JP4002952B2 - 分裂病様精神疾患動物モデル、その作出方法およびその用途 - Google Patents
分裂病様精神疾患動物モデル、その作出方法およびその用途 Download PDFInfo
- Publication number
- JP4002952B2 JP4002952B2 JP2002567050A JP2002567050A JP4002952B2 JP 4002952 B2 JP4002952 B2 JP 4002952B2 JP 2002567050 A JP2002567050 A JP 2002567050A JP 2002567050 A JP2002567050 A JP 2002567050A JP 4002952 B2 JP4002952 B2 JP 4002952B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- schizophrenia
- cognitive
- animal
- abnormalities
- inhibition
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
- 201000000980 schizophrenia Diseases 0.000 title claims description 63
- 238000010171 animal model Methods 0.000 title claims description 37
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims description 10
- 208000020016 psychiatric disease Diseases 0.000 title description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 65
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 57
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 claims description 44
- 230000001149 cognitive effect Effects 0.000 claims description 37
- 208000028698 Cognitive impairment Diseases 0.000 claims description 28
- 208000010877 cognitive disease Diseases 0.000 claims description 28
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 27
- 230000024188 startle response Effects 0.000 claims description 25
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims description 23
- 230000006977 prepulse inhibition Effects 0.000 claims description 23
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 19
- 230000003925 brain function Effects 0.000 claims description 17
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 claims description 17
- 230000003542 behavioural effect Effects 0.000 claims description 16
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 claims description 16
- 230000003997 social interaction Effects 0.000 claims description 14
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 14
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 14
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 13
- 238000005259 measurement Methods 0.000 claims description 12
- 108010082786 Interleukin-1alpha Proteins 0.000 claims description 11
- 102000004125 Interleukin-1alpha Human genes 0.000 claims description 11
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 11
- 238000011161 development Methods 0.000 claims description 10
- 230000001568 sexual effect Effects 0.000 claims description 10
- 230000035938 sexual maturation Effects 0.000 claims description 10
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 claims description 9
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 claims description 9
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 claims description 8
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 claims description 8
- 241000282412 Homo Species 0.000 claims description 7
- 238000012216 screening Methods 0.000 claims description 7
- 241000700159 Rattus Species 0.000 claims description 6
- 230000006872 improvement Effects 0.000 claims description 6
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 claims description 4
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 claims description 3
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 3
- 241000894007 species Species 0.000 claims description 3
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 claims description 3
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 claims description 2
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 claims description 2
- 241000700199 Cavia porcellus Species 0.000 claims 1
- 241000009328 Perro Species 0.000 claims 1
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 68
- 102000000589 Interleukin-1 Human genes 0.000 description 67
- 108010091086 Recombinases Proteins 0.000 description 30
- 102000018120 Recombinases Human genes 0.000 description 30
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 25
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 24
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 19
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 19
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 19
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 19
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 13
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 13
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 11
- 230000004068 intracellular signaling Effects 0.000 description 10
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 9
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 9
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 9
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 8
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 7
- 230000013016 learning Effects 0.000 description 7
- 230000000698 schizophrenic effect Effects 0.000 description 7
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 6
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 6
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 6
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 5
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 5
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 5
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 5
