細書には、diatrizoic acid のエステル体をリポソームに封入し、肝臓や脾臓の選択的造影を行う方法が報告されている。国際公開WO96/28414、同WO96/00089には血管プールやリンパ系をイメージ化するための造影剤が開示されている。しかしながら、これらの造影剤及び造影方法は、血管疾患を選択的に造影する目的のためには効率及び選択性ともに十分ではなく、Ｘ線照射により血管疾患を画像化した例も報告されていない。
【０００５】
国際公開WO01/93918においては、疎水性、かつ加水分解抵抗性の放射性ヨード造影剤をマイクロエマルジョン製剤化、もしくはアセチルＬＤＬに取り込ませて実験動物に投与して、動脈硬化巣部位を放射性造影する例が開示されている。また、リポソーム製剤に関する記載もあるが、その構成組成および造影に関する例はなんら開示されていない。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題及び課題を解決するための手段】
本発明の課題は、病巣を選択的に造影することができるリポソームを用いたＸ線造影剤に適した化合物を提供することにある。本発明者らは上記の課題を解決すべく研究を行った結果、ステロイド残基と２個以上のトリヨードフェニル基とを有する化合物が、Ｘ線造影剤のためのリポソームの構成脂質として優れた性質を有していることを見出した。さらに、この化合物を含み、ホスファチジルコリン及びホスファチジルセリンを膜構成成分として含むリポソームがＸ線造影による血管疾患の病巣の選択的造影に適していることを見出した。本発明は上記の知見を基にして完成されたものである。
【０００７】
すなわち、本発明は、ステロイド残基と２ないし６個のトリヨードフェニル基とを含む化合物を提供するものである。この発明の好ましい態様によれば、２個のトリヨードフェニル基を含む上記化合物が提供される。さらに好ましい態様によれば、下記一般式（Ｉ）：
【化３】
（式中、Ｉ3Ａｒ1及びＩ3Ａｒ2はそれぞれ独立にトリヨードフェニル基を示し；Ｓｔｅはステロイド残基を示し、Ｌ1は１〜３０個の炭素原子を含む三価の連結基を示す）で表される上記の化合物、及び三価の連結基Ｌ1が下記一般式（II）：
【化４】
（式中、Ｌ2、Ｌ3、及びＬ4はそれぞれ独立に１〜２７個の炭素原子を含む二価の連結基を示し、ただしＬ2、Ｌ3、及びＬ4に含まれる総炭素原子数は１〜２７個である）で表される上記の化合物が提供される。
【０００８】
別の観点からは、上記の化合物を膜構成成分として含むリポソームが本発明により提供される。この発明の好ましい態様によれば、ホスファチジルコリン及びホスファチジルセリンからなる群から選ばれる脂質を膜構成成分として含む上記リポソームが提供される。また、リポソームの製造のための上記化合物の使用も本発明により提供される。
【０００９】
また、本発明により、上記のリポソームを含むＸ線造影剤が提供される。この発明の好ましい態様によれば、血管疾患の造影に用いる上記のＸ線造影剤；泡沫化マクロファージの影響で異常増殖した血管平滑筋細胞の造影に用いる上記のＸ線造影剤；マクロファージが局在化する組織又は疾患部位の造影に用いる上記のＸ線造影剤；マクロファージが局在化する組織が肝臓、脾臓、肺胞、リンパ節、リンパ管、及び腎臓上皮からなる群から選ばれる上記のＸ線造影剤；及びマクロファージが局在化する疾患部位が腫瘍、炎症部位、及び感染部位からなる群から選ばれる上記のＸ線造影剤が提供される。
【００１０】
また、上記Ｘ線造影剤の製造のための上記の化合物又はその塩の使用；Ｘ線造影法であって、上記の化合物を膜構成成分として含むリポソームをヒトを含む哺乳類動物に投与した後にＸ線を照射する工程を含む方法；血管疾患の病巣の造影方法であって、上記の化合物を膜構成成分として含むリポソームをヒトを含む哺乳類動物に投与した後にＸ線を照射する工程を含む方法が本発明により提供される。
【００１１】
さらに、少なくとも１つのヨード原子が放射性同位体である上記の化合物又はその塩を膜構成成分として含むリポソーム、及び該リポソームを含むシンチグラフィー造影剤が本発明により提供される。この発明の好ましい態様によれば、泡沫化マクロファージの影響で異常増殖した血管平滑筋細胞の造影に用いる上記のシンチグラフィー造影剤；マクロファージが局在化する組織又は疾患部位の造影に用いる上記のシンチグラフィー造影剤；造影対象の組織が血管、肝臓、脾臓、肺胞、リンパ節、リンパ管、及び腎臓上皮からなる群から選ばれる上記のシンチグラフィー造影剤；腫瘍、動脈硬化巣、炎症部位、及び感染部位からなる群から選ばれる疾患部位の造影に用いる上記のシンチグラフィー造影剤が提供される。
【００１２】
また、上記シンチグラフィー造影剤の製造のための上記の化合物又はその塩の使用；シンチグラフィー造影法であって、上記の化合物を膜構成成分として含むリポソームをヒトを含む哺乳類動物に投与した後に該リポソームが発生する放射線を検出する工程を含む方法；血管疾患の病巣の造影方法であって、上記の化合物を膜構成成分として含むリポソームをヒトを含む哺乳類動物に投与した後に該リポソームが発生する放射線を検出する工程を含む方法が本発明により提供される。
【００１３】
【発明の実施の形態】
本明細書において「ステロイド残基」とはステロイド化合物（シクロペンタノヒドロフェナントレイン骨格を有する化合物）の残基を意味する。ステロイド残基は、一価の残基であってもよいが、二価以上の残基であってもよい。本明細書においてステロイド残基という場合には、置換又は無置換のステロイド残基のいずれであってもよい。また、ステロイド残基は任意の個数の二重結合を有していてもよい。ステロイド残基は一般に１個以上の不斉炭素を有するが、不斉炭素の配置はそれぞれ独立にＲ又はＳ配置のいずれか、あるいは両者の混合物であってもよい。
【００１４】
上記ステロイド残基を構成するステロイド化合物の例としては、コレステロール、コレスタノール、コール酸、デヒドロコール酸、アンドロステロン、ディジトキシゲニン、ディゴキシゲニン、リトコール酸、スティグマスタノール、テトラヒドロコルチソン、ブファリン、５α−アンドロスタン−３β、１７β−ジオール、デヒドロエピアンドロステロン、５−アンドロステン−３β、１７β−ジオール、プレグネノロン、５−コレステン−３β、２０α−ジオール、スチグマステロン、β−シトステロール、５−コレステン−３β−オル−７−オン、カンペステロール、２２−ヒドロキシコレステロール、１７α−アセトキシプレグネノロン、ヂオスゲニン、メチルアンドロステンジオール、５−アンドロステン−３β−オル−１７β−カルボン酸、１７α−ヒドロキシプレグネノロン、２１−アセトキシプレグレノロン、１６β−メチル−１６α、１７α−エポキシプレグネノロン、フコステロール、ソラソジン、５−プレグネン−６−メチル−３β、１７−ジオール−２０−オン、６−メチルプレグネノロン、２１−ヒドロキシプレグネノロン、５−プレグネン−３β、２０α−ジオール、１９−ヨードコレステロール、１６α−メチルプレグネノロン、５−アンドロステン−３β、１７β−ジオール−１７−ベンゾエート、５−アンドロステン−３β、１６α−ジオール−１７−オン、３β、１１β、１７α、２１−テトラヒドロプレグ−５−ネン−２０−オン、５−プレグネン−３β、１６α−ジオール−２０−オン、５−コレステン酸−３β−オルメチルエステル、デスモステロール、５−コレステン−３β−オル−２２−オン、プレグ−５−ネン−３β、１７α、２０α−トリオール、１９−ヒドロキシコレステロール、ソラニジン、２５−ヒドロキシコレステロール、７β−ヒドロキシコレステロール、１９−ヒドロキシプレグネノロン、１７α−ヒドロキシ−１６β−メチルプレグネノロン、１６，１７−エポキシ−２１−アセトキシプレグネノロン、５−プレグネン−６、１６α−ジメチル−３β−オル−２０−オン、５−コレステン酸−３β−オル、アンドロスト−５−ネン−３β、１６β、１７β−トリオール、５−コレステン−３β、２２−ジオール、プレグ−５−ネン−３β、１７α、２０β−トリオール、２１−ヒドロキシプレグネノロン−２１−サルフェートカリウム塩、５−プレグネン−３β−オル−２０−オン−１６α−カルボニトリル、１６α、１７α、エポキシプレグネノロン等を挙げることができるが、これらに限定されるものではない。ステロイド残基としては、環構造中に１以上の二重結合を含むステロイド残基か、コレスタナール基が好ましく、なかでもコレステロール基がより好ましい。
【００１５】
本明細書において、ある官能基について「置換又は無置換」又は「置換基を有していてもよい」という場合には、その官能基が１又は２以上の置換基を有する場合があることを示しているが、結合する置換基の個数、置換位置、及び種類は特に限定されない。ある官能基が２個以上の置換基を有する場合には、それらは同一でも異なっていてもよい。本明細書において、ある官能基が置換基を有する場合、置換基の例としては、ハロゲン原子、アルキル基（シクロアルキル基、ビシクロアルキル基を含む）、アルケニル基（シクロアルケニル基、ビシクロアルケニル基を含む）、アルキニル基、アリール基、ヘテロ環基、シアノ基、ヒドロキシル基、ニトロ基、カルボキシル基、アルコキシ基、アリールオキシ基、シリルオキシ基、ヘテロ環オキシ基、アシルオキシ基、カルバモイルオキシ基、アルコキシカルボニルオキシ基、アリールオキシカルボニルオキシ、アミノ基（アニリノ基を含む）、アシルアミノ基、アミノカルボニルアミノ基、アルコキシカルボニルアミノ基、アリールオキシカルボニルアミノ基、スルファモイルアミノ基、アルキル及びアリールスルホニルアミノ基、メルカプト基、アルキルチオ基、アリールチオ基、ヘテロ環チオ基、スルファモイル基、スルホ基、アルキル及びアリールスルフィニル基、アルキル及びアリールスルホニル基、アシル基、アリールオキシカルボニル基、アルコキシカルボニル基、カルバモイル基、アリール及びヘテロ環アゾ基、イミド基、ホスフィノ基、ホスフィニル基、ホスフィニルオキシ基、ホスフィニルアミノ基、シリル基が挙げられる。
【００１６】
ステロイド残基に置換可能な置換基の種類は特に限定されないが、例えば、炭素数１〜１５の脂肪族基（アルキル基、アルキニル基、アルケニル基）、アリール基、ヘテロ環基、アミノ基、アミド基、カルバモイル基、シアノ基、水酸基、アルコキシ基、アルコキシカルボニル基、カルボニル基、カルボキシル基等があげられるが、これらに限定されるものではなく、また、これら置換基はさらに置換基を有していてもよい。
【００１７】
トリヨードフェニル基おける３個のヨウ素原子の置換位置は特に規定されないが、「２，４，６位」、「３，４、５位」、又は「２，３，５位」が好ましく、より好ましくは、「２，４，６位」、「２，３，５位」であり、「２，４，６位」置換が最も好ましい。トリヨードフェニル基はさらに置換基を有していてもよい。該トリヨードフェニル基が置換基を有する場合、その好ましい置換基の例としては、アルキル基、シアノ基、ヒドロキシル基、アルコキシ基、アミノ基、アシルアミノ基、メルカプト基、アルキルチオ基、アシル基、アルコキシカルボニル基、カルバモイル基が挙げられ、なかでもヒドロキシル基、アルコキシ基、アミノ基が好ましい。また、無置換の場合も好ましい。
【００１８】
上記の一般式（Ｉ）で表される化合物において、「Ｓｔｅ」で表される基は上記ステロイド残基と同義であり、「Ｉ3Ａｒ1」で表される基及び「Ｉ3Ａｒ2」で表される基は、上記トリヨードフェニル基と同義である。
【００１９】
Ｌ1で表される三価の連結基は炭素原子数１〜３０個を含む。該連結基は飽和の基であってもよいが、不飽和結合を含んでいてもよい。また、ヘテロ原子（本明細書においてヘテロ原子という場合には、窒素原子、酸素原子、硫黄原子などの炭素原子以外の任意の原子を意味する）を１個又は２個以上含んでいてもよく、ヘテロ原子を含む官能基を部分構造として含んでいてもよい。連結基中に含まれる不飽和部分又はヘテロ原子を含む官能基としては、例えば、アルケニル基（シクロアルケニル、ビシクロアルケニルを含む）、アルキニル基、アリール基、ヘテロ環基、エステル基（カルボン酸エステル、炭酸エステル、スルホン酸エステル、スルフィン酸エステルを含む）、アミド基（カルボン酸アミド、ウレタン、スルホン酸アミド、スルフィン酸アミドを含む）、エーテル基、チオエーテル基、シリルオキシ基、ヘテロ環オキシ基、アミノ基（アニリノ基を含む）、イミド基、シリル基などがあげられる。上記の官能基はさらに置換基を有していてもよく、これらの官能基はＬ1中に複数個存在してもよい。複数個の存在する場合には、それらは同一でも異なっていてもよい。
