JP4164538B2 - 内臓脂肪蓄積抑制剤 - Google Patents

Description

本発明は、ロフェノール骨格を持つ化合物を有効成分として含有する内臓脂肪蓄積抑制剤及びこれを含有する飲食品に関する。さらに詳細には、腹腔内に蓄積される脂肪を低減し、メタボリックシンドロームの主要な原因と考えられている内臓脂肪型肥満を予防若しくは改善することができる内臓脂肪蓄積抑制剤、及び該内臓脂肪蓄積抑制剤を含有する特定保健用食品等の機能性飲食品に関する。

近年、生活習慣の欧米化に伴い急増している肥満が深刻な問題となってきている。肥満とは、摂取カロリーの過剰と運動不足などによる消費カロリーの低下から、エネルギー蓄積過剰になることであって、「身体における脂肪組織（体脂肪）が過剰に蓄積した状態」を指し、糖尿病、高血圧、高脂血症等のいわゆる生活習慣病の発症基盤となることが指摘されている。

肥満は、過剰な体脂肪の蓄積状態および体重増加現象であるが、肥満を改善するために急激な体重減少を行った場合、脂肪と共にエネルギー消費を担う筋肉も減少させてしまい、高齢者の場合には、血圧障害、股関節破損等の症状を引き起こす危険性があることが報告されている（非特許文献１）。また、体重減少を伴わない脂肪量減少を行った場合は、筋肉組織が改善する効果が期待できる運動療法について報告されている（非特許文献２）。このように、単に体重を減少させるのではなく、体脂肪の蓄積を抑制させることによって肥満を改善する方法が近年注目されている。

脂肪組織には、皮膚の下に蓄積される皮下脂肪および腹腔内の内臓の周囲に蓄積される内臓脂肪があり、これらをあわせて体脂肪と呼ぶ。肥満には、皮下脂肪が蓄積される皮下
脂肪型肥満と、内臓脂肪が蓄積する内臓脂肪型肥満が知られているが、特に内臓脂肪の蓄積が、肥満における代謝異常・循環器疾患等の合併症発症頻度や重症度に強い影響を及ぼす。

従来、複数の生活習慣病が一個人に合併した病態、すなわちマルチプルリスクファクター症候群が、動脈硬化性疾患の発症リスクを飛躍的に上昇させることが以前から知られており、動脈硬化危険因子として、シンドロームＸ、内臓脂肪症候群等の概念が提唱されてきた。これらのマルチプルリスクファクター症候群から、より総合的なリスク評価と動脈硬化の発症予防を目的として、メタボリックシンドロームの定義および診断基準の国際的な統一化が諮られた（非特許文献３）。２００５年４月に提言された日本におけるメタボリックシンドロームの診断基準では、肥満の程度を示す尺度として通常用いられる体格指数（ＢＭＩ；Body Mass Index）や体脂肪率ではなく、内臓脂肪面積１００ｃｍ²以上に相当するウエスト周囲径が必須項目として取り入れられ、メタボリックシンドロームの成因に内臓脂肪の蓄積が深く関わっているとの認識が確立した。

体脂肪減少の手段としては、運動・食事・行動療法等が推奨されているが、これらの方法の実行や継続が困難な場合には薬物療法あるいは外科手術が行われることがある。現在、肥満治療薬として用いられている薬物として、食欲抑制剤であるマジンドールがあり、基本的にＢＭＩが３５以上の高度肥満症においてのみ処方されるが、頭痛や口渇等の副作用があるばかりでなく、重篤な腎や肝・膵機能障害を有する場合には禁忌であり、依存性を示す場合もあることから長期投与ができない等、多くの問題を抱えていた。

β−シトステロールやカンペステロール、スティグマステロール等の植物ステロール類には、コレステロールの吸収阻害による血中コレステロール低下効果が既に知られており、ジグリセリドと植物ステロールを有効成分とする脂質代謝改善剤（特許文献１）が開示されている。さらに、β−シトステロールやカンペステロールなどの植物ステロール類を出発物質として合成されるコレステノン化合物等、又は４−コレステン−３−オンを有効成分として含有する抗肥満剤及び脂質代謝改善剤が開示されている（特許文献２〜５）。

ユリ科に属する植物群としてアロエ属は、アロエベラ（Aloe barbadenisis Miller）やキダチアロエ（Aloe arborescen Miller var. natalensis Berger）等が代表的な植物として知られ、様々な効能があることが報告されている。その中でも、アロエの抽出物に肥満の予防改善効果を有する（特許文献６）ことが開示されている。また、体重減少作用を有するサプリメントとしてアロエベラ粉末が０．２５％含まれたサプリメント（特許文献７）や、体重調節のためのエッセンシャルオイル組成物としてアロエベラが含まれているもの（特許文献８）がそれぞれ開示されている。さらにキダチアロエ全葉をラットに投与すると、濃度依存的に有意に体重が減少することが報告されている（非特許文献４、または非特許文献５）。

特開２００５−１５４２５公報 特開平７−１６５５８７号公報 特開平１１−１９３２９６号公報 特開２００１−２４０５４４号公報 特開平５−１７０６５１号公報 特開２０００−３１９１９０号公報 ニュージーランド特許第３３０４３９号公報 米国特許第６２８０７５１号公報 ジャーナル・オブ・アプライド・フィジオロジー（Journal of Applied Physiology）、第９５巻、第１７２８〜１７３６頁、２００３年 ジャーナル・オブ・アプライド・フィジオロジー（Journal of Applied Physiology）、第９９巻、第１２２０〜１２２５頁、２００５年 アディポサイエンス（Adiposcience）、第２巻、第１１〜１５頁、２００５年 医学と生物学、第１２５巻、第５号、第１８９〜１９４頁 藤田学園医学会誌、第２２巻、第２号、第１５３〜１５７頁

