JP3773148B2 - 虚血性疾患予防、治療剤及び臓器保存剤 - Google Patents

Description

【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、虚血性疾患の予防又は治療剤、および臓器保存剤に関し、さらに詳しくは、特定のアデノシン３’，５’−環状リン酸（以下、ｃＡＭＰという）誘導体を有効成分とする、虚血性疾患予防、治療剤、及び臓器保存剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
近年、活性酸素が生体に対して種々の影響を及ぼしていることが分かってきた。即ち、薬物、金属、虚血−再潅流、ストレスなどの引き金によって生成した活性酸素が、脂質、蛋白質、糖、ＤＮＡなどを攻撃して、様々な病態の形成や増悪を引き起こしている。
最近、虚血性疾患にも活性酸素が関与していることがわかってきており、その病態や疾患として虚血性脳疾患（脳梗塞、脳浮腫など）、虚血性心疾患（心筋梗塞、不整脈、狭心症など）、ショック、あるいは肺酸素中毒、臓器移植障害など多くのものがあげられる。脳梗塞の場合、血栓溶解剤を用いて血液を流れるようにすると、脳出血や脳浮腫などの虚血−再潅流障害が起こることが知られており、これを抑える良い薬は市販されていない。
【０００３】
これらの病態に対して、Ｄ．Ｊ．Ｈｅａｒｓｅらによる、アロプリノールなどのキサンチン酸化酵素阻害剤を用いる試み（Ａｃｔａ Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｓｃａｎｄ．，Ｓｕｐｐｌｙ ５４８巻、６５頁、１９８６年参照）、Ｓ．Ｒ．Ｊｏｌｌｙらによる、スパーオキサイドジスムターゼ（ＳＯＤ）を用いる方法（Ｃｉｒｃ．Ｒｅｓ．，５４巻、２２７頁、１９８４年参照）、ラジカルスカベンジャーを用いる方法（特開平９−６７３２７号参照）、アデノシンやその関連化合物を用いる試み（特開平４−１２４１４３号および特許公報２５０５０８５号参照）がなされているが、半減期の短さ又は効果が不十分であったり、副作用の問題がある。また、臓器移植においても免疫抑制剤の登場に伴う拒絶反応の克服とともに、虚血−再潅流障害の克服が移植後の課題となっている。そして臓器を取り出してから移植までの時間が長いほど虚血状態が長く続くことになり、移植後の臓器障害の度合いも大きくなる。近年この観点から、臓器保存剤として、酸化還元能を有するペプチドの使用（特開平５−１３９９９２号）、あるいは活性酸素抑制組成物の使用（特開平８−２６９０２号参照）などが提案されている。
【０００４】
また、Ｎ⁶，２’−Ｏ−ジブチリルｃＡＭＰなどのｃＡＭＰ誘導体が脳機能改善剤として有効との提案（国際公開番号 ＷＯ ９０／１１０８０参照）があるが、この脳機能改善剤は、脳梗塞などの虚血性疾患の直接（急性期）の予防、治療のためのものではない。つまり、前記のｃＡＭＰ誘導体は、梗塞による心臓や脳の虚血−再潅流障害からの保護ではなく、パーキンソン病による神経症候障害、中枢神経の変成、アルツハイマー病による痴呆症などの脳機能、神経症候障害の改善を試みるものである。また前記提案には、脳梗塞に代表される脳虚血、又は脳出血による脳障害という記述がなされているが、これは上記と同様に、脳梗塞の結果生じた後遺症である脳神経障害の治療に有効であることを示しており、そして前記のｃＡＭＰ誘導体が、前記疾患に通常使用されるイデベノンやホパテン酸カルシウム、ドパミンなどの薬剤に代わるものであるとされている。すなわち、ｃＡＭＰおよびその誘導体が、虚血−再潅流障害などの急性期の虚血性疾患そのものに有効という報告はない。そして、本発明に用いられる多くの化合物は、特開昭６０−２３９４９６号、特開平３−８３９９５号などに記載の公知の化合物であり、そのうちの幾つかは、強心作用を有すること（特開昭６３−２０８５２５号参照）が知られているが、急性期の虚血疾患に対する効果を有することは知られていない。また、臓器保存剤については、Ｎ⁶，２’−Ｏ−ジブチリルｃＡＭＰや８−ブロモｃＡＭＰがその成分の一つとして有用であるとの報告（Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，８８巻，Ｐａｒｔ２，２９１頁，１９９３年参照）があるが、後述する本発明に用いられる化合物がそのような効果を有することは知られていない。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、虚血−再潅流障害により生ずる急性期の疾患、例えば虚血性脳疾患、虚血性心疾患、臓器移植障害などの予防、治療剤、および肺、肝臓、腎臓、心臓などの臓器移植のために摘出された臓器を保存するのに有効な臓器保存剤を提供することを目的としてなされたものである。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、前記課題を達成するために鋭意研究を進めた結果、特定のｃＡＭＰ誘導体が急性期の虚血性疾患の予防、治療剤として、また臓器保護剤として有効であることを見出し、本発明を完成するに至った。
すなわち、本発明は、下記の一般式
【０００７】
【化２】

