JP3875690B2

JP3875690B2 - 微小動物計数用シート

Info

Publication number: JP3875690B2
Application number: JP2004014975A
Authority: JP
Inventors: 政弘吉田
Original assignee: Hohto Shoji Co Ltd
Current assignee: Hohto Shoji Co Ltd
Priority date: 2004-01-22
Filing date: 2004-01-22
Publication date: 2007-01-31
Anticipated expiration: 2024-01-22
Also published as: JP2005204575A

Description

本発明は微小動物計数用シートに関する。具体的には、カーペットやソファ、畳などに存在しているダニなどの微小動物を捕獲し、微小動物の生息数等を計測するために用いられる捕獲・計数用シートに関する。

喘息などのアレルギー症状を引き起こす原因の一つとして室内のダニが着目されており、アレルギー対策の一環としてダニについての実態調査が望まれるところである。ダニを捕獲するための方法として、粘着シートを用いることは周知の技術である。例えば、特開２００１−７８６４３号公報には、ダニを捕獲した粘着剤層（粘着シート）を疎水コート処理された水溶性色素粒子を含んだ透水性被覆層に押し付けて、押し出されたダニの体液と水溶性色素との反応により生じた発色を肉眼で観察する方法が開示されている。また、特開２００１−３５４５０３号公報には、連続多孔体層の片面に形成された粘着剤層に透明な基材シートを備えたダニ検知捕獲シートが開示されている。前者ではダニ体液との反応による発色を観察し、後者ではダニの体色とコントラストがよい粘着剤層が用いられているために、肉眼によって比較的簡単にダニのみを計測することができる。

しかしながら、アレルギーの原因には生きているダニのみが関与するのではなく、成育過程で生じるダニの脱皮殻やダニの死骸も大きく影響する。したがって、ダニの実態調査を行う際には、環境中に生息するダニのみならず脱皮殼や死骸までも捕捉して計測する必要がある。このために、上記方法では実態調査としては不十分なものである。また、前者の方法では、粘着シートの他に発色させるための透水性被覆層が必要であるし、後者の方法では、支持体として連続多孔体層が必要となるので、両者ともモニタリング費用が高くなるという問題点もある。そこで、粘着シートに捕捉したダニや死骸等を顕微鏡下に観察してそれらの個数を数えることが一般的な方法として採用される。

ところが、顕微鏡観察では既に観察した視野と重ならないように検査対象域を移動させるのは結構困難なことである。時として一個の個体を二重に計数してしまい総数が不正確になるという問題もあった。そして、視野の移動量を決める目標がないので、ステージを移動させた際どれだけの量を移動させたのか分からなくなって、最初から計測をやり直さなければならなくなるという場合もあった。

このように、粘着シートを用いて顕微鏡下で観察してダニ個体数を把握しようとするにはある程度の熟練を必要とし、保健所などにおけるダニのモニタリング事業を行うには観察者が十分に確保できないという状況にある。
特開２００１−７８６４３号公報特開２００１−３５４５０３号公報

本発明は上記従来技術の問題点に鑑みてなされたものであって、本発明の目的とするところは、アレルギーの発生と密接に関係するダニ個体数を確実かつ技術的な困難性なく計測できる計数用シートを提供することにある。

本発明の微小動物計数用シートは、可撓性を有する支持体とその片面に粘着剤層を備えてなる捕獲シートと、当該粘着剤層上に剥離再貼着可能に備えられ当該粘着剤層と同一もしくはそれよりも大きな平面積を有するシート状の透明なカバー材とからなり、検査対象物に圧着して捕獲した死骸を含む微小動物を顕微鏡下で計測するための微小動物計数用シートであって、前記カバー材もしくは捕獲シートに、一区画７ｍｍ四方の格子が設けられたことを特徴としている。

また、本発明の微小動物計数方法は、検査対象物に圧着して捕獲した死骸を含む微小動物を顕微鏡下で計測する微小動物計数方法であって、可撓性を有する支持体とその片面に粘着剤層を備えてなる捕獲シートと、当該粘着剤層上に剥離再貼着可能に備えられ当該粘着剤層と同一もしくはそれよりも大きな平面積を有するシート状の透明なカバー材とからなり、前記カバー材もしくは捕獲シートに、測定対象である微小動物に適した倍率で顕微鏡観察をした場合に、前記格子で区切られた区画の一つが顕微鏡の視野内ほぼ一杯に納まる格子が設けられた微小動物計数用シートを用いることを特徴とするものである。

本発明の微小動物計数用シートによれば、前記カバー材もしくは捕獲シートに、格子が設けられているので、この格子を目印にして区画を一つずつ移動させることができる。したがって、一つ一つの区画を順序よく移動させていけば、計測する領域が重なり合うことなく捕獲シートをくまなく観察し、捕獲されたダニの個体数を精確に数えることができる。