- 210000002459 blastocyst Anatomy 0.000 description 4
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 4
- 230000036278 prepulse Effects 0.000 description 4
- 229940126585 therapeutic drug Drugs 0.000 description 4
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 4
- 108010051219 Cre recombinase Proteins 0.000 description 3
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 3
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 3
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 3
- 101001002634 Homo sapiens Interleukin-1 alpha Proteins 0.000 description 3
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 3
- 230000006399 behavior Effects 0.000 description 3
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 3
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 3
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 3
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 3
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 3
- 230000002463 transducing effect Effects 0.000 description 3
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 3
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 3
- KWTSXDURSIMDCE-QMMMGPOBSA-N (S)-amphetamine Chemical compound C[C@H](N)CC1=CC=CC=C1 KWTSXDURSIMDCE-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 2
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 2
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 2
- 108020004638 Circular DNA Proteins 0.000 description 2
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 2
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 2
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 2
- 208000004547 Hallucinations Diseases 0.000 description 2
- 101001033249 Homo sapiens Interleukin-1 beta Proteins 0.000 description 2
- 102000019223 Interleukin-1 receptor Human genes 0.000 description 2
- 108050006617 Interleukin-1 receptor Proteins 0.000 description 2
- 108010025020 Nerve Growth Factor Proteins 0.000 description 2
- 102000007072 Nerve Growth Factors Human genes 0.000 description 2
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 2
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 2
- 210000000683 abdominal cavity Anatomy 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 2
- 229940025084 amphetamine Drugs 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 239000003181 biological factor Substances 0.000 description 2
- 230000001364 causal effect Effects 0.000 description 2
- 239000013611 chromosomal DNA Substances 0.000 description 2
- 230000003930 cognitive ability Effects 0.000 description 2
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- VYFYYTLLBUKUHU-UHFFFAOYSA-N dopamine Chemical compound NCCC1=CC=C(O)C(O)=C1 VYFYYTLLBUKUHU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 2
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 2
- 230000008451 emotion Effects 0.000 description 2
- 230000035558 fertility Effects 0.000 description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 2
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 2
- 230000031146 intracellular signal transduction Effects 0.000 description 2
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 2
- 230000013011 mating Effects 0.000 description 2
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 2
- 238000000520 microinjection Methods 0.000 description 2
- 239000003900 neurotrophic factor Substances 0.000 description 2
- 210000003101 oviduct Anatomy 0.000 description 2
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- QZAYGJVTTNCVMB-UHFFFAOYSA-N serotonin Chemical compound C1=C(O)C=C2C(CCN)=CNC2=C1 QZAYGJVTTNCVMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 2
- LOGFVTREOLYCPF-KXNHARMFSA-N (2s,3r)-2-[[(2r)-1-[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-3-hydroxybutanoic acid Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H]1CCCN1C(=O)[C@@H](N)CCCCN LOGFVTREOLYCPF-KXNHARMFSA-N 0.000 description 1
- PQJUJGAVDBINPI-UHFFFAOYSA-N 9H-thioxanthene Chemical class C1=CC=C2CC3=CC=CC=C3SC2=C1 PQJUJGAVDBINPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 229940123150 Chelating agent Drugs 0.000 description 1
- 208000017667 Chronic Disease Diseases 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 1
- 238000012270 DNA recombination Methods 0.000 description 1
- 206010012239 Delusion Diseases 0.000 description 1
- 241000702421 Dependoparvovirus Species 0.000 description 1
- 206010052804 Drug tolerance Diseases 0.000 description 1
- 241000991587 Enterovirus C Species 0.000 description 1
- YQYJSBFKSSDGFO-UHFFFAOYSA-N Epihygromycin Natural products OC1C(O)C(C(=O)C)OC1OC(C(=C1)O)=CC=C1C=C(C)C(=O)NC1C(O)C(O)C2OCOC2C1O YQYJSBFKSSDGFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 241000702191 Escherichia virus P1 Species 0.000 description 1
- 108010046276 FLP recombinase Proteins 0.000 description 1
- 108700007698 Genetic Terminator Regions Proteins 0.000 description 1
- 102000018899 Glutamate Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010027915 Glutamate Receptors Proteins 0.000 description 1
- 101000979342 Homo sapiens Nuclear factor NF-kappa-B p105 subunit Proteins 0.000 description 1
- 108090000193 Interleukin-1 beta Proteins 0.000 description 1