【０００８】
（式中のＲ₁は、水素原子、炭素数１ないし６のアルキル基、アルキル基の炭素数が１ないし３であるアラルキル基、又はフルフリル基を、Ｒ₂は、水素原子、炭素数が１ないし６のアルキル基、またはアルキル基の炭素数が１ないし３であるアラルキル基を、Ｒ₃は、水素原子、炭素数１ないし６のアルキル基、又はアルキル基の炭素数が１ないしは３であるアラルキル基を、Ｒ₄は、水素原子、アミノ基、低級アルキルアミノ基、低級アルキルチオ基、アラルキルチオ基、又はハロゲン原子を意味し、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃が共に水素原子のとき、Ｒ₄がハロゲン原子となることはなく、またＲ₁、Ｒ₂、Ｒ₃、Ｒ₄が共に同時に水素原子となることはない。また、Ｘは、水素原子、アルカリ金属、アンモニア、アミン類を意味する）
で表されるアデノシン−３’，５’−環状リン酸誘導体の少なくとも一種を有効成分として含有することを特徴とする、虚血性疾患予防、治療剤であり、また、前記のアデノシン−３’，５’−環状リン酸誘導体の少なくとも一種を有効成分として含有することを特徴とする、臓器保存剤である。
以下、本発明について詳細に説明する。
【０００９】
【発明の実施の形態】
本発明の虚血性疾患予防、治療剤および臓器保存剤に用いられる化合物は、前記一般式で表させるｃＡＭＰ誘導体であって、式中のＲ₁は、水素原子、炭素数１ないし６のアルキル基、アルキル基の炭素数が１ないし３であるアラルキル基、又はフルフリル基を示す。Ｒ₁において、炭素数１ないし６のアルキル基としては直鎖状または分岐鎖状のアルキル基であり、例えばメチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基、イソブチル基、ペンチル基、イソペンチル基、ヘキシル基が挙げられ、炭素数が６を超えるときは、本発明の目的を十分に達成することができない（後述のＲ₂、Ｒ₃におけるアルキル基も同様）。また、アルキル基の炭素数が１ないし３であるアラルキル基としては、例えばベンジル基、メチルベンジル基、ハイドロキシベンジル基、アミノベンジル基、クロロベンジル基、ブロモベンジル基、フルオロベンジル基、フェネチル基、フェニルプロピル基などが挙げられる。アルキル基の炭素数が３を超えるときは、本発明の目的を十分に達成することができない（後述のＲ₂、Ｒ₃においても同様）。
【００１０】
また、前記一般式中のＲ₂は、水素原子、炭素数１ないし６のアルキル基、またはアルキル基の炭素数が１ないし３であるアラルキル基を示す。そして、Ｒ₂における炭素数１ないし６のアルキル基としては、例えば前記したＲ₁と同様のアルキル基が挙げられ、またアルキル基の炭素数が１ないし３であるアラルキル基としては、例えば前記したＲ₁と同様のアラルキル基が挙げられる。
【００１１】
また、前記一般式中のＲ₃は、水素原子、炭素数１ないし６のアルキル基、又はアルキル基の炭素数が１ないしは３であるアラルキル基を示し、炭素数１ないし６のアルキル基としては、具体的には前記したＲ₁、Ｒ₂と同様のアルキル基が、また、アルキル基の炭素数が１ないし３であるアラルキル基としては、前記したＲ₁、Ｒ₂と同様のアラルキル基が挙げられる。
【００１２】
また、前記一般式中のＲ₄は、水素原子、アミノ基、低級アルキルアミノ基、低級アルキルチオ基、アラルキルチオ基、又はハロゲン原子を示す。アルキル基が低級アルキル基である前記のアルキルアミノ基としては、例えばメチルアミノ基、ジメチルアミノ基、エチルアミノ基、ジエチルアミノ基、プロピルアミノ基、ジプロピルアミノ基、ブチルアミノ基、ジブチルアミノ基などが挙げられる。また、低級アルキルチオ基としては、例えばメチルチオ基、エチルチオ基、プロピルチオ基、ブチルチオ基などが、またアラルキルチオ基としては、ベンジルチオ基、ハイドロキシベンジルチオ基などが挙げられる。
そして、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃、Ｒ₄が共に同時に水素原子となることはない。
【００１３】
また、一般式中のＸは、水素原子、又はナトリウム、カリウムなどのアルカリ金属、アンモニア、又はトリエチルアミンなどのアミン類を示す。
【００１４】
次いで、本発明に用いられる好適なｃＡＭＰ誘導体の具体例を挙げる。
先ず、一般式中においてＲ₁が、炭素数１ないし６のアルキル基、アルキル基の炭素数が１ないし３であるアラルキル基、又はフルフリル基であり、Ｒ₂、Ｒ₃、Ｒ₄が共に水素原子であるｃＡＭＰ誘導体としては、例えばＮ⁶−エチルｃＡＭＰ、Ｎ⁶−プロピルｃＡＭＰ、Ｎ⁶−ブチルｃＡＭＰ、Ｎ⁶−イソブチルｃＡＭＰ、Ｎ⁶−ペンチルｃＡＭＰ、Ｎ⁶−ヘキシルｃＡＭＰ、Ｎ⁶−ベンジルｃＡＭＰ、Ｎ⁶−フルフリルｃＡＭＰ、Ｎ⁶−クロロベンジルｃＡＭＰ、Ｎ⁶−ハイドロキシベンジルｃＡＭＰ、Ｎ⁶−フェネチルｃＡＭＰ、Ｎ⁶−フェニルプロピルｃＡＭＰなどのＮ⁶−アルキルｃＡＭＰが挙げられる。
【００１５】
また、一般式中において、Ｒ₁、Ｒ₂が、共に炭素数１ないし６のアルキル基、又はアルキル基の炭素数が１ないし３であるアラルキル基であり、Ｒ₃、Ｒ₄が共に水素原子であるｃＡＭＰ誘導体としては、例えばＮ⁶，Ｎ⁶−ジメチルｃＡＭＰ、Ｎ⁶，Ｎ⁶−ジエチルｃＡＭＰ、Ｎ⁶，Ｎ⁶−ジプロピルｃＡＭＰ、Ｎ⁶，Ｎ⁶−ジブチルｃＡＭＰ、Ｎ⁶，Ｎ⁶−ジペンチルｃＡＭＰ、Ｎ⁶，Ｎ⁶−ジヘキシルｃＡＭＰ、Ｎ⁶，Ｎ⁶−ジベンジルｃＡＭＰ、Ｎ⁶，Ｎ⁶−ジメチルベンジルｃＡＭＰ、Ｎ⁶，Ｎ⁶−ジクロロベンジルｃＡＭＰ、Ｎ⁶，Ｎ⁶−ハイドロキシベンジルｃＡＭＰ、Ｎ⁶，Ｎ⁶−ジフェネチルｃＡＭＰ、Ｎ⁶，Ｎ⁶−ジフェニルプロピルｃＡＭＰなどのＮ⁶，Ｎ⁶−ジアルキルｃＡＭＰが挙げられる。
【００１６】
また、一般式中において、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃が同一で、同時に炭素数１ないし６のアルキル基、又はアルキル基の炭素数が１ないし３であるアラルキル基であり、Ｒ₄が水素原子であるｃＡＭＰ誘導体としては、例えばＮ⁶，Ｎ⁶，２’−Ｏ−トリエチルｃＡＭＰ、Ｎ⁶，Ｎ⁶，２’−Ｏ−トリプロピルｃＡＭＰ、Ｎ⁶，Ｎ⁶，２’−Ｏ−トリブチルｃＡＭＰ、Ｎ⁶，Ｎ⁶，２’−Ｏ−トリペンチルｃＡＭＰ、Ｎ⁶，Ｎ⁶，２’−Ｏ−トリヘキシルｃＡＭＰ、Ｎ⁶，Ｎ⁶，２’−Ｏ−トリベンジルｃＡＭＰ、Ｎ⁶，Ｎ⁶，２’−Ｏ−トリフェネチルｃＡＭＰ、Ｎ⁶，Ｎ⁶，２’−Ｏ−トリフェニルプロピルｃＡＭＰなどのＮ⁶，Ｎ⁶，２’−Ｏ−トリアルキルｃＡＭＰが挙げられる。
【００１７】
また、一般式中において、Ｒ₁、Ｒ₃が同一で、炭素数１ないし６のアルキル基であり、Ｒ₂、Ｒ₄が共に水素原子であるｃＡＭＰ誘導体としては、例えばＮ⁶，２’−Ｏ−ジメチルｃＡＭＰ、Ｎ⁶，２’−Ｏ−ジエチルｃＡＭＰ、Ｎ⁶，２’−Ｏ−ジプロピルｃＡＭＰ、Ｎ⁶，２’−Ｏ−ジブチルｃＡＭＰ、Ｎ⁶，２’−Ｏ−ジイソブチルｃＡＭＰ、Ｎ⁶，２’−Ｏ−ジペンチルｃＡＭＰ、Ｎ⁶，２’−Ｏ−ジヘキシルｃＡＭＰなどのＮ⁶，２’−Ｏ−ジアルキルｃＡＭＰが挙げられる。