【００２０】
Ｌ1で表される三価の連結基の部分構造として、好ましくはアルケニル基、アルキニル基、アリール基、ヘテロ環基、エステル基、アミド基、エーテル基、ウレタン基、又はアミノ基であり、さらに好ましくは、アルケニル基、エステル基、アミド基、又はエーテル基である。また、Ｌ1で表される三価の連結基が不飽和炭化水素である場合も好ましい。Ｌ1に含まれる炭素原子数は１〜２５が好ましく、１〜１５が最も好ましい。Ｌ1は置換基を有していてもよい。置換基としては、例えば、アルキル基、シアノ基、ヒドロキシル基、ニトロ基、カルボキシル基、アルコキシ基、アミノ基、アシルアミノ基、アシル基、カルバモイル基が好ましく、アルキル基が最も好ましい。また、Ｌ1が無置換の場合も好ましい。
【００２１】
上記の一般式（Ｉ）で表される化合物のより好ましい態様としては、Ｌ1が上記一般式（II）で表わされる場合が挙げられる。一般式（II）において、Ｌ2、Ｌ3、及びＬ4は、それぞれ独立に１〜２７個の炭素原子を含む二価の連結基を示す。Ｌ2、Ｌ3、及びＬ4は飽和又は不飽和のいずれであってもよく、ヘテロ原子を含む官能基を部分構造として含んでいてもよい。その例は、Ｌ1について説明したものと同様である。Ｌ2、Ｌ3、及びＬ4に含まれる総炭素原子数は１〜２７個であり、１〜２２個が好ましく、１〜１５個が最も好ましい。
【００２２】
本発明の化合物は１以上の不斉炭素を有しており、不斉炭素に基づく光学活性体又はジアステレオ異性体などの立体異性体が存在する。純粋な形態の任意の立体異性体、任意の立体異性体の混合物、ラセミ体などは、いずれも本発明の範囲に包含される。また、本発明の化合物はオレフィン性の二重結合を有する場合があるが、その配置はＥ又はＺのいずれであってもよく、両者の混合物として存在していてもよい。本発明の化合物は互変異性体として存在する場合もあるが、任意の互変異性体、またはそれらの混合物は本発明の範囲に包含される。さらに、本発明の化合物は置換基の種類によっては塩を形成する場合があり、遊離形態の化合物又は塩の形態の化合物が水和物又は溶媒和物を形成する場合もあるが、このような物質も本発明の範囲に包含される。
【００２３】
以下、本発明の化合物の好ましい例を示すが、本発明の化合物はこれらの例に限定されることはない。
【００２４】
【化５】
【００２５】
【化６】
【００２６】
【化７】
【００２７】
【化８】
【００２８】
【化９】
【００２９】
以下に本発明の化合物の一般的な合成法について説明するが、本発明の化合物の合成法はこれらに限定されるものではない。本発明の化合物において用いられるトリヨードフェニル基に関する合成原料としては、通常市販されているものを使用してもよく、あるいは用途に応じて適宜合成してもよい。市販品としては、例えば2,4,6-トリヨードフェノールや安息香酸誘導体（例えば、3-amino-2,4,6-triiodobenzoic acid, acetrizoic acid, iodipamide, diatrizoic acid, histodenz, 5-amino-2,4,6-triiodoisophthalic acid, 2,3,5-triiodobenzoic acid, tetraiodo-2-sulfobenzoic acid）、ヨードパン酸（iopanoic acid）、iophenoxic acidなどを用いることができる。合成により入手する場合には、例えばRichard C. Larock著、Comprehensive organic transformations（VCH） に記載の方法により、芳香環上にヨード原子を導入し、原料として用いることができる。
【００３０】
上記のトリヨードフェニル誘導体は、通常、部分構造として水酸基やアミノ基、カルボキシル基を含有するため、これらの官能基と二価以上のカルボン酸、アルコール、アミン、又はその複合体等を、エステル連結／アミド連結を介して縮合し、ビストリヨードフェニルの部分構造として用いることもできる。二価以上のカルボン酸、アルコール、又はアミンは、次の工程でさらに他の化合物と連結できるように、さらに保護または無保護の水酸基、アミノ基、カルボキシル基、又はカルボニル基等を有していることが好ましい。この場合の保護基としては、例えば、T. W. Green & P. G. M. Wuts著、Protecting groups in organic synthesis（John Wiley & sonc, inc.）に記載のものを用いることができる。二価カルボン酸としては、例えば4-oxo-heptanedioic acid, 4-benzyloxy-heptanedioic acid, 3-oxo-pentanedioic acid等を挙げることができ、二価以上のアルコールとしては、例えばdihydroxyacetone, 3-oxo-pentanediol, 1-benzyloxy-2,3-propanediol, 2-benzyloxy-1,3-propanediol等を挙げることができ、二価アミンとしては、例えば1,5-diamino-3-hydroxypentane, diaminoacetone等が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【００３１】
上記のエステル連結／アミド連結を介した縮合反応としては、例えばRichard C. Larock著、Comprehensive organic transformations（VCH）に記載の方法を用いることができる。得られたこれらのヨードベンゼン化合物は、保護基の脱保護／カルボニル基の還元等によって生じた官能基を用いて、同様の反応を行うことにより、さらに多くのトリヨードフェニル基を有する合成中間体を得ることが可能である。これらの中間体はステロイド残基を有する合成中間体と、例えば、Richard C. Larock著、Comprehensive organic transformations（VCH）に記載の方法でエステル連結、アミド連結等を介して結合することによって本発明の化合物を合成できる。
【００３２】
本発明の化合物はリポソームの膜構成成分として用いることができる。本発明の化合物を用いてリポソームを調製する場合、本発明の化合物の使用量は、膜構成成分の全質量に対して１０から９０質量％程度、好ましくは１０から８０質量％、さらに好ましくは２０から８０質量％である。本発明の化合物は膜構成成分として１種類を用いてもよいが、２種類以上を組み合わせて用いてもよい。
【００３３】
リポソームの他の膜構成成分としては、リポソームの製造に通常用いられている脂質化合物をいずれも用いることが可能である。例えば、Biochim. Biophys. Acta 150(4), 44 (1982)、Adv. in Lipid. Res. 16(1) 1 (1978)、"RESEARCH IN LIPOSOMES"（P.Machy, L.Leserman著、John Libbey EUROTEXT社）、「リポソーム」（野島、砂本、井上編、南江堂）等に記載されている。脂質化合物としてはリン脂質が好ましく、特に好ましいのはホスファチルジルコリン(PC)類である。ホスファチジルコリン類の好ましい例としては、eggPC、ジミリストリルPC（DMPC）、ジパルミトイルPC（DPPC）、ジステアロイルPC（DSPC）、ジオレイルPC（DOPC）等が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【００３４】
本発明の好ましい態様では、リポソームの膜構成成分として、ホスファチジルコリンとホスファチジルセリン(PS)を組み合わせて用いることができる。ホスファチジルセリンとしては、ホスファチジルコリンの好ましい例として挙げたリン脂質と同様の脂質部位を有する化合物が挙げられる。ホスファチジルコリンとホスファチジルセリンを組み合わせて用いる場合、PCとPSの好ましい使用モル比はPC：PS＝９０：１０から１０：９０の間であり、さらに好ましくは、３０：７０から７０：３０の間である。
【００３５】
本発明のリポソームの別の好ましい態様によると、膜構成成分として、ホスファチジルコリンとホスファチジルセリンを含み、さらにリン酸ジアルキルエステルを含むリポソームが挙げられる。リン酸ジアルキルエステルのジアルキルエステルを構成する２個のアルキル基は同一であることが好ましく、それぞれのアルキル基の炭素数は６以上であり、１０以上が好ましく、１２以上がさらに好ましい。好ましいリン酸ジアルキルエステルの例としては、ジラウリルフォスフェート、ジミリスチルフォスフェート、ジセチルフォスフェート等が挙げられるが、これに限定されることはない。この態様において、ホスファチジルコリン及びホスファチジルセリンの合計質量に対するリン酸ジアルキルエステルの好ましい使用量は１から５０質量％までであり、好ましくは１から３０質量％であり、さらに好ましくは１から２０質量％である。
【００３６】
ホスファチジルコリン、ホスファチジルセリン、リン酸ジアルキルエステル、及び本発明の化合物を膜構成成分として含むリポソームにおいて、上記成分の好ましい質量比はＰＣ：ＰＳ：リン酸ジアルキルエステル：本発明の化合物が５〜４０質量％：５〜４０質量％：１〜１０質量％：１５〜８０質量％の間で選択することができる。
【００３７】
本発明のリポソームの構成成分は上記４者に限定されず、他の成分を加えることができる。その例としては、コレステロール、コレステロールエステル、スフィンゴミエリン、FEBS Lett. 223, 42 (1987); Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 85, 6949 (1988)等に記載のモノシアルガングリオシドGM1誘導体、Chem. Lett., 2145 (1989); Biochim. Biophys. Acta, 1148, 77 (1992)等に記載のグルクロン酸誘導体、Biochim. Biophys. Acta, 1029, 91 (1990); FEBS Lett., 268, 235 (1990)等に記載のポリエチレングリコール誘導体が挙げられるが、これに限られるものではない。
【００３８】
本発明のリポソームは、当該分野で公知のいかなる方法でもっても作成できる。作成法の例としては、先に挙げたリポソームの総説成書類の他、Ann. Rev. Biophys. Bioeng., 9, 467 (1980) 、"Liopsomes"（M.J.Ostro編、MARCELL DEKKER, INC.）等に記載されている。具体例としては、超音波処理法、エタノール注入法、フレンチプレス法、エーテル注入法、コール酸法、カルシウム融合法、凍結融解法、逆相蒸発法等が挙げられるが、これに限られるものではない。本発明のリポソームのサイズは、上記の方法で作成できるサイズのいずれであっても構わないが、通常は平均が400 nm以下であり、200 nm以下が好ましい。リポソームの構造は特に限定されず、ユニラメラ又はマルチラメラなどのいずれの形態でもよい。また、リポソームの内部に適宜の薬物や他の造影剤の１種又は２種以上を配合することも可能である。
【００３９】
本発明のリポソームを造影剤として用いる場合には、好ましくは非経口的に投与することができ、より好ましくは静脈内投与することができる。例えば、注射剤や点滴剤などの形態の製剤を凍結乾燥形態の粉末状組成物として提供し、用時に水又は他の適当な媒体（例えば生理食塩水、ブドウ糖輸液、緩衝液など）に溶解ないし再懸濁して用いることができる。本発明のリポソームを造影剤として用いる場合、投与量はリポソームのヨード含有量が従来のヨード造影剤のヨード含有量と同程度になるように適宜決定することが可能である。
【００４０】
