JP4310185B2 - キノリン誘導体およびその抗腫瘍剤としての使用 - Google Patents

Description

（本発明の優先権）
本願は、米国特許法の下で、米国特許仮出願番号６０／３０９，１４４（２００１年７月３１日出願）に基づき、発明の優先権を主張する。

（政府資金）
本明細書中で記載される発明は、国立癌研究所により与えられた、ＮＣＩ−ＮＩＨ補助金番号ＣＡ８２３４１政府の支援に一部基づき作成された。合衆国政府は、本発明における特定の権利を有する。

（発明の背景）
米国特許第４，６２９，４９３号は、以下の式を有する除草剤化合物を開示する：

ここで、数あるなかで、Ａは、−ＣＨ−または−Ｎ−であり；Ｘは、ハロゲンであり；ｎは０、１、または２であり；Ｒ^１は、水素または低級アルキル基であり；そしてＲ^２は、−ＯＨである。これらの化合物のうちの１つは、現在、広葉樹作物における一年生および多年生の雑草の制御のために市販されている。その化合物は、以下の式を有する：

Ｃｏｒｂｅｔｔら、Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎａｌ Ｎｅｗ Ｄｒｕｇｓ、１６ １２９〜１３９（１９９８）は、一連のキノキサリン化合物を、マウスにおける固形腫瘍に対する活性について評価した。以下の化合物（ＸＫ４６９として示す）が、移植可能なマウス腫瘍に対して広範な活性を有することが報告されている。

この化合物はまた、比較的低い能力を有し、そして多数の所望されない副作用（例えば、インビボでの毒性（例えば、麻痺性イレウス、ＧＩ−上皮損傷、骨髄毒性、神経筋毒性および体重の減少））を引き起こすことが報告されている。現在、さらなる抗腫瘍剤が必要とされている。

（発明の要旨）
本発明は、有効な抗腫瘍剤である化合物を提供する。従って、以下の式Ｉの化合物であって：

ここで、Ｙは、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、メチルもしくはメトキシである化合物、またはそれらの薬学的に受容可能な塩である、本発明の化合物が提供される。

本発明はまた、哺乳動物における腫瘍細胞の増殖を阻害するための治療方法を提供し、この方法は、その治療を必要とする哺乳動物に、有効量の本発明の化合物を投与する方法を包含する。

本発明はまた、哺乳動物における癌を処置するための治療方法を提供し、この方法は、その治療を必要とする哺乳動物に、有効量の本発明の化合物を投与する方法を包含する。

本発明はまた、医学的治療における、本発明の化合物の使用を提供する。

本発明はまた、哺乳動物における癌の治療のための医薬の製造のための、本発明の化合物の使用を提供する。

（発明の詳細な説明）
キラル中心を有する光学活性形態およびラセミ形態の本発明の化合物が存在し得、そして単離され得ることが、当業者に理解される。いくつかの化合物が、多形を示し得る。本発明が、本発明の化合物の、任意のラセミ体、光学活性体、多形、または立体異性体形態、またはそれらの混合物を包含し、これらは、本明細書中に記載される有用な特性を保有すること、必要に応じて（例えば、ラセミ形態の分割によって、再結晶化技術によって、光学活性な開始物質からの合成によって、キラル合成によって、またはキラル固定相を用いるクロマトグラフ分離によって）活性形態を調製する方法および本明細書中に記載される標準的な試験を用いるかまたは当該分野において周知の他の類似の試験を用いて、抗腫瘍活性を決定する方法が当該分野において公知であることが理解されるべきである。

Ｙについての特定の意味（ｖａｌｕｅ）は、フッ素である。

Ｙについての別の特定の意味は、塩素である。

Ｙについての別の特定の意味は、臭素である。

Ｙについての別の特定の意味は、メトキシ（−ＯＭｅ）である。

式Ｉの化合物の特定の群は、メチル基を保有する炭素が（Ｓ）配置にある、化合物である。

式Ｉの化合物の好ましい群は、メチル基を保有する炭素が（Ｒ）配置にある、化合物である。

好ましい本発明の化合物は、２−［４−（７−クロロキノリン−２−イルオキシ）フェノキシ］プロパン酸（化合物２１ｂ）；２−［４−（７−ブロモキノリン−２−イルオキシ）フェノキシ］プロパン酸（化合物２１ｃ）；２−［４−（７−フルオロキノリン−２−イルオキシ）フェノキシ］プロパン酸（化合物２１ａ）；およびこれらの薬学的に受容可能な塩（例えば、化合物２２ａ、化合物２２ｂ、および化合物２２ｃ）。より好ましくは、本発明の化合物は、（Ｒ）２−［４−（７−クロロキノリン−２−イルオキシ）フェノキシ］プロパン酸（化合物２１ｂ）、またはその薬学的に受容可能な塩（例えば、化合物２２ｂ）；および（Ｒ）２−［４−（７−ブロモキノリン−２−イルオキシ）フェノキシ］プロパン酸（化合物２１ｃ）、またはその薬学的に受容可能な塩（例えば、化合物２２ｃ）である。

化合物が、安定な非毒性酸塩または非毒性塩基塩を形成するのに十分に塩基性または酸性である場合、これらの化合物の、塩としての投与が適切であり得る。薬学的に受容可能な塩の例は、生理学的に受容可能なアニオンを形成する酸から形成された有機酸付加塩（例えば、トシラート、メタンスルホン酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、マロン酸塩、酒石酸塩、スクシン酸塩、安息香酸塩、アスコルビン酸塩、α−ケトグルタル酸、およびα−グリセロリン酸塩）である。適切な無機塩もまた、形成され得、その無機塩としては、塩酸塩、硫酸塩、硝酸塩、重炭酸塩、および炭酸塩が挙げられる。

薬学的に受容可能な塩は、当該分野において周知の標準的な手順用いて（例えば、十分な塩基性化合物（例えば、アミン）を生理学的に受容可能なアニオンをもたらす適切な酸と反応させることにより）得ることができる。カルボン酸のアルカリ金属（例えば、ナトリウム、カリウム、またはリチウム）塩またはアルカリ土類金属（例えば、カルシウム）塩もまた、作製され得る。

式Ｉの化合物が、薬学的組成物として処方され得、そして選択された投与経路（例えば、経口経路、または静脈内経路、筋内経路、局所的経路または経皮経路による非経口経路）に適合した種々の形態で、哺乳動物ホスト（例えば、ヒト患者）に投与され得る。

従って、本発明の化合物は、薬学的に受容可能なビヒクル（例えば、不活性希釈剤または消化性食用キャリア）と組み合わせて、全身投与（例えば、経口）され得る。これらは、硬質殻ゼラチンカプセルまたは軟質殻ゼラチンカプセル中に内包され得るか、錠剤中に圧縮され得るか、または患者の食する食物に直接的に組み込まれ得る。経口治療投与のためには、活性化合物は、１つ以上の賦形剤と合わせられ得、そして消化可能な錠剤、舌下錠、トローチ剤、カプセル剤、エリキシル剤、懸濁物、シロップ剤、ウエハース剤、などの形態で使用される。このような組成物および調製物は、少なくとも０．１％の活性化合物を含むべきである。この組成物および調製物のパーセンテージは、当然、変化し得、そして好適には、約２重量％と約６０重量％との間の所定の単位投薬形態であり得る。このような治療的に有用な組成物中の活性化合物の量は、有効投薬レベルが得られる量である。

錠剤、トローチ剤、ピル剤、カプセル剤などはまた、以下を含み得る：トラガカントガム、アカシア、コーンスターチ、またはゼラチンのようなバインダー；リン酸二カルシウムのような賦形剤；コーンスターチ、ポテトスターチ、アルギニン酸などのような崩壊剤；ステアリン酸マグネシウムのような潤滑剤、ならびにスクロース、フルクトース、ラクトース、もしくはアスパルテームのような甘味剤、またはペパーミント、冬緑油、もしくはチェリーフレーバーのような芳香剤が添加され得る。単位投薬形態がカプセル剤である場合、上記型の材料に加えて、液体キャリア（例えば、植物油またはポリエチレングリコール）を含み得る。種々の他の材料が、コーティングとしてか、またはそうでなければ固体単位投薬形態の物理的形態を改変するために存在し得る。例えば、錠剤、ピル剤、またはカプセル剤は、ゼラチン、ワックス、セラック、または糖などによりコーティングされ得る。シロップ剤またはエリキシル剤は、活性化合物、甘味料としてスクロースもしくはフルクトース、防腐剤としてメチルパラベンおよびプロピルパラベン、色素、ならびにチェリーフレーバーまたはオレンジフレーバーのような芳香剤を含み得る。当然、任意の単位投薬形態を調製するのに使用される任意の材料が、薬学的に受容可能であり、かつ使用される量において実質的に非毒性であるはずである。さらに、活性化合物は、持続性放出調製物およびデバイスに組み込まれ得る。