前記特許文献１には、植物ステロール単独投与による効果については記載がなく、内臓脂肪に対する作用については一切記載も示唆もされていなかった。

また、前記特許文献２で開示されている３−ケトステロイド化合物、特許文献３で開示されているコレステノン化合物、特許文献４で開示されている２４−メチルコレスト−５−エン−３−オン等の２４−アルキルコレステン−３−オン化合物群のいずれの化合物も、体重、体脂肪量および血中脂質量の減少作用を有していることが開示されているが、経口摂取量や体重増加に影響を与えることなく、内臓脂肪の蓄積抑制作用を示すという効果については一切記載も示唆もされていなかった。

前記、特許文献５に開示されている４−コレステン−３−オンは、本発明の有効成分とは明らかに相違するものであるが、特に特許文献５に示されている作用効果は、正常なマウスにカロリーを摂取させた場合、過剰な腹腔内脂肪とともに、正常範囲内とされる脂肪分まで必要以上に低下させる作用が示されているのであって、本発明における肥満状態や過剰なカロリー摂取時における、内臓に必要以上に蓄積された脂肪分のみを効果的に抑制するという効果とは明らかに異質な効果であった。

さらに前記特許文献６に記載の肥満の予防改善剤は、体重増加を伴う肥満の進行を抑制し、過度の食事制限を必要とすることなく、標準的な体重の維持に効果的であることが開示されているが、体脂肪への作用に関する記載はなく、体重減少を伴わず内臓脂肪を減少させるという内臓脂肪蓄積抑制効果については一切記載も示唆もされていなかった。

また、特許文献６に記載の有効成分はアロエ抽出物であるが、体重増加を伴う肥満の進行を抑制する関与成分については一切特定されておらず、これとは異質な効果である体重減少を伴わず内臓脂肪のみを減少させるという内臓脂肪蓄積抑制効果については、その存在も含め、特許文献６の記載から予測は困難であった。

すなわち、メタボリックシンドロームの発症との関わりが強い内臓脂肪を選択的に減少あるいは蓄積を予防・抑制できる薬剤について、日常的に安全に摂取でき、可能な限り苦痛を伴うことなく、効率よく内臓脂肪を減少できるような機能性素材のさらなる開発が切望されていた。

本発明者らは、前記課題を鑑み、メタボリックシンドロームの主要な原因と考えられている内臓脂肪型肥満を予防若しくは改善することのできる内臓脂肪蓄積抑制剤について鋭意研究を重ねた結果、ロフェノール骨格を持つ化合物に、腹腔内に蓄積される脂肪を効果的に低減する効果を見いだした。また、この効果は、体重の減少を伴わず、標準的な体重の維持が可能であって、過度の食事制限等を行わずに肥満の進行や抑制に有効であることも見いだされた。

本発明の目的は、前記ロフェノール骨格を持つ化合物を有効成分として含有する内臓脂肪蓄積抑制剤を提供することである。また、本発明の他の目的は、前記内臓脂肪蓄積抑制剤を含有する特定保健用食品等の機能性飲食品を提供することである。

前記課題を解決する本願第一の発明は、下記の一般式（１）で示される化合物を有効成分として含有する内臓脂肪蓄積抑制剤である。

（式中、Ｒ１は炭素原子数５〜１６の直鎖状または分枝鎖状のアルキル基、２重結合を１つ又は２つ含むアルケニル基、若しくはヒドロキシル基及び／又はカルボニル基を含む置換アルキル基又は置換アルケニル基であり、Ｒ２、Ｒ３は各々独立に水素原子、炭素原子数１〜３のアルキル基、又は置換アルキル基であり、Ｒ４は環を構成する炭素原子とともにＣ＝Ｏを形成するか、または、−ＯＨ、−ＯＣＯＣＨ₃のいずれかである。）

また、以下の１）〜４）を好ましい態様としている。
１）前記化合物中のＲ２及びＲ３の一方が水素原子であり、他方がメチル基であり、Ｒ４が水酸基であること、

２）前記１）においてＲ１が、下記式のいずれかで表されること、

３）前記２）の化合物が、４−メチルコレスト−７−エン−３−オール、４−メチルエルゴスト−７−エン−３−オール、及び４−メチルスチグマスト−７−エン−３−オール
からなる群から選ばれること、

４）前記１）〜３）の化合物を少なくとも０．００１質量％含有すること。

前記課題を解決する本願第二の発明は、下記の一般式（１）で表される化合物を含むユリ科植物の有機溶媒抽出物、若しくは熱水抽出物、又はこれらの分画物を含有する内臓脂肪蓄積抑制剤であって、前記ユリ科植物の有機溶媒抽出物、若しくは熱水抽出物、又はこれらの分画物が下記の一般式（１）で表される化合物を乾燥質量で少なくとも０．００１質量％含有する組成物を有効成分として含有する内臓脂肪蓄積抑制剤である。

（式中、Ｒ１は炭素原子数５〜１６の直鎖状又は分枝鎖状のアルキル基、２重結合を１つ又は２つ含むアルケニル基、若しくはヒドロキシル基及び／又はカルボニル基を含む置換アルキル基又は置換アルケニル基であり、Ｒ２、Ｒ３は各々独立に水素原子、炭素原子数１〜３のアルキル基、又は置換アルキル基であり、Ｒ４は環を構成する炭素原子とともにＣ＝Ｏを形成するか、または、−ＯＨ、−ＯＣＯＣＨ₃のいずれかである。）