【００１８】
また、一般式中において、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃が、共に水素原子であり、Ｒ₄がアミノ基又は低級アルキルアミノ基であるｃＡＭＰ誘導体としては、例えば８−アミノｃＡＭＰ、８−メチルアミノｃＡＭＰ、８−ジメチルアミノｃＡＭＰ、８−エチルアミノｃＡＭＰ、８−ジエチルアミノｃＡＭＰ、８−プロピルアミノｃＡＭＰ、８−ジプロピルアミノｃＡＭＰ、８−ブチルアミノｃＡＭＰなどの８−アミノｃＡＭＰ又は８−アルキルアミノｃＡＭＰが挙げられる。
【００１９】
また、一般式中において、Ｒ₁が、炭素数１ないし６のアルキル基又はベンジル基であり、Ｒ₂、Ｒ₃が共に水素原子であり、Ｒ₄が低級アルキルアミノ基、低級アルキルチオ基、アラルキルチオ基、又はハロゲン原子であるｃＡＭＰ誘導体としては、例えばＮ⁶−ブチル−８−ベンジルチオｃＡＭＰ、Ｎ⁶−ペンチル−８−ブロモｃＡＭＰ、Ｎ⁶−プロピル−８−ベンジルチオｃＡＭＰ、Ｎ⁶−ヘキシル−８−クロロｃＡＭＰ、Ｎ⁶−ブチル−８−エチルチオｃＡＭＰ、Ｎ⁶−エチル−８−プロピルアミノｃＡＭＰなどのＮ⁶−アルキル−８−置換ｃＡＭＰが挙げられる。
【００２０】
前記したこれらｃＡＭＰ誘導体は、虚血性浮腫に対して強い抑制作用を有するので、虚血による疾患（虚血性脳疾患、虚血性心疾患、虚血−再潅流障害、臓器移植時の障害）の予防、治療剤として、あるいは臓器移植の際の虚血状態にある臓器の保存剤としても有効に用いられる。
【００２１】
本発明に用いられるｃＡＭＰ誘導体（以下、本ｃＡＭＰ誘導体ということがある）の１種又は２種以上を含有させて脳梗塞、脳浮腫、心筋梗塞、不整脈、狭心症などの虚血性疾患予防、治療剤として投与する場合、内服薬あるいは注射薬として用いるのが好ましい。内服薬として用いる場合は、錠剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤、シロップ剤などとして、経口投与してもよいし、また直腸投与のために座剤の形でも投与できる。経口投与の場合は、本ｃＡＭＰ誘導体に、薬理学的に許容される添加物、すなわち賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、着色剤、保存剤などを加えることが出来る。また非経口投与の場合には、例えば注射剤の形で使用され、注射剤としては無菌の水性または非水性の溶液剤、懸濁剤、乳濁剤などが含まれる。更に、必要に応じて防腐剤、乳化剤、分散剤、安定化剤、溶解補助剤等を添加しても良い。またこれを通常の無菌化処理した後、凍結乾燥などにより個体組成物として、使用直前に滅菌液体を加えて使用することもできる。
本発明の虚血性疾患予防、治療剤を投与する場合は、症状の程度、年齢、体重により異なるが、経口投与の場合、一般に成人一日当たり本ｃＡＭＰ誘導体を０．０１〜４００ｍｇ／ｋｇ、好ましくは０．５〜１００ｍｇ／ｋｇを１〜数回に分けて、また非経口投与の場合には０．００１〜１００ｍｇ／ｋｇ、好ましくは０．０１〜５０ｍｇ／ｋｇを１〜数回に分けて投与するのが好ましい。
【００２２】
また、本ｃＡＭＰ誘導体の１種または２種以上を有効成分として含有させて臓器移植時の臓器保存剤として使用する場合は、これを液体に溶解するか、又はその凍結乾燥などにより個体組成物とし、使用直前に滅菌液体を加えて使用する。この保存剤を保存液の形態で用いる場合には、例えば生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水、クエン酸緩衝など生理的に許容される緩衝液や等張化液などに、本ｃＡＭＰ誘導体を溶解して調製することが出来る。
また好ましくは、従来より移植用臓器の保存液として用いられているユーロコリンズ（Ｅｕｒｏ−ｃｏｌｌｉｎｓ）液やユニバーシティ オブ ウイスコンシン（ＵＷ）液などに、本ｃＡＭＰ誘導体の必要量を添加して調製することが出来る。
臓器保存剤として使用する場合は、本ｃＡＭＰ誘導体を０．０１〜１００ｍＭ好ましくは０．１〜３０ｍＭとするのがよい。
【００２３】
これらｃＡＭＰ誘導体を得るには、その製造方法は特に限定されず、どの様な方法でもよく、例えばＮ⁶−アルキルｃＡＭＰ誘導体は、特開昭６０−２３９４９６号に記載の方法に従い、ｃＡＭＰと対応するアルデヒドと還元剤を用いる還元アルキル化反応により、また、Ｎ⁶，Ｎ⁶−ジアルキルｃＡＭＰ誘導体は、特開平３−８３９９５号に記載の方法に従い、２’−Ｏ−トシルｃＡＭＰをＮａＨ存在下、ハロゲン化アルキルで処理した後、アルカリ水溶液中で脱保護することにより得られる。また、Ｎ⁶，Ｎ⁶，２’−Ｏ−トリアルキルｃＡＭＰ誘導体は、特公平７−６４８６８号に記載の方法に従い、ｃＡＭＰをＮａＨ存在下、ハロゲン化アルキルと反応させることにより、また、Ｎ⁶，２’Ｏ−ジアルキルｃＡＭＰは特公告７−１１６２１３号に記載の方法に従い、ｃＡＭＰをナトリウムメトキサイド存在下、ハロゲン化アルキルと反応させることにより得られる。また８−置換ｃＡＭＰ誘導体は、Ｍｕｎｅｙａｍａらの方法（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、１０巻、２３９０頁、１９７１年参照）により、さらにまた、Ｎ⁶−アルキル−８−置換ｃＡＭＰ誘導体は、Ｃｈｅｍｉｃａｌ ａｎｄ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｂｕｌｌｅｔｉｎ，３６巻、２２１２頁、１９８８年、に記載の方法を用いるか又は応用し、８置換ｃＡＭＰと対応するアルデヒドと還元剤を用いる還元アルキル化反応により得ることが出来る。
【００２４】
【実施例】
以下に、参考例、実験例、実施例を挙げてさらに詳細に説明するが、本発明は、これらの例によって限定されるものではない。
参考例１（Ｎ⁶−プロピルｃＡＭＰの製造）
ｃＡＭＰのトリブチルアミン塩５．０ｇを酢酸１００ｍｌに溶解し、プロピオンアルデヒド５．８ｍｌを添加し、５０℃に加熱下で撹拌した。次いでシアノ水素化ほう素ナトリウム２．５ｇを含んだジメチルホルムアミド６ｍｌを加え、５時間撹拌した。反応混合物に少量の水を加え、溶媒を減圧留去したのち、残査を少量の水に溶解し、塩酸でｐＨ２に調整し、活性炭カラムに吸着させ、水洗後、メタノール／水／２８％水酸化アンモニウム（容量比１０：１０：１）で溶出する区分を減圧乾固した。残査をｐｒｅｐ．ＴＬＣ（メタノール／クロロホルム；容量比３５：６５）で精製した。得られた無色固体に水−メタノール、２Ｎ−ＮａＯＨを添加して溶解し、２Ｎ塩酸でｐＨ２に調整して目的の化合物Ｎ⁶−プロピルｃＡＭＰ２．４ｇを得た。

