JP3946163B2

JP3946163B2 - 長鎖多不飽和脂肪酸の含有量が高い材料の調製方法

Info

Publication number: JP3946163B2
Application number: JP2003136251A
Authority: JP
Inventors: ケイン、フレドリック・ウィリアム; ムーア、スティーブン・レイモンド; マクニール、ジェラルド・パトリック; ツェマー、オルガ
Original assignee: ロダース・クロックラーン・ビー・ブイ
Priority date: 1995-11-14
Filing date: 2003-05-14
Publication date: 2007-07-18
Anticipated expiration: 2016-11-12
Also published as: ES2148814T5; DE69609196D1; DE69609196T3; JP3936398B2; CA2237883A1; CA2237883C; DK0866874T3; US6534110B1; AU7625296A; ES2148814T3; WO1997018320A1; EP0866874A1; DK0866874T4; US20030013164A1; US6534663B1; JP2004041187A; KR100300826B1; AU705157B2; JP2007138181A; ATE194387T1

Description

【０００１】
動物及び人用食品において、共役長鎖多不飽和脂肪酸の健康によいという効果は、先行技術において認識されている。
【０００２】
例えば、欧州特許第４１１，１０１号は、９，１１−ジエン脂肪酸及び１０，１２−ジエン脂肪酸等の遊離共役リノール酸（＝ＣＬＡ）、あるいはそれらの非毒性塩を含有する組成物が、カビの成長を阻害することにより、製品を保護するために使用され得ることを開示する。この欧州特許第４１１,１０１号によると、遊離酸は、リノール酸を、８５℃までの温度において、リノール酸の、所望の酸の形態への転化に影響を与えることができるたんぱく質と反応させることによって調製される。得られたＣＬＡは、９，１１−オクタデカジエン酸と１０，１２−オクタデカジエン酸の両者と、それらに由来する活性異性体を含む。シス／トランス異性のために、上記ＣＬＡ類は、８種の異なる異性体、即ち、シス^９−シス^１１、シス^９−トランス^１１、トランス^９−シス^１１、トランス^９−トランス^１１、シス^１０−シス^１２、シス^１０−トランス^１２、トランス^１０−シス^１２、及びトランス^１０−トランス^１２、を含むことができる。それら異性体の中で、シス^９−トランス^１１及びトランス^１０−シス^１２は、最も量が多く、その上、それらの濃度はほぼ等しい。それら二種の最も量が多い異性体は、ＣＬＡ類を含有する組成物の健康によいという効果の原因であることが、一般的に信じられている。
【０００３】
欧州特許第４４０,３２５号によると、ＣＬＡ類は、自然食品中において、“金属キレート剤”として使用され得る。ＣＬＡ類は、９，１１−オクタデカジエン酸、１０，１２−オクタデカジエン酸、及びそれらの塩又は他の誘導体類を含有する。遊離酸は、例えば、Δ^１２シスΔ^１１トランスイソメラーゼを用いるリノール酸の酵素処理によって調製され得る。
【０００４】
米国特許第５，４３０，０６６号には、ＣＬＡ類が、動物又は人における体重減少、体重増加の減少又は食欲不振を防止するために、食品において使用され得ることが開示されている。これらのＣＬＡ類が、免疫系からの、特にインターロイキン−１からの生成物の、有害な異化の影響を軽減できることもまた開示されている。
【０００５】
米国特許第５,４２８,０７２号より、ＣＬＡ類が、ある種の動物において、飼料の体重への転換効率の増加のために使用され得ることが知られている。
【０００６】
シャンサ（Shantha）らは、ジャーナル・オブ・エイオーエイシー・インターン（J. of AOAC Intern）、７６巻、３号、１９９３年、第６４４−６４９頁において、ＣＬＡ異性体は、潜在的な抗癌物質であることを開示した。
【０００７】
ヌートリション・リポーツ・インターン（Nutrition Reports Intern）、３８巻、５号、１９８８年、第９３７−９４４頁のフォガーティ（Fogerty）らによれば、シス^９−トランス^１１リノール酸は、様々な食品または人用のミルクにおいて使用され得る。
【０００８】
米国特許第４,１６４,５０５号は、塩基を用いる処理によって、非共役不飽和脂肪酸が共役不飽和脂肪酸に異性化される方法を開示する。この方法の結果として、速度的に支配された反応混合物であって、ここにおいて、二重結合は共役しているが、多不飽和脂肪酸の全炭素鎖に亘って分布しているものが得られるであろう。それゆえ、この方法は、本発明者等が本発明の方法の結果として得られることを意図しているような、二種の最も量が多い共役多不飽和脂肪酸部分Ｌ_１及びＬ_２が、重量比Ｌ_１／Ｌ_２＝２.３−９９で存在する有機材料をもたらさない。
【０００９】
上記先行技術の方法及び生成物は、多くの欠点を有する。例えば、上記先行技術によるＣＬＡ類の調製方法は、例えば生成物の収量が非常に限られているために、商業規模では適用され得ない。更に、得られる生成物は、シス^９−トランス^１１異性体／トランス^１０−シス^１２異性体間に、常にある特定の比率（一般的には約１.０）を有するであろう。このために、１.０以外の比率を有する組成物を得ることはできない。特定の目的に対する二つの異性体の有効性は異なるので、ＣＬＡ類を作るために、当該方法の実施の際に適用される条件に応じて、シス^９−トランス^１１／トランス^１０−シス^１２の比率が自由に選択され得るという見込みがあることは、非常に望ましい。
【００１０】
それゆえ、本発明は、新たなＣＬＡ類の調製方法であって、シス^９−トランス^１１／トランス^１０−シス^１２の比率が自由に選択され得る方法に関する。この新たな方法は、新たなＣＬＡ組成物及び公知のＣＬＡ組成物の両者の調製に適用され得る。
【００１１】
よって、本発明は、共役不飽和脂肪酸部分を含む材料の調製方法であって、少なくとも５重量％の共役多不飽和脂肪酸部分を含み、少なくとも二つの異なる異性体Ｌ_１及びＬ_２を、重量比Ｌ_１：Ｌ_２＝ＸＡで含む材料が、酵素転化に供され、当該酵素転化は、次の転化(i)〜(iv)、即ち、
(ｉ) 遊離脂肪酸の転化であって：
(a) モノ−又はポリアルコール、又は
(b) モノ−、ジ−又はトリグリセリド、又は
(c) アルキルエステル、又は
(d) リン脂質
を用いる転化、
(ｉｉ) モノ−、ジ−又はトリグリセリドの転化であって：
(a) 水、又は
(b) モノ−又はポリアルコール、又は
(c) アルキルエステル、又は
(d) リン脂質
を用いる転化、
(ｉｉｉ) リン脂質の転化であって：
(a) 水、又は
(b) アルキルエステル、又は
(c) 他のリン脂質、又は
(d) モノ−又はポリオール
を用いる転化、
(ｉｖ) アルキルエステル又はろうエステルの転化であって：
(a) 水、又は
(b) モノ−又はポリオール、又は
(c) 遊離脂肪酸、又は