また、以下の５）〜７）を好ましい態様としている。
５）前記化合物中のＲ２及びＲ３の一方が水素原子であり、他方がメチル基であり、Ｒ４が水酸基であること、

６）前記５）においてＲ１が、下記式のいずれかで表されること、

７）前記６）の化合物が、４−メチルコレスト−７−エン−３−オール、４−メチルエルゴスト−７−エン−３−オール、及び４−メチルスチグマスト−７−エン−３−オールからなる群から選ばれること。

前記課題を解決する本願第三の発明は、前記第一又は第二の発明に記載の内臓脂肪蓄積抑制剤を含有する飲食品である。
また、以下の８)を好ましい態様としている。
８）飲食品が、前記一般式（１）で示される化合物を０．０００１質量％以上含むこと。

前記課題を解決する本願第四の発明は、内臓脂肪蓄積抑制剤の製造のための前記の一般式（１）で示される化合物、若しくは該化合物を乾燥質量で少なくとも０．００１質量％含有するユリ科植物の有機溶媒抽出物、熱水抽出物、又はこれらの分画物の使用である。

前記課題を解決する本願第五の発明は、内臓脂肪の蓄積を抑制する方法であって、前記の一般式（１）に示される化合物、若しくは該化合物を乾燥質量で少なくとも０．００１質量％含有するユリ科植物の有機溶媒抽出物、熱水抽出物、又はこれらの分画物を、内臓脂肪の蓄積を抑制しようとする対象に投与することを特徴とする方法である。
本発明の上記使用及び方法における前記一般式（１）で表される化合物の好ましい態様は、本願第二の発明と同様である。

本発明の内臓脂肪蓄積抑制剤及びこれを含有する飲食品は、安全に投与又は摂取が可能であって、内臓脂肪の蓄積を効果的に抑制する作用を有する。また、本発明の内臓脂肪蓄積抑制剤の有効成分は、食経験上安全に摂取でき、入手容易であるユリ科植物等、例えばアロエベラ（Aloe barbadensis Miller）から簡便に製造することができる。

次に、本発明の好ましい実施形態について詳細に説明する。ただし、本発明は以下の好ましい実施形態に限定されず、本発明の範囲内で自由に変更することができるものである。尚、本明細書において百分率は特に断りのない限り質量による表示である。

本発明において、内臓脂肪蓄積抑制作用とは、腹腔内に蓄積する脂肪の量を低減させる作用を意味する。したがって、内臓脂肪の蓄積抑制作用は、腹腔内の脂肪量、例えば腸管膜脂肪の重量を測定することにより、評価することができる。

本発明の内臓脂肪蓄積抑制剤（以下、「本発明の医薬」ともいう）の有効成分として用
いる化合物は、前記一般式（１）で表される構造をもつ化合物であって、内臓脂肪蓄積抑制作用を有する化合物（以下、「本発明の化合物」ともいう）であれば、いずれの誘導体等も有効成分として含まれる。

本発明の内臓脂肪蓄積抑制剤の有効成分として用いられる本発明の化合物の純度は、１００％であることが最も好ましいが、内臓脂肪の蓄積を抑制する作用を有する範囲で適宜設定することが可能である。

また、本発明の内臓脂肪蓄積抑制剤の有効成分として用いる組成物（以下、「本発明の組成物」ともいう）は、前記本発明の化合物を、乾燥質量で少なくとも０．００１質量％、好ましくは０．０１質量％以上、より好ましくは０．１質量％以上含むユリ科植物の抽出物又はその分画物である。本発明の化合物の含有量の上限は特に制限されないが、１０質量％が好ましく、５０質量％、もしくは７０質量％、又は９０質量％が例示できる。

なお、本発明において乾燥質量とは、第十四改正日本薬局方（平成１３年３月３０日厚生労働省告示第１１１号）における一般試験法「乾燥減量試験法」において規定される乾燥方法によって、化合物を乾燥した後に測定した質量であって、例えば、本発明の化合物を約１ｇ分取し、これを１０５℃で４時間乾燥し、デシケーター内で放冷して、はかりにてその質量を測定することによって規定することが可能である。

前記一般式（１）中、Ｒ１は炭素原子数５〜１６の直鎖状または分枝鎖状のアルキル基、若しくは２重結合を１つ又は２つ含むアルケニル基である。尚、これらのアルキル基又はアルケニル基は、少なくとも１つの水素原子がヒドロキシル基及び／又はカルボニル基で置換された、置換アルキル基または置換アルケニル基であってもよい。Ｒ２、Ｒ３は各々独立に水素原子、炭素原子数１〜３のアルキル基、又は置換アルキル基であり、Ｒ４は環を構成する炭素原子とともにＣ＝Ｏを形成するかまたは、−ＯＨ、−ＯＣＯＣＨ₃のいずれかである。尚、前記炭素原子数１〜３のアルキル基としては、メチル基、エチル基等が好ましく、メチル基が特に好ましい。

前記Ｒ１は、下記式で表される基のいずれかであることが好ましい。

また、前記Ｒ２及びＲ３は、一方が水素原子であり、他方がメチル基であることが好ましい。さらに、Ｒ４は水酸基であることが好ましい。

前記化合物として最も好ましい化合物は、下記式で表される４−メチルコレスト−７−エン−３−オール（式（２））、４−メチルエルゴスト−７−エン−３−オール（式（３
））、及び４−メチルスチグマスト−７−エン−３−オール（式（４））である。