【００２５】
参考例２（Ｎ⁶−ブチルｃＡＭＰの製造）
ｃＡＭＰのトリブチルアミン塩５．０ｇを酢酸１００ｍｌに溶解し、ブチルアルデヒド８．７ｍｌを添加し、５０℃に加熱下、撹拌した。次いでシアノ水素化ほう素ナトリウム２．５ｇを含んだジメチルホルムアミド６ｍｌを加え、６時間撹拌した。次いで、参考例１に示したと同様の後処理をして、無色粉状の目的の化合物Ｎ⁶−ブチルｃＡＭＰ２．８ｇを得た。

【００２６】
参考例３（Ｎ⁶−イソブチルｃＡＭＰの製造）
ｃＡＭＰのトリブチルアミン塩５．０ｇを酢酸１００ｍｌに溶解し、イソブチルアルデヒド７．１ｍｌを添加し、５０℃に加熱下で撹拌した。次いでシアノ水素化ほう素ナトリウム２．５ｇを含んだジメチルホルムアミド６ｍｌを加え、５時間撹拌した。参考例１に示したと同様の後処理をして、目的の化合物Ｎ⁶−イソブチルｃＡＭＰ１．６ｇを得た。

【００２７】
参考例４（Ｎ⁶−ペンチルｃＡＭＰの製造）
ｃＡＭＰのトリブチルアミン塩５．０ｇを酢酸１００ｍｌに溶解し、バレルアルデヒド１０．６ ｍｌを添加し、５０℃に加熱下で撹拌した。次いでシアノ水素化ほう素ナトリウム３．１ｇを含んだジメチルホルムアミド６ｍｌを加え、８時間撹拌した。次いで参考例１に示したと同様の後処理をして、目的の化合物Ｎ⁶−ペンチルｃＡＭＰ１．８ｇを得た。

