JPH09172908A - インターロイキン１関連疾患モデルトランスジェニック動物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 インターロイキン１関連疾患モデルトランス
ジェニック動物を提供することにある。 【解決手段】 サイトメガロウイルスエンハンサーのＤ
ＮＡ配列及びニワトリベーターアクチンプロモーターの
ＤＮＡ配列の下流にインターロイキン１アルファ遺伝子
をコードするＤＮＡ配列含む外来性遺伝子構築体を、脊
椎動物の遺伝子に組み込むことによりインターロイキン
１関連疾患モデルトランスジェニック動物が得られる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明が属する技術分野】本発明は、インターロイキン
１アルファ（Interleukin 1α：ＩＬ−1αと略す）遺伝
子を含む外来性遺伝子構築体を組み込んだインターロイ
キン１関連疾患モデル非ヒト脊椎トランスジェニック動
物に関する。詳しくは、サイトメガロウイルスエンハン
サー／ニワトリベーターアクチンプロモーター領域及び
ヒトＩＬ−１αをコードする外来性遺伝子構築体が組み
込まれたインターロイキン１関連疾患モデル非ヒト脊椎
トランスジェニック動物に関する。

【０００２】

【従来の技術及び発明が解決しようとする課題】インタ
ーロイキン１（interleukin−１：ＩＬ−１と略す）
は、非常に多くの細胞に対して様々な活性を示し、急性
炎症反応以外にも生体の恒常性を含む種々の反応におい
て重要な役割を果たしていることが明らかにされている
（Oppenheim, J. J. et al.，Immunol Today vol.7，p.
45-56, 1986）。

【０００３】１９８４年、マウスのＩＬ−１のｃＤＮＡ
がクローニングされて以来（Lomedico, P.T. et al.，N
ature，vol.312，p.458-467，1984）、ヒト、ウサギ、
ラットＩＬ−１のｃＤＮＡがクローニングされ、その構
造が明らかにされた。ＩＬ−１は、約２５０個のアミノ
酸から成り、分子量は、１７.５ｋＤ、糖が付いていな
い単純蛋白質である。ＩＬ−１は、他の分泌蛋白質と同
様に、シグナルペプチドを欠いているため、細胞外への
放出機構は、十分に明らかにされていない。いずれの動
物種においてもＩＬ−１には二つの分子種が存在するこ
とが明らかになり、α型及びβ型に分類される。α型に
ついては、細胞膜を通過する時に、カルシウム依存性の
蛋白質分解酵素によりＮ末端側が切り取られると考えら
れている（Kobayashi，Y．et al.，Proc Natl Acad Sci
USA，vol.87，p.5548-5552，1990）。ＩＬ−１αとＩ
Ｌ−１β間でのアミノ酸配列における相同性は約２５％
しかないが、動物種が異なっていても、同型のＩＬ−１
間では、６０〜７０％と相同性が高い。ＩＬ−１αとＩ
Ｌ−１βは、同じレセプターに結合し、ほぼ同じような
生物活性を示す。

【０００４】ＩＬ−１は、単球、マクロファージ及びそ
の類縁細胞（ランゲルハンス細胞等）が、細菌、エンド
トキシン（ＬＰＳ）、補体結合免疫複合体、補体成分
（Ｃ３ａ，Ｃ５ａ）、インターフェロン（ＩＦＮ）、腫
瘍壊死因子（ＴＮＦ）、コロニー刺激因子（ＣＳＦ）、
transforming growth factor-β（ＴＧＦ−β）、ウイ
ルスなど様々な刺激により産生される。また、ケラチノ
サイト（keratinocyte）、ＮＫ細胞、Ｔ細胞、Ｂ細胞、
血管内皮細胞、メサンギウム（mesangium）細胞、滑膜
細胞、アストログリア（astroglia）、好中球、繊維芽
細胞等もＩＬ−１を産生する。従って、きわめて多くの
細胞がＩＬ−１を産生しており、炎症時と非炎症時にお
けるＩＬ−１産生細胞も異なっている。

【０００５】最近の発生工学の発展により、人為的に外
来性遺伝子を組み込んだトランスジェニック動物（Tran
sgenic animals）の作成が可能になった（Gordon J．an
d Ruddle F.，Science，214，1244-1246，1981）。卵へ
の外来性遺伝子の導入方法には、外来性遺伝子を微小ピ
ペットに吸入し、これを１細胞期卵の前核内へ注入する
顕微注入法（Gordon et al.，1980）あるいはウイルス
を介して感染させる方法があり、外来性遺伝子を組み込
んだ卵は、形質転換卵と呼ばれている（GordonJ．et a
l.，Proc Natl Acad Sci USA 77，7380-7384，1980；Ja
enisch R. etal.，Cell 32，209-216，1983）。この形
質転換卵を偽妊娠させた受容雌（recipient）の生殖器
道（卵管または子宮）に移植することにより、成長させ
ることができる。得られた成体のトランスジェニック動
物は、外来性遺伝子を自らの染色体に組み込んでおり、
且つ適切なプロモーターの影響下で外来性遺伝子を発現
することができる。こうして取り込まれた外来性遺伝子
は、トランスジーン（Transgene）と呼ばれている。種
々のプロモーター領域を選択しトランスジーンと組み合
わせることにより、受精卵から成体に至るまでの各ステ
ージに特異的なトランスジーンを発現させることができ
る。その発現の結果、トランスジーンによりコードされ
る蛋白質がトランスジェニック動物内で生産される。特
に、その蛋白質が動物にとって重要な機能を果たす場合
は、その個体の発生のある時点で、個体の表現型に何ら
かの変化を引き起こすこともあり得、ヒトのある遺伝病
に類似した形質を獲得することも可能である。また、ト
ランスジェニック動物が、トランスジーンを自らの染色
体に取り込んでいるかどうかは、ＰＣＲ法やサザンブロ
ット法等の解析により確認することができる。もし、こ
の取り込みが確認された場合、この動物は、in vivoに
おける遺伝子発現解析、例えば、ノーザンブロット法や
免疫抗体法等による解析に利用される。

【０００６】遺伝子の発現を制御するのは、目的とする
蛋白質をコードしている遺伝子の上流に位置しているプ
ロモーター及びエンハンサーと呼ばれる遺伝子の特定領
域である。プロモーターは、ＤＮＡを鋳型にｍＲＮＡ合
成（転写）を開始するＤＮＡ上のシグナルで、特徴的な
塩基配列を持っており、ＲＮＡポリメラーゼの作用によ
り目的の蛋白質のｍＲＮＡ合成が開始される。このプロ
モーター領域のさらに上流に、エンハンサーと呼ばれる
ＤＮＡの転写効率を増強させる働きを持つ特殊なＤＮＡ
塩基配列を組み込んでおくと目的とする蛋白質の生産効
率をより高めることができる。