活性化合物はまた、吸入または注射により、静脈内または腹腔内に投与され得る。活性化合物またはその塩の溶液は、水中で調製され得、必要に応じて非毒性界面活性剤と混合され得る。分散物もまた、グリセロール、液体ポリエチレングリコール、トリアセチン、およびそれらの混合物中で、ならびに油中で調製され得る。通常の保存条件および使用条件下で、これらの調製物は、微生物の増殖を防止するために防腐剤を含む。

注射または吸入に適した薬学的投薬形態としては、滅菌注射可能もしくは注入可能な溶液または分散物（必要に応じて、リポソーム中にカプセル化される）の即座の調製に適合された、活性成分を含む滅菌水性溶液もしくは分散液または滅菌粉末が挙げられ得る。全ての場合、最終的な投薬形態は、製造条件および保存条件の下で、滅菌性、流体、および安定であるべきである。液体キャリアまたはビヒクルは、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、液体ポリエチレングリコールなど）、植物油、非毒性グリセリルエステル、およびそれらの適切な混合物を含む、溶媒または液体分散媒体であり得る。適切な流動性は、例えば、リポソームの形成により、分散物の場合に必要とされる粒子サイズの維持により、または界面活性剤の使用により維持され得る。微生物の活性の防止は、種々の抗菌剤および抗真菌剤（例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、チオメルサールなど）によりもたらされ得る。多くの場合、等張剤（例えば、糖、緩衝剤、または塩化ナトリウム）を含むことが好ましい。注射可能組成物の延長された吸収性は、吸収を遅延する薬剤（例えば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチン）の組成物中での使用によりもたらされ得る。

滅菌注射可能溶液は、上に列挙された他の種々の成分と共に、適切な溶媒中に、必要とされる量で、活性化合物を組み込むことにより調製される（必要な場合、その後、濾過滅菌される）。滅菌注射可能溶液の調製のための滅菌粉末の場合、調製の好ましい方法は、真空乾燥技術および凍結乾燥技術であり、これにより、予め滅菌濾過溶液中に存在した活性成分および任意のさらなる所望の成分の粉末が生成される。

局所投与について、本発明の化合物は、純粋な形態で適用され得る（すなわち、それらが液体である場合）。しかし、一般的に、皮膚に受容可能なキャリア（固体または液体であり得る）と組み合わせて、組成物または処方物として、皮膚にそれらを適用することが望ましい。

有用な固体キャリアとしては、精巧に分割された固体（例えば、タルク、クレイ、微結晶性セルロース、シリカ、アルミナなど）が挙げられる。有用な液体キャリアとしては、水、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、アルコールもしくはグリコール、または水−アルコール／グリコールブレンドが挙げられ、この中に、本発明の化合物が、必要に応じて非毒性界面活性剤を用いて、有効レベルで溶解または分散され得る。アジュバント（例えば、フレグランス）およびさらなる抗微生物剤が、所定の用途にその特性を最適化するために添加され得る。得られる液体組成物は、バンドエイドおよび他の包帯に染み込ませるのに使用される、吸収パッドから適用され得るか、またはポンプ型スプレーまたはエアロゾル型スプレーを用いて影響を受けた領域に噴霧され得る。

濃厚剤（例えば、合成ポリマー、脂肪酸、脂肪酸塩および脂肪酸エステル、脂肪アルコール、改変セルロース、または改変鉱物材料）がまた、使用者の皮膚に直接的に適用するために、拡散可能なペースト、ゲル、軟膏、スープなどを形成するために、液体キャリアと共に用いられ得る。

式Ｉの化合物を皮膚に送達するために使用され得る有用な皮膚用組成物の例は、当該分野で公知である；例えば、Ｊａｃｑｕｅｔら（米国特許第４，６０８，３９２号）、Ｇｅｒｉａ（米国特許第４，９９２，４７８号）、Ｓｍｉｔｈら（米国特許第４，５５９，１５７号）、およびＷｏｒｔｚｍａｎ（米国特許第４，８２０，５０８号）を参照のこと。

式Ｉの化合物の有用な投薬量は、それらのインビトロ活性と動物モデルにおけるインビボ活性とを比較することにより決定され得る。マウスおよび他の動物における、ヒトに対する有効用量の推定のための方法は、当該分野で公知である；例えば、米国特許第４，９３８，９４９号を参照のこと。

処置に使用するために必要とされる、この化合物、またはその活性な塩もしくは誘導体の量は、選択される特定の塩だけでなく、投与経路、処置される状態の性質、ならびに患者の年齢および状態と共に変動し、最終的に、付き添う治療者または臨床医の裁量による。

この化合物は、好適には、単位投薬形態（例えば、単位投薬形態あたり、５〜１，０００ｍｇ／ｍ^２、好適には、１０〜７５０ｍｇ／ｍ^２、最も好適には、５０〜５００ｍｇ／ｍ^２の活性成分を含む）で投与される。

所望の用量は、好適には、単一用量または適切な間隔で（例えば、１日あたり、２回、３回、４回、またはそれ以上の準用量で）投与される分割用量として存在し得る。準用量自体はさらに、例えば、多くの別個に大まかに間隔を空けた投与に分割され得る。

本発明の化合物は、有効な抗腫瘍剤であり、そしてＸＫ４６９と比較して、より高い能力および／または減少した毒性を有する。好ましくは、本発明の化合物は、（Ｒ）ＸＫ４６９よりも高い能力および低い毒性であり、そして／またはＸＫ４６９と遭遇する異化性の代謝の潜在的な部位を回避する（すなわち、ＸＫ４６９よりも異なる代謝プロフィールを有する）。

本発明は、哺乳動物において癌を処置する治療方法を提供する。この方法は、癌を有する哺乳動物に、有効量の本発明の化合物または組成物を投与する工程を包含する。哺乳動物としては、霊長類、ヒト、げっ歯類、イヌ、ネコ、ウシ、ヒツジ、ウマ、ブタ、ヤギ、ウシなどが挙げられる。癌は、任意の種々の型の悪性新生物（例えば、結腸癌、乳癌、骨髄腫、および白血病）をいい、一般的には、望まない細胞増殖（例えば、調節されない増殖、分化の欠如、局所的組織浸潤、および転移）により特徴付けられる。

癌を処置する本発明の化合物の能力は、当該分野で周知のアッセイを用いることによって決定され得る。例えば、処置プロトコルの設計、毒性評価、データ分析、腫瘍細胞死滅量、および転移可能な腫瘍のスクリーニングの使用の重要性が議論されている。さらに、癌を処置する化合物の能力は、以下に記載される試験を用いて決定され得る。

試験Ａ〜Ｈにおいて、以下の一般的な方法が使用された。

（腫瘍および動物の管理）
膵管腺癌−０３、Ｂ１６−黒色腫、乳腺癌−１６／Ｃ／Ａｄｒ、乳腺癌−１７／Ａｄｒ、結腸腺癌−２６、および乳腺癌−１６／Ｃを、この研究に使用した。

腫瘍を、マウスの起源系統Ｃ５７Ｂｌ／６（膵管腺癌−０３、Ｂ１６）、Ｂａｌｂ／ｃ（結腸２６）、およびＣ_３Ｈ（乳腺腫瘍）において維持した。腫瘍を、適切なＦ_１ハイブリッド（ＢＤＦ１＝Ｃ５７Ｂｌ／６雌×ＤＢＡ／２雄）または化学療法試験のための起源系統に移植した。各実験についての個々のマウスの体重は５グラム未満であり、そして全てのマウスは、治療の開始時に１７グラムを超えていた。マウスに、食料および水を自由に供給した。

（固形腫瘍の化学療法）
動物をプールし、０日目に１２ゲージのトロカールにより３０〜６０ｍｇの腫瘍片を皮下移植し、そして再度、プールした後に種々の処置群およびコントロール群へと非選択的に分散させた。早期段階の治療については、細胞の数を比較的少なく（１０^７〜１０^８細胞）しつつ、化学療法を、腫瘍移植後１〜３日以内に開始した。後半段階（ｕｐｓｔａｇｅｄ）または進行段階（ａｄｖａｎｃｅｄ ｓｔａｇｅｄ）の試験については、処置を開始する前に、腫瘍を５日間以上増殖させた。腫瘍を、カリパーを用いて週に２度測定した。マウスを、それらの腫瘍が１５００ｍｇに達した場合に屠殺した。腫瘍重量を、以下の二次元測定から見積もった。