すなわち、４−メチルコレスト−７−エン−３−オールは、前記一般式（１）において、Ｒ２及びＲ３の一方が水素原子であり、他方がメチル基であり、Ｒ４が水酸基であって、Ｒ１が前記式（vi）で表される基（但し、Ｒｃは−Ｈ、Ｒｄは−ＣＨ₃である）。４−
メチルエルゴスト−７−エン−３−オールは、前記一般式（１）において、Ｒ２及びＲ３の一方が水素原子であり、他方がメチル基であり、Ｒ４が水酸基であって、Ｒ１が前記式（vi）で表される基（但し、Ｒｃ及びＲｄはともに−ＣＨ₃である）。また、４−メチルスチグマスト−７−エン−３−オールは、前記一般式（１）において、Ｒ２及びＲ３の一方が水素原子であり、他方がメチル基であり、Ｒ４が水酸基であって、Ｒ１が前記式（i）で表される基である。

本発明の医薬又は飲食品は、前記化合物の一種を単独で含んでいてもよく、任意の２種類以上を含んでいてもよい。

ロフェノールが植物に含まれていることは公知であり、公知のロフェノールの製造方法に準じて、本発明の化合物を製造することができる（生物化学実験法２４、脂肪脂質代謝実験法、山田晃弘著、学会出版センター、第１７４ページ、１９８９年）。本発明の化合物は、例えば、同化合物を含む植物から、有機溶媒抽出法または熱水抽出法などの方法を用いて抽出し、得られた抽出物を精製することによって、得ることができる。本発明においては、本発明の化合物は、精製されたものであってもよいが、同化合物を有効量含む限り、植物の抽出物又はその分画物等の組成物であってもよい。

本発明の化合物又はそれを含む組成物は、例えば、ユリ科植物に属し、本発明の化合物を含む植物もしくはその一部又はそれらの破砕物から、同化合物を含む画分を有機溶媒又は熱水を用いて抽出、濃縮することにより、製造することができる。

前記ユリ科に属する植物としては、アロエ属又はアリウム属に属する植物が挙げられる。また、アロエ属植物としては、アロエベラ（Aloe barbadensis Miller）、アロエフェロックスミラー（Aloe ferox Miller）、アロエアフリカーナミラー（Aloe africana Miller）、キダチアロエ（Aloe arborescen Miller var. natalensis Berger）、アロエスピカータベイカー（Aloe spicata Baker）等が挙げられる。本発明の化合物又はそれを含む組成物の製造においては、前記植物の全体を用いてもよいが、葉肉（透明ゲル部分）を用いることが好ましい。このような植物又はその一部を、好ましくはホモジナイザー等を用いて破砕して液状化し、有機溶媒又は熱水で抽出する。有機溶媒としては、メタノール、エタノール、ブタノール等のアルコール；酢酸メチル、酢酸エチル、酢酸プロピル、酢酸ブチル等のエステル；アセトン、メチルイソブチルケトン等のケトン；ジエチルエーテル、石油エーテル等のエーテル；ヘキサン、シクロヘキサン、トルエン、ベンゼン等の炭化水素；四塩化炭素、ジクロロメタン、クロロホルム等のハロゲン化炭化水素；ピリジン等の複素環化合物、エチレングリコール等のグリコール；ポリエチレングリコール等のポリアルコール；アセトニトリル等のニトリル溶媒、及びこれらの溶媒の混合液等が挙げられる。また、これらの溶媒は無水であってもよく、含水状態であってもよい。これらの溶媒の中では、酢酸エチル／ブタノール混合液（３：１）またはクロロホルム／メタノール混合液（２：１）が好ましい。

抽出方法としては、通常の植物成分の抽出に用いられる方法を用いることができる。通常、新鮮な植物又は乾燥植物１質量部に対し、有機溶媒１〜３００質量部を用いて、撹拌又は振盪しながら、溶媒の沸点以下の温度で加熱還流するか、常温で超音波抽出する方法が挙げられる。抽出液は、濾過又は遠心分離等の適当な方法により、不溶物を分離して粗抽出物を得ることができる。

抽出物は、各種クロマトグラフィー、例えば順相又は逆相のシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより、精製することができる。順相シリカゲルカラムクロマトグラフィーにおいては、溶出溶媒としてクロロホルム／メタノール混合液のグラジエントを用いると、クロロホルム：メタノール＝２５：１程度で本発明の化合物が溶出される。また、逆相シ
リカゲルカラムクロマトグラフィーにおいては、溶出溶媒としてヘキサン／酢酸エチル混合液（４：１）を用いると、本発明の化合物は最初の方のフラクションとして溶出される。得られたフラクションは、さらにＨＰＬＣ等により精製することができる。

また、本発明に用いる化合物は、化学的な合成法、又は、微生物又は酵素等を利用した生物学的方法又は酵素的方法によって製造してもよい。

上記のようにして得られる化合物又はそれを含む組成物が、本発明の化合物を含むことは、例えば、マススペクトル法（ＭＳ）及び核磁気共鳴スペクトル法（ＮＭＲ）等によって確認することができる。

本発明の化合物は、内臓脂肪の蓄積を抑制させる作用を有し、その結果、内臓脂肪型肥満を予防することができる。したがって、内臓脂肪蓄積抑制のための医薬または飲食品の有効成分として使用することができる。

尚、アロエベラの葉皮には、緩下作用を持つバロバロインやアロエエモジンが含まれており、緩下作用を期待しない医薬又は飲食品としては、好ましくないと考えられている。したがって、本発明の化合物を含む組成物は、これらの成分が含まれていないことが好ましい。また、アロエベラの葉肉又はその破砕物も、内臓脂肪蓄積抑制剤の有効成分として用いることができる。