【０００７】個体がトランスジーンで形質転換されたと
いう報告、あるいはその結果、個体の表現型が変わった
という報告は、これまでにいくつか成されており、特に
Palmiter R．D．and Brinster R．L.（Annu. Rev．Gene
t.，vol.20，p.465-499：1986）やGordon J．W.（In. R
ev. of Cytobiol.，vol.115，ｐ.171-229：1989）等の
総説に詳しく述べられている。これらのトランスジェニ
ック動物は、１）発生過程での遺伝子発現の個体レベル
での解析、２）遺伝病の克服または軽減に向けた研究等
の分野でも利用され得る。

【０００８】これまでに種々のサイトカイン遺伝子を組
み込まれたトランスジェニックマウスが数多く作製され
た。例えば、ヒトＩＬ−２を胸腺、脾臓、骨髄、肺及び
皮膚等で発現しているトランスジェニックマウスは、脱
毛症及び肺炎を高率に発症するが、自己免疫疾患様病態
をほとんど示さないことが報告されている（Ishida Y．
et al.，Int Immunol 1，113-120，1989）。また、ヒト
ＩＬ−４を持つトランスジェニックマウスは、Ｔ細胞の
発生及び免疫グロブリン−アイソタイプの調節異常に伴
う免疫応答の変化や骨組織における骨芽細胞、破骨細胞
の活性低下に伴う骨粗鬆症を起こすことが知られている
（Tepper R．I．et al.，Cell 62，457-467，1990；Lew
is D．B．et al.，J Exp Med 173，89-100，1991；Mull
er W．etal.，Eur J Immunol 22，1179-1184，1992；Le
wis D．B．et al.，Proc Natl Acad Sci USA 90，11618
-11622，1993）。マウスＩＬ−５においても同様にトラ
ンスジェニックマウスが作製されており、マウスＩＬ−
５の過剰発現は、好酸球増多症（eosinophilia）や自己
抗体産生を引き起こす（Dent L．A．et al.，J Exp Med
172，1425-1431，1990；Tominaga A．et al.，J Exp M
ed 173，429-437，1991）。また、ヒトＩＬ−６導入ト
ランスジェニックマウスは、自己免疫疾患や形質細胞腫
を引き起こす（Suematsu S．et al.，Proc Natl Acad S
ci USA 86，7547-7551，1989；Suematsu S．et al.，Pr
o Natl Acad Sci USA 89，232-235，1992）。更に、ヒ
トＩＬ−７，ヒトＩＬ−８及びヒトＧＭ−ＣＳＦの過剰
発現トランスジェニックマウスでは、各々リンパ腫、好
中球の移動障害及び眼房内へのmacrophage集積による白
内障等が確認されている（Rich B．E．et al.，J ExpMe
d 177，305-316，1993；Simonet W．S．et al.，J Clin
Invest 94，1310-1319，1994；Lang R．A．et al.，Ce
ll 51，675-686，1987）。総じて、いずれのサイトカイ
ンを過剰発現するトランスジェニックマウスも免疫担当
細胞の表現型の変化に起因する異常を呈することは明ら
かである。なお、ＩＬ−１βを導入したトランスジェニ
ックマウスの作出も試みられているが、致死であり、今
だ成体へ発生したという報告はない（Csaikl F．F．et
al.，Overexpression and Knockout of Cytokines in T
ransgenic Mice，Jacob CO (ed)，1-13，1994）。

【０００９】関節炎を発症するトランスジェニックマウ
スとしてＨＴＬＶ−１ｐｘが知られている（Iwakura Y.
et al., Science 253, 1026-1028, 1991）。成人Ｔ細
胞白血病（ＡＴＬ）患者に見られる慢性関節炎は、その
原因ウイルスであるＨＴＬＶ−１のＬＴＲ−ｅｎｖ−ｐ
ｘ領域あるいはｔａｘ遺伝子を導入したトランスジェニ
ックマウスで再現され、関節リウマチの病態モデルとし
て有用と考えられている。ＨＴＬＶ−１ｐｘマウスにお
ける関節局所でのｔａｘ遺伝子の発現は、炎症性サイト
カインの発現を誘導していることが示唆されるが、事
実、ＩＬ−１α，ＩＬ−１β及びＩＬ−６等の発現が亢
進されていることが確認されている。また、関節炎を起
こすトランスジェニックラットの報告もある（Hammer
R.E. et al., Cell 63, 1099-1112, 1990）。多臓器疾
患として知られている脊椎関節症と関連性のある主要組
織適合抗原遺伝子ＨＬＡ−Ｂ２７とβ２ミクログロブリ
ン遺伝子を導入したトランスジェニックラットで、末梢
及び脊髄の関節炎、皮膚炎、消化管の炎症及び心筋炎等
を発症し、Ｂ２７関連ヒト疾患のモデルとして考えられ
ている。

【００１０】しかし、病因、病態解析あるいは薬剤のス
クリーニングのためには、複数のタイプの異なるモデル
動物を使い分けることが望まれている。本発明者らは鋭
意努力の結果、ヒト慢性関節リウマチの病態により近い
ＩＬ−１の生体内での過剰発現モデルトランスジェニッ
クマウスの作成および系統（ライン）に初めて成功し本
発明を完成した。

【００１１】本発明は、関節でのＩＬ−１の過剰発現に
よって、より有用な慢性関節リウマチモデルを提供する
とともに、ＩＬ−１の滑膜における機能を明らかにする
ことができる。より詳しくは、ＩＬ−１を動物の個体内
で過剰発現させることにより、関節炎を誘起させるのみ
ならず、広く全身で作用させることにより、過剰発現に
起因する疾患、例えば、自己免疫疾患、膠原病及び骨粗
鬆症等のモデルになり得るようなトランスジェニック動
物、好ましくは、トランスジェニックマウスを発生工
学、遺伝子工学的手法を用いて作成することである。

【００１２】

【課題を解決するための手段】ヒトＩＬ−１をコードす
る遺伝子断片を非ヒト脊椎動物、好ましくは、マウスの
１細胞期卵の前核に顕微注入し、次いでこの注入された
卵を偽妊娠メスマウスに移植し、該マウスを飼育すると
トランスジェニックマウスが産まれる。このトランスジ
ェニックマウスは、ＩＬ−１の過剰発現に伴って、全身
性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、慢性関節リウマチ及び
骨粗鬆症等を発症すると考えられる。注入された遺伝子
断片には、トランスジェニックマウス内で非特異的に様
々なタイプの細胞でＩＬ−１を発現せしめるようなプロ
モーターが含まれている。このプロモーターの制御下で
ＩＬ−１を免疫担当細胞及び滑膜細胞等で過剰発現させ
ることにより、これらの細胞の活性（表現型）自体を変
化せしめるとともに、関節炎の発症が高率に認められる
ことが考えられる。