腫瘍重量（ｍｇ）＝（ａ×ｂ^２）／２（ここで、ａおよびｂは、それぞれ、腫瘍の長さおよび幅（ｍｍ）である）
（固形腫瘍に対する抗腫瘍活性を評価するための終点）
以下の定量的な終点をしようして、抗腫瘍活性を評価した。

ａ）腫瘍増殖の遅延（Ｔ−Ｃ値）；ここで、Ｔは、処置群の腫瘍が予め決定されたサイズ（例えば、１０００ｍｇ）に達するのに必要とされる時間中央値（日）であり、そしてＣは、コントロール群の腫瘍が、同一サイズに達するのに必要とされる時間中央値（日）である。無腫瘍生存体を、これらの計算から排除した（治癒体は、別個に表化する）この値は、抗腫瘍効果の重要な判定基準である。なぜならば、この値は、腫瘍細胞死滅の定量を可能にするからである。

ｂ）皮下（ＳＣ）増殖腫瘍に対する腫瘍細胞死滅の計算、ｌｏｇ_１０細胞死滅を、以下の式：
ｌｏｇ_１０細胞総死滅（全体）＝（Ｔ−Ｃ値（日））／（３．３２）（Ｔｄ）
から算出した。ここで、Ｔ−Ｃは、上記のような腫瘍増殖の遅延であり、そしてＴｄは、指数関数的増殖（１００〜８００ｍｇの範囲）におけるコントロール群の腫瘍の対数直線増殖プロットからの最大一致直線から概算される、腫瘍体積倍化時間（日）である。処置後の腫瘍再増殖のＴｄ（Ｒｘ）は、未処置コントロールマウスにおける腫瘍のＴｄ値を近似するので、ｌｏｇ_１０細胞総死滅へのＴ−Ｃ値の変換が可能である。

対数腫瘍細胞死滅への腫瘍増殖遅延（Ｔ−Ｃ値）の変換の問題は、このシリーズにおいて正当化される。なぜならば、多くの治癒体が、研究した５つの試薬により得られるからである。治癒体は、腫瘍細胞死滅の明確な指標である（腫瘍細胞複製の停止ではなく）。

選択された事例において、歴史的なインビボ評価のデータおよび本明細書中に示されるデータの両方について、顕著に異なる試験スケジュールの試験からの対数死滅数を比較することに価値がある。この目的のために、活性表を作成し、そしてそれを以下に示す。＋＋＋から＋＋＋＋までの活性等級は、マウスの１００〜３００ｍｇの大きさの最も移植された固体腫瘍の部分的回帰（ＰＲ）または完全な回帰（ＣＲ）をもたらすのに必要とされることに注意されたい。従って、＋または＋＋の活性等級は、通常の臨床的評価により活性であるとスコア付けされない。ＰＲは、処置前サイズの５０％未満までの腫瘍塊の減少である。ＣＲは、明瞭なサイズを下回る腫瘍塊の減少（すなわち、検出可能な塊がゼロになるまでの減少）である。

処置群およびコントロール群を、コントロール群の腫瘍が訳７００〜１２００ｍｇの大きさに達した場合（群の中央値）に測定した。Ｔ／Ｃ値（パーセント）は、抗腫瘍効果の指標である：Ｔ／Ｃ＝０％は、腫瘍の増殖がないことを意味する。Ｔ／Ｃ＝１００％は、抗腫瘍活性がない（すなわち、処置腫瘍とコントロール腫瘍とが等しく成長したこと）を意味する。Ｔ／Ｃが４２％以下であることは、Ｄｒｕｇ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ Ｂｒａｎｃｈ ｏｆ ｔｈｅ Ｄｉｖｉｓｉｏｎ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ（ＮＣＩ）により有意な抗腫瘍活性であるとみなされる。Ｔ／Ｃ値＜１０％は、高度に有意な抗腫瘍活性を示すとみなされ、そして毒性、処方、および特定の他の要件を満たす（ＤＮ−２レベル活性と呼ばれる）場合に臨床試験を正当化するために、ＮＣＩにより使用されるレベルである。２０％より高い体重の減少の最下点（群の平均）または２０％より高い薬物死は、ほとんどの単一課程試験において、過剰な毒性用量を示すとみなされる。

（マウス注射用の薬物調製物）
試験Ａ〜Ｈの化合物２２ｂ（ナトリウム塩）を、１％の重炭酸ナトリウム溶液、ｄＨ_２Ｏ、またはリン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）中で、ＨＣｌによりｐＨを７．０〜７．５に調節しながら調製し、そして１回の注射に０．２ｍｌの注射体積で静脈内（ＩＶ）または経口（ＰＯ）投与した。

（試験Ａ）
（初期段階の膵管腺癌０３に対する評価）
膵管腺癌０３腫瘍は、タキソールに対して高度に感受性である（＋＋＋＋活性等級）。この腫瘍は、アデノマイシンに対して感受性であり（＋＋＋活性等級）、ＶＰ−１６、シトキサン（ｃｙｔｏｘａｎ）、およびＣｉｓＤＤＰｔに対して中程度に感受性であり（＋＋活性等級）、そして５−ＦＵに対して穏やかに感受性である（＋活性）。雌のＢＤＦ１マウス（ＮＣＩ−Ｒａｌｅｉｇｈから入手される）（誕生日（本明細書以後、Ｄ．Ｏ．Ｂ）２０００年３月２７日；入手日（本明細書以後、Ｄ．Ｏ．Ａ．）２０００年４月９日）に、処置群とコントロール群とに分けて、膵管腺癌０３腫瘍（腫瘍移植日（本明細書以後、Ｄ．Ｏ．Ｔ．）２０００年３月１７日）を移植した。この処置群に、３日目〜９日目に毎日、化合物２２ｂを静脈内投与した。試験Ａの結果を、表１に要約した。

（試験Ｂ）
（初期段階Ｂ１６黒色腫に対する評価）
Ｂ１６黒色腫は、皮下（ＳＣ）移植された場合に、非常に薬物非感受性の腫瘍である。Ｂ１６黒色腫は、Ｖ−１６、ビンブラスチン、およびＡｒａ−Ｃに対して非応答性であり（ネガティブ（−）活性等級）、タキソール、アドリアマイシンおよびカンプトテシンに対してわずかに応答性であり（＋または＋／−活性等級）、５−ＦＵ、シトキサンおよびＣｉｓＤＤＰｔに対して穏やかに応答性である（＋＋活性等級）。ＢＣＮＵおよび他のニトロソウレアのみが、高度に活性である（＋＋＋＋活性等級）。

ＢＤＦ１雌マウス（ＮＣＩ−ＣＲＬ−Ｒａｌから入手される）（Ｄ．Ｏ．Ｂ．２０００年１月２４日、Ｄ．Ｏ．Ａ．２０００年２月２９日）。このマウスの平均重量は、２１．６ｇであった。マウスに、Ｂ１６黒色腫細胞（継代数１３８）を移植した（Ｄ．Ｏ．Ｔ．２０００年４月１７日）。Ｔｄ（腫瘍体積倍加時間）は、１日であった。このマウスを、コントロール群と３つの実験群に分けた。このコントロール群（ケージ番号１）は、処置を受けなかった。

ケージ番号１は、７日目に１０００ｍｇに達し（１．０日のＴｄ）、そして腫瘍増殖は、予想された通りであった。

ケージ番号２において、化合物２２ｂ（ラセミ体）を、１日目〜４日目に１日に１回、４０ｍｇ／ｋｇ／注射で静脈内投与した。全部で３２０ｍｇ／ｋｇを投与した。この用量は、毒性であり、１／５の薬物死（７日目に生じる）を生じた。死の原因は、小さな脾臓サイズによって実証されるように、骨髄毒性であった。胃腸管の実験は、胃腸管が、死の前に食物を摂取されずに空のままであることを明らかにした。この用量は、重篤な体重減少を生じた（−２０．８％；７日目に最下点を生じ、１１日目に完全に回復した）。−２０％の体重の減少は、Ｎ．Ｃ．Ｉ．標準によって、過剰に毒性であるとみなされる。ここで、化合物２２ｂ（ラセミ体）の投与は、マウスの神経伝導を遅延させることと関連した。５０ｍｇ／ｋｇの用量で、この毒性は穏やかであるが、１日目に２０分間、そして４日目に８分間続いた。高い用量（例えば、８０ｍｇ／ｋｇ）において、この薬剤は、２０分以上続く、実質的な注射後の神経筋毒性を生じたが、２時間で解消した。これは、後足の特有の麻酔状態を含み、この毒性が、伝導速度に関連することを示した。なぜなら、この神経が長くなるほど、より多くの機能に影響を与えたからである。以後で議論されるように、この神経伝導の遅延は、この系のラセミ体およびＳ−エナンチオマーにより生じる。全ての場合において、Ｒ−エナンチオマー形態は、存在しない。