【００２８】
参考例５（Ｎ⁶−ヘキシルｃＡＭＰの製造）
ｃＡＭＰのトリブチルアミン塩５．０ｇを酢酸１００ｍｌに溶解し、カプロアルデヒド１２ｍｌを添加し、５０℃に加熱下で撹拌した。次いでシアノ水素化ほう素ナトリウム２．５ｇを含んだジメチルホルムアミド６ｍｌを加え、６時間撹拌した。次いで参考例１に示したと同様の後処理をして、Ｎ⁶−ヘキシルｃＡＭＰ２．６ｇを得た（なお、後述の動物試験には、０．２Ｎ ＮａＯＨで中和して得たＮ⁶−ヘキシルｃＡＭＰのＮａ塩を使用した）。

【００２９】
参考例６（Ｎ⁶−ベンジルｃＡＭＰの製造）
ｃＡＭＰのトリブチルアミン塩 ５．０ｇを酢酸１００ｍｌに溶解し、ヘプチルアルデヒド１０．２ｍｌを添加し、５０℃に加熱下で撹拌した。次いでシアノ水素化ほう素ナトリウム３．１ｇを含んだジメチルホルムアミド６ｍｌを加え、８時間撹拌した。次いで参考例１に示したと同様の後処理をして、無色粉状の目的の化合物Ｎ⁶−ベンジルｃＡＭＰ２．２ｇを得た。

【００３０】
参考例７（Ｎ⁶−フルフリルｃＡＭＰの製造）
ｃＡＭＰのトリブチルアミン塩５．０ｇを酢酸１００ｍｌに溶解し、フルフラ−ル８．４ｍｌを添加し、５０℃に加熱下で撹拌した。次いでシアノ水素化ほう素ナトリウム２．５ｇを含んだジメチルホルムアミド６ｍｌを加え、８時間撹拌した。次いで参考例１に示したと同様の後処理をして、無色粉状の目的の化合物Ｎ⁶−フルフリルｃＡＭＰ２．３ｇを得た。なお、元素分析には、Ｎａ塩を調製し、測定した。

【００３１】
参考例８（Ｎ⁶，Ｎ⁶−ジブチルｃＡＭＰの製造）
（１）２’−Ｏ−トシルｃＡＭＰの合成
ｃＡＭＰ（３２．９ｇ）の水酸化ナトリウム（１１ｇ）水溶液（２００ｍｌ）にトシルクロライド（８６ｇ）のジオキサン（６００ｍｌ）溶液を加え、室温下で一晩撹拌した。生成した沈殿をろ取し、ジオキサン洗浄し、乾燥して２’−Ｏ−トシルｃＡＭＰ３９ｇを得た。

（２）Ｎ⁶，Ｎ⁶−ジブチルｃＡＭＰの製造
前記のごとくして得た２’−Ｏ−トシルｃＡＭＰ（２．０ｇ）のジメチルスルホキサイド（２０ｍｌ）溶液に、水素化ナトリウム（６６０ｍｇ）、ブチルブロマイド（１．８ｍｌ）を添加し、室温下、２日間撹拌した。反応液にメタノール／水（６０ｍｌ：６０ｍｌ）、２Ｎ水酸化ナトリウム（１４ｍｌ）を加え、室温下で一日撹拌した。その後、濃塩酸で中和、溶媒留去後、残査を水に溶解し、２Ｎ塩酸でｐＨ２に調整し、活性炭カラムに吸着させ、水で洗浄し、エタノール／水／２８％水酸化アンモニウム（容量比１０：１０：１）で溶出する区分を減圧乾固した。残査を少量のメタノールに溶解し、２Ｎ塩酸でｐＨ２に調整し、ｐｒｅｐ ＴＬＣ（メタノール／クロロホルム；容量比３：７）で精製し、目的とするＮ⁶，Ｎ⁶−ジブチルｃＡＭＰ１．２６ｇを得た。

【００３２】
参考例９（Ｎ⁶，Ｎ⁶−ジペンチルｃＡＭＰの製造）
参考例８に示したと同様の方法でおこなった。すなわち、２’−Ｏ−トシルｃＡＭＰ（２．０ｇ）のジメチルスルホキサイド（２０ｍｌ）溶液に水素化ナトリウム（６６０ｍｇ）、ペンチルブロマイド（２．３ｍｌ）を添加し、室温下で２日間反応させた。この反応液にメタノール／水（３０ｍｌ：７０ｍｌ）、２Ｎ水酸化ナトリウム（１４ｍｌ）を加え、室温下で３日撹拌した。次いで参考例８の（２）と同様の後処理をして目的化合物のＮ⁶，Ｎ⁶−ジペンチルｃＡＭＰを０．９３４ｇ得た。

【００３３】
参考例１０（Ｎ⁶，Ｎ⁶−ジベンジルｃＡＭＰの製造）
参考例８に示したと同様の方法でおこなった。すなわち、２’−Ｏ−トシルｃＡＭＰ（２．０ｇ）のジメチルスルホキサイド（２０ｍｌ）溶液に水素化ナトリウム（７３０ｍｇ）、ベンジルブロマイド（２．６ｍｌ）を添加し、室温下で７時間反応させた。この反応液にメタノール／水（３０ｍｌ：７０ｍｌ）、２Ｎ水酸化ナトリウム（１３ｍｌ）を加え、室温下で２日撹拌した。次いで参考例８−（２）と同様の後処理をして目的化合物のＮ⁶，Ｎ⁶−ジベンジルｃＡＭＰを０．７７３ｇ得た。

