JP4029137B2

JP4029137B2 - 新生理活性物質

Info

Publication number: JP4029137B2
Application number: JP2000549618A
Authority: JP
Inventors: 利明若林; 礼奈川瀬; 庸彰成瀬; 雅宣藤田; 朋宏鮫島; 吉雄渡辺; 和之土橋; 泰博船橋; 太郎仙波
Original assignee: Mercian Corp; Eisai R&D Management Co Ltd
Current assignee: Mercian Corp; Eisai R&D Management Co Ltd
Priority date: 1998-05-18
Filing date: 1999-04-28
Publication date: 2008-01-09
Anticipated expiration: 2019-04-28
Also published as: EP1081151A4; AU3538699A; EP1081151A1; US6645996B1; WO1999060000A1

Description

発明の属する技術分野
本発明は血管新生の異常増殖を伴う各種疾患に対する予防及び治療に有効な新規生理活性物質に関する。
従来の技術
血管新生は胎児期の血管樹形成や各臓器の形態的、機能的発達時に不可欠な生物学的現象である。新生血管は内皮細胞の遊走、増殖、管腔形成などの複数の過程を経て構築され、その過程にはマスト細胞、リンパ球、間質細胞などの関与も重要であることが報告されている（Ｊ．ＦｏｌｋｍａｎａｎｄＹ．Ｓｈｉｎｇ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６７，１０９３１，１９９２）。成熟個体では女性性周期においてのみに血管新生が生じるが、成熟個体においては血管新生の病的増加が様々な疾患の発症あるいは進行過程に関与していることが知られている。具体的には癌、リウマチ性関節炎、アテローム性動脈硬化症、糖尿病性網膜症、血管腫、乾せんなどが血管新生の異常を伴う疾患としてあげられる（Ｊ．Ｆｏｌｋｍａｎ，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．，３３３，１７５７，１９９５）。
特に固形癌の増殖は血管新生に依存する事が報告されており、血管新生阻害剤が難治性固形癌に対する新しい治療薬になると期待されている（ＦｏｌｋｍａｎＪ．，Ｊ．Ｎａｔｌ．ＣａｎｃｅｒＩｎｓｔ．，８２，４，１９９０）。
また、リウマチ性関節炎では浸潤したマクロファージ・リンパ系細胞からの血管新生因子の過剰な産生が関節内の血管新生誘導に関与すると言われ（ＫａｈｎＪ．，Ｐｒｏｃ．Ａｍ．Ｓｏｃ．Ｃｌｉｎ，Ｏｎｃｏｌ．，１２，５０，ａｂｓｔｒａｃｔ，１９９３）、コラーゲン関節炎モデルで血管新生阻害剤ＡＧＭ−４７０が関節炎を抑制することが示された。（ＰｅａｃｏｃｋＤＪ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７５，１１３５−８，１９９２）。これにより、炎症性疾患において血管新生を抑制することが、疾患の治療にもつながることが示唆された。
アテローム性動脈硬化症では、低酸素で誘導されるｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ（ＶＥＧＦ）の過剰産生によりアテローム斑での血管新生が引き起こされることが示され（ＳｔａｖｒｉＧＴ．，ＦＥＢＳＬｅｔｔ．，３５８，３１１−５，１９９５）、腫瘍増殖に血管新生が必要であるのと同様に、アテローム斑の伸展にも血管新生が必要であると言われている（Ｏ’ＢｒｉｅｎＥＲ．，Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．，１４６，１０２９−３９，１９９４）。また、時に新生児の生死に関わることがある血管腫では、血管新生抑制活性の知られているＩＦＮ−α２ａによる治療が試みられている（ＷｈｉｔｅＣＷ．，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３２０，１１９７−２００，１９８９）。これら疾患に対する治療薬として、新たな血管新生抑制剤が待望されている。
これまでいくつかの血管新生阻害物質に関する報告はあるが、いまだに実用化に耐える有効な物質は見出されていない（公開特許公報平３−１０９３２４号、公開特許公報平３−２３６３２４号、公開特許公報平３−２１４８号）。
本発明は血管新生阻害活性を有する新規物質を単離し、血管新生の異常増殖を伴う各種疾患に対する予防及び治療剤を提供することにある。
発明の開示
上記現状に鑑み、本発明者らは微生物培養液を原料として、血管新生阻害物質の探索スクリーニングを行った。その結果、ストレプトミセス属に属する微生物の培養液中に血管新生阻害物質が産生されることを見出した。この活性物質を単離・構造決定したところ新規活性物質であることが判明した。そして、その作用メカニズムを解析した結果、阻害作用メカニズムの一つとして内皮細胞に対する接着分子発現抑制作用も有することを見出した。具体的には内皮細胞のＶＣＡＭ−１とＥ−ｓｅｌｅｃｔｉｎの発現に対して本物質は明らかな阻害作用を示した。ＶＣＡＭ−１及びＥ−ｓｅｌｅｃｔｉｎは血管新生に必要な内皮細胞の遊走や管腔形成に関与していることが示唆されているが（Ａ．Ｅ．Ｋｏｃｈｅｔａｌ，Ｎａｔｕｒｅ，３７６，５１７，１９９５）、内皮細胞とリンパ球との接着にも関与していることが報告されている。従って、本物質は血管新生に起因する疾患に加え、活性化リンパ球による異常反応に起因すると考えられる種々の疾病、具体的には膠原病や移植拒絶反応などの自己免疫、心筋梗塞、動脈硬化症等の疾患に対する治療薬となる事が期待される。
すなわち本発明は、一般式（１）で表わされる化合物、その塩又はその水和物に関する。