- 102000003777 Interleukin-1 beta Human genes 0.000 description 1
- 108090000157 Metallothionein Proteins 0.000 description 1
- 101710094503 Metallothionein-1 Proteins 0.000 description 1
- 241000711408 Murine respirovirus Species 0.000 description 1
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 1
- 208000029726 Neurodevelopmental disease Diseases 0.000 description 1
- 102100023050 Nuclear factor NF-kappa-B p105 subunit Human genes 0.000 description 1
- IAJOBQBIJHVGMQ-UHFFFAOYSA-N Phosphinothricin Natural products CP(O)(=O)CCC(N)C(O)=O IAJOBQBIJHVGMQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 1
- 241000714474 Rous sarcoma virus Species 0.000 description 1
- 206010040021 Sensory abnormalities Diseases 0.000 description 1
- 241000710960 Sindbis virus Species 0.000 description 1
- 238000002105 Southern blotting Methods 0.000 description 1
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 description 1
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 1
- 108090000901 Transferrin Proteins 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 1
- 239000002168 alkylating agent Substances 0.000 description 1
- 229940100198 alkylating agent Drugs 0.000 description 1
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 1
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 230000035045 associative learning Effects 0.000 description 1
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 1
- 150000003936 benzamides Chemical class 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 210000003969 blast cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 1
- 210000004958 brain cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000004641 brain development Effects 0.000 description 1
- 230000005978 brain dysfunction Effects 0.000 description 1
- 210000005013 brain tissue Anatomy 0.000 description 1
- FFSAXUULYPJSKH-UHFFFAOYSA-N butyrophenone Chemical class CCCC(=O)C1=CC=CC=C1 FFSAXUULYPJSKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052793 cadmium Inorganic materials 0.000 description 1
- BDOSMKKIYDKNTQ-UHFFFAOYSA-N cadmium atom Chemical compound [Cd] BDOSMKKIYDKNTQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000000975 co-precipitation Methods 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 210000003792 cranial nerve Anatomy 0.000 description 1
- 230000025402 cranial nerve development Effects 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 231100000868 delusion Toxicity 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N dexamethasone Chemical compound C1CC2=CC(=O)C=C[C@]2(C)[C@]2(F)[C@@H]1[C@@H]1C[C@@H](C)[C@@](C(=O)CO)(O)[C@@]1(C)C[C@@H]2O UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N 0.000 description 1
- 229960003957 dexamethasone Drugs 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 229960003638 dopamine Drugs 0.000 description 1
- 239000003210 dopamine receptor blocking agent Substances 0.000 description 1
- 230000003291 dopaminomimetic effect Effects 0.000 description 1
- 238000001647 drug administration Methods 0.000 description 1
- 210000002308 embryonic cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000001671 embryonic stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 210000004700 fetal blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- IAJOBQBIJHVGMQ-BYPYZUCNSA-N glufosinate-P Chemical compound CP(O)(=O)CC[C@H](N)C(O)=O IAJOBQBIJHVGMQ-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 1
- 210000002149 gonad Anatomy 0.000 description 1
- 230000026781 habituation Effects 0.000 description 1
- 230000003400 hallucinatory effect Effects 0.000 description 1
- 229910001385 heavy metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 1
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 1
- 210000003016 hypothalamus Anatomy 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 1
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000010365 information processing Effects 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 238000006713 insertion reaction Methods 0.000 description 1
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 1
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 1
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 1
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- 230000003340 mental effect Effects 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 230000008450 motivation Effects 0.000 description 1
- 210000000653 nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 230000003988 neural development Effects 0.000 description 1
- 239000002858 neurotransmitter agent Substances 0.000 description 1
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000007310 pathophysiology Effects 0.000 description 1
- 230000008447 perception Effects 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- 101150047627 pgk gene Proteins 0.000 description 1
- JTJMJGYZQZDUJJ-UHFFFAOYSA-N phencyclidine Chemical compound C1CCCCN1C1(C=2C=CC=CC=2)CCCCC1 JTJMJGYZQZDUJJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229950010883 phencyclidine Drugs 0.000 description 1
- 125000001484 phenothiazinyl group Chemical class C1(=CC=CC=2SC3=CC=CC=C3NC12)* 0.000 description 1
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 229940001470 psychoactive drug Drugs 0.000 description 1