また、測定対象である微小動物に適した倍率において、格子によって区切られた区画の一つが視野内にほぼ一杯に観察されるので、一つの区画が顕微鏡の視野一杯に入るように倍率を調整すれば、観察に適した倍率を知らない場合でも最適な倍率においてダニなどの微小動物を観察できる。また、視野の移動も確実に行えるので、微小動物の計測に熟練を要しない。

そして、格子を７ｍｍ四方に設定するのがよい。７ｍｍ四方とするとよいのは、一般の光学顕微鏡を用いてダニを観察するのに適した倍率（２０倍）にした場合、顕微鏡の視野内に一つの区画が納まるからである。このとき、捕獲シートの捕獲面積（粘着面積）を５０ｃｍ^２（ほぼ９０ｍｍ×５６ｍｍの大きさ）とすれば、顕微鏡のステージに載置できる適度な大きさとなり、一シートの全観察数から単純な計算によって単位面積すなわち１ｍ^２あたりのダニ数に換算できる。

この格子は、捕獲シートに貼着される透明なカバー材全面に設けるのが好ましい。捕獲シートに備える場合に比べて非常に簡単に格子を設けられるからである。また、捕獲シートの端部に非貼着部を設けると、捕獲領域に手を触れることなくダニの捕獲操作ができ、剥離再貼付が簡単に行える。

このように本発明によれば、粘着シートに格子が付されているので、アレルギーの原因物質と考えられているダニの個体数を顕微鏡下で精確にしかも安価にモニタリングすることができる。そして、顕微鏡さえあれば熟練を要せずに精度のよいモニタリング調査が行え、多くの自治体等での実施が容易になる。

以下、図１を参照しながら本発明について詳細に説明する。図１は本発明の一実施形態である微小動物計数用シート１の説明図である。本発明において微小動物とは、通常顕微鏡下において観察する微小生物、主として衛生害虫を意味し、本発明に最も適した微小動物はダニである。

計数用シート１は、ダニを捕獲するための捕獲シート１０と捕獲シート１０を覆う透明なカバー材２０とからなる。捕獲シート１０は、支持体１１の片面に粘着剤層１２を設けたいわゆる粘着シートからなる。支持体１１はいわゆるテープもしくはシート状の紙、布帛、プラスチック材からなり、可撓性を有するものが好適に用いられる。粘着剤層１２は、ダニなどの微小動物を捕獲して支持体１１から剥離、支持体１１に再貼付できるものであればその材質は特段の制約がなく、例えば感圧性接着剤が粘着剤層１２に用いられる。また、粘着剤層１２は好ましくは白色以外に着色されたものが用いられる。その色はダニの体色とコントラストがよくダニを容易に検出できるものであって、例えば、黒や緑などが好ましい。なお、粘着剤層１２をほぼ無色透明なものとして支持体１１にこのような着色を施しても差し支えない。なお、ここで言うダニには、生きているダニのみならず、成育過程で生じた脱皮殻、死骸も含まれる（以下同じ）。

捕獲シート１０はほぼ矩形状とされ、その端部には非貼着部１３が設けられる。図示例では、粘着剤層１２の短辺に沿って帯状の非貼着部１３が設けられている。この非貼着部１３はダニの捕獲時に手で把持するためのものである。非貼着部１３を設けることにより、操作時に粘着面に触れることなく捕獲シート１０を持つことができる。非貼着部１３は、例えば図示例のように、粘着剤層１２の表面に紙などからなる帯状のシート部材１３ａを貼着する、当該箇所に粘着剤を塗布しないなどの方法により形成される。また、非貼着部１３の形状は限られず、手で把持しやすいように例えば支持体１１の一部が耳のように飛び出た形状のものであっても差し支えない。

本発明においては、捕獲シート１０の粘着面の面積は望ましくは約５０ｃｍ^２と設定され、９０ｍｍ×５６ｍｍの矩形が最も望ましい大きさである。この大きさが顕微鏡のステージに載置して捕獲シート１０のほぼ全体が観察できる大きさであると共に計測されたダニ数から単位面積（１平方メートル）当たりへの換算が行いやすいからである。つまり、１枚の計測用シート１を用いて１箇所の測定場所を測定した場合には計測されたダニ数を２００倍、１枚の計測用シート１を用いて１０箇所の測定場所を測定した場合には２０倍すればよい。換算が行いやすくこれ以上大きな面積、例えば１００ｃｍ^２程度にすれば、ステージよりはみ出し、また、観察すべき区画数（面積）が大きくなりすぎる。もちろん、非貼着部１３を除いた大きさである。また、９０ｍｍ×５６ｍｍの大きさであれば、以下に述べるように７ｍｍ四方の格子を設けた場合約１００個の区画ができる。