【００１３】本発明は、ＩＬ−１α遺伝子を含む外来性
遺伝子構築体を組み込んだＩＬ−１関連疾患モデル非ヒ
ト脊椎トランスジェニック動物に関する。本発明は、サ
イトメガロウイルスエンハンサーのＤＮＡ配列及びニワ
トリベーターアクチンプロモーターのＤＮＡ配列の下流
にＩＬ−１α遺伝子を含む外来性遺伝子構築体を組み込
んだＩＬ−１関連疾患モデル非ヒト脊椎トランスジェニ
ック動物に関する。本発明の重要な点は、ＩＬ−１を強
力なプロモーターの制御下、どのタイプの組織でも過剰
発現させることができることである。即ち、ＩＬ−１の
生体内での機能は、免疫関連組織以外にも広範囲にわた
っており、これらの組織におけるＩＬ−１の作用機序
は、ほとんど不明である。従って、免疫関連組織に止ま
らず、広く各組織におけるＩＬ−１の作用を解明できる
可能性がある。そのためには、限定なく全ての体細胞に
おいて転写を開始させるニワトリベーターアクチンプロ
モーター及びその転写効率を強力に増強させる働きを有
するサイトメガロウイルスエンハンサーが組み換え遺伝
子に組み込まれた。本発明は、ＩＬ−１α遺伝子がヒト
由来であることを特徴とするＩＬ−１関連疾患モデル非
ヒト脊椎トランスジェニック動物に関する。

【００１４】本発明は、さらに、ＩＬ−１関連疾患モデ
ル非ヒト脊椎トランスジェニック動物がマウスであるこ
とを特徴とする。本発明は、ＩＬ−１関連疾患が慢性関
節リウマチであるＩＬ−１関連疾患モデル非ヒト脊椎ト
ランスジェニック動物に関する。本発明は、ＩＬ−１関
連疾患が全身性エリテマトーデスであるＩＬ−１関連疾
患モデル非ヒト脊椎トランスジェニック動物に関する。
本発明は、ＩＬ−１関連疾患が骨粗鬆症であるＩＬ−１
関連疾患モデル非ヒト脊椎トランスジェニック動物に関
する。

【００１５】本発明のＩＬ−１関連疾患モデル非ヒト脊
椎トランスジェニック動物は四肢の関節において免疫応
答亢進に伴う、関節の腫れ、関節へのリンパ球侵潤、滑
膜細胞の増殖、軟骨、骨の破壊、自己抗体産生、血管内
皮細胞の損傷及び骨粗鬆症を呈することを特徴とする。
本トランスジェニック動物は、ＩＬ−１の過剰発現によ
り慢性関節リウマチ様病態を示すことが明らかになって
おり、従って本発明は、ＩＬ−１が関節局所で過剰発現
することによる慢性関節リウマチ発症の機序等をin viv
oで研究するための有用なラインを提供するものであ
る。更に、骨粗鬆症は、骨吸収が骨形成を上回った結
果、骨組織が減少し、腰背部痛や骨折などの症状を示す
もので、骨粗鬆症患者の単球が産生するＩＬ−１量が多
いこと、及びＩＬ−１には、強い骨吸収促進作用がある
ことから、ＩＬ−１の過剰発現によって骨の変化が期待
される。また、ＳＬＥは、免疫制御機構に異常がみられ
る疾患で、Ｂ細胞の機能亢進による自己抗体産生の増強
が認められ、形成された免疫複合体により、補体依存性
の組織障害が起こる。このような免疫異常の一因として
ＩＬ−１などのサイトカインの産生あるいは反応性の異
常が存在することが知られている。

【００１６】さらにライム病もＩＬ−１の関与が示唆さ
れている。即ち、ライム病は、ダニにより媒介される疾
患で、病原体はスピロヘーターである。特徴的な皮膚病
変で発症し、その後慢性関節炎へと移行する。ＩＬ−１
は、スピロヘーターによって単球から誘導されることが
明らかになっている（Habicht，G．S．et al.，J．Immu
nol.，134，3147，1985）。

【００１７】このように、ＩＬ−１がほぼ全身で過剰発
現しているので、ＩＬ−１の過剰発現に起因していると
思われる疾患の発症機序の解明や治療薬の探索にも利用
できるものである。例えば、検索されるべき薬剤は、対
照動物、即ち本発明のトランスジェニックマウスでない
動物群（非トランスジェニックマウス等）及び本発明の
トランスジェニックマウスに同時に投与される。この薬
剤は、トランスジェニックマウスの病態が改善され得る
に充分な期間を越えて連続的に投与されるであろう。こ
の充分な期間を経て薬剤を投与された後、トランスジェ
ニックマウス及び対照の非トランスジェニックマウス
は、関節組織等の解析に供されることとなる。そして、
上記パラメーターを比較することにより、薬剤の効能に
ついてひとつの決定を下すことができる。

【００１８】本発明は、βＡＩＬ−１α−１７０５又は
βＡＩＬ−１α−１７０６である、ＩＬ−１関連疾患モ
デルトランスジェニックマウスに関する。本発明者ら
は、ＩＬ−１α遺伝子を全身で過剰発現させることによ
って、上記のＩＬ−１関連疾患を示すトランスジェニッ
クマウスを作成した。本マウスは、自己抗体の産生、好
中球の増殖、関節炎及び免疫担当細胞の活性亢進等を示
す。これらの病態は、上記の疾患に類似したものであ
る。従って、本マウスは、ＩＬ−１のin vivoにおける
作用を解明できるばかりでなく、ＩＬ−１の過剰発現に
起因する種々のＩＬ−１関連疾患の発症機序の解明及び
これら疾患の治療薬のinvivoスクリーニングのためのラ
インを提供するものである。本発明のトランスジェニッ
ク動物は、体外受精法にてラインを維持するが生まれた
トランスジェニック動物は、通常の動物と同様に飼育す
ることができ、特別な飼育及び餌は必要としない。

【００１９】本発明の目的は、ＩＬ−１を関節組織及び
他の組織で強力に発現せしめるために必要なＤＮＡ配
列、いわゆる組み換えＤＮＡを有するトランスジェニッ
ク動物を提供することである。更に、本発明の有用性と
しては、このトランスジェニック動物がＩＬ−１のin v
ivoにおける作用解明、上記のＩＬ−１関連疾患の発症
機序の解明及びこれらの関連疾患の治療薬のin vivoス
クリーニングのために用いられることである。