- 239000004089 psychotropic agent Substances 0.000 description 1
- 239000002464 receptor antagonist Substances 0.000 description 1
- 229940044551 receptor antagonist Drugs 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 230000000306 recurrent effect Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 description 1
- 230000001953 sensory effect Effects 0.000 description 1
- 229940076279 serotonin Drugs 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 1
- 239000000021 stimulant Substances 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 230000002123 temporal effect Effects 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 229960002180 tetracycline Drugs 0.000 description 1
- 229930101283 tetracycline Natural products 0.000 description 1
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 description 1
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 description 1
- 230000008448 thought Effects 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 230000005030 transcription termination Effects 0.000 description 1
- 238000003151 transfection method Methods 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 1
- 230000010474 transient expression Effects 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 1
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 description 1
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
- G01N33/6896—Neurological disorders, e.g. Alzheimer's disease
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K67/00—Rearing or breeding animals, not otherwise provided for; New or modified breeds of animals
- A01K67/027—New or modified breeds of vertebrates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K49/00—Preparations for testing in vivo
- A61K49/0004—Screening or testing of compounds for diagnosis of disorders, assessment of conditions, e.g. renal clearance, gastric emptying, testing for diabetes, allergy, rheuma, pancreas functions
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/415—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from plants
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
- G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
- G01N33/5082—Supracellular entities, e.g. tissue, organisms
- G01N33/5088—Supracellular entities, e.g. tissue, organisms of vertebrates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2217/00—Genetically modified animals
- A01K2217/05—Animals comprising random inserted nucleic acids (transgenic)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2227/00—Animals characterised by species
- A01K2227/10—Mammal
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2267/00—Animals characterised by purpose
- A01K2267/03—Animal model, e.g. for test or diseases
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2799/00—Uses of viruses
- C12N2799/02—Uses of viruses as vector
- C12N2799/021—Uses of viruses as vector for the expression of a heterologous nucleic acid
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
- G01N2800/30—Psychoses; Psychiatry
- G01N2800/302—Schizophrenia
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Neurology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Biodiversity & Conservation Biology (AREA)
- Botany (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
Description
本発明は、精神分裂病様の認知障害動物モデル、その作出方法、並びに該動物モデルを用いた精神分裂病様の認知障害の評価方法および該認知障害の治療薬または治療方法のスクリーニング方法に関する。
背景技術
精神分裂病は、人口の0.7−1.0%の人に発症し、日本でも数十万人に及ぶ長期入院患者を生み出している極めて重大な慢性疾患である。青年期から壮年期にかけて知覚・思考・感情・行動面に特徴的な症状で発病し、多くは慢性に経過し、社会適応にさまざまな困難を生じる精神障害である。本疾患は、妄想、幻覚、幻聴、減弱思考、緊張症状、奇異な行動などの陽性症状に加えて、知覚異常といった認知障害や、感情の平板化、意欲低下、引きこもりや鬱症状といった陰性症状に至るまで、多様な精神的異常を伴うものである。本疾患の病態の特殊性から早期発見、治療、社会復帰活動、再発予防といった一貫した包括的治療体系の確立が望まれているが、現在のところ、その発症原因の解明はおろか、生物学的な病態の理解さえはっきりしていない。
唯一、精神分裂病の陽性症状を改善する治療薬として有用であるのは、神経伝達物質であるドパミンやセロトニンと拮抗する薬物だとされている。具体的にはフェノチアジン系化合物、チオキサンチン系化合物、ブチロフェノン系化合物、ベンズアミド系化合物が患者に多用されている。多くの場合、長年にわたるこれらの薬物の長期投与が不可欠である。
これらの薬物の作用機序の研究に加えて、アンフェタミンを代表とする覚せい剤が、実際にヒトにおいて精神分裂病の陽性症状を誘起することから、ドパミンの作用異常により精神分裂病が発症するとの仮説が提唱されている。また、これらの事実より、アンフェタミンを慢性投与した動物を精神分裂病のモデルとして使用することがある。同様に、ヒトにおいて幻覚誘発作用のある薬物も、動物に投与することで精神分裂病動物モデルとして利用することがある。たとえば、記憶や学習の脳生理機能に関連するといわれているグルタミン酸受容体の阻害剤であるフェンサイクリジンの投与動物である。
これら従来の精神分裂病動物モデルでは、薬物の投与に依存した一過性の脳機能異常を呈するものが多く、ヒトでみられるような、慢性的な精神分裂病の病態を再現しているとはいえなかった。また、ドパミン拮抗薬の作用も、陽性症状の改善が主たるもので、陰性症状の治療薬は極めて限られていた。その主たる原因の1つは、適切な精神分裂病の動物モデルが存在しなかったことであると考えられる。
一方、精神分裂病の発症機構については、上記のドパミン作用異常説を含め、実にさまざまな仮説が提唱されてきたが、その中の1つに、Winbergerを主とする研究者によって提唱されている神経発達障害仮説(Weinberger DR.,Arch.Gen.Psychiatry,44,660−669,1987)がある。しかしながら、実際にどのような生体因子が、どのようなメカニズムで脳神経発達に異常を引き起こすのかは全く不明であった。
分裂病とインターロイキン1(以下、IL−1と略称する場合もある)との間にある種の相関関係があることが示唆されている。例えば、分裂病患者でIL−1活性が上昇すること(Sirota P.,Prog.Neurophychopharmacol.Biol.Psychiatry,19(1),75−83,1995)、分裂病患者でIL−1βのレベルが変化すること(Barak V.,J.Basic Clin.Physiol.Pharmacol.,6(1),61−69,1995)、分裂病患者でのIL−1遺伝子多型との相関関係(Katila H.,Mol.Psychiatry,4(2),179−81,1999)、向精神薬のIL−1受容体アンタゴニストへの影響(Song C.,Schizophr.Res.,42(2),157−64,2000;Akiyama K.,Schizophr.Res.,37(1),97−106,1999)等が知られている。しかしながら、実際に、IL−1の動態が分裂病の発症と因果関係を有するのか否かについては全く解明されていないのが現状であった。
また、他の生体因子の中にも分裂病との関係が示唆されているものがある。例えば、分裂病患者と神経栄養因子との関係(Takahashi M.,Molecular Psychiatry,5,293−300,2000)、神経の発達における神経栄養因子とサイトカインの相関(Nawa H.,Molecular Psychiatry,5(6),594−603,2000)等が報告されている。しかしながら、これらの物質に関しても、分裂病との実際の因果関係については不明のままであった。