【００３４】
参考例１１（Ｎ⁶，Ｎ⁶，２’−Ｏ−トリエチルｃＡＭＰの製造）
ｃＡＭＰトリブチルアミン塩（２．１ｇ）のジメチルスルホキサイド（２０ｍｌ）溶液に水素化ナトリウム（８００ｍｇ）、エチルブロマイド（２．１ｍｌ）を添加し、室温下で８時間撹拌した。反応液を２Ｎ塩酸でｐＨ２に調整した後、溶媒を減圧留去した。残留する油状物質にベンゼン（５０ｍｌ）を加えて溶解し、水１５０ｍｌ／回で４回洗浄した。ベンゼン層を分取し、無水硫酸ナトリウム乾燥後、減圧乾固した。得られた残査を少量のメタノールに溶解し、ｐｒｅｐ．ＴＬＣ（メタノール／クロロホルム；容量比１：４）にて精製し、目的化合物のＮ⁶，Ｎ⁶，２’−Ｏ−トリエチルｃＡＭＰを０．９６ｇ得た。

なお、動物試験にはこの化合物を０．２Ｎ ＮａＯＨで中和してＮａ塩としたものを使用した。
【００３５】
参考例１２（Ｎ⁶，Ｎ⁶，２’−Ｏ−トリブチルｃＡＭＰの製造）
ｃＡＭＰトリブチルアミン塩（２．１ｇ）のジメチルスルホキサイド（２０ｍｌ）溶液に水素化ナトリウム（８００ｍｇ）、ブチルブロマイド（２．１ｍｌ）を添加し、室温下で１日間撹拌した。次いで参考例１１と同様に後処理し、目的化合物のＮ⁶，Ｎ⁶，２’−Ｏ−トリブチルｃＡＭＰ０．９４ｇを得た。
なお、動物試験にはこの化合物を０．２Ｎ ＮａＯＨで中和してＮａ塩としたもの使用した。

【００３６】
参考例１３（Ｎ⁶，２’−Ｏ−ジブチルｃＡＭＰの製造）
ｃＡＭＰトリブチルアミン塩（３．１ｇ）のジメチルスルホキサイド（５０ｍｌ）溶液に、２８％ナトリウムメトキサイド（２５．６ｍｌ）、ブチルブロマイド（１０．３ｍｌ）を添加し、室温下で１日間撹拌した。この反応液を２Ｎ塩酸で中和した後、溶媒を減圧留去した。残査を少量の水に溶解し、２Ｎ塩酸でｐＨ２に調整した後、活性炭カラムに吸着させ、水で洗浄後、エタノ−ル／水／２８％水酸化アンモニウム（容量比１０；１０：１）で溶出する区分を減圧乾固した。得られた残査を少量のメタノールに溶解し、２Ｎ塩酸でｐＨ２に調整、ｐｒｅｐ．ＴＬＣ（メタノール／クロロホルム；容量比３：７）にて精製し、目的化合物であるＮ⁶，２’−Ｏ−ジブチルｃＡＭＰを０．５４ｇ得た。

【００３７】
参考例１４（８−ジメチルアミノｃＡＭＰの製造）
Ｍｕｎｅｙａｍａらの方法（バイオケミストリー、１０巻、２３９０頁、１９７１年参照）で合成した。すなわち、８−ブロモｃＡＭＰ３ｇのメタノール（２０ｍｌ）溶液に、ジメチルアミン（１８ｍｌ）を添加し、一晩加熱還流した。溶媒を留去した後、残査をシリカゲルカラム（３０ｇ）に添付し、クロロホルム−メタノール（容量比３：１）で洗浄後、メタノールで溶出し、目的化合物を含む区分を減圧乾固した。得られた残査を水より再結晶して目的の化合物８−ジメチルアミノｃＡＭＰ２．１ｇを得た。

【００３８】
参考例１５（Ｎ⁶−ブチル−８−ベンジルチオｃＡＭＰの製造）
前記したＭｕｎｅｙａｍａらの方法で合成した８−ベンジルチオｃＡＭＰのトリブチルアミン塩３．２ｇを酢酸１００ ｍｌに溶解し、ブチルアルデヒド３．４ｍｌを添加し、室温下で撹拌した。次いでシアノ水素化ほう素ナトリウム１．４ｇを含んだジメチルホルムアミド６ｍｌを加え、４時間撹拌した。次いで参考例１と同様の後処理をして無色粉状の目的化合物のＮ⁶−ブチル−８−ベンジルチオｃＡＭＰ２．１ｇを得た。

【００３９】
参考例１６（Ｎ⁶−ペンチル−８−ブロモｃＡＭＰの製造）
８−ブロモｃＡＭＰのトリブチルアミン塩２．７ｇを酢酸１００ｍｌに溶解し、バレルアルデヒド８．５ｍｌを添加し、室温下で撹拌した。次いでシアノ水素化ほう素ナトリウム１．８ｇを含んだジメチルホルムアミド６ｍｌを加え、６時間撹拌した。参考例１と同様の後処理をして無色粉状の目的とする化合物のＮ⁶−ペンチル−８−ブロモｃＡＭＰ１．８ｇを得た。

【００４０】
実験例１（急性毒性試験）
表１に示す各ｃＡＭＰ誘導体を生理食塩水に溶解し、５週齢のＩＣＲ系マウス（雌５匹／群）に腹腔内投与してＬＤ₅₀を求めた。その結果を表１に示す。
【００４１】
【表１】
表１