(d) リン脂質
を用いる転化、
の中から選択され、ここで、Ｌ_１とＬ_２とを区別する能力を有する酵素が使用され、前記転化は、少なくとも二種の生成物(I)及び(II)の混合物をもたらし、当該生成物(I)及び(II)の中の少なくとも一つの生成物(I)又は(II)は、Ｌ_１とＬ_２とを重量比Ｘ_Ｂで含み、Ｘ_Ｂは、少なくとも１.１×Ｘ_Ａ、好ましくは少なくとも１.２×Ｘ_Ａ、最も好ましくは少なくとも１.３×Ｘ_Ａであり、ここにおいて、Ｌ_１とＬ_２は、少なくとも二つの不飽和と少なくとも１８の炭素原子とを有する多不飽和脂肪酸の異なる異性体である、方法に関する。
【００１２】
酵素転化に適用され得る酵素は、例えば、ゲオトリカム・カンジダム（Geotrichum candidum）、カンジダ・ルゴサ、及びホスホリパーゼ類である。
【００１３】
先に示したように、多くの異なる種類の反応体が、酵素転化に使用され得る。転化が、少なくとも５重量％、好ましくは少なくとも１０重量％、最も好ましくは少なくとも１５重量％の共役多不飽和脂肪酸を含む遊離脂肪酸と、リン脂質あるいはモノ−、ジ−又はトリグリセリドとの混合物について行われる場合、非常に良好な結果が得られることが見出された。
【００１４】
本発明の方法に使用することができる、好ましい出発材料は、重量比Ｘ_Ａ（即ちＬ_１：Ｌ_２）が約１.０である。
【００１５】
本発明の他の態様によると、水又はグリセロールと、モノ−、ジ−又はトリグリセリドとの混合物もまた、転化されることができた。この例では、グリセリド材料は、その中に少なくとも５重量％の共役多不飽和脂肪酸を有する反応体である。
【００１６】
上記方法は、どのような出発材料（当該材料において、Ｌ_１とＬ_２は、存在する長鎖多不飽和脂肪酸が異なるシス／トランス異性の形態にて存在する限りにおいて、少なくとも二つの不飽和と１８以上の炭素原子とを有する長鎖多不飽和脂肪酸部分すべてから選択され得る）にも適用され得るが、Ｌ_１とＬ_２が、シス^９−トランス^１１リノール酸とトランス^１０−シス^１２リノール酸（あるいはその逆）であるのが好ましい。
【００１７】
本発明の方法は、公知の化合物の調製にも適用され得る。しかしながら、この方法を用いて、新規の組成物も得ることができる。これらの新規な化合物（組成物）は、これらの組成物中において見出される重量比Ｌ_１：Ｌ_２のために、予期されなかった性質を有する。それゆえ、本発明は、新規な有機材料であって、少なくとも１８炭素原子の鎖長を有する共役多不飽和脂肪酸部分を少なくとも１重量％含み、ここにおいて、当該共役多不飽和脂肪酸部分は、少なくとも、二種の異性体Ｌ_１とＬ_２とを、重量比Ｌ_１／Ｌ_２＝２.３〜９９、好ましくは４〜２０、最も好ましくは８〜１５にて含み、Ｌ_１は当該材料中において最も量が多い、そしてＬ_２は当該材料中において二番目に量が多い共役多不飽和脂肪酸部分であり、その上、Ｌ_１とＬ_２とは、少なくとも２つの不飽和と少なくとも１８の炭素原子とを有する多不飽和脂肪酸の異なる異性体である、材料にも関する。
【００１８】
得ることができる有機材料は、遊離脂肪酸の混合物、ろうエステルの混合物、低級アルキルエステルの混合物、モノグリセリド又はジグリセリド又はトリグリセリド、又はモノ−、ジ−及びトリグリセリドの混合物、又はリン脂質の混合物、あるいは前記混合物の一種以上の成分の混合物であることができる。
【００１９】
新規有機材料において、Ｌ_１とＬ_２とは、共に、シス^９−トランス^１１リノール酸及びトランス^１０−シス^１２リノール酸から選択され得る。
【００２０】
多くの例において、本発明方法のための出発材料は、魚油等の、動物に由来する材料であろう。しかしながら、出発材料として植物油を用いることも可能である。植物油は、例えば魚油中には存在せず、且つ、その油が得られる植物源を示す特定の成分を少量含有するので、そのような植物油を用いると、転化生成物は、先行技術において知られているいずれの生成物に対しても新規である。よって、植物油から得られ、少なくとも二つの共役多不飽和脂肪酸部分Ｌ_１及びＬ_２を有する有機材料（ここにおいて、Ｌ_１は最も量が多い、そしてＬ_２は二番目に量が多い共役多不飽和脂肪酸部分であり、Ｌ_１とＬ_２とは、１.５〜２５、好ましくは４〜２０、最も好ましくは８〜１５の重量比で存在し、一方、有機材料中における共役多不飽和脂肪酸部分の合計量は、少なくとも１重量％であり、その上、Ｌ_１とＬ_２とは、少なくとも２つの不飽和と少なくとも１８の炭素原子とを有する多不飽和脂肪酸の異なる異性体である）は、非植物源から得られる先行技術のいずれの生成物に対しても、新規であると考えられる。
【００２１】
先行技術からよく知られているように、多量の多不飽和脂肪酸を含む有機材料は、酸素に対して非常に敏感である。それゆえ、本発明者等は、有効量の、天然又は合成のトコフェロール類、ＴＢＨＱ、ＢＨＴ、ＢＨＡ、ラジカル捕捉剤類、没食子酸プロピル、脂肪酸のアスコルビルエステル類、及び抗酸化性を有する酵素類からなる群から選択される酸化安定剤を加えるのがよいと考える。
【００２２】
本発明の有機材料は、そのまま使用され得るが、補足的脂肪とのブレンドとしてそれらを用いるのが、しばしば好ましい。それゆえ、本発明は、有機材料と補足的脂肪とのブレンドであって、当該ブレンドは、０.３〜９５重量％、好ましは２〜８０重量％、最も好ましくは５〜４０重量％の、請求項１〜６の方法によって得られる有機材料又は請求項７〜１１の有機材料と、９９.７〜５重量％、好ましくは９８〜２０重量％、最も好ましくは９５〜６０重量％の、カカオ脂、カカオ脂同等物、パーム油又はその画分、パーム核油又はその画分、前記脂肪又はその画分のエステル交換混合物又はヒマワリ油、高オレインヒマワリ油、大豆油、菜種油、綿実油、魚油、サフラワー油、高オレインサフラワー油、トウモロコシ油及びＭＣＴ（中鎖トリグリセリド）油類から選択される液状油から選択される、補足的脂肪を含むというものにも関する。
【００２３】
上記の、有機材料と補足的脂肪とのブレンドは、５℃において、好ましくは０〜８５、より好ましくは１０〜７０、最も好ましくは２０〜６０の固体脂含有量（ＮＭＲ−パルス、非安定化（n.s.)）を示し、３５℃において、好ましくは３０未満、より好ましくは２０未満、最も好ましくはの固体脂含有量を示す。本発明の一部は、脂肪相を含む、食品及び動物用飼料でもある。ここにおいて、当該脂肪相は、有効量の、請求項１〜５の方法によって得られる生成物、請求項６〜１０の有機材料又は請求項１１〜１２のブレンドを含む。食品は、スプレッド類、マーガリン類、クリーム類、ドレッシング類、マヨネーズ類、アイスクリーム類、ベーカリー製品類（bakery products）、乳幼児用食品、チョコレート、菓子類、ソース類、コーティング（被覆物）類、チーズ及びスープ類からなる群から適切に選択される。
【００２４】
しかしながら、栄養補助食品（サプリメント）及び医薬品も、本発明の脂肪及びブレンドを用いて得られ得る。それゆえ、本発明の方法によって得られる生成物あるいは本発明の有機材料又はブレンドを含む、栄養補助食品あるいは経腸又は非経口投与に適するカプセル形態又は他の形態の医薬品もまた、本発明の一部である。
【００２５】