発明の開示
したがって、本発明の目的は、脳神経の発達を阻害して精神分裂病を発症させ得る物質を明らかにし、当該物質の体内動態を人為的に操作することにより、ヒトの精神分裂病と極めて類似した慢性的な認知行動学的異常性を示す実験的精神分裂病モデルを提供することである。さらに、本発明の別の目的は、該動物モデルを利用した精神分裂病様の認知障害の評価方法および該評価方法に基づく有効な精神分裂病治療薬のスクリーニング方法を提供することである。
本発明者らは、上記の目的を達成すべく鋭意研究を重ねた結果、幼若期におけるIL−1の過剰存在が動物の脳機能の発達を阻害して、持続的な精神分裂病様の認知障害を誘導することを見出した。すなわち、本発明者らは、脳機能の発達期にある幼若哺乳動物にIL−1もしくはその類縁体を投与し、あるいはIL−1もしくはその類縁体をコードする核酸を含む発現ベクターを哺乳動物またはその胚細胞等に導入して、脳の発達期の全部または一部においてIL−1もしくはその類縁体を該動物体内に過剰に存在させることにより、性成熟以後に持続的な認知異常を呈する精神分裂病様の認知障害動物モデルを作出することに成功した。
さらに、本発明者らは、上記のようにして取得した精神分裂病様の認知障害動物モデルに、公知の各種認識能力試験方法を実施することによる認識障害の評価方法、並びに試験物質の投与または外的刺激の付与後に当該評価方法を実施することによる、精神分裂病治療薬のスクリーニングまたは精神分裂病治療方法の評価方法を確立して本発明を完成するに至った。
すなわち、本発明は、精神分裂病様の認知障害動物モデルであって、脳機能の発達期の全部または一部において、IL−1もしくはその類縁体および/またはIL−1もしくはその類縁体により誘起される細胞内シグナル伝達物質の少なくとも1つが体内に過剰に存在することにより、性成熟以後に持続的な認知異常を呈することを特徴とする哺乳動物を提供する。
該認知異常は、驚愕反応におけるプレパルスインヒビション、ラテントインヒビション、ソウシャルインタラクション、動物運動量等の従来公知の各種行動学的測定において、同種の正常動物と有意差を示すことによって把握される。
本発明の精神分裂病様の認知障害動物モデルは、(1)脳機能の発達期の全部または一部において、該認知異常を誘導するのに十分な量のIL−1もしくはその類縁体および/またはIL−1もしくはその類縁体により誘起される細胞内シグナル伝達物質の少なくとも1つを哺乳動物に投与する、(2)IL−1もしくはその類縁体をコードする核酸を含む発現ベクターを哺乳動物に導入して、脳機能の発達期の全部または一部において、該認知異常を誘導するのに十分な量のIL−1もしくはその類縁体を該動物体内で発現させる、または(3)IL−1もしくはその類縁体により誘起される内因性細胞内シグナル伝達物質の産生を誘導すべく細胞内シグナル系を遺伝子工学的手法を用いて改変し、脳機能の発達期の全部または一部において、該認知異常を誘導するのに十分な量の該内因性細胞内シグナル伝達物質を該動物体内で産生させることにより作出することができる。したがって、本発明はまた、上記手法による精神分裂病様の認知障害動物モデルの作出方法を提供する。
本発明はさらに、上記精神分裂病様の認知障害動物モデルに、驚愕反応におけるプレパルスインヒビション、ラテントインヒビション、ソウシャルインタラクション、動物運動量等の各種行動学的測定を行い、認知異常を試験することによる精神分裂病様の認知障害の評価方法を提供する。精神分裂病治療薬の候補化合物を当該モデルに投与した後、または精神分裂病の非薬物治療としての外的刺激を当該モデルに施した後に当該評価方法を実施して、認知異常の改善効果を調べることにより、有効な精神分裂病治療薬または治療方法を発見することが可能となる。したがって、本発明はまた、上記プロトコルによる精神分裂病治療薬のスクリーニング方法および精神分裂病治療方法の評価方法を提供する。
発明の詳細な説明
本発明の動物モデルのもととなる動物は、哺乳動物であれば特に限定されず、例えば、マウス、ラット、ウサギ、モルモット、サル、ブタ、イヌおよびネコ等が挙げられるが、これまで多くのデータの蓄積がある点や、トランスジェニック技術が確立していることを考慮すれば、マウス、ラットまたはサルがより好ましい。また、遺伝的形質が固定した近交系の動物であることが望ましく、さらに、SPF技術が確立している動物種においてはSPF動物を使用することがより望ましい。
本発明の動物モデルにおける持続的な認知異常の発症は、脳機能の発達期の全部または一部において、IL−1もしくはその類縁体および/またはIL−1もしくはその類縁体により誘起される細胞内シグナル伝達物質の少なくとも1つが体内に過剰に存在することに起因する。脳機能の発達期は使用する哺乳動物の種類によって異なるが、例えば、マウスの場合、重量でみた脳の発達は生後20〜30日でほぼ終了するので、それまでに、IL−1もしくはその類縁体および/またはIL−1もしくはその類縁体により誘起される細胞内シグナル伝達物質の少なくとも1つが体内に過剰に存在することが必要である。通常、妊娠中の胎仔か生後のできる限り早い時期にそのような体内環境を実現すべきである。
本発明で用いる「インターロイキン1(IL−1)」という語は、インターロイキン1α(IL−1α)およびインターロイキン1β(IL−1β)を包括的に意味する。IL−1αおよびIL−1βは同じ受容体に結合し、同様の生物学的活性を示すことが学術的に証明されている。本発明のIL−1は、使用される哺乳動物の体内で内因性IL−1と同等の生物学的活性を示すものであればその由来に制限はなく、例えばヒト、サル、ブタ、ウシ、ウマ、イヌ、ネコ、マウス、ラット、ウサギ、ハムスター、モルモット等由来のIL−1αもしくはIL−1βが含まれる。より具体的な例としては、配列番号2に示されるアミノ酸配列を有するヒトIL−1αおよび配列番号4に示されるヒトIL−1βが挙げられる。また、IL−1の類縁体も、使用される哺乳動物の体内で内因性IL−1と同等の生物学的活性を示すものであれば特に制限はなく、例えば、天然のIL−1αもしくはIL−1βのアミノ酸配列において、1または2以上のアミノ酸が置換、欠失、挿入、付加もしくは修飾されたアミノ酸配列からなるポリペプチドであって天然のIL−1と同等の生物学的活性を有するものが例示される。
IL−1もしくはその類縁体は、いかなる方法によって調製されてもよいが、例えば、細菌、酵母等の異種細胞内で大量に組換え生産されたもの、あるいは動物細胞から精製されたもの等を用いることができる。
IL−1はサイトカインの一種であり、多種の細胞内シグナル伝達物質の活性化を促進することが知られている。本発明の動物モデルにおける精神分裂病様の認知障害は、IL−1もしくはその類縁体の過剰存在により過剰産生された細胞内シグナル伝達物質が二次的メッセンジャーとして作用することにより発症すると考えられるので、それらの細胞内シグナル伝達物質を人為的に過剰に存在させるもしくは活性化させることによっても本発明の動物モデルを作出することができる。脳神経系においては、IL−1は、例えば、視床下部において細胞内シグナル因子であるNFκBやIKKキナーゼの活性を誘起するので、本発明の「IL−1もしくはその類縁体により誘起される細胞内シグナル伝達物質」にはこれらの遺伝子転写因子等が包含される。
IL−1もしくはその類縁体を投与、もしくは発現させる手段としては、大別して2つの方法が考えられる。その1つは、IL−1もしくはその類縁体を直接、動物の腹腔か皮下等に注射する方法である。この方法では、体内における当該外因性IL−1もしくはその類縁体の代謝分解により、その体内濃度がすぐ低下するので、IL−1もしくはその類縁体は何日間かにわたって複数回、注射する必要がある。例えば、マウスの場合、生後1〜10日齢から1〜20日間、30〜3,000μg/kgの日量で投与することができる。
もう1つの方法は、IL−1もしくはその類縁体をコードする核酸を含む発現ベクターを動物個体に導入し、該動物体内で強制的に遺伝子発現させることにより、結果として当該IL−1もしくはその類縁体の投与と同様の効果を達成させるものである。この方法は、さらに、一過的に導入遺伝子を発現させる方法と、当該遺伝子が動物染色体内に組み込まれたトランスジェニック動物を作製する方法とに分けられる。後者の場合、一度そのトランスジェニック動物を作製し、さらに導入した形質が遺伝的に固定された近交系を樹立することにより、その動物を系統維持するだけで、繰り返し精神分裂病様の認知障害動物モデルとして使用することができる。
「IL−1もしくはその類縁体をコードする核酸」は上記の本発明で使用しうるIL−1もしくはその類縁体のアミノ酸配列をコードするものであれば、特に制限はない。例えば、配列番号2に示されるヒトIL−1αアミノ酸配列または配列番号4に示されるヒトIL−1βアミノ酸配列をコードするDNA配列、あるいは配列番号1に示されるヒトIL−1αコード配列または配列番号3に示されるヒトIL−1βコード配列、あるいは当該DNA配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズするDNA配列であって動物体内でIL−1と同等の生物学的活性を示すポリペプチド、もしくは同一のIL−1レセプターに結合するアミノ酸配列を有するタンパク質をコードするDNA配列が挙げられる。
本発明のIL−1もしくはその類縁体(以下、IL−1類と略称する場合もある)発現ベクターは、上記IL−1もしくはその類縁体をコードする核酸が、対象である哺乳動物の細胞内でプロモーター活性を発揮し得るプロモーターに機能的に連結されているか、あるいは導入された動物細胞内で、一定の条件下に機能的に連結された形態に変化し得るような位置に配置されていなければならない。使用されるプロモーターは、投与対象である哺乳動物細胞内で機能し得るものであれば特に制限はないが、例えば、SV40由来初期プロモーター、サイトメガロウイルスLTR、ラウス肉腫ウイルスLTR、MoMuLV由来LTR、アデノウイルス由来初期プロモーター等のウイルスプロモーター、並びにβ−アクチン遺伝子プロモーター、PGK遺伝子プロモーター、トランスフェリン遺伝子プロモーター等の哺乳動物の構成蛋白質遺伝子のプロモーターなどが挙げられる。「一定の条件下に機能的に連結された形態に変化し得るような位置に配置される」とは、例えば、以下でさらに詳述するように、プロモーターとIL−1類をコードする核酸とが、該プロモーターからのIL−1類の発現を妨げるのに十分な長さを有するスペーサー配列により隔てられた、同方向に配置される2つのリコンビナーゼ認識配列によって分断された構造を有し、該認識配列を特異的に認識するリコンビナーゼの存在下に該スペーサー配列が切り出されて、IL−1類をコードする核酸がプロモーターに機能的に連結されるように配置されることをいう。
本発明のIL−1類発現ベクターは、好ましくはIL−1類をコードする核酸の下流に転写終結シグナル、すなわちターミネーター領域を含有する。さらに、形質転換細胞選択のための選択マーカー遺伝子(テトラサイクリン、アンピシリン、カナマイシン、ハイグロマイシン、ホスフィノスリシン等の薬剤に対する抵抗性を付与する遺伝子、栄養要求性変異を相補する遺伝子等)をさらに含有していることが好ましい。発現ベクターが上述のようにリコンビナーゼ認識配列に挟まれたスペーサー配列を有する場合、該選択マーカー遺伝子は当該スペーサー配列内に配置することもできる。
本発明のIL−1類発現ベクターに使用されるベクターは特に制限されないが、ヒト等の哺乳動物への投与に好適なベクターとしては、レトロウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルス、ワクシニアウイルス、ポックスウイルス、ポリオウイルス、シンドビスウイルス、センダイウイルス等のウイルスベクターが挙げられる。アデノウイルスは、遺伝子導入効率が極めて高く、非分裂細胞にも導入可能である等の利点を有する。また、導入遺伝子の宿主染色体への組込みは極めて稀であるので、遺伝子発現は一過性で通常約4週間程度しか持続しない。したがって、脳機能の発達期にある幼若動物において、一過的にIL−1もしくはその類縁体を過剰発現させる場合に特に有利である。