（式中、Ｒ^１は水素原子、アルデヒド基又は低級アシル基、Ｒ^２及びＲ^３は同一又は相異なり水素原子もしくは低級アルコキシ基、又は一緒になって酸素原子を意味し、Ｒ^４は低級アルキル基、Ｒ^５は水素原子又は低級アルキル基を意味する。但し、Ｒ^１がアルデヒド基、Ｒ^２及びＲ^３が相異なり水素原子又はメトキシ基、Ｒ^４がエチル基で、かつＲ^５が水素原子である化合物は除く。）
より具体的にはそれぞれ、
一般式（１）において、Ｒ^１が水素原子、アルデヒド基又はアセチル基、Ｒ^２及びＲ^３が同一又は相異なり水素原子もしくはメトキシ基、又は一緒になって酸素原子、Ｒ^４がエチル基、ノルマルプロピル基又はイソプロピル基、Ｒ^５が水素原子又はメチル基である化合物（但し、Ｒ^１がアルデヒド基、Ｒ^２及びＲ^３が相異なり水素原子又はメトキシ基、Ｒ^４がエチル基で、かつＲ^５が水素原子である化合物は除く。）、その塩又はその水和物、
一般式（１）において、Ｒ^１がアルデヒド基、Ｒ^２及びＲ^３が同一で水素原子、Ｒ^４がエチル基、Ｒ^５が水素原子又はメチル基である化合物、その塩又はその水和物、
一般式（１）において、Ｒ^１がアルデヒド基、Ｒ^２及びＲ^３が同一で水素原子、Ｒ^４がノルマルプロピル基又はイソプロピル基、Ｒ^５が水素原子である化合物、その塩又はその水和物、
一般式（１）において、Ｒ^１がアルデヒド基、Ｒ^２及びＲ^３が相異なり水素原子又はメトキシ基、Ｒ^４がノルマルプロピル基又はイソプロピル基、Ｒ^５が水素原子である化合物、その塩又はその水和物、
一般式（１）において、Ｒ^１が水素原子、Ｒ^２及びＲ^３が一緒になって酸素原子、Ｒ^４がエチル基又はイソプロピル基、Ｒ^５が水素原子である化合物、その塩又はその水和物、
一般式（１）において、Ｒ^１がアセチル基、Ｒ^２及びＲ^３が同一で水素原子、Ｒ^４がエチル基、Ｒ^５が水素原子である化合物、その塩又はその水和物、
これらの化合物、あるいは一般式（１）において、Ｒ^１がアルデヒド基、Ｒ^２及びＲ^３が相異なり水素原子又はメトキシ基、Ｒ^４がエチル基、Ｒ^５が水素原子である化合物、その塩又はその水和物を有効成分とする医薬、
ストレプトミセス・エスピー・エムイーアール・ヴィディ１２０７（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｓｐ．Ｍｅｒ−ＶＤ１２０７．ＦＥＲＭＰ−１５８８９）を栄養培地中で培養し、その培養液から上記の化合物又はその塩を採取する事を特徴とする、上記化合物又はその塩の製造方法に関する。
本発明は、上記の化合物、その塩又はその水和物を薬理上有効量及び薬理上許容できる担体を含む医薬組成物、上記の化合物、その塩又はその水和物の薬理上有効量を患者に投与し、血管新生阻害活性または接着分子ＶＣＡＭ−１又は／及びＥ−ｓｅｌｅｃｔｉｎ発現抑制活性が有効な疾患を治療する方法または上記の化合物、その塩又はその水和物の、血管新生阻害活性または接着分子ＶＣＡＭ−１又は／及びＥ−ｓｅｌｅｃｔｉｎ発現抑制活性が有効な疾患の治療剤を製造する用途を提供する。
本発明は、リウマチ性関節炎、固形癌、アテローム性動脈硬化症、糖尿病性網膜症、血管腫、乾せんなどに対する予防剤及び治療薬を提供する。
発明の詳細な説明
本発明化合物の精製原料として、ストレプトミセス属の菌種いずれも使用可能であると期待されるが、本発明の代表的な菌株として、熊本県で採取された土壌より分離された放線菌で、本発明者らがエムイーアール・ヴイディ１２０７（Ｍｅｒ−ＶＤ１２０７）菌株と番号を付した菌株が挙げられる。このエムイーアール・ヴイディ１２０７菌株の菌学的性状は次の通りであった。
培養はすべて２８℃で行った。培地はインターナショナル・ストレプトミセス・プロジェクト・コミッティー（ＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓＰｒｏｊｅｃｔｃｏｍｍｉｔｔｅｅ）（以後ＩＳＰという）が推奨するものから選択した。色調の記載はコンティナー・コーポレーション・オブ・アメリカのカラー・ハーモニー・マニュアル（ＣｏｎｔａｉｎｅｒＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎｏｆＡｍｅｒｉｃａのＣｏｌｏｒＨａｒｍｏｎｙＭａｎｕａｌ）の（）内に示す符号で示した。
（１）形態
菌株の顕微鏡検査によると、基生菌糸はよく伸長し、同じくよく伸長する気中菌糸を着生した。気中菌糸の先端は断裂して円筒形の胞子となった。胞子の大きさは直径０．６〜０．８μｍ×０．８〜１．０μｍで胞子表面はｓｍｏｏｔｈであった。胞子は１０個から５０個が連鎖した直線状の胞子鎖となった。
（２）各種培地上での生育
ＩＳＰ−２培地；生育は良好で、薄い気中菌糸の上に赤色系の胞子をつけた。コロニー裏側は褐色で、培地中に黄褐色〜褐色の可溶性色素を出した。
ＩＳＰ−３培地；生育は弱く、白色の気中菌糸を僅かに産生じた。コロニー裏側は褐色であった。
ＩＳＰ−４培地；生育は良好で、豊富な気中菌糸の上に赤色系（５ｄｃ；Ｇｒａｙｉｓｈｙｅｌｌｏｗｉｓｈｐｉｎｋ）の胞子をつけた。コロニー裏側は黄褐色であった。
ＩＳＰ−５培地；生育は中程度で、薄い気中菌糸の上に赤色系の胞子をつける。
コロニー裏側は褐色で、培地中に黄褐色〜褐色の可溶性色素を出した。
ＩＳＰ−７培地；メラニン色素を産生していた（培地黒変）。
また、産生した可溶性色素はｐＨによって変色しなかった。
（３）糖の資化性
本菌株の菌体をＩＳＰ−９培地に各種糖を加えた寒天培地に塗抹し、３〜１０日間培養して、その生育状況を観察した。グルコース、フラクトース、ラムノース、シュクロース、イノシトール、マンノース、アラビノース、キシロースをよく資化した。
（４）菌体成分分析
本菌株の菌体を６ＮＨＣｌで一夜加水分解し、その濃縮物をセルロースＴＬＣで分離し、ジアミノピメリン酸標準物質と比較して異性体型を確認した。得られたジアミノピメリン酸の異性体型はＬＬ型であった。
以上の菌学的性質から本菌はストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属の菌であることは明確である。本発明者らは、本菌をストレプトミセス・エスピー・エムイーアール・ヴイディー１２０７（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｓｐ．Ｍｅｒ−ＶＤ１２０７）として工業技術院生命工学工業技術研究所（郵便番号３０５−８５６６日本国茨城県つくば市東１丁目１番３号）にＦＥＲＭＰ−１５８８９の番号で１９９６年９月２７日に寄託した。又、これは１９９９年４月５日に国際寄託番号ＦＥＲＭＢＰ−６６９３で移管した。
生産菌の培養
上記微生物の培養方法は、原則的には一般微生物の培養法に準ずるが、通常は通気撹拌培養法などの好気的条件下で行なうのが好適である。培養に用いられる培地としては、ストレプトミセス属に属する微生物が利用できる栄養源を含有する培地であればよく、各種の合成培地、半合成培地、天然培地などいずれも用いることができる。培地組成としては炭素源としてのグルコース、シュークロース、フルクトース、グリセリン、デキストリン、澱粉、糖蜜、コーン・スティープ・リカー、有機酸などを単独又は組み合わせて用い得る。窒素源としてはファーマメディア、ペプトン、肉エキス、酵母エキス、大豆粉、カゼイン、アミノ酸、尿素などの有機窒素源、硝酸ナトリウム、硫酸アンモニウムなどの無機窒素源を単独又は組み合わせて用い得る。ナトリウム塩、カリウム塩、マグネシウム塩、リン酸塩、その他の重金属塩なども必要に応じて添加使用され得る。なお、培養中発泡の著しいときは公知の各種消泡剤を適宜培地中に添加することもできるが、その添加は目的物質の生産に悪影響をあたえないものとする必要がある。
培地のｐＨは微生物の至適ｐＨ範囲、通常中性付近とするのが望ましい。培養温度は、微生物が良好に生育する温度、通常２０〜４０℃、特に好ましくは３０℃付近に保つのがよい。培養時間は液体培養の場合、１〜５日間程度とされる。もちろん上述した各種の培養条件は、使用微生物の種類や特性、外部条件などに応じて適宜変更でき、またそれぞれに応じて上記範囲から最適条件を選択、調節される。
血管新生阻害活性のスクリーニング法として、ラット大動脈片をコラーゲンゲル内にて培養した場合に観察される管腔形成の阻害度を指標とした（ＮｉｃｏｓｉａＲ．Ｆ．，Ｌａｂ．Ｉｎｖｅｓｔ．，６３，１１５，１９９０）。又、得られた化合物についてその血管新生阻害活性の作用機構解析を目的として、ヒト臍帯静脈由来内皮細胞を用いる内皮細胞増殖抑制作用、及び内皮細胞に対する接着分子発現抑制作用について測定した。
菌の培養液からの本発明化合物の精製は以下のようにして精製することができる。ストレプトミセス属の微生物を通常の適切な培養条件にて培養後、培養液を清澄濾過したのちブタノール又はメチルイソブチルケトンなどの有機溶媒を加え抽出し、有機溶媒層を減圧下濃縮する。次いでメタノールにて抽出し、石油エーテル（ｌｉｇｈｔｐｅｔｒｏｌｅｕｍ）などで処理し粗抽出物を得る。次いでシリカゲルなどを用いる吸着クロマトグラフィー、ＬＨ２０ゲルクロマトグラフィー、分配クロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィー、ペーパークロマトグラフィーなどを適宜利用して分画し、活性スクリーニングにより活性画分を確認する。上記手法を適宜組み合わせることにより活性物質を単離することができる。吸着クロマトグラフィーに使用する溶媒としては、クロロホルム、メタノール、アセトン、ヘキサン、トルエンなど通常使用される有機溶媒を用い、適宜濃度を選択、組み合わせて使用することができる。結晶化の溶媒としてはクロロホルムとヘキサン、又はクロロホルムと四塩化炭素などを用いることができる。一つの手法としてＭ．Ｌｕｍｂらの方法がある（Ｎａｔｕｒｅ．２０６，２６３，１９６５）。単離した化合物の構造解析は、元素分析、ＧＣ−ＭＳ、ＮＭＲ、融点など常法の手法によって行うことができる。
単離した化合物は強力な血管新生阻害活性を有することを見い出した。前記の如く、各種疾患において異常な血管新生が観察されていることから、それら疾患、例えばリウマチ性関節炎、固形癌、アテローム性動脈硬化症、糖尿病性網膜症、血管腫、乾せんなどの予防剤として、また治療薬として期待されるものであり、特に抗固形癌剤として有効である。
該化合物を各種疾患治療・予防剤として投与する場合、錠剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤、シロップ剤などとして経口的に投与してもよいし、また噴霧剤、坐剤、注射剤、外用剤、点滴剤として非経口的に投与してもよい。投与量は症状の程度、年齢、肝疾患の種類などにより著しく異なるが、通常成人１日当たり約１ｍｇ〜１００ｍｇを１日１〜数回にわけて投与する。
製剤化の際は通常の製剤担体を用い、常法により製造する。すなわち、経口用固形製剤を調製する場合は、主薬に賦形剤、更に必要に応じて結合剤、崩壊剤、滑沢剤、着色剤、矯味矯臭剤などを加えた後、常法により錠剤、被覆錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤などとする。これらの錠剤、顆粒剤には糖衣、ゼラチン衣、その他必要により適宜コーティングすることは勿論差し支えない。
注射剤を調製する場合には、主薬に必要によりｐＨ調整剤、緩衝剤、安定化剤、可溶化剤などを添加し、常法により皮下、筋肉内、静脈内用注射剤とする。
実施例
以下の実施例によりさらに詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
実施例１精製方法
Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｓｐ，ＶＤ１２０７株の斜面培養（ＩＳＰ−２寒天培地）から１白金耳を１００ｍｌの種培地（グリセロール２％、グルコース２％、大豆粉２％、酵母エキス０．５％、ＮａＣｌ０．２５％、ＣａＣＯ_３０．３２％、ＣｕＳＯ_４・５Ｈ_２Ｏ０．０００５％、ＭｎＣｌ_２・４Ｈ_２Ｏ０．０００５％、ＺｎＳＯ_４・７Ｈ_２Ｏ０．０００５％）を入れた５００ｍｌ容の三角フラスコに接種した。これを２８℃で２日間回転撹拌機上で培養して一次種培養液を得た。この一次種培養液５ｍｌを上記と同じ組成の培地５００ｍｌを含む３Ｌ容坂口フラスコに接種して、２８℃で４８時間往復式撹拌機上で培養を行って二次種培養液を得た。この二次種培養液１Ｌづつを上記と同じ組成の培地１００Ｌを含む２００Ｌ容培養タンク２基に接種して、２８℃で６４時間通気撹拌培養（通気量５０Ｌ／ｍｌ、撹拌１８５−３２５ｒ．ｐ．ｍ．）を行った。
得られた全培養液２００Ｌを連続遠心分離器にかけ、上清と菌体とに分離した。上清をダイヤイオンＨＰ−２０２０Ｌのカラムに通過させ、２０％メタノール６０Ｌで洗浄した。続いて、８０％アセトン６０Ｌで溶出し、溶出液を減圧下で濃縮し、アセトンを留去した。残った水溶液を、酢酸エチル５Ｌで２回抽出し、酢酸エチル層を減圧下濃縮乾固して１９ｇの粗抽出物を得た。
また、菌体を１００Ｌのメタノールで抽出し、得られたメタノール抽出物を、減圧下で濃縮し、メタノールを留去した。残った水溶液を、酢酸エチル１２Ｌで２回抽出した。得られた抽出液を減圧下濃縮乾固して７４ｇの粗抽出物を得た。
上清と菌体からの抽出物をあわせ、少量のジメチルスルホキシドに溶解し、アセトニトリル−１０ｍＭリン酸二水素カリウム緩衝液（ｐＨ３．５）＝４：６の混合溶液で予め平衡化しておいたＹＭＣ−ＧＥＬＯＤＳ−ＡＭ１２０−Ｓ５０（ワイエムシィ社製）のカラム（内径５０ｍｍ、長さ９５０ｍｍ）に二度に分けて付した。同じ組成の混合溶媒、１：１の組成の混合溶媒、５５：４５の組成の混合溶媒で洗浄した。続いて、６：４の組成の混合溶媒、６５：３５の組成の混合溶媒、７：３の組成の混合溶媒で順次極性を下げて、溶出した。溶出液は高速液体クロマトグラフで分析し、ＶＤ１２０７Ｕ１，Ｕ２，Ａ１，Ａ２，Ｂ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｆ’，Ｇ１，Ｇ２，Ｇ’，Ｈ（カラム：Ｊ’ｓｐｈｅｒｅＯＤＳ−Ｈ８０、内径４．６ｍｍ、長さ７５ｍｍ、ワイエムシイ社製、移動層：アセトニトリル−１０ｍＭリン酸二水素カリウム緩衝液（ＰＨ３．５）＝６：４、流速：１ｍＬ／ｍｉｎ、検出：２５４ｎｍにおける紫外吸収、保持時間；Ｕ１，Ｕ２：３．７ｍｉｎ、Ａ１，Ａ２：４．８ｍｉｎ、Ｂ：５．４ｍｉｎ、Ｃ：６．０ｍｉｎ、Ｄ：７．０ｍｉｎ、Ｅ：７．４ｍｉｎ、Ｆ：８．０ｍｉｎ、Ｆ’：８．２ｍｉｎ、Ｇ１，Ｇ２：９．４ｍｉｎ、Ｇ’：９．８ｍｉｎ、Ｈ：１０．３ｍｉｎ）の各成分を含む溶出液をそれぞれ集め、Ｕ１，Ｕ２成分を含むフラクション、Ａ１，Ａ２成分を含むフラクション、Ｂ成分を含むフラクション、Ｃ成分を含むフラクション、Ｄ成分を含むフラクション、Ｅ成分を含むフラクション、Ｆ成分を含むフラクション、Ｆ’成分を含むフラクション、Ｇ１，Ｇ２，Ｇ’成分を含むフラクション、Ｈ成分を含むフラクションをそれぞれ得た。各フラクションはアセトニトリルを減圧下留去した後、酢酸エチルで抽出した。酢酸エチル層を脱イオン水で洗浄後、減圧下濃縮乾固した。
実施例２ＶＤ１２０７Ｕ１，Ｕ２の精製及び構造解析
実施例１で得られたＵ１，Ｕ２成分を含むフラクションを酢酸エチルに溶解し、少量のシリカゲル（ＳｉｌｉｃａＧｅｌＦＬ１００Ｄ、富士シリシア化学社製）を加え、溶媒を減圧下で留去した。残渣をシリカゲルのカラム（内径２０ｍｍ、長さ５００ｍｍ）に付した。ヘキサン−アセトン＝９０：１０の混合溶媒で洗浄し、８５：１５の混合溶媒で溶出した。Ｕ１，Ｕ２成分を含む溶出液をあわせ、濃縮乾固した。
このものを少量のジメチルスルホキシドに溶解し、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｊ’ｓｐｈｅｒｅＯＤＳ−Ｈ８０、内径２０ｍｍ、長さ２５０ｍｍ、ワイエムシイ社製、移動層：アセトニトリル−１０ｍＭリン酸二水素カリウム緩衝液（ｐＨ３．５）＝５５：４５、流速：１２ｍＬ／ｍｉｎ、検出：２５４ｎｍにおける紫外吸収、保持時間：Ｕ１：２６．２分、Ｕ２：２７．１分）に付した。この分取をくりかえし、Ｕ１，Ｕ２成分のピークを示す溶出液をそれぞれ併せ、アセトニトリルを減圧下留去した後、酢酸エチルで抽出した。酢酸エチル層を脱イオン水で洗浄後、減圧下濃縮乾固した。残渣を凍結乾燥して、ＶＤ１２０７Ｕ１，Ｕ２の純粋な白色粉末をそれぞれ５７ｍｇ、１３２ｍｇ得た。
ＶＤ１２０７Ｕ１構造解析データ
１．色及び性状：白色粉末
２．分子式：Ｃ_２３Ｈ_３３Ｏ_８
３．マススペクトル（ＦＡＢ−ＭＳ）：ｍ／ｚ４３７（Ｍ＋Ｈ）^＋
４．比旋光度：［α］^Ｄ _２３＋２．５（ｃ０．１、ＣＨＣｌ_３）
５．紫外部吸収スペクトル：
中性メタノール中：λｍａｘｎｍ（ε）：２５７（２３７００），３２４（３１００）
酸性メタノール中：λｍａｘｎｍ（ε）：２５７（２５０００），３２４（３２００）
塩基性メタノール中：λｍａｘｎｍ（ε）：２６０（１０３００），３１７（９７００），３４４（８９００）
６．赤外部吸収スペクトル：
ＫＢｒ粉末中で測定した。主な吸収を示す。（波数、ｃｍ^−１）
３４４０，２９７０，２８８０，１６４０，１５９０，１４９０，１４６０，１３９０，１３５０，１２１０，１１６０，１０９０，１０４０，９７０，９３０，９００，８３０，７４０，６７０，５９０，４６０，４１０
７．^１ＨＮＭＲスペクトル：
重クロロホルム溶液中で測定したスペクトル^１Ｈ−シフト（Ｊ値）
８．３９（１Ｈ，ｓ），６．４３（１Ｈ，ｓ），４．８１（１Ｈ，ｂｒｓ），４．４６（１Ｈ，ｄｄｄ，１１，１０，１．５），４．２７（１Ｈ，ｄｄｄ，１１，６．５），３．３０（１Ｈ，ｔ，６．５），３．５１（１Ｈ，ｄｄｄ，１０．４，３．５），２．３２（１Ｈ，ｄｄｄ，１２．５，１．５），１．５４（１Ｈ，ｍ），３．５９（２Ｈ，ｍ），１．７５（１Ｈ，ｍ），１．６１（１Ｈ，ｍ），３．５９（２Ｈ，ｍ），１．４４（２Ｈ，ｍ），１．２９（３Ｈ，ｍ），１．２９（３Ｈ，ｍ），１．３０（３Ｈ，ｔ，７．５），１．０６（３Ｈ，ｄ，７．５），１３．２１（１Ｈ，ｓ），１３．１８（１Ｈ，ｓ），２．８２（１Ｈ，ｄ，２．５），１．６８（１Ｈ，ｄ，１１），
８．^１３ＣＮＭＲスペクトル：
重クロロホルム溶液中で測定したスペクトル^１３Ｃ−シフト
２０９．１（ｓ），２０７．５（ｓ），１６９．７（ｓ），１６８．７（ｓ），１３５．６（ｄ），１１４．９（ｓ），１１１．９（ｓ），１０５．１（ｄ），９４．０（ｄ），７０．２（ｄ），６２．５（ｄ），６１．９（ｓ），５９．８（ｄ），５０．０（ｄ），３７．３（ｔ），３４．９（ｔ），３１．２（ｔ），２０．６（ｔ），２０．６（ｔ），１９．７（ｑ），１９．１（ｑ），１４．２（ｑ），１０．４（ｑ），
９．溶解性：
可溶：酢酸エチル、クロロホルム、ジメチルスルホキシド
不溶：中性の水
１０．高速液体クロマトグラフィー：
カラム：Ｉ’ｓｐｈｅｒｅＯＤＳ−Ｈ８０、内径４．６ｍｍ、長さ７５ｍｍ（ワイエムシイ社製）
溶媒：アセトニトリル−１０ｍＭリン酸二水素カリウム緩衝液（ｐＨ３．５）＝６：４
流速：１ｍＬ／ｍｉｎ
検出波長：２５４ｎｍにおける紫外吸収
保持時間：３．７ｍｉｎ
１１．薄層クロマトグラフィー：
担体：シリカゲル６０Ｆ２５４（メルク社製、ドイツ）
展開溶媒：ヘキサン／アセトン（７：３）
Ｒｆ値：０．３８。
ＶＤ１２０７Ｕ２構造解析データ
１．色及び性状：白色粉末
２．分子式：Ｃ_２３Ｈ_３３Ｏ_８
３．マススペクトル（ＦＡＢ−ＭＳ）：ｍ／ｚ４３７（Ｍ＋Ｈ）^＋
４．比旋光度：［α］^Ｄ _２１−６．２（ｃ０．１、ＣＨＣｌ_３）
５．紫外部吸収スペクトル：
中性メタノール中：λｍａｘｎｍ（ε）：２５７（４１７００），３２４（５７００）
酸性メタノール中：λｍａｘｎｍ（ε）：２５７（４１９００），３２５（５１００）
塩基性メタノール中：λｍａｘｎｍ（ε）：２６１（１８７００），３１６（１７３００），３４６（１６７００）
６．赤外部吸収スペクトル：
ＫＢｒ粉末中で測定した。主な吸収を示す。（波数、ｃｍ^−１）
３４３０，２９７０，２８８０，１６４０，１５９０，１４９０，１４７０，１４３０，１３５０，１２１０，１１６０，１０９０，１０４０，９９０，９７０，９３０，９００，８３０，７６０，６８０，５９０，５４０，４６０
７．^１ＨＮＭＲスペクトル：
重クロロホルム溶液中で測定したスペクトル^１Ｈ− シフト（Ｊ値）
８．４２（１Ｈ，ｓ），６．４６（１Ｈ，ｓ），５．０２（１Ｈ，ｄ，３），４．４１（１Ｈ，ｄｄｄ，１１．８，１．５），４．２２（１Ｈ，ｄｄｄ，１１，６．５），３．３１（１Ｈ，ｔ，６．５），３．５９（１Ｈ，ｄｄｄ，１０．４，３．５），２．０５（１Ｈ，ｄｄｄ，１２．５，１．５），１．４１（１Ｈ，ｄｄ，１１，１２），３．５５（１Ｈ，ｍ），１．８５（２Ｈ，ｍ），１．２５（２Ｈ，ｍ），１．６３（２Ｈ，ｍ），１．２９（３Ｈ），１．２９（３Ｈ），０．９０（３Ｈ，ｄ，７．５），１．０９（３Ｈ，ｄ，７．５），１３．２１（１Ｈ，ｓ），１３．１７（１Ｈ，ｓ），２．５９（１Ｈ，ｄ，３．５），１．５１（１Ｈ，ｄ，１２），
８．^１３ＣＮＭＲスペクトル：
重クロロホルム溶液中で測定したスペクトル^１３Ｃ−シフト
２０８．９（ｓ），２０６．５（ｓ），１６９．９（ｓ），１６９．２（ｓ），１３５．５（ｄ），１１４．５（ｓ），１１２．０（ｓ），１０５．４（ｄ），９４．５（ｄ），６９．８（ｄ），６２．４（ｄ），６１．８（ｓ），５９．９（ｄ），４９．９（ｄ），３７．３（ｄ），３４．８（ｄ），３２．３（ｔ），２０．６（ｔ），２０．６（ｔ），１９．６（ｑ），１９．３（ｑ），１４．２（ｑ），１０．５（ｑ），
９．溶解性：
可溶：酢酸エチル、クロロホルム、ジメチルスルホキシド
不溶：中性の水
１０．高速液体クロマトグラフィー：
カラム：Ｊ’ｓｐｈｅｒｅＯＤＳ−Ｈ８０、内径４．６ｍｍ、長さ７５ｍｍ（ワイエムシイ社製）
溶媒：アセトニトリル−１０ｍＭリン酸二水素カリウム緩衝液（ｐＨ３．５）＝６：４
流速：１ｍＬ／ｍｉｎ
検出波長：２５４ｎｍにおける紫外吸収
保持時間：３．７ｍｉｎ
１１．薄層クロマトグラフィー：
担体：シリカゲル６０Ｆ２５４（メルク社製、ドイツ）
展開溶媒：ヘキサン／アセトン（７：３）
Ｒｆ値：０．３５。
実施例３ＶＤ１２０７Ａ１，Ａ２の精製及び構造解析
実施例１で得られたＡ１，Ａ２成分を含むフラクションに溶解し、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｊ’ｓｐｈｅｒｅＯＤＳ−Ｈ８０、内径２０ｍｍ、長さ２５０ｍｍ、ワイエムシイ社製、移動層：アセトニトリル−１０ｍＭリン酸二水素カリウム緩衝液（ｐＨ３．５）＝６０：４０、流速：１０ｍＬ／ｍｉｎ、検出：２５４ｎｍにおける紫外吸収、保持時間：Ａ１，Ａ２：２９．４分）に付した。この分取をくりかえし、Ａ１，Ａ２成分のピークを示す溶出液を併せ、アセトニトリルを減圧下留去した後、酢酸エチルで抽出した。酢酸エチル層を脱イオン水で洗浄後、減圧下濃縮乾固した。
このものを少量の酢酸エチルに溶解し、薄層クロマトグラフプレート（シリカゲル６０Ｎｏ．５７４４メルク社製）で展開溶媒（トルエン−メタノール＝９：１）を用いて分取薄層クロマトグラフを行った。展開後ＵＶランプ（２５４ｎｍ）でＡ１，Ａ２成分のスポットを確認し（Ｒｆ値：Ａ１：０．２３、Ａ２：０．１７），それぞれの成分を酢酸エチル−メタノール＝１：１の溶媒で溶出させ、減圧下濃縮乾固した。残渣を凍結乾燥して、ＶＤ１２０７Ａ１，Ａ２の純粋な白色粉末をそれぞれ６ｍｇ、１１ｍｇ得た。