ケージ番号３において、化合物２２ｂに、１日目〜５日目に毎日、５０ｍｇ／ｋｇ／注射で静脈注射した。全部で２５０ｍｇ／ｋｇを投与した。この用量において、体重減少の割合が、−１３％であった（７日目に最下点を生じ、１１日目に完全に回復した（４日の宿主回復時間））。この用量は、活性であった（Ｔ／Ｃ＝０、２．６ ｌｏｇの殺傷、＋＋＋活性等級）。

ケージ番号４において、化合物２２ｂに、１日目〜６日目に毎日、３０ｍｇ／ｋｇ／注射（全部で１８０ｍｇ／ｋｇの投与）で静脈内投与した。この用量は、７．４％の体重減少を生じた（５日目に最下点を生じ、９日目に完全に回復した）。この用量は、活性であった（Ｔ／Ｃ＝１５．６％、１．８ｌｏｇの殺傷、＋＋活性等級）。

試験Ｂの結果を、表２に要約する。

（試験Ｃ）
（初期段階乳腺癌−１６／Ｃ／Ａｄｒに対する評価）
初期段階乳腺癌−１６／Ｃ／Ａｄｒは、ｐ−糖タンパク質ネガティブ多剤耐性腫瘍である。Ｃ３Ｈ雌マウスを、ＮＣＩ−Ｋｉｎｇｓｔｏｎ−ＣＲＬから得た（Ｄ．Ｏ．Ｂ．２０００年４月３日；Ｄ．Ｏ．Ａ．２０００年５月１６日）。このマウスの平均重量は、２６．３ｇであった。マウスに、初期段階乳腺癌−１６／Ｃ／Ａｄｒ（継代数１８３）を移植し、そしてコントロール群（ケージ番号１）および２つの実験群（ケージ番号２およびケージ番号３）に分けた（Ｄ．Ｏ．Ｔ．＝２０００年６月２２日）。コントロール動物（ケージ番号１）は、処置を受けなかった。化合物２２ｂのラセミ形態（クロロアナログ）を、以下のような実験群に投与した：

ケージ番号１は、１６日目に１０００ｍｇに達し（１．２日のＴｄ）、そして腫瘍増殖は、予想された通りであった。

ケージ番号２において、５０４ｍｇ／ｋｇの総投薬量の化合物２２ｂを静脈内投与した。この処置は、注射後に約１０分間続く、適度の神経筋歩行障害を生じた。この毒性は、最初の２日間に最も明らかであり、続く注射により明らかでなくなった。この用量は、−１５％の体重減少を生じた（７日目に最下点を生じ、１２日目に完全に回復した）。興味深いことに、マウスは、処置の第２の過程（１１〜１３日）の間に体重が増えた。この薬剤は、この用量において活性であった（Ｔ／Ｃ＝０％、２．０ ｌｏｇの殺傷、＋＋＋活性等級）。

ケージ番号３において、全部で３２４ｍｇ／ｋｇの化合物２２ｂを投与した。この用量は、有意でない歩行障害、およびケージ番号３の動物において−１．１％の体重の減少を生じた（７日目に最下点を生じ、８日目に完全に回復した）。この薬剤は、この用量スケジュールにおいて不活性であった（Ｔ／Ｃ＝５３％、０．６ ｌｏｇの殺傷）。試験Ｃの結果を、表３に要約する。

（試験Ｄ）
（初期段階の乳腺癌−１７／Ａｄｒに対するラセミ化合物２２ｃの評価）
化合物２２ｃのラセミ混合物（ブロモアナログ）を、多剤耐性乳癌（Ｍａｍ−１７／Ａｄｒ）に対して評価した。

雌Ｃ３Ｈ／ＨｅＮ（ＭＴＶ−ｎｅｇ）マウスを、Ｎ．Ｃ．Ｉ．Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋから入手した（Ｄ．Ｏ．Ｂ．は、２０００年１０月９日であった；Ｄ．Ｏ．Ａ．は、２０００年１１月１４日であった）。このマウスの体重は、平均２９．３ｇであった。マウスに、Ｍａｍ−１７／Ａｄｒ／継代２２０（ｐ−糖タンパク質ポジティブ多剤耐性腫瘍）を移植した（Ｄ．Ｏ．Ｔ．は、２００１年１月２日であった；Ｔｄ＝１．０日）。化合物２２ｃ（ラセミ体）を、溶液に影響を与えるように、５％のエタノール、１％のＰＯＥ−８０、および１％の重炭酸ナトリウム中に懸濁させることで投与するために調製した。次いで、Ｐ．Ｂ．Ｓ．を添加し、そしてＨＣｌによりｐＨを７に調節した。１回の注射当たり０．２ｍｌを、静脈内投与した。

ケージ番号１動物は、処置を受けなかった。腫瘍の増殖は、予想された通りであり、７日間で１０００ｍｇに達した（範囲７〜９）（Ｔｄ＝１．０日）。

ケージ番号３の動物に、１日目に５０ｍｇ／ｋｇ／注射；２日目に６２．５ｍｇ／ｋｇ；および３、６、７、８日目に６０ｍｇ／ｋｇ／注射で、全部で３５２．５ｍｇ／ｋｇの化合物２２ｃのラセミ調製物を静脈内投与した。この用量は、適度の−５．５％体重減少を生じた。この薬剤は、６０〜６２．５ｍｇ／ｋｇの用量で約１０分間続く、神経伝導の適度の遅延を生じた。この症状は、穏やかな歩行障害であった。この用量は、強力な抗腫瘍活性を有した（Ｔ／Ｃ＝０、４．２ ｌｏｇの殺傷、＋＋＋＋活性等級）。腫瘍は、２１日目に１０００ｍｇに達した（１９〜４２の範囲）。どの抗腫瘍剤、標準または調査も、この腫瘍に対する、この活性の程度を超えなかった。

ケージ番号４の動物に、１日目に３０ｍｇ／ｋｇ；２日目に３７．５ｍｇ／ｋｇ；および３、６、７、８日目に３６ｍｇ／ｋｇ／注射で、全部で２１１．５ｍｇ／ｋｇの化合物２２ｃのラセミ調製物を静脈内に与えた。この用量において、歩行障害は存在しなかった。この用量はまた、高度に活性であった（３．０ ｌｏｇの殺傷）。腫瘍は、１７日目に１０００ｍｇに達した（範囲１４〜２１）。

化合物２２ｃのラセミ調製物は、化合物２２ｂのラセミ調製物を試験するのに観測されたのと同一の型の神経筋毒性を有したが、重篤ではないことが見出された（試験Ｂを参照のこと）。

結果を、表４に示す。

（試験Ｅ）
（初期段階の乳腺癌−１７／Ａｄｒに対する化合物２２ｂおよび化合物２２ａのＲ−エナンチオマーの評価）
化合物２２ｂおよび化合物２２ａのＲエナンチオマー（フルオロアナログ）の活性を、乳癌Ｍａｍ−１７／Ａｄｒ（これは、ｐ−糖タンパク質ポジティブ多剤耐性腫瘍）に対する活性について評価した。Ｃ３Ｈ／ＨｅＮ（ＭＴＶ−ｎｅｇ）雌マウスを、Ｎ．Ｃ．Ｉ．−Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋから入手した（Ｄ．Ｏ．Ｂ．は、２０００年１１月２０日であった；Ｄ．Ｏ．Ａ．は、２００１年１月２日であった）。マウスの平均重量は、２５．９ｇであった。マウスに、Ｍａｍ−１７／Ａｄｒ／継代−２２３を移植し（Ｄ．Ｏ．Ｔ．は、２００１年２月１２日であった；Ｔｄは、１．２日であった）、そしてコントロール群および処置群に分けた。

