JP3889456B2 - グリセロリン酸脱水素酵素阻害剤 - Google Patents

Description

【０００１】
【産業上の利用分野】
本発明は、グリセロリン酸脱水素酵素阻害剤に関し、より詳しくは脂肪前駆細胞から脂肪細胞へと分化する時に活性が上昇するグリセロリン酸脱水素酵素を阻害することができるグリセロリン酸脱水素酵素阻害剤に関する。さらにそのグリセロリン酸脱水素酵素阻害剤を含む食品添加物、及びそれらを配合した食品に関する。
【０００２】
【従来技術】
近年、わが国は食生活の欧米化が進み、糖質の摂取量が減り、脂肪、タンパク質の摂取量が増えてきている。それに伴い、肥満という問題が取り上げられるようになってきた。肥満は、高血圧、心臓病、糖尿病などの成人病の原因となるので、健康を維持するためには努力して防止する必要がある。
肥満の成因を考えていく上で、脂肪細胞への分化や脱分化のメカニズムが重要である。１９７４年GREEN らは、マウス胎児由来３Ｔ３線維芽細胞の中から脂肪細胞へと分化するものをクローニングし、細胞株を樹立することに成功し、脂肪前駆細胞から脂肪細胞への分化の課程を生化学的に研究できるようになった（GREEN, H. 等、CELL, VOL.1, 113−116 頁（1974）；CELL, VOL.3, 127−133 頁（1974））。また、Ne'grel らも遺伝性肥満マウス(C57BL/6J ob/ob)の副睾丸脂肪組織より脂肪細胞へと分化する細胞（ob 17)をクローン化した(Ne'grel, R.等、PROC. NATL. ACAD. SCI. USA, VOL.75, p.6054-6058(1978) ）。
これらの細胞を用い生化学的研究が行われ、前駆細胞の時にはほとんど活性が検出されず、脂肪細胞に分化することにより増加する酵素が明らかになってきた。たとえば、グリセロリン酸脱水素酵素、リポプロテインリパーゼ、ジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼなどが報告されているが、特にグリセロリン酸脱水酵素は1,０００倍も酵素活性が上昇するので、分化のマーカー酵素として利用されている。
従って、グリセロリン酸脱水素酵素を阻害することにより脂肪細胞への分化を抑制することが考えられる。また、そのような酵素阻害剤により肥満の治療や予防をすることが考えられる。
さらに、食品にあらかじめ酵素に対する阻害剤を配合しておく方法が考えられている。
グリセロリン酸脱水素酵素に対する阻害剤としては、５−アルキルレゾシノール（特開平６−１００４４０号公報）が知られていて、動物細胞での脂肪蓄積防止効果が明らかにされている。しかしながら、未だ十分な効果は得られていない。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の目的は、グリセロリン酸脱水素酵素に対して優れた阻害活性を示し、かつ安全性の高いグリセロリン酸脱水素酵素阻害剤を提供することである。本発明の目的はまた、上記グリセロリン酸脱水素酵素阻害剤を含む食品添加剤を提供し、さらに、上記グリセロリン酸脱水素酵素阻害剤あるいは食品添加剤を配合した食品を提供することである。
【０００４】
【発明が解決するための手段】
本発明者らは、グリセロリン酸脱水素酵素に対して阻害活性を有する物質を鋭意探求したところ、コレステロール−３−硫酸、ジヒドロコレステロール−３−硫酸及びそれらの塩類が強い阻害活性を示すことを見いだし、本発明を完成するに至った。
従って、本発明は、コレステロール−３−硫酸、ジヒドロコレステロール−３−硫酸及びそれらの塩からなる群から選ばれる少なくとも１種を有効成分として含有するグリセロリン酸脱水素酵素阻害剤である。本発明はまた、上記グリセロリン酸脱水素酵素阻害剤を含有する食品添加物である。本発明はさらに、グリセロリン酸脱水素酵素阻害剤または食品添加物を配合した食品に関する。
【０００５】
本発明に使用するコレステロール−３−硫酸あるいはジヒドロコレステロール−３−硫酸の塩としては、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、バリウム塩及びテトラブチルアンモニウム塩などが挙げられる。
コレステロール−３−硫酸、及びジヒドロコレステロール−３−硫酸は、コレステロールまたは、ジヒドロコレステロールを硫酸化することにより常法に従って合成することができる。またそれらの塩類も常法に従って製造することができる。
コレステロール−３−硫酸は、生体中の各組織に分布し（IWAMORI, M. 等, Biochim ．Biophys. Acta., Vol. 441, 268 −279 頁（1976））、ステロイド合成反応を調節しているとも言われ、３−ヒドロキシ−３−メチルグルタリルＣｏＡレダクターゼ活性を阻害することが知られている（Xu, X. X. 等、J. Biol. Chemy, Vol. 264, 7222−7227頁（1989）；Williams. M. L. 等、Biochim. Biophys. Acta, Vol. 845, 349 −357 頁（1985）) 。
また、ヒト表皮脂質にもコレステロール硫酸が多量検出されることも報告されている（Lampe, M. A., J. Lipid Resy, Vol. 24, 131 −140 頁（1983）；J. Lipid Resy, Vol. 24, 120 −130 頁（1983））。
このようにコレステロール−３−硫酸は生体内で見出されるものであって、極めて毒性の低いものである。
従来、コレステロール−３−硫酸、ジヒドロコレステロール−３−硫酸が、グリセロリン酸脱水素酵素を阻害することは知られていなかった。
本発明に使用するコレステロール−３−硫酸あるいはジヒドロコレステロール−３−硫酸は、市販されているものでもよい。
【０００６】
試験例
グリセロリン酸脱水素酵素阻害活性の測定は、WISE等の方法に準じて、以下のように行った（WISE. L. S. 等、J. BIOL. CHEM., Vol. 254, 273-275 頁(1979)) 。
１cmの角セルに、2.５mMのEDTAを含んだ100 mMのトリエタノール／塩酸バッファー（ｐＨ7.５）1.９７ml、６mMのジヒドロキシアセトンリン酸0.３ml、１mMのβ−メルカプトエタノール0.３ml、1.２mMのＮＡＤＨ 0.３ml及び各濃度の検体溶液0.０３mlを入れよく混合した。
次に、１unit／mlのグリセロリン酸脱水素酵素（シグマ社製）溶液0.１５mlを加え、混合後、３４０nmの吸光度を測定し、１０分後の吸光度より阻害活性を求めた。
その結果、コレステロール−３−硫酸、ジヒドロコレステロール−３−硫酸が、下記表１のように強い阻害活性を示した。５０％阻害濃度はそれぞれ、0.６及び0.４μｇ／ｍｌであった。
【０００７】
【表１】