本発明の化合物は、内臓脂肪の蓄積を抑制させる作用を有し、その結果、内臓脂肪型肥満を予防することができる。したがって、そのまま本発明の内臓脂肪蓄積抑制剤またはそれを含有する飲食品の有効成分として利用することが可能である。また、本発明の化合物を含む、植物の有機溶媒抽出物もしくは熱水抽出物又はこれらの分画物（以下、「抽出物等」と呼ぶ）を医薬または飲食品の有効成分として利用してもよい。この場合、医薬に含有させる前記抽出物等は、本発明の化合物を、乾燥質量で少なくとも０．００１質量％含んでいることが好ましく、０．０１〜１質量％含んでいることがより好ましく、０．０５〜１質量％含んでいることが特に好ましい。また、飲食品に含有させる前記抽出物等は、本発明の化合物を、乾燥質量で少なくとも０．０００１質量％含んでいることが好ましく、０．００１〜１質量％含んでいることがより好ましく、０．００５〜１質量％含んでいることが特に好ましい。前記抽出物等は、本発明の化合物を２種類以上含むものであってもよい。また、前記抽出物等は、溶液であってもよく、常法により凍結乾燥または噴霧乾燥して粉末として保存ないし使用することもできる。

本発明の内臓脂肪蓄積抑制剤は、本発明の化合物又はそれを含む抽出物等の組成物をそのまま、若しくはこれらを製剤学的に許容される製剤担体と組み合わせて、経口的、又は非経口的にヒトを含む哺乳動物に投与することができる。尚、本発明の内臓脂肪蓄積抑制剤において、本発明の化合物は医薬に許容される塩にすることもできる。医薬に許容可能な塩として、金属塩（無機塩）と有機塩との両方が含まれ、それらのリストは「レミントン・ファーマシューティカル・サイエンシーズ（Remington's Pharmaceutical Sciences）、第１７版、第１４１８頁、１９８５年」に掲載されているものが例示される。具体的には塩酸塩、硫酸塩、リン酸塩、二リン酸塩および臭化水素酸塩などの無機酸塩や、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、酒石酸塩、コハク酸塩、クエン酸塩、酢酸塩、乳酸塩、メタンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、パモ酸塩、サリチル酸塩及びステアリン酸塩などの有機酸塩が非限定的に含まれる。また、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、アルミニウム等の金属の塩、リジン等のアミノ酸との塩とすることもできる。また、上記化合物もしくはその医薬上許容される塩の水和物等の溶媒和物も本発明に含まれる。

本発明の内臓脂肪蓄積抑制剤の製剤形態は特に限定されず、治療目的に応じて適宜選択でき、具体的には、錠剤、丸剤、散剤、液剤、懸濁剤、乳剤、顆粒剤、カプセル剤、シロップ剤、坐剤、注射剤、軟膏剤、貼付剤、点眼剤、点鼻剤等を例示できる。製剤化にあたっては製剤担体として通常の内臓脂肪蓄積抑制用医薬に汎用される賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、安定剤、矯味矯臭剤、希釈剤、界面活性剤、注射剤用溶剤等の添加剤を使用できる。また、本発明の効果を損なわない限り、本発明の化合物又はそれを含む抽出物等と、他の内臓脂肪蓄積抑制作用を有する医薬とを併用してもよい。

本発明の内臓脂肪蓄積抑制剤中に含まれる本発明の化合物又はそれを含む抽出物等の量は、特に限定されず適宜選択すればよいが、例えば、本発明の化合物の量として、製剤中に少なくとも０．００１質量％、好ましくは０．０１〜１質量％、特に好ましくは０．０５〜１質量％とするのがよい。

本発明の内臓脂肪蓄積抑制剤は、内臓脂肪の蓄積を抑制させる作用を有することから、内臓脂肪型肥満を予防することができる。内臓脂肪型肥満とは、一般的には内臓脂肪面積１００ｃｍ²以上の状態を指し、メタボリックシンドロームの診断基準によれば、ウエスト周囲径が、日本人の場合、男性８５ｃｍ以上、女性９０ｃｍ以上の場合をいう（日本内科学雑誌、第９４巻、第１８８〜２０３頁、２００５年）。また、本発明の内臓脂肪蓄積抑制剤は、内臓脂肪が健常人値より蓄積した状態の患者に対する治療に好適に用いられる。

また、本発明の内臓脂肪蓄積抑制剤は、内臓脂肪の蓄積により引き起こされる疾患、合併症等、例えば脂質代謝異常・循環器疾患等の改善又は予防、並びにこれら疾病・合併症等のリスクを低減することも可能である。かかる内臓脂肪蓄積に起因する種々の疾病としては、肥満、特に内臓脂肪型肥満、高脂血症、糖尿病、高血圧、動脈硬化症等を例示することができる。また、これらの疾患に起因する合併症として、糖尿病による糖尿病性網膜症、腎症、神経障害、糖尿病性壊疽、高血圧による脳卒中、腎硬化症、腎不全、また、動脈硬化症による脳卒中や脳梗塞、狭心症や心筋梗塞などの心血管疾患、尿毒症、腎硬化症、腎不全などの腎症等を例示することができる。尚、本発明者らは、本発明の化合物が、ヘモグロビンＡ１ｃ値を低下させ、高血糖を改善する作用を有することを見出している（国際公開２００５／０９４８３８号）。本発明の内臓脂肪蓄積抑制剤が適用される疾病は、ヘモグロビンＡ１ｃの値が健常人より高い状態にあるものではないことが好ましい。