【００２０】

【実施例】次に、実施例を示して本発明をさらに具体的
に説明する。以下の実施例は、遺伝子断片、組換え遺伝
子構築体、トランスジェニックマウス等をどのように作
成するか等を完全に開示し、記載することを目的とした
ものであり、本発明は、この実施例によって限定される
ものではない。

【００２１】実施例１ プラスミドｐβＡ／ｈＩＬ−１
α−１の構築 マウスで発現させるべき目的遺伝子は以下のように作成
した。はじめに、上記標的遺伝子を発現させるためのベ
クターを作成した。ニワトリベーターアクチンプロモー
ターとその上流にサイトメガロウイルスエンハンサーを
有する哺乳動物発現ベクター pCAGGS（Niwa H．et al.,
Gene, vol. 108, p．193-200，1991）より２.３ｋｂ断
片をＳａｌＩ／ＰｓｔＩ消化により切り出し、これをク
ローニングベクター pBluescript（Stratagene社より購
入）のＳａｌＩ／ＰｓｔＩ部位へ挿入し、ｐＢｓＣＡＧ
−２ベクターを構築した。サイトメガロウイルスエンハ
ンサー／ニワトリベーターアクチンプロモーターは、哺
乳動物の多種多様な細胞において強い活性が認められて
おり、現在、in vivoにおける外来性遺伝子発現を強力
に促進するプロモーター系として有用であることが判っ
ている。この２.３ｋｂ断片中には、上記エンハンサー
／プロモーターの他に、ウサギベーターグロビン遺伝子
の一部（第２イントロン、第３エクソン、３′側非翻訳
領域から成る）が含まれる。通常、ｃＤＮＡ等の発現さ
せたい目的遺伝子は、ウサギベーターグロビン遺伝子の
第３エクソンのＥｃｏＲＩ部位に挿入される。イントロ
ンの存在により、目的遺伝子のin vivoでの転写効率が
改善されることが知られている（Brinster R.L. et a
l., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, vol.85, p.836-840,
1988）。このｐＢｓＣＡＧ−２のＥｃｏＲＩ部位に目
的遺伝子であるヒトＩＬ−１α〔ｈＩＬ−１α Ｈ２Ｈ
３プラスミド（March et al., Nature, 315, p.641, 19
85）〕のｃＤＮＡの全長（６６０ｂｐ）を挿入し、トラ
ンスジェニックマウス発現用プラスミドｐβＡ／ｈＩＬ
−１α−１（５.９６ｋｂ）を構築した（図１）。マウ
ス１細胞期卵へのＤＮＡ導入には、これら組換え遺伝子
構築体よりＳｃａＩ／ＳａｌＩ／ＢａｍＨＩ消化により
遺伝子を単離し、これを用いた。また、この構築体に
は、ＤＮＡを消化したり、繋げたり、ＤＮＡ断片を単離
する等の操作が行われたが、このためにはManiatis T.
et al.（Molecular Cloning, A Laboratory Mannual, 1
982）の標準的ＤＮＡ組み換え技術が用いられた。ま
た、インサートの結合部周辺のＤＮＡ配列は、ＤＮＡシ
ークエンシング法により確認された。

【００２２】実施例２ 外来性遺伝子（βＡ−ｈＩＬ−
１α）のマウス受精卵への注入、その受精卵の移植及び
導入されたトランスジーンの確認 実験動物として受精卵採取用にＣ５７ＢＬ／６Ｎ雄及び
Ｂ６Ｃ３Ｆ１雌マウス（Ｃ５７ＢＬ／６Ｎ × Ｃ３Ｈ
／ＨｅＮ）、ＤＮＡ注入後の受精卵移植用の受容雌（レ
シピエント）としてＩＣＲの雌マウスを用いた。また、
移植用レシピエントに偽妊娠誘起を施すため、精管を切
断したＩＣＲの雄マウスとレシピエントを交配させた。
まず、過排卵誘起を施すために、Ｂ６Ｃ３Ｆ１雌マウス
に妊馬血清性性腺刺激ホルモン（ＰＭＳＧ）及びヒト絨
毛性性腺刺激ホルモン（ｈＣＧ）を４８時間間隔で各々
５ＩＵ腹腔内に投与後、直ちにＣ５７ＢＬ／６Ｎ雄マウ
スと同居させた。翌日、Ｂ６Ｃ３Ｆ１雌マウスの膣に膣
栓（プラグ）が形成されているものを交配が成立したマ
ウスと判断した。交配が確認されたマウスを屠殺し、卵
管膨大部から顆粒層細胞及び卵丘細胞に囲まれた受精卵
（前核期卵）を回収した。回収された受精卵は１％ヒア
ルロニダーゼ（持田製薬製品）を含むＭ１６培養液（Wh
ittingham D.G., J. Reprod. Fert., Suppl. vol.14,
p.7-21, 1971）中に導入し、顆粒層細胞及び卵丘細胞を
除去した後、ＤＮＡを注入するまでＭ１６培養液中にて
３７℃、５％ＣＯ₂、９５％空気の気相下で培養され
た。培養は、３５mm径のサスペンジョンカルチャーデイ
ッシュ（suspension culture dish)（No.171099，Nunc
社）内に滴下した５０μlのＭ１６培養液の微小滴中に
受精卵を浮遊させ、上部を流動パラフィン（White ligh
t mineral oil，Fisher社）で覆った状態で行われた。

【００２３】外来性遺伝子は、上述の方法で調製したプ
ラスミドｐβＡ／ｈＩＬ−１α−１を宿主大腸菌にて大
量増幅の後、抽出された。更に、プラスミドを精製する
ために、塩化セシウムによる超遠心、臭化エチジユウム
（ethidium bromide）の除去及び透析処理を行った。精
製されたプラスミドは、制限酵素ＳａｌＩ、ＢａｍＨＩ
及びＳｃａＩにより消化された後、０.８％アガロース
ゲル電気泳動により、目的の外来性遺伝子（βＡ−ｈＩ
Ｌ−１α，３.０ｋｂ）が単離された。外来性遺伝子
は、注入操作直前にリン酸緩衝液（ｐＨ７.２）にて希
釈したものを用いた。この外来性遺伝子は、既報（Hoga
n B. et al., In Manipulating the MouseEmbryo., Col
d Spring Harbor Laboratory Press，1986）に準じて、
受精卵に注入された。即ち、培養液中で受精卵を保持用
ガラスピペットで保持した後、微細な注入用ガラスピペ
ットを用いてＤＮＡ溶液を約２ｐｌ（２,０００コピ
ー）ずつ受精卵の雄性前核内に注入した。