化合物２２ａのラセミ調製物を、溶液に影響を与えるように、３％のエタノール、１％のＰＯＥ−８０、および０．２５％の重炭酸ナトリウム中に懸濁した。次いで、Ｐ．Ｂ．Ｓ．を添加し、そしてＨＣｌによりｐＨを７に調節した。１回の注射当たり０．２ｍｌの体積を、動物に静脈内注射した。化合物２２ｂのＲエナンチオマーを、溶液に影響を与えるように、３％のエタノール、１％のＰＯＥ−８０、および０．２５％の重炭酸ナトリウム中に懸濁した。次いで、Ｐ．Ｂ．Ｓ．を添加し、そしてＨＣｌによりｐＨを７に調節した。１回の注射当たり０．２ｍｌの体積を、動物に静脈内注射した。

ケージ番号１のコントロール群は、処置を受けず、そして９．０日で１０００ｍｇに達した（８．５〜１０）（１．２日のＴｄ）。腫瘍増殖は、予想された通りであった。

ケージ番号３に、１日目に３６ｍｇ／ｋｇ、および２〜７日目に４８ｍｇ／ｋｇ／注射で、全部で３２４ｍｇ／ｋｇのラセミ化合物２２ａを静脈内投与した。個々のより多量の投薬は、重篤な神経筋毒性（神経伝達の遅延は、前足および後足の両方の機能障害性の脚運動を生じる）のために、与えられ得なかった。この機能障害は、前足で１５分間、後足でそれより長く持続した。この用量は、活性であった（Ｔ／Ｃ＝１４％、１．５ ｌｏｇの殺傷、＋＋活性等級）。活性であったが、これは、化合物２２ｂまたは化合物２２ｃよりも明らかに良好でなかった。

ケージ番号４およびケージ番号５は、ケージ番号３よりもラセミ化合物２２ａ調製物のより少ない用量を受けた。

ケージ番号６に、化合物２２ｂのＲ−エナンチオマーを投与し、そして神経筋毒性を生じなかった。試験Ｂにおいて、化合物２２ｂのラセミ形態は、神経伝達において遅延を生じた。この結果は、Ｓ−エナンチオマーが化合物２２ｂの神経筋毒性の原因であることを意味した。このＳ−エナンチオマー形態は、後で合成され、そして８０ｍｇ／ｋｇ／注射および５０ｍｇ／ｋｇ／注射で静脈内注射され、この両方は、顕著な神経筋毒性を生じた。ケージ番号６において、化合物２２ｂのＲ−エナンチオマーを、１〜４日目に８３ｍｇ／ｋｇ／注射であって、全部で３３２ｍｇ／ｋｇで静脈内注射した。この用量は毒性であり、５匹のマウス全てが（７、７、８、９、１０日目）に死んだ。死の原因は、下痢をもたらすＧＩ上皮脱落を生じるＧＩ−上皮損傷であった。このマウスの内の３匹は、食物を充填した胃がわずかに拡張し、胃不全麻痺または麻痺性イレウスを示した。全てのマウスの脾臓の大きさは、正常に近く、薬剤が、マウスにおいてほとんど骨髄毒性を生じないことを示した。

ケージ番号７に、５５ｍｇ／ｋｇ／注射で、毎日１〜４回２２０ｍｇ／ｋｇの合計用量で化合物２２ｂのＲエナンチオマーをＩＶ投与した。この用量はいくらか毒性であり、１／５の薬物死および大きな体重減少（９日目に最下点−２３．４％、そして１４日目に完全な回復）を生じた。１匹の死亡は、骨髄毒性（小さな脾臓）を併発した胃腸上皮損傷（下痢）によるものであった。しかし、この用量は、高度に活性（Ｔ／Ｃ＝０、３．３ｌｏｇ死亡、＋＋＋＋活性度）であった。腫瘍は、２２（１８−２３）日目に１０００ｍｇに達した。

ケージ番号８は、１匹のマウスしか含まず、これを、神経筋毒性を評価するための初期毒性コントロールに使用した。１日目のみに、１２４．５ｍｇ／ｋｇで化合物２２ｂのＲエナンチオマーの調製物を、単回ボーラス投薬量で注射した。神経筋毒性はなかった。この用量は、穏やかに活性であり、そして毒性ではなかった（Ｔ／Ｃ＝３５％、０．８ｌｏｇ死亡、＋活性度）。

従って、このデータは、化合物２２ａが活性であることを示していた（ケージ番号２）。化合物２２ｂのＲエナンチオマー（薬剤のラセミ体に存在する）は、神経筋毒性を欠いていた。Ｓエナンチオマーを作製し、そして試験し、そして神経筋毒性の原因であることを見出した。

結果を表５に示す。

（試験Ｆ）
（初期乳腺腺癌１６Ｃに対する、化合物２２ｂのＲエナンチオマーおよび化合物２２ｃのＲエナンチオマーの評価）
この試験において、化合物２２ｃおよび化合物２２ｂの両方のＲエナンチオマーを比較した。各化合物は、神経筋毒性が全くなかった。致死用量限界毒性は、類似している（胃腸上皮損傷）。

Ｃ３Ｈ雌性マウスを、Ｎ．Ｃ．Ｉ．から入手した（Ｄ．Ｏ．Ｂ．は、２００１年１月２２日であった；Ｄ．Ｏ．Ａ．は、２００１年１月２７日であった）。これらのマウスの平均体重は、１９．２ｇｍであった。マウスに、乳腺腺癌１６／Ｃ（継代１７０）（急速に成長し、高度に侵襲性で、高度に転移性の腫瘍）をＳＣに移植した（Ｄ．Ｏ．Ｔ．は、２００１年３月８日であった；Ｔｄは、１．２日であった）。

化合物２２ｃおよび化合物２２ｂの両方のＲエナンチオマーを、それぞれ３％エタノール、１％ ＰＯＥ−８０、０．５％炭酸水素ナトリウム（体積基準）に懸濁して溶液とし、次いで、Ｐ．Ｂ．Ｓを添加してｐＨをＨＣｌで７に調整した。アドリアマイシン（ＡＤＲＩＡ；ロット番号２０３３８ｃ）を、ｄＨ_２Ｏに懸濁して溶液とし、そしてｐＨを６．０に調整した。マウスに、ＩＶ注射１回あたり０．２ｍｌを投与した。

ケージ番号１には処置を施さず、そして腫瘍成長は、予測どおりであった。これらの腫瘍は、９．５日目（７〜１２日の範囲）に１０００ｍｇに達した（Ｔｄ＝１．０日）。

ケージ番号２のマウスに、６５ｍｇ／ｋｇ／注射で、毎日１〜４回合計２６０ｍｇ／ｋｇで化合物２２ｃのＲエナンチオマーをＩＶ投与した。これらの注射後、神経筋毒性は、生じなかった。全てのマウスが、最後の処置の２〜３日後にＧ．Ｉ．上皮損傷により死亡した。

ケージ番号３のマウスに、一日おきに（１、３、５、７日目にそれぞれ１回）６５ｍｇ／ｋｇ／注射で合計２６０ｍｇ／ｋｇの化合物２２ｃのＲエナンチオマーを、ＩＶ投与した。このアナログシリーズに対して非常に急速な宿主回復時間を維持したまま、１匹も死亡しなかった。マウスは、−８．３％の体重減少であった（９日目に最下点、１２日目に完全に回復）。このことは、この断続的なスケジュールでの総用量が、適切であるが過剰ではないということを示す。また、この用量スケジュールでは神経筋毒性は全くなかった。この用量は、活性であった（Ｔ／Ｃ＝４％；１．７Ｌｏｇ死亡；＋＋活性度）。

ケージ番号４のマウスに、ケージ番号３と同じスケジュール（すなわち、１、３、５、７日目）で、４０ｍｇ／ｋｇ／注射で合計１６０ｍｇ／ｋｇの化合物２２ｃのＲエナンチオマーをＩＶ投与した。毒性は全くなく、そしてマウスは、処置の間に体重を獲得した（＋６．４％の体重獲得）。この用量もまた活性であった（Ｔ／Ｃ＝９％；１．４Ｌｏｇ死亡；および１／５治癒；治癒を考慮しない場合、＋＋活性度）。腫瘍を有さないマウスに、１５５日目にＭａｍ１６／Ｃ腫瘍を再移植した。移植物は、首尾よく増殖した。このことは、免疫原性因子が、元来の治癒には関与していなかったことを示している。