いかなる特定の理論に拘泥するわけではないが、動脈硬化、もしくはPTCA後の再狭窄等の血管疾患においては、血管の中膜を形成する血管平滑筋細胞が異常増殖をおこすと同時に内膜に遊走し、血流路を狭くすることが知られている。正常の血管平滑筋細胞が異常増殖を始めるトリガーはまだ完全に明らかにされていないが、マクロファージの内膜への遊走と泡沫化が重要な要因であることが知られており、その後に血管平滑細胞がフェノタイプ変換（収縮型から合成型）をおこすことが報告されている。
【００４１】
本発明のリポソームを用いると、泡沫化マクロファージの影響で異常増殖した血管平滑筋に対して疎水性ヨード化合物を選択的に取りこませることができる。その結果、公知技術であるサスペンジョン又はオイルエマルジョンを用いる場合と比べて、より多くのヨード化合物を血管平滑筋細胞に集積させることが可能である。この結果、本発明のリポソ-ムを用いると、病巣と非疾患部位の血管平滑筋細胞との間でコントラストの高いＸ線造影が可能である。従って、本発明の造影剤は、特に血管疾患の造影に好適に使用でき、例えば、動脈硬化巣やPTCA後の再狭窄等の造影を行うことができる。
【００４２】
また、例えばJ. Biol. Chem., 265, 5226 (1990)に記載されているように、リン脂質よりなるリポソーム、特にホスファチジルコリンとホスファチジルセリンから形成されるリポソームが、スカベンジャーレセプターを介してマクロファージに集積しやすいことが知られている。従って本発明のリポソームを使用することにより、本発明のヨード化合物をマクロファージが局在化している組織又は疾患部位に集積させることができる。本発明のリポソームを用いると、公知技術であるサスペンジョン又はオイルエマルジョンを用いる場合に比べて、より多くのヨード化合物をマクロファージに集積させることが可能である。
【００４３】
マクロファージの局在化が認められ、本発明の方法で好適に造影可能な組織としては、例えば、血管、肝臓、肺胞、リンパ節、リンパ管、腎臓上皮を挙げることができる。また、ある種の疾患においては、疾患部位にはマクロファージが集積していることが知られている。こうした疾患としては、腫瘍、動脈硬化、炎症、感染等を挙げることができる。従って、本発明のリポソームを用いることにより、これらの疾患部位を特定することができる。特に、アテローム性動脈硬化病変の初期過程において、スカベンジャーレセプターを介して変性LDLを大量に取り込んだ泡沫化マクロファージが集積していることが知られており（Am. J. Pathol., 103, 181(1981)、Annu. Rev. Biochem., 52, 223(1983)）、このマクロファージに本発明のリポソームを集積化させてＸ線造影をすることにより、他の手段では困難な動脈硬化初期病変の位置を特定することが可能である。
【００４４】
本発明のリポソームを用いた造影方法は特に限定されない。例えば、通常のＸ線造影剤を用いた造影方法と同様にしてＸ線を照射することにより造影を行うことができる。また、ヨードの放射線同位体を含む本発明の化合物を用いてリポソームを形成し、該リポソームをシンチグラフィー用造影剤として用いることにより、核医学的方法による造影を行うことも可能である。ヨードの放射性同位体は特に限定されないが、好ましい例としては122I、123I、125Iおよび131Iが挙げられ、特に好ましい例としては123Iおよび125Iを挙げることができる。放射性ラベル化合物の合成は、対応する非ラベル化合物を合成した後に、Appl.Radiat. Isot., 37(8), 907 (1986)等に記載されている既知の方法で実施することができる。疎水性化合物がトリヨードベンゼン誘導体である場合、同一ベンゼン環上の３個のヨード原子のうち少なくとも１個が放射線同位体化されていることが好ましい。好ましくは２個以上が放射線同位体化されていることであり、最も好ましいのは３個が同一の放射線同位体でラベル化されていることである。
【００４５】
【実施例】
以下、実施例により本発明をさらに具体的に説明するが、本発明の範囲は下記の実施例に限定されることはない。なお、下記の実施例中の化合物番号は上記に示した化合物例の番号に対応している。また、実施例中の化合物の構造はＮＭＲスペクトルにより確認した。
【００４６】
化合物Ｉ−１
コレステロール１５．１ｇと６．１２ｇのピリジンを６０ｍｌのクロロホルムに加え、さらに５．０ｍｌの４−ブロモ酪酸クロリドを滴下した。０℃で２時間、さらに室温で２０時間攪拌した後、クロロホルムと１規定塩酸水溶液を加えて抽出し、得られた有機層を硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製し、中間体Ｉ−１−Aを１７．４ｇ（収率６５％）得た。
【００４７】
上記中間体Ｉ−１−A ８．００ｇとビス（２−ヒドロキシエチル）アミン４．０８ｇを３０ｍｌのジメチルホルムアミドに溶解し、さらに３．１７ｇの炭酸カリウムと触媒量のよう化ナトリウムを加えた。６５℃で６時間攪拌した後、クロロホルムと水を加えて２度抽出し、得られた有機層を水で洗浄した。さらに、硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製した。中間体Ｉ−１−Bを５．６０ｇ（収率６７％）得た。
【００４８】
上記中間体Ｉ−１−B ０．４１ｇとα−エチル−３−アミノ−２，４，６−トリヨードハイドロケイヒ酸０．８２ｇを２０ｍｌのジクロロメタンに加え、さらに２０ｍｇのジメチルアミノピリジンと０．３１ｇの１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩を加えた。室温で２日間攪拌した後、溶媒を留去し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製し、無色アモルファス状結晶０．７４ｇを得た（収率６１％）。
1Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ；８．０９（２Ｈ，ｓ），５．３６（１Ｈ，ｂｄ），４．８６（４Ｈ，ｓ），４．５３−４．６８（１Ｈ，ｍ），４．００−４．１７（４Ｈ，ｍ），３．３８（２Ｈ，ｄｄ），３．２６（２Ｈ，ｄｄ），２．７０−２．８１（２Ｈ，ｍ），２．６２（４Ｈ，ｂｓ），２．４７（２Ｈ，ｔ），２．２５−２．３５（４Ｈ，ｍ），０．６０−２．１０（ｍ）
【００４９】
化合物Ｉ−２
上記中間体Ｉ−１−Bと３−アミノ−２，４，６−トリヨードハイドロケイヒ酸（合成：J. Med. Chem., 1995, 38, 639記載）を用い、上記Ｉ−１と同様の方法で合成した。
1Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ；８．０８（２Ｈ，ｓ），５．４７（１Ｈ，ｂｄ），４．８４（４Ｈ，ｓ），４．５５−４．６８（１Ｈ，ｍ），４．２２（４Ｈ，ｔ），３．３６−３．４７（４Ｈ，ｍ），２．８３（４Ｈ，ｔ），２．６１（２Ｈ，ｔ），２．５０−２．６１（４Ｈ，ｍ），２．３９（２Ｈ，ｔ），２．３０（２Ｈ，ｄ），０．６０−２．１０（ｍ）
【００５０】
化合物Ｉ−４
５−オキソアゼライン酸１．０１ｇと２，４，６−トリヨードフェノール４．８８ｇを５０ｍｌのジクロロメタンに加え、さらに０．１６ｇのジメチルアミノピリジンと２．４２ｇの１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩を加えた。室温で２日間攪拌した後、浮遊物を濾別し、溶媒を留去した。得られた残渣に、テトラヒドロフラン２６ｍｌ、ベンゼン７ｍｌ、水２ｍｌを加え０℃に冷やして、水素化ホウ素ナトリウム０．４３ｇを加えた。０℃で攪拌した後、クロロホルムと飽和塩化アンモニウム水溶液を加えて２度抽出し、得られた有機層を硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製し、中間体Ｉ−４−A を０．８９ｇ（収率１６％）得た。
【００５１】
上記中間体Ｉ−４−A ０．５４ｇとコハク酸水素コレステロール０．２４ｇを２０ｍｌのジクロロメタンに加え、さらに５ｍｇのジメチルアミノピリジンと０．１５ｇの１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩を加えた。室温で攪拌した後、溶媒を留去し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製し、無色アモルファス状結晶０．１２ｇ（収率１５％）を得た。
1Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ；８．０７（４Ｈ，ｓ），５．３６（１Ｈ，ｄ），４．９８−５．０８（１Ｈ，ｍ），４．５５−４．７０（１Ｈ，ｍ），２．５７−２．７５（８Ｈ，ｍ），２．３１（２Ｈ，ｄ），０．６０−２．１０（ｍ）
【００５２】
化合物ＩＩ−１
α−エチル−３−アミノ−２，４，６−トリヨードハイドロケイヒ酸５０．７ｇとジヒドロキシアセトン４．０１ｇを３００ｍｌのジクロロメタンに加え、さらに１．０８ｇのジメチルアミノピリジンと２０．７ｇの１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩を加えた。室温で２日間攪拌した後、ジクロロメタンと１規定塩酸水溶液を加えて２度抽出し、得られた有機層を水洗した後、硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を留去して、中間体ＩＩ−１−A ５１．３ｇ（収率９６％）を得た。
【００５３】
上記中間体ＩＩ−１−A ５０．１ｇにテトラヒドロフラン２１０ｍｌ、ベンゼン５８ｍｌ、水１７ｍｌを加え０℃に冷やして、水素化ホウ素ナトリウム２．４７ｇを加えた。０℃で３時間攪拌した後に飽和塩化アンモニウム水溶液を加えて反応を停止した。さらにクロロホルムを加えて２度抽出し、得られた有機層を飽和食塩水で洗浄した後、硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製し、中間体ＩＩ−１−Ｂ を２７．３ｇ（収率５４％）得た。
【００５４】
上記中間体ＩＩ−１−Ｂ １．００ｇとクロロ蟻酸コレステロール０．７５ｇを１０ｍｌのジクロロメタンに加え、さらに２７ｍｇのジメチルアミノピリジンと０．１７ｍｌのピリジンを加えた。室温で攪拌した後、溶媒を留去し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製した。無色結晶を０．７４ｇ（収率５５％）得た。
1Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ；８．０６（２Ｈ，ｓ），５．３９（１Ｈ，ｂｓ），５．００−５．０９（１Ｈ，ｍ），４．８４（４Ｈ，ｓ），４．４０−４．５５（１Ｈ，ｍ），４．２２−４．３８（２Ｈ，ｍ），４．０５−４．２０（２Ｈ，ｍ），３．３９（２Ｈ，ｄｄ），３．２８（２Ｈ，ｄｄ），２．７１−２．８４（２Ｈ，ｍ），２．３９（２Ｈ，ｂｓ），０．６０−２．１０（ｍ）
【００５５】
化合物ＩＩ−２
（Ｓ）−（＋）−２、２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−メタノール２．８１ｇとフマル酸水素コレステロール１０．２ｇを３０ｍｌのジクロロメタンに加え、さらに０．２６ｇのジメチルアミノピリジンと４．８５ｇの１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩を加えた。室温で２日間攪拌した後、溶媒を留去して、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製した。中間体ＩＩ−２−A ７．７６ｇ（収率６２％）を得た。
上記中間体ＩＩ−２−Aを用い、Arch. Pharm. (Weinheim), 1995, 328, 271記載の方法に準拠してアセトニド基の脱保護を行い、中間体ＩＩ−２−Ｂを得た。
【００５６】
上記中間体ＩＩ−２−Ｂ ０．４１ｇとα−エチル−３−アミノ−２，４，６−トリヨードハイドロケイヒ酸０．８３ｇを２０ｍｌのジクロロメタンに加え、さらに１９ｍｇのジメチルアミノピリジンと０．３４ｇの１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩を加えた。室温で２日間攪拌した後、溶媒を留去し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製し、無色アモルファス状結晶を０．７３ｇ（収率６０％）得た。
1Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ；８．１０（２Ｈ，ｓ），５．３９（１Ｈ，ｄ），５．２１−５．３１（１Ｈ，ｍ），４．８８（４Ｈ，ｍ），４．５５−４．７０（１Ｈ，ｍ），４．０２−４．４２（４Ｈ，ｍ），３．２５−３．４５（４Ｈ，ｍ），２．７２−２．８８（２Ｈ，ｍ），２．６４（４Ｈ，ｂｓ），２．３４（２Ｈ，ｄ），０．６０−２．１０（ｍ）
【００５７】
化合物ＩＩ−３
３−アミノ−２，４，６−トリヨードハイドロケイヒ酸を用いて、化合物ＩＩ−２と同様の方法で合成した。
1Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ；８．０６（２Ｈ，ｓ），５．３１−５．４１（２Ｈ，ｍ），４．８１（４Ｈ，ｓ），４．５２−４．６９（１Ｈ，ｍ），４．４５（１Ｈ，ｄｄ），４．４１（１Ｈ，ｄｄ），４．２８（１Ｈ，ｄｄ），４．２３（１Ｈ，ｄｄ），３．３５−３．４３（４Ｈ，ｍ），２．６０−２．７０（２４Ｈ，ｍ），２．５１−２．６０（４Ｈ，ｍ），２．３０（２Ｈ，ｄ），０．６０−２．１０（ｍ）
【００５８】
化合物ＩＩ−４
（Ｒ）−（−）−２、２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−メタノールを用いて、化合物ＩＩ−２と同様の方法で合成した。
1Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ；８．１０（２Ｈ，ｓ），５．３９（１Ｈ，ｄ），５．２１−５．３１（１Ｈ，ｍ），４．８８（４Ｈ，ｍ），４．５５−４．７０（１Ｈ，ｍ），４．０２−４．４２（４Ｈ，ｍ），３．２５−３．４５（４Ｈ，ｍ），２．７２−２．８８（２Ｈ，ｍ），２．６４（４Ｈ，ｂｓ），２．３４（２Ｈ，ｄ），０．６０−２．１０（ｍ）
【００５９】
化合物ＩＩ−５
３−アミノ−２，４，６−トリヨードハイドロケイヒ酸を用いて、化合物ＩＩ−４と同様の方法で合成した。
1Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ；８．０６（２Ｈ，ｓ），５．３１−５．４１（２Ｈ，ｍ），４．８１（４Ｈ，ｓ），４．５２−４．６９（１Ｈ，ｍ），４．４５（１Ｈ，ｄｄ），４．４１（１Ｈ，ｄｄ），４．２８（１Ｈ，ｄｄ），４．２３（１Ｈ，ｄｄ），３．３５−３．４３（４Ｈ，ｍ），２．６０−２．７０（２４Ｈ，ｍ），２．５１−２．６０（４Ｈ，ｍ），２．３０（２Ｈ，ｄ），０．６０−２．１０（ｍ）
【００６０】
化合物ＩＩ−６
５−（３−アミノ−２，４，６−トリヨードフェニル）ペンタン酸（J. Med. Chem., 1995, 38, 639記載）を用い、上記中間体ＩＩ−１−Ｂと同様の方法で中間体ＩＩ−６−Ｂを合成した。
上記中間体ＩＩ−６−Ｂとフマル酸水素コレステロールを用い、化合物Ｉ−４と同様の方法で合成した。
1Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ；８．０４（２Ｈ，ｓ），５．２７−５．３６（２Ｈ，ｍ），４．７９（４Ｈ，ｂｓ），４．５５−４．７０（１Ｈ，ｍ），４．３２（２Ｈ，ｄｄ），４．１９（２Ｈ，ｄｄ），２．９８−３．０８（４Ｈ，ｍ），２．５５−２．６５（４Ｈ，ｍ），２．４３（４Ｈ，ｔ），２．３０（２Ｈ，ｄ），０．６０−２．１０（ｍ）
【００６１】
化合物ＩＩ−７
７−（３−アミノ−２，４，６−トリヨードフェニル）ヘプタン酸（J. Med. Chem., 1995, 38, 639記載）を用い、上記ＩＩ−６と同様の方法で合成した。1Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ；８．０２（２Ｈ，ｓ），５．２５−５．４１（２Ｈ，ｍ），４．８０（４Ｈ，ｂｓ），４．５５−４．７０（１Ｈ，ｍ），４．３２（２Ｈ，ｄｄ），４．１８（２Ｈ，ｄｄ），２．９６−３．１０（４Ｈ，ｍ），２．５８−２．７０（４Ｈ，ｍ），２．３８−２．４７（６Ｈ，ｍ），０．６０−２．１０（ｍ）
【００６２】
化合物ＩＩ−８
３−アミノ−２，４，６−トリヨードハイドロケイヒ酸を用い、上記ＩＩ−６と同様の方法で合成した。
1Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ；８．０５（２Ｈ，ｓ），５．３０−５．４０（２Ｈ，ｍ），４．８２（４Ｈ，ｂｓ），４．５２−４．６７（１Ｈ，ｍ），４．４０（２Ｈ，ｄｄ），４．２８（２Ｈ，ｄｄ），３．３３−３．４２（４Ｈ，ｍ），２．６０−２．７０（４Ｈ，ｍ），２．５０−２．６０（４Ｈ，ｍ），２．２９（２Ｈ，ｄ），０．６０−２．１０（ｍ）
【００６３】
化合物ＩＩ−９
４−（２−グリセリル）酪酸（３−オキソ−４−コレステ−１７β−リル）エステル[Arch. Pharm. (Weinheim), 1995, 328, 271記載の方法に準拠して合成]とα−エチル−３−アミノ−２，４，６−トリヨードハイドロケイヒ酸を用いて、上記ＩＩ−２と同様の方法で合成した。
1Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ；８．１０（２Ｈ，ｓ），５．３９（１Ｈ，ｄ），４．８８（４Ｈ，ｂｓ），４．５５−４．７０（１Ｈ，ｍ），３．９５−４．２８（４Ｈ，ｍ），３．２４−３．６０（７Ｈ，ｍ），２．７５−２．８８（２Ｈ，ｍ），２．２９−２．４１（４Ｈ，ｍ），０．６０−２．１０（ｍ）
【００６４】
化合物ＩＩ−１０
３−アミノ−２，４，６−トリヨードハイドロケイヒ酸を用いて、上記ＩＩ−９と同様の方法で合成した。
1Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ；８．０７（２Ｈ，ｓ），５．３７（１Ｈ，ｄ），４．３５（４Ｈ，ｂｓ），４．５３−４．６９（１Ｈ，ｍ），４．３０（２Ｈ，ｄｄ），４．２２（２Ｈ，ｄｄ），３．８０（１Ｈ，ｑｕｉｎ），３．６７（２Ｈ，ｔ），３．３８−３．４６（４Ｈ，ｍ），２．５４−２．６４（４Ｈ，ｍ），２．４３（２Ｈ，ｔ），２．２９（２Ｈ，ｄ），０．６０−２．１０（ｍ）
【００６５】
化合物ＩＩ−１１
上記中間体ＩＩ−１−Ｂとフマル酸水素コレステロール（J. Am. Chem. Soc., 1996, 118, 5351記載）を用い、上記Ｉ−４と同様の方法で合成した。
1Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ；８．１０（２Ｈ，ｓ），６．９０（１Ｈ，ｄ），６．８２（１Ｈ，ｄ），５．４２（１Ｈ，ｄ），５．２７−５．３７（１Ｈ，ｍ），４，８９（４Ｈ，ｂｓ），４．６９−４．８２（１Ｈ，ｍ），４．１０−４．４２（４Ｈ，ｍ），３．４０（２Ｈ，ｄｄ），３．２９（２Ｈ，ｄｄ），２．７４−２．９０（２Ｈ，ｍ），２．３９（２Ｈ，ｄ），０．６０−２．１０（ｍ）
【００６６】
化合物ＩＩ−１２
上記中間体ＩＩ−１−Ｂとコハク酸水素コレステロールを用い、上記Ｉ−４と同様の方法で合成した。
1Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ；８．１０（２Ｈ，ｓ），５．３８（１Ｈ，ｄ），５．２２（１Ｈ，ｑｕｉｎ），４．８７（４Ｈ，ｂｓ），４．５５−４．７０（１Ｈ，ｍ），４．２６−４．３９（２Ｈ，ｍ），４．０８−４．２１（２Ｈ，ｍ），３．４０（２Ｈ，ｄｄ），３．３０（２Ｈ，ｄｄ），２．７４−２．８８（２Ｈ，ｍ），２．５３（４Ｈ，ｓ），２．３３（２Ｈ，ｄ），０．６０−２．１０（ｍ）
【００６７】
試験例：血管平滑筋細胞におけるヨード原子の取り込み量
下記に示した割合でジ・パルミトイル ＰＣ（フナコシ社製、No.1201-41-0225）、ジ・パルミトイル ＰＳ（フナコシ社製、No.1201-42-0237）をJ. Med. Chem., 25(12), 1500 (1982)記載の方法で、既存化合物であるCholesterol Iopanoate（以下、C.I.と記載）又は本発明の化合物とそれぞれナス型フラスコ内でクロロホルムに溶解して均一溶液とした後、溶媒を減圧で留去してフラスコ底面に薄膜を形成した。この薄膜を真空で乾燥後、0.9%生理食塩水（光製薬社製、No.512）を適当量加え、超音波照射（Branson社製、No.3542プローブ型発振器、0.1 mW）を氷冷下５分実施することにより、均一なリポソーム分散液を得た。得られた分散液の粒径をWBCアナライザー（日本光電社製、A-1042）で測定した結果、粒子径は40から65 nmであった。この方法により調製した下記リポソーム製剤を特願2001-018573号明細書に記載の血管平滑筋細胞とマクロファージとの混合培養系に添加し、37℃で5%CO2下に24時間培養した後、血管平滑筋細胞に取り込まれた疎水性ヨード造影剤を定量しヨード原子の量に変換した。結果を下記の表１に示す。本発明の化合物（ＩＩ−８、ＩＩ−１２）は、既存化合物であるCholesterol Iopanoateに比べて効率よくヨード原子を血管平滑筋細胞内に取り込ませることができた。
【００６８】
【表１】
【００６９】
試験例２：ラット動脈硬化巣のＸ線撮影
Invest. radiol. 18, 275 (1985)の方法に従い、ラット大動脈に動脈硬化巣を形成させた。動脈硬化巣を形成したラットに上記の試験例１で調製した化合物ＩＩ−１２を含むリポソームを化合物ＩＩ−１２に換算したＭＴＤ量である200 mg/kgを頚静脈より慎重に投与した。投与10分後、Ｘ線撮影により明瞭な動脈硬化巣の造影写真が得られた。その結果を図１から図３に示す。
【００７０】
【発明の効果】
本発明の化合物は、Ｘ線造影剤及びシンチグラフィー造影剤のためのリポソームの構成脂質として優れた性質を有しており、この化合物を含むリポソームを用いてＸ線造影することにより血管疾患の病巣を選択的に造影できる。
【図面の簡単な説明】
【図１】 本発明のリポソームを投与する直前のラットをＸ線撮影した写真である。
【図２】 本発明のリポソームを投与した直後のラットをＸ線撮影した写真である。
【図３】 本発明のリポソームの投与10分後のラットの動脈硬化巣をＸ線撮影により造影した写真である。
【発明の属する技術分野】
本発明は、ステロイド残基と２ないし６個のトリヨードフェニル基とを含む化合物に関する。この化合物はリポソームの構成脂質として利用することができ、このリポソームはＸ線造影剤およびシンチグラフィー造影剤として用いることができる。
【０００２】
【従来の技術】
ヨード化合物を用いたＸ線造影、例えばＸ線血管造影の分野では、水溶性のヨード造影剤を投与することにより血液の流れを造影し、その流れが滞っている箇所をみつける技術がある。しかしこの方法は、ヨード造影剤は血流中にあって血管内部の血流の変化を検出する方法であり、ヨード造影剤が病巣細胞にある場合に比べて正常組織との区別がつけにくいために、通常狭窄が５０％以上進んだ病巣しか検出することができず、虚血性疾患の発作が発症する前に病巣を検出することは困難である。
【０００３】
これとは別に、疎水性ヨード造影剤若しくは親水性造影剤を製剤化し、目的とする疾患部位に選択的に集積させる試みが報告されている(国際公開WO95/19186、同WO95/21631、同WO89/00812、英国特許第867650号、国際公開WO96/00089、同WO94/19025、同WO96/40615、同WO95/2295、同 WO98/41239、同WO98/23297、同WO99/02193、同 WO97/06132、米国特許第4192859号明細書、同4567034号明細書、同4925649号明細書、 Pharm. Res., 6(12), 1011 (1989), Pharm. Res., 16(3), 420 (1999), J. Pharm. Sci., 72(8), 898 (1983), Invest. Radiol., 18(3), 275 (1983))。例えばPharm. Res., 6(12), 1011 (1989)には、疎水性化合物であるCholesteryl Iopanoateの油滴分散液を注射することにより、該ヨード化合物が実験動物の動脈硬化部位に集積することが開示されている。また、Pharm. Res., 16(3), 420 (1999)には、Cholesteryl IopanoateをアセチルＬＤＬに取り込ませて投与することによって該ヨード化合物が実験動物の動脈硬化部位に集積することが開示されている。