【００２４】注入操作後、受精卵は、精管を切断された
成熟ＩＣＲ雄マウスと交配した偽妊娠１日目の成熟ＩＣ
Ｒ雌マウスの卵管内へ移植した。卵管移植後、分娩満期
まで飼育し、産仔を得た。分娩後、得られた産仔は、生
後４週齢で離乳させ、このマウスの尾部の先端部分約１
cmを麻酔下で切断するとともに耳にパンチングし、個体
識別した。尾部の組織より染色体ＤＮＡを抽出、精製し
た後、サザンブロット法により導入した遺伝子断片がマ
ウスの染色体に組み込まれていることを確認した。即
ち、制限酵素ＥｃｏＲＩ、ＢａｍＨＩで完全に消化させ
た１０μgの染色体ＤＮＡを０.８％アガロースゲル電気
泳動し、ナイロンフィルター（GeneScreen Plus, NEN,
USA）に染色体ＤＮＡを転写した。フィルターは、風乾
後、ハイブリダイゼーションに供した。ハイブリダイゼ
ーションは、常法（Maniatis T. etal., 1982）に従っ
てｈＩＬ−１α遺伝子断片をプローブとし、導入遺伝子
断片のマウス染色体への組み込みを確認した。これらの
結果を、下記の表１に示した。計２回の実験で、１３３
個の受精卵に遺伝子注入操作を行い８６個（６５％）の
受精卵が操作後生存していた。この生存卵すべてを４匹
のレシピエントに移植した結果、３匹のレシピエントが
妊娠し、妊娠１９日目に帝王切開術を実施することによ
り２４匹（１８％）の産仔を摘出した。摘出された産仔
は、蘇生後、予め準備しておいた当日出産した里親（Ｉ
ＣＲ雌マウス）に保育させた。これらの産仔の内、１１
匹（８％）において、胎盤より抽出された染色体ＤＮＡ
に導入遺伝子が確認されたが、この内２匹は里親に食殺
されたため、その後の解析はできなかった。

【００２５】

【表１】

【００２６】食殺されずに生存した９匹のトランスジェ
ニックマウスは、すべて離乳まで発育した。これら９匹
のトランスジェニックマウスより各々Ｆ１マウスを得、
トランスジーンの伝達性を調べたところ、すべてトラン
スジーンをＦ１マウスに伝達した。得られたトランスジ
ェニックマウスの性状を、下記の表２に示した。

【００２７】

【表２】

【００２８】得られたトランスジェニックマウスは、す
べてのラインにおいて、そのトランスジーンを子孫（Ｆ
１）へ伝達していたが、各組織での発現が認められたラ
インは、わずかに２ライン（βＡＩＬ−１α−１７０５
およびβＡＩＬ−１α−１７０６）のみであった。これ
らの発現している２ラインの初代トランスジェニックマ
ウスは、いずれも離乳（４週齢）まで達したが非常に小
型（非トランスジェニックマウスの体重の約半分）であ
った。また、離乳時には、既に前後肢の関節周囲に顕著
な腫大が認められ、週齢が進むにつれて悪化した。本マ
ウスを約１４週齢まで飼育し、観察を続けたところ、７
週齢頃より眼瞼の閉鎖（目ヤニが眼周囲に付着すること
による）及び１３週齢頃より脱毛が確認された。更に、
１０週齢頃から腫大した後肢関節の下部が内側に湾曲
し、変形してきた。その頃には、後肢は完全に麻痺して
おり、前肢のみで行動することが観察された。

【００２９】このような状態のトランスジェニックマウ
スから、自然交配により子孫（Ｆ１）を得ることは困難
であると判断し、体外受精法にてＦ１を得ることを試み
た。体外受精法は、常法（Toyoda Y., Yokoyama M., Ho
shi T., Japan J. Anim. Reprod., 16, 147-151,1971）
により行った。即ち、心臓より直接、全採血し、屠殺せ
しめた２ラインのトランスジェニックマウス（Ｆ０）か
ら各々精巣上体尾部を摘出し、予め用意されたsuspensi
on culture dish（Nunc社）中の４００μl ＴＹＨ培養
液（ＴＹＨ培養液は超純水１００mlにＮａＣｌ ０.６９
７６ｇ、ＫＣｌ０.０３５６ｇ、ＣａＣｌ₂・２Ｈ₂Ｏ
０.０２５１ｇ、ＫＨ₂ＰＯ₄ ０.０１６２ｇ、ＭｇＳＯ₄
・７Ｈ₂Ｏ ０.０２９３ｇ、ＮａＨＣＯ₃ ０.２１０６
ｇ、ピルビン酸ナトリウム０.０１１ｇ、ブドウ糖０.１
ｇ、ウシ血清アルブミン０.４ｇ、ペニシリンＧ ０.０
０７５ｇ、ストレプトマイシン０.００５ｇ、phenol re
d ０.０００２ｇを順次加えて、溶解して作製する。溶
解後、この培養液をミリポアフィルターを通して除菌
し、実験に使用する。参考文献：Toyoda, Y., Yokoyam
a, M. and Hoshi, T. ：Jpn. J. Anim. Reprod. 16, 14
7-151, 1971）に導入した。導入された精巣上体尾部
は、眼科用ハサミにて細切されることにより、精子を採
取した。得られたトランスジェニックマウス由来精子
は、１時間培養した後、予めＢ６Ｃ３Ｆ１雌マウスより
採取しておいた未受精卵が入っている４００μlＴＹＨ
培養液中に精子浮遊液１０μlを添加した。この状態
で、５％ＣＯ₂、９５％空気の気相下にて３７℃、２４
時間培養した。２４時間培養後、２細胞期へ発生したも
のを受精卵と判定し、これらの受精卵の一部は、偽妊娠
１日目のＩＣＲ系レシピエントマウスの卵管に移植し
た。なお、残りの受精卵は、既報（Tada N. et al., Th
eriogenology, 40, 333-344, 1993）に従って凍結保存
を実施した。以下に得られた受精卵数及び移植成績を表
３に示した。

【００３０】

【表３】

【００３１】これらの体外受精及び移植により得られた
産仔の中には、各々トランスジェニックマウス（Ｆ１）
が含まれていた。βＡＩＬ−１α−１７０５のＦ１トラ
ンスジェニックマウスは、すべてＦ０と同様な表現型を
示し、発育遅延及び関節炎を生じたが、Ｆ０の表現型と
比べ、その異常の程度は、顕著であった。一方、βＡＩ
Ｌ−１α−１７０６のＦ１トランスジェニックマウス
は、Ｆ０と比べ逆に異常が軽度であった。即ち、Ｆ１で
は、関節炎の発症が遅れる傾向が認められた。