ＶＤ１２０７Ａ１構造解析データ
１．色及び性状：白色粉末
２．分子式：Ｃ_２４Ｈ_３５Ｏ_８
３．マススペクトル（ＦＡＢ−ＭＳ）：ｍ／ｚ４５１（Ｍ＋Ｈ）^＋
４．比旋光度：［α］^Ｄ _２３＋１．９（ｃ０．１、ＣＨＣｌ_３）
５．紫外部吸収スペクトル：
中性メタノール中：λｍａｘｎｍ（ε）：２５７（４８９００），３２４（６９００）
酸性メタノール中：λｍａｘｎｍ（ε）：２５７（５４３００），３２４（７７００）
塩基性メタノール中：λｍａｘｎｍ（ε）：２６１（２２１００），３１７（２０７００），３４５（２０１００）
６．赤外部吸収スペクトル：
ＫＢｒ粉末中で測定した。主な吸収を示す。（波数、ｃｍ^−１）
３４４０，２９６０，１６４０，１５９０，１４９０，１４７０，１３９０，１３５０，１２１０，１１６０，１０９０，１０３０，９８０，９３０，８３０，７４０，６７０，５９０，４６０
７．^１ＨＮＭＲスペクトル：
重クロロホルム溶液中で測定したスペクトル^１Ｈ−シフト（Ｊ値）
８．４３（１Ｈ，ｓ），６．４４（１Ｈ，ｓ），４．８２（１Ｈ，ｂｒｓ），４．３９（１Ｈ，ｄｄｄ，１１．５，９．５，２），４．２７（１Ｈ，ｄｄｄ，１２，１１．５，５），３．３０（１Ｈ，ｄｄ，７．６），３．５８（１Ｈ，ｍ），１．８４（１Ｈ，ｄｄｄ，１３．５，１１．４），１．３３（１Ｈ，ｄｄｄ，１３．５，１０，３．５），２．３４（１Ｈ，ｄｄｄ．１２，５，２），１．５３（１Ｈ，ｄｄｄ，１２，１２，１１．５），３．５９（１Ｈ，ｓｅｐｔ，７），１．４４（１Ｈ，ｍ），０．８９（３Ｈ，ｄ，６．５），０．８９（３Ｈ，ｄ，６．５），１．６３−１．５２（２Ｈ，ｍ），１．２８（３Ｈ，ｄ，７），１．３０（３Ｈ，ｄ，７），１．０６（３Ｈ，ｔ，７．５），１３．２２（１Ｈ，ｓ），１３．１８（１Ｈ，ｂｒｓ），２．４９（１Ｈ，ｂｒｓ），１．６３（１Ｈ，ｄ，１１．５）
８．^１３ＣＮＭＲスペクトル：
重クロロホルム溶液中で測定したスペクトル^１３Ｃ−シフト
２０９．１（ｓ），２０７．８（ｓ），１６９．７（ｓ），１６８．７（ｓ），１３５．７（ｄ），１１５．１（ｓ），１１１．９（ｓ），１０５．１（ｄ），９４．１（ｄ），７１．０（ｄ），６２．５（ｄ），６１．８（ｓ），５９．８（ｄ），４８．３（ｄ），３８．４（ｔ），３７．５（ｔ），３４．９（ｄ），２６．０（ｄ），２３．８（ｑ），２１．９（ｑ），２０．６（ｔ），１９．７（ｑ），１９．１（ｑ），１０．５（ｑ）
９．溶解性：
可溶：酢酸エチル、クロロホルム、ジメチルスルホキシド
不溶：中性の水
１０．高速液体クロマトグラフィー：
カラム：Ｊ’ｓｐｈｅｒｅＯＤＳ−Ｈ８０、内径４．６ｍｍ、長さ７５ｍｍ（ワイエムシイ社製）
溶媒：アセトニトリル−１０ｍＭリン酸二水素カリウム緩衝液（ｐＨ３．５）＝６：４
流速：１ｍＬ／ｍｉｎ
検出波長：２５４ｎｍにおける紫外吸収
保持時間：４．８ｍｉｎ
１１．薄層クロマトグラフィー：
担体：シリカゲル６０Ｆ２５４（メルク社製、ドイツ）
展開溶媒：トルエン／メタノール（９：１）
Ｒｆ値：０．２３。
ＶＤ１２０７Ａ２構造解析データ
１．色及び性状：白色粉末
２．分子式：Ｃ_２４Ｈ_３５Ｏ_８
３．マススペクトル（ＦＡＢ−ＭＳ）：ｍ／ｚ４５１（Ｍ＋Ｈ）^＋
４．比旋光度：［α］^Ｄ _２３−６．２（ｃ０．１、ＣＨＣｌ_３）
５．紫外部吸収スペクトル：
中性メタノール中：λｍａｘｎｍ（ε）：２５８（６３９００），３２５（９５００）
酸性メタノール中：λｍａｘｎｍ（ε）：２５７（６３９００），３２５（９４００）
塩基性メタノール中：λｍａｘｎｍ（ε）：２６１（２５１００），３１７（２３４００），３４７（２５０００）
６．赤外部吸収スペクトル：
ＫＢｒ粉末中で測定した。主な吸収を示す。（波数、ｃｍ^−１）
３４４０，２９６０，１６４０，１５９０，１４９０，１４７０，１３５０，１２１０，１１６０，１０９０，１０４０，９７０，９３０，９００，８３０，７３０，６９０，５９０，５４０，４６０
７．^１ＨＮＭＲスペクトル：
重クロロホルム溶液中で測定したスペクトル^１Ｈ−シフト（Ｊ値）
８．４６（１Ｈ，ｓ），６．４６（１Ｈ，ｓ），５．０１（１Ｈ，ｄ，３），４．３４（１Ｈ，ｄｄｄ，１２．７，１．５），４．２１（１Ｈ，ｄｄｄ，１２，１１．５，４．５），３．３１（１Ｈ，ｔ，６．５），３．６９（１Ｈ，ｄｄｄ，１０．５，７，３．５），１．９１（１Ｈ，ｄｄｄ，１３．５，１０．５，５），１．６６（１Ｈ，ｍ），２．０３（１Ｈ，ｄｄｄ，１２，４．５，１．５），１．４５（１Ｈ，ｄｄｄ，１２，１２，１２），３．５７（１Ｈ，ｓｅｐｔ，７），１．５０（１Ｈ，ｍ），０．９１（３Ｈ，ｄ，６．５）０．９１（３Ｈ，ｄ，６．５），１．６４（２Ｈ，ｍ），１．２９（３Ｈ，ｄ，７），１．３０（３Ｈ，ｄ，７），１．１０（３Ｈ，ｔ，７．５），１３．２１（１Ｈ，ｓ），１３．２１（１Ｈ，ｓ），２．５９（１Ｈ，ｄ，３），１．５４（１Ｈ，ｄ，１１．５）
８．^１３ＣＮＭＲスペクトル：
重クロロホルム溶液中で測定したスペクトル^１３Ｃ−シフト
２０８．９（ｓ），２０６．６（ｓ），１６９．９（ｓ），１６９．２（ｓ），１３５．５（ｄ），１１４．６（ｓ），１１２．０（ｓ），１０５．４（ｄ），９４．５（ｄ），７０．６（ｄ），６２．５（ｄ），６１．８（ｓ），５９．８（ｄ），４７．７（ｄ），３９．２（ｔ），３７．１（ｔ），３４．８（ｄ），２６．１（ｄ），２３．７（ｑ），２２．０（ｑ），２０．６（ｔ），１９．６（ｑ），１９．２（ｑ），１０．５（ｑ）
９．溶解性：
可溶：酢酸エチル、クロロホルム、ジメチルスルホキシド
不溶：中性の水
１０．高速液体クロマトグラフィー：
カラム：Ｊ’ｓｐｈｅｒｅＯＤＳ−Ｈ８０、内径４．６ｍｍ、長さ７５ｍｍ（ワイエムシイ社製）
溶媒：アセトニトリル−１０ｍＭリン酸二水素カリウム緩衝液（ｐＨ３．５）＝６：４
流速：１ｍＬ／ｍｉｎ
検出波長：２５４ｎｍにおける紫外吸収
保持時間：４．８ｍｉｎ
１１．薄層クロマトグラフィー：
担体：シリカゲル６０Ｆ２５４（メルク社製、ドイツ）
展開溶媒：トルエン／メタノール（９：１）
Ｒｆ値：０．１７。
実施例４ＶＤ１２０７Ｂ精製及び構造解析
実施例１で得られたＢ成分を含むフラクションを少量の酢酸エチルに溶解し、薄層クロマトグラフプレート（シリカゲル６０Ｎｏ．１３８９５メルク社製）で展開溶媒（ヘキサン−アセトン＝７：３）を用いて分取薄層クロマトグラフを行った。展開後ＵＶランプ（２５４ｎｍ）でＢ成分のスポットを確認し、Ｂ成分を酢酸エチル−メタノール＝１：１の溶媒で溶出させ、減圧下濃縮乾固した。
このものを少量の酢酸エチルに溶解し、薄層クロマトグラフプレート（シリカゲル６０Ｎｏ．５７４４メルク社製）で展開溶媒（トルエン−メタノール＝９：１）を用いて分取薄層クロマトグラフを行った。展開後ＵＶランプ（２５４ｎｍ）でＢ成分のスポットを確認し、Ｂ成分を酢酸エチル−メタノール＝１：１の溶媒で溶出させ、減圧下濃縮乾固した。残渣を凍結乾燥して、ＶＤ１２０７Ｂの純粋な淡橙色粉末６１ｍｇを得た。
ＶＤ１２０７Ｂ構造解析データ
１．色及び性状：淡橙色粉末
２．分子式：Ｃ_２５Ｈ_３６Ｏ_９
３．マススペクトル（ＦＡＢ−ＭＳ）：ｍ／ｚ４８１（Ｍ＋Ｈ）^＋
４．比旋光度：［α］^Ｄ _２１−９７．７（ｃ０．１、ＣＨＣｌ_３）
５．紫外部吸収スペクトル：
中性メタノール中：λｍａｘｎｍ（ε）：２５４（２１３００），２７６（１６８００），３４１（８５００）
酸性メタノール中：λｍａｘｎｍ（ε）：２５３（２７４００），２７６（１９１００），３５３（７７００）
塩基性メタノール中：λｍａｘｎｍ（ε）：２７８（１８２００），３３２（２４６００）
６．赤外部吸収スペクトル：
ＫＢｒ粉末中で測定した。主な吸収を示す。（波数、ｃｍ^−１）
３３６０，２９６０，１６３０，１４５０，１３８０，１３００，１２６０，１１８０，１０９０，１０４０，９３０，８３０，７５０，６８０，５９０
７．^１ＨＮＭＲスペクトル：
重クロロホルム溶液中で測定したスペクトル^１Ｈ−シフト（Ｊ値）
１０．４２（１Ｈ，ｓ），８．０８（１Ｈ，ｓ），４．９７（１Ｈ，ｄ，３），４．３３（１Ｈ，ｄ，６），４．４０（１Ｈ，ｄｄｄ，１２，７，２），４．１９（１Ｈ，ｄｄｄ，１２，１２，５），３．２８（１Ｈ，ｔ，６．５），３．２３（３Ｈ，ｓ），３．６１（１Ｈ，ｍ），２．０５（１Ｈ，ｄｄｄ，１２，５．２），１．４４（１Ｈ，ｄｄｄ，１２，１２，１２），１．９２（１Ｈ，ｓｅｐｔ，ｄ，７．７），１．８０（２Ｈ，ｍ），１．６４（２Ｈ，ｑｄ，７．５，６．５），１．２８（２Ｈ，ｍ），０．９３（３Ｈ，ｄ，６．５），０．９３（３Ｈ，ｄ，６．５），０．８９（３Ｈ，ｄ，７．５），１．０８（３Ｈ，ｔ，７．５），１４．１７（１Ｈ，ｂｒｓ），１２．９７（１Ｈ，ｂｒｓ），２．８９（１Ｈ，ｓ），１．５６（１Ｈ，ｄ，１２）
８．^１３ＣＮＭＲスペクトル：
重クロロホルム溶液中で測定したスペクトル^１３Ｃ−シフト
２０７．２（ｓ），１９４．４（ｄ），１６７．９（ｓ），１６７．３（ｓ），１３７．６（ｄ），１２０．３（ｓ），１１３．０（ｓ），１０９．２（ｓ），９４．５（ｄ），８０．６（ｄ），６９．６（ｄ），６２．６（ｄ），６１．８（ｓ），５９．７（ｄ），５７．２（ｑ），４９．８（ｄ），３７．１（ｔ），３３．８（ｄ），３３．９，３１．８（ｔ），２０．６（ｔ），２０．６（ｔ），１８．７（ｑ），１７．６（ｑ），１４．１（ｑ），１０．５（ｑ）
９．溶解性：
可溶：酢酸エチル、クロロホルム、ジメチルスルホキシド
不溶：中性の水
１０．高速液体クロマトグラフィー：
カラム：Ｊ’ｓｐｈｅｒｅＯＤＳ−Ｈ８０、内径４．６ｍｍ、長さ７５ｍｍ（ワイエムシイ社製）
溶媒：アセトニトリル−１０ｍＭリン酸二水素カリウム緩衝液（ｐＨ３．５）＝６：４
流速：１ｍＬ／ｍｉｎ
検出波長：２５４ｎｍにおける紫外吸収
保持時間：５．４ｍｉｎ。
実施例５ＶＤ１２０７Ｃ精製及び構造解析
実施例１で得られたＣ成分を含むフラクションを少量のジメチルスルホキシドに溶解し、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｊ’ｓｐｈｅｒｅＯＤＳ−Ｈ８０、内径２０ｍｍ、長さ２５０ｍｍ、ワイエムシイ社製、移動層：アセトニトリル−１０ｍＭリン酸二水素カリウム緩衝液（ｐＨ３．５）＝６：４、流速：１２ｍＬ／ｍｉｎ、検出：２５４ｎｍにおける紫外吸収、保持時間：３１．３分）に付した。この分取をくりかえし、Ｃ成分の単一ピークを示す溶出液を併せ、アセトニトリルを減圧下留去した後、酢酸エチルで抽出した。酢酸エチル層を脱イオン水で洗浄後、減圧下濃縮乾固した。
得られた残渣を酢酸エチルに溶解し、少量のシリカゲル（ＷａｋｏｇｅｌＣ−２００、和光純薬工業社製）を加え、溶媒を減圧下で留去した。残渣をシリカゲルのカラム（内径２０ｍｍ、長さ５００ｍｍ）に付した。ヘキサン−アセトン＝９５：５の混合溶媒、９０：１０の混合溶媒で洗浄し、８０：２０の混合溶媒で溶出した。Ｃ成分を含む溶出液をあわせ、濃縮乾固した。
得られた残渣を酢酸エチルに溶解し、少量のシリカゲル（ＷａｋｏｇｅｌＣ−２００、和光純薬工業社製）を加え、溶媒を減圧下で留去した。残渣をシリカゲルのカラム（内径２０ｍｍ、長さ５００ｍｍ）に付した。トルエンで洗浄し、トルエン−メタノール＝９８：２の混合溶媒で溶出した。Ｃ成分を含む溶出液をあわせ、濃縮乾固した。
得られた残渣を少量のメタノールに溶解し、ＳｅｐｈａｄｅｘＬＨ−２０（ファルマシア製）のカラム（内径２０ｍｍ、長さ９５０ｍｍ）に付し、メタノールで溶出した。Ｃ成分を含む溶出液をあわせ、減圧下濃縮乾固した。残渣を凍結乾燥して、ＶＤ１２０７Ｃの純粋な白色粉末２５６ｍｇを得た。
ＶＤ１２０７Ｃ構造解析データ
１．色及び性状：白色粉末
２．分子式：Ｃ_２５Ｈ_３６Ｏ_９