【００２６】
分析方法
脂肪酸組成は、ＪＡＯＣＳ、７１巻、１２号、第１３２１頁に示されている方法を用い、脂肪酸メチルエステル・ガスクロマトグラフィー（ＦＡＭＥＧＣ）にて決定した。
【００２７】
部分グリセリド含有量は、内部標準として１２−ヒドロキシイソオクタンを用い、気化光散乱検出器を用い、シリカゲル高性能液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）にて決定した。
【００２８】
脂肪酸含有量は、標準水酸化ナトリウムに対する滴定によって決定した。それは、％オレイン酸と表される。
【００２９】
実施例：
実施例１：
リノール酸（純度：９５％）５０ｇを、ＮａＯＨ（１５ｇ）のエチレングリコール（２９０ｇ）溶液に添加した。混合物を、不活性雰囲気中にて、１８０℃にて２時間加熱した。反応混合物を冷却し、ＨＣｌを用いてｐＨを４に調節し、抽出を、ヘキサン（５０ｍｌ×２回）を用いて行った。ヘキサン抽出物を一緒にし、それを５％ＮａＣｌ（２５ｍｌ×３回）で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥し、溶媒をロータリー・エバポレーターで取り去った。ＦＡＭＥＧＣによって決定された脂肪酸分布により、生成物が共役リノール酸（ＣＬＡ）を９１.８％含み、その中の４９.７％はシス９，トランス１１異性体であり、５０.３％はトランス１０，シス１２異性体であることが示された。ＣＬＡ生成物を、窒素雰囲気下、−２０℃にて保存した。
【００３０】
この方法において、オクタノール２.７８６ｇを、上記の如く調製された混合ＣＬＡ異性体６.０ｇが入っているガラス容器に量り入れた。これに、ＴＢＨＱの蒸留水溶液（０.２ｍｇ／ｍｌ）６ｍｌと、ゲオトリカム・カンジダム（Geotrichum candidum）リパーゼの蒸留水溶液（５ｍｇ／ｍｌ）１２ｍｌとを添加した。反応混合物を２５℃に調節し、窒素下で、オービタル・シェーカーによって激しく攪拌した。７２時間の反応時間の後、試料を移し、転化率が３５.１％であることを決定した。薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）により、未反応脂肪酸を脂肪酸オクチルエステルから分離した。オクチルエステル画分中のＣＬＡは、シス９，トランス１１異性体９７.６％とトランス１０，シス１２異性体２.４％で構成されていることがわかった。遊離脂肪酸画分中のＣＬＡは、シス９，トランス１１異性体２９.３％とトランス１０，シス１２異性体７０.７％で構成されていることがわかった。
【００３１】
実施例２：
混合ＣＬＡ異性体を、実施例１に記載のようにして調製した。脂肪酸メチルエステルのガスクロマトグラフィーによる分析の結果は、次の通りであった。生成物は、ＣＬＡを８９.９％含み、その中の４９．７％はシス９，トランス１１異性体であり、５０.３％はトランス１０，シス１２異性体であった。
【００３２】
生成物を、次の方法によって作った。ゲオトリカム・カンジダム・リパーゼ（リパーゼは、酸を基準として１％）２０ｍｇを、蒸留され且つ脱気された水６．０ｍｌに溶解した。この溶液を、再び脱気した。実施例１に記載のようにして調製した混合ＣＬＡ異性体２ｇを、オクタノール０.９２８８ｇと混合し（酸：アルコールのモル比は１：１）、リパーゼ溶液に添加した。この混合物に、Tocomix（トコフェロール類混合物）抗酸化剤一滴を加えた。反応混合物の温度を３５℃に調節し、窒素下において、電磁攪拌機にて激しく攪拌した。２４時間の反応時間及び転化率が２１％に到達した後、試料を移し、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）により、未反応脂肪酸を脂肪酸オクチルエステルから分離した。オクチルエステル画分中のＣＬＡは、シス９，トランス１１異性体９４％とトランス１０，シス１２異性体６％で構成されていることがわかった。遊離脂肪酸画分中のＣＬＡは、シス９，トランス１１異性体３８％とトランス１０，シス１２異性体６２％で構成されていることがわかった。
【００３３】
実施例３：
実施例２に記載されたように製造されたＣＬＡ異性体混合物を本実施例で用いた。
【００３４】
実施例２に記載された方法により生成物を製造した。９６時間の反応時間そして５３％の転化の後に、試料を取り出し、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）により脂肪酸オクチルエステルから未反応の脂肪酸を分離した。脂肪酸オクチルエステル画分におけるＣＬＡは、８１％の、シス９，トランス１１異性体と１９％の、トランス１０，シス１２異性体から成ることが見出だされた。遊離脂肪酸画分におけるＣＬＡは、１５％の、シス９，トランス１１異性体と８５％の、トランス１０，シス１２異性体から成ることが見出だされた。
【００３５】
実施例４：
下記の方法により、生成物を製造した。オクタノール（０.４６４４ｇ）と１.０ｇの、実施例１に記載されたように製造されたＣＬＡ異性体混合物を秤量してガラス容器に入れた。これに、蒸留水中のＴＢＨＱ（０.２ｍｇ／ｍｌ）溶液を１ｍｌとカンジダ・ルゴサ（Candida rugosa）リパーゼ蒸留水溶液（５ｍｇ／ｍｌ）を２ｍｌ、添加した。その反応混合物を25℃に調整し、窒素下でオービタルシェーカーにより攪拌した。３０分間の反応時間の後に試料を取り出し、４３.４％の転化率であることを測定した。薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）により脂肪酸オクチルエステルから未反応の脂肪酸を分離した。脂肪酸オクチルエステル画分におけるＣＬＡは、９０.７％の、シス９，トランス１１異性体と９.３％の、トランス１０，シス１２異性体から成ることが見出だされた。遊離脂肪酸画分におけるＣＬＡは、２１.５％の、シス９，トランス１１異性体と７８.５％の、トランス１０，シス１２異性体から成ることが見出だされた。
【００３６】
実施例５：
実施例４に記載された方法により生成物を製造した。４５分間の反応時間の後に、試料を取り出し、転化率が４８.３％であることを測定した。薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）により脂肪酸オクチルエステルから未反応の脂肪酸を分離した。脂肪酸オクチルエステル画分におけるＣＬＡは、８４.８％の、シス９，トランス１１異性体と１５.２％の、トランス１０，シス12異性体から成ることが見出だされた。遊離脂肪酸画分におけるＣＬＡは、１０.１％の、シス９，トランス１１異性体と８９.９％の、トランス１０，シス１２異性体から成ることが見出だされた。
【００３７】
実施例６：