【００３２】実施例３ トランスジーン由来のｍＲＮＡ
発現 トランスジーン由来のｍＲＮＡ発現は、ＩＬ−１αのト
ランスジェニック９ライン、すべてのＦ０マウスにおい
て、ノーザンブロット法により確認した。トランスジェ
ニックＦ０マウス及びその同腹の非トランスジェニック
マウスの脳、肝臓、腎臓、小腸、精巣、骨格筋、皮膚及
び頚骨より、全ＲＮＡを単離した。ノーザンブロット解
析には、２０μgの全ＲＮＡを１.１％アガロース／１.
１Ｍホルムアルデヒドゲル電気泳動し、次いで、これを
ナイロン膜フィルターに移した。プレハイブリダイゼー
ションは、ハイブリダイゼーション液〔5×SSC（1×SSC
＝0.15M NaCl，15mM Na-citrate，pH7.4)、５０％ホル
ムアミド、５mM ＥＤＴＡ、５mg／mlの変性サケＤＮ
Ａ、5×Denhardt試薬等を含む〕の中で、４２℃にて２
時間行った。次いで、ランダムにプライミングしたｃＤ
ＮＡプローブ（ヒトＩＬ−１α遺伝子断片）を熱変性さ
せた後、これをハイブリダイゼーション液に加え、ハイ
ブリダイゼーションを行った。反応は、４２℃にて１８
時間行い、洗浄は、0.1×SSC／0.1％ SDS中、５６℃、
２０分間行った。フィルターは、−８０℃にて２４〜７
２時間暴露した（増感スクリーン＋コダックＸＡＲ−５
フィルム使用）。９ラインのＦ０トランスジェニックマ
ウスの上記の主要臓器について、ノーザンブロット解析
を実施した。βＡＩＬ−１α−１７０５及びβＡＩＬ−
１α−１７０６ラインを除き、すべてのラインでＩＬ−
１αの発現を認めなかった。βＡＩＬ−１α−１７０５
ラインは、腎臓、小腸、皮膚及び頚骨で強いＩＬ−１α
の発現が認められたが、脳、肝臓及び骨格筋では、その
発現は弱かった。また、精巣については、その発現は、
ほとんど認められなかった。一方、βＡＩＬ−１α−１
７０６ラインの場合は、全体的にβＡＩＬ−１α−１７
０５の発現に比べ弱い傾向を示したが、骨格筋のみで強
い発現が認められた。また、脳、肝臓、腎臓、小腸、皮
膚及び頚骨では、比較的弱い発現があり、精巣では、ほ
とんど発現がなかった。なお、解析は、βＡＩＬ−１α
−１７０５及びβＡＩＬ−１α−１７０６ Ｆ０マウス
について実施したが、以下に示す解析の結果及び図は、
２ラインともほぼ同様な病態を示すため、βＡＩＬ−１
α−１７０５ Ｆ０マウスの所見に限定して解説する。

【００３３】実施例４ トランスジェニックマウスの各
臓器における病理学的解析 生後４週齢βＡＩＬ−１α−１７０５ Ｆ０マウスをペ
ントバルビタール酸ナトリウムにて深麻酔し、心臓より
全採血することにより屠殺した後、脳、肝臓、腎臓、胸
腺、脾臓、膵臓、肺、心臓、精巣、小腸、大腸、頭蓋
冠、皮膚、大腿骨（膝関節）及び眼球を各々摘出した。
これらの組織を１０％ホルマリン緩衝液にて固定した
後、パラフィンに包埋し、約２mmの連続薄切標本を作製
した。なお、骨組織については、薄切標本を作製する前
に、１４％ＥＤＴＡに約１週間浸漬することにより脱灰
処置を施した。これらの標本について、ヘマトキシリン
ーエオシン染色を行った。染色後の標本は、光学顕微鏡
下にて異常の有無を観察し、一部の標本について写真撮
影を行った（図２および図３）。

【００３４】ヘマトキシリン−エオシン染色結果の解析
を以下に示す。胸腺における病理組織において、トラン
スジェニックマウスの胸腺では、非トランスジェニック
マウスの胸腺と比べ、皮質の萎縮が認められた。脾臓の
病理組織においては、トランスジェニックマウスの脾臓
は、好中球の増加、髄外造血の亢進及び軽度の形質細胞
様細胞の増加が認められたが、非トランスジェニックマ
ウスの脾臓では、このような変化は、認められなかっ
た。肺の病理組織においては、トランスジェニックマウ
スの肺は、肺胞の拡張が不十分で肺胞壁が厚く、好中球
の浸潤が認められた。しかし、非トランスジェニックマ
ウスの肺では、何ら異常を認めなかった。腎臓の病理組
織においてはトランスジェニックマウスの腎臓は、糸球
体中のメサンギウム領域が増加しており、肥厚している
状態の硬化性変化が認められた。非トランスジェニック
マウスの腎臓は、変化を認めなかった。

【００３５】頭蓋冠の病理組織においてはトランスジェ
ニックマウスの頭蓋冠（図２Ａ）では、破骨細胞（矢印
ＯＣ）の増加による顕著な骨吸収像、骨髄腔（矢印Ｂ
Ｍ）中の好中球の増加及び骨髄への線維性組織（矢印Ｆ
ｂ）の置換が認められたが、非トランスジェニックマウ
スの頭蓋冠（図２Ｂ）では、これらの変化を認めなかっ
た。皮膚の病理組織においてはトランスジェニックマウ
スの皮膚では、軽度ではあるが真皮組織の萎縮が認めら
れた。非トランスジェニックマウスの皮膚では、このよ
うな変化はなかった。大腿骨の病理組織においてはトラ
ンスジェニックマウスの大腿骨（図３Ａ）では、顕著な
骨髄球系細胞（矢印ＢＭＣ）の増加、破骨細胞の骨小柱
吸収像（矢印Ｒｓ）及び骨軟骨破壊に伴う骨髄への線維
性組織（矢印Ｆｂ）の置換が観察された。その他、著明
な関節への好中球浸潤、滑膜細胞の増加及び軽度ではあ
るが関節のパンヌス形成が認められた。なお、非トラン
スジェニックマウスの大腿骨（図３Ｂ）では、このよう
な変化は、認められなかった。眼球の病理組織において
はトランスジェニックマウスの眼球では、角膜上皮の肥
厚が認められ、重層扁平上皮細胞の増加に起因している
ものと思われる。また、顆粒球系細胞等の浸潤は観察さ
れなかった。非トランスジェニックマウスの眼球では、
このような異常は認められなかった。なお、上記の異常
が認められた臓器以外の臓器、即ち脳、肝臓、膵臓、心
臓、精巣、小腸及び大腸では、病理組織学的検索で何ら
異常を認めなかった。