３．マススペクトル（ＦＡＢ−ＭＳ）：ｍ／ｚ４８１（Ｍ＋Ｈ）^＋
４．比旋光度：［α］^Ｄ _２１＋５０．２（ｃ０．１、ＣＨＣｌ_３）
５．紫外部吸収スペクトル：
中性メタノール中：λｍａｘｎｍ（ε）：２５３（１９５００），２７７（１６３００），３４１（８７００）
酸性メタノール中：λｍａｘｎｍ（ε）：２５３（２５４００），２７７（１８４００），３５２（７６００）
塩基性メタノール中：λｍａｘｎｍ（ε）：２７７（１７１００），３３４（２５２００）
６．赤外部吸収スペクトル：
ＫＢｒ粉末中で測定した。主な吸収を示す。（波数、ｃｍ^−１）
２９６０，１６４０，１４６０，１３９０，１３００，１２５０，１１７０，１０９０，１０４０，９３０，８３０，７５０，６８０，５９０
７．^１ＨＮＭＲスペクトル：
重クロロホルム溶液中で測定したスペクトル^１Ｈ−シフト（Ｊ値）
１０．４３（１Ｈ，ｓ），８．０５（１Ｈ，ｓ），４．９６（１Ｈ，ｄ，２．５），４．３４（１Ｈ，ｄ，６．５），４．４１（１Ｈ，ｄｄｄ，１１．５，７．５，１．５），４．１９（１Ｈ，ｄｄｄ，１１．５，１１．５，５），３．２７（１Ｈ，ｔ，６．５），３．２２（３Ｈ，ｓ），３．６８（１Ｈ，ｄｄｄ，９．５，７．５，４．５），２．０３（１Ｈ，ｄｄｄ，１１．５，１．５），１．４８（１Ｈ，ｄｄｄ，１１．５，１１．５，１１），１．９６（１Ｈ，ｍ），１．８２（２Ｈ，ｍ），１．６０（２Ｈ，ｍ），１．２４（２Ｈ，ｍ），０．８８（３Ｈ，ｄ，６．５），０．９６（３Ｈ，ｄ，６．５），０．８８（３Ｈ，ｔ，７．５），１．０７（３Ｈ，ｔ，７．５），１４．２１（１Ｈ，ｂｒｓ），１２．９９（１Ｈ，ｂｒｓ），２．９９（１Ｈ，ｄ，２．５），１．６２（１Ｈ，ｄ，１１．５）
８．^１３ＣＮＭＲスペクトル：
重クロロホルム溶液中で測定したスペクトル^１３Ｃ−シフト
２０７．３（ｓ），１９４．４（ｄ），１６７．９（ｓ），１６７．４（ｓ），１３７．５（ｄ），１２０．３（ｓ），１１３．２（ｓ），１０９．１（ｓ），９４．５（ｄ），８０．５（ｄ），６９．８（ｄ），６２．６（ｄ），６１．８（ｓ），５９．７（ｄ），５７．２（ｑ），４９．３（ｄ），３６．９（ｔ），３３．７（ｄ），３２．１（ｔ），２０．７（ｔ），２０．６（ｔ），１８．７（ｑ），１７．９（ｑ），１４．２（ｑ），１０．５（ｑ）
９．溶解性：
可溶：酢酸エチル、クロロホルム、ジメチルスルホキシド
不溶：中性の水
１０．高速液体クロマトグラフィー：
カラム：Ｊ’ｓｐｈｅｒｅＯＤＳ−Ｈ８０、内径４．６ｍｍ、長さ７５ｍｍ（ワイエムシイ社製）
溶媒：アセトニトリル−１０ｍＭリン酸二水素カリウム緩衝液（ｐＨ３．５）＝６：４
流速：１ｍＬ／ｍｉｎ
検出波長：２５４ｎｍにおける紫外吸収
保持時間：６．０ｍｉｎ。
実施例６ＶＤ１２０７Ｄ精製及び構造解析
実施例１で得られたＤ成分を含むフラクションを少量のジメチルスルホキシドに溶解し、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｊ’ｓｐｈｅｒｅＯＤＳ−Ｈ８０、内径２０ｍｍ、長さ２５０ｍｍ、ワイエムシイ社製、移動層：アセトニトリル−１０ｍＭリン酸二水素カリウム緩衝液（ｐＨ３．５）＝６：４、流速：１２ｍＬ／ｍｉｎ、検出：２５４ｎｍにおける紫外吸収、保持時間：３７．１分）に付した。この分取をくりかえし、Ｄ成分の単一ピークを示す溶出液を併せ、アセトニトリルを減圧下留去した後、酢酸エチルで抽出した。酢酸エチル層を脱イオン水で洗浄後、減圧下濃縮乾固した。
得られた残渣を少量の酢酸エチルに溶解し、薄層クロマトグラフプレート（シリカゲル６０Ｎｏ．１３８９５メルク社製）で展開溶媒（ヘキサン−アセトン＝７：３）を用いて分取薄層クロマトグラフを行った。展開後ＵＶランプ（２５４ｎｍ）でＤ成分のスポットを確認し、Ｄ成分を酢酸エチル−メタノール＝１：１の溶媒で溶出させ、減圧下濃縮乾固した。
このものを少量の酢酸エチルに溶解し、薄層クロマトグラフプレート（シリカゲル６０Ｎｏ．５７４４メルク社製）で展開溶媒（トルエン−メタノール＝９：１）を用いて分取薄層クロマトグラフを行った。展開後ＵＶランプ（２５４ｎｍ）でＤ成分のスポットを確認し、Ｄ成分を酢酸エチル−メタノール＝１：１の溶媒で溶出させ、減圧下濃縮乾固した。残渣を凍結乾燥して、ＶＤ１２０７Ｄの純粋な淡橙色粉末６４ｍｇを得た。
ＶＤ１２０７Ｄ構造解析データ
１．色及び性状：淡橙色粉末
２．分子式：Ｃ_２４Ｈ_３４Ｏ_８
３．マススペクトル（ＦＡＢ−ＭＳ）：ｍ／ｚ４５１（Ｍ＋Ｈ）^＋
４．比旋光度：［α］^Ｄ _２１−１３．０（ｃ０．１、ＣＨＣｌ_３）
５．紫外部吸収スペクトル：
中性メタノール中：λｍａｘｎｍ（ε）：２５５（２３０００），２７６（１６３００），３５２（７８００）
酸性メタノール中：λｍａｘｎｍ（ε）：２５５（２７３００），２７６（１８０００），３５７（７８００）
塩基性メタノール中：λｍａｘｎｍ（ε）：２７９（１８０００），３３８（２６４００）
６．赤外部吸収スペクトル：
ＫＢｒ粉末中で測定した。主な吸収を示す。（波数、ｃｍ^−１）
３４４０，２９６０，２８７０，１６３０，１４６０，１３９０，１３００，１２７０，１１９０，１０９０，１０４０，９３０，８３０，６８０，６２０，５５０
７．^１ＨＮＭＲスペクトル：
重クロロホルム溶液中で測定したスペクトル^１Ｈ−シフト（Ｊ値）
１０．４１（１Ｈ，ｓ），７．７４（１Ｈ，ｓ），４．９９（１Ｈ，ｄ，３），４．３８（１Ｈ，ｄｄｄ，１１．５，９，１．５），４．２０（１Ｈ，ｄｄｄ，１１．５，１１．５，４．５），３．２９（１Ｈ，ｄｄ，７，６），３．５６（１Ｈ，ｄｄｄ，９．９，４），２．４７（１Ｈ，ｄｄ，１３．５，７）、２．４２（１Ｈ，ｄｄ，１３．５，７），２．０２（１Ｈ，ｄｄｄ，１２，４．５，１．５），１．４２（１Ｈ，ｄｄｄ，１２，１１．５，１１．５），１．８３（２Ｈ，ｍ），１．９１（１Ｈ，ｍ），０．９２（３Ｈ，ｄ，６．５），０．９２（３Ｈ，ｄ，６．５），１．６１（２Ｈ，ｍ），１．２５（２Ｈ，ｍ），０．８８（３Ｈ，ｔ，７．５），１．０８（３Ｈ，ｔ，７．５），１４．１５（１Ｈ，ｂｒｓ），１２．９８（１Ｈ，ｂｒｓ），２．７４（１Ｈ，ｄ，３），１．５５（１Ｈ，ｄ，１１．５）
８．^１３ＣＮＭＲスペクトル：
重クロロホルム溶液中で測定したスペクトル^１３Ｃ−シフト
２０６．７（ｓ），１９４．３（ｄ），１６８．０（ｓ），１６７．５（ｓ），１３９．４（ｄ），１２１．０（ｓ），１１２．５（ｓ），１０９．３（ｓ），９４．５（ｄ），６９．８（ｄ），６２．４（ｄ），６１．８（ｓ），５９．８（ｄ），４９．４（ｄ），３７．９（ｔ），３７．３（ｔ），３２．１（ｔ），２８．３（ｄ），２２．３（ｑ），２２．２（ｑ），２０．６（ｔ），２０．６（ｔ），１４．２（ｑ），１０．５（ｑ）
９．溶解性：
可溶：酢酸エチル、クロロホルム、ジメチルスルホキシド
不溶：中性の水
１０．高速液体クロマトグラフィー：
カラム：Ｊ’ｓｐｈｅｒｅＯＤＳ−Ｈ８０、内径４．６ｍｍ、長さ７５ｍｍ（ワイエムシイ社製）
溶媒：アセトニトリル−１０ｍＭリン酸二水素カリウム緩衝液（ｐＨ３．５）＝６：４
流速：１ｍＬ／ｍｉｎ
検出波長：２５４ｎｍにおける紫外吸収
保持時間：７．０ｍｉｎ。
実施例７ＶＤ１２０７Ｅ精製及び構造解析
実施例１で得られたＥ成分を含むフラクションを少量のジメチルスルホキシドに溶解し、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｊ’ｓｐｈｅｒｅＯＤＳ−Ｈ８０、内径２０ｍｍ、長さ２５０ｍｍ、ワイエムシイ社製、移動層：アセトニトリル−１０ｍＭリン酸二水素カリウム緩衝液（ｐＨ３．５）＝６：４、流速：１２ｍＬ／ｍｉｎ、検出：２５４ｎｍにおける紫外吸収、保持時間：３７．８分）に付した。この分取をくりかえし、Ｅ成分の単一ピークを示す溶出液を併せ、アセトニトリルを減圧下留去した後、酢酸エチルで抽出した。酢酸エチル層を脱イオン水で洗浄後、減圧下濃縮乾固した。
このものを少量の酢酸エチルに溶解し、薄層クロマトグラフプレート（シリカゲル６０Ｎｏ．５７４４メルク社製）で展開溶媒（トルエン−メタノール＝９：１）を用いて分取薄層クロマトグラフを行った。展開後ＵＶランプ（２５４ｎｍ）でＥ成分のスポットを確認し、Ｅ成分を酢酸エチル−メタノール＝１：１の溶媒で溶出させ、減圧下濃縮乾固した。残渣を凍結乾燥して、ＶＤ１２０７Ｅの純粋な白色粉末１６ｍｇを得た。
ＶＤ１２０７Ｅ構造解析データ
１．色及び性状：白色粉末
２．分子式：Ｃ_２６Ｈ_３８Ｏ_９
３．マススペクトル（ＦＡＢ−ＭＳ）：ｍ／ｚ４９５（Ｍ＋Ｈ）^＋
４．比旋光度：［α］^Ｄ _２１−８２．６（ｃ０．１、ＣＨＣｌ_３）
５．紫外部吸収スペクトル：
中性メタノール中：λｍａｘｎｍ（ε）：２５４（２２５００），２７６（１７７００），３４１（９３００）
酸性メタノール中：λｍａｘｎｍ（ε）：２５３（２９１００），２７６（２０１００），３５２（８２００）
塩基性メタノール中：λｍａｘｎｍ（ε）２７７（１９４００），３３３（２６２００）
６．赤外部吸収スペクトル：
ＫＢｒ粉末中で測定した。主な吸収を示す。（波数、ｃｍ^−１）
３４４０，２９６０，１６４０，１４６０，１３９０，１３００，１２６０，１１８０，１０９０，１０２０，９３０，８３０，７４０，６８０，５９０，５７０
７．^１ＨＮＭＲスペクトル：
重クロロホルム溶液中で測定したスペクトル^１Ｈ−シフト（Ｊ値）
１０．４２（１Ｈ，ｓ），８．１３（１Ｈ，ｓ），４．９５（１Ｈ，ｄ，３），４．３５（１Ｈ，ｄ，５．５），４．３３（１Ｈ，ｄｄｄ，１２，７，１．５），４．１７（１Ｈ，ｄｄｄ，１１．５，１１．５，４．５），３．２８（１Ｈ，ｄｄ，７．６），３．２３（３Ｈ，ｓ），３．７２（１Ｈ，ｄｄｄ，１０，７，３．５），１．８９（１Ｈ，ｄｄｄ，１３．５，１０，４．５），１．５８（１Ｈ，ｍ），２．０２（１Ｈ，ｄｄｄ，１２，４．５，１．５），１．４７（１Ｈ，ｄｄｄ，１２，１２，１１．５），１．９２（１Ｈ，ｓｅｐｔ，ｄ，７，５．５），１．４６（１Ｈ，ｍ），０．８８（３Ｈ，ｄ，６．５），０．８７（３Ｈ，ｄ，６．５），１．６１（２Ｈ，ｍ），０．９１（３Ｈ，ｄ，７），０．９２（３Ｈ，ｄ，７），１．０８（３Ｈ，ｔ，７．５），１４．２１（１Ｈ，ｓ），１２．９８（１Ｈ，ｓ），２．６９（１Ｈ，ｂｒｓ），１．５３（１Ｈ，ｄ，１１．５）
８．^１３ＣＮＭＲスペクトル：
重クロロホルム溶液中で測定したスペクトル^１３Ｃ−シフト
２０７．２（ｓ），１９４．４（ｄ），１６７．９（ｓ），１６７．３（ｓ），１３７．６（ｄ），１２０．３（ｓ），１１３．１（ｓ），１０９．２（ｓ），９４．５（ｄ），８０．６（ｄ），７０．３（ｄ），６２．６（ｄ），６１．７（ｓ），５９．７（ｄ），５７．２（ｑ），４７．６（ｄ），３８．７（ｔ），３６．９（ｔ），３３．８（ｄ），２６．１（ｄ），２３．６（ｑ），２１．８（ｑ），２０．６（ｔ），１８．７（ｑ），１７．５（ｑ），１０．５（ｑ）
９．溶解性：
可溶：酢酸エチル、クロロホルム、ジメチルスルホキシド
不溶：中性の水
１０．高速液体クロマトグラフィー：
カラム：Ｊ’ｓｐｈｅｒｅＯＤＳ−Ｈ８０、内径４．６ｍｍ、長さ７５ｍｍ（ワイエムシイ社製）
溶媒：アセトニトリル−１０ｍＭリン酸二水素カリウム緩衝液（ｐＨ３．５）＝６：４
流速：１ｍＬ／ｍｉｎ
検出波長：２５４ｎｍにおける紫外吸収
保持時間：７．４ｍｉｎ。
実施例８ＶＤ１２０７Ｆ精製及び構造解析
実施例１で得られたＦ成分を含むフラクションを少量のジメチルスルホキシドに溶解し、アセトニトリル−１０ｍＭリン酸二水素カリウム緩衝液（ｐＨ３．５）＝４５：５５の混合溶液で予め平衡化しておいたＹＭＣ−ＧＥＬＯＤＳ−ＡＭ１２０−Ｓ５０（ワイエムシィ社製）のカラム（内径３０ｍｍ、長さ４５０ｍｍ）に付した。同じ組成の混合溶媒、１：１の組成の混合溶媒で洗浄した後、５５：４５の組成の混合溶媒、６０：４０の組成の混合溶媒で順次極性を下げて溶出した。Ｆ成分を含む溶出液を集め、アセトニトリルを減圧下留去した後、酢酸エチルで抽出した。酢酸エチル層を脱イオン水で洗浄後、減圧下濃縮乾固した。