ケージ番号５のマウスに、５０ｍｇ／ｋｇ／注射で、毎日１〜５回、合計２５０ｍｇ／ｋｇの化合物２２ｂのＲエナンチオマーをＩＶ投与した。神経筋毒性は、注射後なかった。この用量は、過剰な体重減少を生じたが、死亡はなかった。これらのマウスは、５日以内に全ての体重を再獲得した（８日目で−２２．９％の体重減少、１３日目の完全な回復、これは、体重減少の一部が脱水によることを示している）。この用量は、高度に活性であった（Ｔ／Ｃ＝０％；２．１Ｌｏｇ死亡；＋＋＋活性度）。

ケージ番号６のマウスに、５０ｍｇ／ｋｇ／注射で、１、３、５、７日目に化合物２２ｂのＲエナンチオマーの合計２００ｍｇ／ｋｇをＩＶ投与した。この用量は、十分に許容され、そして体重減少を生じなかった。これは活性であった（Ｔ／Ｃ＝５％；１．７Ｌｏｇ死亡；＋＋活性度）。体重減少がなかったことを考慮して、このスケジュールでより高い用量が投与され得るようである。

ケージ番号７のマウスに、３０ｍｇ／ｋｇ／注射でケージ６と同じスケジュールで、合計１２０ｍｇ／ｋｇの化合物２２ｂのＲエナンチオマーをＩＶ投与した。これらのマウスは、体重を獲得した。この用量は、穏やかに活性であった（Ｔ／Ｃ＝３２％；０．８Ｌｏｇ死亡；＋活性度）。

ケージ番号１１のマウスに、アドリアマイシンをポジティブコントロールとして投与した。歴史的に、アドリアマイシンは、この腫瘍に対する最も活性な薬剤の１つである。７．５ｍｇ／ｋｇ／注射を、合計１５ｍｇ／ｋｇで１日目および５日目にＩＶで投与した。体重減少は観察されなかったが、これらのマウスは、１１日まで体重を獲得し始めず、次いで穏やかにのみ獲得し始めた。この群では、１匹が遅れて薬物死した。予測されたように、この薬剤は、高度に活性であった（Ｔ／Ｃ＝０％；３．６Ｌｏｇ死亡；毒性用量であるが、＋＋＋＋活性度）。

１０％未満の体重減少を生じた投薬量において、化合物２２ｂのＲエナンチオマーおよび化合物２２ｃのＲエナンチオマーは、等しく活性であり、それぞれ１．７Ｌｏｇ死亡であった（ケージ３および６を参照のこと）。等しく活性な投薬量において、化合物２２ｂのＲエナンチオマーは、化合物２２ｃのＲエナンチオマー（２６０ｍｇ／ｋｇ、ケージ４を参照のこと）よりも、わずかに低い用量必要量を有していた（２００ｍｇ／ｋｇ、ケージ６を参照のこと）。

結果を表６に示す。

（試験Ｇ）
（後期膵管腺癌０３に対する化合物２２ｃおよび２２ｂのＲエナンチオマーの評価）
この試験において、化合物２２ｃおよび２２ｂのＲエナンチオマーを比較した。

ＢＤＦ１雌性マウスを、Ｎ．Ｃ．Ｉ．、ＣＲＬ−Ｒａｌから入手した（Ｄ．Ｏ．Ｂ．は、２００１年２月２６日であり；Ｄ．Ｏ．Ａ．は、２００１年３月１０日であった）。これらのマウスは、２２．５ｇｍの平均体重であった。マウスに、膵管腺癌０３（継代１４３）をＳＣに移植した（Ｄ．Ｏ．Ｔ．は、２００１年５月２９日であった；Ｔｄは、２．３日であった）。

化合物２２ｃのＲエナンチオマーを、３％エタノール、１％ＰＯＥ−８０、０．２５％炭酸水素ナトリウム（体積基準）に懸濁して溶液とした。次いで、ｄＨ_２Ｏを添加し、そしてｐＨをＨＣｌで７に調整した。マウスに、ＩＶ注射あたり０．２ｍｌを投与した。化合物２２ｂのＲエナンチオマーを、３％エタノール、１％ＰＯＥ−８０、０．５％炭酸水素ナトリウム（体積基準）に懸濁して溶液とした。次いで、ｄＨ_２Ｏを添加し、そしてｐＨをＨＣｌで７．５に調整した。マウスに、ＩＶまたはＰＯで注射あたり０．２ｍｌを注射した。アドリアマイシン（供給源ＡＤＲＩＡ；ロッ ト２０３３ＢＣ）を、ｄＨ_２Ｏに懸濁して溶液とし、そしてｐＨを６．０にした。マウスに、ＩＶ注射あたり０．２ｍｌを投与した。

移植の６日後に処置を開始し、この時点で腫瘍は、触知可能なサイズ（１２６ｍｇメジアン）であった。これらの化合物間の有効性における明確な分離を得るために、処置期間」を延長した（１８日）。

ケージ番号１は処置を全く受けず、そして腫瘍成長は予測どおりであった。これらの腫瘍は、１６．５日目（１５〜２１の範囲；Ｔｄ＝２．３日）には１０００ｍｇに達した。

ケージ番号２のマウスに、８０ｍｇ／ｋｇ／注射で、断続的スケジュール（６、９、１２、１５、１８、２１、２４日目に１回／日）で合計５６０ｍｇ／ｋｇの化合物２２ｂ（Ｒエナンチオマー）をＩＶ投与した。このレジメンは、体重減少も死亡もなく、十分に許容された。これらのマウスを、ＩＶ注射後に震えていたが、この挙動は、数分間しか続かなかった。Ｒエナンチオマーに神経筋毒性はなかった。この用量は活性であった（２．３ｌｏｇ死亡、２／７ＰＲ、＋＋＋活性度）。この用量スケジュールは、明らかに化合物２２ｃ（Ｒエナンチオマー）より劣っていた。

ケージ番号３のマウスに、断続的なスケジュール（６、９、１２、１５、１８、２１、２４日目にそれぞれ１回／日）で、５０ｍｇ／ｋｇ／注射で合計３５０ｍｇ／ｋｇの化合物２２ｂ（Ｒエナンチオマー）を、ＩＶ投与した。このレジメンは、体重減少も死亡もなく、十分に許容された。この用量は、活性であった（１．５ｌｏｇ死亡、１／６ＣＲ、＋＋活性度）。

ケージ番号４のマウスに、断続的なスケジュール（６、９、１２、１５、１８、２１、２４日目にそれぞれ１回／日）で、３１ｍｇ／ｋｇ／注射で合計２１７ｍｇ／ｋｇの化合物２２ｂ（Ｒエナンチオマー）を、ＩＶ投与した。このレジメンは、実質的な体重増加で、十分に許容された。この用量は、活性でなかった（０．５ｌｏｇ死亡、−活性度）。

ケージ番号５のマウスに、毎日のスケジュール（毎日６〜２４）で、３１．２ｍｇ／ｋｇ／注射で合計５９２．８ｍｇ／ｋｇの化合物２２ｂ（Ｒエナンチオマー）を、ＳＣ投与した。このレジメンは、少しの体重減少のみであり死亡もなく、十分に許容された。このマウスは、ＳＣ注射後、震えなかった。この用量は、中程度の活性のみであった（０．９ｌｏｇ死亡、１／５ＣＲ、＋活性度）。腫瘍を有さないマウスに、１５７日目にＰ０３の腫瘍フラグメント（３０ｍｇ）を再移植した。移植物は、増殖した。このことは、免疫因子が、元来の治癒には関与していなかったことを示している。このＳＣの毎日のスケジュールは、ＩＶの断続的スケジュールより明らかに劣っていた（ケージ番号２と比較して）。

ケージ番号６のマウスに、毎日のスケジュール（毎日６〜２４）で、１９．５ｍｇ／ｋｇ／注射で合計３７０．５ｍｇ／ｋｇの化合物２２ｂ（Ｒエナンチオマー）を、ＳＣ投与した。このレジメンは、体重減少も死亡もなく、十分に許容された。このマウスは、ＳＣ注射後、震えなかった。この用量は、活性でなかった（０．４ｌｏｇ死亡、−活性度）。このＳＣの毎日のスケジュールは、ＩＶの断続的スケジュールより明らかに劣っていた（ケージ番号３と比較して）。