【０００４】
また、J. Pharm. Sci. 72(8), 898 (1983)には、Cholesteryl Iopanoateの油滴分散液を注射することによる肝臓や脾臓のＸ線造影の例が開示されている。米国特許第4567034号明細書には、diatrizoic acid のエステル体をリポソームに封入し、肝臓や脾臓の選択的造影を行う方法が報告されている。国際公開WO96/28414、同WO96/00089には血管プールやリンパ系をイメージ化するための造影剤が開示されている。しかしながら、これらの造影剤及び造影方法は、血管疾患を選択的に造影する目的のためには効率及び選択性ともに十分ではなく、Ｘ線照射により血管疾患を画像化した例も報告されていない。
【０００５】
国際公開WO01/93918においては、疎水性、かつ加水分解抵抗性の放射性ヨード造影剤をマイクロエマルジョン製剤化、もしくはアセチルＬＤＬに取り込ませて実験動物に投与して、動脈硬化巣部位を放射性造影する例が開示されている。また、リポソーム製剤に関する記載もあるが、その構成組成および造影に関する例はなんら開示されていない。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題及び課題を解決するための手段】
本発明の課題は、病巣を選択的に造影することができるリポソームを用いたＸ線造影剤に適した化合物を提供することにある。本発明者らは上記の課題を解決すべく研究を行った結果、ステロイド残基と２個以上のトリヨードフェニル基とを有する化合物が、Ｘ線造影剤のためのリポソームの構成脂質として優れた性質を有していることを見出した。さらに、この化合物を含み、ホスファチジルコリン及びホスファチジルセリンを膜構成成分として含むリポソームがＸ線造影による血管疾患の病巣の選択的造影に適していることを見出した。本発明は上記の知見を基にして完成されたものである。
【０００７】
すなわち、本発明は、ステロイド残基と２ないし６個のトリヨードフェニル基とを含む化合物を提供するものである。この発明の好ましい態様によれば、２個のトリヨードフェニル基を含む上記化合物が提供される。さらに好ましい態様によれば、下記一般式（Ｉ）：
【化３】
【化４】
【０００８】
別の観点からは、上記の化合物を膜構成成分として含むリポソームが本発明により提供される。この発明の好ましい態様によれば、ホスファチジルコリン及びホスファチジルセリンからなる群から選ばれる脂質を膜構成成分として含む上記リポソームが提供される。また、リポソームの製造のための上記化合物の使用も本発明により提供される。
【０００９】
また、本発明により、上記のリポソームを含むＸ線造影剤が提供される。この発明の好ましい態様によれば、血管疾患の造影に用いる上記のＸ線造影剤；泡沫化マクロファージの影響で異常増殖した血管平滑筋細胞の造影に用いる上記のＸ線造影剤；マクロファージが局在化する組織又は疾患部位の造影に用いる上記のＸ線造影剤；マクロファージが局在化する組織が肝臓、脾臓、肺胞、リンパ節、リンパ管、及び腎臓上皮からなる群から選ばれる上記のＸ線造影剤；及びマクロファージが局在化する疾患部位が腫瘍、炎症部位、及び感染部位からなる群から選ばれる上記のＸ線造影剤が提供される。
【００１０】
また、上記Ｘ線造影剤の製造のための上記の化合物又はその塩の使用；Ｘ線造影法であって、上記の化合物を膜構成成分として含むリポソームをヒトを含む哺乳類動物に投与した後にＸ線を照射する工程を含む方法；血管疾患の病巣の造影方法であって、上記の化合物を膜構成成分として含むリポソームをヒトを含む哺乳類動物に投与した後にＸ線を照射する工程を含む方法が本発明により提供される。
【００１１】
さらに、少なくとも１つのヨード原子が放射性同位体である上記の化合物又はその塩を膜構成成分として含むリポソーム、及び該リポソームを含むシンチグラフィー造影剤が本発明により提供される。この発明の好ましい態様によれば、泡沫化マクロファージの影響で異常増殖した血管平滑筋細胞の造影に用いる上記のシンチグラフィー造影剤；マクロファージが局在化する組織又は疾患部位の造影に用いる上記のシンチグラフィー造影剤；造影対象の組織が血管、肝臓、脾臓、肺胞、リンパ節、リンパ管、及び腎臓上皮からなる群から選ばれる上記のシンチグラフィー造影剤；腫瘍、動脈硬化巣、炎症部位、及び感染部位からなる群から選ばれる疾患部位の造影に用いる上記のシンチグラフィー造影剤が提供される。
【００１２】
また、上記シンチグラフィー造影剤の製造のための上記の化合物又はその塩の使用；シンチグラフィー造影法であって、上記の化合物を膜構成成分として含むリポソームをヒトを含む哺乳類動物に投与した後に該リポソームが発生する放射線を検出する工程を含む方法；血管疾患の病巣の造影方法であって、上記の化合物を膜構成成分として含むリポソームをヒトを含む哺乳類動物に投与した後に該リポソームが発生する放射線を検出する工程を含む方法が本発明により提供される。
【００１３】
【発明の実施の形態】
本明細書において「ステロイド残基」とはステロイド化合物（シクロペンタノヒドロフェナントレイン骨格を有する化合物）の残基を意味する。ステロイド残基は、一価の残基であってもよいが、二価以上の残基であってもよい。本明細書においてステロイド残基という場合には、置換又は無置換のステロイド残基のいずれであってもよい。また、ステロイド残基は任意の個数の二重結合を有していてもよい。ステロイド残基は一般に１個以上の不斉炭素を有するが、不斉炭素の配置はそれぞれ独立にＲ又はＳ配置のいずれか、あるいは両者の混合物であってもよい。
【００１４】
上記ステロイド残基を構成するステロイド化合物の例としては、コレステロール、コレスタノール、コール酸、デヒドロコール酸、アンドロステロン、ディジトキシゲニン、ディゴキシゲニン、リトコール酸、スティグマスタノール、テトラヒドロコルチソン、ブファリン、５α−アンドロスタン−３β、１７β−ジオール、デヒドロエピアンドロステロン、５−アンドロステン−３β、１７β−ジオール、プレグネノロン、５−コレステン−３β、２０α−ジオール、スチグマステロン、β−シトステロール、５−コレステン−３β−オル−７−オン、カンペステロール、２２−ヒドロキシコレステロール、１７α−アセトキシプレグネノロン、ヂオスゲニン、メチルアンドロステンジオール、５−アンドロステン−３β−オル−１７β−カルボン酸、１７α−ヒドロキシプレグネノロン、２１−アセトキシプレグレノロン、１６β−メチル−１６α、１７α−エポキシプレグネノロン、フコステロール、ソラソジン、５−プレグネン−６−メチル−３β、１７−ジオール−２０−オン、６−メチルプレグネノロン、２１−ヒドロキシプレグネノロン、５−プレグネン−３β、２０α−ジオール、１９−ヨードコレステロール、１６α−メチルプレグネノロン、５−アンドロステン−３β、１７β−ジオール−１７−ベンゾエート、５−アンドロステン−３β、１６α−ジオール−１７−オン、３β、１１β、１７α、２１−テトラヒドロプレグ−５−ネン−２０−オン、５−プレグネン−３β、１６α−ジオール−２０−オン、５−コレステン酸−３β−オルメチルエステル、デスモステロール、５−コレステン−３β−オル−２２−オン、プレグ−５−ネン−３β、１７α、２０α−トリオール、１９−ヒドロキシコレステロール、ソラニジン、２５−ヒドロキシコレステロール、７β−ヒドロキシコレステロール、１９−ヒドロキシプレグネノロン、１７α−ヒドロキシ−１６β−メチルプレグネノロン、１６，１７−エポキシ−２１−アセトキシプレグネノロン、５−プレグネン−６、１６α−ジメチル−３β−オル−２０−オン、５−コレステン酸−３β−オル、アンドロスト−５−ネン−３β、１６β、１７β−トリオール、５−コレステン−３β、２２−ジオール、プレグ−５−ネン−３β、１７α、２０β−トリオール、２１−ヒドロキシプレグネノロン−２１−サルフェートカリウム塩、５−プレグネン−３β−オル−２０−オン−１６α−カルボニトリル、１６α、１７α、エポキシプレグネノロン等を挙げることができるが、これらに限定されるものではない。ステロイド残基としては、環構造中に１以上の二重結合を含むステロイド残基か、コレスタナール基が好ましく、なかでもコレステロール基がより好ましい。
【００１５】
本明細書において、ある官能基について「置換又は無置換」又は「置換基を有していてもよい」という場合には、その官能基が１又は２以上の置換基を有する場合があることを示しているが、結合する置換基の個数、置換位置、及び種類は特に限定されない。ある官能基が２個以上の置換基を有する場合には、それらは同一でも異なっていてもよい。本明細書において、ある官能基が置換基を有する場合、置換基の例としては、ハロゲン原子、アルキル基（シクロアルキル基、ビシクロアルキル基を含む）、アルケニル基（シクロアルケニル基、ビシクロアルケニル基を含む）、アルキニル基、アリール基、ヘテロ環基、シアノ基、ヒドロキシル基、ニトロ基、カルボキシル基、アルコキシ基、アリールオキシ基、シリルオキシ基、ヘテロ環オキシ基、アシルオキシ基、カルバモイルオキシ基、アルコキシカルボニルオキシ基、アリールオキシカルボニルオキシ、アミノ基（アニリノ基を含む）、アシルアミノ基、アミノカルボニルアミノ基、アルコキシカルボニルアミノ基、アリールオキシカルボニルアミノ基、スルファモイルアミノ基、アルキル及びアリールスルホニルアミノ基、メルカプト基、アルキルチオ基、アリールチオ基、ヘテロ環チオ基、スルファモイル基、スルホ基、アルキル及びアリールスルフィニル基、アルキル及びアリールスルホニル基、アシル基、アリールオキシカルボニル基、アルコキシカルボニル基、カルバモイル基、アリール及びヘテロ環アゾ基、イミド基、ホスフィノ基、ホスフィニル基、ホスフィニルオキシ基、ホスフィニルアミノ基、シリル基が挙げられる。
【００１６】
ステロイド残基に置換可能な置換基の種類は特に限定されないが、例えば、炭素数１〜１５の脂肪族基（アルキル基、アルキニル基、アルケニル基）、アリール基、ヘテロ環基、アミノ基、アミド基、カルバモイル基、シアノ基、水酸基、アルコキシ基、アルコキシカルボニル基、カルボニル基、カルボキシル基等があげられるが、これらに限定されるものではなく、また、これら置換基はさらに置換基を有していてもよい。
【００１７】
トリヨードフェニル基おける３個のヨウ素原子の置換位置は特に規定されないが、「２，４，６位」、「３，４、５位」、又は「２，３，５位」が好ましく、より好ましくは、「２，４，６位」、「２，３，５位」であり、「２，４，６位」置換が最も好ましい。トリヨードフェニル基はさらに置換基を有していてもよい。該トリヨードフェニル基が置換基を有する場合、その好ましい置換基の例としては、アルキル基、シアノ基、ヒドロキシル基、アルコキシ基、アミノ基、アシルアミノ基、メルカプト基、アルキルチオ基、アシル基、アルコキシカルボニル基、カルバモイル基が挙げられ、なかでもヒドロキシル基、アルコキシ基、アミノ基が好ましい。また、無置換の場合も好ましい。
【００１８】
上記の一般式（Ｉ）で表される化合物において、「Ｓｔｅ」で表される基は上記ステロイド残基と同義であり、「Ｉ3Ａｒ1」で表される基及び「Ｉ3Ａｒ2」で表される基は、上記トリヨードフェニル基と同義である。
【００１９】
Ｌ1で表される三価の連結基は炭素原子数１〜３０個を含む。該連結基は飽和の基であってもよいが、不飽和結合を含んでいてもよい。また、ヘテロ原子（本明細書においてヘテロ原子という場合には、窒素原子、酸素原子、硫黄原子などの炭素原子以外の任意の原子を意味する）を１個又は２個以上含んでいてもよく、ヘテロ原子を含む官能基を部分構造として含んでいてもよい。連結基中に含まれる不飽和部分又はヘテロ原子を含む官能基としては、例えば、アルケニル基（シクロアルケニル、ビシクロアルケニルを含む）、アルキニル基、アリール基、ヘテロ環基、エステル基（カルボン酸エステル、炭酸エステル、スルホン酸エステル、スルフィン酸エステルを含む）、アミド基（カルボン酸アミド、ウレタン、スルホン酸アミド、スルフィン酸アミドを含む）、エーテル基、チオエーテル基、シリルオキシ基、ヘテロ環オキシ基、アミノ基（アニリノ基を含む）、イミド基、シリル基などがあげられる。上記の官能基はさらに置換基を有していてもよく、これらの官能基はＬ1中に複数個存在してもよい。複数個の存在する場合には、それらは同一でも異なっていてもよい。