得られた残液を酢酸エチルに溶解し、少量のシリカゲル（ＳｌｉｃａＧｅｌＦＬ１００Ｄ、富士シリシア化学社製）を加え、溶媒を減圧下で留去した。残渣をシリカゲルのカラム（内径２０ｍｍ、長さ５００ｍｍ）に付した。ヘキサン、ヘキサン−アセトン＝９５：５の混合溶媒で洗浄し、９：１の混合溶媒、８５：１５の混合溶媒で溶出した。Ｆ成分を含む溶出液をあわせ、濃縮乾固した。
得られた残渣を酢酸エチルに溶解し、少量のシリカゲル（ＳｉｌｉｃａＧｅｌＦＬ１００Ｄ、富士シリシア化学社製）を加え、溶媒を減圧下で留去した。残渣をシリカゲルのカラム（内径２０ｍｍ、長さ５００ｍｍ）に付した。トルエンで洗浄し、トルエン−メタノール＝９９：１の混合溶媒、９８：２の混合溶媒で溶出した。Ｆ成分を含む溶出液をあわせ、濃縮乾固した。
このものを少量の酢酸エチルに溶解し、薄層クロマトグラフプレート（シリカゲル６０Ｎｏ．５７４４メルク社製）で展開溶媒（トルエン−メタノール＝９：１）を用いて分取薄層クロマトグラフを行った。展開後ＵＶランプ（２５４ｎｍ）でＦ成分のスポットを確認し、Ｆ成分を酢酸エチル−メタノール＝１：１の溶媒で溶出させ、減圧下濃縮乾固した。残渣を凍結乾燥して、ＶＤ１２０７Ｆの純粋な淡橙色粉末１２５ｍｇを得た。
ＶＤ１２０７Ｆ構造解析データ
１．色及び性状：淡橙色粉末
２．分子式：Ｃ_２６Ｈ_３８Ｏ_９
３．マススペクトル（ＦＡＢ−ＭＳ）：ｍ／ｚ４９５（Ｍ＋Ｈ）^＋
４．比旋光度：［α］^Ｄ _２１＋５４．１（ｃ０．１、ＣＨＣｌ_３）
５．紫外部吸収スペクトル：
中性メタノール中：λｍａｘｎｍ（ε）：２５４（１４９００），２７８（１２１００），３４８（５７００）
酸性メタノール中：λｍａｘｎｍ（ε）：２５４（１７４００），２７８（１３３００），３５１（５６００）
塩基性メタノール中：λｍａｘｎｍ（ε）：２７７（１２４００），３３８（２００００）
６．赤外部吸収スペクトル：
ＫＢｒ粉末中で測定した。主な吸収を示す。（波数、ｃｍ^−１）
３４２０，２９６０，１６３０，１４６０，１３８０，１３００，１２６０，１１８０，１０９０，１０４０，９３０，８３０，７４０，６８０，５９０，５７０
７．^１ＨＮＭＲスペクトル：
重クロロホルム溶液中で測定したスペクトル^１Ｈ−シフト（Ｊ値）
１０．４２（１Ｈ，ｓ），８．０８（１Ｈ，ｓ），４．９４（１Ｈ，ｄ，２．５），４．３４（１Ｈ，ｄ，６），４．３０（１Ｈ，ｍ），４．１７（１Ｈ，ｄｄｄ，１２，１２，４．５），３．２７（１Ｈ，ｄｄ，７．６），３．２２（３Ｈ，ｓ），３．７５（１Ｈ，ｄｄｄ，１０．５，７，３．５），１．９０（１Ｈ，ｄｄｄ，１３，１０．５，４．５），１．５９（１Ｈ，ｍ），２．０２（１Ｈ，ｄｄｄ，１２．５，５．２），１．４６（１Ｈ，ｄｄｄ，１２，１２，１２），１．９０（１Ｈ，ｓｅｐｔ，ｄ，７，７），１．４６（２Ｈ，ｍ），０．８８（３Ｈ，ｄ，６．５），０．８６（３Ｈ，ｄ，６．５），１．５９（２Ｈ，ｍ），０．９０（３Ｈ，ｄ，７），０．９４（３Ｈ，ｄ，７），１．０７（３Ｈ，ｔ，７．５），１４．２１（１Ｈ，ｂｒｓ），１２．９８（１Ｈ，ｂｒｓ），２．９５（１Ｈ，ｄ，３），１．５９（１Ｈ，ｄ，１２）
８．^１３ＣＮＭＲスペクトル：
重クロロホルム溶液中で測定したスペクトル^１３Ｃ−シフト
２０７．２（ｓ），１９４．４（ｄ），１６７．９（ｓ），１６７．３（ｓ），１３７，６（ｄ），１２０．２（ｓ），１１３．３（ｓ），１０９．２（ｓ），９４．５（ｄ），８０．７（ｄ），７０．５（ｄ），６２．７（ｄ），６１．７（ｓ），５９．７（ｄ），５７．２（ｑ），４７．２（ｄ），３８．７（ｔ），３６．６（ｔ），３３．９（ｄ），２６．２（ｔ），２３．６（ｑ），２１．９（ｑ），２０．６（ｔ），１８．７（ｑ），１７．７（ｑ），１０．５（ｑ），９．溶解性：
可溶：酢酸エチル、クロロホルム、ジメチルスルホキシド
不溶：中性の水
１０．高速液体クロマトグラフィー：
カラム：Ｊ’ｓｐｈｅｒｅＯＤＳ−Ｈ８０、内径４．６ｍｍ、長さ７５ｍｍ（ワイエムシイ社製）
溶媒：アセトニトリル−１０ｍＭリン酸二水素カリウム緩衝液（ｐＨ３．５）＝６：４
流速：１ｍＬ／ｍｉｎ
検出波長：２５４ｎｍにおける紫外吸収
保持時間：８．０ｍｉｎ。
実施例９ＶＤ１２０７Ｆ’精製及び構造解析
実施例１で得られたＦ’成分を含むフラクションに溶解し、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｊ’ｓｐｈｅｒｅＯＤＳ−Ｈ８０、内径２０ｍｍ、長さ２５０ｍｍ、ワイエムシイ社製、移動層：アセトニトリル−１０ｍＭリン酸二水素カリウム緩衝液（ｐＨ３．５）＝６０：４０、流速：１２ｍＬ／ｍｉｎ、検出：２５４ｎｍにおける紫外吸収、保持時間：Ｆ’：４８．３分）に付した。この分取をくりかえし、Ｆ’成分のピークを示す溶出液を併せ、アセトニトリルを減圧下留去した後、酢酸エチルで抽出した。酢酸エチル層を脱イオン水で洗浄後、減圧下濃縮乾固した。残渣を凍結乾燥して、ＶＤ１２０７Ｆ’の純粋な淡黄色粉末をそれぞれ２．８ｍｇ得た。
ＶＤ１２０７Ｆ’構造解析データ
１．色及び性状：淡黄色粉末
２．分子式：Ｃ_２６Ｈ_３９Ｏ_９
３．マススペクトル（ＦＡＢ−ＭＳ）：ｍ／ｚ４９５（Ｍ＋Ｈ）^＋
４．比旋光度：［α］^Ｄ _２１＋４．４（ｃ０．０４、ＣＨＣｌ^３）
５．紫外部吸収スペクトル：
中性メタノール中：λｍａｘｎｍ（ε）：２５３（２１２００），２８６（２４５００），３４０（１１６００）
酸性メタノール中：λｍａｘｎｍ（ε）：２５３（２４１００），２８５（２５１００），３４６（１００００）
塩基性メタノール中：λｍａｘｎｍ（ε）：２７６（１６５００），３４６（４０３００）
６．赤外部吸収スペクトル：
ＫＢｒ粉末中で測定した。主な吸収を示す。（波数、ｃｍ^−１）
３３３０，２９６０，２８７０，１７２０，１６２０，１４６０，１３８０，１３００，１１７０，１０９０，９３０，８３０，６８０，５９０
７．^１ＨＮＭＲスペクトル：
重クロロホルム溶液中で測定したスペクトル^１Ｈ−シフト（Ｊ値）
１０．４３（１Ｈ，ｓ），８．０３（１Ｈ，ｓ），４．９８（１Ｈ，ｄ，２．５），４．３４（１Ｈ，ｄ，６），４．４０（１Ｈ，ｄｄｄ，１１．５，８，１．５），４．１９（１Ｈ，ｄｄｄ，１１．５，１１．５，５），３．２８（１Ｈ，ｄｄ，７，６），３．２３（３Ｈ，ｓ），３．６１（１Ｈ，ｔｄ，８．５，５），２．０４（１Ｈ，ｍ），、１．４３（１Ｈ，ｄｄｄ，１１．５，１１．５，１１．５），１．９２（１Ｈ，ｍ），１．８４（２Ｈ，ｍ）ｏｒ１．１９（２Ｈ，ｍ），１．８４（２Ｈ，ｍ）ｏｒ１．１９（２Ｈ，ｍ），１．２８（２Ｈ，ｍ），１．６０（２Ｈ，ｍ），０．９０（３Ｈ，ｄ，７），０．９４（３Ｈ，ｄ，７），０．８４（３Ｈ，ｔ，７），１．０８（３Ｈ，ｔ，７．５），１４．２０（１Ｈ，ｂｒｓ），１２．９９（１Ｈ，ｂｒｓ），２．６６（１Ｈ，ｄ，３．５），１．５３（１Ｈ，ｓ）
８．^１３ＣＮＭＲスペクトル：
重クロロホルム溶液中で測定したスペクトル^１３Ｃ− シフト
２０７．２（ｓ），１９４．３（ｄ），１６７．８（ｓ），１６７．３（ｓ），１３７．４（ｄ），１２０．３（ｓ），１１３．１（ｓ），１０９．１（ｓ），９４．５（ｄ），８０．５（ｄ），６９．７（ｄ），６２．５（ｄ），６１．７（ｓ），５９．７（ｄ）．５７．２（ｄ），４９．５（ｄ），３６．９（ｔ），３３．８（ｔ），２９．６（ｔ），２９．５（ｔ），２２．８（ｔ），２０．６（ｔ），１８．６（ｑ），１７．６（ｑ），１３．８（ｑ），１０．５（ｑ）
９．溶解性：
可溶：酢酸エチル、クロロホルム、ジメチルスルホキシド
不溶：中性の水
１０．高速液体クロマトグラフィー：
カラム：Ｊ’ｓｐｈｅｒｅＯＤＳ−Ｈ８０、内径４．６ｍｍ、長さ７５ｍｍ（ワイエムシイ社製）
溶媒：アセトニトリル−１０ｍＭリン酸二水素カリウム緩衝液（ｐＨ３．５）＝６：４
流速：１ｍＬ／ｍｉｎ
検出波長：２５４ｎｍにおける紫外吸収
保持時間：８．２ｍｉｎ。
実施例１０ＶＤ１２０７Ｇ’，Ｇ１，Ｇ２精製及び構造解析
実施例１で得られたＧ１，Ｇ２成分を含むフラクションを少量のジメチルスルホキシドに溶解し、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｊ’ｓｐｈｅｒｅＯＤＳ−Ｈ８０、内径２０ｍｍ、長さ２５０ｍｍ、ワイエムシイ社製、移動層：アセトニトリル−１０ｍＭリン酸二水素カリウム緩衝液（ｐＨ３．５）＝６５：３５、流速：１２ｍＬ／ｍｉｎ、検出：２５４ｎｍにおける紫外吸収、保持時間：Ｇ１，Ｇ２：３３．８分、Ｇ’：３５．５分）に付した。この分取をくりかえし、Ｇ１，Ｇ２成分のピークを示す溶出液、Ｇ’成分のピークを示す溶出液をそれぞれ併せ、アセトニトリルを減圧下留去した後、酢酸エチルで抽出した。酢酸エチル層を脱イオン水で洗浄後、減圧下濃縮乾固し、Ｇ１，Ｇ２成分を含むフラクションとＶＤ１２０７Ｇ’の純粋な淡黄色粉末を４ｍｇを得た。
Ｇ１，Ｇ２成分を含むフラクションは少量の酢酸エチルに溶解し、薄層クロマトグラフプレート（シリカゲル６０Ｎｏ．５７４４メルク社製）で展開溶媒（ヘキサン−アセトン＝７：３）を用いて分取薄層クロマトグラフを行った。展開後ＵＶランプ（２５４ｎｍ）でＧ１，Ｇ２成分のスポットを確認し、併せて酢酸エチル−メタノール＝１：１の溶媒で溶出させ、減圧下濃縮乾固した。
このものを少量の酢酸エチルに溶解し、薄層クロマトグラフプレート（シリカゲル６０Ｎｏ．５７４４、メルク社製）で展開溶媒（トルエン−メタノール＝１７：３）を用いて分取薄層クロマトグラフを行った。展開後ＵＶランプ（２５４ｎｍ）でＧ１，Ｇ２成分それぞれのスポットを確認し（Ｒｆ値；Ｇ１：０．３０、Ｇ２：０．２４）、Ｇ１，Ｇ２成分それぞれを酢酸エチル−メタノール＝１：１の溶媒で溶出させ、減圧下濃縮乾固した。残渣を凍結乾燥して、ＶＤ１２０７Ｇ１，Ｇ２の純粋な白色粉末をそれぞれ７ｍｇ、８ｍｇ得た。
ＶＤ１２０７Ｇ’構造解析データ
１．色及び性状：淡黄色粉末
２．分子式：Ｃ_２５Ｈ_３７Ｏ_８
３．マススペクトル（ＦＡＢ−ＭＳ）：ｍ／ｚ４６５（Ｍ＋Ｈ）^＋
４．比旋光度：［α］^Ｄ _２３＋２．３（ｃ０．０４、ＣＨＣｌ_３）
５．紫外部吸収スペクトル：
中性メタノール中：λｍａｘｎｍ（ε）：２５４（８６６００），２７７（５９５００），３５５（２６８００）
酸性メタノール中：λｍａｘｎｍ（ε）：２５５（９１５００），２７７（６１５００），３５６（２６１００）
塩基性メタノール中：λｍａｘｎｍ（ε）：２７９（６２８００），３３７（８４８００）
６．赤外部吸収スペクトル：
ＫＢｒ粉末中で測定した。主な吸収を示す。（波数、ｃｍ^−１）
３３９０，２９６０，２８７０，１６３０，１４６０，１３９０，１３００，１１８０，１０９０，１０４０，９３０，８３０，６８０，６２０，５５０
７．^１ＨＮＭＲスペクトル：
重クロロホルム溶液中で測定したスペクトル^１Ｈ−シフト（Ｊ値）
１０．４２（１Ｈ，ｓ），７．７３（１Ｈ，ｓ），５．００（１Ｈ，ｄ，２．５），４．３８（１Ｈ，ｄｄｄ，１１．５，８，１．５），４．２０（１Ｈ，ｄｄｄ，１１．５，１１．５，５），３，３０（１Ｈ，ｄｄ，７，６），３．５４（１Ｈ，ｔｄ，８，５．５），２．４８（１Ｈ，ｄｄ，１３．５，７），２．４２（１Ｈ，ｄｄ，１３．５，７），２．０３（１Ｈ，ｄｄｄ，１２．５，５，１．５），１．４２（１Ｈ，ｄｄｄ，１２，１２，１２），１．８４（２Ｈ，ｍ），１．２０（２Ｈ，ｍ），１．９１（１Ｈ，ｍ），１．２８（２Ｈ，ｍ），０．９３（３Ｈ，ｄ，６．５），０．９２（３Ｈ，ｄ，６．５），１．６３（２Ｈ，ｍ），０．８５（３Ｈ，ｔ，７），１．０９（３Ｈ，ｔ，７．５），１４．１６（１Ｈ，ｓ），１２．９９（１Ｈ，ｓ），２．６９（１Ｈ，ｄ，３），１．５０（１Ｈ，ｄ，１１．５）