ケージ番号１２のマウスに、化合物２２ｃ（Ｒエナンチオマー）を投与した。限定された薬物スプレーのみが、利用可能であり、従って、１用量レベルＩＶのみを試験し、そして１グループあたり４マウスのみを使用し得た。化合物２２ｃを、断続的なスケジュール（６、９、１２、１５、１８、２１、２４日目にそれぞれ１回／日）で、８０ｍｇ／ｋｇ／注射で合計４８０ｍｇ／ｋｇで、ＩＶ投与した。薬物スプレーが消耗したので、２４日目の注射は省かれた。このレジメンは、体重減少も死亡もなく、十分に許容された。このマウスは、ＩＶ注射後、震えたが、この挙動は、数分間しか続かなかった。化合物２２ｂで生じた震えよりも、この化合物のアナログでより少ない震えであった。Ｒエナンチオマーに神経筋毒性はなかった。この用量は高活性であった（３．１ｌｏｇ死亡、３／４完全な回復、＋＋＋＋活性度）。化合物２２ｃを用いたこの用量スケジュールは、この膵管腺癌に対して、化合物２２ｂに対して顕著に有意であった。

ケージ番号１３のマウスに、アドリアマイシンをポジティブコントロールとして投与した。歴史的に、アドリアマイシンは、この腫瘍に対して高活性である。７．５ｍｇ／ｋｇ／注射の用量を、合計１５ｍｇ／ｋｇ（およそ最大の許容用量）で６日目および１４日目にＩＶで投与した。これは、この試験において十分に許容であり、体重減少も死亡もなかった。予測されたように、この薬剤は活性であった（２．３ｌｏｇ死亡；１／５ＣＲ、＋＋＋活性度）。

化合物２２ｃ（Ｒエナンチオマー）は、ＩＶで与えられる断続的な用量スケジュール、化合物２２ｂに対して顕著に有意であった。この断続的なスケジュールＩＶは、毎日の経口スケジュールに対して明らかに有意であった。

結果を表７に示す。

（試験Ｈ）
（メスＢａｌｂ／ｃマウスの進行期結腸癌２６に対する、ＸＫ−４６９、化合物２２ｂおよび化合物２２ｃのＲエナンチオマーおよび化合物２２ｃのＲエナンチオマーの評価）
（Ｂａｌｂ／ｃマウス）
この試験において、ＸＫ−４６９、化合物２２ｃおよび化合物２２ｂのＲエナンチオマーを、メスのＢａｌｂ／ｃマウスの進行期結腸癌２６について比較した。化合物２２ｃは、この結腸癌に対して、化合物２２ｂまたは化合物ＸＫ−４６９よりも顕著に活性であった。ケージ番号２は４００ｍｇ／ｋｇで２２ｂ、そしてケージ番号４は４００ｍｇ／ｋｇで２２ｃであった。両方は毒性であり、そしてこの表から省いた。

「＊」（アスタリスク）は、腫瘍が高い転移性かつ毒性であり、実質的な体重減少を引き起こすことを示す。許容されたグループにおいて、体重減少は、腫瘍が実質的に嵌入する前に測定された。

ＸＫ４６９−Ｒ化合物、２２ｂ化合物および２２ｃ化合物の用量を、３％エタノール、１％ ＰＯＥ−８０、０．５％炭酸水素ナトリウムを使用して、全て同様に調製した。注射体積は、１匹のマウスあたり０．２ｍＬ、ＩＶであった。サイトキサン（ｃｙｔｏｘａｎ）を、ｄＨ_２Ｏ中で調製し、そして１匹のマウスあたり０．２ｍＬの体積でＩＶ注射した。このマウスは、Ｂａｌｂ／ｃ雌マウスであった：ＤＯＢ ２／１２／０１；ＤＯＡ ３／２７／０１；ＤＯＴ８／８／０１、Ｒｘ投与の開始時で、平均２４．７ｇの体重であった。この腫瘍は、結腸癌２６であり（継代１４１）であった；移植の日８／８／０１、そして３０〜６０ｍｇフラグメントで両方のＳＣに移植された。全ての腫瘍は、６日目（始めのＲｘの日）で６３〜１７１ｍｇであった。

ケージ番号１：コントロール：予測されるような増殖、１．７日 Ｔｄ。

ケージ番号３：２２ｂ；５０ｍｇ／ｋｇ／注射を、６、８、１０、１３および１５日目に合計２５０ｍｇ／ｋｇでＩＶで与えた。これは、１／６の完全な回復および１．４ｌｏｇ死亡（＋＋活性度）を生じた。

ケージ番号５：２２ｃ：１回の注射当たり５０ｍｇ／ｋｇを、６日目、８日目、１０日目、１３日目および１５日目に、ＩＶに施した（総量２５０ｍｇ／ｋｇ）。このことは、５５日目に、３／６に完全な退行、および３／６に腫瘍のない生存体を生じた。これらのマウスは、体重および骨格のサイズを増加させながら、良好な状態で生き残った。このマウスに、１５６日目にＣｏｌｏｎ−２６の３０ｍｇ片を再移植した。この移植物は、首尾良く増殖し、このことは、免疫因子が最初の治癒には関与しなかったことを示す（＋＋＋＋の活性評点）。

ケージ番号６：ＸＫ４６９−Ｒ：１回の注射当たり８０ｍｇ／ｋｇを、６日目、８日目、１０日目、１４日目および１６日目に、ＩＶに注射した（総量４００ｍｇ／ｋｇ）（歴史的なＭＴＤは４００〜４５０ｍｇ／ｋｇの範囲内にある）。退行はなかった。この投薬量は、０．９ｌｏｇの殺傷を生じた（＋の活性評点）。

ケージ番号７：ＸＫ４６９−Ｒ：１回の注射当たり５０ｍｇ／ｋｇを、６日目、８日目、１０日目、１３日目および１５日目に、ＩＶに施した（総量２５０ｍｇ／ｋｇ）。この用量は、不活性であった。

ケージ番号８：シトキサン（ｃｙｔｏｘａｎ）を、１回の注射当たり１１０ｍｇ／ｋｇで６日目、および１０日目に、ＩＶに施した（総量２２０ｍｇ／ｋｇ）。有意な活性ななかった。処置が１日目（移植後の日）に開始される場合、歴史的にＣｙｔｏｘａｎはこの腫瘍に対して活性である。

これらの結果を表８に提示する。

本発明はここで、以下の非限定的な実施例によって例示される。

（実施例１）
（［４−［（７−置換−２−キノリニル）オキシフェノキシ］−プロピオン酸の合成（スキームＩ〜ＩＩＩ））
スキームＩに示されるように、エチルビニルエーテル（２）およびオキサリルクロライド（３）の反応、それに続く脱炭酸反応による、ｔｒａｎｓ−３−エトキシアクリロイルクロライド（４）のワンポット調製は、Ｔｉｅｔｚｅら（Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，１０７９−１０８０（１９９３））に記載されている。４を用いるメタ置換アニリン（５ａ−ｅ）のアミド化（すなわち、６ａ−ｅへの転換）を、ｔｒａｎｓ−Ｎ−（４−ブロモ−３−メチルフェニル）−３−エトキシプロペンアミドの調製についてのＣａｍｐｂｅｌｌおよびＲｏｂｅｒｔｓによって記載された手順（米国特許第４，７１０，５０７号）に合わせて行った。後者ｔｒａｎｓ−Ｎ−（４−ブロモ−３−メチルフェニル）−３−エトキシプロペンアミドの、５−置換キノリン−２−オール（８ａ−３）および７−置換キノリン−２−オール（７ａ−ｅ）の混合物への環化は、濃硫酸中または濃塩酸中のいずれかで効果的であった（ＣａｍｐｂｅｌｌおよびＲｏｂｅｒｔｓ）。次いで、この混合物を、オキシ塩化リンを用いて還流する際に、対応する２−クロロキノリン誘導体（９ａ−ｅ）および（１０ａ−ｅ）へと変換した（ＣａｍｐｂｅｌｌおよびＲｏｂｅｒｔｓ）。大部分の７−置換誘導体（９ａ−ｅ）が、分別析出で位置異性体（１０ａ−ｅ）から分離した。シリカゲルによるカラムクロマトグラフィーの後、その残渣はさらに９ａ−ｃを生じた。

スキームＩＩに例示されるように、２−クロロキノリン９ａ−ｃを、ＮａＨまたはＫ_２ＣＯ_３のいずれかを使用して、ＤＭＦ中で還流して、２−（４−ヒドロキシフェノキシプロピオン酸（２０）とカップリングし、続いて酸性化して、酸を生じた（２１ａ−ｅ）。これらの酸をまた、金属水酸化物との反応によって、それらの金属塩（２２ａ−ｅ）へと転換し得る。ＸＫ４６９は（プロピオン酸部分のＣ−２に１つの立体化学中心を有する）、一般的に、ラセミ混合物の形態で調製される。２１ｂおよび２１ｃのＲ−（＋）体を、９ｂおよび９ｃを用いて市販のＲ−（＋）−２−（４−ヒドロキシフェノキシ）プロピオン酸をエーテル化することよって調製した。２１ｂおよび２１ｃのＲ体のキラルＨＰＬＣは、これらが共に９９％ｅｅで得られたことを示した（図２を参照のこと）。