【００３６】前述したように、ＩＬ−１は、内因性発熱
因子、白血球増加や急性期蛋白質の誘導因子、リンパ球
活性化因子及びＢ細胞活性化因子としての作用のみなら
ず、非常に多くの細胞に対し様々な活性を示し、急性炎
症以外にも生体の恒常性を含む種々の反応において、重
要な役割を果たしていることが明らかにされている。特
に、ＩＬ−１と慢性炎型疾患との関係が注目されてい
る。本マウスの特徴的な病理組織学的変化として、著明
な関節部の炎症性変化を示す肉芽性増殖性炎の像が挙げ
られる。関節軟骨、骨組織の線維性組織による破壊像、
一部パンヌス形成、滑膜細胞増生など、いわゆる関節炎
と考えられる変化が認められた。また、頭蓋冠におい
て、破骨細胞による骨の吸収像や骨髄の線維性組織によ
る置換などの変化が認められたことから、関節以外に骨
への直接的な影響も考えられた。骨髄や脾臓等における
骨髄球系細胞増殖及び肺等の好中球浸潤は、関節炎によ
る二次的な変化が考えられるが、ＩＬ−１により誘導さ
れるＩＬ−８がリンパ球や好中球に対し走化性を促進さ
せることによって、これら細胞の付着性を高めるという
報告（Larsen C.G. et al., Science, 243, 1464-1466,
1989）があり、ＩＬ−１の過剰発現による直接的な影
響も示唆される。

【００３７】実施例５ トランスジェニックマウス由来
脾臓細胞のマイトージェン刺激によるサイトカインの産
生能の確認 トランスジェニックマウスの脾臓細胞を用いて、ＩＬ−
１の過剰発現による免疫担当細胞の表現型の変化を観察
した。トランスジェニックマウスより摘出した脾臓は、
ガラス性のホモジナイザーにて単一の細胞にした。次い
で、赤血球をTris buffer（0.75％NH₄Cl、5.6mM Tris−
HCl、pH7.65）にて溶血し、セルストレーナー（Falcon
2350）で破壊された赤血球の残存物を除去した。単離さ
れた脾臓細胞は、５×１０⁶／mlの濃度になるように、
１０％ＦＣＳを含むＲＰＭＩ １６４０にて調製し、こ
れを脾臓細胞懸濁液とした。cancanavalin A（Ｃｏｎ
Ａ；E．Y．Labs. Inc.）及びlipopolysaccharide（ＬＰ
Ｓ；Difco Laboratories）は、各々２μg／ml、５μg／
mlの濃度になるように脾臓細胞懸濁液に加えた。抗マウ
スＣＤ３抗体（B.M.Y.）は、５μg／mlの濃度になるよ
うにＰＢＳで希釈し、これを培養用２４穴プレートの１
穴あたり２５０μl加え、２時間室温下で培養した後、
穴を２％ＦＣＳを含むＲＰＭＩ １６４０で洗浄した。
上記の何れの場合も、脾臓細胞懸濁液は２４穴プレート
１穴あたり１ml加えた。その後、３７℃、５％ＣＯ₂のi
ncubatorで２日間培養した細胞懸濁液を８,０００r.p.
m.で１０分間遠心し、その上清を回収した。脾臓細胞懸
濁液上清中に含まれるサイトカイン（マウスＩＬ−２、
マウスＩＬ−４、マウスＩＬ−６、ＩＮＦ−γ：Biosou
rce International、マウスＩＬ−１α，マウスＴＮＦ
α：Genzyme、ヒトＩＬ−１α：R & D systems Inc.）
の定量は、吸光度（ＯＤ）４５０nmにて市販のＥＬＩＳ
Ａキットを使用し、手順はそのプロトコールに従って実
施した。トランスジェニックマウス由来脾臓細胞のマイ
トージェン刺激によるサイトカイン産生能の結果を表４
に示す。

【００３８】

【表４】

【００３９】マイトージェン（分裂促進因子）とは、リ
ンパ球を活性化し、細胞分裂を誘導促進する物質を言
う。代表的なものとして、植物由来のレクチン類〔ＰＨ
Ａ（フィトヘマアグルチンＡ)、ＣｏｎＡ〕、あるいは
バクテリア由来のＬＰＳなどがある。ＰＨＡ、ＣｏｎＡ
などは、Ｔ細胞、ＬＰＳなどはＢ細胞を刺激することが
知られている。トランスジェニックマウス由来脾臓細胞
は、マイトージェン刺激のない状態でもヒトＩＬ−１α
をspontaneousに産生しており、各種のマイトージェン
で刺激を加えることにより、全体的に非トランスジェニ
ックマウス由来脾臓細胞に比べサイトカインの産生がＩ
Ｌ−４を除き亢進する傾向が認められた。例えば、トラ
ンスジェニックマウス由来脾臓細胞をＣｏｎＡ（コンカ
ナバリンＡ）にて刺激すると、ＩＬ−２、ＩＦＮγ、Ｉ
Ｌ−６及びヒトＩＬ−１αの産生が亢進するが、特にＩ
Ｌ−２の亢進が顕著であった。このようなサイトカイン
産生の亢進パターンは、アジュバンドのみを投与したＤ
ＢＡ／１マウス（ＤＢＡ１：ＣＦＡ）やII型コラーゲン
を投与して関節炎を誘発したＤＢＡ／１マウス（ＤＢＡ
１：ＲＡ）の亢進パターンとは明らかに異なっていた。
このことから、外部からの刺激（感染、抗原刺激等）に
対して、速やかにサイトカイン産生が亢進することによ
り、免疫応答（免疫能）も亢進していることが示唆され
た。なお、トランスジェニックマウスの血中にもヒトＩ
Ｌ−１αが存在していることも確認された。しかし、非
トランスジェニックマウス由来脾臓細胞の培養上清及び
血中からは、ヒトＩＬ−１αの存在は、確認できなかっ
た。

【００４０】実施例６ トランスジェニックマウス脾臓
細胞を用いた抗核抗体の検出 上述したように本トランスジェニックマウスは、ヒトＩ
Ｌ−１αの過剰発現により免疫応答が過剰に起こりすぎ
ていることが推測されたため、自己免疫疾患の可能性を
確認するために、トランスジェニックマウス由来の脾臓
細胞における抗核抗体の検出を試みた。抗核抗体とは、
自己免疫疾患の患者血中に検出できるもので、細胞核成
分を抗原とする抗体である。ＳＬＥ患者血中に高頻度に
検出できるほか、関節リウマチ、強皮症、胸腺腫にも認
められる。１重鎖及び２重鎖ＤＮＡ、ヒストン、ポリＡ
ＤＰリボースなどのクロマチン成分、ＲＮＡ蛋白などの
核質内可溶性成分が抗原になる。ＤＮＡと反応する抗体
は、ＳＬＥの診断に使われている。