さらに、本発明の内臓脂肪蓄積抑制剤は、メタボリックシンドロームの発症を予防するために用いることにも有用である。このように、内臓脂肪の蓄積を抑制、又は減少させることは、メタボリックシンドローム、並びに関連する動脈硬化性疾患、またリスクファクターとして指摘されている糖尿病、高血圧、高脂血症等の生活習慣病、さらにこれらの疾患に付随する合併症の発症を予防する上で極めて有効である。なお、本発明におけるメタボリックシンドロームとは、マルチプルリスクファクター症候群において認められる病態、すなわち、高インスリン血症、耐糖能異常または高血糖、脂質代謝異常、高脂血症（高トリグリセリド血症、低ＨＤＬコレステロール血症）、高血圧、肥満、内臓脂肪蓄積等の危険因子とされる症状を複合的に併発した、動脈硬化易発症状態を意味する。

本発明の医薬の投与時期は特に限定されず、対象となる疾患の治療方法に従って、適宜投与時期を選択することが可能である。また、投与形態は製剤形態、患者の年齢、性別、その他の条件、患者の症状の程度等に応じて決定されることが好ましい。本発明の医薬の投与量は、用法、患者の年齢、性別、疾患の程度、その他の条件等により適宜選択される。通常有効成分としての本発明の化合物の量は、０．００１〜５０ｍｇ／ｋｇ／日、好ましくは、０．０１〜１ｍｇ／ｋｇ／日での範囲となる量を目安とするのが良い。また、本発明の化合物を含む抽出物等を用いる場合は、抽出物等の乾燥質量として０．１〜１００
０ｍｇ／ｋｇ／日、好ましくは、１〜１００ｍｇ／ｋｇ／日となるような量を目安とするのが良い。いずれの場合も、１日１回又は複数回に分けて投与することができる。

本発明の化合物又はそれを含む組成物は、飲食品（飲料又は食品）に含有させて、内臓脂肪蓄積抑制効果を有する飲食品とすることが可能である。飲食品としては、前記有効成分の効果を損なわず、経口摂取できるものであれば、形態や性状は特に制限されず、前記有効成分を含有させること以外は、通常飲食品に用いられる原料を用いて通常の方法によって製造することができる。また、本発明の飲食品中に含まれる本発明の化合物又はそれを含む抽出物等の量は、特に限定されず適宜選択すればよいが、例えば、本発明の化合物の量として、飲食品中に少なくとも０．０００１質量％、好ましくは０．００１〜１質量％、特に好ましくは０．００５〜１質量％とするのがよい。

本発明の飲食品における用途としては、内臓脂肪低減の効果を利用するような種々の用途をとることが可能である。例えば、ウエスト周囲径が気になり始めた方に適した飲食品、血中脂質が気になり始めた方に適した飲食品、メタボリックシンドロームの危険要因の低減・除去に役立つ飲食品等の用途を例示することができる。

尚、本発明の飲食品において、「内臓脂肪蓄積抑制」とは、内臓脂肪の蓄積に起因して導かれる種々の健康への害を改善又は予防する事を意味しており、「内臓脂肪型肥満改善」、「内臓脂肪型肥満予防」、「内臓脂肪低減」、「内臓脂肪蓄積予防」等も、前記「内臓脂肪蓄積抑制」と同様の意味として、本発明において例示することができる。

また、本発明の飲食品は、内臓脂肪の蓄積により引き起こされる疾患、例えば高脂血症に代表される脂質代謝異常・循環器疾患等の改善又は予防に有用である。また、内臓脂肪型肥満やメタボリックシンドローム等の発症を予防するために用いることもできる。さらに、本発明の飲食品は、本発明の医薬で例示されたのと同様に、内臓脂肪蓄積に起因する種々の疾病・合併症等の治療又は予防、並びにこれら疾病・合併症等のリスクを低減することが可能である。

本発明の飲食品は、内臓脂肪蓄積抑制のために用いられるものである旨の表示を付した飲食品、例えば「内臓脂肪蓄積抑制用と表示された、内臓脂肪蓄積抑制効果を有する化合物を含有する飲食品」、あるいは「内臓脂肪蓄積抑制用と表示された、植物抽出物を含有する飲食品」等として販売することが好ましい。尚、本発明の化合物又はそれを含む組成物等は、内臓脂肪蓄積抑制作用を有することから、飲食品への内臓脂肪蓄積抑制の表示には、内臓脂肪型肥満を改善する意味も有すると考えられる。したがって、本発明の飲食品は、「内臓脂肪型肥満改善用」と表示することができる。すなわち、前記内臓脂肪蓄積抑制用の表示とは、このような「内臓脂肪型肥満改善用」の表示であってもよい。

以上のような表示を行うために使用する文言は、「内臓脂肪蓄積抑制用」、又は「内臓脂肪型肥満改善用」という文言のみに限られるわけではなく、それ以外の文言であっても、内臓脂肪の蓄積を抑制、又は内臓脂肪型肥満を予防、改善する効果を表す文言であれば、本発明の範囲に包含されることはいうまでもない。そのような文言としては、例えば、需要者に対して、内臓脂肪蓄積抑制又は内臓脂肪型肥満改善の効果を認識させるような種々の用途に基づく表示も可能である。例えば、「ウエスト周囲径が気になり始めた方に適した」、「内臓脂肪型肥満傾向のある方に適した」、「メタボリックシンドロームの危険要因（リスク）の低減・除去に役立つ」等の表示を例示することができる。