なお、表１に示した各ｃＡＭＰ誘導体は、参考例１、２、６、７、８及び１５に記載したと同様にして得たものである。
【００４２】
実施例１（虚血性浮腫に対する抑制試験）
７〜８週齢のｄｄｙ雄性マウスを用い、表２に示す各被検物質を虚血する３０分前に投与した。なお、対照には生理食塩水を投与した。
浮腫抑制試験は、マウス右後足に輪ゴム（直径４２ｍｍ）で縛り、虚血状態とした。２０分後に輪ゴムを取り除き血流を再開させたときの浮腫の程度を調べることによって行なった。浮腫の程度は、再潅流２０分後に、ＯＺＡＫＩ ＭＦＧ．ＣＯ．，ＬＴＤ社製の「ｄｉａｌ ｔｈｉｃｋｎｅｓｓ ｇａｇｅ Ｇ ＭＩＣＲＯ Ｇ−１Ｍ」を用いて、右足の厚さ（ｍｍ）を測定することで数値化した。
被検物質は、生理食塩水に溶解し、これを１０ｍｇ／ｋｇ投与量で静脈内投与した。なお、生理食塩水に溶解しにくい化合物については腹腔内投与した。浮腫抑制率（％）は、Ａ；被検物質投与における虚血前の足の厚さ（ｍｍ）、Ｂ；被検物質投与における再潅流後２０分の足の厚さ（ｍｍ）、Ｃ；対照の虚血前の足の厚さ（ｍｍ）、Ｄ；対照の再潅流後２０分の足の厚さ（ｍｍ）を測定し、測定したＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄから、｛１−（Ｂ−Ａ）÷（Ｄ−Ｃ）｝×１００の計算によって求めた。
このようにして求めた各被検物質の浮腫抑制率（％）を表２に示す。
【００４３】

表中の−は、活性なしを表す。
なお、表２中のＮｏ．１〜１６に示す各ｃＡＭＰ誘導体は、それぞれ前記参考例１〜１６に記載したと同様の方法で得たものである。
【００４４】
表２に示したように、本発明に用いられるｃＡＭＰ誘導体は、いずれも虚血性浮腫に対して強い抑制作用を有することが確認された。一方ｃＡＭＰ、８−ブロモｃＡＭＰ、アシル誘導体であるＮ⁶，２’−Ｏ−ジブチリルｃＡＭＰ、さらにはｃＡＭＰ類似化合物であるアデノシンなどには殆ど活性がないか、あっても非常に弱いものであり、本発明に用いられるｃＡＭＰ誘導体が、虚血性浮腫に対し優れた抑制作用を有することがわかる。
よって本発明化合物は、虚血による疾患（虚血性脳疾患、虚血性心疾患、虚血−再潅流障害など）の予防、治療として、そして臓器移植用の臓器が保存されている状態においては、その臓器はまさに虚血状態であるので、本ｃＡＭＰ誘導体は、臓器保存効果が知られているＮ⁶，２’−ジブチリルｃＡＭＰ、８−ブロモｃＡＭＰよりも優れた効果を示し、臓器保存剤としても有用である。
【００４５】
実施例２（アンプル型の虚血性疾患予防、治療剤）
Ｎ⁶−ブチルｃＡＭＰ９ｇを注射用蒸留水３００ｍｌに溶解し、無菌ろ過した後、アンプルに３ｍｌづつ充填し、アンプル型の非経口投与用の虚血性疾患予防、治療剤を調製した。なお、使用したＮ⁶−ブチルｃＡＭＰは、参考例２に記載したと同様の方法で得たものである。
【００４６】
実施例３（アンプル型の虚血性疾患予防、治療剤）
Ｎ⁶−ベンジルｃＡＭＰ３ｇを、注射用蒸留水３００ｍｌに溶解し、無菌ろ過した後、アンプルに２ｍｌづつ充填し、アンプル型の非経口投与用の虚血性疾患予防、治療剤を調製した。なお、使用したＮ⁶−ベンジルｃＡＭＰは、参考例６に記載したと同様の方法で得たものである。
【００４７】
実施例４（カプセルタイプの虚血性疾患予防、治療剤）
組成成分；
Ｎ⁶−ペンチルｃＡＭＰ ２５０ｇ
バレイショ澱粉 １５０ｇ
軽質無水ケイ酸 ５０ｇ
ステアリン酸マグネシウム １０ｇ
乳糖 ５４０ｇ
上記組成成分を均一に混合し、硬質カプセルに５００ｍｇづつ充填して経口投与用のカプセルタイプの虚血性疾患予防、治療剤を調製した。
なお、使用したＮ⁶−ペンチルｃＡＭＰは、参考例４に記載したと同様の方法で得たものである。
【００４８】
実施例５（錠剤型の虚血性疾患予防、治療剤）
組成成分；
Ｎ⁶−ブチル−８−ベンジルチオｃＡＭＰＮａ ４００ｇ
バレイショ澱粉 １５０ｇ
結晶セルロース ６０ｇ
軽質無水ケイ酸 ５０ｇ
ヒドロキシプロピルセルロース ３０ｇ
ステアリン酸マグネシウム １５ｇ
乳糖 ２９５ｇ
上記のＮ⁶−ブチル−８−ベンジルチオｃＡＭＰＮａ、乳糖、バレイショ澱粉、結晶セルロースおよび軽質無水ケイ酸を混合し、ヒドロキシプロピルセルロースの１０％エタノール溶液を加えて練合、造粒して径０．８ｍｍのスクリーンで押し出して顆粒を調製し、乾燥した後にステアリン酸マグネシウムを加えて圧縮成形し、５００ｍｇの錠剤型の虚血性疾患予防、治療剤を調製した。
なお、使用したＮ⁶−ブチル−８−ベンジルチオｃＡＭＰＮａは、参考例１５に記載したと同様の方法で得たものである。
【００４９】
実施例６（臓器保存剤）
組成成分；
デキストラン ５０ｇ／リットル
グルコン酸カリウム ９５ｍｍｏｌ／リットル
ＫＨ₂ＰＯ₄ ２５ｍｍｏｌ／リットル
ＭｇＳＯ₄ ５ｍｍｏｌ／リットル
グルコース ６５ｍｍｏｌ／リットル
アデノシン ５ｍｍｏｌ／リットル
Ｎ−アセチルシステイン ０．５ｍｍｏｌ／リットル
Ｎ⁶−ベンジルｃＡＭＰ １ｍｍｏｌ／リットル
上記の成分を混合してｐＨ７〜８に調製し、臓器保存用液を調製した。
なお、使用したＮ⁶−ベンジルｃＡＭＰは、参考例６に記載したと同様の方法で得たものである。
【００５０】
実施例７（臓器保存剤）
組成成分；
ヒドロキシエチル澱粉 ６０ｇ／リットル
ＫＨ₂ＰＯ₄ ６．５ｍｍｏｌ／リットル
Ｋ₂ＨＰＯ₄ １８ｍｍｏｌ／リットル
グルコン酸カリウム ８６ｍｍｏｌ／リットル
グルコン酸ナトリウム １０ｍｍｏｌ／リットル
マンニトール ９０ｍｍｏｌ／リットル
ＮａＨＣＯ₃ １０ｍｍｏｌ／リットル
Ｎ⁶−ペンチルｃＡＭＰ ２ｍｍｏｌ／リットル
上記の成分を混合してｐＨ７〜８に調製し、臓器保存用液を調製した。
なお、使用したＮ⁶−ペンチルｃＡＭＰは、参考例４に記載したと同様の方法で得たものである。
【００５１】
【発明の効果】
本ｃＡＭＰ誘導体は、虚血−再潅流障害による浮腫を強く抑制する作用を有するので、これを有効成分として含有させた本発明の虚血性疾患予防、治療剤は、急性期の虚血性脳疾患、虚血性心疾患、臓器移植障害などの予防、治療剤として有効に用いられる。また、本発明の臓器保存剤は、虚血状態にある肺、肝臓、腎臓、心臓などの移植用摘出臓器を保存する際の臓器保存剤として有効に用いることができる。