【０００８】
本発明のグリセロリン酸脱水素酵素阻害剤は、その有効成分であるコレステロール−３−硫酸、ジヒドロコレステロール−３−硫酸及びそれらの塩から選ばれる少なくとも１種の他に添加剤を含んでもよい。またそれらの有効成分は、適当な助剤とともに任意の形態に製剤化して、経口または非経口投与が可能なグリセロリン酸脱水素酵素阻害剤とすることができる。
【０００９】
以下に、本発明のグリセロリン酸脱水素酵素阻害剤の投与方法、投与量及び製剤化の方法を示す。
本発明のグリセロリン酸脱水素酵素阻害剤は、経口及び非経口投与のいずれも使用可能であり、経口投与する場合は、軟・硬カプセル剤又は錠剤、顆粒剤、細粒剤、散剤として投与される。非経口投与する場合は、注射剤、点滴剤及び固体状または懸濁粘稠液状として持続的な粘膜吸収が維持できるように坐薬のような剤型で投与され得るが、局所組織内投与、皮内、皮下、筋肉内及び静脈内注射、局所への塗布、噴霧、坐剤、膀胱内注射などの外用的投与法等も用いることができる。
投与量は、投与方法と、患者の年齢、病状や一般状態等に依って変化し得るが、大人では通常、１日当たり有効成分として0.５〜5,０００mgが適当であり、小人では0.５〜3,０００mgが適当である。
本発明のグリセロリン酸脱水素酵素阻害剤の有効成分の割合は、剤型によって変更され得るが、通常、経口投与されるとき、約0.3 〜１5.０重量％が適当であり、非経口投与されるときは、ほぼ0.０１〜１０重量％が適当である。
また、本発明のグリセロリン酸脱水素酵素阻害剤の製剤化に当たっては、常法に従い、水溶液、油性製剤などにして、皮下あるいは静脈注射用製剤とすることができる他、皮膚などに局所適用する製剤としたり、またカプセル剤、錠剤、細粒剤等の剤型に製剤化して経口用に供することができる。
【００１０】
また、有効成分に長時間の保存に耐える安定性及び耐酸性を付与して薬効を完全に持続させるために、更に医薬的に許容し得る被膜を施して製剤化すれば、すぐれた安定性を有するグリセロリン酸脱水素酵素阻害剤とすることができる。
本発明のグリセロリン酸脱水素酵素阻害剤の製剤化に用いられる界面活性剤、賦形剤、滑沢剤、佐剤及び医薬的に許容し得る被膜形成物質等を挙げれば、次の通りである。
本発明のグリセロリン酸脱水素酵素阻害剤の崩壊、溶出を良好にするために、界面活性剤、例えばアルコール、エステル類、ポリエチレングリコール誘導体、ソルビタンの脂肪酸エステル類、硫酸化脂肪アルコール類等の１種又は２種以上を添加することができる。
また、賦形剤として、例えば、庶糖、乳糖、デンプン、結晶セルロース、マンニット、軽質無水珪酸、アルミン酸マグネシウム、メタ珪酸アルミン酸マグネシウム、合成珪酸アルミニウム、炭酸カルシウム、炭酸水素ナトリウム、リン酸水素カルシウム、カルボキシメチルセルロースカルシウム等の１種又は２種以上を組み合わせて添加することができる。
【００１１】
滑沢剤としては、例えばステアリン酸マグネシウム、タルク、硬化油等を１種または２種以上添加することができ、また矯味剤及び矯臭剤として、食塩、サッカリン、糖、マンニット、オレンジ油、カンゾウエキス、クエン酸、ブドウ糖、メントール、ユーカリ油、リンゴ酸等の甘味剤、香料、着色剤、保存料等を含有させてもよい。
懸濁剤、湿潤剤のような佐剤としては、例えば、ココナッツ油、オリーブ油、ゴマ油、落花生油、乳酸カルシウム、ベニバナ油、大豆リン脂質等を含有させることができる。