前記「表示」とは、需要者に対して上記用途を知らしめるための全ての行為を意味し、上記用途を想起・類推させうるような表示であれば、表示の目的、表示の内容、表示する対象物・媒体等の如何に拘わらず、すべて本発明の「表示」に該当する。しかしながら、
需要者が上記用途を直接的に認識できるような表現により表示することが好ましい。具体的には、本発明の飲食品に係る商品又は商品の包装に上記用途を記載する行為、商品又は商品の包装に上記用途を記載したものを譲渡し、引渡し、譲渡若しくは引渡しのために展示し、輸入する行為、商品に関する広告、価格表若しくは取引書類に上記用途を記載して展示し、若しくは頒布し、又はこれらを内容とする情報に上記用途を記載して電磁気的（インターネット等）方法により提供する行為、等が例示できる。一方、表示としては、行政等によって認可された表示（例えば、行政が定める各種制度に基づいて認可を受け、そのような認可に基づいた態様で行う表示）であることが好ましく、特に包装、容器、カタログ、パンフレット、ＰＯＰ等の販売現場における宣伝材、その他の書類等への表示が好ましい。

また、例えば、健康食品、機能性食品、経腸栄養食品、特別用途食品、栄養機能食品、医薬用部外品等としての表示を例示することができ、その他厚生労働省によって認可される表示、例えば、特定保健用食品、これに類似する制度にて認可される表示を例示できる。後者の例としては、特定保健用食品としての表示、条件付き特定保健用食品としての表示、身体の構造や機能に影響を与える旨の表示、疾病リスク低減表示等を例示することができ、詳細にいえば、健康増進法施行規則（平成１５年４月３０日日本国厚生労働省令第８６号）に定められた特定保健用食品としての表示（特に保健の用途の表示）、及びこれに類する表示が、典型的な例として列挙することが可能である。

次に実施例を示して本発明を更に詳細に説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。

はじめに、本発明の化合物又は組成物がユリ科に属する植物から製造することが可能であることを製造例として示す。
［製造例１］
アロエベラの葉肉（透明ゲル部分）１００ｋｇを、ホモジナイザーを用いて液状化し、ここに１００Ｌの酢酸エチル／ブタノール混合液（３：１）を添加して攪拌した。一晩放置した後、酢酸エチル／ブタノール混合液と水層を分液して、酢酸エチル／ブタノール混合液を回収した。この酢酸エチル／ブタノール混合液を減圧下濃縮して得られた、酢酸エチル／ブタノール混合液抽出物の重量は、１３．５ｇであった。シリカゲル６０（メルク社製）を４００ｇ充填しカラムに、当該抽出物１３ｇを１ｍｌのクロロホルム／メタノール混合液（１：１）に溶解させた溶液を流してカラムに吸着させた後、クロロホルム／メタノール混合液（クロロホルム：メタノール＝１００：１、２５：１、１０：１、５：１及び１：１の各混合比）を使用し、メタノール濃度を段階的に上昇させるステップワイズグラジエント法により溶出し、前記混合液の混合比毎に溶出液を分画した。これらのフラクションのうち、クロロホルム：メタノール＝２５：１で溶出してきたフラクションに本発明の化合物が存在することを、順相及び逆相薄層クロマトグラフィー（メルク社製、シリカゲル６０Ｆ２５４及びＲＰ−１８Ｆ２５４３）にて確認した。

この本発明の化合物を含む、粗精製物質（粗精製物１）は３ｇであった。また、このとき得られた、クロロホルム：メタノール＝１０：１および、１：１で溶出されたフラクションの粗精製物収量は、それぞれ１．１７ｇ及び、２．２７ｇであった。これらのフラクションの溶媒を除去した後、それぞれの抽出物を１ｍｌのクロロホルム／メタノール混合液（１：１）に溶解し、シリカゲル６０を１００ｇ充填したカラムに流してカラムに吸着させた後、ヘキサン／酢酸エチル混合液（４：１）１１００ｍｌで溶出した。溶出フラクションを、順に３００ｍｌ（フラクションＡ）、３００ｍｌ（フラクションＢ）、５００ｍｌ（フラクションＣ）ずつ分取した。それぞれのフラクションの溶媒除去後の収量は、フラクションＡ：０．６ｇ、フラクションＢ：１．３５ｇ、フラクションＣ：０．１５ｇであった。本発明の化合物が、フラクションＡ（粗精製物２）に濃縮されたことを、順相
及び逆相薄層クロマトグラフィーにて確認した。この粗精製物２を、さらに、コスモシールＣ１８（ナカライテスク社製）を装着したＨＰＬＣを用いて、クロロホルム／ヘキサン混合液（８５：１５）にて分離し、化合物３（４−メチルコレスト−７−エン−３−オール）、化合物４（４−メチルエルゴスト−７−エン−３−オール）、化合物５（４−メチルスチグマスト−７−エン−３−オール）を、それぞれ１．３ｍｇ、１．２ｍｇ、１ｍｇ得た。各々の化合物の構造はＭＳおよびＮＭＲにて確認した。

本実施例１は、肥満糖尿病モデル動物であるＺＤＦ（Zucker Diabetic Fatty）ラットを用いて、ロフェノール骨格を持つ化合物の内臓脂肪蓄積抑制作用を検討した。

（１）試料の調製
前記製造例１で製造した化合物３（４−メチルコレスト−７−エン−３−オール）、化合物４（４−メチルエルゴスト−７−エン−３−オール）、化合物５（４−メチルスチグマスト−７−エン−３−オール）を、それぞれ試験試料１、試験試料２、試験試料３とした。各試料をＤＭＳＯに溶解した後、蒸留水にて、各試験試料における化合物の濃度が１０μｇ／ｍｌとなるように試験試料１−１、試験試料２−１、及び試験試料３−１として調製した。また、１μｇ／ｍｌになるように試験試料１−２、試験試料２−２、及び試験試料３−２として調製した。なお、ＤＭＳＯの最終濃度は０．２％になるように調整した。さらに、試料を含まない溶液を陰性試料とした。