６ｋｇのエチレングリコール中６００ｇのＮａＯＨの溶液を２ｇのヒマワリ油に添加した。その混合物を攪拌し、不活性雰囲気下で、１８０℃において３時間加熱した。その反応混合物を、攪拌し、それにより固体石鹸の沈殿の発生を防ぎながら、約９０乃至９５℃に冷却した。その反応混合物に、８ｋｇの脱イオン水中ＨＣｌの１２８０ｍｌの溶液をゆっくりと添加した。その後、攪拌を停止し、不活性雰囲気において、その混合物を沈降させた。ＨＣｌを用いてそのｐＨを４に調整した。油相から水性相を分離した。油相を９０℃において、１ｌの５％のＮａＣｌで２回そして２・の熱脱イオン水で１回洗滌し、次に、真空下で１００℃において乾燥させた。乾燥した油相を窒素シールをして５０乃至６０℃に冷却し、そして濾過した。脂肪酸メチルエステルのガスクロマトグラフィー（ＦＡＭＥＧＣ）により決定された生成物の脂肪酸組成物は、４８.９％が、シス９，トランス１１異性体であり、５１.１％が、トランス１０，シス１２異性体である６１.９％の共役リノール酸［conjugated linoleic acid （ＣＬＡ）］を含有していた。その生成物（ＳＯＣＬＡ）を窒素雰囲気下で−２０℃において保存した。
【００３８】
この方法において、０.９８６ｇのグリセロールを秤量して、先きに記載したように製造したＳＯＣＬＡ１.０ｇとともにガラス容器に入れた。これに、１５０μｌの蒸留水と１００ｍｇのゲオトリカム・カンジダム（Geotrichum candidum）リパーゼを添加した。その反応混合物を３５℃に調整し、窒素下でオービタルシェーカー（２５０ｒｐｍ）により攪拌した。８時間の反応時間の後に試料を取り出し、１６.６％の転化率であることを測定した。高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）により測定した、この反応混合物の部分グリセリド含量は、９.６％のモノグリセリド、３.８％のジグリセリド及び３.２％のトリグリセリドであった。薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）により、モノ−、ジ−及びトリ−グリセリドから未反応の脂肪酸（８３.４％）を分離した。モノグリセリド画分におけるＣＬＡは、６６.８％の、シス９，トランス１１異性体と３３.２％の、トランス１０，シス１２異性体から成ることが見出だされた。ジグリセリド画分におけるＣＬＡは、８０.０％の、シス９，トランス１１異性体と２０.０％の、トランス１０，シス１２異性体から成ることが見出だされた。トリグリセリド画分におけるＣＬＡは、７７.９％の、シス９，トランス11異性体と２２.１％の、トランス１０，シス１２異性体から成ることが見出だされた。遊離脂肪酸画分におけるＣＬＡは、４５.７％の、シス９，トランス１１異性体と５４.３％の、トランス１０，シス１２異性体から成ることが見出だされた。
【００３９】
実施例７：
実施例６に記載したようにＳＯＣＬＡを製造した。脂肪酸メチルエステルのガスクロマトグラフィー分析の結果は下記の通りであった。その生成物は、４８.９％が、シス９，トランス１１異性体であり、そして５１.１％が、トランス１０，シス１２異性体である、６３.８％のＣＬＡを含有していた。
【００４０】
下記の方法により生成物を製造した。グリセロール（４００ｇ）と４０１.５ｇのＳＯＣＬＡを秤量し、ジャケットで水を循環させたガラス反応容器に入れた。これに、４４.４ｇの蒸留水と０.８ｇのカンジダ・ルゴサ（Candida rugosa）リパーゼを添加した。その反応混合物を３５℃に調整し、窒素下で頭上攪拌（２５０ｒｐｍ）により攪拌した。５時間の反応時間後に試料を取り出し、４２％の転化率であることを測定した。その後、反応混合物を８０℃まで加熱することにより反応を停止させた。そのエマルジョンをヘキサンで抽出することにより油相から水性相を分離させた。ヘキサンを回転蒸発（rotary evaporation）により除去した。薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）により、モノ−、ジ−及びトリ−グリセリドから未反応の脂肪酸を分離し、ガスクロマトグラフィーにより分析した。それらのＦＡＭＥ分析の結果を第１ａ表に記載する。分子蒸留により、モノ−、ジ−及びトリ−グリセリドから未反応の脂肪酸（５８％）を分離した。分子蒸留後、その２つの画分についてＦＡＭＥＧＣ及びＨＰＬＣ分析を行った。それらの分析の結果を第１ｂ表に記載する。
【００４１】
実施例８：
ＳＯＣＬＡからＣＬＡトリグリセリドを製造した。ＳＯＣＬＡ（４２８ｇ）、グリセロール（４７ｇ）及び、リゾムコール・ミエヘイ（Rhizomucor miehei）担持リパーゼ（２４ｇ）を含有する再エステル化反応を行った。１・容のジャケット付き容器でその反応を行い、不活性雰囲気下で連続的混合をしながら６０℃に加熱した。試料を規則的な間隔で取り出し、遊離脂肪酸（ＦＦＡ）の含量を測定した。４５.５時間の後に、反応混合物中には、６％しかＦＦＡが残存していなかった。次に、その反応混合物を８０℃に加熱することにより、その反応を停止させた。ワットマンNo. ５４フィルターを用い、濾過により、不活性化リパーゼを除去し、油を回収した。油の試料のＨＰＬＣ分析により、それぞれ５.４％及び１.９％である１，３−ジグリセリド及び１，２−ジグリセリドの低含量の存在が示された。
【００４２】
ＣＬＡトリグリセリドの選択的加水分解により、１０トランス，１２シス異性体に富んだＣＬＡ部分グリセリドを製造した。ＣＬＡトリグリセリド（３９５ｇ）、蒸留水（３９５ｇ）及びカンジダ・ルゴサ（Candida rugosa）リパーゼ（０.８ｇ）を含有する１・容のジャケット付き容器において加水分解反応を行った。不活性雰囲気中で連続的攪拌しながら、その反応混合物を３５℃に加熱し、そしてＦＦＡ分析のために試料を規則的間隔で取り出した。６０％転化率において（１時間１０分後）、８０℃に加熱することにより反応を停止させ、油相と水性相を分離した。油相を回収し、そしてヘキサンで抽出し、次に回転蒸発により溶媒を除去した。油の試料を、ＴＬＣにより成分ＦＦＡ及び部分グリセリド［モノグリセリド（ＭＧ）、ジグリセリド（ＤＧ）及びトリグリセリド（ＴＧ）］に分離し（移動相は、容量で、６０のジエチルエーテル、４０のヘキサン及び１のギ酸から成っていた）、ガスクロマトグラフィー（ＧＣ）により相当するバンドを分析した。その富有化油のＦＡＭＥＧＣ分析を下に記載する。ＨＰＬＣ分析により、１，３−ジグリセリド（６.５％）、１，２−ジグリセリド（５.２％）及びモノグリセリド（１.１％）の存在が示された。
【００４３】
カンジダ・ルゴサ（C. rugosa）リパーゼを用いたＣＬＡトリグリセリドの６０％加水分解の後のＣＬＡ異性体の割合
【表１】