【００４１】ＦＩＴＣ染色により染色された抗核抗体が
存在するトランスジェニックマウス由来の脾臓細胞の写
真を図４に示す。トランスジェニックマウスの脾臓細胞
（図４Ａ）は、細胞質全体が鮮明に染色されており、抗
核抗体の存在が確認できた。一方、非トランスジェニッ
クマウスの脾臓細胞（図４Ｂ）は、若干ではあるが染色
されていた。しかし、トランスジェニックマウスの脾臓
細胞と比べ明らかに染色性が弱い。非トランスジェニッ
クマウス脾臓細胞の染色性は、非特異的なものと考えら
れた。

【００４２】トランスジェニックマウスの全体写真を図
５に示す。図５Ａは、生後５週齢のβＡＩＬ−１α−１
７０５トランスジェニックマウス（写真右端）、βＡＩ
Ｌ−１α−１７０６トランスジェニックマウス（写真中
央）及び同腹の非トランスジェニックマウス（写真左
端）の全身写真である。２匹のトランスジェニックマウ
スは、非トランスジェニックマウスと比べ、明らかに小
型で体重は、非トランスジェニックマウスの約半分であ
る。また、これら２匹のトランスジェニックマウスの尾
が湾曲しているのが確認できる。さらに生後５週齢のト
ランスジェニックマウス（βＡＩＬ−１α−１７０５）
の前肢関節周囲が非トランスジェニックマウスと比べ腫
脹していた。トランスジェニックマウス（βＡＩＬ−１
α−１７０５）の関節周囲が腫脹した後肢の写真を図５
Ｂに示す。トランスジェニックマウスの後肢（写真右）
は、非トランスジェニックマウスの後肢（写真左）と比
べ、明らかに腫脹している。図５Ｃに体外受精法によっ
て得られた生後９日齢のＦ１トランスジェニックマウス
（βＡＩＬ−１α−１７０５−２）の全体写真を示す。
この時期で既に前後肢の関節周囲に顕著な腫脹が認めら
れる。また、発育も遅延している。

【００４３】

【発明の効果】本発明のトランスジェニック動物は、ヒ
トＩＬ−１αの全身での過剰発現により免疫担当細胞及
び関節中の滑膜細胞等の活性を亢進せしめる結果、慢性
関節リウマチを発症する。その病態は、ヒトにおける膠
原病を含む慢性関節リウマチにきわめて類似しており、
上記疾患の有用なモデルとなり得る。

【図面の簡単な説明】

【図１】サイトメガロウイルスエンハンサーのＤＮＡ配
列およびニワトリベーターアクチンプロモーターのＤＮ
Ａ配列の下流にＩＬ−１α遺伝子をコードするＤＮＡ配
列さらにウサギベーターグロビン遺伝子を有するプラス
ミドｐβＡ／ｈＩＬ−１α−１のプラスミドマップを示
した図である。

【図２】生後４週齢βＡＩＬ−１α−１７０５ Ｆ０マ
ウス(Ａ)と非トランスジェニックマウス(Ｂ)の頭蓋冠を
ヘマトキシリンーエオシン染色で染めた標本の顕微鏡の
写真である。

【図３】生後４週齢βＡＩＬ−１α−１７０５ Ｆ０マ
ウス(Ａ)と非トランスジェニックマウス(Ｂ)の大腿骨を
ヘマトキシリンーエオシン染色で染めた標本の顕微鏡の
写真である。

【図４】生後４週齢βＡＩＬ−１α−１７０５ Ｆ０マ
ウス(Ａ)と非トランスジェニックマウス(Ｂ)のＦＩＴＣ
染色により染色した脾臓細胞の顕微鏡写真である。

【図５】(Ａ)は生後５週齢のβＡＩＬ−１α−１７０５
トランスジェニックマウス（右端）、βＡＩＬ−１α−
１７０６トランスジェニックマウス(中央)及び同腹の非
トランスジェニックマウス(左端)の全身の形態写真、
(Ｂ)はβＡＩＬ−１α−１７０５トランスジェニックマ
ウスの関節周囲が腫脹した後肢(右)および非トランスジ
ェニックマウスの後肢(左)の形態写真である。また(Ｃ)
は体外受精法によって得られた生後９日齢のＦ１トラン
スジェニックマウス（βＡＩＬ−１α−１７０５−２）
の全身の形態写真である。

フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｒ 1:91） (Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｒ 1:91）

Claims (8)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 インターロイキン１アルファ遺伝子を含
   む外来性遺伝子構築体を組み込んだインターロイキン１
   関連疾患モデル非ヒト脊椎トランスジェニック動物。
2. 【請求項２】 サイトメガロウイルスエンハンサーのＤ
   ＮＡ配列及びニワトリベーターアクチンプロモーターの
   ＤＮＡ配列の下流に、インターロイキン１アルファ遺伝
   子をコードするＤＮＡ配列を含む外来性遺伝子構築体を
   組み込んだ、請求項１に記載のインターロイキン１関連
   疾患モデル非ヒト脊椎トランスジェニック動物。
3. 【請求項３】 インターロイキン１アルファ遺伝子がヒ
   ト由来であることを特徴とする、請求項１または２に記
   載のインターロイキン１関連疾患モデル非ヒト脊椎トラ
   ンスジェニック動物。
4. 【請求項４】 非ヒト脊椎動物がマウスであることを特
   徴とする、請求項１ないし３のいずれかの項に記載のイ
   ンターロイキン１関連疾患モデル非ヒト脊椎トランスジ
   ェニック動物。
5. 【請求項５】 インターロイキン１関連疾患が慢性関節
   リウマチである請求項１ないし４のいずれかの項に記載
   のインターロイキン１関連疾患モデル非ヒト脊椎トラン
   スジェニック動物。
6. 【請求項６】 インターロイキン１関連疾患が全身性エ
   リテマトーデスである請求項１ないし４のいずれかの項
   に記載のインターロイキン１関連疾患モデル非ヒト脊椎
   トランスジェニック動物。
7. 【請求項７】 インターロイキン１関連疾患が骨粗鬆症
   である請求項１ないし４のいずれかの項に記載のインタ
   ーロイキン１関連疾患モデル非ヒト脊椎トランスジェニ
   ック動物。
8. 【請求項８】 βＡＩＬ−１α−１７０５又はβＡＩＬ
   −１α−１７０６である請求項４ないし７のいずれかの
   項に記載インターロイキン１関連疾患モデルトランスジ
   ェニックマウス。