（２）試験方法
６週齢、雄性ＺＤＦラット（米国チャールスリバー社より購入）を、高脂肪食（リサーチダイエット社製）を用いて１ヶ月間予備飼育を行った後、１群６匹に群分けした。各群のラットに、１日１回ゾンデを用いて、陰性試料、試験試料１−１、試験試料１−２、試験試料２−１、試験試料２−２、試験試料３−１、及び試験試料３−２の各溶液をそれぞれラット体重４００ｇにつき１ｍｌずつ４４日間連日経口投与した。投与開始から４５日目に内臓脂肪として腸管膜脂肪重量を測定した。

（３）試験結果
投与開始から４５日目の腸管膜脂肪重量を表１に示す。陰性試料投与群のラット腸管膜脂肪重量（６．８３±１．１０ｇ）に比べ、化合物の濃度が１０μｇ／ｍｌである試験試料１−１、試験試料２−１、及び試験試料３−１では、それぞれ脂肪量が、４．４８±１．３４ｇ、３．７８±０．２６ｇ、及び３．３６±１．６７ｇとなり、それぞれ陰性試料群の６５．０％、５４．９％および４８．７％の脂肪量を示して、内臓脂肪の有意な蓄積抑制効果が確認された。一方、化合物の濃度が１μｇ／ｍｌである試験試料１−２、試験試料２−２、及び試験試料３−２では、いずれも減少傾向を示したが、有意な効果は認められなかった。また、投与期間中に病理的な所見からの副作用は、全く見られなかった。なお、表中のｐ値はTukey-Kramer's testによる有意確率を示している。

本実施例２は、ロフェノール骨格を持つ化合物における、ラットの餌の摂取量（摂餌量）、及び体重増加（増体量）への影響を検討した。

（１）試料の調製
前記実施例１で使用した試験試料１−１、試験試料２−１、及び試験試料３−１を試験試料として使用した。また、試料を含まない溶液を陰性試料とした。

（２）試験方法
６週齢、雄性ＺＤＦラット（米国チャールスリバー社より購入）を、高脂肪食（リサーチダイエット社製）を用いて１ヶ月間予備飼育を行った後、体重を測定し、１群６匹に群分けした。各群のラットに、１日１回ゾンデを用いて試験試料１−１、試験試料２−１、及び試験試料３−１、並びに陰性試料の各溶液を体重４００ｇにつき１ｍｌずつ４４日間連日経口投与した。投与開始から４２日目のラットの体重を測定し、投与開始前の体重との差を増体量とした。また、投与開始の日から一週間に一度の割合で、一日の間に消費される餌の重さを測定し、この平均値を一日あたりの摂餌量とした。

（３）試験結果
ラット１匹１日あたりの摂餌量と４２日間の増体量を表２に示す。試験試料１−１、試験試料２−１、及び試験試料３−１を投与した群は、いずれも陰性試料を投与した群に比して摂餌量の顕著な増減は認められなかった。また、増体量（体重の増加）に関しても陰性試料を投与した群とほぼ同等であった。従って、ロフェノール骨格を持つ化合物は、ラットの餌の摂取量及び体重増加に影響を与えないことが判明した。

産業上の利用の可能性

本発明は、体重の減少を伴わず、標準的な体重の維持が可能であって、過度の食事制限等を行わずに肥満の進行や抑制に有効な内臓脂肪蓄積抑制剤、及び前記内臓脂肪蓄積抑制剤を含有する特定保健用食品等の機能性飲食品を提供することが可能であって、内臓脂肪の蓄積により引き起こされる疾患、合併症等、例えば脂質代謝異常・循環器疾患等の改善又は予防、並びにこれら疾病・合併症等のリスクを低減することも可能である。また、メタボリックシンドローム、並びにリスクファクターとして指摘されている糖尿病、高血圧、高脂血症等の生活習慣病の発症を予防する効果も兼ね備えている。

Claims (4)

1. ４−メチルコレスト−７−エン−３−オール、４−メチルエルゴスト−７−エン−３−オール、及び４−メチルスチグマスト−７−エン−３−オールからなる群から選ばれる化合物を有効成分として含有する内臓脂肪蓄積抑制剤。
2. 前記化合物を少なくとも０．００１質量％含有する請求項１に記載の内臓脂肪蓄積抑制剤。
3. ４−メチルコレスト−７−エン−３−オール、４−メチルエルゴスト−７−エン−３−オール、及び４−メチルスチグマスト−７−エン−３−オールからなる群から選ばれる化合物を含むユリ科植物の酢酸エチル／ブタノール混合液抽出物、若しくはクロロホルム／メタノール混合液抽出物、又はこれらの分画物を含有する内臓脂肪蓄積抑制剤であって、前記ユリ科植物の酢酸エチル／ブタノール混合液抽出物、若しくはクロロホルム／メタノール混合液抽出物、又はこれらの分画物が該化合物を乾燥質量で少なくとも０．００１質量％含有する組成物を有効成分として含有する内臓脂肪蓄積抑制剤。
4. ４−メチルコレスト−７−エン−３−オール、４−メチルエルゴスト−７−エン−３−オール、及び４−メチルスチグマスト−７−エン−３−オールからなる群から選ばれる化合物、又は該化合物を乾燥質量で少なくとも０．００１質量％含有するユリ科植物の酢酸エチル／ブタノール混合液抽出物、若しくはクロロホルム／メタノール混合液抽出物、又はこれらの分画物を有効成分として配合することを特徴とする、内臓脂肪蓄積抑制剤の製造方法。