本発明の好ましい態様においては、IL−1類発現ベクターは、不要な時期および/または不要な部位での当該IL−1類の過剰発現による悪影響を防ぐために、IL−1類を時期特異的且つ脳組織特異的に発現させることができる。このようなベクターの第一の実施態様としては、投与対象となる動物において脳機能の発達期において脳細胞内で特異的に発現する遺伝子由来のプロモーターに機能的に連結したIL−1類をコードする核酸を含むベクターが挙げられる。当業者は従来公知のこのようなプロモーターを容易に選択することができる。
本発明の時期特異的発現ベクターの第二の実施態様として、外因性の物質によってトランスに発現が制御される誘導プロモーターに機能的に連結したIL−1類をコードする核酸を含むベクターが挙げられる。誘導プロモーターとして、例えば、メタロチオネイン−1遺伝子プロモーターを用いた場合、金、亜鉛、カドミウム等の重金属、デキサメサゾン等のステロイド、アルキル化剤、キレート剤またはサイトカインなどの誘導物質を、脳機能の発達期に体内に投与することにより、時期特異的にIL−1類の発現を誘導することができる。
本発明の時期特異的発現ベクターの第三の態様は、プロモーターとIL−1類をコードする核酸とが、該プロモーターからのIL−1類の発現を妨げるのに十分な長さを有するスペーサー配列により隔てられた、同方向に配置される2つのリコンビナーゼ認識配列によって分断された構造を有するベクターである。該ベクターが動物細胞内に導入されただけではプロモーターはIL−1類の転写を指示することができない。しかしながら、脳機能の発達期に該認識配列を特異的に認識するリコンビナーゼを投与するか、あるいは該リコンビナーゼをコードする核酸を含む発現ベクターを投与して該リコンビナーゼを動物体内で発現させると、該認識配列間で該リコンビナーゼを介した相同組換えが起こり、その結果、該スペーサー配列が切り出され、IL−1類をコードする核酸がプロモーターに機能的に連結されてIL−1類発現カセットを生じ、時期特異的にIL−1類が発現される。
上記ベクターに使用されるリコンビナーゼ認識配列は、投与対象に内在のリコンビナーゼによる組換えを防ぐために、内在のリコンビナーゼによっては認識されない異種リコンビナーゼ認識配列であることが望ましい。したがって、該ベクターにトランスに作用するリコンビナーゼもまた異種リコンビナーゼであることが望ましい。このような異種リコンビナーゼと該リコンビナーゼ認識配列の組み合わせとしては、大腸菌のバクテリオファージP1由来のCreリコンビナーゼとloxP配列、あるいは酵母由来のFlpリコンビナーゼとfrt配列が特に好ましく例示されるが、それらに限定されるものではない。
Creリコンビナーゼはバクテリオファージで発見されたが、特異的なDNA組換え反応は、原核細胞だけでなく真核細胞である動物細胞や動物ウイルスでも機能することが知られている。同一DNA分子上に同方向の2つのloxP配列が存在する場合は、Creリコンビナーゼはその間に挟まれたDNA配列を切り出して環状分子を形成させる(切り出し反応)、一方、異なるDNA分子上に2つのloxP配列が存在し、その一方が環状DNAである場合は、loxP配列を介して環状DNAが他方のDNA分子上に挿入される(挿入反応)[J.Mol.Biol.,150:467−486(1981);J.Biol.Chem.,259:1509−1514(1984);Proc.Natl.Acad.Sci.USA,81:1026−1029(1984)]。切り出し反応の例は、動物培養細胞[Nucleic Acids Res.,17:147−161(1989);Gene,181:207−212(1996)]、動物ウイルス[Proc.Natl.Acad.Sci.USA,85:5166−5170(1988);J.Virol.,69:4600−4606(1995);Nucleic Acids Res.,23:3816−3821(1995)]、トランスジェニックマウス[Proc.Natl.Acad.Sci.USA,89:6232−6236(1992);Proc.Natl.Acad.Sci.USA,89:6861−6865(1992);Cell,73:1155−1164(1993);Science,265:103−106(1994)]等で報告されている。
リコンビナーゼ/リコンビナーゼ認識配列の相互作用を利用した本発明の時期特異的IL−1発現ベクターのプロモーターとしては、時期特異的発現を確実にするために、好ましくはウイルス由来プロモーターや哺乳動物の構成蛋白質遺伝子のプロモーターが使用される。
トランスに作用する物質としてリコンビナーゼ自体を投与する場合、例えば、リコンビナーゼを適当な無菌のビヒクルに溶解または懸濁して腹腔内または皮下等に注入すればよい。
一方、トランスに作用する物質としてリコンビナーゼ発現ベクターを投与する場合、該リコンビナーゼ発現ベクターは、リコンビナーゼをコードする核酸が、投与対象の動物細胞内でプロモーター活性を発揮し得るプロモーターに機能的に連結した発現カセットを有するものであれば特に制限されない。使用されるプロモーターが構成プロモーターである場合、不要な時期におけるリコンビナーゼの発現を防ぐために、投与されるベクターは、例えばアデノウイルスのように、宿主細胞の染色体へのインテグレーションが稀なものであることが望ましい。リコンビナーゼを所望の時期に発現させる別のアプローチとして、メタロチオネイン遺伝子プロモーターのような誘導プロモーターの使用が挙げられる。
IL−1類を脳機能の発達期に一過的に発現させるためのIL−1類発現ベクターの投与は、標的細胞(例えば、骨髄、末梢血、臍帯血由来の造血幹細胞、リンパ球、線維芽細胞等)を体外に取り出し、培養してから導入を行って体内に戻すex vivo法と、投与対象の体内に直接ベクターを投与して導入を行うin vivo法のいずれかで行われる。ex vivo法の場合、標的細胞へのベクターの導入は、マイクロインジェクション法、リン酸カルシウム共沈殿法、PEG法、エレクトロポレーション法等により行うことができる。in vivo法の場合、ウイルスベクターは、注射剤等の形態で静脈内、動脈内、皮下、皮内、筋肉内、腹腔内等に投与される。あるいは、静脈内注射などによりベクターを投与すると、ウイルスベクターに対する中和抗体の産生が問題となるが、標的細胞の存在する臓器/組織に局所的にベクターを注入すれば(in situ法)、抗体の存在による悪影響を軽減することができる。
本発明のIL−1類発現ベクターが、リコンビナーゼ/リコンビナーゼ認識配列の相互作用を利用した時期特異的発現ベクターであり、且つ該ベクターにトランスに作用し得るリコンビナーゼを、リコンビナーゼ発現ベクターの形態で該標的組織に投与する場合、リコンビナーゼ発現ベクターの投与方法として、上記in vivo法が同様に使用できる。
本発明の動物モデルはまた、本発明のIL−1類発現ベクターが導入されたトランスジェニック動物として作出することができる。導入されるIL−1類発現ベクターは上述のものがすべて使用可能であるが、後述の認知障害の評価方法等への使用の際における好ましくない影響を考慮すれば、精神分裂病様の認知異常を動物に発症させるのに十分な量のIL−1を必要な時期においてのみ発現するようにデザインされたトランスジェニック動物、いわゆる「コンディショナルトランスジェニック動物」を作出するのに適した時期特異的ベクターを使用することがより好ましい。尚、本発明においては、誘導プロモーターや時期特異的および/組織特異的プロモーターの制御下にIL−1類をコードする核酸を含む発現ベクターが導入されたトランスジェニック動物をも、「コンディショナルトランスジェニック動物」に包含するものとする。
本発明のトランスジェニック動物は、従来公知のトランスジェニック作出法により、動物の生殖系列細胞に本発明のIL−1類発現ベクターを導入することにより作出することができる。例えば、交配後の雌の卵管を洗浄して受精卵を採取し、精子または卵子由来の前核にマイクロインジェクション法により該ベクターを直接注入する。この受精卵を偽妊娠させた仮親の輸卵管に移植し、子宮内で発生を続けさせる。注入したベクターが染色体DNAに組み込まれているか否かは、産仔の尾部より分離抽出した染色体DNAをサザンハイブリダイゼーションまたはPCR法によりスクリーニングすることにより検定することができる。
マウス、ハムスター、ブタ等を用いる場合、胚性幹細胞(ES細胞)に該ベクターを導入することによってもトランスジェニック動物を得ることができる。ES細胞は胚盤胞期の受精卵の内部細胞塊(ICM)に由来し、in vitroで未分化状態を保ったまま培養維持できる細胞をいう。ICMの細胞は将来、胚本体を形成する細胞であり、生殖細胞を含むすべての組織の基になる幹細胞である。ES細胞の調製は以下のようにして行うことができる。交配後の雌から胚盤胞を分離し、ペトリ皿で培養すると胚盤胞の一部の細胞が集合して将来胚に分化するICMを形成する。この内部細胞塊をトリプシン処理して単細胞を遊離させることによりES細胞が得られる。ES細胞への遺伝子導入には、トランスフェクション法、レトロウイルスベクターを用いた感染法、エレクトロポレーション法等が用いられる。ES細胞を用いる系の最大の長所は、抗生物質耐性などの選択マーカーを用いて細胞段階で形質転換体を選択できることである。選択された(すなわち、導入遺伝子が組み込まれた)ES細胞を胚盤胞に顕微注入すると、ICMに組み込まれてキメラ胚が形成される。これを仮親に移植してさらに発生を続けさせることにより、キメラトランスジェニック動物が得られる。生殖腺がES細胞由来になった個体を交配することにより組換え形質が遺伝的に固定されたトランスジェニック動物を作出することができる。
本発明の動物モデルは、同様に、IL−1もしくはその類縁体により誘起される上記細胞内シグナル伝達物質を直接、脳機能の発達期にある幼若動物の、動物の腹腔内や皮下等に注射することによっても作出することができる。この場合も、体内における当該外因性細胞内シグナル伝達物質の代謝分解により、その体内濃度がすぐ低下するので、何日間かにわたって複数回、注射する必要がある。
また、本発明の動物モデルは、IL−1もしくはその類縁体により誘起される上記細胞内シグナル伝達物質の産生を誘導すべく細胞内シグナル系を遺伝子工学的手法を用いて改変し、脳機能の発達期にある幼若動物において、該内因性細胞内シグナル伝達物質を該動物体内で産生させることによっても作出することができる。例えば、細胞内シグナル伝達物質の産生をトランスに促進させるベプチドをコードする核酸や、逆にそれらの物質の産生を抑制する調節因子の作用をブロックするペプチドをコードする核酸を含む発現ベクターを、動物体内に上記のIL−1類発現ベクターの場合と同様の手法を用いて導入・発現させる方法が挙げられる。
また、動物細胞に人為的に突然変異を誘発して、IL−1もしくはその類縁体により誘起される内因性細胞内シグナル伝達物質が過剰に産生されるような細胞内シグナル系の変異を有する動物を作製することもできる。
上記のいずれかの方法によって作出された本発明の精神分裂病様認知障害動物モデルは、性成熟以後に特に顕著な持続的認知異常の症状を呈することを特徴とする。ここで「性成熟」とは、動物が生殖能力を獲得することを意味し、ヒトの思春期に相当する。例えば、マウスの場合、生殖能力を獲得する約50〜約60日齢以後に顕著な認知異常の症状が現れ、この認知異常は少なくとも約1〜2ヶ月間、好ましくは生涯を通じて持続する。但し、当該認知異常の発症の時期については、IL−1もしくはその類縁体またはIL−1もしくはその類縁体により誘起される細胞内シグナル伝達物質が体内に過剰に存在する期間以降であれば特に限定されず、性成熟前であっても差し支えない。