透明なカバー材２０は例えばプラスチック材料から作製され、好ましくは無色である。計数用シート１は顕微鏡観察に供するものであるので、柔軟なものよりは硬質のものが用いられ、やや可撓性を有するものが好ましい。例えば、ポリプロピレンなどから作製される。厚みは特に限定されるものではないが、ダニの観察上できうる限り薄いものが望ましい。そして、捕獲シート１０がよじれたりしわなく平面に支持できる程度の硬さもしくは厚みが必要である。

透明なカバー材２０には格子２１が設けられる。格子２１の大きさは、格子によって区切られた区画（枠）の一つが、ある倍率にした場合の顕微鏡視野にほぼ一杯に観察される程度の大きさとされる。ある倍率とは、対象とする微小動物の観察に適した倍率であって、ダニの場合であればその倍率は２０倍である。そして、２０倍の倍率となるように対物レンズ接眼レンズを選択して顕微鏡を覗いた場合、格子２１の大きさは、本発明においては、図２（ａ）に示すように、顕微鏡の視野にほぼ１つの区画がすっぽりと入る大きさである。具体的には２０倍の倍率にした場合には、格子２１の大きさは７ｍｍ四方である。つまり、２０倍の倍率にすればほぼ７ｍｍ四方の区画（枠）が視野内に一つ観察されることになる。言い換えると、視野に一つの区画が納まるような倍率に調整するとその倍率は２０倍となり、ダニの観察にちょうど都合のよい倍率となる。したがって、観察者はダニの観察倍率を知らなくても観察にちょうど都合のよい倍率に合わせることができ、顕微鏡を覗いて視野の中に一つの枠がほぼ納まればそのまま観察を行えばよい。なお、本発明において、格子により区切られた区画の一つが顕微鏡の視野内ほぼ一杯に納まるように観察される大きさとは、図２（ａ）に示すように、顕微鏡の視野には一つの区画を観察でき、２つ以上の区画を同時に見られない状態を意味し、観察対象である区画に隣り合った区画の一部が視野に入り込んでも差し支えない。また、区画の４隅が視野を形づくる円形状の枠上にある必要はなく、区画を視野のほぼ中央に位置させることができる大きさであればよい。もちろん、対象動物が異なれば観察するに適した倍率が異なることもあり、それらの場合には格子の大きさは変化する。例えば、ダニよりも小さな微小動物を観察する場合、例えば通常４０倍の倍率で観察するならば、本発明にいう観察に適した倍率は４０倍である。したがって、この場合には格子の大きさを一区画３〜４ｍｍ四方として差し支えない。格子２１は、例えば印刷や刻印等により設けることができるが、その方法は問われない。例えば、図に示すように実線を用いてもよく、また、破線による格子２１とすることができる。格子２１と捕獲シート１０との位置関係は問われず、図２（ｂ）に示すように、捕獲シート１０の端部では一つの区画全体に粘着面が存在しない箇所があってもよい。

このような格子２１を設けることによって、観察場所の移動を確実に行うことができる。すなわち、ステージを動かし区画をひとつずつ移動させて視野を移せば、視野が重ならずしかも読み飛ばしを防き、捕獲された微小動物の数を正確に計数できる。そして、計測した後に当該格子２１内に油性ペンなどでチェックを入れておくと、一旦計測を中断した後再計測を開始する場合においても、どの区画から計数を再開すればよいかがすぐに分かる。

格子２１は、捕獲シート１０、例えば支持体１１の背面に設けることもできるが、好ましくはカバー材２０に設けるのがよい。支持体１１であれば粘着剤層１２の色との組み合わせや粘着剤層１２の透明度を考慮しなければならないが、カバー材２０であれば単純な印刷作業で済む。この格子２１はカバー材２０の全面に設けておくのが好ましい。捕獲シート１０は、一度カバー材２０から剥離されてダニを捕捉した後再びカバー材２０に再貼付されるが、全面に格子２１があればカバー材２０の任意の位置に捕獲シート１０を貼り付けることができる。なお、再貼付の際、粘着面の角と格子２１の角を一致させるように貼り合わせるのが好ましいが、例えば図２（ｂ）に示すように両者が一致しなくとも粘着面全域を計測するので捕獲された総数には影響を与えない。

また、カバー材２０は粘着面とほぼ同じ大きさか、好ましくは粘着面の周囲にいわゆる糊しろを設けるように粘着面よりも大きく作製される。再貼付が容易に行えるからである。糊しろは、おおむね粘着面の周縁から約５ｍｍ程度とされる。上記大きさの場合、カバー材２０は１００×６６ｍｍ程度の大きさとなる。