８．^１３ＣＮＭＲスペクトル：
重クロロホルム溶液中で測定したスペクトル^１３Ｃ−シフト
２０６．７（ｓ），１９４．３（ｄ），１６８．０（ｓ），１６７．５（ｓ），１３９．５（ｄ），１２１．０（ｓ），１１２．６（ｓ），１０９．４（ｓ），９４．５（ｄ），６９．８（ｄ），６２．４（ｄ），６１．８（ｓ），５９．８（ｄ），４９．６（ｄ），３７．９（ｔ），３７．３（ｔ），２９．７（ｔ），２９．５（ｔ），２８．３（ｄ），２２．８（ｔ），２２．４（ｑ），２２．２（ｑ），２０．６（ｔ），１３．８（ｑ），１０．５（ｑ）
９．溶解性：
可溶：酢酸エチル、クロロホルム、ジメチルスルホキシド
不溶：中性の水
１０．高速液体クロマトグラフィー：
カラム：Ｊ’ｓｐｈｅｒｅＯＤＳ−Ｈ８０、内径４．６ｍｍ、長さ７５ｍｍ（ワイエムシイ社製）
溶媒：アセトニトリル−１０ｍＭリン酸二水素カリウム緩衝液（ｐＨ３．５）＝６：４
流速：１ｍＬ／ｍｉｎ
検出波長：２５４ｎｍにおける紫外吸収
保持時間：９．８ｍｉｎ。
ＶＤ１２０７Ｇ１構造解析データ
１．色及び性状：白色粉末
２．分子式：Ｃ_２５Ｈ_３６Ｏ_８
３．マススペクトル（ＦＡＢ−ＭＳ）：ｍ／ｚ４６５（Ｍ＋Ｈ）^＋
４．比旋光度：［α］^Ｄ _２１−１１．５（ｃ０．１、ＣＨＣｌ_３）
５．紫外部吸収スペクトル：
中性メタノール中：λｍａｘｎｍ（ε）：２５４（２５６００），２７６（１７２００），３５５（７８００）
酸性メタノール中：λｍａｘｎｍ（ε）：２５５（２９８００），２７６（１９５００），３５６（８４００）
塩基性メタノール中：λｍａｘｎｍ（ε）：２７９（２００００），３３７（２７２００）
６．赤外部吸収スペクトル：
ＫＢｒ粉末中で測定した。主な吸収を示す。（波数、ｃｍ^−１）
３４４０，２９６０，２８７０，１６３０，１４６０，１３９０，１３００，１１９０，１１００，１０３０，９３０，９１０，８２０，６８０，６２０，５５０
７．^１ＨＮＭＲスペクトル：
重クロロホルム溶液中で測定したスペクトル^１Ｈ−シフト（Ｊ値）
１０．４２（１Ｈ，ｓ），７．７４（１Ｈ，ｓ），５．０１（１Ｈ，ｄ，３．５），４．３８（１Ｈ，ｄｄｄ，１２，８．５，２），４．２０（１Ｈ，ｄｄｄ，１２，１１．５，４．５），３．３４（１Ｈ，ｄｄ，７，６），３．５６（１Ｈ，ｄｄｄ，９，８．５，４．５），２．０３（１Ｈ，ｄｄｄ，１２，４．５，２），１．４２（１Ｈ，ｄｄｄ，１２，１２，１２），２．４７（１Ｈ，ｄｄ，１３．５，７），２．４２（１Ｈ，ｄｄ，１３．５，７），１．８３（２Ｈ，ｍ），１．６６（１Ｈ，ｍ），１．５５（１Ｈ，ｍ），１．９１（１Ｈ，ｍ），１．５５（２Ｈ，ｍ），１．２４（２Ｈ，ｍ），０．９３（３Ｈ，ｄ，６．５），０．９２（３Ｈ，ｄ，６．５），０．９９（３Ｈ，ｄ，７．５），０．８９（３Ｈ，ｔ，７．５），１４．１５（１Ｈ，ｓ），１２．９９（１Ｈ，ｓ），２．５２（１Ｈ，ｄ，３．５），１．５０（１Ｈ，ｄ，１１．５），
８．^１３ＣＮＭＲスペクトル：
重クロロホルム溶液中で測定したスペクトル^１３Ｃ−シフト
２０６．７（ｓ），１９４．３（ｄ），１６８．０（ｓ），１６７．５（ｓ），１３９．４（ｄ），１２１．０（ｓ），１１２．５（ｓ），１０９．４（ｓ），９４．５（ｄ），６９．８（ｄ），６２．４（ｄ），６１．５（ｓ），５８．６（ｄ），４９．４（ｄ），３７．９（ｔ），３７．３（ｔ），３２．１（ｔ），３１．２（ｔ），２９．３（ｄ），２８．３（ｔ），２２．３（ｔ），２０．６（ｑ），１９．９（ｑ），１４．２（ｑ），１３．９（ｑ），
９．溶解性：
可溶：酢酸エチル、クロロホルム、ジメチルスルホキシド
不溶：中性の水
１０．高速液体クロマトグラフィー：
カラム：Ｊ’ｓｐｈｅｒｅＯＤＳ−Ｈ８０、内径４．６ｍｍ、長さ７５ｍｍ（ワイエムシイ社製）
溶媒：アセトニトリル−１０ｍＭリン酸二水素カリウム緩衝液（ｐＨ３．５）＝６：４
流速：１ｍＬ／ｍｉｎ
検出波長：２５４ｎｍにおける紫外吸収
保持時間：９．４ｍｉｎ
１１．薄層クロマトグラフィー：
担体：シリカゲル６０Ｆ２５４（メルク社製、ドイツ）
展開溶媒：トルエン／メタノール（１７：３）
Ｒｆ値：０．３０。
ＶＤ１２０７Ｇ２構造解析データ
１．色及び性状：白色粉末
２．分子式：Ｃ_２５Ｈ_３６Ｏ_８
３．マススペクトル（ＦＡＢ−ＭＳ）：ｍ／ｚ４６５（Ｍ＋Ｈ）^＋
４．比旋光度：［α］^Ｄ _２１−１１．２（ｃ０．１、ＣＨＣｌ_３）
５．紫外部吸収スペクトル：
中性メタノール中：λｍａｘｎｍ（ε）：２５５（２８０００），２７７（１９２００），３５６（８８００）
酸性メタノール中：λｍａｘｎｍ（ε）：２５５（３０９００），２７７（２０４００），３５６（８７００）
塩基性メタノール中：λｍａｘｎｍ（ε）：２７８（２１１００），３３７（２８１００）
６．赤外部吸収スペクトル：
ＫＢｒ粉末中で測定した。主な吸収を示す。（波数、ｃｍ^−１）
３４４０，２９６０，１６４０，１４６０，１３９０，１３４０，１３００，１２７０，１１９０，１０９０，１０４０，９１０，８８０，８３０，７３０，６８０，６２０，５５０
７．^１ＨＮＭＲスペクトル：
重クロロホルム溶液中で測定したスペクトル^１Ｈ−シフト（Ｊ値）
１０．４２（１Ｈ，ｓ），７．７８（１Ｈ，ｓ），４．９９（１Ｈ，ｄ，３），４．３０（１Ｈ，ｄｄｄ，１１，７．５，１．５），４．１８（１Ｈ，ｄｄｄ，１２，１２，４．５），３．２９（１Ｈ，ｄｄ，７，６），３．６５（１Ｈ，ｄｄｄ．１０．５，７，３．５），１．９０（１Ｈ，ｄｄｄ，１３．５，１０．５，４．５），１．６３（１Ｈ，ｍ），２．５０（１Ｈ，ｄｄ，１４．７），２．４１（１Ｈ，ｄｄ，１４．７），１．９９（１Ｈ，ｄｄｄ，１２．５，５．２），１．４５（１Ｈ，ｄｄｄ，１２．５，１２，１１），１．９２（１Ｈ，ｓｅｐｔ，ｄ，７，７），１．４５（１Ｈ，ｍ），０．８８（３Ｈ，ｄ，６．５），０．９３（３Ｈ，ｄ，６．５），０．９２（３Ｈ，ｄ，６．５），０．８７（３Ｈ，ｄ，６．５），１．６０（３Ｈ，ｑｄ，７，７），１．０９（３Ｈ，ｄ，７．５），１４．２０（１Ｈ，ｓ），１３．００（１Ｈ，ｓ），２．５０（１Ｈ，ｄ，３．５），１．５０（１Ｈ，ｄ，１２）
８．^１３ＣＮＭＲスペクトル：
重クロロホルム溶液中で測定したスペクトル^１３Ｃ−シフト
２０６．７（ｓ），１９４．３（ｄ），１６８．０（ｓ），１６７．５（ｓ），１３９．４（ｄ），１２１．０（ｓ），１１２．７（ｓ），１０９．４（ｓ），９４．５（ｄ），７０．６（ｄ），６２．５（ｄ），６１．８（ｓ），５９．８（ｄ），４７．４（ｄ），３９．０（ｔ），３８．０（ｔ），３７．１（ｔ），２８．２（ｄ），２６．２（ｄ），２３．７（ｑ），２２．４（ｑ），２２．２（ｑ），２２．０（ｑ），２０．６（ｔ），１０．５（ｑ）
９．溶解性：
可溶：酢酸エチル、クロロホルム、ジメチルスルホキシド
不溶：中性の水
１０．高速液体クロマトグラフィー：
カラム：Ｊ’ｓｐｈｅｒｅＯＤＳ−Ｈ８０、内径４．６ｍｍ、長さ７５ｍｍ（ワイエムシイ社製）
溶媒：アセトニトリル−１０ｍＭリン酸二水素カリウム緩衝液（ｐＨ３．５）＝６：４
流速：１ｍＬ／ｍｉｎ
検出波長：２５４ｎｍにおける紫外吸収
保持時間：９．４ｍｉｎ
１１．薄層クロマトグラフィー：
担体：シリカゲル６０Ｆ２５４（メルク社製、ドイツ）
展開溶媒：トルエン／メタノール（１７：３）
Ｒｆ値：０．２４。
実施例１１ＶＤ１２０７Ｈ精製及び構造解析実施例
実施例１で得られたＨ成分を含むワラクションを少量のジメチルスルホキシドに溶解し、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｊ’ｓｐｈｅｒｅＯＤＳ−Ｈ８０、内径２０ｍｍ、長さ２５０ｍｍ、ワイエムシイ社製、移動層：アセトニトリル−１０ｍＭリン酸二水素カリウム緩衝液（ｐＨ３．５）＝６５：３５、流速：１２ｍＬ／ｍｉｎ、検出：２５４ｎｍにおける紫外吸収、保持時間：３６．６分）に付した。この分取をくりかえし、Ｈ成分の単一ピークを示す溶出液を併せ、アセトニトリルを減圧下留去した後、酢酸エチルで抽出した。酢酸エチル層を脱イオン水で洗浄後、減圧下濃縮乾固した。
得られた残渣を酢酸エチルに溶解し、少量のシリカゲル（ＳｉｌｉｃａＧｅｌＦＬ１００Ｄ、富士シリシア化学社製）を加え、溶媒を減圧下で留去した。残渣をシリカゲルのカラム（内径２０ｍｍ、長さ３８０ｍｍ）に付した。ヘキサンで洗浄し、ヘキサン−アセトン＝９５：５の混合溶媒、９０：１０の混合溶媒で溶出した。Ｈ成分を含む画分をあわせ、濃縮乾固した。
得られた残渣を少量のメタノールに溶解し、ＳｅｐｈａｄｅｘＬＨ−２０（ファルマシア製）のカラム（内径２０ｍｍ、長さ９５０ｍｍ）に付し、メタノールで溶出した。Ｈ成分を含む溶出液をあわせ、減圧下濃縮乾固した。残渣を凍結乾燥して、ＶＤ１２０７Ｈの純粋な白色粉末７５ｍｇを得た。
ＶＤ１２０７Ｈ構造解析データ
１．色及び性状：淡黄色粉末
２．分子式：Ｃ_２５Ｈ_３６Ｏ_８
３．マススペクトル（ＦＡＢ−ＭＳ）：ｍ／ｚ４６５（Ｍ＋Ｈ）^＋
４．比旋光度：［α］^Ｄ _２１−１．６（ｃ０．１、ＣＨＣｌ_３）
５．紫外部吸収スペクトル：
中性メタノール中：λｍａｘｎｍ（ε）：２５５（２８０００），２７７（１９２００），３５６（８８００）
酸性メタノール中：λｍａｘｎｍ（ε）：２５５（３０９００），２７７（２０４００），３５６（８７００）
塩基性メタノール中：λｍａｘｎｍ（ε）：２７８（２１１００），３３７（２８１００）
６．赤外部吸収スペクトル：
ＫＢｒ粉末中で測定した。主な吸収を示す。（波数、ｃｍ^−１）
３４２０，２９６０，２８７０，２６７０，１６２０，１４００，１３００，１１５０，１０９０，１０４０，９１０，８３０，７６０，６９０，６２０，５６０
７．^１ＨＮＭＲスペクトル：
重クロロホルム溶液中で測定したスペクトル^１Ｈ−シフト（Ｊ値）
７．７１（１Ｈ，ｓ），５．０１（１Ｈ，ｄ，２．５），４．３８（１Ｈ，ｄｄｄ，１２，８，１．５），４．２０（１Ｈ，ｄｄｄ，１２，１１．５，４．５），３．３０（１Ｈ，ｄｄ，７．６），３．５８（１Ｈ，ｄｄｄ，８．５，８，４．５），２，４７（１Ｈ，ｄｄ，１３．５，７），２．４１（１Ｈ，ｄｄ，１３．５，７），２．０２（１Ｈ，ｄｄｄ，１２，４．５，１．５），１．４２（１Ｈ，ｄｄｄ，１２，１２，１２），２．７９（３Ｈ，ｓ），１．８３（２Ｈ，ｍ），１．９２（１Ｈ，ｍ），０．９１（３Ｈ，ｄ，６．５），０．９２（３Ｈ，ｄ，６．５），１．６４（２Ｈ，ｍ），１．２５（２Ｈ，ｍ），０．８８（３Ｈ，７．５），１．０９（３Ｈ，ｔ，８），１５．１１（１Ｈ，ｓ），１４．７３（１Ｈ，ｓ），２．７３（１Ｈ，ｄ，２．５），１．５４（１Ｈ，ｄ，１１．５）
８．^１３ＣＮＭＲスペクトル：
重クロロホルム溶液中で測定したスペクトル^１３Ｃ−シフト
２０６．６（ｓ），２０５．９（ｓ），１７０．０（ｓ），１６７．７（ｓ），１３７．８（ｄ），１２１．５（ｓ），１１２．１（ｓ），１０９．５（ｓ），９４．５（ｄ），６９．９（ｄ），６２．５（ｄ），６１．８（ｓ），５９．８（ｄ），４９．３（ｄ），３８．６（ｔ），３７．４（ｔ），３３．６（ｑ），３２．２（ｔ），２８．１（ｄ），２２．４（ｑ），２２．３（ｑ），２０．６（ｔ），２０．５（ｔ），１４．２（ｑ），１０．５（ｑ）
９．溶解性：
可溶：酢酸エチル、クロロホルム、ジメチルスルホキシド
不溶：中性の水
１０．高速液体クロマトグラフィー：
カラム：Ｊ’ｓｐｈｅｒｅＯＤＳ−Ｈ８０、内径４．６ｍｍ、長さ７５ｍｍ（ワイエムシイ社製）
溶媒：アセトニトリル−１０ｍＭリン酸二水素カリウム緩衝液（ｐＨ３．５）＝６：４
流速：１ｍＬ／ｍｉｎ
検出波長：２５４ｎｍにおける紫外吸収
保持時間：１０．３ｍｉｎ
以上の解析データから各化合物の構造は表１に記載した。