【００４４】
油の分子蒸留により、遊離脂肪酸（１９７ｇ）と部分グリセリド（１２９ｇ）の分離が可能であった。部分グリセリド画分のＦＦＡ分析により、低含量（８.２％）のＦＦＡの存在が示され、そしてＨＰＬＣ分析により、３５.８％のジグリセリド（２０.６％の１，３−ジグリセリド及び１５.２％の１，２−ジグリセリド）並びに０.９％のモノグリセリドの存在が示された。この画分の総合的ＦＡＭＥＧＣ分析により、１０トランス，１２シス−ＣＬＡ異性体の富有化が示された（４６.５％の１０トランス，１２シス異性体及び１９.３％の９シス，１１トランス異性体）。
【００４５】
実施例９：
実施例７において製造されたＣＬＡのシス９，トランス11異性体に富んだ部分グリセリドを再エステル化し、トリグリセリドに富んだ脂肪を生成した。
【００４６】
実施例７において製造された部分グリセリド１１.６ｇを、ヒマワリ油の完全加水分解により製造された遊離脂肪酸６.０３ｇ及びデュオライト（Duolite）上に固定したリゾムコール・ミエヘイ（Rhizomucor miehei）リパーゼ０.５４ｇと混合した。その混合物を、表面に窒素を吹き込んで５５℃において開放ガラスバイアル中で４８時間攪拌した。ＨＰＬＣにより測定された、得られたブレンドの部分グリセリド含量は、７５％のトリグリセリド、１３％のＦＦＡ及び１１.６％のジグリセリドであった。その生成物をアルミナで処理し、残存する遊離脂肪酸を除去した。トリグリセリドは、７４.６％が、シス９，トランス11異性体であり、２５.４％が、トランス１０，シス１２異性体であるＣＬＡを３６.６％含有していた。
【００４７】
実施例１０：
実施例８において製造されたＣＬＡのトランス１０，シス１２異性体に富んだ部分グリセリドを再エステル化し、トリグリセリドに富んだ脂肪を生成した。
【００４８】
実施例８において製造された部分グリセリド１２.６ｇを、ヒマワリ油の完全加水分解により製造された遊離脂肪酸２.０３ｇ及びデュオライト（Duolite）上に固定したリゾムコール・ミエヘイ（Rhizomucor miehei）リパーゼ０.５２ｇと混合した。その混合物を、表面に窒素を吹き込んで５５℃において開放ガラスバイアル中で48時間攪拌した。ＨＰＬＣにより測定された、得られたブレンドの部分グリセリド含量は、８２％のトリグリセリド、１２％のＦＦＡ及び５.６％のジグリセリドであった。その生成物をアルミナで処理し、残存する遊離脂肪酸を除去した。トリグリセリドは、３０.３％が、シス９，トランス１１異性体であり、６９.３％が、トランス１０，シス１２異性体である、ＣＬＡを５６.８％含有していた。
【００４９】
実施例１１：
実施例１において製造されたリノール酸複合体０.５０ｇをヒマワリ油４.５４ｇ、カンジダ・ルゴサ（Candida rugosa）リパーゼ（ＯＦ）０.０９ｇ及び水０.００８ｇと混合した。電磁攪拌機を取り付けたガラスジャケット付き容器中で３０℃において窒素シール下でその混合物を攪拌した。
【００５０】
６時間後、試料を取り出し、すぐに８０℃に加熱し、酵素を不活性化した。塩基性アルミナでの処理により部分グリセリドと遊離脂肪酸を取り出した。残存するトリグリセリドにおける脂肪酸分布をＦＡＭＥＧＣにより測定した。ＣＬＡのトリグリセリド分子への組み込みは、７１.４％が、シス９，トランス１１異性体であり、２８.６％が、トランス１０，シス１２異性体である、２.１％のＣＬＡであった。
【００５１】
実施例１２：
実施例９において記載されたように製造されたシス９，トランス１１異性体に富んだトリグリセリドを本実施例で用いた。シス９，トランス11異性体（Ｃ９Ｔ１１）に富んだトリグリセリドと補足的な脂肪／脂肪ブレンドから成るブレンドを下記の用途のために作った。
【００５２】
【表２】