Claims (8)

1. 下記の一般式
   

   

   （式中のＲ₁は、水素原子、炭素数１ないし６のアルキル基、アルキル基の炭素数が１ないし３であるアラルキル基、又はフルフリル基を、Ｒ₂は、水素原子、炭素数が１ないし６のアルキル基、またはアルキル基の炭素数が１ないし３であるアラルキル基を、Ｒ₃は、水素原子、炭素数１ないし６のアルキル基、又はアルキル基の炭素数が１ないしは３であるアラルキル基を、Ｒ₄は、水素原子、アミノ基、低級アルキルアミノ基、低級アルキルチオ基、アラルキルチオ基、又はハロゲン原子を意味し、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃が共に水素原子のとき、Ｒ₄がハロゲン原子となることはなく、またＲ₁、Ｒ₂、Ｒ₃、Ｒ₄が共に同時に水素原子となることはなく、また、Ｘは、水素原子、アルカリ金属、アンモニア、アミン類を意味する）で表されるアデノシン−３’，５’−環状リン酸誘導体の少なくとも一種を有効成分として含有することを特徴とする、虚血−再潅流障害の予防剤或いは治療剤。
2. アデノシン−３’，５’−環状リン酸誘導体がＮ⁶−アルキル誘導体であり、式中においてＲ₁が、炭素数１ないし６のアルキル基、アルキル基の炭素数が１ないし３であるアラルキル基（フェニル基は、低級アルキル基、水酸基、ハロゲン原子、若しくはアミノ基を有したフェニル基であってもよい）、又はフルフリル基であり、Ｒ₂、Ｒ₃、Ｒ₄が共に水素原子である、請求項１記載の虚血−再潅流障害の予防剤或いは治療剤。
3. アデノシン−３’，５’−環状リン酸誘導体がＮ⁶，Ｎ⁶−ジアルキル誘導体であり、式中においてＲ₁、Ｒ₂が、共に炭素数１ないし６のアルキル基、又はアルキル基の炭素数が１ないし３であるアラルキル基（フェニル基は、低級アルキル基、水酸基、ハロゲン原子、若しくはアミノ基を有したフェニル基であってもよい）であり、Ｒ₁とＲ₂は同じであってもよく、また互いに異なっていてもよく、Ｒ₃、Ｒ₄が共に水素原子である、請求項１記載の虚血−再潅流障害の予防剤或いは治療剤。
4. アデノシン−３’，５’−環状リン酸誘導体がＮ⁶，Ｎ⁶，２’−Ｏ−トリアルキル誘導体であり、式中においてＲ₁、Ｒ₂、Ｒ₃が同一で、同時に炭素数１ないし６のアルキル基、又はアルキル基の炭素数が１ないし３であるアラルキル基（フェニル基は、低級アルキル基、水酸基、ハロゲン原子、若しくはアミノ基を有したフェニル基であってもよい）であり、Ｒ₄が水素原子である、請求項１記載の虚血−再潅流障害の予防剤或いは治療剤。
5. アデノシン−３’，５’−環状リン酸誘導体がＮ⁶，２’−Ｏ−ジアルキル誘導体であり、式中においてＲ₁、Ｒ₃が同一で、炭素数１ないし６のアルキル基であり、Ｒ₂、Ｒ₄が共に水素原子である、請求項１記載の虚血−再潅流障害の予防剤或いは治療剤。
6. アデノシン−３’，５’−環状リン酸誘導体が８−アミノ又は８−アルキルアミノ誘導体であり、式中においてＲ₁、Ｒ₂、Ｒ₃が、共に水素原子であり、Ｒ₄がアミノ基又は低級アルキルアミノ基である、請求項１記載の虚血−再潅流障害の予防剤或いは 治療剤。
7. アデノシン−３’，５’−環状リン酸誘導体がＮ⁶−アルキル−８−置換誘導体であり、式中においてＲ₁が、炭素数１ないし６のアルキル基又はベンジル基であり、Ｒ₂、Ｒ₃が共に水素原子であり、Ｒ₄が低級アルキルアミノ基、低級アルキルチオ基、アラルキルチオ基、又はハロゲン原子である、請求項１記載の虚血−再潅流障害の予防剤或いは治療剤。
8. 請求項１〜７記載のいずれかのアデノシン−３’，５’−環状リン酸誘導体の少なくとも一種を有効成分として含有することを特徴とする、臓器保存剤。