本発明の動物モデルにおける認知異常は、従来公知の行動学的測定の少なくとも1つにおいて、同種の正常動物と有意差を示すことによって把握される。従来公知の行動学的測定としては、驚愕反応におけるプレパルスインヒビション、ラテントインヒビション、ソウシャルインタラクション、動物運動量の測定等が挙げられるが、これらに限定されない。
驚愕反応におけるプレパルスインヒビションとは、ヒトと動物で共通に評価が可能な驚愕反応を指標とする知覚−運動反応能力のテストである。このテストでは、精神分裂病の病態の中心を成すと考えられている注意力と脳内情報処理力の異常性が、科学的に、客観的に評価できる特徴を有する。テスト自身は、120デシベル程度の大きな音でびっくり驚愕反応をおこす前、30〜150ミリ秒に、それ自身はびっくり驚愕反応を起こしえない弱い音刺激(プレパルス)をあらかじめ聴かせておくと、本来の大きな音でびっくり驚愕反応が減少することを測定する。このプレパルスによる減少分をプレパルスインヒビションと呼び、これは、精神分裂病患者と精神分裂病の動物モデルで異常な減少を示すことが知られている(Braff D.L.,Geyer M.A.,Arch.Gen.Psychiatry,47,181−188,1990)。
ラテントインヒビションとは、一連の学習テストにおいてのテスト事前の「慣れ」による学習阻害性を評価するもので、前述のプレパルスインヒビションとテストの構図は似通っている。例えばパブロフ型のコンディショニング学習において、あらかじめ餌提示(US)なしのベル(CS)に慣れていると、ベル(CS)=餌提示(US)の学習が阻害されるというものである。通常、精神分裂病患者やそのモデルでは、注意の配分や「慣れ」の学習が少ないため、事前提示のCSによる学習阻害、ラテントインヒビションがかかりにくいといわれている(Brauch I.,Hemsley D.R.,Gray J.A.,J.Nerv,Ment.Dis.,176,598−606,1991)。
ソウシャルインタラクションとは、精神分裂病患者が、ヒトとの接触をいやがり、社会から引きこもる現象を指標化できるテストである。一般に、動物では、新規の動物に初対面したときの臭い嗅ぎ行動等を測定している(Sams−Dodd F.,Rev.Neurosci.,10(1),59−90,1999)。一般に分裂病患者を含む精神疾患で異常を呈することが知られている。
本発明はまた、本発明の動物モデルを用いた精神分裂病様の認知障害の評価方法を提供する。当該方法は、本発明の動物モデルおよびそれと同種の哺乳動物の両方について、驚愕反応におけるプレパルスインヒビション、ラテントインヒビション、ソウシャルインタラクション、動物運動量等の行動学的測定を行い、認知能力における正常動物との差を調べることを特徴とする。本発明の動物モデルでは、性成熟以後において、プレパルスインヒビションの増大が顕著に観察される。
上記の評価方法は、従来の精神分裂病治療薬および治療方法の評価、並びに新規精神分裂病治療薬および治療方法の探索に応用することができる。すなわち、本発明の動物モデルに試験物質を投与した後、驚愕反応におけるプレパルスインヒビション、ラテントインヒビション、ソウシャルインタラクション、動物運動量等の行動学的測定を行い、認知異常の改善を評価することにより、精神分裂病治療薬を評価およびスクリーニングすることができる。また、本発明の動物モデルに非薬物治療としての外的刺激を与えた後、同様に行動学的測定を行い、認知異常の改善を評価することにより、精神分裂病治療方法の効果を評価することができる。
実施例
以下に実施例を示して本発明をさらに詳細に説明するが、これらは単なる例示であって、本発明の範囲を何ら限定するものではない。
実施例1<IL−1αの投与で生じた驚愕反応とプレパルスインヒビションの慢性的異常>
動物は、SDラット(日本SLC)を生後2日齢より使用した。試薬は、ヒト組換えインターロイキン1α,チトクローム−C(Sigma)を生理食塩水にそれぞれ40μg/mL溶解させたものを使用した。生後2日目より1日おきに計10回(生後11目まで)、頚部にラット体重1g当たり25μL(それぞれ1.0mg/kg)皮下投与した。生後21日より小動物驚愕反応測定装置(San Diego Instruments)にて驚愕反応強度およびプレパルスインヒビションを測定した。すなわち、驚愕反応を誘発する感覚刺激としては、音刺激を用い、プレパルス刺激として環境騒音(バックグラウンドノイズ)レベルより5デシベル高い75デシベルの音圧の刺激を与え、その100ミリセコンド後に、音圧が120デシベルのパルス刺激を与えた。120デシベル単独の時の驚愕反応に対するプレパルスを組み合わせた時の驚愕反応減少分の比をプレパルスインヒビション(PPI)とした。生後60日齢の時点において、IL−1α投与群ではチトクローム−C投与群に比べ、音圧120デシベルに対する驚愕反応強度の有意な上昇(図1A)とプレパルスインヒビションの有意な低下(図2A)(*p<0.05)を示した。対照的に生後22日(図1Bおよび図2B)では、いずれもそのような異常性を示しておらず、精神分裂病の思春期発症の時間的パターンも一致をみた。
産業上の利用可能性
本発明の精神分裂病様の認知障害動物モデルは、性成熟以後に持続的な認知異常を示す点において、従来の精神分裂病モデルに比較してよりヒトにおける病態を正確に再現していることから、この動物モデルを用いることにより、精神分裂病治療薬、診断薬、あるいは非薬物的治療方法を適切に評価し、また、新規の治療薬、診断薬、または治療方法を開発することが可能となる。
本出願は、2001年2月27日に日本で出願された特願2001−52546を基礎としており、その内容は本明細書中に援用される。
【配列表】
【図面の簡単な説明】
図1は、生後60日齢(A)および生後22日齢(B)での120dbの音に対する驚愕反応強度を示すグラフである。
図2は、生後60日齢(A)および生後22日齢(B)でのプレパルスインヒビションを示すグラフである。
Claims (15)
- 性成熟以後に持続的な認知異常を誘導するのに十分な量の以下(a)又は(b)を、脳機能の発達期において非ヒト哺乳動物に一時的に皮下投与することによって作出され、かつ性成熟以後に持続的な認知異常を呈することを特徴とする精神分裂病様の認知障害動物モデルの非ヒト哺乳動物:
(a)インターロイキン1α;
(b)インターロイキン1αのアミノ酸配列において、1又は2個のアミノ酸が置換、欠失、挿入、付加、もしくは修飾されたアミノ酸配列からなり、かつ性成熟以後に持続的な認知異常を誘導する活性を有するインターロイキン1α類縁体。 - 該哺乳動物が性成熟以後に過剰なインターロイキン1αを体内に含まない、請求項1記載の哺乳動物。
- マウス、ラット、ウサギ、モルモット、サル、ブタ、イヌおよびネコからなる群より選択される請求項1又は2記載の哺乳動物。
- マウスである請求項3記載の哺乳動物。
- 性成熟以後に持続的な認知異常を誘導するのに十分な量のインターロイキン1αを、脳機能の発達期において非ヒト哺乳動物に一時的に皮下投与することによって作出され、かつ性成熟以後に持続的な認知異常を呈することを特徴とする請求項1〜4のいずれかに記載の哺乳動物。
- 該認知異常が、驚愕反応におけるプレパルスインヒビション、ラテントインヒビション、ソウシャルインタラクションおよび動物運動量からなる群より選択される少なくとも1つの行動学的測定において、同種の正常動物と有意差を示すことによって把握されるものである、請求項1〜5のいずれかに記載の哺乳動物。
- 性成熟以後に持続的な認知異常を呈することを特徴とする精神分裂病様の認知障害動物モデルの作出方法であって、該認知異常を誘導するのに十分な量の以下(a)又は(b)を、脳機能の発達期において非ヒト哺乳動物に一時的に皮下投与することを含む方法:
(a)インターロイキン1α;
(b)インターロイキン1αのアミノ酸配列において、1又は2個のアミノ酸が置換、欠失、挿入、付加、もしくは修飾されたアミノ酸配列からなり、かつ性成熟以後に持続的な認知異常を誘導する活性を有するインターロイキン1α類縁体。 - 作出される認知障害動物モデルが、該認知障害動物モデルが性成熟以後に過剰なインターロイキン1αを体内に含まない、請求項7記載の方法。
- 性成熟以後に、驚愕反応におけるプレパルスインヒビション、ラテントインヒビション、ソウシャルインタラクションおよび動物運動量からなる群より選択される少なくとも1つの行動学的測定において、同種の正常動物と有意差を示すことによって、認知異常を呈していることを確認することをさらに含む、請求項7又は8記載の方法。
- 請求項1〜6のいずれかに記載の哺乳動物について、驚愕反応におけるプレパルスインヒビション、ラテントインヒビション、ソウシャルインタラクションおよび動物運動量からなる群より選択される少なくとも1つの行動学的測定を行い、認知異常を試験することを特徴とする精神分裂病様の認知障害の評価方法。
- 請求項1〜6のいずれかに記載の哺乳動物に試験物質を投与した後、驚愕反応におけるプレパルスインヒビション、ラテントインヒビション、ソウシャルインタラクションおよび動物運動量からなる群より選択される少なくとも1つの行動学的測定を行い、認知異常の改善を評価することを特徴とする精神分裂病治療薬のスクリーニング方法。
- 請求項1〜6のいずれかに記載の哺乳動物に外的刺激を与えた後、驚愕反応におけるプレパルスインヒビション、ラテントインヒビション、ソウシャルインタラクションおよび動物運動量からなる群より選択される少なくとも1つの行動学的測定を行い、認知異常の改善を評価することを特徴とする精神分裂病治療方法の評価方法。
- 以下(a)及び(b)を含む、精神分裂病様の認知障害の評価方法:
(a)請求項7〜9のいずれかに記載の方法により、性成熟以後に持続的な認知異常を呈することを特徴とする精神分裂病様の認知障害動物モデルを作出すること;
(b)工程(a)により得られた哺乳動物について、驚愕反応におけるプレパルスインヒビション、ラテントインヒビション、ソウシャルインタラクションおよび動物運動量からなる群より選択される少なくとも1つの行動学的測定を行い、認知異常を試験すること。 - 以下(a)及び(b)を含む、精神分裂病治療薬のスクリーニング方法:
(a)請求項7〜9のいずれかに記載の方法により、性成熟以後に持続的な認知異常を呈することを特徴とする精神分裂病様の認知障害動物モデルを作出すること;
(b)工程(a)により得られた哺乳動物に試験物質を投与した後、驚愕反応におけるプレパルスインヒビション、ラテントインヒビション、ソウシャルインタラクションおよび動物運動量からなる群より選択される少なくとも1つの行動学的測定を行い、認知異常の改善を評価すること。 - 以下(a)及び(b)を含む、精神分裂病治療方法の評価方法:
(a)請求項7〜9のいずれかに記載の方法により、性成熟以後に持続的な認知異常を呈することを特徴とする精神分裂病様の認知障害動物モデルを作出すること;
(b)工程(a)により得られた哺乳動物に外的刺激を与えた後、驚愕反応におけるプレパルスインヒビション、ラテントインヒビション、ソウシャルインタラクションおよび動物運動量からなる群より選択される少なくとも1つの行動学的測定を行い、認知異常の改善を評価すること。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2001052546 | 2001-02-27 | ||
JP2001052546 | 2001-02-27 | ||
PCT/JP2002/001734 WO2002067668A1 (fr) | 2001-02-27 | 2002-02-26 | Animal modele atteint d'une maladie mentale de type schizophrenie, methode d'obtention dudit modele et utilisation |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPWO2002067668A1 JPWO2002067668A1 (ja) | 2004-09-24 |