【００５３】
対照のＮ値の範囲及びブレンドの測定したＮ値を第２表に記載する。
【００５４】
実施例１３：
実施例１０に記載したように調製されたトランス１０，シス１２異性体に富むトリグリセリドを、この実施例に使用した。トランス１０，シス１２異性体（＝Ｔ１０Ｃ１２）に富むトリグリセリド及び補足的な脂肪／脂肪ブレンドで、以下の用途のためにブレンドを製造した。
【００５５】
【表３】

【００５６】
対照のＮ値の範囲及び測定したブレンドのＮ値を、第３表に示す。
【００５７】
実施例１４：
実施例７で製造された、ＣＬＡのシス９，トランス１１異性体に富むグリセリドを混合したスプレッドを、以下の配合に従って調製した。
【００５８】
脂肪相
脂肪ブレンド４０％
ハイモノ（Ｈｙｍｏｎｏ）７８０４０.３％
着色料（２％ β−カロテン）０ . ０２％
合計４０.３２％
水相（ｐＨ５．１へ調整する）
水５６.４４％
スキムミルクパウダー１.５％
ゼラチン（２７０ブルーム（bloom））１.５％
ソルビン酸カリウム０.１５％
クエン酸粉末０ . ０７％
合計５９.６６％
【００５９】
上記の配合の中で、二つの異なる脂肪ブレンドを使用した。対照用の脂肪ブレンドは、ＨＳ／ヒマワリ油が１３／８７であり、本発明の脂肪ブレンドは、デュオライト（Duolite）上に固定された７４ｇのリゾムコール・ミエヘイ（Rhizomucor miehei）を触媒として使用し、実施例７で製造されたシス９，トランス１１ＣＬＡ酸に富むグリセリド７６.７ｇを、ヒマワリ油１４２３ｇでエステル交換することによって調製された。反応は、６０℃において７時間実施された。酵素は、濾過によって除去された。シス９，トランス１１ＣＬＡ酸を含むトリグリセリドに富む、得られた生成物をシリカ処理して部分的なグリセリドを除去し、次に以下のようにハードストックとブレンドした。
【００６０】
−ＨＳ／ｉｎ（ヒマワリ油／Ｃ９Ｔ１１ＣＬＡ）１３／８７。
【００６１】
ｉｎ（ヒマワリ油／Ｃ９Ｔ１１ＣＬＡ）及びハードストックとのブレンドのＦＡＭＥＧＣの結果を第４表に示す。
【００６２】
以下の方法に従って、スプレッドを加工した。
【００６３】
３ｋｇの物質を調製し、そして加工した。
【００６４】
マイミクロボテーター加工ラインを、以下のように設定した。
【００６５】

【００６６】
水相は、必要量の水を約８０℃へ加熱し、次にシルバーソン（Silverson）混合器を使用して、成分に徐々に混合して調製した。必要により２０％乳酸溶液を添加して、系のｐＨを５.１へ調整した。
【００６７】
プレミックスは、プレミックスタンクで脂肪相を撹拌し、次に水相に徐々に添加して調製した。添加が完了すると、ラインへポンプで注入する前に、混合物をさらに５分間撹拌した。加工が安定したら（約２０分）、生成物を貯蔵及び評価のために回収した。
【００６８】
典型的な加工条件は以下の通りであった。
【００６９】
【表４】

【００７０】
対照及びＣＬＡ生成物の両方にこの系を使用し、非常に良好な油の連続する低脂肪スプレッドが製造された。
【００７１】
スプレッドを５日間５℃及び２０℃において貯蔵した後、円錐型針入度計を使用して硬度、電気導電性、及び２ｍｍのスチールロッドを使用しカラー（collar）を成形して生成物の可塑性を評価した。
【００７２】
【表５】

【００７３】
すべてのサンプルは、水の損失の明らかな兆候を示すことなく、防油紙の上に非常に容易に塗布された。
【００７４】
実施例１５：
実施例８で製造された、ＣＬＡのトランス１０，シス１２異性体に富むグリセリドを混合したスプレッドを、以下の配合に従って調製した。
【００７５】
脂肪相
脂肪ブレンド４０％
ハイモノ（Ｈｙｍｏｎｏ）７８０４０.３％
着色料（２％ β−カロテン）０ . ０２％
合計４０.３２％
水相（ｐＨ５.１へ調整する）
水５６.４４％
スキムミルクパウダー１.５％
ゼラチン（２７０ブルーム）１.５％
ソルビン酸カリウム０.１５％
クエン酸粉末０ . ０７％
合計５９.６６％
【００７６】
上記の配合の中で、二つの異なる脂肪ブレンドを使用した。対照用の脂肪ブレンドは、ＨＳ／ヒマワリ油１３／８７であり、本発明の脂肪ブレンドは、ハードストックと、実施例８に記載したように調製されたトランス１０，シス１２異性体に富むグリセリド及びヒマワリ油とのブレンドであって、
−ＨＳ／ヒマワリ油／Ｔ１０Ｃ１２ＣＬＡは１３／８２／５であった。
【００７７】
Ｔ１０Ｃ１２ＣＬＡのＦＡＭＥの結果を第４表に示す。
【００７８】
以下の方法に従って、スプレッドを製造した。
【００７９】
３ｋｇの物質を調製し、そして加工した。
【００８０】
マイクロボテーター加工ラインを、以下のように設定した。
【００８１】