ラセミ体およびＲ体の２１ｂのＨＰＬＣ分離を、ＡＳＴＥＣ Ｃｈｉｒｏｂｉｏｔｉｃ Ｔ２５０×４．６ｍｍを使用して、６５％ Ｈ_２Ｏ、３５％ ＣＨ_３ＯＨ、２０ｍＭ ＮＨ_４ＮＯ_３、１ｍＬ／分で、２５０ｎｍで検出しながら、実行した。

（一般的な実験手順）
ＤＭＦに溶解した７−置換−２−クロロキノリンおよび２−（４−ヒドロキシフェノキシ）プロピオン酸（１当量）の溶液（５ｍＬ／ｍｍｏｌ）に、６０％ ＮａＨ（３当量）を少しずつで添加し、そしてこの混合物を２時間加熱して穏やかに還流させた。冷ました後、これを濃縮して固形物を得、これに水を添加し、そしてこの溶液をＣｅｌｉｔｅを通して濾過し、次いで水で洗浄した。濾液をエーテルで抽出し、そしてこの水層を１Ｍ ＨＣｌを用いてｐＨ３〜４まで酸性化した。冷ました後、固形物を収集し、乾燥し、ＡｃＯＥに溶解し、そしてシリカゲルを通してろ過した。この濾液を、低容量に濃縮し、固形物を収集し、そしてＡｃＯＥｔ−ヘプタンから再結晶させた。

この反応をまた、ＮａＨの代りにＫ_２ＣＯ_３（２．５当量）を使用して実行し得るが、その反応時間は約１２時間まで増加される必要がある。

２−［４−［（７−フルオロ−２−キノリニル）オキシ］フェノキシ］プロピオン酸２１ａ（０．１４ｇ、ＮａＨを使用して４３％）。明黄色結晶として。

２−［４−［（７−クロロ−２−キノリニル）オキシ］フェノキシ］プロピオン酸２１ｂ（Ｋ_２ＣＯ_３を使用して８４％）。白色結晶様。

Ｒ−（＋）−２−［４−［（７−クロロ−２−キノリニル）オキシ］フェノキシ］プロピオン酸を、市販のＲ−（＋）−２−（４−ヒドロキシフェノキシ）プロピオン酸から調製した。この生成物は、ラセミ体生成物と全ての点で同一であり、［α］^２５＋１９°Ｃ ０．５、０．１Ｎ ＮａＯＨ）の旋光度を示した。

２−［４−［（７−ブロモ−２−キノリニル）オキシ］フェノキシ］プロピオン酸２１ｃ（０．６９ｇ、ＮａＨを使用して７０％）。白色結晶として。

Ｒ−（＋）−２−［４−［（７−ブロモ−２−キノリニル）オキシ］フェノキシ］プロピオン酸を、市販のＲ−（＋）−２−（４−ヒドロキシフェノキシ）プロピオン酸から調製した。この生成物は、ラセミ体生成物と全ての点で同一であり、［α］^２５＋２２．０°Ｃ ０．５、０．１Ｎ ＮａＯＨ）の旋光度を示した。

２−［４−［（７−メチル−２−キノリニル）オキシ］フェノキシ］プロピオン酸２１ｄ（ＮａＨより収率３２％）。明黄色結晶として。

２−［４−［（７−メトキシ−２−キノリニル）オキシ］フェノキシ］プロピオン酸２１ｅ（Ｋ_２ＣＯ_３より収率６６％）。明黄色結晶として。

（実施例２）
以下は、ヒトにおける治療的使用または予防的使用のための、式Ｉの化合物（「化合物Ｘ」）を含む代表的な薬学的投薬形態を例示する。

（ｉ） 錠剤１ ｍｇ／錠剤
「化合物Ｘ」 １００．０
ラクトース ７７．５
ポビドン １５．０
クロスカルメロース（ｃｒｏｓｃａｒｍｅｌｌｏｓｅ）ナトリウム １２．０
微結晶性セルロース ９２．５
ステアリン酸マグネシウム ３．０
３００．０
（ｉｉ） 錠剤２ ｍｇ／錠剤
「化合物Ｘ」 ２０．０
微細結晶セルロース ４１０．０
デンプン ５０．０
デンプングリコール酸ナトリウム １５．０
ステアリン酸マグネシウム ５．０
５００．０
（ｉｉｉ） カプセル ｍｇ／カプセル
「化合物Ｘ」 １０．０
コロイド状二酸化ケイ素 １．５
ラクトース ４６５．５
予めゼラチン化したデンプン １２０．０
ステアリン酸マグネシウム ３．０
６００．０
（ｉｖ） 注射剤 １（ｍｇ／ｍｌ） １ｍｇ／ｍｌ
「化合物Ｘ」（遊離酸形態） １．０
第二リン酸ナトリウム １２．０
第一リン酸ナトリウム ０．７
塩化ナトリウム ４．５
１．０Ｎ 水酸化ナトリウム溶液 ｑ．ｓ．
（７．０から７．５にｐＨを調製）
注射用水 ｑ．ｓ． ａｄ １ｍＬ
（ｖ） 注射剤 ２（１０ｍｇ／ｍｌ） ｍｇ／ｍｌ
「化合物Ｘ」（遊離酸形態） １０．０
第一リン酸ナトリウム ０．３
第二リン酸ナトリウム １．１
ポリエチレングリコール４００ ２００．０
０１Ｎ 水酸化ナトリウム溶液 ｑ．ｓ．
（７．０から７．５にｐＨを調製）
注射用水 ｑ．ｓ． ａｄ １ｍＬ
（ｖｉ） 噴霧剤 ｍｇ／缶
「化合物Ｘ」 ２０．０
オレイン酸 １０．０
トリクロロモノフルオロメタン ５，０００．０
ジクロロジフルオロメタン １０，０００．０
ジクロロテトラフルオロエタン ５，０００．０
上記の処方物は、薬学的技術において周知の従来の手順によって得られ得る。

全ての刊行物、特許および特許文書は、本明細書中で、個々に参考として援用されるように、参考として援用される。本発明は、種々の特定かつ好ましい実施形態および技術に関して記載されている。しかし、本発明は、本発明の本質および範囲の中にある状態で、多くの種々の改変がなされ得ることが、理解されるべきである。

図１は、Ｃｈｉｒｏｂｉｏｔｉｃ Ｔ２５０×４．６ｍｍ、６５％Ｈ_２Ｏ、３５％ＣＨ_３ＯＨ、２０ｍＭ ＮＨ_４ＮＯ_３を、１ｍＬ／分で用い、２５０ｎｍで検出した、ラセミ化合物２１ｂ（スキームＩＩ）および化合物２１ｂのＲ−エナンチオマーのＨＰＬＣ分離を示す。

Claims (14)

1. 以下の式Ｉの化合物であって：
   

   

   ここで、Ｙは、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、メチルもしくはメトキシである化合物、またはそれらの薬学的に受容可能な塩。
2. ＹがＦである、請求項１に記載の化合物。
3. ＹがＣｌである、請求項１に記載の化合物。
4. ＹがＢｒである、請求項１に記載の化合物。
5. Ｙが−ＯＭｅである、請求項１に記載の化合物。
6. Ｙがメチルである、請求項１に記載の化合物。
7. メチル基を保有する炭素が（Ｒ）配置にある、請求項１〜６のいずれか一項に記載の化合物。
8. メチル基を保有する炭素が（Ｓ）配置にある、請求項１〜６のいずれか一項に記載の化合物。
9. ２−［４−（７−クロロキノリン−２−イルオキシ）フェノキシ］プロパン酸である、請求項１に記載の化合物。
10. （Ｒ）２−［４−（７−クロロキノリン−２−イルオキシ）フェノキシ］プロパン酸である、請求項１に記載の化合物。
11. 薬学的に受容可能な賦形剤またはキャリアと組み合わせた、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に受容可能な塩を含む、組成物。
12. 医学的治療における使用のための、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の化合物。
13. 哺乳動物における癌の治療のための医薬の製造のための、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の化合物の使用。
14. 哺乳動物における癌を処置する際に使用するための組成物であって、該組成物は、有効量の請求項１〜１０のいずれか一項に記載の化合物を含有する、組成物。

Images