また、被膜形成物質としては、セルロース、糖類等の炭水化物誘導体として酢酸フタル酸セルロース（ＣＡＰ）、またアクリル酸系共重合体、二塩基酸モノエステル類等のポリビニル誘導体としてアクリル酸メチル・メタアクリル酸共重合体、メタアクリル酸メチル・メタアクリル酸共重合体が挙げられる。
また、上記被膜形成物質をコーティングするに際し、通常使用されるコーティング剤、例えば可塑剤の他、コーティング操作時の薬剤相互の付着防止のための各種添加剤を添加することによって被膜形成剤の性質を改良したり、コーティング操作をより容易にすることができる。
【００１２】
本発明のグリセロリン酸脱水素酵素阻害剤はまた、食品、健康食品に配合することができ、また食品添加物の成分とすることもできる。食品中に配合する場合は、食品に対して有効成分として0.００１〜１５重量％が適当であり、特に0.０１〜１０重量％配合することが好ましい。
本発明のグリセロリン酸脱水素酵素阻害剤あるいは食品添加物を配合させる食品の種類はいかなるものであってもよく、例えば、パン、麺、ビスケット、ホットケーキ、錠菓等の澱粉含有食品の他、ドレッシング、ドリンク等を挙げることができる。
【００１３】
【実施例】
以下、実施例により本発明をさらに詳しく説明する。
実施例１（錠菓及び錠剤）
卵殻カルシウム108g、ピロリン酸第二鉄2g、アスコルビン酸40g 、微結晶セルロース40g 、還元麦芽糖285g、コレステロール−３−硫酸25g をミキサーによって常法により混和した後、打錠し、錠菓及び錠剤を製造した。
実施例２（ビスケット）
小麦粉120g、コレステロール−３−硫酸1.2g、ジヒドロコレステロール−３−硫酸1.2g、砂糖35g 、ショートニング15g 、全卵粉1.5g、食塩1g、炭酸水素ナトリウム0.6g、炭酸アンモニア0.75g 、水20g を用いて、常法によりドウを作成し、成形、焙焼してビスケットを製造した。
【００１４】
実施例３（パン）
小麦粉3kg 、コレステロール−３−硫酸ナトリウム3g、イースト60g 、イーストフード3g、砂糖150g、食塩60g 、ショートニング150g、脱脂粉乳60g 、水2070g を用いて、常法によりドウを作成し、成形、焙焼してパンを製造した。
実施例４（麺）
準強力小麦粉に対して、１重量％のジヒドロコレステロール−３−硫酸ナトリウム、34重量％の水、１重量％の食塩及び１重量％のかんぷんを加えたものを、１２分間混捏した後、麺機にて数回圧延、成形して、中華麺の生麺帯、生麺線を得た。
【００１５】
【発明の効果】
本発明のグリセロリン酸脱水素酵素阻害剤は、安全性が高く、かつ高いグリセロリン酸脱水素酵素阻害活性を有する。食品に容易に配合することができ、また肥満の予防や治療に有用である。

Claims (3)

1. コレステロール−３−硫酸、ジヒドロコレステロール−３−硫酸及びそれらの塩からなる群から選ばれる少なくとも１種を有効成分として含むグリセロリン酸脱水素酵素阻害剤を含有する食品添加物。
2. コレステロール−３−硫酸、ジヒドロコレステロール−３−硫酸及びそれらの塩からなる群から選ばれる少なくとも１種を有効成分として含むグリセロリン酸脱水素酵素阻害剤を配合した食品。
3. 請求項１記載の食品添加物を含有する食品。