本発明の計数用シート１は、カバー材２０に捕獲シート１０が貼り合せられた状態で供給される。使用時には捕獲シート１０がカバー材２０から剥がされ、検査対象物（測定場所）、例えばカーペットやソファ、ふとん、毛布、畳などに貼り付けられる。貼り付けられた後は直ちに、もしくはしばらく時間を置いた後に検査対象物から剥がされ、カバー材２０に再び貼り合わせられる。また、通常モニタリングでは、１枚の計測用シート１について複数箇所（ほとんどの場合１０箇所）が対象とされ、カバー材２０への再貼付までに検査対象物への貼付剥離が複数回繰り返される。カバー材２０への再貼付の際、カバー材２０の格子２１のある面ない面いずれに貼り合わせられてもよく、格子２１と多少ゆがんで貼り合わせられてもよい。そして、計数用シート１は光学顕微鏡のステージ上に載置される。観察に際して適当な倍率（ダニの場合２０倍）に調整すれば、一つの区画が顕微鏡の視野にすっぽりと収まる。そして、捕獲シート１０の端にある区画から順序よく観察して区画ごとにダニの存在（一区画に複数のダニがいる場合にはダニの匹数）を確認し、最後に得られたダニの総数（区画数）に２０を掛け合わせた数字が、単位面積（ｍ^２）当たりの検出数として算出される。

このように本発明の微小動物計数シートは、粘着剤層１２の表面に貼り合せられた透明なカバー材２０に、格子で区切られた区画の一つが顕微鏡の視野内にほぼ一杯に納まるように観察される大きさの格子２１が設けられているので、例えばダニを観察する場合、約２０倍に合わせると顕微鏡の視野に一つの区画が観察できる。そして、この格子２１を順序よく観察していくことにより、重複して捕獲されたダニを読み取ったり、観察する場所（区画）を読み飛ばすことなく捕獲されたダニを計数できる。また、一枚のシートの計測している途中で計測を一旦中断した場合であっても、その後計測すべき場所を間違えずに計測を再開できる。また、計測が終わったことの印を格子２１で区切られた区画に入れることにより誤計数を防ぐこともできる。

もちろん、粘着面を一定の面積にして円形、例えば５０ｃｍ^２であれば直径を８ｃｍの捕獲シート１０とすることを排除するものではない。また、観察の補助として、各区画の中心に「＋」の記号を入れることや上記実線による格子２１と格子２１の間に、格子２１と区別可能な細い破線や一点破線を加えることを排除するものでもない。また、本発明は粘着シートに捕捉した微小動物を顕微鏡下で観察する場合を前提とするものであるが、例えば特開２００１−３５４５０３号公報に開示されたように目視観察を前提とする粘着シートを排除するものではない。本発明における格子が目視観察の妨げにはならず、目視観察を前提とする粘着シートを顕微鏡下で観察しても差し支えないからである。

本発明の一実施形態である計数用シートを示す図であって、（ａ）はその平面図、（ｂ）はその側面図である。（ａ）（ｂ）はそれぞれ同上の計数用シートにおける格子と顕微鏡観察における視野との関係を示す図である。

符号の説明

１計数用シート
１０捕獲シート
１１支持体
１２粘着剤層
１３非貼着部
２０カバー材
２１格子

Claims

可撓性を有する支持体とその片面に粘着剤層を備えてなる捕獲シートと、当該粘着剤層上に剥離再貼着可能に備えられ当該粘着剤層と同一もしくはそれよりも大きな平面積を有するシート状の透明なカバー材とからなり、検査対象物に圧着して捕獲した死骸を含む微小動物を顕微鏡下で計測するための微小動物計数用シートであって、前記カバー材もしくは捕獲シートに、一区画７ｍｍ四方の格子が設けられたことを特徴とする微小動物計数用シート。
前記捕獲シートの捕獲面積は、５０ｃｍ ^２であることを特徴とする請求項１に記載の微小動物計数用シート。
前記格子が前記カバー材の全面に設けられたことを特徴とする請求項１又は２のいずれかに記載の微小動物計数用シート。
前記捕獲シートの端部に非貼着部を設けたことを特徴とする請求項１〜３のいずれかに記載の微小動物計数用シート。
前記微小動物はダニであることを特徴とする請求項１〜４のいずれかに記載の微小動物計数用シート。
検査対象物に圧着して捕獲した死骸を含む微小動物を顕微鏡下で計測する微小動物計数方法であって、
可撓性を有する支持体とその片面に粘着剤層を備えてなる捕獲シートと、当該粘着剤層上に剥離再貼着可能に備えられ当該粘着剤層と同一もしくはそれよりも大きな平面積を有するシート状の透明なカバー材とからなり、前記カバー材もしくは捕獲シートに、測定対象である微小動物に適した倍率で顕微鏡観察をした場合に、格子で区切られた区画の一つが顕微鏡の視野内ほぼ一杯に納まる格子が設けられた微小動物計数用シートを用いることを特徴とする微小動物計数方法。
前記測定対象である微小動物はダニであることを特徴とする請求項６に記載の微小動物計数方法。