【００２０】
Ｌ1で表される三価の連結基の部分構造として、好ましくはアルケニル基、アルキニル基、アリール基、ヘテロ環基、エステル基、アミド基、エーテル基、ウレタン基、又はアミノ基であり、さらに好ましくは、アルケニル基、エステル基、アミド基、又はエーテル基である。また、Ｌ1で表される三価の連結基が不飽和炭化水素である場合も好ましい。Ｌ1に含まれる炭素原子数は１〜２５が好ましく、１〜１５が最も好ましい。Ｌ1は置換基を有していてもよい。置換基としては、例えば、アルキル基、シアノ基、ヒドロキシル基、ニトロ基、カルボキシル基、アルコキシ基、アミノ基、アシルアミノ基、アシル基、カルバモイル基が好ましく、アルキル基が最も好ましい。また、Ｌ1が無置換の場合も好ましい。
【００２１】
上記の一般式（Ｉ）で表される化合物のより好ましい態様としては、Ｌ1が上記一般式（II）で表わされる場合が挙げられる。一般式（II）において、Ｌ2、Ｌ3、及びＬ4は、それぞれ独立に１〜２７個の炭素原子を含む二価の連結基を示す。Ｌ2、Ｌ3、及びＬ4は飽和又は不飽和のいずれであってもよく、ヘテロ原子を含む官能基を部分構造として含んでいてもよい。その例は、Ｌ1について説明したものと同様である。Ｌ2、Ｌ3、及びＬ4に含まれる総炭素原子数は１〜２７個であり、１〜２２個が好ましく、１〜１５個が最も好ましい。
【００２２】
本発明の化合物は１以上の不斉炭素を有しており、不斉炭素に基づく光学活性体又はジアステレオ異性体などの立体異性体が存在する。純粋な形態の任意の立体異性体、任意の立体異性体の混合物、ラセミ体などは、いずれも本発明の範囲に包含される。また、本発明の化合物はオレフィン性の二重結合を有する場合があるが、その配置はＥ又はＺのいずれであってもよく、両者の混合物として存在していてもよい。本発明の化合物は互変異性体として存在する場合もあるが、任意の互変異性体、またはそれらの混合物は本発明の範囲に包含される。さらに、本発明の化合物は置換基の種類によっては塩を形成する場合があり、遊離形態の化合物又は塩の形態の化合物が水和物又は溶媒和物を形成する場合もあるが、このような物質も本発明の範囲に包含される。
【００２３】
以下、本発明の化合物の好ましい例を示すが、本発明の化合物はこれらの例に限定されることはない。
【００２４】
【化５】
【化６】
【化７】
【化８】
【化９】
以下に本発明の化合物の一般的な合成法について説明するが、本発明の化合物の合成法はこれらに限定されるものではない。本発明の化合物において用いられるトリヨードフェニル基に関する合成原料としては、通常市販されているものを使用してもよく、あるいは用途に応じて適宜合成してもよい。市販品としては、例えば2,4,6-トリヨードフェノールや安息香酸誘導体（例えば、3-amino-2,4,6-triiodobenzoic acid, acetrizoic acid, iodipamide, diatrizoic acid, histodenz, 5-amino-2,4,6-triiodoisophthalic acid, 2,3,5-triiodobenzoic acid, tetraiodo-2-sulfobenzoic acid）、ヨードパン酸（iopanoic acid）、iophenoxic acidなどを用いることができる。合成により入手する場合には、例えばRichard C. Larock著、Comprehensive organic transformations（VCH） に記載の方法により、芳香環上にヨード原子を導入し、原料として用いることができる。
【００３０】
上記のトリヨードフェニル誘導体は、通常、部分構造として水酸基やアミノ基、カルボキシル基を含有するため、これらの官能基と二価以上のカルボン酸、アルコール、アミン、又はその複合体等を、エステル連結／アミド連結を介して縮合し、ビストリヨードフェニルの部分構造として用いることもできる。二価以上のカルボン酸、アルコール、又はアミンは、次の工程でさらに他の化合物と連結できるように、さらに保護または無保護の水酸基、アミノ基、カルボキシル基、又はカルボニル基等を有していることが好ましい。この場合の保護基としては、例えば、T. W. Green & P. G. M. Wuts著、Protecting groups in organic synthesis（John Wiley & sonc, inc.）に記載のものを用いることができる。二価カルボン酸としては、例えば4-oxo-heptanedioic acid, 4-benzyloxy-heptanedioic acid, 3-oxo-pentanedioic acid等を挙げることができ、二価以上のアルコールとしては、例えばdihydroxyacetone, 3-oxo-pentanediol, 1-benzyloxy-2,3-propanediol, 2-benzyloxy-1,3-propanediol等を挙げることができ、二価アミンとしては、例えば1,5-diamino-3-hydroxypentane, diaminoacetone等が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【００３１】
上記のエステル連結／アミド連結を介した縮合反応としては、例えばRichard C. Larock著、Comprehensive organic transformations（VCH）に記載の方法を用いることができる。得られたこれらのヨードベンゼン化合物は、保護基の脱保護／カルボニル基の還元等によって生じた官能基を用いて、同様の反応を行うことにより、さらに多くのトリヨードフェニル基を有する合成中間体を得ることが可能である。これらの中間体はステロイド残基を有する合成中間体と、例えば、Richard C. Larock著、Comprehensive organic transformations（VCH）に記載の方法でエステル連結、アミド連結等を介して結合することによって本発明の化合物を合成できる。
【００３２】
本発明の化合物はリポソームの膜構成成分として用いることができる。本発明の化合物を用いてリポソームを調製する場合、本発明の化合物の使用量は、膜構成成分の全質量に対して１０から９０質量％程度、好ましくは１０から８０質量％、さらに好ましくは２０から８０質量％である。本発明の化合物は膜構成成分として１種類を用いてもよいが、２種類以上を組み合わせて用いてもよい。
【００３３】
リポソームの他の膜構成成分としては、リポソームの製造に通常用いられている脂質化合物をいずれも用いることが可能である。例えば、Biochim. Biophys. Acta 150(4), 44 (1982)、Adv. in Lipid. Res. 16(1) 1 (1978)、"RESEARCH IN LIPOSOMES"（P.Machy, L.Leserman著、John Libbey EUROTEXT社）、「リポソーム」（野島、砂本、井上編、南江堂）等に記載されている。脂質化合物としてはリン脂質が好ましく、特に好ましいのはホスファチルジルコリン(PC)類である。ホスファチジルコリン類の好ましい例としては、eggPC、ジミリストリルPC（DMPC）、ジパルミトイルPC（DPPC）、ジステアロイルPC（DSPC）、ジオレイルPC（DOPC）等が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【００３４】
本発明の好ましい態様では、リポソームの膜構成成分として、ホスファチジルコリンとホスファチジルセリン(PS)を組み合わせて用いることができる。ホスファチジルセリンとしては、ホスファチジルコリンの好ましい例として挙げたリン脂質と同様の脂質部位を有する化合物が挙げられる。ホスファチジルコリンとホスファチジルセリンを組み合わせて用いる場合、PCとPSの好ましい使用モル比はPC：PS＝９０：１０から１０：９０の間であり、さらに好ましくは、３０：７０から７０：３０の間である。
【００３５】
本発明のリポソームの別の好ましい態様によると、膜構成成分として、ホスファチジルコリンとホスファチジルセリンを含み、さらにリン酸ジアルキルエステルを含むリポソームが挙げられる。リン酸ジアルキルエステルのジアルキルエステルを構成する２個のアルキル基は同一であることが好ましく、それぞれのアルキル基の炭素数は６以上であり、１０以上が好ましく、１２以上がさらに好ましい。好ましいリン酸ジアルキルエステルの例としては、ジラウリルフォスフェート、ジミリスチルフォスフェート、ジセチルフォスフェート等が挙げられるが、これに限定されることはない。この態様において、ホスファチジルコリン及びホスファチジルセリンの合計質量に対するリン酸ジアルキルエステルの好ましい使用量は１から５０質量％までであり、好ましくは１から３０質量％であり、さらに好ましくは１から２０質量％である。
【００３６】
ホスファチジルコリン、ホスファチジルセリン、リン酸ジアルキルエステル、及び本発明の化合物を膜構成成分として含むリポソームにおいて、上記成分の好ましい質量比はＰＣ：ＰＳ：リン酸ジアルキルエステル：本発明の化合物が５〜４０質量％：５〜４０質量％：１〜１０質量％：１５〜８０質量％の間で選択することができる。
【００３７】
本発明のリポソームの構成成分は上記４者に限定されず、他の成分を加えることができる。その例としては、コレステロール、コレステロールエステル、スフィンゴミエリン、FEBS Lett. 223, 42 (1987); Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 85, 6949 (1988)等に記載のモノシアルガングリオシドGM1誘導体、Chem. Lett., 2145 (1989); Biochim. Biophys. Acta, 1148, 77 (1992)等に記載のグルクロン酸誘導体、Biochim. Biophys. Acta, 1029, 91 (1990); FEBS Lett., 268, 235 (1990)等に記載のポリエチレングリコール誘導体が挙げられるが、これに限られるものではない。
【００３８】
本発明のリポソームは、当該分野で公知のいかなる方法でもっても作成できる。作成法の例としては、先に挙げたリポソームの総説成書類の他、Ann. Rev. Biophys. Bioeng., 9, 467 (1980) 、"Liopsomes"（M.J.Ostro編、MARCELL DEKKER, INC.）等に記載されている。具体例としては、超音波処理法、エタノール注入法、フレンチプレス法、エーテル注入法、コール酸法、カルシウム融合法、凍結融解法、逆相蒸発法等が挙げられるが、これに限られるものではない。本発明のリポソームのサイズは、上記の方法で作成できるサイズのいずれであっても構わないが、通常は平均が400 nm以下であり、200 nm以下が好ましい。リポソームの構造は特に限定されず、ユニラメラ又はマルチラメラなどのいずれの形態でもよい。また、リポソームの内部に適宜の薬物や他の造影剤の１種又は２種以上を配合することも可能である。
【００３９】
本発明のリポソームを造影剤として用いる場合には、好ましくは非経口的に投与することができ、より好ましくは静脈内投与することができる。例えば、注射剤や点滴剤などの形態の製剤を凍結乾燥形態の粉末状組成物として提供し、用時に水又は他の適当な媒体（例えば生理食塩水、ブドウ糖輸液、緩衝液など）に溶解ないし再懸濁して用いることができる。本発明のリポソームを造影剤として用いる場合、投与量はリポソームのヨード含有量が従来のヨード造影剤のヨード含有量と同程度になるように適宜決定することが可能である。
【００４０】