なお、ＢとＣ、ＥとＦ、Ａ１とＡ２、Ｕ１とＵ２はそれぞれ＊位の立体の異なるエピマーである。

実施例１２血管新生阻害活性
ラット大動脈片をコラーゲン内にて培養して観察される管腔形成の阻害度を血管新生阻害活性とした。すなわち、Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ系雌ラット（８−１２週齢）より摘出した大動脈をハンクス液で洗浄しながら周辺の脂肪組織を丁寧に除去した。大動脈を切開し２ｍｍ角の切片を作成した後、２４ウェルプレート内へ内皮細胞面を上にして静置する。次に、５００μｌの中性化したタイプＩコラーゲンゲル（ＣｅｌｌＭａｔｒｉｘＴｙｐｅＩ−Ａ：新田ゼラチン）を各ウェルへ注ぎ、クリーンベンチ内で室温下約２０分間放置してゲルを固まらせた。ゲルが固まったことを確認した後に５００μｌのＭＣＤＢ１３１（クロレラ工業）培地を加え、ＣＯ_２インキュベーター（５％ＣＯ_２）で３７℃下培養した。翌日試料を含むＭＣＤＢ１３１培地と培養液を交換し、更に培養４日目に再度試料を含むＭＣＤＢ１３１培地と交換して培養を続けた。そして、試料添加後７日目の時点に大動脈周囲に形成された毛細血管数を計測した。その結果を試料無添加時に形成された毛細血管数を１００％とした時の各試料のＩＣ_５０値を表２に示す。

実施例１３内皮細胞増殖抑制作用
ＥＧＭ培地（三光純薬）で培養したヒト臍帯静脈由来内皮細胞（ＨＵＶＥＣ；三光純薬）を１ｘ１０^４ｃｅｌｌ／ｍｌに調整し、９６ウェルプレートに各１００μｌづつ分注した。そして、一晩培養した後に試料を含む１００μｌの培養液を加えて３日間培養し、その時の細胞数をＭＴＴ法にて測定した。すなわち、０．３３％３−［４，５−Ｄｉｍｅｔｈｙｌｔｈｉａｚｏｌｅ−２−ｙｌ］−２，５−ｄｉｐｈｅｎｙｌｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍｂｒｏｍｉｄｅ（ＭＴＴ）を含むＰＢＳ溶液を５０μｌ添加して更に３−４時間培養を続けた。培養上清を除去した後に１００μｌのＤＭＳＯ溶液を加えて細胞内に生成したホルマザンを溶解し、４６０ｎｍの波長での吸光度をプレートリーダーによって測定した。その結果を試料無添加時の吸光度を１００％としてＩＣ_５０値を算出し、表３に示した。

実施例１４内皮細胞に対する接着分子発現抑制作用
ヒト臍帯静脈由来内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）を９６穴プレートでｃｏｎｆｌｕｅｎｔの状態にまで培養した。培養液を除去し、各ウェルに１５０μｌの新しい培養液を加えた後に２０μｌの試料溶液を加えた。１５分後に最終濃度が１ｎｇ／ｍｌとなるように３０μｌのＴＮＦαを加え、５％ＣＯ_２インキュベーターで３７℃下４時間培養した。次に、培養液を除去してリン酸バッファー（ＰＢＳ）で２回細胞を洗浄、さらに０．０２５％ｇｌｕｔａｒａｌｄｅｈｙｄｅを含むＰＢＳ溶液を加えて室温で６分間放置して細胞を固定した。細胞を固定後２００μｌの０．２５％ＢＳＡを含むリン酸バッファー（ＰＢＳＡ）で２回細胞を洗浄した後に１μｇ／ｍｌのマウス抗ヒトＶＣＡＭ−１（Ｒ＆Ｄｓｙｓｔｅｍｓ）あるいはマウス抗ヒトＥ−ｓｅｌｅｃｔｉｎ抗体（Ｒ＆Ｄｓｙｓｔｅｍｓ）を含むＰＢＳＡ液を各ウェルに１００μｌづつ加えた。室温下３０分間放置した後に再び細胞を洗浄し、１００μｌのｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ−ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄヒツジ抗マウス抗体（ＣｏｓｍｏＢｉｏＣｏ．，Ｌｔｄ．）を含むＰＢＳＡ液を加えた。そして、室温で３０分間放置した後に細胞を洗浄し１００μｌの３，３＊，５，５＊−ｔｅｔｒａｍｅｔｈｙｌｂｅｎｚｙｉｄｉｎｅ（ＴＭＢ）基質液を加えて発色させた。次に、１００μｌのＩＭリン酸で発色を止め４５０ｎｍでの吸光度を測定した。ＴＮＦα刺激によって発色した吸光度を１００％としたときの各試料のＩＣ_５０値を表４に示す。

実施例１５ＶＤ１２０７Ｃのｉｎｖｉｖｏ血管新生抑制作用
ＶＤ１２０７Ｃのｉｎｖｉｖｏでの血管新生抑制作用を調べるために、ヒト大腸癌ＷｉＤｒ細胞により誘導される血管新生が、ＶＤ１２０７Ｃ投与により抑制されるかどうかを検討した。
マウスに、ＷｉＤｒ細胞を封入したチャンバーを移植した後、０．５，１．０，２．０ｍｇ／ｋｇのＶＤ１２０７Ｃを４日間にわたり一日一回腹腔内投与した。腫瘍により誘導される血管新生量は、^５１Ｃｒラベルした赤血球を静注しチャンバー近傍皮内の放射活性を測定することにより、血液量として定量した。図１にはＶＤ１２０７Ｃの各投与量において新生された血管の量を示したが、１ｍｇ／ｋｇのＶＤ１２０７Ｃ投与によりＷｉＤｒ細胞により誘導される血管新生が有意差をもって抑制された。この結果より、ＶＤ１２０７Ｃがｉｎｖｉｖｏにおいても血管新生抑制活性を持つことが明らかとなった。
実施例１６ＶＤ１２０７Ｃの癌転移抑制作用
ＶＤ１２０７Ｃがｉｎｖｉｖｏでも血管新生抑制作用を有することから、マウス結腸癌Ｃｏｌｏｎ３８−ＯＴ−７の肝臓への転移が、ＶＤ１２０７Ｃ投与により抑制されるかどうかを検討した。
肝高転移マウス結腸癌Ｃｏｌｏｎ３８−ＯＴ−７をマウス盲腸に移植し、１２日後より０．５，１．０，２．０ｍｇ／ｋｇのＶＤ１２０７Ｃを一日一回腹腔内投与して、肝臓への転移巣の数を調べた。表５にはＶＤ１２０７Ｃの各投与量における肝転移巣の数を示したが、ＶＤ１２０７Ｃは０．５ｍｇ／ｋｇの投与から転移巣の数を減少させ、２．０ｍｇ／ｋｇでは転移巣は全く観察されなかった。これらの結果より、ＶＤ１２０７Ｃは癌の転移を抑制する活性を有することが明らかとなった。

実施例１７ＶＤ１２０７類縁体の安全性
ＶＤ１２０７Ｂ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇ２の１ｍｇ／ｋｇ，２ｍｇ／ｋｇを４日間にわたり腹腔内へ連投し、ＶＤ１２０７類縁体の安全性を調べた。
その結果、図２に示すようにＶＤ１２０７Ｃでは１ｍｇ／ｋｇで体重増加の抑制、２ｍｇ／ｋｇで体重減少が見られたが、その他の類縁体では体重減少は観察されなかった。また表６の剖検所見に示すように、ＶＤ１２０７Ｃ及びＦに肝臓・腎臓・肺重量の増加が見られたが、他の類縁体では毒性が弱かった。

【図面の簡単な説明】
図１は、ＶＤ１２０７Ｃの各投与量において新生された血管の量を示した図である。
図２は、ＶＤ１２０７Ｂ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇ２の１ｍｇ／ｋｇ，２ｍｇ／ｋｇを４日間にわたり腹腔内へ連投した際の体重変化を示した図である。

Claims

一般式（１）で表わされる化合物、その塩又はその水和物。

（式中、Ｒ ^１がアルデヒド基、Ｒ ^２及びＲ ^３が同一で水素原子、Ｒ ^４がエチル基、Ｒ ^５が水素原子又はメチル基であるか、Ｒ ^１がアルデヒド基、Ｒ ^２及びＲ ^３が同一で水素原子、Ｒ ^４がノルマルプロピル基又はイソプロピル基、Ｒ ^５が水素原子であるか、Ｒ ^１がアルデヒド基、Ｒ ^２及びＲ ^３が相異なり水素原子又はメトキシ基、Ｒ ^４がノルマルプロピル基又はイソプロピル基、Ｒ ^５が水素原子であるか、Ｒ ^１が水素原子、Ｒ ^２及びＲ ^３が一緒になって酸素原子、Ｒ ^４がエチル基又はイソプロピル基、Ｒ ^５が水素原子であるか、あるいはＲ ^１がアセチル基、Ｒ ^２及びＲ ^３が同一で水素原子、Ｒ ^４がエチル基、Ｒ ^５が水素原子である。）
一般式（１）において、Ｒ^１がアルデヒド基、Ｒ^２及びＲ^３が同一で水素原子、Ｒ^４がエチル基、Ｒ^５が水素原子又はメチル基である、請求項１記載の化合物、その塩又はその水和物。
一般式（１）において、Ｒ^１がアルデヒド基、Ｒ^２及びＲ^３が同一で水素原子、Ｒ^４がノルマルプロピル基又はイソプロピル基、Ｒ^５が水素原子である、請求項１記載の化合物、その塩又はその水和物。
一般式（１）において、Ｒ^１がアルデヒド基、Ｒ^２及びＲ^３が相異なり水素原子又はメトキシ基、Ｒ^４がノルマルプロピル基又はイソプロピル基、Ｒ^５が水素原子である、請求項１記載の化合物、その塩又はその水和物。
一般式（１）において、Ｒ^１が水素原子、Ｒ^２及びＲ^３が一緒になって酸素原子、Ｒ^４がエチル基又はイソプロピル基、Ｒ^５が水素原子である、請求項１記載の化合物、その塩又はその水和物。
一般式（１）において、Ｒ^１がアセチル基、Ｒ^２及びＲ^３が同一で水素原子、Ｒ^４がエチル基、Ｒ^５が水素原子である、請求項１記載の化合物、その塩又はその水和物。
請求項１ないし６のいずれか一項に記載の化合物、その塩又はその水和物を有効成分とする、血管新生阻害活性に基づく医薬。
ストレプトミセス・エスピー・エムイーアール・ヴィディ１２０７（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｓｐ．Ｍｅｒ−ＶＤ１２０７，ＦＥＲＭＰ−１５８８９）を栄養培地中で培養し、その培養液から請求項１ないし６のいずれか一項に記載の化合物又はその塩を採取する事を特徴とする、請求項１ないし６のいずれか一項に記載の化合物又はその塩の製造方法。