JP4002952B2 true JP4002952B2 (ja) | 2007-11-07 |
Family
ID=18913158
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2002567050A Expired - Lifetime JP4002952B2 (ja) | 2001-02-27 | 2002-02-26 | 分裂病様精神疾患動物モデル、その作出方法およびその用途 |
Country Status (4)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20040103447A1 (ja) |
EP (1) | EP1364578A4 (ja) |
JP (1) | JP4002952B2 (ja) |
WO (1) | WO2002067668A1 (ja) |
Families Citing this family (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US8207369B2 (en) | 2008-02-11 | 2012-06-26 | Ramot At Tel-Aviv University Ltd. | Conjugates for treating neurodegenerative diseases and disorders |
BR112012013639A2 (pt) * | 2009-12-09 | 2017-04-04 | Bar-Ilan Univ | "métodos pára melhorar funções congnitivas" |
WO2012038963A1 (en) | 2010-09-22 | 2012-03-29 | Ramot At Tel-Aviv University Ltd. | An acid addition salt of a nortriptyline-gaba conjugate and a process of preparing same |
CN113840569A (zh) | 2019-03-19 | 2021-12-24 | 剑桥认知有限公司 | 诊断精神病症和推荐用于精神病症的治疗的方法和用途 |
Family Cites Families (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1995003402A1 (en) * | 1993-07-22 | 1995-02-02 | Merck & Co., Inc. | EXPRESSION OF HUMAN INTERLEUKIN-1β IN A TRANSGENIC ANIMAL |
JPH09500533A (ja) * | 1993-07-22 | 1997-01-21 | メルク エンド カンパニー インコーポレーテッド | 認識障害に関するトランスジェニック動物モデル |
ES1027665Y (es) * | 1994-04-11 | 1995-03-01 | Dormimueble S L | Mueble tapizado convertible. |
DK0680762T3 (da) * | 1994-05-06 | 2002-09-30 | Esp Farmaceuticas Centrum Sa | Farmaceutisk sammensætning til brug i behandlingen af neurodegenerative dysfunktioner |
JPH09172908A (ja) * | 1995-12-22 | 1997-07-08 | Hoechst Japan Ltd | インターロイキン1関連疾患モデルトランスジェニック動物 |
JP3939160B2 (ja) * | 2001-05-25 | 2007-07-04 | 独立行政法人科学技術振興機構 | 腎臓における外来遺伝子発現方法 |
-
2002
- 2002-02-26 JP JP2002567050A patent/JP4002952B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 2002-02-26 EP EP02700795A patent/EP1364578A4/en not_active Withdrawn
- 2002-02-26 US US10/469,165 patent/US20040103447A1/en not_active Abandoned
- 2002-02-26 WO PCT/JP2002/001734 patent/WO2002067668A1/ja not_active Application Discontinuation
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
WO2002067668A1 (fr) | 2002-09-06 |
EP1364578A4 (en) | 2004-09-15 |
US20040103447A1 (en) | 2004-05-27 |
JPWO2002067668A1 (ja) | 2004-09-24 |
EP1364578A1 (en) | 2003-11-26 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US20100146645A1 (en) | Transgenic animal model for modelling pathological anxiety, a method for identifying compounds for treatment of diseases or disorders caused by pathological anxiety and a method for using wfs1 protein as a target for identifying effective compounds against pathological anxiety | |
US20120185956A1 (en) | Global nav1.7 knockout mice and uses | |
JP4857450B2 (ja) | ヒト関節リウマチの病態を再現するトランスジェニック非ヒト哺乳動物 | |
JPWO2003041496A1 (ja) | トランスジェニック動物 | |
US20130115171A1 (en) | Nav1.7-related assays | |
JP7193509B2 (ja) | 上位及び下位運動ニューロン機能並びに知覚の減衰を示す非ヒト動物 | |
Okunomiya et al. | Generation of a MOR‐CreER knock‐in mouse line to study cells and neural circuits involved in mu opioid receptor signaling | |
JP4002952B2 (ja) | 分裂病様精神疾患動物モデル、その作出方法およびその用途 | |
JP2007105046A (ja) | N型カルシウムチャネルノックアウト動物を利用する物質の作用の測定方法 | |
US20020104107A1 (en) | Point mutant mice with hypersensitive alpha 4 nicotinic receptors: dompaminergic pathology and increased anxiety | |
Baghdadi et al. | Sex-specific effects of Cre expression in Syn1Cre mice | |
JP2002541765A (ja) | Msh5を削除したマウス及びその利用法 | |
US20050044581A1 (en) | Animals and cells containing a mutated alpha2/omega1 gene | |
JP5344732B2 (ja) | ヒトtpo受容体の膜貫通部位を有するキメラtpo受容体導入ノックイン非ヒト哺乳動物 | |
JP3483552B2 (ja) | 新規時計遺伝子プロモーター | |
JPWO2007043589A1 (ja) | 統合失調症モデル動物 | |
AU779476B2 (en) | Modulation of angiogenesis | |
Popko | Mouse models in the study of genetic neurological disorders | |
JP2004534534A (ja) | 新しい分子モータータンパク質をコードする遺伝子、およびこの遺伝子に関連する疾患についての診断方法 | |
JP2003169679A (ja) | ヒトβ3受容体発現動物 | |
JP2007159473A (ja) | 内因性オピオイドペプチド産生ニューロンの可視化に利用可能なトランスジェニック非ヒト動物およびその利用 | |
JP2003018944A (ja) | 細胞死誘導モデル非ヒト動物 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A711 | Notification of change in applicant |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A712 Effective date: 20040910 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20041117 |
|
RD02 | Notification of acceptance of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7422 Effective date: 20050217 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20050217 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20061121 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20070118 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20070220 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20070411 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20070515 |
|
A711 | Notification of change in applicant |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A711 Effective date: 20070612 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20070612 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 4002952 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
EXPY | Cancellation because of completion of term |