いかなる特定の理論に拘泥するわけではないが、動脈硬化、もしくはPTCA後の再狭窄等の血管疾患においては、血管の中膜を形成する血管平滑筋細胞が異常増殖をおこすと同時に内膜に遊走し、血流路を狭くすることが知られている。正常の血管平滑筋細胞が異常増殖を始めるトリガーはまだ完全に明らかにされていないが、マクロファージの内膜への遊走と泡沫化が重要な要因であることが知られており、その後に血管平滑細胞がフェノタイプ変換（収縮型から合成型）をおこすことが報告されている。
【００４１】
本発明のリポソームを用いると、泡沫化マクロファージの影響で異常増殖した血管平滑筋に対して疎水性ヨード化合物を選択的に取りこませることができる。その結果、公知技術であるサスペンジョン又はオイルエマルジョンを用いる場合と比べて、より多くのヨード化合物を血管平滑筋細胞に集積させることが可能である。この結果、本発明のリポソ-ムを用いると、病巣と非疾患部位の血管平滑筋細胞との間でコントラストの高いＸ線造影が可能である。従って、本発明の造影剤は、特に血管疾患の造影に好適に使用でき、例えば、動脈硬化巣やPTCA後の再狭窄等の造影を行うことができる。
【００４２】
また、例えばJ. Biol. Chem., 265, 5226 (1990)に記載されているように、リン脂質よりなるリポソーム、特にホスファチジルコリンとホスファチジルセリンから形成されるリポソームが、スカベンジャーレセプターを介してマクロファージに集積しやすいことが知られている。従って本発明のリポソームを使用することにより、本発明のヨード化合物をマクロファージが局在化している組織又は疾患部位に集積させることができる。本発明のリポソームを用いると、公知技術であるサスペンジョン又はオイルエマルジョンを用いる場合に比べて、より多くのヨード化合物をマクロファージに集積させることが可能である。
【００４３】
マクロファージの局在化が認められ、本発明の方法で好適に造影可能な組織としては、例えば、血管、肝臓、肺胞、リンパ節、リンパ管、腎臓上皮を挙げることができる。また、ある種の疾患においては、疾患部位にはマクロファージが集積していることが知られている。こうした疾患としては、腫瘍、動脈硬化、炎症、感染等を挙げることができる。従って、本発明のリポソームを用いることにより、これらの疾患部位を特定することができる。特に、アテローム性動脈硬化病変の初期過程において、スカベンジャーレセプターを介して変性LDLを大量に取り込んだ泡沫化マクロファージが集積していることが知られており（Am. J. Pathol., 103, 181(1981)、Annu. Rev. Biochem., 52, 223(1983)）、このマクロファージに本発明のリポソームを集積化させてＸ線造影をすることにより、他の手段では困難な動脈硬化初期病変の位置を特定することが可能である。
【００４４】
本発明のリポソームを用いた造影方法は特に限定されない。例えば、通常のＸ線造影剤を用いた造影方法と同様にしてＸ線を照射することにより造影を行うことができる。また、ヨードの放射線同位体を含む本発明の化合物を用いてリポソームを形成し、該リポソームをシンチグラフィー用造影剤として用いることにより、核医学的方法による造影を行うことも可能である。ヨードの放射性同位体は特に限定されないが、好ましい例としては122I、123I、125Iおよび131Iが挙げられ、特に好ましい例としては123Iおよび125Iを挙げることができる。放射性ラベル化合物の合成は、対応する非ラベル化合物を合成した後に、Appl.Radiat. Isot., 37(8), 907 (1986)等に記載されている既知の方法で実施することができる。疎水性化合物がトリヨードベンゼン誘導体である場合、同一ベンゼン環上の３個のヨード原子のうち少なくとも１個が放射線同位体化されていることが好ましい。好ましくは２個以上が放射線同位体化されていることであり、最も好ましいのは３個が同一の放射線同位体でラベル化されていることである。
【００４５】
【実施例】
以下、実施例により本発明をさらに具体的に説明するが、本発明の範囲は下記の実施例に限定されることはない。なお、下記の実施例中の化合物番号は上記に示した化合物例の番号に対応している。また、実施例中の化合物の構造はＮＭＲスペクトルにより確認した。
【００４６】
化合物Ｉ−１
コレステロール１５．１ｇと６．１２ｇのピリジンを６０ｍｌのクロロホルムに加え、さらに５．０ｍｌの４−ブロモ酪酸クロリドを滴下した。０℃で２時間、さらに室温で２０時間攪拌した後、クロロホルムと１規定塩酸水溶液を加えて抽出し、得られた有機層を硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製し、中間体Ｉ−１−Aを１７．４ｇ（収率６５％）得た。
【００４７】
上記中間体Ｉ−１−A ８．００ｇとビス（２−ヒドロキシエチル）アミン４．０８ｇを３０ｍｌのジメチルホルムアミドに溶解し、さらに３．１７ｇの炭酸カリウムと触媒量のよう化ナトリウムを加えた。６５℃で６時間攪拌した後、クロロホルムと水を加えて２度抽出し、得られた有機層を水で洗浄した。さらに、硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製した。中間体Ｉ−１−Bを５．６０ｇ（収率６７％）得た。
【００４８】
上記中間体Ｉ−１−B ０．４１ｇとα−エチル−３−アミノ−２，４，６−トリヨードハイドロケイヒ酸０．８２ｇを２０ｍｌのジクロロメタンに加え、さらに２０ｍｇのジメチルアミノピリジンと０．３１ｇの１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩を加えた。室温で２日間攪拌した後、溶媒を留去し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製し、無色アモルファス状結晶０．７４ｇを得た（収率６１％）。
1Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ；８．０９（２Ｈ，ｓ），５．３６（１Ｈ，ｂｄ），４．８６（４Ｈ，ｓ），４．５３−４．６８（１Ｈ，ｍ），４．００−４．１７（４Ｈ，ｍ），３．３８（２Ｈ，ｄｄ），３．２６（２Ｈ，ｄｄ），２．７０−２．８１（２Ｈ，ｍ），２．６２（４Ｈ，ｂｓ），２．４７（２Ｈ，ｔ），２．２５−２．３５（４Ｈ，ｍ），０．６０−２．１０（ｍ）
【００４９】
化合物Ｉ−２
上記中間体Ｉ−１−Bと３−アミノ−２，４，６−トリヨードハイドロケイヒ酸（合成：J. Med. Chem., 1995, 38, 639記載）を用い、上記Ｉ−１と同様の方法で合成した。
1Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ；８．０８（２Ｈ，ｓ），５．４７（１Ｈ，ｂｄ），４．８４（４Ｈ，ｓ），４．５５−４．６８（１Ｈ，ｍ），４．２２（４Ｈ，ｔ），３．３６−３．４７（４Ｈ，ｍ），２．８３（４Ｈ，ｔ），２．６１（２Ｈ，ｔ），２．５０−２．６１（４Ｈ，ｍ），２．３９（２Ｈ，ｔ），２．３０（２Ｈ，ｄ），０．６０−２．１０（ｍ）
【００５０】
化合物Ｉ−４
５−オキソアゼライン酸１．０１ｇと２，４，６−トリヨードフェノール４．８８ｇを５０ｍｌのジクロロメタンに加え、さらに０．１６ｇのジメチルアミノピリジンと２．４２ｇの１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩を加えた。室温で２日間攪拌した後、浮遊物を濾別し、溶媒を留去した。得られた残渣に、テトラヒドロフラン２６ｍｌ、ベンゼン７ｍｌ、水２ｍｌを加え０℃に冷やして、水素化ホウ素ナトリウム０．４３ｇを加えた。０℃で攪拌した後、クロロホルムと飽和塩化アンモニウム水溶液を加えて２度抽出し、得られた有機層を硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製し、中間体Ｉ−４−A を０．８９ｇ（収率１６％）得た。
【００５１】
上記中間体Ｉ−４−A ０．５４ｇとコハク酸水素コレステロール０．２４ｇを２０ｍｌのジクロロメタンに加え、さらに５ｍｇのジメチルアミノピリジンと０．１５ｇの１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩を加えた。室温で攪拌した後、溶媒を留去し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製し、無色アモルファス状結晶０．１２ｇ（収率１５％）を得た。
1Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ；８．０７（４Ｈ，ｓ），５．３６（１Ｈ，ｄ），４．９８−５．０８（１Ｈ，ｍ），４．５５−４．７０（１Ｈ，ｍ），２．５７−２．７５（８Ｈ，ｍ），２．３１（２Ｈ，ｄ），０．６０−２．１０（ｍ）
【００５２】
化合物ＩＩ−１
α−エチル−３−アミノ−２，４，６−トリヨードハイドロケイヒ酸５０．７ｇとジヒドロキシアセトン４．０１ｇを３００ｍｌのジクロロメタンに加え、さらに１．０８ｇのジメチルアミノピリジンと２０．７ｇの１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩を加えた。室温で２日間攪拌した後、ジクロロメタンと１規定塩酸水溶液を加えて２度抽出し、得られた有機層を水洗した後、硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を留去して、中間体ＩＩ−１−A ５１．３ｇ（収率９６％）を得た。
【００５３】
上記中間体ＩＩ−１−A ５０．１ｇにテトラヒドロフラン２１０ｍｌ、ベンゼン５８ｍｌ、水１７ｍｌを加え０℃に冷やして、水素化ホウ素ナトリウム２．４７ｇを加えた。０℃で３時間攪拌した後に飽和塩化アンモニウム水溶液を加えて反応を停止した。さらにクロロホルムを加えて２度抽出し、得られた有機層を飽和食塩水で洗浄した後、硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製し、中間体ＩＩ−１−Ｂ を２７．３ｇ（収率５４％）得た。
【００５４】
上記中間体ＩＩ−１−Ｂ １．００ｇとクロロ蟻酸コレステロール０．７５ｇを１０ｍｌのジクロロメタンに加え、さらに２７ｍｇのジメチルアミノピリジンと０．１７ｍｌのピリジンを加えた。室温で攪拌した後、溶媒を留去し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製した。無色結晶を０．７４ｇ（収率５５％）得た。
1Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ；８．０６（２Ｈ，ｓ），５．３９（１Ｈ，ｂｓ），５．００−５．０９（１Ｈ，ｍ），４．８４（４Ｈ，ｓ），４．４０−４．５５（１Ｈ，ｍ），４．２２−４．３８（２Ｈ，ｍ），４．０５−４．２０（２Ｈ，ｍ），３．３９（２Ｈ，ｄｄ），３．２８（２Ｈ，ｄｄ），２．７１−２．８４（２Ｈ，ｍ），２．３９（２Ｈ，ｂｓ），０．６０−２．１０（ｍ）
【００５５】
化合物ＩＩ−２
（Ｓ）−（＋）−２、２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−メタノール２．８１ｇとフマル酸水素コレステロール１０．２ｇを３０ｍｌのジクロロメタンに加え、さらに０．２６ｇのジメチルアミノピリジンと４．８５ｇの１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩を加えた。室温で２日間攪拌した後、溶媒を留去して、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製した。中間体ＩＩ−２−A ７．７６ｇ（収率６２％）を得た。
上記中間体ＩＩ−２−Aを用い、Arch. Pharm. (Weinheim), 1995, 328, 271記載の方法に準拠してアセトニド基の脱保護を行い、中間体ＩＩ−２−Ｂを得た。
【００５６】
上記中間体ＩＩ−２−Ｂ ０．４１ｇとα−エチル−３−アミノ−２，４，６−トリヨードハイドロケイヒ酸０．８３ｇを２０ｍｌのジクロロメタンに加え、さらに１９ｍｇのジメチルアミノピリジンと０．３４ｇの１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩を加えた。室温で２日間攪拌した後、溶媒を留去し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製し、無色アモルファス状結晶を０．７３ｇ（収率６０％）得た。
1Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ；８．１０（２Ｈ，ｓ），５．３９（１Ｈ，ｄ），５．２１−５．３１（１Ｈ，ｍ），４．８８（４Ｈ，ｍ），４．５５−４．７０（１Ｈ，ｍ），４．０２−４．４２（４Ｈ，ｍ），３．２５−３．４５（４Ｈ，ｍ），２．７２−２．８８（２Ｈ，ｍ），２．６４（４Ｈ，ｂｓ），２．３４（２Ｈ，ｄ），０．６０−２．１０（ｍ）
【００５７】
化合物ＩＩ−３
３−アミノ−２，４，６−トリヨードハイドロケイヒ酸を用いて、化合物ＩＩ−２と同様の方法で合成した。
1Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ；８．０６（２Ｈ，ｓ），５．３１−５．４１（２Ｈ，ｍ），４．８１（４Ｈ，ｓ），４．５２−４．６９（１Ｈ，ｍ），４．４５（１Ｈ，ｄｄ），４．４１（１Ｈ，ｄｄ），４．２８（１Ｈ，ｄｄ），４．２３（１Ｈ，ｄｄ），３．３５−３．４３（４Ｈ，ｍ），２．６０−２．７０（２４Ｈ，ｍ），２．５１−２．６０（４Ｈ，ｍ），２．３０（２Ｈ，ｄ），０．６０−２．１０（ｍ）
【００５８】
化合物ＩＩ−４
（Ｒ）−（−）−２、２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−メタノールを用いて、化合物ＩＩ−２と同様の方法で合成した。
1Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ；８．１０（２Ｈ，ｓ），５．３９（１Ｈ，ｄ），５．２１−５．３１（１Ｈ，ｍ），４．８８（４Ｈ，ｍ），４．５５−４．７０（１Ｈ，ｍ），４．０２−４．４２（４Ｈ，ｍ），３．２５−３．４５（４Ｈ，ｍ），２．７２−２．８８（２Ｈ，ｍ），２．６４（４Ｈ，ｂｓ），２．３４（２Ｈ，ｄ），０．６０−２．１０（ｍ）
【００５９】
化合物ＩＩ−５
３−アミノ−２，４，６−トリヨードハイドロケイヒ酸を用いて、化合物ＩＩ−４と同様の方法で合成した。
1Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ；８．０６（２Ｈ，ｓ），５．３１−５．４１（２Ｈ，ｍ），４．８１（４Ｈ，ｓ），４．５２−４．６９（１Ｈ，ｍ），４．４５（１Ｈ，ｄｄ），４．４１（１Ｈ，ｄｄ），４．２８（１Ｈ，ｄｄ），４．２３（１Ｈ，ｄｄ），３．３５−３．４３（４Ｈ，ｍ），２．６０−２．７０（２４Ｈ，ｍ），２．５１−２．６０（４Ｈ，ｍ），２．３０（２Ｈ，ｄ），０．６０−２．１０（ｍ）
【００６０】
化合物ＩＩ−６
５−（３−アミノ−２，４，６−トリヨードフェニル）ペンタン酸（J. Med. Chem., 1995, 38, 639記載）を用い、上記中間体ＩＩ−１−Ｂと同様の方法で中間体ＩＩ−６−Ｂを合成した。
上記中間体ＩＩ−６−Ｂとフマル酸水素コレステロールを用い、化合物Ｉ−４と同様の方法で合成した。
1Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ；８．０４（２Ｈ，ｓ），５．２７−５．３６（２Ｈ，ｍ），４．７９（４Ｈ，ｂｓ），４．５５−４．７０（１Ｈ，ｍ），４．３２（２Ｈ，ｄｄ），４．１９（２Ｈ，ｄｄ），２．９８−３．０８（４Ｈ，ｍ），２．５５−２．６５（４Ｈ，ｍ），２．４３（４Ｈ，ｔ），２．３０（２Ｈ，ｄ），０．６０−２．１０（ｍ）
【００６１】
化合物ＩＩ−７
７−（３−アミノ−２，４，６−トリヨードフェニル）ヘプタン酸（J. Med. Chem., 1995, 38, 639記載）を用い、上記ＩＩ−６と同様の方法で合成した。1Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ；８．０２（２Ｈ，ｓ），５．２５−５．４１（２Ｈ，ｍ），４．８０（４Ｈ，ｂｓ），４．５５−４．７０（１Ｈ，ｍ），４．３２（２Ｈ，ｄｄ），４．１８（２Ｈ，ｄｄ），２．９６−３．１０（４Ｈ，ｍ），２．５８−２．７０（４Ｈ，ｍ），２．３８−２．４７（６Ｈ，ｍ），０．６０−２．１０（ｍ）
【００６２】
化合物ＩＩ−８
３−アミノ−２，４，６−トリヨードハイドロケイヒ酸を用い、上記ＩＩ−６と同様の方法で合成した。
1Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ；８．０５（２Ｈ，ｓ），５．３０−５．４０（２Ｈ，ｍ），４．８２（４Ｈ，ｂｓ），４．５２−４．６７（１Ｈ，ｍ），４．４０（２Ｈ，ｄｄ），４．２８（２Ｈ，ｄｄ），３．３３−３．４２（４Ｈ，ｍ），２．６０−２．７０（４Ｈ，ｍ），２．５０−２．６０（４Ｈ，ｍ），２．２９（２Ｈ，ｄ），０．６０−２．１０（ｍ）
【００６３】
化合物ＩＩ−９
４−（２−グリセリル）酪酸（３−オキソ−４−コレステ−１７β−リル）エステル[Arch. Pharm. (Weinheim), 1995, 328, 271記載の方法に準拠して合成]とα−エチル−３−アミノ−２，４，６−トリヨードハイドロケイヒ酸を用いて、上記ＩＩ−２と同様の方法で合成した。
1Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ；８．１０（２Ｈ，ｓ），５．３９（１Ｈ，ｄ），４．８８（４Ｈ，ｂｓ），４．５５−４．７０（１Ｈ，ｍ），３．９５−４．２８（４Ｈ，ｍ），３．２４−３．６０（７Ｈ，ｍ），２．７５−２．８８（２Ｈ，ｍ），２．２９−２．４１（４Ｈ，ｍ），０．６０−２．１０（ｍ）
【００６４】
化合物ＩＩ−１０
３−アミノ−２，４，６−トリヨードハイドロケイヒ酸を用いて、上記ＩＩ−９と同様の方法で合成した。
1Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ；８．０７（２Ｈ，ｓ），５．３７（１Ｈ，ｄ），４．３５（４Ｈ，ｂｓ），４．５３−４．６９（１Ｈ，ｍ），４．３０（２Ｈ，ｄｄ），４．２２（２Ｈ，ｄｄ），３．８０（１Ｈ，ｑｕｉｎ），３．６７（２Ｈ，ｔ），３．３８−３．４６（４Ｈ，ｍ），２．５４−２．６４（４Ｈ，ｍ），２．４３（２Ｈ，ｔ），２．２９（２Ｈ，ｄ），０．６０−２．１０（ｍ）
【００６５】
化合物ＩＩ−１１
上記中間体ＩＩ−１−Ｂとフマル酸水素コレステロール（J. Am. Chem. Soc., 1996, 118, 5351記載）を用い、上記Ｉ−４と同様の方法で合成した。
1Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ；８．１０（２Ｈ，ｓ），６．９０（１Ｈ，ｄ），６．８２（１Ｈ，ｄ），５．４２（１Ｈ，ｄ），５．２７−５．３７（１Ｈ，ｍ），４，８９（４Ｈ，ｂｓ），４．６９−４．８２（１Ｈ，ｍ），４．１０−４．４２（４Ｈ，ｍ），３．４０（２Ｈ，ｄｄ），３．２９（２Ｈ，ｄｄ），２．７４−２．９０（２Ｈ，ｍ），２．３９（２Ｈ，ｄ），０．６０−２．１０（ｍ）
【００６６】
化合物ＩＩ−１２
上記中間体ＩＩ−１−Ｂとコハク酸水素コレステロールを用い、上記Ｉ−４と同様の方法で合成した。
1Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ；８．１０（２Ｈ，ｓ），５．３８（１Ｈ，ｄ），５．２２（１Ｈ，ｑｕｉｎ），４．８７（４Ｈ，ｂｓ），４．５５−４．７０（１Ｈ，ｍ），４．２６−４．３９（２Ｈ，ｍ），４．０８−４．２１（２Ｈ，ｍ），３．４０（２Ｈ，ｄｄ），３．３０（２Ｈ，ｄｄ），２．７４−２．８８（２Ｈ，ｍ），２．５３（４Ｈ，ｓ），２．３３（２Ｈ，ｄ），０．６０−２．１０（ｍ）
【００６７】
試験例：血管平滑筋細胞におけるヨード原子の取り込み量
下記に示した割合でジ・パルミトイル ＰＣ（フナコシ社製、No.1201-41-0225）、ジ・パルミトイル ＰＳ（フナコシ社製、No.1201-42-0237）をJ. Med. Chem., 25(12), 1500 (1982)記載の方法で、既存化合物であるCholesterol Iopanoate（以下、C.I.と記載）又は本発明の化合物とそれぞれナス型フラスコ内でクロロホルムに溶解して均一溶液とした後、溶媒を減圧で留去してフラスコ底面に薄膜を形成した。この薄膜を真空で乾燥後、0.9%生理食塩水（光製薬社製、No.512）を適当量加え、超音波照射（Branson社製、No.3542プローブ型発振器、0.1 mW）を氷冷下５分実施することにより、均一なリポソーム分散液を得た。得られた分散液の粒径をWBCアナライザー（日本光電社製、A-1042）で測定した結果、粒子径は40から65 nmであった。この方法により調製した下記リポソーム製剤を特願2001-018573号明細書に記載の血管平滑筋細胞とマクロファージとの混合培養系に添加し、37℃で5%CO2下に24時間培養した後、血管平滑筋細胞に取り込まれた疎水性ヨード造影剤を定量しヨード原子の量に変換した。結果を下記の表１に示す。本発明の化合物（ＩＩ−８、ＩＩ−１２）は、既存化合物であるCholesterol Iopanoateに比べて効率よくヨード原子を血管平滑筋細胞内に取り込ませることができた。
【００６８】
【表１】
試験例２：ラット動脈硬化巣のＸ線撮影
Invest. radiol. 18, 275 (1985)の方法に従い、ラット大動脈に動脈硬化巣を形成させた。動脈硬化巣を形成したラットに上記の試験例１で調製した化合物ＩＩ−１２を含むリポソームを化合物ＩＩ−１２に換算したＭＴＤ量である200 mg/kgを頚静脈より慎重に投与した。投与10分後、Ｘ線撮影により明瞭な動脈硬化巣の造影写真が得られた。その結果を図１から図３に示す。
【００７０】
【発明の効果】
本発明の化合物は、Ｘ線造影剤及びシンチグラフィー造影剤のためのリポソームの構成脂質として優れた性質を有しており、この化合物を含むリポソームを用いてＸ線造影することにより血管疾患の病巣を選択的に造影できる。
【図面の簡単な説明】
【図１】 本発明のリポソームを投与する直前のラットをＸ線撮影した写真である。
【図２】 本発明のリポソームを投与した直後のラットをＸ線撮影した写真である。
【図３】 本発明のリポソームの投与10分後のラットの動脈硬化巣をＸ線撮影により造影した写真である。
Claims (16)
- 下記一般式（Ｉ）：
- 前記トリヨードフェニル基が、２，４，６位にヨウ素原子が置換したトリヨードフェニル基であり、前記ヨウ素原子の他に置換基を有さないか、又は３位にアミノ基を置換基として有する請求項１に記載の化合物。
- 請求項１又は２に記載の化合物を膜構成成分として含むリポソーム。
- ホスファチジルコリン及びホスファチジルセリンからなる群から選ばれる脂質を膜構成成分として含む請求項３に記載のリポソーム。
- 請求項３又は４に記載のリポソームを含むＸ線造影剤。
- 血管疾患の造影に用いるための請求項５に記載のＸ線造影剤。
- 泡沫化マクロファージの影響で異常増殖した血管平滑筋細胞の造影に用いる請求項５に記載のＸ線造影剤。
- マクロファージが局在化する組織又は疾患部位の造影に用いる請求項５に記載のＸ線造影剤。
- マクロファージが局在化する組織が肝臓、脾臓、肺胞、リンパ節、リンパ管、及び腎臓上皮からなる群から選ばれる請求項８に記載のＸ線造影剤。
- マクロファージが局在化する疾患部位が腫瘍、炎症部位、及び感染部位からなる群から選ばれる請求項８に記載のＸ線造影剤。
- 少なくとも１つのヨード原子が放射性同位体である請求項１又は２に記載の化合物又はその塩を膜構成成分として含むリポソーム。
- 請求項１１に記載のリポソームを含むシンチグラフィー造影剤。
- 泡沫化マクロファージの影響で異常増殖した血管平滑筋細胞の造影に用いる請求項１２に記載のシンチグラフィー造影剤。
- マクロファージが局在化する組織又は疾患部位の造影に用いる請求項１２に記載のシンチグラフィー造影剤。
- 造影対象の組織が血管、肝臓、脾臓、肺胞、リンパ節、リンパ管、及び腎臓上皮からなる群から選ばれる請求項１２に記載のシンチグラフィー造影剤。
- 腫瘍、動脈硬化巣、炎症部位、及び感染部位からなる群から選ばれる疾患部位の造影に用いる請求項１２に記載のシンチグラフィー造影剤。
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