【００８２】
水相は、必要量の水を約８０℃へ加熱し、次にシルバーソン混合器を使用して、成分に徐々に混合して調製した。必要により、２０％乳酸溶液を添加して、系のｐＨを５．１へ調整した。
【００８３】
プレミックスは、プレミックスタンクで脂肪相を撹拌し、次に水相に徐々に添加して調製した。添加が完了すると、ラインへポンプで注入する前に、混合物をさらに５分間撹拌した。加工が安定したら（約２０分）、生成物を貯蔵及び評価のために回収した。
【００８４】
典型的な加工条件は以下の通りであった。
【００８５】
【表６】

【００８６】
対照及びＣＬＡ生成物の両方にこの系を使用し、非常に良好な油の連続する低脂肪スプレッドが製造された。
【００８７】
スプレッドを５日間５℃及び２０℃において貯蔵した後、円錐型針入度計を使用して硬度、電気導電性、及び２ｍｍのスチールロッドを使用しカラーを成形して生成物の可塑性を評価した。
【００８８】
【表７】

【００８９】
すべてのサンプルは、水の損失の明らかな兆候を示すことなく、防油紙の上に非常に容易に塗布された。
【００９０】
実施例１６：
実施例７で製造された、ＣＬＡのシス９，トランス１１異性体に富むグリセリドを混合した農場様式（ranch style）ドレッシングを、以下の配合に従って調製した。
【００９１】

【００９２】
上記の配合において、二種類の異なる液状油を使用した。対照用の液状油はヒマワリ油であり、本発明の液状油は、デュオライト上に固定された７４ｇのリゾムコール・ミエヘイを触媒として使用し、実施例７で製造されたシス９，トランス１１ＣＬＡ酸に富むグリセリド７６.７ｇを、ヒマワリ油１４２３ｇでエステル交換することによって調製した。反応は、６０℃において７時間実施した。酵素は、濾過によって除去された。シス９，トランス１１ＣＬＡ酸を含むトリグリセリドに富む、得られた生成物をシリカ処理して部分的なグリセリドを除去した。
【００９３】
ｉｎ（ヒマワリ油／Ｃ９Ｔ１１ＣＬＡ）のＦＡＭＥの結果を第４表に示す。
一つの大量のバッチの水相を製造し、全てのドレッシングに使用した。初めに、水及びマルトデキストリンを、シルバーソン混合器を使用してブレンドした。完全な混合が起きるまでシルバーソン混合器で撹拌を続けながら、卵黄、キサンタンガム、及びビネガーを連続して添加した。この段階でｐＨ＝３.２５であったので、さらなるｐＨの調整は行わなかった。
【００９４】
シルバーソン混合器を使用して撹拌をしながら、油を徐々に水相へ添加した。全ての油が分散したように見えるまで混合を続けた。次に、ドレッシングを２００ｍｌのプラスチックの滅菌ボトルへ移した。
【００９５】
サンプルの粘度は、１０ｒｐｍで回転する数値４のスピンドルに合わせたブルックフィールド粘度計（Brookfield Viscometer）を使用して測定した。サンプルは、同一の２００ｍｌのプラスチックボトルに充填されたので、粘度を直接相互に比較することが可能である。各サンプルについて、各１分の剪断の間に１分の弛緩を行い、３回の測定の平均をとった。
【００９６】
油滴径分布は、４５ｍｍフィルターを使用して、マルバーンマスターサイザー（Malvern Mastersizer）を使用して測定した。
【００９７】
ドレッシングの評価の結果
【表８】

【００９８】
実施例１７：
実施例８で製造した、ＣＬＡのトランス１０，シス１２異性体に富むグリセリドを混合した農場様式ドレッシングを、以下の配合に従って調製した。
【００９９】

【０１００】
上記の配合において、二種類の異なる液状油を使用した。対照用の液状油はヒマワリ油であり、本発明の液状油は、実施例８に記載したように製造されたトランス１０，シス１２異性体に富むグリセリドと、ヒマワリ油とのブレンドであって、−ヒマワリ油／Ｔ１０Ｃ１２ＣＬＡは９５／５であった。
【０１０１】
Ｔ１０Ｃ１２ＣＬＡのＦＡＭＥの結果を第４表に示す。
【０１０２】
一つの大量のバッチの水相を製造し、全てのドレッシングに使用した。初めに、水及びマルトデキストリンを、シルバーソン混合器を使用してブレンドした。完全な混合が起きるまでシルバーソン混合器で撹拌を続けながら、卵黄、キサンタンガム、及びビネガーを連続して添加した。この段階でｐＨ＝３.２５であったので、さらなるｐＨの調整は行わなかった。
【０１０３】
シルバーソン混合器を使用して撹拌をしながら、油を徐々に水相へ添加した。全ての油が分散したように見えるまで混合を続けた。次に、ドレッシングを２００ｍｌのプラスチックの滅菌ボトルへ移した。
【０１０４】
サンプルの粘度は、１０ｒｐｍで回転するNo.４のスピンドルに合わせたブルックフィールド粘度計（Brookfield Viscometer）を使用して測定した。サンプルは、同一の２００ｍｌのプラスチックボトルに充填されたので、粘度を直接相互に比較することが可能である。各サンプルについて、各１分の剪断の間に１分の弛緩を行い、３回の測定の平均をとった。
【０１０５】
油滴径分布は、４５ｍｍフィルターを使用して、マルバーンマスターサイザー（Malvern Mastersizer）を使用して測定した。
【０１０６】
ドレッシングの評価の結果
【表９】

【０１０７】
実施例１８：
実施例６に記載した方法によって、ＳＯＣＬＡを調製した。脂肪酸メチルエステルのガスクロマトグラフィー分析の結果は以下の通りであった。生成物は、６３.８％のＣＬＡを含み、その４８．９％はシス９，トランス１１異性体であり、５１.１％はトランス１０，シス１２異性体であった。
【０１０８】
ＳＯＣＬＡ脂肪酸を以下のようにしてそのエチルエステルへ転換した。５０ｇのＳＯＣＬＡ脂肪酸を１５０ｍｌの乾燥エタノールと混合し、１０ｍｌの濃塩酸を加えた。混合物を窒素下で２３時間還流し、冷却し、そして塩基性アルミナと撹拌して未反応の遊離脂肪酸を除去した。アルミナを濾去し、反応混合物を水で４回洗浄し、乾燥させた。得られた油（４０ｇ）は９１％エチルエステルであると測定された。
【０１０９】
上記のように調製されたエチルエステルは、以下のように選択的に加水分解された。０.２ｍｇのカンジダ・ルゴサ（Candida rugosa）リパーゼを２ｍｌの蒸留水に溶解し、１ｇのＳＯＣＬＡエチルエステルを混合した。反応温度を３０℃に維持し、混合物を０.５時間激しく振った。混合物をジクロロメタンと石油エーテルの１：１溶液で抽出し、続いてこの溶液を蒸発により除去した。生成物は１９.１％の遊離脂肪酸を含み、薄層クロマトグラフィーによりエチルエステルから分離された。ガスクロマトグラフィー分析は、遊離脂肪酸画分が、４５.６％のシス９ＣＬＡ異性体及び９．７％のトランス１０ＣＬＡ異性体を含むことを示した。
【０１１０】
実施例１９：
実施例６に記載されているようにしてＳＯＣＬＡを調製した。脂肪酸メチルエステルのガスクロマトグラフィー分析の結果は以下の通りであった。生成物は、６３.８％のＣＬＡを含み、その内の４８.９％がシス９，トランス１０異性体であり、５１.１％がトランス１０，シス１２異性体であった。
【０１１１】
ＳＯＣＬＡ脂肪酸を以下のようにしてそれらのメチルエステルに転化した。５０ｇのＳＯＣＬＡ脂肪酸を２００mlの無水メタノールと混合し、それに１０mlの濃ＨＣｌを添加した。混合物を窒素雰囲気下に２６時間還流させ、冷却し、そして塩基性アルミナと共に撹拌して未反応の遊離脂肪酸を除去した。アルミナを濾別し、反応混合物を水で３回洗浄し、乾燥した。得られた油（４０ｇ）は９９％メチルエステルであることが判明した。
【０１１２】
上述のようにして調製されたメチルエステルを以下のようにして選択的に加水分解した：１０mgのカンジダ・ルゴサリパーゼを４mlの蒸留水に溶解し、１ｇのＳＯＣＬＡメチルエステルと混合した。反応温度を３０℃に保持して、混合物を０.７時間激しく振盪した。混合物をジクロロメタンと石油エーテルの１：１の溶液で抽出し、その後蒸発によって溶液を除去した。生成物はメチルエステルから分離された２４.４％の遊離脂肪酸を含んでおり、薄層クロマトグラフィーを使用して回収した。ガスクロマトグラフィー分析は、遊離脂肪酸画分が４６.６％のシス９ＣＬＡ異性体と１０.８％のトランス１０ＣＬＡ異性体を含んでいることを示した。
【０１１３】
実施例２０：
上述の実施例１９に記載されているようにしてＳＯＣＬＡのメチルエステルを調製し、カンジダ・ルゴサリパーゼを使用して選択的に加水分解した。実施例１９に記載されているようにして、１時間の反応後、３８％の遊離脂肪酸を含む反応混合物を抽出し、メチルエステルを遊離脂肪酸から分離し、薄層クロマトグラフィーによって回収した。ガスクロマトグラフィー分析は、メチルエステルが１５.３％のシス９ＣＬＡ異性体と３８.２％のトランス１０ＣＬＡ異性体を含んでいることを示した。
【０１１４】
【表１０】

【０１１５】
【表１１】

【０１１６】
【表１２】

【０１１７】
【表１３】

Claims

脂肪相を含む食品又は動物用飼料であって、当該脂肪相が少なくとも１重量％の共役リノール脂肪酸部分を含む０．３〜９５重量％の有機材料を含み、当該共役リノール酸部分が２つの最も豊富な幾何異性体として少なくとも幾何異性体シス９トランス１１及びトランス１０シス１２リノール酸を重量比率：トランス１０シス１２／シス９トランス１１又はシス９トランス１１／トランス１０シス１２＝１．５〜２０で含み、前記有機材料は、遊離脂肪酸の混合物、ろうエステルの混合物、低級アルキルエステルの混合物、モノグリセリド又はジグリセリド又はトリグリセリド又はモノ−、ジ−、及びトリグリセリドの混合物、又は前記混合物の１種以上の成分の混合物である、食品又は動物用飼料。
重量比率がシス９トランス１１／トランス１０シス１２＝４〜２０である、請求項１に記載の食品又は動物用飼料。
食品が、スプレッド、マーガリン、クリーム、ドレッシング、マヨネーズ、アイスクリーム、ベーカリー製品、乳幼児食、チョコレート、菓子、ソース、コーティング、チーズ、及びスープから成る群から選択される、請求項１または２のいずれかの項に記載の食品。
脂肪相を含む栄養補助食品であって、当該脂肪相が少なくとも１重量％の共役リノール脂肪酸部分を含む０．３〜９５重量％の有機材料を含み、当該共役リノール酸部分が２つの最も豊富な幾何異性体として少なくとも幾何異性体シス９トランス１１及びトランス１０シス１２リノール酸を重量比率：トランス１０シス１２／シス９トランス１１又はシス９トランス１１／トランス１０シス１２＝１．５〜２０で含み、前記有機材料は、遊離脂肪酸の混合物、ろうエステルの混合物、低級アルキルエステルの混合物、モノグリセリド又はジグリセリド又はトリグリセリド又はモノ−、ジ−、及びトリグリセリドの混合物、又は前記混合物の１種以上の成分の混合物であり、経腸又は非経口の用途に適するカプセルの形態である、栄養補助食品。